本发明涉及药物制剂， 具体涉及凝胶载体包载药物， 构建温敏型凝胶缓释血管栓 塞剂， 尤其涉及一种用于治疗肿瘤的药物缓释血管栓 塞凝胶剂及其制备方法。 背景技术:

目前， 介入治疗是用于治疗中晚期肿瘤的一种较为流 行与有效的治疗方法之一， 在介 入治疗方法中又以经导管动脉灌注化疗 （Transcatheter arterial infusion ; TAI ) 和 经导管动脉化疗栓塞（Transcatheter arterial chemoembolization; TACE)最为常用。 大量的实验和临床研究证实（HinoT, Kawashima Y, Shimabayashi S. Basic study for stabilization of w / o / w emulsion and its application to transcatheter arterial embolization therapy [ J ] . Adv Drug Deliv Rev, 2000, 45 (1) , 27 ― 45. )经导管 选择或超选择性插至肿瘤供血动脉， 施行 TAI可明显提高肿瘤局部药物浓度， 延长药物接 触时间， 提高药物疗效。 但是单纯 TAI方法， 通常， 患者五年生存率低， 其远期疗效并不 比静脉化疗有明显提高； 另外， 由于 TAI仍受到化疗药物剂量的限制、肿瘤耐药性和 癌细 胞增殖状态的影响； TAI属短时间高浓度的肿瘤冲击疗法， 药物局部作用时间有限， 对全 身血液中的肿瘤细胞和远处转移灶疗效甚微， 其远期疗效也不令人满意。 TACE方法通过 阻断肿瘤供血， 达到肿瘤缺血、 缺氧坏死的目的， 坏死的癌组织能激发机体免疫力， 有 可能清除远处的转移灶； 将栓塞剂与化疗药物混合注入肿瘤供血靶动脉 ， 既能阻断血供， 又可缓慢释放化疗药物起到局部化疗作用，因 此， TACE的近期疗效要较 TAI好。但是， TACE 存在肿瘤耐药以及肿瘤新生血管需反复栓塞等 不足。 有文献报道， 施行栓塞治疗后局部 缺氧有诱导 VGEF等表达，促肿瘤血管再生 (王滨，徐辉，曹贵文等. 肝动脉化疗栓塞对肝癌 肿瘤新生血管生成及血管内皮细胞生长因子表 达的影响.中华放射学杂志， 2005, 39 (2) : 204-206) , 然而， 其远期疗效仍不理想。 因此， 探索进一步提高肿瘤介入治疗的远期疗 效的栓塞剂， 成为介入医学研究的重点课题之一， 而其中的栓塞材料是关键。

目前， 临床与实验研究使用的栓塞材料主要有： （1)按材料性质分类可分为对机体无 活性材料、 自体材料及放射性颗粒； （2)按物理性状可分为固体和液体栓塞材料； （3)按 使血管闭塞的时间长短可分为短期、 中期和长期栓塞材料； （4)按材料能否被机体吸收， 分为可吸收性和不可吸收性栓塞材料。在 TACE临床治疗中广泛应用的液体栓塞剂为碘油� � 主要应用于肝癌等恶性肿瘤的栓塞治疗， 一般将碘油与化疗药物混合配制成混悬液或乳 剂。 其作用原理为： 碘油可通过导管直接注入到肿瘤的供血动脉并 于肿瘤微小动脉和血 窦内沉积， 起到栓塞肿瘤末梢动脉的作用， 同时由于其内包含有化疗药物， 可起到缓释 作用延长局部化疗时间。 但是从大量临床与实验研究表明碘油只能充填 末梢血管， 并非 理想的栓塞剂， 它可随着血管的再通而流失； 液体栓塞剂， 无论是混悬液或乳剂， 缓释 作用时间都较短， 一般 24-72小时内。 固体栓塞剂如明胶海绵微球、 PVA (聚乙烯醇）等， 不能随血管大小和形态塑形， 存在栓塞不彻底、 诱导肿瘤新生血管和侧支血管形成等不 足。其它有白芨微球栓塞剂的报道， 由于白芨除机械性阻塞外， 还有强烈的促凝血作用， 因此， 其临床疗效较其他栓塞剂可靠， 但由于其栓塞后疼痛、 发温、 肝功能损害等副反 应较重， 目前尚未在临床上推广使用。 还有如白蛋白、 淀粉、 顺铂白芨胶、 聚乳酸、 壳 聚糖等微球的临床与实验研究的不足。 因而， 虽然目前临床与实验研究中的栓塞剂种类 很多， 但仍需要研究与改进。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于克服临床用栓 塞剂的不足， 选择合适的、生物相容 性好的聚合物为载体包载药物， 构建缓释温敏凝胶型栓塞剂， 使其在室温时为液态、体 温时为凝胶态， 达到栓塞效果和缓慢释药的目的。

