本发明涉及有机化合物领域， 尤其涉及卡泊芬净或其药学上可接受的盐 及其制备方法。 背景技术

1974年，人们发现了棘白菌素类化合物具有良� �的抗菌活性。从此以后， 人们研究了许多半合成的棘白菌素类化合物的 药理活性。 直至 2001 年， 卡 泊芬净正式得到美国 FDA的批准上市，人们对抗真菌的药物的研究得 到了突 破性的进展。 卡泊芬净是一个作用位点独特， 广谱且低毒的药物， 其化学结 构如式 1所示：

WO94/21677 , WO96/24613 , US555252 K WO97/47645 , US5936062 , WO02/083713 、 J.Org.Chem.,2007,72,2335-2343 、 CN 101792486A 、 CN 101648994A 、 WO2010008493A2 、 US2010168415A1 、 EP 1785432 、 WO2010064219A1 、 WO2009158034A1 、 WO2009151341A1 禾口

WO2010108637A1描述了卡泊芬净类似物和卡泊芬� ��的制备方法。 由于卡泊 芬净是注射剂型， 对有机溶剂残留和盐残留量限度高。 但又由于其不具有良 好的稳定性， 为了防止降解，通常要采用特殊的方法除去样 品中的残留溶剂。

J.Org.Chem.,2007,72,2335-2343 , US5552521 、 US5936062、 WO96/24613 和 EP 1785432报道了湿润氮气干燥法干燥卡泊芬净， 该方法投入成本高， 重 现性差， 浪费大量氮气， 并且有机溶剂残留过高， 不符合药品的质量要求。

WO94/21677 , WO97/47645 , CN101792486A , US2010168415A1 , CN 101648994A和 WO2009158034A1报道了冷冻干燥法干燥卡泊芬净， 该方法 得到无定形的卡泊芬净产品， 稳定性差， 残留溶剂含量高， 且投入成本高， 能耗大， 效率低， 产能易受限， 难以满足工业化生产的需求。

WO2010008493A2报道了喷雾干燥法， 是将溶液喷成雾滴分散于热气流 中， 使料液所含水分或溶剂快速蒸发的一种干燥方 法。 但是经研究发现得到 的也是无定形的卡泊芬净产品， 稳定性较差， 且无法将乙醇和乙酸乙酯等溶 剂完全除去， 溶剂残留严重超标。 此外， 该干燥方法所需设备投入成本高， 生产规模小， 不能很好的满足工业化生产的要求。

WO2009151341A1描述了卡泊芬净的真空干燥方法， 虽然样品在干燥的 前期有机溶剂易在真空干燥的条件下除去， 但随着残留溶剂含量的降低， 样 品的晶格逐渐闭合， 导致溶剂仍然保留在晶格内。 在干燥的后期， 样品晶格 闭合完全， 溶剂永久包埋在晶格内， 无法除去。 而且， 干燥过程中， 样品中 水分含量逐渐降低， 样品稳定性变差， 易导致降解， 最终无法获得高纯度的 卡泊芬净产品。

WO2010108637A1报道了盐析结晶卡泊芬净， 虽此方法获得的卡泊芬净 产品不含有残留溶剂， 但不可避免地导致产品盐含量超标， 并且结晶过程中 样品易发生降解， 导致产品纯度降低， 无法作为原料药供应市场直接用于药 物制剂的生产。

药物中的残留溶剂在 ICH (国际人用药品注册和医药技术协调会） 定义 为在原料药或赋形剂的生产中， 以及在制剂制备过程中产生或使用的有机挥 发性化合物， 它们在工艺中不能完全除尽。 指导原则根据危害程度对残留溶 剂分类并制定残留溶剂在保证人体安全条件下 的可接受量即限度， 提出了一 些残留溶剂毒理学上的可接受水平。

现行的生产卡泊芬净的工艺中基本上都会用到 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇其中的多种溶剂。 而使用上述报道的常规方法制备的卡泊芬 净产品无法达到 ICH关于溶剂残留的规定 （详见 ICH Q3C ) 。

由此可见， 现有的卡泊芬净制备方法均存在各自缺陷， 如设备投入高， 生产规模易受到限制， 操作难度高， 明显不利于工业化生产， 同时所得的产 品稳定性差， 需要保存在 -70°C以下， 带来了产品运输的困难， 这无疑又增加 了工业化生产的难度， 严重限制了工业化生产规模。 因此， 迫切需要进一步 研究能有效去除产品中有机溶剂残留， 同时又能防止其降解， 适合工业化生 产的卡泊芬净或其盐的制备方法， 以获得符合药用标准的稳定的低溶剂残留 的卡泊芬净或其盐。 发明内容

