Изобретение относится к медицине и предназначено для коррекции минерального обмена в организме.

Из ЕА 201700202 А1 известен способ определения макро-микроэлементного баланса в организме, включающий определение содержания макро- и микроэлементов в биосубстрате, определение отклонений от нормы и отнесение пациентов к группам риска.

Из RU 2011139264 А известен способ диагностики нарушений элементного статуса, включающий определение содержания элементов в волосах методом атомной эмиссионной спектрометрии, расчёт кратности отклонений от нормы.

Из RU 2201179 С2 известен способ лечения диабетической ретинопатии, включающий спектрометрический анализ волос и ногтей, определение дефицита микроэлементов и наличия алюминия и свинца с последующей коррекцией мономинералами микроэлементов, лечебным питанием, лекарственными препаратами.

В качестве ближайшего аналога можно принять способ коррекции минерального обмена организма при диабетической ретинопатии по RU 2201179 С2.

Общими недостатками известных способов являются: отсутствие комплексного подхода к диагностике и лечению, недостаточный учёт факторов, влияющих на минеральный обмен, отсутствие чётких критериев лечения в зависимости от степени нарушения минерального обмена.

Эти недостатки приводят к неэффективности при коррекции нарушений минерального обмена, в результате чего наблюдается прогрессирование заболеваний, связанных с нарушениями минерального обмена, их систематические рецидивы.

Предлагается способ коррекции нарушений минерального обмена организма, включающий спектрометрию биосубстратов, отличающийся тем, что проводят атомную эмиссионную спектрометрию волос и/или ногтей, определяют содержание в волосах и/или ногтях следующих элементов: Са, Со, Сг, Си, К, Mg, Мп, Se, Zn, разделяют выявленные отклонения в содержании вышеуказанных элементов на четыре степени в соответствии с таблицей 6, проводят коррекцию выявленного дефицита вышеуказанных элементов назначением препаратов, которые дозируют в зависимости от веса, возраста и степени отклонения содержания вышеуказанных элементов следующим образом: для человека весом 70 кг при степенях отклонения 1-2 назначают дозы препаратов по таблице 7, для детей до 10 лет 1/3 дозы, для детей 10-15 лет 1/2 дозы, если диагностирована 3-я степень отклонения, то к табличному значению добавляют 1/3 от дозы, если диагностирована 4-я степень отклонения, добавляют 2/3 от дозы, также учитывается вес, на каждые 20 кг свыше 70 кг добавляют 1/3 от дозы, на каждые 20 кг ниже 70 кг дозу уменьшают на 1/3.

Дополнительно можно проводить атомную эмиссионную спектрометрию цельной крови и/или плазмы крови и/или сыворотки крови и/или мочи, устанавливать содержание Са, Со, Сг, Си, К, Mg, Мп, Se, Zn и сравнивать его с диагностическими критериями по таблицам 8, 9, 10.

Техническим результатом предлагаемого способа является эффективность лечения нарушений минерального обмена, достигаемая за счёт комплексного подхода с максимальным учётом факторов, влияющих на минеральный обмен, чёткими критериями назначения лечения.

Патологические состояния и их клинические проявления с соответствующими им дефицитами макро- и микроэлементов представлены в Таблице 1, в скобках указан код заболевания по МКБ-10.

Средства коррекции минерального обмена организма человека, применяемые при обнаружении дефицита различных макро- и микроэлементов представлены в Таблице 2.

В Таблице 3 показаны биологически активные добавки к пище (БАДП), используемые в предлагаемом способе.

Кроме перечисленных средств могут использоваться их аналоги, разрешенные к применению в РФ в качестве биологически активных добавок или фармацевтические препараты.

Противопоказанием к использованию предлагаемого способа является индивидуальная непереносимость средств коррекции минерального обмена.

Материально-техническое обеспечение предлагаемого способа.

ИСП-АЭС (атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно связанной плазмой). Оборудование для проведения анализа биосубстратов.

