(варианты) Область техники

Изобретение относится к области органической химии и медицины, конкретно - к синтетическим веществам пиримидинового ряда - производным 2-хлор-5-фенил-5#- пиримидо[5',4' :5,6]пирано[2,3-(1]пиримидин-4-ола, обладающим противовирусной активностью.

Изобретение может быть использовано для лечения заболеваний, вызванных вирусами иммунодефицита и другими ретровирусами, вирусами гепатита В, а также для аналогичных целей в ветеринарии. Заявленное средство может применяться как в индивидуальном виде, так и в комбинации с другими препаратами и фармацевтическими добавками.

Предшествующий уровень техники

Как известно, многие производные пиримидина обладаю! выраженной биологической активностью и участвуют в процессах жизнедеятельности организмов. Производные пиримидина являются нуклеиновыми основаниями (урацил, тимин, цитозин), витаминами (тиамин, фосфотиамин), коферментами (кокарбоксилаза), регуляторами роста (оротовая кислота) и т.д. [Data for Biochemical Research (3rd ed), R. M. C. Dawson, D. C. Elliott, W. H. Elliott, К. M. Jones (Clarendon Press, 1986].

Особый интерес представляют системы, в которых пиримидиновый цикл аннелирован другими гетероциклами. К ни относятся пурины, входящие в состав нуклеиновых кислот (аденин, гуанин), фолиевая кислота, АТФ, птерины, флавины, многие другие природные вещества и их синтетические аналоги.

Из синтетических производных пиримидина широкое использование в медицине приобрели замещенные барбитуровые и 2-тиобарбитуровые кислоты. Данные о биологической активности разнообразных производных 5-илиденбарбитуровых кислот суммированы в обзоре [2- Sans R.G., Chosas M.G. // Pharmazie, 1988, Bd 43, N 12, S. 827-829], где отмечены антиконвульсантное, антимикробное, спазмолитическое, жаропонижающее, противоопухолевое действие этих веществ.

Высокая биологическая активность обнаружена также у аннелированных производных пиримидина, например, у пиразоло[3,4- ]пиримидинов, полученных конденсацией 6-гидразиноурацилов с изо(тио)цианатами [3- Naka Т., Nagaoka А., Furukawa Y., заявка ЕПВ No. 237289 (1987)], 5-деазафлавинов [4- Yoneda F., Sasaki Т., Патент Японии, М кл.С 07D 471/04, No 03 81276, заявлена 24.08.1989 (89/218146), опуб. 05.04.1991 ], производных пирроло[2,3^]пиримидинов [5- Quijano M.L., Nogueras M, Melguizo M., Alvarez de Cienfuegos G., Melgarejo M., Sanches A. // Nucleosides & Nucleotides, 1989, Vol. 8, N 8, P. 1519- 1528], пирано[2,3^]пиримидинов [6- Ahluwalia V.K., Batla R., hurana A., Kumar R. // Indian J. Chem. , 1990, Vol. 29B, N 12, P. 1 141 ] и пиримидо[4,5-с]пиридазинов [7- Billings B.K., Wagner J. A., Cook F.D., Castle R.N. // J.Heterocycl. Chem., 1975, Vol. 12, N 6, P. 1221-1224]. Перечисленные соединения обладают пестицидным, противоопухолевым, антимикробным, иммуносупрессивным, ноотропным, антигипертензионным и антиаллергическим действием.

Приведенные выше материалы свидетельствуют о перспективности поиска новых фармацевтических препаратов среди производных пиримидина.

В то же время известны лишь несколько примеров образования пирано[2,3-^ :6,5-^ ']дипиримидиновой системы, в частности, при взаимодействии барбитуровых кислот с 3- ацилхромонами [8- Eiden F., Schikorr W. // Arch. Pharm., 1972, Bd 305, N 3, S. 187- 193] [ 9- Stone K.M., Wittington W.L., Treatment of genital gerpes, Rev. of Infect. Dis., 1990, 12, Supl. 6, Р.610-619]. Об их биологической активности сведений нет. Как было отмечено выше, соединения, содержащие фрагмент пиримидиндиона, обладают разнообразной биологической активностью. Однако эффективность многих из изученных веществ недостаточно высока, многие из них токсичны и обладают побочными эффектами. Кроме того, у бактерий, вирусов и опухолевых клеток очень быстро вырабатывается устойчивость к существующим преиаратам[ 10- Stone .M., Wittington W.L., Treatment of genital gerpes, Rev. of Infect. Dis., 1990, 12, Supl. 6, Р.610-619].