本发明旨在提供一种低溶剂残留的卡泊芬净或 其盐。

本发明的另一目的是提供一种低盐的卡泊芬净 或其盐。

本发明的再一目的是提供一种低溶剂残留及低 盐的卡泊芬净或其盐的 制备方法。

本发明的最后一目的是提供一种低溶剂残留及 低盐的卡泊芬净或其盐 的用途。 在本发明的第一方面， 提供了一种低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或其 盐， 如式 1化合物所示， 其中四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇的质 量百分含量分别低于 0.072 %、 0.041%、 0.3%、 0.5%和 0.5%， 较好地质量百 分含量分别低于 0.05 %、 0.02%、 0.15%、 0.25%和 0.25%， 更好地质量百分 含量分别低于 0.02 %、 0.01%、 0.05%、 0.10%和 0.10%， 最佳地质量百分含 量均为 0%; 其中其他溶剂含量均符合 ICH关于残留溶媒的限度规定； 其中 无机盐 （采用灼烧残渣法测定） 质量百分含量低于 0.5 %， 较好地质量百分 含量低于 0.1 %， 最佳地质量百分含量均为 0%。

在本发明的一个优选例中， 所述的化合物 1或其盐是结晶态的。

在本发明的一个实施例中， 所述获得低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或其 盐的方法包括步骤：

( a) 将含有式 1化合物或其盐的原料与水体系一起进行真空� �燥；

(b ) 撤去水体系继续真空干燥式 1 化合物或其盐， 获得低溶剂残留及低盐 的式 1化合物或其盐。

在另一优选例中， 在步骤（a) 中， 所述含有式 1化合物或其盐的原料是指 结晶态的式 1化合物或其盐。

在另一优选例中， 在步骤 （a) 中， 所述干燥温度在 0至 20°C。

在另一优选例中， 在步骤 （a) 中， 所述水体系包括自来水、 纯水、 冰水混 合物、 碎冰、 和能释放水蒸汽的物质。

在另一优选例中， 在步骤 （a) 中， 所述干燥时间为 1至 48小时。

在另一优选例中， 在步骤 （b ) 中， 所述干燥时间为 0至 5小时。

在另一优选例中， 步骤（a)所述的含有式 1化合物或其盐的原料的制备过 程可以包含以下步骤：

(a' ) 将式 1化合物或其盐粗品和醋酸、 水混合， 得到均相溶液 1 ;

(b' ) 将均相溶液 1和乙醇混合， 得到均相溶液 2; 和

(C )将均相溶液 2和乙酸乙酯混合， 得到含有式 1化合物或其盐的原料； 在另一优选例中， 在步骤 （a' ) 中， 所述混合温度在 0至 20°C。

在另一优选例中， 在步骤 （b' ) 中， 所述混合温度在 0至 20°C。

在另一优选例中， 在步骤 （c' ) 中， 所述混合温度在 0至 20°C。 在另一优选例中，在步骤（c' )中,溶液 2和乙酸乙酯的混合体积比例为 1：

1-3。

在本发明的另一实施例中， 所述获得低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或其 盐的方法包括步骤：

(a') 将无定形态的式 1化合物或其盐和醋酸、 水混合， 得到均相溶液 1 ;

(b') 将均相溶液 1和第一有机溶剂乙醇混合， 得到均相溶液 2 ;

(c') 将均相溶液 2和第二有机溶剂乙酸乙酯混合， 得到式 1化合物或其 盐晶体；

(d') 将步骤 c'得到的式 1化合物或其盐晶体和水体系进行真空干燥； 和 (e') 撤去水体系继续真空干燥式 1化合物或其盐，获得低溶剂残留及低盐的 式 1化合物或其盐。 在本发明的第二方面， 提供了一种本发明提供的低溶剂残留及低盐的 卡 泊芬净或其盐的用途， 用于制备预防或治疗真菌感染引起的疾病的药 物。

在另一优选例中， 低溶剂残留及低盐的卡泊芬净和药学上可接受 的载体 混合， 得到一种药物卡泊芬净。 附图说明

图 1 显示了本发明各种溶剂 GC分析对照图； 其中各种溶剂的保留时间 和峰面积如下表所列：

图 2 显示了本发明实施例制备得到的低溶剂残留及 低盐的卡泊芬净或 其盐的 GC分析图； 其中各种溶剂的保留时间、 峰面积和质量含量如下表所 列： 保留时间 峰面积 质量含量(％；) 溶剂种类

2.344 0 0 甲醇

3.097 84.5 0.26 乙醇

4.069 0 0 乙腈

6.962 19. 1 0.01 乙酸乙酯

7.370 13.9 0.01 四氢呋喃 图 3 显示了本发明实施例制备得到的低溶剂残留及 低盐的卡泊芬净或 其盐的 XRPD图谱； 其中各峰的相关数据如下表所列：

