以下に、本発明の実施の形態を説明する� ��もっとも、本発明は、以下に説明する実施� ��形態によって、限定されるものではない。

 本発明者等は、驚くべきことに、DDX39と� �うタンパク質の発現が消化管間質腫瘍の術� �転移症例の原発巣腫瘍組織において、非転� �症例の原発巣腫瘍組織よりも有意に発現が� �いことを発見した。本発明者等は、プロテ� �ーム解析によって消化管間質腫瘍患者の予� �を予測するための腫瘍マーカーの開発を行� �た。以下に詳細に説明するように、転移が3� ��以上なく病理学的悪性度も低かった症例群� ��、早期(1年以内)に転移を来し病理学的悪性� ��も高かった症例群とを比較した。手術検体� ��対して蛍光二次元電気泳動法によるタンパ� ��質の網羅的発現解析を行い、約5000個のタン パク質スポットの中から両群を区別しうる特 定のタンパク質としてDDX39を見いだした。

 このように、本発明の一の側面によると� ��消化管間質腫瘍を患う患者の予後を予測す� ��ためのキットおよび方法が提供される。す� ��わち、本発明によると、DDX39を腫瘍マーカ� �とすることで、消化管間質腫瘍症例のうち� �後不良群を予め見出すことができる。さら� �、このような症例には早期から消化管間質� �瘍治療剤の投与を開始することで消化管間� �腫瘍の治療成績を向上させることが見込ま� �る。なお、本発明による消化管間質腫瘍の� �後の予測は、消化管間質腫瘍の術後または� �前のいずれの時点でも行うことができる。� �えば、本発明による消化管間質腫瘍の予後� �予測は、術前および/または術後におけるメ� ��ル酸イマチニブの投与等の化学療法の要否� ��検討する際に利用することができる。なお� ��本明細書において、予後不良は、術後に消� ��管間質腫瘍が転移することや、消化管間質� ��瘍の病勢が悪化することをいう。

 なお、DDX39(UniProt Accession No.:O00148)は、DEA D box RNA Helicasesの一種であり、正常細胞で� �ほとんど発現していないことが報告されて� �る。RNA Helicasesは、RNAのスプライシングや輸 送などRNA代謝に重要な役割を担うとされてお り、また、DEAD box protein familyは、発生、精� ��形成、細胞増殖・分化に関与していると考� ��られている。なお、本明細書においてDDX39� �は、配列番号1のアミノ酸配列からなり、ま� ��配列番号1のアミノ酸配列において、1つ若� �くは数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、� �加若しくは挿入されたアミノ酸配列からな� �ものも含む。

 これまでに、DDX39はいくつかの腫瘍組織� �おいて高発現していることが報告されてお� �(非特許文献3: T Sugiura et al. (2007), 非特許 文献4: Joon T. Park et al. (2006), 非特許文献5 : I. Gashaw et al. (2005), 非特許文献6: J Takit a et al. (2004) )、乳がんや卵巣癌腫瘍の予後 を診断する際の複数の遺伝子マーカーセット の一つとして認識されていた(非特許文献7: S kye H. C et al (2006), 特許文献4:国際公開2004/ 022778号パンフレット)。しかしながら、本発� �によれば、DDX39を単一のマーカーとして用い ることで腫瘍組織の予後を予測することが可 能となる。腫瘍の予後の予測に関し、DDX39の� ��独マーカーとしての利用は、どの腫瘍につ� ��ても報告されていない。特に、消化管間質� ��瘍におけるDDX39の発現に関するものは何ら� �告されていない。すなわち、本発明者は、� �化管間質腫瘍を患う患者の予後を、DDX39を単 一のマーカーとして用いることで予測するこ とが可能であることを見出した。上記のよう に、単一マーカーによって予後を予測するこ とが可能となることにより、複数マーカーに より予後を予測する際に比べ、技術的により 簡便であり、迅速に予測することが可能であ り、またコスト面においても実用的なものと なる。