Прототипом изобретения выбран препарат, Ралтегравир (Raltegravir) ингибитор интегразы, N-(2 - (4 - (4- флюоробензилкарбамоил)-5-гидрокс и- 1 -метил-6-оксо- 1 ,6- дигидропиримидин-2-ил) пропан-2-ил), общей формулы

(http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/201 1/022145s018 lbl.pdf).

Препарат ингибирует каталитическую активность ВИЧ интегразы - фермента, участвующего в репликации вируса. Ингибирование интегразы предотвращает ковалентное введение генома ВИЧ в геном клетки хозяина на ранних стадиях развития инфекции. Недостатки прототипа связаны с быстро возникающей резистентностью вирусов к данному препарату, что обусловливает его невысокую эффективность.

Раскрытие изобретения Задачей настоящего изобретения является создание эффективного лекарственного средства с противовирусной активностью. Согласно изобретению по варианту 1 поставленная задача решается путем синтеза лекарственного средства с противовирусной активностью в отношении ВИЧ инфекции и вируса гепатита В, представляющего собой производные 2-хлор-5-фенил-5Н-пиримидо[5 ^, ,4' :5,6]пирано[2,3-с1]пиримидин-4- ола общей формулы:

X выбран из группы: Н, N0 ₂ , Hal, ОМе;

R1 выбран из группы: О, ОН;

R2 выбран из группы: CI, SH, ОН;

Согласно изобретению по варианту 2 поставленная задача решается путем синтеза лекарственного средства с противовирусной активностью в отношении ВИЧ инфекции, содержащего производное 2-хлор-5-фенил-5Н- пиримидо[5',4' :5,6]пирано[2,3-ё]пиримидин-4-ола общей формулы:

где: X выбран из группы: Н, N0 ₂ , Hal, ОМе;

R1 выбран из группы: С1, ОН;

R2 выбран из группы: CI, SH, ОН

совместно с ингибитором обратной транскриптазы, выбранным из Ретровира, или с ингибитором протеазы, выбранным из Лопинавира, взятых в эффективном количестве.

Изобретение распространяется на все пространственные изомеры заявляемых веществ, все их таутомерные формы, а также соли.

Заявителю не известны какие-либо источники информации, в которых бы содержались сведения об идентичных технических решениях, что позволяет сделать вывод о соответствии заявленного изобретения условию патентоспособности «Новизна» («N»).

Заявителем не выявлены какие-либо источники информации, содержащие сведения о влиянии признаков изобретения на достигаемый вследствие их реализации технический результат. Это, по мнению заявителя, свидетельствует о соответствии данного технического решения условию патентоспособности «Изобретательский уровень» («IS»).

Краткое описание чертежей

В дельнейшем изобретение поясняется подробным описанием примеров его осуществления без ссылок на чертежи.

Лучший вариант осуществления изобретения Для решения поставленной задачи наиболее предпочтительны производные заявленного вещества, указанные в таблице 1.

Синтез заявленного лекарственног о средства

Производные 1 -7 заявленного вещества синтезируют в 2 этапа в соответствии со схемой 1.

Схема 1

Для получения заявляемых веществ вначале синтезируют промежуточные вещества - соли производных бис-[5-(2- сульфгидрил-4,6-дигидроксигексаг� �дропиримидо)]фенилметана из соответствующих ароматических альдегидов и 2-тиобарбитуровой кислоты в присутствии основания (Base) - триэтиламина или пиридина. Затем обработкой промежуточных соединений хлорокисью фосфора синтезируют заявленные вещества.

Заявленное вещество получают следующим образом.

Для получения производного 1 в колбу вместимостью 500 мл помещают 14.4 г (0.1 моль) 2-тиобарбитуровой кислоты, приливают 150 мл воды и нагревают смесь до 90-95 °С. Затем к горячему раствору при перемешивании приливают 5.01 (0.05 моль) триэтиламина в 7 мл спирта, и нагревают еще 1 мин до полного растворения. Затем раствор снимают с нагрева и быстро, при перемешивании, приливают раствор 7.55 г (0.05 моль) 4-нитробензальдегида в 25-30 мл горячего спирта. Реакционную смесь перемешивают без нагревания 5 мин и оставляют при 15-20 °С на 3-4 ч. Выпавший кристаллический осадок отфильтровывают, промывают небольшим количеством воды и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 24 г промежуточного вещества - триэтиламмониевой соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6-дигидрокси гексагидропиримидо)]4- нитрофенилметана в виде кристаллического порошка кремового цвета, Т разл. 240 °С.