本发明提供一种用于治疗肿瘤的药物缓释血管 栓塞凝胶剂。

本发明所述药物缓释血管栓塞凝胶剂是将药物 通过药用载体形成的凝胶包载制成； 药物在血管栓塞凝胶剂中的含量范围为 0. 01%-50% W/W; 优选为 0. 5-50% W/W。 所述药用载体在血管栓塞凝胶剂中的质量百分 含量为 10%-65%。

所述药用载体在制备栓塞剂前可经过重结晶,� �化。

所述凝胶剂的凝胶粒径范围为 10ηιη-150μιη _; 优选为 100ηιη-50μιη。 本发明中所述药用载体为聚合物泊洛沙姆或合 成高分子材料如： 聚乙烯吡咯垸酮 (PVP) 、 聚乙二醇 PEG、 聚乙烯醇 （PVA) 、 卡波姆（Carbomer) 、 聚甲基丙烯酸酯类、 聚乙二醇修饰的聚乳酸（PEG- PLA) 、 聚乙二醇修饰的聚乳酸-羟基乙酸 (PEG-PLGA) 、 聚 乙二醇修饰的聚乙醇酸（PEG-PGA) 、 聚乙二醇修饰的聚己内酯 (PEG-PCL) ; 纤维素类： 甲基纤维素（MC)、乙基纤维素（EC)、羟乙基纤 维素（HEC)、甲基羟乙基纤维素（MHEC)、 羟甲基纤维素（HMC) 、 羟丙基甲基纤维素（HPMC) 、 羟丙基纤维素（HPC) 、 羧甲基纤 维素（CMC) 、 羧甲基纤维素钠 （CMC-Na) ； 改性淀粉类： 预胶化淀粉； 天然胶类： 阿拉 伯胶、 西黄蓍胶、 角叉菜胶、 刺槐豆胶、 瓜尔豆胶、 魔芋胶、 藻酸盐、 明胶、 透明质酸、 琼脂； 非纤维素多糖类： 壳聚糖、 脱乙酰壳聚糖、 半乳糖甘露聚糖、 环糊精及环糊精衍 生物等中的一种或多种。所述药用载体中各聚 合物的分子量在 0.1K-5000K道尔顿， 优选 为 0.5K- 50K道尔顿。

本发明所述药用载体优选以泊洛沙姆为主体， 不加或加入上述聚合物中的一种或者多 种。 最优以泊洛沙姆 407 (Pluronic® F127, Lutrol®F127) 为主体与其它聚合物一种或 者多种的组合物。泊洛沙姆占载体材料的 100%-0.1%。泊洛沙姆为主体加入上述聚合物中 的一种或者多种占载体材料的 0-20%。

本发明所述聚合物泊洛沙姆， 别名普流罗尼克， poloxamer; poloxalkol; monolan; supronic; polyvethylene propylene glycol； pluronic的系列产品。 （中国药典第 5 版） 泊洛沙姆的分子式 H0(C ₂ H ₄ 0) _a (C ₃ H ₆ 0) _b (C ₂ H ₄ 0) _a H _; 结构式为-

其中， b是在 15-67之间， a是在 2-130之间， 且 a单元的总比例占泊洛沙姆重量的 20-90%。 泊洛沙姆分子量范围优选为 1,000-20,000。

本发明所述的泊洛沙姆型号及理化参数见表 1。 （说明： 泊洛沙姆和普朗尼克是同一 种物质， 只是英译不同。）

表 1 泊洛沙姆型号及理化参数

相应于

泊洛沙姆型号 平均分子量 熔点 rc) 粘度 （°c) HLB 相对密度 普朗尼克型号

408 F128 12600 58 3100 22 1.08

407 F127 12220 58 3600 21.5 1.07

338 F108 14600 57 2800 27 1.07

333 P103 5800 57 500(60°C) 12.5 1.03

334 P104 5850 37.5 550 13 1.0

237 F87 7700 49 700 24 1.04

235 P85 4250 32 265 13.8 1.05

215 P75 4150 34 250 16.5 1.06

188 F68 8350 52 1000 29 1.06

108 F38 5000 48 260 30.5 1.07 * F表示固体（片状）， P表示半固体 （膏状物）。

泊洛沙姆优选型号的理化参数：

泊洛沙姆 188， 237, 338, 407在常温下最低凝胶（质量浓度分别为 60%， 65%, 30%, 20%), 熔点分别为 (52°C, 49 °C, 57 °C, 56°C )，粘度 ( >7°C, mPa. s )分别为 ( 100, 700, 2800， 3100), 故而优选为泊洛沙姆 407 (Pluronic® F127, Lutrol®F127)和泊洛沙姆 338 (Pluronic® F108)以及泊洛沙姆 188(Pluronic® F68 Lutrol®F68),最优选为泊洛沙姆 407(Pluronic® F127