Атомно-эмиссионный спектрометр с радиочастотным электромагнитным генератором для возбуждения индуктивно-связанной аргоновой плазмы, оборудованный устройством для контроля скоростей потока аргона, компьютером для обработки выходных сигналов спектрометра с возможностью коррекции фоновых сигналов (типа

Optima 2000 DV фирмы Перкин-Элмер или подобный, имеющий сертификат Госстандарта России, зарегистрированный в Государственном реестре средств измерений). Весы аналитические электронные с пределом допускаемой погрешности ±0,0005 г, отвечающие требованиям весы лабораторные общего назначения ГОСТ 24104. Термоблок фирмы Экрос (мод. 4020) или подобный с 30 или более гнездами для тефлоновых пробирок вместимостью 10 мл. (Возможно использование установок для микроволновой пробоподготовки с тефлоновыми вкладышами в автоклавы). Аквадистиллятор электрический одноступенчатый или двухступенчатый по ГОСТ 28165. Мембранная комбинированная установка для получения деионизованной воды типа ДВС-М/1НА-1(2)-

L. Пипетки автоматические, дозаторы любого типа вместимостью 0,2- 1,0 мл ± 1%. Стаканы химические термостойкие вместимостью 100-150 мл по ГОСТ 25336. Пробирки тефлоновые градуированные на 10 мл, ГОСТ 1770-74. Цилиндр мерный вместимостью 100 мл, ГОСТ 1770-74. Стаканчики для взвешивания, ГОСТ 25336.

ИСП-АЭС. Реактивы и материалы для проведения анализа биосубстратов.

Азотная кислота концентрированная по ГОСТ 11125 особой чистоты или по ГОСТ 4461, очищенная методом перегонки в кварцевой посуде. Аргон газообразный высокой чистоты, ГОСТ 10157. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 или деионизованная. Ацетон, ос.ч., ТУ 2633-039-44493179-00. Стандартные образцы состава растворов ионов металлов и неметаллов. Скальпель хирургический. Фильтровальная бумага.

ИСП-МС (масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой). Оборудование для проведения анализа биосубстратов.

Квадрупольный масс-спектрометр с индуктивно-связанной плазмой, имеющий сертификат Госстандарта России, зарегистрированный в Государственном реестре средств измерений. Весы аналитические электронные с пределом допускаемой погрешности ±0,0005 г, отвечающие требованиям весы лабораторные общего назначения ГОСТ 24104. Аквадистиллятор электрический одноступенчатый по ГОСТ 28165. Установка для получения деионизованной воды, обеспечивающая получение воды с удельным сопротивлением 15-18 МОм х см ² .

Дозаторы жидкости ручные или электронные автоматические с одноразовыми наконечниками, емкостью 0,5-10 мкл, 50-200 мкл и 200-1000 мкл, обеспечивающие суммарную погрешность дозирования на уровне ± 1%. Термоблок для фторопластовых цилиндров, с возможностью нагрева до 120°С и автоматического поддержания при этой температуре или песчаная баня. Цилиндры фторопластовые, емкостью 20 мл, ГОСТ 177074. Система микроволнового разложения, с контролем температуры и давления. Фторопластовые автоклавы емкостью 20-50 мл для микроволнового разложения.

ИСП-МС. Реактивы и материалы для проведения анализа биосубстратов.

Азотная кислота концентрированная по ГОСТ 11125 особой чистоты или по ГОСТ 4461, очищенная методом изотермической перегонки в пластиковой системе. Аргон сжатый или сжиженный, высокой чистоты, ГОСТ 10157. Вода деионизованная, удельным сопротивлением 15-18 МОм х см ² . Ацетон, ос.ч., ТУ2633-039-44493179-00. Стандартные образцы состава растворов одно- и многоэлементные, сертифицированные. Скальпель хирургический.

Фильтровальная бумага. Пластиковые промывалки для деионизованной воды и разбавленной азотной кислоты. Пленка лабораторная герметизирующая PARAFILM® или аналогичная. Одноразовые полипропиленовые градуированные центрифужные пробирки без крышек, емкостью 15 мл, для хранения растворенных образцов. Одноразовые полипропиленовые градуированные центрифужные пробирки с винтовыми крышками, емкостью 50 мл, для хранения рабочих стандартов.

Определение макро- и микроэлементов (алюминия, бария, бериллия, ванадия, железа, калия, кадмия, кальция, кобальта, лития, магния, марганца, меди, молибдена, натрия, никеля, олова, ртути, серебра, свинца, стронция, титана, фосфора, хрома, цинка, циркония) в диагностирующих биосубстратах, в качестве которых выступают волосы, ногти, кровь, плазма, грудное молочко, моча, аутопсийные материалы (печень, почки, миокард, плацента), слюна, зубы с использованием метода атомной эмиссионной спектрометрии на основе серии сканирующих приборов фирмы Перкин-Элмер и аналогов.