Затем в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора, нагревают до кипения и к кипящей жидкости при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (триэтиламмониевой соли бис-[5-(2- сульфгидрил-4,6-дигидроксигексаг� �дропиримидо)]-(4-нитрофенил) метана), и продолжают перемешивать при интенсивном кипячении с обратным холодильником 30-50 мин до полного растворения осадка, после чего кипятят еще 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании, порциями вливают в 350 г толченого льда. Скорость прибавления смеси регулируют так, чтобы температура массы была не выше 15 °С. После прибавления всей смеси продолжают перемешивать массу, постепенно доводя ее до температуры 20 °С, а при достижении заданной температуры добавляют к смеси еще 50 г льда, удерживая температуру в пределах 20-35 °С. После завершения экзотермической реакции разбавляют смесь водой до конечного объема 1 л, выделившийся белый осадок фильтруют и промывают водой до слабокислой реакции смывов (рН 4-5). Далее, сырой осадок переносят в колбу, добавляют 200 мл воды, 5 г трис- оксиметиламинометана (ТРИС) и перемешивают без нагревания до полного растворения осадка. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц. К фильтрату добавляют 100 мл водного раствора уксусной кислоты 1% до рН 7 и выдерживают 30 мин, а выделившийся осадок отделяют и отбрасывают. К полученному фильтрату добавляют 100 мл раствора уксусной кислоты 1 % до рН 5 и выдерживают 1 ч, сформировавшийся осадок фильтруют, промывают водным раствором уксусной кислоты 0.1 %, зате чистой водой и сушат в вауум-эксикаторе над КОН при температуре до 30 °С. Получают 3.5 г производного 1 заявляемого вещества в виде стеклообразного продукта коричневого цвета. Выход 40 % от теории.

Примечание. По аналогичной методике при использовании соответствующих альдегидов (бензальдегида, 3-хлорбензальдегида и 4-метоксибензальдегида) получают производные 5, 6 и 7. Выход продуктов указан в таблице 2, характеристики и данные элементного анализа - в таблицах 3 и 4.

Для получения смеси производных 1 , 2 и 3 в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2-сульфгидрил-4,6- дигидроксигексагидропиримидо)]-( 4-нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипячении с обратным холодильником 30-50 мин до полного растворения осадка, после чего кипятят еще 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании, порциями вливают в 350 г толченого льда. Скорость прибавления смеси регулируют так, чтобы температура массы была не выше 15 °С. После прибавления всей смеси продолжают перемешивать массу, постепенно доводя ее до температуры 20 °С, а при достижении заданной температуры добавляют к смеси еще 50 г льда, удерживая температуру в пределах 20-35 °С. После завершения экзотермической реакции, разбавляют смесь водой до конечного объема 1 л. Выделившийся белый осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой до слабокислой реакции смывов (рН 4-5). Далее, сырой осадок переносят в колбу, добавляют 200 мл воды, 5 г трис- оксиметиламинометана (ТРИС) и перемешивают без нагревания до полного растворения осадка и получения раствора с рН 8-9. Полученный раствор разбавляют водой до конечного объема 400 мл и фильтруют от инородных частиц. Затем к полученному фильтрату медленно, при перемешивании, добавляют 50 мл водного раствора, содержащего 5 мл уксусной кислоты до рН 3. Выпавший густой осадок выдерживают 30 мин и фильтруют, тщательно промывают осадок на фильтре водным раствором уксусной кислоты 0.1 %, затем чистой водой и сушат на воздухе при температуре не выше 40 °С. После сушки получают 6 г стеклообразного продукта коричневого цвета, представляющего собой смесь производных 1 , 2 и 3 заявляемого вещества в соотношении (%) 40:30:20, соответственно. Суммарный выход около 80 % от теории. Для получения целевого продукта, а именно 2-хлор-8- сульфгидрил-5-(4-нитрофенил)-5Н-пир имидо[5',4' :5,6]пирано[2,3- о! |пиримидин-4,6-диола (производное 2) в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2- сульфгидрил-4,6-дигидрокси-гексаг идропиримидо)]-(4- нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипении до полного растворения осадка (30-50 мин). После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании, порциями вливают в 250 г толченого льда, регулируя скорость прибавления смеси так, чтобы конечная температура массы составляла 50-60 °С. После завершения экзотермической реакции осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой. Далее, сырой осадок переносят в колбу и растворяют в 200 мл воды с добавкой 5-6 мл аммиака 25%. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц и фильтрат подкисляют водным раствором уксусной кислоты 5% до рН 5. Выпавший осадок отделяют и отбрасывают, а фильтрат подкисляют НС1 до рН 1 и выдерживают 1 ч при 20 °С. Выделившийся осадок фильтруют, промывают на водой и сушат в вауум-эксикаторе над КОН при температуре до 30 °С. После сушки получают 1.35 г производное 2 в виде светло-желтого кристаллического порошка. Выход 19 % от теории.