本发明所述聚乙烯基吡咯垸酮，也叫聚维酮， 通用名为 Povidone,异名 E1201 ; Kollidon； Plasdone； Polyvidone； poly [1- (2-oxo- 1- pyrro- 1 idinyl) ethylene]； PVP； polyvinylpyrrolidone； l-vinyl-2-pyrro-lidinone polymer. 化学名为 1_乙稀基 _2- 吡咯垸酮均聚物。

(中国药典第 5版）化学结构式为：

PVP的分子量用聚维酮水溶液相对于水的粘度来 表征， 以 K值表示， K值在 10 120 之间。

表 2各种级别聚维酮的近似分子量

K-值 分子量

12 2500

15 8000

17 10 000

25 30 000

30 50 000

60 400 000

90 1 000 000

120 3 000 000 本发明所述聚乙烯吡咯垸酮优选 K值为 15-60之间。 最优为 K25和 K30以及 K90。

. 所述泊洛沙姆和聚乙烯吡咯垸酮通过市售得到 。如泊洛沙姆 407, 以 Pluronic® F127 (BASF公司 ) 或 Synperonic PE/F127 (Uniqema)之名出售的泊洛沙姆。

本发明中， 术语 "温敏凝胶"指当在足够的浓度和临界温度以下� �� 凝胶作为可流 动的液体存在， 而在高于临界温度时变成凝胶， 并且如果再将温度降到临界点以下， 凝 胶会可逆地变成可流动的液体。

本发明的另一目的是提供了上述一种用于治疗 肿瘤的药物缓释血管栓塞凝胶剂的制 备方法。该方法为将药物通过药用载体形成的 凝胶包载， 制备药物缓释血管栓塞凝胶剂。 本发明的凝胶剂可以用纯化或未纯化的市购聚 合物来制备。更优选用纯化的聚合物 来制备。 其纯化方法是通过重结晶， 分离聚合物， 干燥即可使用。

可以通过下列方法中的一种方法纯化泊洛沙姆 :将泊洛沙姆溶于合适溶剂，如乙醇、 异丙醇、 氯仿、 二氯甲垸、水中的一种或几种混合物中， 然后在醚或者垸烃， 如乙醚或 者正己垸中沉淀。 或者通过在正丙醇 /水溶剂中分层将其分离。 将分离的聚合物干燥即 可使用。

可以通过下列方法中的一种方法纯化聚维酮： 将 PVP溶于合适溶剂， 如甲醇、 乙 醇、 异丙醇、 丙酮、 氯仿、 二氯甲垸、 乙酸乙酯、 水中的一种或几种混合物中， 然后在 醚或者垸烃， 如乙醚或者正己垸中沉淀。 将分离的聚合物干燥即可使用。

本发明的干燥方法可采取减压旋转蒸发、 减压干燥、 真空干燥、 冷冻干燥、 喷雾干 燥、 硫化床制粒干燥、 加热烘干中的一种或几种。

本发明的用于治疗肿瘤的药物缓释血管栓塞凝 胶剂的制备方法包括下列步骤：

(1) 凝胶剂的制备

将载体材料一种或多种混合物加入溶液中， 振荡、 分散， 在 0-30CTC温度， 优选温 度为 0-70°C， 最优选温度为 0-25°C放置， 直至载体材料完全溶胀、搅拌分散溶解成 透明的液体， 灭菌， 无菌灌装、 密封， 即得液体凝胶剂； 或干燥得到凝胶干剂， 置 于 _70°C- 50°C温度， 优选温度为 0-25°C， 最优选温度为 4 °C保存备用；

(2)载药缓释凝胶剂的制备

A、 将药物加到上述制备好的水凝胶中， 搅拌分散溶解， 灭菌， 无菌灌装、 密封， 即 得载药凝胶剂； 将凝胶剂置于 0-50°C温度， 优选温度为 0- 25°C， 最优选温度为 4°C保存备用；或干燥得到凝胶干剂，置于 -70°C-50°C温度，优选温度为 0- 25°C， 最优选温度为 4°C保存备用；

B、 以凝胶干剂为原料制备： 将凝胶干剂以水溶液为分散介质， 在 0- 300°C温度， 优 选温度为 0-70°C， 最优选温度为 0-25°C， 振荡分散均匀， 将药物加入分散后的凝 胶中，搅拌分散溶解， 灭菌， 无菌灌装、密封， 即得载药凝胶剂， 置于 -70°C-5(TC 温度， 优选温度为 0- 25°C， 最优选温度为 4°C保存备用。 ( 3) 药物缓释血管栓塞凝胶剂的制备

所述步骤（1 )分散用的溶液为水溶液、 生理盐水溶液或 pH7. 4的 PBS (磷酸盐缓冲 液）， 药用载体材料与溶液的比例为 0. 01%- 50%W/V， 优选为 0. 5-50% W/V。