具体实施方式

发明人发现了一种简易制备得到低溶剂残留及 低盐的卡泊芬净或其盐 的方法。 发明人经过深入研究， 发现无定形态的式 1化合物或其盐能通过醋 酸的水溶液溶解后， 然后加入乙醇和乙酸乙酯结晶， 得到含有式 1化合物或 其盐的原料， 再通过与水体系共同真空干燥的方式， 得到一种稳定的低溶剂 残留及低盐的卡泊芬净或其盐。 如本文所用， 化学式或名称应当包括所有的光学和立体异构 体， 以及 存在这些异构体的消旋混合物。 低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或其盐的干燥原 理

发 明 人 对 WO94/21677 、 WO97/47645 、 WO2010008493A2 、

WO200915 1341AK WO2010108637A1 等文献报道的氮气干燥法、 冷冻干燥 法、 喷雾干燥法和真空干燥法 (不加水体系干燥)分别进行了深入研究， 发现 氮气干燥法、 冷冻干燥法和喷雾干燥法难以将有机溶剂干燥 除去， 导致有机 溶剂残留超标， 真空干燥法 (不加水体系干燥)不但没能很好地除去有机溶� ��， 而且产品降解相当明显。 发明人对采用上述这些方法干燥后产品中溶剂 残留 超标的原因进行了深入分析发现： 氮气干燥法、 冷冻干燥法和真空干燥法 (不 加水体系干燥)在样品干燥的前期有机溶剂易� �真空干燥或氮气流的条件下 除去， 但随着残留溶剂的降低， 样品的晶格逐渐闭合， 导致溶剂仍是保留在 晶格内。 在干燥的后期， 样品晶格闭合完全， 溶剂永久包埋在晶格内， 无法 在真空干燥或氮气流的条件下除去。

发明人惊喜地发现在真空干燥器中放置能释放 出水蒸汽的物质， 不但能 够得到低溶剂残留的、 甚至不含有溶剂残留的卡泊芬净或其盐， 而且卡泊芬 净或其盐的纯度未发生变化。

发明人在获得低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或 其盐后对其干燥原理进 行了深入研究。 在真空干燥器中放置能释放出水蒸汽的物质， 目的是为了控 制样品的含水量。 在样品干燥的前期， 大量的有机溶剂已经除去。 在样品干 燥的中期， 样品中的水分不断形成水蒸汽， 而水蒸汽又与样品中的残留有机 溶剂形成氢键， 因而将有机溶剂一起真空干燥除去。 但是样品中的水分含量 有限， 为了维持这一平衡， 防止样品的晶格完全闭合， 我们在干燥体系中放 入能释放水蒸汽的物质， 在真空的条件下， 该物质不断产生出水蒸汽， 又由 于样品本身含有大量的氮、 氧原子， 能够与水蒸汽形成氢键， 与水结合， 因 而能避免样品的晶格闭合， 保持这一交换平衡。 现有技术中另一种湿润氮气 干燥法， 虽控制了样品的含水量， 但是由于是在正压的条件下， 样品中水分 无法形成水蒸汽， 无法将溶剂一起真空干燥除去， 并且耗费大量氮气， 设备 投入高。

发明人在获得低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或 其盐后对又其干燥过程 再次进行了深入研究， 惊奇地发现， 当有机溶剂干燥合格后， 再撤去释放出 水蒸汽的物质， 继续真空干燥一定时间， 能将样品中的水分真空干燥到合格 范围内， 并且样品在这一水份范围内稳定性良好。 因此本发明的干燥过程分 为两阶段， 第一阶段是将样品与水体系共同真空干燥除去 有机溶剂， 第二阶 段是撤去水体系真空干燥到样品含水量合格为 止。 低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或其盐的纯度和 溶剂残留测定

发明人在获得低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或 其盐后进一步采用高效 液相与气相对其纯度和溶剂残留进行了研究。

本发明采用 HPLC测得用本发明方法制备的样品中卡泊芬净� �其盐 （式

1化合物或其盐） 的纯度， 以及用于样品的稳定性研究， 所述的 HPLC检测 方法如下：

色谱柱： 4.6x250mm 5μηι的 C18柱；

流动相： Α: 0.1%的高氯酸和 0.075 %的氯化钠溶液； Β:乙腈；

梯度洗脱条件： Α:Β=65.5:34.5, 14.5 分钟； Α:Β=65.5:34.5到 50： 50， 21.5 分 中； Α:Β=50 : 50到 35 : 65， 10 分 中； Α:Β=35 : 65到 20:80， 5 分 中； Α:Β=20 : 80， 2 分钟； Α:Β=20 : 80到 65.5： 34.5， 1 分钟； Α:Β= 65.5： 34.5， 13分 钟；

流速： 1 ml/分钟； 进样量： ΙΟμΙ;