Для получения заявляемого производного, а именно 2,6,8- трихлор-5-(4-нитрофенил)-5//-пиримид о[5',4' :5,6]пирано[2,3- с!]пиримидин-4-ола (производное 3) в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 3 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2- сульфгидрил-4,6-дигидрокси-гексаг идропиримидо)]-(4- нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипении 2 ч. После этого из смеси отгоняют в вакууме не менее 70 мл хлорокиси фосфора при температуре бани до 90 °С и остаток охлаждают до комнатной температуры. Затем реакционную смесь при активном перемешивании, порциями вливают в 150 г толченого льда, регулируя скорость прибавления смеси так, чтобы температура массы не превышала 15 °С. После завершения экзотермической реакции осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой. Далее, сырой осадок переносят в колбу, добавляют 100 мл воды, 2 г трис- оксиметиламинометана (ТРИС) и перемешивают без нагревания до полного растворения осадка и получения раствора с рН 8-9. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц и фильтрат подкисляют водным раствором уксусной кислоты 1 % до рН 7. Выпавший осадок фильтруют, тщательно промывают на водой и сушат в вауум-эксикаторе над КОН при температуре до 30 °С. После сушки получают 0.56 г производного 3 заявляемого вещества в виде стеклообразного продукта светло-коричневого цвета. Выход 27 % от теории.

Для получения целевого продукта, а именно 2-хлор-5-(4- нитрофенил)-5//-пиримидо[5',4' :5,6]пирано[2,3- 1]пиримидин-4,6,8- триола (производное 4) в колбу вместимостью 200 мл помещают 100 мл хлорокиси фосфора и нагревают до кипения. Затем в кипящую жидкость при перемешивании добавляют 10 г полученного выше промежуточного вещества (соли бис-[5-(2- сульфгидрил-4,6-дигидрокси-гексаг идропиримидо)]-(4- нитрофенил)метана) и продолжают перемешивать при интенсивном кипении до полного растворения осадка (30-50 мин). После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и при активном перемешивании, порциями вливают в 250 г толченого льда, регулируя скорость прибавления смеси так, чтобы конечная температура массы составляла 50-60 °С. После завершения экзотермической реакции смесь перемешивают при 50 °С в течение 8 ч. Затем охлаждают смесь до комнатной температуры, осадок фильтруют через бумажный фильтр и тщательно промывают водой. Далее, сырой осадок переносят в колбу и растворяют в 200 мл воды с добавкой 5-6 мл аммиака 25%. Полученный раствор фильтруют от инородных частиц и фильтрат подкисляют водным раствором уксусной кислоты 5% до рН 5. Выпавший осадок отделяют и отбрасывают, а фильтрат подкисляют НС1 до рН 1 и выдерживают 1 ч при 20 °С. Выделившийся осадок фильтруют, промывают водой, затем спиртом, эфиром и сушат на воздухе при комнатной температуре. Получают 2.4 г производного 4 заявляемого вещества в виде бесцветного кристаллического порошка. Выход 34 % от теории.

Исследование биологической активности заявленного лекарственного средства.

Пример 1. Определение анти-ВИЧ активности производных

1 -7 заявленного лекарственного средства.

Материалы и методы: Клетки. Использовали перевиваемые лимфобластоидные клетки человека МТ-4. Клетки культивировали в среде RPMI 1640 с 10% сыворотки эмбрионов коров, 100 г/мл гентамицина.

Вирусы. В качестве источника вируса использовали штамм

ВИЧ- 1 _899А .

Препарат. Исследовали образцы препаратов, растворенные в диметилсульфоксиде.