所述步骤（1 )得到的凝胶粒径在 10nm -150 w m _; 优选为 100ηηι-50 μ m。

所述步骤（1 ) 或 （2) 中的灭菌方法为下列中的一种： ① 0. 45 μ ιπ 的滤膜过滤； ② 常规热压灭菌； ③低温灭菌： 先降温至 -20°C超过 3小时，再降温至 - 70°C超过 3小时， 后升温至 -20°C 超过 3小时，再升至 4°C超过 3小时，紫外照射超过 30min， 此过程重复 2-5次。

所述步骤（1 )和 (2)整个制备过程在无菌条件下操作， 所用试剂和仪器都是无菌的。 本发明所述药物包括任何适合制成给药系统的 抗肿瘤药物（包括但不限于）， 可为有 机药物、 水溶性药物或水不溶性药物抗癌药。 包括垸化剂类： 如氮芥类， 如氮芥、 苯丁 酸氮芥、 环磷酰胺（CTX)、 异环磷酰胺 （IF0) 等， 亚硝脲类： 如 N-甲基亚硝脲（MNU)、 ACNU、 BCNU、 CCNU、甲基 CCNU等，乙烯亚胺类：如 2， 4， 6-三乙烯亚胺三嗪化合物（TEM)、 塞替派， 甲垸磺酸酯类： 如白消安 （马利兰）， 以及达卡巴嗪、 甲基苄肼、 六甲嘧胺等； 抗代谢类： 包括胸腺酸合成酶抑制剂， 如氟尿嘧啶 （5-FU)、 呋喃氟尿嘧啶 （FT-207)、 二喃氟啶 （双呋啶 FD-1 )、 优氟泰 （UFT)、 氟铁龙 （5-DFUR) 等， 二氢叶酸还原酶抑制 剂， 如甲氨蝶呤（MTX)、氨喋呤（白血宁）等， DNA多聚酶抑制剂， 如阿糖胞苷（Ara-c)、 等， 核苷酸还原酶抑制剂， 如羟基脲 （HU)、 肌苷二醛 （inosine dialdehyde), 腺苷二 醛（adenosinediialde-hgde)、 胍唑 （guanazole)等， 嘌呤核苷酸合成抑制剂， 如 6-巯 嘌呤 （6-MP)等； 抗肿瘤抗生素类： 包括蒽环类抗肿瘤抗生素， 如阿霉素 （ADM)、 柔红 霉素 (DNR)、表阿霉素 (EPI或 E_ADM)、米托蒽醌 (MTT、 DHAD)、 吡喃阿霉素 (THP)等， 放线菌素类抗肿瘤抗生素， 如放线菌素 D (ACD)等， 博莱霉素类抗肿瘤抗生素， 如博莱 霉素 （争光霉素）、 平阳霉素 （A5) 等， 丝裂霉素类抗肿瘤抗生素， 如丝裂霉素 A、 丝裂 霉素 B、 丝裂霉素 C (MMC)等， 光辉霉素类抗肿瘤抗生素， 如光辉霉素 （MTH)、 橄榄霉 素等， 其他抗生素如链脲霉素 （STT); 抗肿瘤植物药： 抑制微管和微管蛋白聚合的长春 碱和紫杉类， 如长春花碱（VLB)、 长春新碱（VCR)、 长春花碱酰胺（VDS：)、 去甲长春花 碱 （NVB)、 紫杉醇 （PTX)、 泰索帝等， 拓扑异构酶抑制剂喜树碱类和鬼臼毒类， 如喜树 碱（CPT)、羟基喜树碱（HCPT)、 鬼臼乙叉甙（足叶乙甙， VP- 16)等， 抑制肿瘤细胞 DNA 合成类， 如三尖杉酯碱和靛玉红等； 其他抗肿瘤药物， 如顺铂 （DDP)、 卡铂 （CBP)、 草 酸铂 （奥沙利铂， L- 0HP)等。 优选的药物是表阿霉素、 顺铂、 长春新碱、 紫杉醇、 多西他赛和依托泊苷。

本发明所述药物包括任何适合制成凝胶胶束给 药系统的肿瘤血管生成抑制剂。 如抑 制基质降解的药物： Marimastat、 AG3340、 COL- 3、 Bay 12— 9556、 BM S- 275291 或 Neovastat;直接作用于内皮细胞的药物： TNP- 470、 Squalamine AE-941或 Endostatin; 抑制促血管生成因子的药物： SU5416、 SU6668, 干扰素 α 或抗 VEGF抗体； 抑制整合蛋 白识别的药物： Vitaxin (伊瑞西珠、 恩度） 或 EMD 121974 ;其他非特异性抑制剂：反应 停、 CA I、 白细胞介素 12、 Suramin或 IM862等。

优选的药物是 Vitaxin、 白细胞介素 12或 Endostatin。

本发明所述药物包括任何适合制成凝胶胶束给 药系统的分子靶向抗肿瘤药物， 如酪 氨酸蛋白激酶抑制剂： 伊马替尼、 厄洛替尼、 舒尼替尼、 吉非替尼、 索拉菲尼、 达沙替 尼、 拉帕替你、 尼洛替尼等。