柱温： 35 °C ±5 °C ; 检测波长： 220nm; 运行时间： 60分钟；

主峰保留时间： 27分钟左右。

本发明还采用 GC 测定本发明方法制备的样品中的溶剂残留， 所述的 GC检测方法如下：

色谱柱： Varian CP-Select 624 (94%氰丙基苯基 -6%二甲基聚硅氧烷） 柱规格： 30ηιχ0.32ηιηιχ 1.8μηι

进样口温度： 200°C

检测器温度： 260°C

流速： 2.5ml/分钟， 恒流

炉温：

40°C， 2°C/分钟 5 °C/分钟 30°C/分钟 250°C，

45 °C 80 °C

5分钟 ► ► ► 2分钟 载气： 氮气

分流比： 1 : 1 (工作站） ， 实际分流比： 17: 1 (皂膜流量计测定 值）

检测器气体： 空气流量： 400ml/分钟

氢气流量： 40ml/分钟

尾吹气流量： 25ml/分钟 （氮气）

顶空进样器条件：

加热平衡温度： 80°C ; 定量环温度： 85 °C ; 传输线温度： 90°C ;

平衡时间： 20分钟； 加压时间： 0.5分钟； 充样时间： 0.2分钟； 定量环平衡时间： 0.10分钟； 进样时间： 1分钟； 运行时间： 30分钟； 进样体积： 1ml

本发明还采用灼烧残渣法测定本发明方法制备 的样品中的盐残留量， 所述的检测方法如下：

将样品与硫酸混合， 采用电炉加热到碳化， 再放到马弗炉加热到 600— 700 °C， 然后放到真空干燥箱中降温到室温， 称量残留物的重量， 计算无机盐的含

制备方法

发明人通过深入研究， 发现无定形态卡泊芬净在醋酸、 水中形成均相溶 液后， 然后加入乙醇稀释、 再用乙酸乙酯将其混合溶液进行进一步稀释， 并 通过变换结晶温度、 摩尔浓度、 冷却速率或搅拌情况、 结晶时间等因素得到 含有式 1化合物或其盐的原料， 再通过与水体系共同真空干燥的方式能够得 到一种稳定的低溶剂残留及低盐的卡泊芬净或 其盐。

如本文所用， "式 1化合物或其盐粗品" 或 "卡泊芬净或其盐粗品" 可 以互换使用， 都是指无定形态的式 1化合物或其盐， 可以通过本领域熟知的 方法 获得 ， 例 如 但 不 限 于 J.Org.Chem., 2007, 72, 2335-2343 、 WO2009158034A1等文献报道的方法制备得到。

如本文所用， "含有式 1化合物或其盐的原料" 是指结晶态的式 1化合 物或其盐， 可以通过下述步骤得到：

a'. 将式 1化合物或其盐粗品和醋酸、 水混合， 得到均相溶液 1 ;

b' . 将均相溶液 1和乙醇混合， 得到均相溶液 2; 和 C . 将均相溶液 2和乙酸乙酯混合， 得到含有式 1化合物或其盐的原料。 上述步骤 a'至 b'至 c'可以重复 1、 2或 3次， 以得到重结晶的式 1化合 物或其盐， 所述结晶态的式 1化合物或其盐中的有机溶剂的质量百分含量 1.5%； 所述的有机溶剂为四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯或乙醇。 .

在获得含有式 1化合物或其盐的原料的方法中， 一旦步骤 （c ' ) 结晶完 全， 即可以通过过滤、 倾出溶剂、 或其他方法， 优选通过过滤来分离出晶体。

本发明提供的一种制备所述的低溶剂残留及低 盐的卡泊芬净或其盐的 方法包括以下步骤：

( a) 将含有式 1化合物或其盐的原料与水体系一起进行真空� �燥； (b ) 撤去水体系继续真空干燥式 1 化合物或其盐的原料， 获得低溶剂残留 及低盐的式 1化合物或其盐。

在另一优选例中， 在步骤 （a) 中， 所述干燥温度在 0至 20°C。

在另一优选例中， 在步骤 （a) 中， 所述水体系包括自来水、 纯水、 冰水混 合物和能释放水蒸汽的物质。

在另一优选例中， 在步骤 （a) 中， 所述干燥时间为 1至 48小时。

在另一优选例中， 在步骤 （b ) 中， 所述干燥时间为 0至 5小时。

在另一优选例中， 步骤（a)所述的含有式 1化合物或其盐的原料的制备过 程可以包含以下步骤：

(a' ) 将式 1化合物或其盐粗品和醋酸、 水混合， 得到均相溶液 1 ;

(b' ) 将均相溶液 1和乙醇混合， 得到均相溶液 2; 和

(C )将均相溶液 2和乙酸乙酯混合， 得到含有式 1化合物或其盐的原料； 在另一优选例中， 在步骤 （a' ) 中， 所述混合温度在 0至 20°C。

在另一优选例中， 在步骤 （b' ) 中， 所述混合温度在 0至 20°C。

在另一优选例中， 在步骤 （c' ) 中， 所述混合温度在 0至 20°C。

在另一优选例中，在步骤（c' )中,溶液 2和乙酸乙酯的混合体积比例为 1：

1-3。

在本发明的另一优选例中， 所述方法包括：

(a') 将式 1化合物或其盐粗品和醋酸、 水混合， 得到均相溶液 1 ;