 DDX39の発現を検出または定量するための� �料は、消化管間質腫瘍を患う患者の罹患組� �、血液に由来することが好ましい。試験に� �する試料は、患者から採取された検体自体� �あってもよく、また試験に応じて検体を処� �して得られた試料であってもよい。例えば� �料を免疫染色法に供する場合、試験に供す� �試料として、患者から得られた検体から調� �したパラフィン切片を用いることができる� �また、例えば試料をウェスタン・ブロッテ� �ング法またはRT-PCRに供する場合、試験に供� �る試料として、患者から得られた検体から� �製したタンパク質抽出液またはmRNA抽出液を� ��いることができる。

 試料におけるDDX39の発現は、以下に例示� �る通り、任意の方法で検出または定量する� �とができる。なお、DDX39発現の検出または定 量は、単にDDX39発現の有無を検出するもので� ��ってもよく、また、DDX39の発現量を相対的� �たは絶対的に決定するものでもよい。また� �DDX39発現は、タンパク質レベルで検出または 定量してもよく、またmRNAレベルで検出また� �定量してもよい。

 タンパク質レベルでの検出または定量は� ��例えば、免疫染色法(蛍光抗体法、酵素抗体 法、重金属標識抗体法、放射性同位元素標識 抗体法を含む)、電気泳動法による分離と蛍� �、酵素、放射性同位元素等による検出また� �定量との組み合わせ(ウェスタン・ブロッテ� ��ング法、蛍光二次元電気泳動法を含む)、酵 素免疫測定吸着法(ELISA)、ドット・ブロッテ� �ング法等により行うことができる。また、mR NAレベルでの検出または定量は、例えば、RT-P CR(好ましくはリアルタイムRT-PCR)、ノーザン� �ブロッティング法、Branched DNAアッセイ等に� ��り行うことができる。

 DDX39発現の検出または定量の結果は、2種� ��の段階(陽性および陰性)または3種類以上の� ��階に分類することができる。DDX39発現の分� �は、検出または定量方法に応じて、十分な� �験を有する病理医、臨床医、検査技師また� �検査施設が行うことが好ましい。例えば、DD X39発現の分類は、免疫染色法を用いる場合は 病理医が行うことができ、RT-PCRを用いる場合 は検査技師が行うことができる。

 なお、DDX39発現の分類は、患者からの試� �におけるDDX39の発現量を、コントロールにお けるDDX39の発現量と比較することにより行う� ��とが好ましい。DDX39発現の結果を分類する� �階の数に応じて、複数のコントロールを用� �ることが好ましい。例えば、DDX39発現の結果 を2種類の段階(陽性および陰性)に分類する場 合は、それぞれの段階に対応した2種類のコ� �トロール(DDX39陽性コントロールおよびDDX39陰 性コントロール)を用いることが好ましい。� �た、DDX39発現の結果を3種類の段階に分類す� �場合は、それぞれの段階に対応した3種類の� ��ントロールを用いることが好ましい。また� ��コントロールの1つとして、健常者または予 後良好な消化管間質腫瘍患者に由来するコン トロールを用いることが好ましい。なお、コ ントロールは、予め作成されたものでもよく 、また、患者からの試料と同時に試験された ものでもよい。

 本発明によると、消化管間質腫瘍を患う� ��者の予後を予測するためのキットが提供さ� ��る。当該キットは、患者から得られた試料� ��おけるDDX39の発現を検出または定量する手� �を含む。すなわち、タンパク質レベルでの� �出または定量を行う場合においては、発現� �検出または定量する手段は、免疫染色法等� �行うための手段を含むことが好ましく、例� �ば、抗DDX39抗体(モノクローナルおよびポリ� �ローナル抗体、標識化抗体、キメラ抗体、� �ト化抗体ならびにこれらの結合活性断片を� �む)を含むことが好ましい。また、mRNAレベル での検出または定量を行う場合においては、 発現を検出または定量する手段は、上記した RT-PCR等を行うための手段を含むことが好まし く、例えば、DDX39のmRNAに対するプローブを含 むことが好ましい。さらに、当業者に明らか なように、発現を検出または定量する手段は 、バッファー、発色基質、二次抗体、ブロッ キング剤等の試薬、試験に必要な器具、コン トロール、ならびに取扱説明書および評価指 導書(同等の内容の電子データを含むCD-ROM等� �記録媒体も含む)等を含むことができる。