Структура исследования:

Исследование цитотоксического действия препарата.

К клеткам добавляли исследуемый препарат в различных концентрациях. Инкубировали клетки при 37С° в атмосфере с 5% С0 ₂ и 98% влажности 5 дней. Учет результатов: определение жизнеспособности и количества клеток при помощи красителя.

Исследование противовирусного действия препарата.

К клеткам добавляли исследуемые препараты в различных дозах при одновременном инфицировании вирусом в дозе 0,01 ТЦИД ₅₀ /клетка. Инкубировали культуры клеток при 37С° в атмосфере с 5% С0 ₂ и 98% влажности 5 дней. Учет результатов проводили окрашиванием клеток с помощью тетразолиевого красителя (метод МТТ) со спектрофотометрией и световой микроскопией: исследование цитопатического эффекта вируса (ЦПД) и вирусиндуцируемого образования синцития (синцитий - конгломерат нескольких клеток с общей клеточной оболочкой, образовавшейся в результате слияния их мембран).

Степень защиты клеток от цитодеструктивного действия вируса определяли по формуле: A - В

% защиты x 100, где

К - В

Л число жизнеспособных клеток в опытной группе;

В - то же в инфицированной культуре (контроль вируса);

К- то же в неинфицированной культуре (контроль клеток).

Результаты исследования приведены в таблице 6.

Пример 2. Определение 50%-ой летальной дозы смеси производных 1 -1- 2 + 4 заявленного вещества (ЛД ₅₀ ) при парентеральном (инъекционном) способе введения.

Определение показателей острой токсичности при парентеральном способе введения включало эксперименты на мышах массой 18-20 г, возраст 8-9 недель.

В опытах на грызунах для исследования каждой дозы использовались группы по 5 животных одного пола. Препараты растворяли в стерильной Н ₂ 0 и вводили в хвостовую вену (в/в).

Результаты: ЛД ₅₀ смеси производных 1+2+4 составило 2000 - 2500 мг/кг.

Пример 3. Определение ЛД ₅₀ смеси производных 1 + 2 1 5 при энтеральном способе введения.

Определение ЛД ₅ о заявленного вещества при энтеральном способе введения.

Определение показателей острой токсичности при энтеральном способе введения включало эксперименты на мышах массой 18-20 г, возраст 8-9 недель.

В опытах на грызунах для исследования каждой дозы препаратов использовались группы по 5 животных одного пола. Препараты вводили внутрижелудочно (в/ж) в возрастающих дозах по Литчфилду-Уилкоксону. Для этого их разводили в 1 % крахмальной слизи и полученную взвесь вводили животным.

Результаты: ЛД ₅₀ смеси производных 1 +2+5 составило 12000 16000 мг/кг.

Пример 4. Определение ЛД ₅₀ при внутривагинальном способе введения

Определение показателей острой токсичности при внутри вагинальном способе введения включало эксперименты па крысах массой 150-170 грамм, возраст 3-3,5 месяца. Суппозитории, содержащие 1000 мкг/суппозиторий J4 > 14, нарезались бритвой на полоски меньшего размера, удобные для вагинального введения. Введения препарата осуществляли на протяжении 12 часов с интервалами в 2 часа. Общая дозировка получаемая животным при введении, составила 2200 мкг/кг. Ни у одного из животных не отмечалось гибели и каких-либо признаков негативного воздействия препарата. Динамика массы тела во всех группах оставалась нормальной.

Пример 5. Совместное действие заявленного лекарственного средства и препаратов, используемых для лечения заболеваний, вызванных вирусами иммунодефицита человека.

Материалы и методы:

Использовали перевиваемые лимфобластоидные клетки человека МТ-4. Клетки культивировали в среде RPMI 1640 с 10% сыворотки эмбрионов коров, 100 мкг/мл гентамицина.

В качестве источника вируса использовали штамм ВИЧ-

1 S99A- Препарат. Исследовали образцы препаратов, растворенью в диметилсульфоксиде. В качестве антиретровирусного референс- препарата использовали препарат Ралтегравир (прототип).

Исследование противовирусного действия препарата (защита клеток).