(b') 将均相溶液 1和第一有机溶剂乙醇混合， 得到均相溶液 2 ;

(c') 将均相溶液 2和第二有机溶剂乙酸乙酯混合， 得到含有式 1化合物 或其盐的原料； (d') 将步骤 c'得到的含有式 1化合物或其盐的原料和水体系一起进行真 空干燥； 和

(e') 撤去水体系继续真空干燥含有式 1 化合物或其盐的原料， 获得低溶剂 残留及低盐的式 1化合物或其盐。

一旦步骤 （c ' ) 结晶完全， 即可以通过过滤、 倾出溶剂、 或其他方法， 优选通过过滤来分离出晶体。然后可任选将晶 体洗涤， 最后在真空的条件下， 将晶体与水体系干燥得到低溶剂残留及低盐的 卡泊芬净。

在本发明提供的获得低溶剂残留及低盐的式 1化合物或其盐的方法中， 所述的 "将含有式 1化合物或其盐的原料与水体系一起进行真空� �燥" 是指 将含有式 1化合物或其盐的原料放置在真空干燥器通常� �置样品的地方， 并 在真空干燥器周围（例如底部）放置盛着能释 放水蒸汽的物质的敞开的容器， 所述的能释放水蒸汽的物质选自自来水、 纯水、 碎冰或冰水混合物。

在本发明提供的获得低溶剂残留及低盐的式 1化合物或其盐的方法中， 所述的 "撤去水体系" 是指将盛着能释放水蒸汽的物质的敞开的容器 移往真 空干燥的环境之外。 用途

在本发明的第二方面， 提供了一种本发明提供的低溶剂残留及低盐的 卡 泊芬净或其盐的用途， 用于制备预防或治疗真菌感染引起的疾病的药 物。

鉴于此， 本发明还提供了一种药物组合物， 它包括低溶剂残留及低盐的 卡泊芬净或其盐和药学上可接受的载体。 如本文所用， 术语"有效量 "是指用于治疗剂给药的载体， 包括各种赋形 剂和稀释剂。 该术语指这样一些药剂载体:它们本身并不是� �要的活性成分， 且使用没有过分的毒性。 合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。 在 Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Pub. Co., N.J. 1991)中可找到关于药 学上可接受的赋形剂的充分讨论。 在卡泊芬净或其盐中药学上可接受的载体 可包括液体， 如水、 盐水、 甘油和乙醇。 另外， 这些载体中还可能存在辅助 性的物质， 如崩解剂、 润湿剂、 乳化剂、 pH缓冲物质等。

所述药物卡泊芬净可以根据不同给药途径制备 成各种剂型。 这些剂型以 下面方式施用： 口服、 喷雾吸入、 直肠用药、 鼻腔用药、 颊部用药、 局部用 药、 非肠道用药， 如皮下、 静脉、 肌肉、 腹膜内、 鞘内、 心室内、 胸骨内和 颅内注射或输入， 或借助一种外植储器用药。 本发明提到的上述特征， 或是实施例提到的特征可以任意组合。 本案例 说明书的所有特征可与任何卡泊芬净形式并用 ， 说明书中所揭示的各个特 征， 可以任何可提供相同、 或等或相似目的替代性特征取代。 因此除有特别 说明， 所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例 子。 本发明的主要优点在于：

1、本发明提供了一种新的低溶剂残留及低盐� �卡泊芬净或其药学上可接 受的盐。

2、 本发明提供了一种新的低溶剂残留及低盐的卡 泊芬净或其盐制备方 法。

3、 本发明具有条件温和、 操作过程简单、 收率高、 产品稳定性良好、 便 于运输， 在很大程度上减轻了工艺操作难度系数， 降低了生产成本。 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于 说明本发明而不用于限制本发明的范围。 下列实施例中未注明具体条件的实 验方法， 通常按照常规条件， 或按照制造厂商所建议的条件， 除非另外说明， 否则百分比和份数按重量计算。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域 技术人员所熟知的， 例如 是指在 100ml的溶液中的溶质的重量。

除非另行定义， 文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟 练人员所 熟悉的意义相同。 此外， 任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆 可应 用于本发明方法中。 文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用 。 实施例 1

制备含有结晶态的式 1化合物的原料

以 Pneumocandin B。 为起始原料， 参照 WO97/47645、 US5936062 , J.Org.Chem., 2007, 72, 2335-2343等文献报道的方法，制备得到含有式 1化合 物的原料。 实施例 2