Методика определения макро- и микроэлементов в диагностирующих биосубстратах разработана в соответствии с требованиями ГОСТ 8.563-96 «Методики выполнения измерений», ГОСТ Р 1.5-92 «Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов», ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

Определение содержания химических элементов в диагностируемых биосубстратах методом атомной эмиссионной спектрометрии с индуктивносвязанной аргоновой плазмой.

Сущность метода

Методика основана на окислительно-кислотной "мокрой" минерализации проб исследуемых биосубстратов и препаратов и на последующем анализе ее на требуемые химические элементы методом атомно-эмиссионной спектрометрии с использованием в качестве источника возбуждения высокочастотной индуктивно связанной аргоновой плазмы. Цель пробоподготовки состоит в переведении пробы в форму удобную для выполнения спектрометрического анализа. Последнее достигается обработкой проб концентрированной азотной кислотой при 115°С, что обеспечивает значительную деструкцию органической матрицы и получение гомогенного прозрачного раствора. Полного предварительного разрушения органической матрицы не требуется, поскольку это не сказывается на протекающей в плазме при высокой температуре атомизации пробы и на процессах возбуждения эмиссионных спектров атомов определяемых элементов. Применение схемы последовательного сканирования позволяет задавать необходимый список требуемых спектральных линий, отвечающих определяемым элементам. Для обеспечения наиболее низких пределов обнаружения ими чаще всего являются резонансные линии, иногда в зависимости от характера фона может быть выбрана и более подходящая с точки зрения соотношения сигнал/шум линия конкретного элемента.

Интенсивность спектральной линии элемента определенным образом связана с его концентрацией в пробе, что позволяет с использованием сопровождающего спектрометр программного обеспечения получать надежные градуировочные характеристики, прямо пропорциональные в интервале пяти - шести порядков. Гарантируемая величина пределов обнаружения, достигаемых на спектрометрах такого класса, составляет доли мкг/л (ppb). Сочетание высокой избирательности и последовательного по длинам волн способа измерений позволяет определять до 30-40 элементов из одной подготовленной пробы в течение 4-5 мин.

Характеристика сканирующего спектрометра

Атомно-эмиссионный спектрометр типа Optima 2000™ DV и его аналоги серий

Optima 4000 DV, Optima 4X00 DV представляют собой быстро сканирующие спектрометры, отличающееся новыми детекторами типа CCD (charge-coupled device) или твердотельным типа SCD, динамической стабилизацией длин волн, позволяющей гибко выбирать требуемую длину волны и увеличивать скорость анализа двойным способом наблюдения плазмы, что позволяет при аксиальном обзоре достигать очень низких пределов обнаружения при расширении динамического диапазона. Рабочий диапазон длин волн Optima 2000™ DV 165-800 нм при спектральном разрешении 0,007 (при 193 нм). Спектральная полоса пропускания частот: 0,009 нм на 200 нм, 0,027 нм на 700 нм, монохроматор типа Эшелле. Прибор имеет быстро настраиваемый блок ввода пробы. Допускаемая относительная погрешность спектрометра ±5,0 %. Экспозиция спектров осуществляется автоматически в интервале 0,01-500 с, количество реплик - произвольное. В спектрометре реализуется спектральная коррекция фона с помощью алгоритма мультиспектральной подгонки (MSF).

Работа спектрометра полностью управляется и контролируется компьютером, операционная система Windows NT 4.0, используется пакет 32 битных программ WinLab32. Это позволяет осуществлять полную автоматизацию измерений и управление вспомогательными системами для ввода проб, сохраняет результаты измерений, включая спектры, и дает возможность повторной обработки информации без проведения дополнительных измерений. Результаты анализа выводятся на дисплей в требуемом формате, сохраняются в виде файла, могут быть использованы для его распечатки, контроля качества результатов анализа.

Условия выполнения измерений

Выполнение измерений проводят при нормальных климатических условиях испытаний в соответствии с ГОСТ 15150. Помещение не должно содержать токсичных паров и газов. Температура окружающего воздуха в лаборатории 18-25°С. Атмосферное давление 84-106 кПа (630-800 мм рт. ст.). Влажность воздуха 80±5 % при температуре 25°С. При использовании электроприборов частота переменного тока 50±1 Гц, напряжение сети 220±10 В. Освещение помещения естественное или искусственное, не ограничивается особыми требованиями.

Подготовка к проведению измерений

Подготовка проб биосубстратов и препаратов к анализу на содержание микроэлементов должна обеспечивать надлежащее хранение проб, правильные процедуры пробоотбора и извлечения микроэлементов из проб, а также подготовку рабочего места для обработки доставленных в лабораторию проб. Все процедуры подготовки проб к анализу должны исключать возможность внесения в них загрязнений.