 実施例において詳細に説明するように、� ��発明者等は、DDX39の発現が患者の予後不良� �相関することを見出した。すなわち、DDX39の 発現がより高いほど予後不良となる可能性が 高いと予測できる。

 なお、DDX39の発現による判断基準は、治� �の段階や治療手段(メシル酸イマチニブの投� ��等)に応じて個々に設定することができる。 例えば、術前のメシル酸イマチニブの投与の 要否を検討するための判断基準と、術後のメ シル酸イマチニブの投与の要否を検討するた めの判断基準とは異ならせることができる。 なお、メシル酸イマチニブは副作用の大きさ や医療費の高さが問題となっているが、上記 判断基準は、消化管間質腫瘍の外科手術によ る摘出前および/または摘出後のメシル酸イ� �チニブの投与の要否を検討する際に用いる� �とが好ましい。

 このように本発明によると、消化管間質� ��瘍の予後をより高い判別率で予測すること� ��でき、ひいては、これに基づきより適切な� ��療計画を立てることが可能となり、より適� ��な治療を行うことが可能となる。例えば、� ��化管間質腫瘍の外科手術による摘出前およ� ��/または摘出後のメシル酸イマチニブの投与 の要否を検討するために患者の予後を予測す る場合、上記したように予後不良となる可能 性が高いと判断された際には、メシル酸イマ チニブによる化学療法を受ける必要があると 判断できる。また、予後不良となる可能性が 低いと判断された際には、メシル酸イマチニ ブによる化学療法の必要はないと判断できる 。

 実施例において詳細に説明するように、� ��発明によると、非常に高い感度および特異� ��で患者の予後を予測することができる。さ� ��に、メシル酸イマチニブは副作用の大きさ� ��医療費の高さが問題となっているが、本発� ��によると、メシル酸イマチニブによる治療� ��必要としない患者に対して当該治療薬の投� ��を回避することで上記問題点を回避でき、� ��らに、メシル酸イマチニブによる治療を必� ��とする患者に対してはより迅速に当該治療� ��による治療を開始できる。このように、本� ��明によると診断的価値が非常に高い予後予� ��方法およびキットが提供される。一方で、� ��発明による予測は、特殊な装置等を必要と� ��ずに、例えば免疫染色法などの一般的に用� ��られている簡便な手法で通常の技術レベル� ��病理医等により廉価に行うことができる。

 また、本発明の他の側面によると、消化� ��間質腫瘍を患う患者のうち、DDX39の発現に� �づき定義された患者の消化管間質腫瘍を処� �するための医薬組成物が提供される。本発� �にかかる医薬組成物は、上記式(I)で示され� �4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メ� �ル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリミジン-2-イルア� ��ノ)フェニル]-ベンズアミドまたは薬学的に� ��容されるその塩を活性成分として含む。

 4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-� ��チル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリミジン-2-イル アミノ)フェニル]-ベンズアミドまたは薬学的 に許容されるその塩の製造方法、および抗腫 瘍剤としてのその使用は、特許文献2(欧州特� ��出願公開第0564409号明細書の実施例21、なら� ��に他の対応出願および対応特許、例えば日� ��国特許第2706682号明細書、米国特許第5521184� �明細書)に記載されている。