制备无定形的式 1化合物

# J.Org.Chem., 2007, 72, 2335-2343 、 WO2009158034A1等文献报道 的冻干法制备得到无定形的式 1化合物， 或将柱层析收集液直接减压浓缩到 近干， 得到无定形的式 1化合物。 实施例 3

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

于 12°C的条件下，将实施例 2获得的式 1化合物（2.0g )，溶于醋酸 (0.13ml) 和水 (2.2ml)的体系中， 溶清后加入乙醇 （25ml ) ， 搅拌均匀， 缓慢滴加乙酸 乙酯 （27.4ml ) ， 滴毕， 于 12°C搅拌 12h。 过滤， 用乙醇和乙酸乙酯的混合 物 （1.7 : 1 ) 洗涤数次， 然后将样品放置于真空干燥中， 并在真空干燥器底 部放置一盘自来水， 于 12°C和真空条件下干燥 2h， 然后撤去自来水于 12°C 真空干燥 2h， 得到卡泊芬净二乙酸盐 （1.50g， 质量收率 75%) 。 HPLC显示 纯度为 99.90 %， 单一杂质均在 0.1 %以下， 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙 酯和乙醇的质量百分含量分别为 0.01 %、 0.0%、 0.0%、 0.01%和 0.26%， 见 附图 1和 2所示， 无机盐的质量百分含量为 0.0 %， 水分 7.5%。 其 XRPD图 谱见附图 3。

MS(ESI) : 1093.6[M+H] ⁺ ;

^-NMR (500.13 MHz, CD ₃ OD) δ 7.12 (m, 2H), 6.75 (m, 2H), 4.97 (d, IH) 4.91 (d, IH), 4.66 (d, IH), 4.60(dd, 3.2, IH), 4.56-4.51 (om, 2H), 4.48 (dd, IH), 4.32-4.28 (om, 3H) 4.22 (dd, IH), 4.18 (d, IH), 4.08-3.96 (om, 3H), 3.83 (m, IH), 3.76 (d, IH), 3.05 (t, 2H), 3.02-2.76 (om, 4H), 2.41 (dd, IH), 2.29-2.17 (om, 3H) 2.11-1.78 (om, 5H), 1.90(s, 6H), 1.58 (m, 2H), 1.53-1.19 (om, 15H), 1.16 (d,3H), 1.13-1.00 (om, 2H), 0.91 (m, IH), 0.87 (t, 3H),0.85 (degenerate d, 6H);

¹³ C-NMR (125 MHz, CD ₃ OD) 179.3, 175.5, 173.4, 172.8, 172.6, 171.95, 171.93, 168.1, 157.7, 132.1, 128.8 , 115.4， 76.5, 74.8, 74.2, 71.2, 70.5, 69.3, 68.5 67.4, 63.5, 61.9, 57.6, 56.3, 55.4, 55.2, 50.4, 46.2, 45.1, 43.1, 39.6, 38.1, 37.6,

37.2, 36.1, 34.9, 33.8, 32.1, 30.4, 30.3, 30.0, 29.9, 29.8, 29.53, 29.50, 27.2, 26.3, 23.3， 19.9， 19.4， 19.1。 实施例 4

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

于 10°C的条件下，将实施例 2获得的式 1化合物（2.0g)，溶于醋酸 (0.13ml) 和水 (2.2ml)的体系中， 溶清后加入乙醇 （25ml) ， 搅拌均匀， 缓慢滴加乙酸 乙酯 （27.4ml) ， 滴毕， 于 10°C搅拌 2h。 过滤， 用乙醇和乙酸乙酯的混合物 (1.7： 1) 洗涤数次， 然后将样品放置于真空干燥中， 并在真空干燥器底部 放置一盘自来水， 于 10°C和真空条件下干燥 4h， 得到卡泊芬净二乙酸盐 (1.50g， 质量收率 75%) 。 HPLC显示纯度为 99.90%， 单一杂质均在 0.1% 以下， 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇的质量百分含量分别为 0.07 %、 0.04%、 0.15%、 0.47%和 0.49%。 无机盐的质量百分含量为 0.095 %， 水 分 9.5%。 实施例 5

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

于 15°C的条件下， 将实施例 1获得的含有式 1化合物的原料 （2.0g) ， 溶于醋酸 (0.25ml)和水 2.2mi;>的体系中， 溶清后加入乙醇 （25ml) ， 搅拌均 匀， 缓慢滴加乙酸乙酯 （30ml) ， 滴毕， 于 15°C搅拌 2h。 过滤， 用乙醇和 乙酸乙酯的混合物 （1.7: 1) 洗涤数次， 然后将样品放置于真空干燥中， 并 在真空干燥中底部放置一盘纯水， 于 15°C和真空条件下干燥 6h， 然后撤去 纯水于 15°C真空干燥 2h， 得到卡泊芬净二乙酸盐 （1.70g， 质量收率 85%) 。 HPLC显示纯度为 99.91%。 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇的质量 百分含量分别为 0.05%、 0.02%、 0.29%、 0.48%和 0.50%， 无机盐的质量百 分含量为 0.495%， 水分 8.5%。 实施例 6