优选的药物是伊马替尼、 吉非替尼、 索拉菲尼。

最优选的药物是 Endostatin (恩度）。 本发明所述药物包括显影剂， 显影剂为微粒化钽粉、 氧化钽、硫酸钡、 磁性粒子或 碘海醇。 优选的是碘海醇。

本发明栓塞剂可以进行动脉栓塞， 通过局部缓释达到抑制肿瘤新生血管的作用， 到 达靶血管后立即凝固， 使栓塞能迅速彻底， 进一步提高 TACE疗效， 而且副反应小， 不 影响心、 肝、 肾等功能。 . 本发明栓塞剂易于经导管注入， 可随血流进入不同细小血管分支。 在注射过程中不 易返流， 不通过吻合侧支。

本发明的温敏凝胶可用作各种恶性肿瘤经导管 动脉化疗栓塞的栓塞剂，也可以作为良 性病变的血管内栓塞剂， 如子宫肌瘤、 肺咯血、 消化道出血或产后大出血等动脉栓塞治 疗， 有较大的临床应用价值。 本发明制备方法简便， 适于工业化生产。 附图说明

图 1 : 实施例 13兔子栓塞效果。 A为栓塞前肝动脉 DSA造影； B为栓塞后肝动脉 DSA造 影见肝动脉末梢血管栓塞。 （实施例 18)

图 2: 实施例 13试验兔栓塞后 24小时 CT见肝内沉积 （实施例 22)

图 3: 实施例 13试验兔栓塞后 48小时 CT见肝内沉积 （实施例 22)

图 4 : A为实施例 13试验兔栓塞后 8天 CT见肝左叶坏死， 边缘有栓塞剂沉积 （实施例 23 )

B为实施例 13试验兔栓塞后 21天 CT见肝左叶点状坏死， 边缘仍有栓塞剂沉积 (实施例 23 )

图 5 : 实施例 14试验兔栓塞前后肝动脉 DSA造影见肝动脉栓塞后末梢血管闭塞 （实施 例 24)

图 6: 实施例 14试验兔栓塞后 24小时复査 CT见肝实质内栓塞剂沉积 （实施例 25 ) 图 7: 实施例 14试验兔栓塞后 48小时复查 CT见肝实质内栓塞剂沉积 （实施例 25 ) 图 8: 试验兔肝左叶实质内直接注射栓塞剂后 24、 48小时后复査 CT见肝实质内栓塞剂 沉积， 一周后无栓塞剂沉积。 （实施例 26)

图 9: 栓塞后大体与病理标本 （实施例 22 )

图 10 确认肝内肿瘤生长 （如图 10A), 明确肿瘤供血动脉（图 10B) , 造影见肿瘤供血动 脉完全栓塞 （图 10C) (实施例 27)

图 11术后 3周复査 CT及处死动脉后行组织病理检査， 见肿瘤完全性坏死状况。 （实施例 27 ) 具体实施方式

下面以实施例对本发明加以进一步的说明， 但是不限制本发明的内容。 实施例 1 泊洛沙姆 407的纯化 . 取市售泊洛沙姆 407，加二氯甲垸适量使恰好溶解，将溶液在搅 拌下滴入过量正己烷中， 静置待沉淀完全， 离心取沉淀， 减压干燥即得。 实施例 2 泊洛沙姆 407的纯化

取市售泊洛沙姆 407， 加乙醇适量使恰好溶解， 将溶液在搅拌下滴入过量乙醚中， 静置 待沉淀完全， 离心取沉淀， 减压旋蒸干燥即得。 实施例 3 泊洛沙姆 407的纯化

取市售泊洛沙姆 407， 加水适量使恰好溶解， 加入适量正丙醇萃取， 静置待完全分层， 取水层， 冷冻干燥即得。 实施例 4聚乙烯吡咯烷酮 PVP K90的纯化 取市售聚乙烯吡咯烷酮 PVP K90， 加乙醇适量使恰好溶解， 将溶液在搅拌下滴入正己烷 中， 静置待沉淀完全， 离心取沉淀， 减压干燥即得。 实施例 5聚乙烯吡咯垸酮 PVP Κ30的纯化

取市售聚乙烯吡咯垸酮 PVP K30, 加二氯甲烷适量使恰好溶解， 将溶液在搅拌下滴入乙 醚中， 静置待沉淀完全， 离心取沉淀， 40°C烘干即得。 实施例 6聚乙烯吡咯垸酮 PVP K25的纯化

取市售聚乙烯吡咯垸酮 PVP K25, 加乙酸乙酯适量使恰好溶解， 将溶液在搅拌下滴入正 己烷中， 静置待沉淀完全， 离心取沉淀， 减压干燥即得。 实施例 7凝胶剂的制备：