 また、4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチ� �)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリミジン -2-イルアミノ)フェニル]-ベンズアミドまたは 薬学的に許容されるその塩は、好ましくは薬 学的に許容される酸付加塩であり、例えば塩 酸、硫酸またはリン酸のような無機酸との塩 であるか、あるいは適当な有機カルボン酸ま たはスルホン酸、例えばトリフルオロ酢酸、 酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク 酸、マレイン酸、フマル酸、ヒドロキシマレ イン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸もしく はシュウ酸のようなモノ-もしくはジ-カルボ� ��酸、またはアルギニンまたはリジンのよう� ��アミノ酸、安息香酸、2-フェノキシ-安息香� ��、2-アセトキシ-安息香酸、サリチル酸、4-� �ミノサリチル酸のような芳香族カルボン酸� �マンデル酸またはケイ皮酸のような芳香族-� ��肪族カルボン酸、ニコチン酸またはイソニ� ��チン酸のような複素環式芳香族カルボン酸� ��メタン-、エタン-もしくは2-ヒドロキシエタ ン-スルホン酸のような脂肪族スルホン酸、� �たはベンゼン-、p-トルエン-もしくはナフタ� ��ン-2-スルホン酸のような芳香族スルホン酸� ��の塩である。

 また、4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチ� �)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリミジン -2-イルアミノ)フェニル]-ベンズアミドのモノ メタンスルホン酸付加塩およびその好ましい 結晶形は、特許文献3(国際特許出願99/03654号� �ンフレット、ならびに他の対応出願および� �応特許、例えば日本国特許第3276359号明細書) に記載されている。

 本発明にかかる医薬組成物の有効投与量� ��、患者の年齢、体重、病状、投与様式およ� ��臨床像等に依存して、体重約70kgの患者に対 してイマチニブとして例えば1日約100~1000mg、� ��ましくは200~600mg、さらに好ましくは400mgで� �る。

 本発明にかかる医薬組成物は、薬学的に� ��容される担体をさらに含むことができる。� ��学的に許容される担体として、任意の標準� ��な担体、緩衝剤および賦形剤(例えばリン酸 緩衝食塩水、5%デキストロース水溶液)を用い ることができる。好ましい担体は、投与様式 に依存する。典型的な投与様式には、経腸(� �えば経口)投与または非経口投与(例えば皮下 、筋肉内、静脈内もしくは腹腔内注射、また は局所、経皮、または経粘膜投与)が含まれ� �経口投与が好ましい。例えば、経口投与の� �めには、カプセル、錠剤および粉末などの� �形剤形、またはエリキシル、シロップおよ� �懸濁液などの液体剤形で投与することがで� �る。

 上記したように、本発明にかかる医薬組� ��物は、DDX39の発現に基づき定義された患者� �対象とする。具体的には、本発明にかかる� �薬組成物は、上記したように、DDX39の発現に 基づき予後不良と予測された患者を対象とす ることが好ましい。以上のように、本発明に よると、消化管間質腫瘍を患う患者のうち、 DDX39の発現に基づき定義された患者の消化管� ��質腫瘍を処置するための医薬組成物が提供� ��れる。

 なお、消化管間質腫瘍治療薬であるメシ� ��酸イマチニブが、ノバルティスファーマ株� ��会社よりグリベック(登録商標)として販売� �れている。その添付書類には、免疫組織学� �検査によりKIT(CD117)陽性消化管間質腫瘍と診� ��された患者を当該治療薬の対象とする旨が� ��記されている。このように、本発明にかか� ��医薬組成物の対象患者群と、グリベック(登 録商標)の対象患者群とは、当業者が明確に� �別することが可能であり、本発明にかかる� �薬組成物は、その対象患者、すなわち医薬� �途において、グリベック(登録商標)とは一線 を画する。

 なお、本発明にかかる医薬組成物も、グ� ��ベック(登録商標)と同様に、さらに免疫組� �学的検査によりKIT(CD117)陽性消化管間質腫瘍� ��診断された患者を対象とすることが好まし� ��。広く当業者に行われているように、KIT(CD1 17)陽性の確認は、例えば、抗ヒトc-Kit(CD117)ウ サギポリクローナル抗体(コード番号:A4502、� �コ・ジャパン株式会社製)を用いた免疫染色� ��により行うことができる。免疫染色法は、� ��造業者の取扱説明書に記載の方法に準じて� ��うことができる。KIT(CD117)陽性の確認は、上 記抗ヒトc-Kit(CD117)ウサギポリクローナル抗体 の添付書類に記載のように、当該抗体を用い た免疫染色法により行うことができる。