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

于 20°C的条件下， 将实施例 1获得的含有式 1化合物的原料 （2.0g) ， 溶于醋酸 0.13ml)和水 4.2ml)的体系中， 溶清后加入乙醇 （25ml) ， 搅拌均 匀， 缓慢滴加乙酸乙酯 （88.2ml) ， 滴毕， 于 20°C搅拌 lh。 过滤， 用乙醇和 乙酸乙酯的混合物 （1.7: 1) 洗涤数次， 然后将样品放置于真空干燥中， 并 在真空干燥中底部放置一盘冰水混合物， 于 20°C和真空条件下干燥 10h， 然 后撤去冰水混合物 20°C真空干燥 lh， 得到卡泊芬净二乙酸盐 （1.95g， 质量 收率 97.5%) 。 HPLC显示纯度为 99.92%， 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙 酯和乙醇的质量百分含量分别为 0.02%、 0.01%、 0.15%、 0.26%和 0.25%， 无机盐的质量百分含量为 0%， 水分 8.9%。

实施例 7

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

于 10°C的条件下，将实施例 2获得的式 1化合物（2.0g)，溶于醋酸 (0.25ml) 和水 (2.2ml)的体系中， 溶清后加入乙醇 （25ml) ， 搅拌均匀， 缓慢滴加乙酸 乙酯 （30ml) ， 滴毕， 于 10°C搅拌 2h。 过滤， 用乙醇和乙酸乙酯的混合物 (1.7： 1) 洗涤数次， 然后将样品放置于真空干燥中， 并在真空干燥中底部 放置一盘冰水混合物， 于 10°C和真空条件下干燥 24h， 然后撤去冰水混合物 10°C真空干燥 2.5h， 得到卡泊芬净二乙酸盐 （1.55g， 质量收率 77.5%) 。 HPLC显示纯度为 99.90%， 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇的质量 百分含量分别为 0%、 0%、 0.05%、 0.09%和 0.10%， 无机盐的质量百分含量 为 0%， 水分 9.0%。 实施例 8

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

于 0°C的条件下，将实施例 2获得的式 1化合物（2.0g)，溶于醋酸 (0.13ml) 和水 (2.3ml)的体系中， 溶清后加入乙醇 （36ml) ， 搅拌均匀， 缓慢滴加乙酸 乙酯 （38.4ml) ， 滴毕， 于 0°C搅拌 lh。 过滤， 用乙醇和乙酸乙酯的混合物 (1.7： 1) 洗涤数次， 然后将样品放置于真空干燥中， 并在真空干燥中底部 放置一盘冰水混合物，于 0°C和真空条件下干燥 48h，然后撤去冰水混合物 0°C 真空干燥 5h， 得到卡泊芬净二乙酸盐 （1.80g， 质量收率 90%) 。 HPLC 显 示纯度为 99.88%， 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇的质量百分含 量均为 0%， 无机盐的质量百分含量为 0%， 水分 12.0%。 实施例 9

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

于 5 °C的条件下， 将实施例 1 获得的含有式 1化合物的原料 （2.0g ) ， 溶于醋酸 (0.50ml)和水 (3.3ml)的体系中， 溶清后加入乙醇 （36ml ) ， 搅拌均 匀， 缓慢滴加乙酸乙酯 （60ml) ， 滴毕， 于 5 °C搅拌 lh。 过滤， 用乙醇和乙 酸乙酯的混合物 （1.7 : 1 ) 洗涤数次， 然后将样品放置于真空干燥中， 并在 真空干燥中底部放置一盘碎冰， 然后于 5 °C和真空条件下干燥 48h， 然后撤 去碎冰 5 °C真空干燥 0.5h，得到卡泊芬净二乙酸盐（1.88g，质量收率 94.0 % )。 HPLC显示纯度为 99.86 %， 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇的质量 百分含量均为 0%， 无机盐的质量百分含量为 0 %， 水分 15.0%。 实施例 10

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

将实施例 1获得的含有式 1化合物的原料， 放置于真空干燥中， 并在真 空干燥中底部放置一盘碎冰， 然后于 0°C和真空条件下干燥 24h， 然后撤去 碎冰 0°C真空干燥 lh。 HPLC显示纯度为 99.50 %， 四氢呋喃、 乙腈、 甲醇、 乙酸乙酯和乙醇的质量百分含量均为 0.01 %、 0.03 %、 0.10 %、 0.19 %和 0.20 %， 无机盐的质量百分含量为 0.05 %， 水分 9.5%。 实施例 11