称取 10g泊洛沙姆 407， 加入超纯水 40ml， 在 4°C放置 1天， 以完全溶解聚合物。 将得 到的凝胶分散体经常规热灭菌方法灭菌后无菌 分装， 密封， 4°C保存。 实施例 8凝胶冻干剂的制备

称取 7. 4g泊洛沙姆 407和 0. 3g聚乙烯吡咯垸酮 PVP K30,加入 30ml超纯水， 在 4°C放 置 3天， 以完全溶解聚合物。 将得到的凝胶分散体冷冻干燥后密封， 4°C保存。 实施例 9凝胶剂的制备

称取 0. 84g泊洛沙姆 338， 加入超纯水 3ml， 在 4°C放置 24h， 以完全溶解聚合物， 将得 到的凝胶分散体真空干燥后密封， 4°C保存。 实施例 10凝胶剂的制备

称取 7. 4g泊洛沙姆 407和 0. 2g聚乙二醇修饰的聚乳酸 PLA-PEG,分别加入 20ml和 10ml 超纯水， 在 25°C放置 3天， 以完全溶解聚合物。 再将二者混合， 漩涡震荡， 将得到的 凝胶分散体减压蒸出水分， 干燥后密封， 4°C保存。 实施例 11凝胶冻干剂的制备

称取 4. 8g泊洛沙姆 407和 0. 4g聚乙二醇 PEG修饰的聚乳酸 -羟基乙酸，分别加入 20ml 和 10ml超纯水， 在 4°C放置 3天， 以完全溶解聚合物。 再将二者混合， 漩涡震荡， 将 得到的凝胶分散体冷冻干燥后密封， 4°C保存。 实施例 12凝胶体系的制备

称取 23g泊洛沙姆 407和 2g泊洛沙姆 188， 加入 51ml超纯水， 5°C放置 2天， 直至完 全溶解， 搅拌均匀， 即可得到一种泊洛沙姆 407和泊洛沙姆 188的凝胶体系。 0. 45 μ m 滤膜过滤， 无菌分装， 密封， 4°C保存。 实施例 13 (无菌操作）凝胶显影剂 "碘海醇"栓塞剂制备

称取 1. 76g实施例 8所制备的水凝胶于无菌试剂瓶中，加入 1. 5mg碘海醇和 4ml超纯水， 振荡分散， 即制得含显影剂碘海醇的温敏凝胶分散体系。 灭菌、 密封后， 置于 4°C冰箱 保存备用。

灭菌方法： 将制备好的凝胶， 先降温至 -20°C保存 24h, 再降温至 -70°C 保持 12h, 后缓 慢升温至 -20°C， 保持 10h， 再升至 4°C保持 24h， 紫外照射 6h。 此过程反复 3次。 实施例 14: (无菌操作）凝胶显影剂 "碘海醇" （2 )栓塞剂制备

称取 1. 54g实施例 8制备的凝胶冻干剂于无菌试剂瓶中， 加入 6ml超纯水， 再加入 lmg 碘海醇， 震荡分散， 室温 25°C放置 2天， 制得含显影剂碘海醇的温敏凝胶栓塞剂。 灭 菌、 密封后， 置于 4'C冰箱保存备用。

灭菌方法： 将制备好的凝胶， 先降温至- 20°C保持 24h, 再降温至 -70Ό 保持 12h， 后升 温至 -20°C 保持 10h， 再升至 4°C 保持 6 h， 紫外照射 lh。 如此反复 3次， 密封后置于 4°C冰箱保存备用。 实施例 15: (无菌操作）重组人血管内皮抑制素 （恩度）栓塞剂制备

称取实施例 8制备的凝胶冻干剂 0. 457g装入无菌试剂瓶中，将 15mg重组人血管内皮抑 制素和 3ml超纯水加入试剂瓶中， 振荡分散， 4 放置过夜， 制备载重组人血管内皮抑 制素的凝胶栓塞剂。将制备好的重组人血管内 皮抑制素栓塞剂，先降温至 -20°C保持 48h， 再降温至 -70°C保持 12h， 后升温至 - 20°C 保持 24h， 再升至 4。C 保持 24 h， 紫外照射 2h。 如此反复 2次， 密封后置于 4°C冰箱保存备用。 实施例 16: (无菌操作）重组人血管内皮抑制素栓塞剂制� �

称取实施例 8制备的凝胶冻干剂 2. l lg置于无菌试剂瓶中，然后加入 25mg重组人血管 内皮抑制素和 5ml超纯水， 振荡、 超声分散， 4°C放置过夜， 制备重组人血管内皮抑制 素栓塞剂。 然后将制备好的重组人血管内皮抑制素栓塞剂 ， 先降温至- 20°C保持 48h， 再降温至 -70Ό保持 24h， 后升温至- 20°C 保持 24h， 再升至 4°C 保持 24 h, 紫外照射 3h。 如此反复 2次， 无菌分装， 密封后置于 4°C环境保存备用。 取配制成的凝胶， 在 37 °C环境， 可在 4min内形成稳定的凝胶。 实施例 17: (无菌操作）表阿霉素栓塞剂制备