К клеткам добавляли исследуемые препараты в различных дозах при одновременном инфицировании вирусом в дозе 0,01 ГЦИДзо/клетка. Инкубировали культуры клеток при 37С° в атмосфере с 5% С0 ₂ и 98% влажности 5 дней. Учет результатов проводили окрашиванием клеток с помощью тетразолиевого красителя (метод МТТ) со спектрофотометрией и световой микроскопией: исследование цитопатического эффекта вируса (ЦПД) и вирусиндуцируемого образования синцития (синцитий - конгломерат нескольких клеток с общей клеточной оболочкой, образовавшейся в результате слияния их мембран).

Результаты приведены в таблице 8.

Таким образом, можно сделать вывод о синергическом действии заявленного лекарственного средства при совместном использовании с препаратами, используемыми для лечения заболеваний, вызываемых вирусами иммунодефицита человека.

Пример 6. Влияние заявляемых соединений на репродукцию вируса Гепатита В (HBV).

Материалы и методы.

Клетки линии HepG2.2.15, инфицированные вирусом Гепатита В, выращивали на среде DMEM с добавлением 1 0% бычьей сыворотки при 5% С0 ₂ , 37 °С.

Анализ количества внеклеточной HBV ДНК. Через 5 дней инкубации HepG2.2.15 отбирали культуральную среду, центрифугированием отделяли клетки и выделяли ДНК по методу Klintschar и Neuhuber (Klintschar and Neuhuber, 2000). Количественное определение HBV проводили с использованием T-PCR.

Результаты приведены в таблице 9.

Полученные данные указывают, что заявленное лекарственное средство активно против вируса гепатита В. Промышленная применимость

Для реализации изобретения используются известные материалы и оборудование, что обусловливает, по мнению заявителя, соответствие изобретения критерию «Промышленная применимость» («IA»).

Таблица 1

Структура наиболее активных производных общей формулы заявленного лекарственного средства

Таблица 2

Выход и свойства производных 1 -7 заявляемого вещества

Таблица 3 анные спектров ПМР заявляемых веществ 1-7 (ДМСО- ₆ , δ, м.д. , J, Гц)

Таблица 4

Данные элементного анализа заявляемых веществ

Найдено, % Вычислено, %

Бругго-формула

С Н N Hal С Н N Hal

1 44.01 1.79 17.05 17.1 1 C 15H7CI2N5O5 44.14 1.73 17.16 17.37

? 44.13 2.10 17.09 8.60 C, ₅ H ₈ C1N ₅ 0 ₄ S 44.40 1.99 17.26 8.74

.3 42.03 1.49 16.22 24.70 С ₁₅ Н ₆ С1з ₅ 04 42.23 1.42 16.42 24.93

4 46.04 2.15 17.88 8.96 C ₁₅ H ₈ C1N ₅ 0 ₆ 46.23 2.07 17.97 9.10

5 49.47 2.34 15.25 19.30 C ₁₅ H ₈ C1 ₂ N ₄ 0 ₃ 49.61 2.22 15.43 19.52

6 45.15 1.88 13.87 26.66 C i 5H ₇ Cl ₃ N ₄ 0 ₃ 45.31 1.77 14.09 26.75

7 48.70 2.69 14.13 17.89 C ₁₆ H ₁₀ Cl ₂ N ₄ O ₄ 48.88 2.56 14.25 18.03

Таблица 5

Исследование противовирусной активности на модели клеток,

инфицированных ВИЧ-1

P T/RU2016/000197

Таблица 6

Определение ЛД ₅₀ смеси производных 1+2+4.

Доза препарата Число живых Число погибших

(мг/кг) животных в группе животных в группе

0 5 0

250 5 0

500 5 0

1000 5 0

1500 5 0

2000 5 2

2500 5 3

3000 5 3

4000 5 5

5000 5 5

Таблица 7

Определение ЛД ₅₀ смеси производных 1 +2+5

Доза препарата Число живых Число погибших

(мг/кг) животных в группе животных в группе

0 5 0

500 5 0

1000 5 0

2000 5 0

4000 5 0

6000 5 0

8000 5 0

12000 5 2

16000 5 2

24000 5 5 Таблица 8

роизводное 7 + PV 5 мкг/мл + 2,5 мкг/мл 100

Таблица 9

Изменение количества внеклеточной ДНК НВ V

Проба HBV Log 10 IU/ml

Контроль (необработанные клетки) 4,42 +/- 0,28

Производное 1 , 5 мкг/мл 2,58 +/- 0,33

Производное 2, 5 мкг/мл 2,65 +/- 0,19

Производное 7, 5 мкг/мл 2,74 +/- 0.25