制备低溶剂残留及低盐的卡泊芬净

将实施例 1获得的含有式 1化合物的原料， 放置于真空干燥中， 并在真 空干燥中底部放置一盘碎冰， 然后于 10°C和真空条件下干燥 12h， 然后撤去 碎冰 10°C真空干燥 0.5h。 HPLC显示纯度为 99.50 %， 四氢呋喃、 乙腈、 甲 醇、 乙酸乙酯和乙醇的质量百分含量均为 0.01 %、 0.02%、 0.10%、 0.15%和 0.15%， 无机盐的质量百分含量为 0.05 %， 水分 10.2%。 对比例 12

低溶剂残留及低盐的卡泊芬净稳定性研究

取上述实施例 3、 实施例 4、 实施例 5、 实施例 6、 实施例 7、 实施例 8和实 施例 9制备的样品， 分别于 -25— -20°C放置 30天， 然后取样进行 HPLC分析， 结果如下表 1所示。 HPLC分析显示， 其稳定性良好， 未发生任何降解。

对比例 13

参照文献方法制备卡泊芬净

以 Pneumocandin B。 为起始原料， 参照 WO97/47645、 US5936062 , J.Org.Chem., 2007, 72, 2335-2343等文献报道的方法， 制备得到卡泊芬净粗 品， 然后通过结晶和制备柱分离得到 99.9 %的卡泊芬净样品， 再按照 WO94/21677 、 WO97/47645 、 WO2010008493A2 、 WO2009151341A1 、 WO2010108637A1等文献报道方法分别进行干燥或结� ��， 数据如下表所示。 数据表明湿润氮气干燥法、 冷冻干燥法和喷雾干燥法难以将有机溶剂干燥 除 去， 导致有机溶剂残留超标， 真空干燥法 (不加水体系干燥)不但没有良好除 去有机溶剂， 而且产品降解相当明显， 盐析结晶法不含有有机溶剂， 但是氯 化钠明显超标， 并且结晶后纯度降低。

四氢呋 乙腈 甲醇 乙酸 乙醇 无机 水分 HPLC 喃 乙酯 土卜 纯度 湿润氮气干燥法 0.07 % 0. 14% 0.25% 1.0% 2.5% 0.05% 8.8% 99.7 % 冷冻干燥法 0.05 % 0.09% 0.27% 1.2% 2.3% 0% 3.8% 99.6 % 喷雾干燥法 0.02 % 0. 14% 0.29% 1.5% 2.9% 0 % 5.8% 99.6 % 真空干燥法（不加 0.01 % 0.03% 0.04% 0.75% 1.24% 0 % 2.0% 99. 1 % 水体系干燥）

盐析结晶法 0 % 0% 0% 0% 0% 1.55% 7.8% 99.6 % 实施例 14

低溶剂残留及低盐的卡泊芬净药物组合物的制 备

于 25ml烧瓶中， 加入 0.375g蔗糖、 0.25g甘露醇、 8.75ml水、 0.25ml 醋酸水溶液 (75mg/ml)， 然后加入 0.6415g实施例 7获得的低溶剂残留及低盐 的卡泊芬净。 搅匀该混合溶液， 然后用 1N 的氢氧化钠溶液调节 pH值到 6， 用水调节混合溶液的体积到 12.5ml。 然后采用无菌过滤器过滤， 滤液转移到 10ml的玻璃管中， 每支玻璃管装量为 1.75ml， 再将其转移到冻干机中， 将其 冻干成白色粉末。 实施例 15

低溶剂残留及低盐的卡泊芬净药物组合物的制 备

于 25ml烧瓶中， 加入 0.375g蔗糖、 0.25g甘露醇、 8.75ml水、 0.25ml醋 酸水溶液 (75mg/ml)， 然后加入 0.6853g实施例 9获得的低溶剂残留及低盐的 卡泊芬净。 搅匀该混合溶液， 然后用 1N 的氢氧化钠溶液调节 pH值到 6， 用 水调节混合溶液的体积到 12.5ml。 然后采用无菌过滤器过滤， 滤液转移到 10ml的玻璃管中， 每支玻璃管装量为 1.75ml， 再将其转移到冻干机中， 将其 冻干成白色粉末。 实施例 16

于 25ml烧瓶中， 加入 0.375g蔗糖、 0.25g甘露醇、 8.75ml水、 0.25ml醋 酸水溶液 (75mg/ml)， 然后加入 0.6388g实施例 4获得的低溶剂残留及低盐的 卡泊芬净。 搅匀该混合溶液， 然后用 1N 的氢氧化钠溶液调节 pH值到 6， 用 水调节混合溶液的体积到 12.5ml。 然后采用无菌过滤器过滤， 滤液转移到 10ml的玻璃管中， 每支玻璃管装量为 1.75ml， 再将其转移到冻干机中， 将其 冻干成白色粉末。 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并非用以限定本发明的实质技 术内容范围， 本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的 权利要求范围 中， 任何他人完成的技术实体或方法， 若是与申请的权利要求范围所定义的 完全相同， 也或是一种等效的变更， 均被视为涵盖于该权利要求范围之中。