分别称取 2. 22克泊洛沙姆 407和 70mg PVPK-30以及 10mg盐酸表阿霉素， 一起装入无 菌试剂瓶中， 置于紫外灯下照射 4h。 在超净台中， 向试剂瓶中加入 9ml超纯水， 4 放 置 3天，振荡、分散，制成表阿霉素栓塞剂。将� �备好的表阿霉素栓塞剂，先降温至 -20°C 保持 48h， 再降温至 -70°C保持 24h， 后升温至- 20°C 保持 24h， 再升至 4°C 保持 24 h， 紫外照射 3h。如此反复 2次， 无菌分装， 密封后置于 4°C冰箱保存备用。用于治疗膀胱 癌。 实施例 18: (无菌操作）伊马替尼栓塞剂制备

分别称取 2. 22克泊洛沙姆 407和 70mg PVPK-30以及 10mg甲磺酸伊马替尼， 一起装入 无菌试剂瓶中， 置于紫外灯下照射 4h。 在超净台中， 向试剂瓶中加入 9ml超纯水， 4°C 放置 3天， 振荡、分散， 制成甲磺酸伊马替尼栓塞剂。将制备好的甲磺 酸伊马替尼栓塞 剂， 先降温至 -20Ό保持 48h， 再降温至 -70°C保持 24h， 后升温至- 20°C 保持 24h， 再 升至 4°C 保持 24 h， 紫外照射 3h。 如此反复 2次， 无菌分装， 密封后置于 4°C冰箱保 存备用。 用于治疗小细胞肺癌。 实施例 19: (无菌操作） 奥沙利铂栓塞剂制备

分别称取 2. 5克泊洛沙姆 407和 50mg PVPK-30以及 20mg奥沙利铂， 一起装入无菌试剂 瓶中， 置于紫外灯下照射 4h。 在超净台中， 向试剂瓶中加入 10ml超纯水， 4°C放置 3 天， 振荡、 分散， 制成奥沙利铂栓塞剂。 将制备好的奥沙利铂栓塞剂， 先降温至 -20°C 保持 48h， 再降温至 -70°C保持 24h， 后升温至 -20°C 保持 24h， 再升至 4°C 保持 24 h， 紫外照射 3h。如此反复 2次， 无菌分装， 密封后置于 4°C冰箱保存备用。用于治疗大肠 癌。 实施例 20: (无菌操作）顺铂栓塞剂制备

分别称取 2. 3克泊洛沙姆 407和 20mg PVPK-30以及 lOmg顺铂，一起装入无菌试剂瓶中， 置于紫外灯下照射 4h。 在超净台中， 向试剂瓶中加入 10ml超纯水， 4°C放置 3天， 振 荡、 分散， 制成顺铂栓塞剂。 蒋制备好的顺铂栓塞剂， 先降温至 -20°C保持 48h, 再降 温至- 70°C保持 24h， 后升温至 -20°C 保持 24h， 再升至 4°C 保持 24 h， 紫外照射 3h。 如此反复 2次， 无菌分装， 密封后置于 4°C冰箱保存备用。 用于治疗宫颈癌。 实施例 21 : (无菌操作）索拉菲尼栓塞剂制备

分别称取 2. 22克泊洛沙姆 407和 70mg PVPK-30以及 lOmg索拉菲尼， 一起装入无菌试 剂瓶中， 置于紫外灯下照射 4h。 在超净台中， 向试剂瓶中加入 9ml超纯水， 4°C放置 3 天， 振荡、 分散， 制成索拉菲尼栓塞剂。 将制备好的索拉菲尼栓塞剂， 先降温至 -2CTC 保持 48h， 再降温至 -70°C保持 24h， 后升温至- 20°C 保持 24h， 再升至 4°C 保持 24 h, 紫外照射 3h。如此反复 2次，无菌分装，密封后置于 4Ό冰箱保存备用。用于治疗肾癌。 实施例 22: 健康试验兔肝动脉栓塞

常规准备下，兔耳缘静脉注射注射盐酸氯胺 酮 (3. 5- 4mg/kg)行静脉麻醉后， 开腹将胃向 左侧外翻暴露肝门区，沿门静脉内侧分离出肝 总动脉,分别于上下两端引入 2根套扎线， 远端结扎，近端向上牵拉止血后，将动脉剪一 小口后插入 24G静脉留置软管进入肝面有 动脉内，行 DSA造影确定肝动脉及分支显影后再经导管注射 自制 "碘海醇"栓塞剂（实 施例 13) 1. 5ml，复査造影见肝动脉段以下细小分支完全性 栓龛后， 拔管、 关腹结束手 术。术后 24、 48小时分别行 CT复査并与 48小时处死动物后行肝大体标本及病理检査。 结果（如图 2, 3) CT所见： 24至 48小时见栓塞区肝实质内有栓塞剂散在分布， 以左叶 明显， （图 9)大体标本见肝左叶边缘呈片状缺血坏死， 病理示肝细胞 80%坏死。

实施例 23: 健康试验兔肝动脉栓塞

手术操作同实施例 18， 肝动脉注入栓塞剂（实施例 13) (2. 5ml,复査 DSA造影示肝左叶 段以下小分支完全栓塞， 24、 48小时 CT复査见肝实质内栓塞剂沉积， 术后 1周复査见 肝左外叶陈球形坏死， 坏死区边缘见栓塞剂仍有沉积（图 4)。 实施例 24: 健康试验兔肝动脉栓塞

手术操作同实施例 18， 肝动脉注入栓塞剂（实施例 14) (2. 5ml,复査 DSA造影示肝左叶 段以下小分支完全栓塞， 24、 48小时 CT复査见肝实质内栓塞剂沉积 （图 5)。 实施例 25: 健康试验兔肝动脉栓塞

常规准备下，兔耳缘静脉注射注射盐酸氯胺 酮 (3. 5-4mg/kg)行静脉麻醉后，开腹将胃向 左侧外翻暴露肝门区，沿门静脉内侧分离出肝 总动脉，分别于上下两端引入 2根套扎线， 远端结扎，近端向上牵拉止血后，将动脉剪一 小口后插入 24G静脉留置软管进入肝固有 动脉内， 行 DSA造影确定肝动脉及分支显影后再经导管注射 自制栓塞剂 （实施例 14) 的 1. 5ral,复査造影见肝动脉段以下细小分支完全性� ��塞后，拔管、关腹结束手术后 24、 48小时分别行 CT复査 （如图 6， 7 ) 并与 48小时处死动物后行肝大体标本及病理检査。 结果 CT所见： 24至 48小时见栓塞区肝实质内有栓塞剂散在分布。 实施例 26: 健康试验兔肝实质内直接注射

动物麻醉及开腹同前， 开腹后暴露肝左叶， 于肝左叶内直接注入栓塞剂 （实施例 14) 2ml,术后 24、 48小时及 1周后复査 CT， 48小时可见栓塞剂沉积于肝左叶， 1周后 肝实质内未见栓塞剂。 (如图 8: A，B,C ) 实施例 27兔移植性肝癌介入治疗

开腹将大小月 lcm3的 VX- II瘤株直接种植与兔肝左叶内，种植 2周后复査 CT,确定肝 内有肿瘤生长后 （如图 10A), 再次开腹行肝动脉 DSA造影 （方法同前） 明确肿瘤供血 动脉后 (图 10B), 于肝动脉内注入 "血管内皮抑素- 15mg"温敏凝胶栓塞剂（实施例 15) 2ml左右， 复査造影见肿瘤供血动脉完全栓塞后结束手术 （如图 10C)。 术后 24、 48小 时及 1、 2、 3周分别抽血行血常规肝肾功能检查， 了解栓塞后毒副反应； 行 CT复査， 观察肝肿瘤大小及坏死情况，并于术后 3周复査 DSA及处死动脉后行组织病理检査， 了 解肿瘤血供及坏死状况。 （如图 11 : A，B,C )

结论： 1、 采用健康实验兔肝动脉栓塞： "碘海醇"温敏栓塞剂在常温下可通过内 径 0. 75mra微导管直接注入，注入后其栓塞剂可选择� ��到达肝动脉末梢血管并快速凝固， 形成末梢微小动脉栓塞。 2、 栓塞后可见肝内 "碘海醇"显影剂局部沉积， 沉积时间达 4周。

3、栓塞后 1周可见明显肝组织局部坏死，4周后病理证实� ��塞部位肝小叶结构消失， 肝细胞完全坏死并可见纤维结締组织。

4、 栓塞后除肝功能 （谷草、 谷丙转氨酶）一过性增高外， 未见严重毒副反应。

5、移植性肝癌治疗实验证实： 采用 "血管内皮抑素"温敏栓塞剂治疗组疗效最佳， 其次为 "碘海醇" 温敏栓塞剂治疗组疗， "血管内皮抑素"单独灌注组弱优于空白对 昭。

因此， 本发明 "血管内皮抑素"温敏栓塞剂具有如下优势： 本栓塞剂具有 "温敏，， 特征， 常温下液态有利于经导管注入； 在体内快速凝固， 达到血管栓塞的作用； 栓塞后 无严重毒副反应且疗效可靠；在栓塞的同时能 于肿瘤局部缓释药物，抑制肿瘤血管生长， 达到双重治疗的目的， 是一种较为理想血管栓塞剂。