Поскольку элементный состав волос, в отличие от объектов внутренней среды организма, не подлежит жесткому гомеостатическому регулированию, то его изменения являются ранними признаками обменных нарушений, возникающих на доклинических стадиях патологических процессов. Это обусловливает его информативность в целях гигиенической и донозологической диагностики, контроля над приемом препаратов и качеством лечебно-профилактических мероприятий. Отбор и хранение проб (см. далее). Разложение проб биосубстратов

Волосы. Ногти. Другие твердые образцы. На аналитических весах берут навеску высушенных, обезжиренных и измельченных волос массой 0,1 г. Образец волос помещают в тефлоновую градуированную пробирку, приливают 2 мл ос.ч. перегнанной азотной кислоты, помещают в термоблок с температурой 115°С и нагревают до полного растворения пробы. Далее объем охлажденной до комнатной температуры пробы доводят до 10 мл бидистиллированной водой, перемешивают. Пробирку, закрытую пластиковой пробкой, передают на анализ.

Жидкие образцы. Навеску анализируемого объекта 1-2 г (1-2 мл) взвешивают на аналитических весах в тефлоновых пробирках. Каждую пробу помещают в термоблок, разогретый до 114°С, и упаривают досуха. Далее в каждую пробирку приливают 2 мл ос.ч. перегнанной азотной кислоты и действуют, как описано выше.

При использовании микроволновой пробоподготовки навески образцов помещают в автоклав с тефлоновым вкладышем и приливают 2 мл ос.ч. перегнанной азотной кислоты. Автоклав с пробой во вкладыше помещают в микроволновую печь и проводят разложение пробы в следующем режиме: а) нагрев в печи при мощности 40 Вт в течение 50 с; б) охлаждение - 2 мин; в) нагрев в печи при мощности 60 Вт в течение 30 с; г) охлаждение - 5 мин.

Далее пробу переносят в градуированную пробирку вместимостью 100 мл и доводят объем пробы до 10 мл бидистиллированной водой, закрывают пластиковой пробкой, перемешивают и направляют на анализ.

Раствор контрольной пробы готовят с соблюдением всех указанных выше этапов, не отбирая навески пробы биосубстрата. Градуировка спектрометра

Градуировку спектрометра выполняют перед началом измерений полностью подготовленных проб, используя градуировочные растворы. Нахождение градуировочной характеристики, обработка и хранение результатов градуировки спектрометра выполняют с использованием программного обеспечения спектрометра. Выполнение измерений

Ввод в спектрометр подготовленной пробы, измерение атомного излучения элементов и измерение концентрации определяемых элементов проводят при нормальных условиях и сучетом требований руководства (инструкции) по эксплуатации спектрометра. Устанавливают оптимальный режим регистрации спектров и измерений. Интенсивность характеристического излучения регистрируется фоточувствительным детектором после прохождения этого излучения через монохроматор. Интенсивность и положение спектральных линий измеряются и обрабатываются компьютерной системой спектрометра.

Выбор аналитических линий. Для измерения используют спектральные линии элементов, наиболее предпочтительные по совокупности характеристик. Важнейшими из них являются интенсивность, отсутствие спектральных наложений, отношение сигнал/шум, достигаемый предел обнаружения, эквивалентная концентрация фона (ЭКФ). При отладке методики проводят измерения по 3-5 линиям на элемент, затем из них выбирают наилучшую для постоянной работы. Вычисление результатов измерений Аналитические сигналы обрабатываются при помощи программного обеспечения спектрометра, используя градуировочные зависимости, рассчитываемые методом наименьших квадратов, учет и коррекцию фона, при необходимости учет взаимного влияния измеряемых элементов. Результат определения на дисплее отвечает среднему арифметическому из нескольких параллельных измерений анализируемого элемента. Обработка результатов измерений соответствует ГОСТ 8.207. Результаты измерений выводятся на дисплей, сохраняются в файле на жестком диске, который далее переносится на магнитооптический диск. Распечатанные результаты оформляют протоколом.

Определение содержания химических элементов в диагностируемых биосубстратах методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной аргоновой плазмой.

Сущность метода

Метод ИСП-МС комбинирует использование индуктивно-связанной плазмы в качестве источника ионов с квадрупольным масс-спектрометром, выступающем в роли масс-анализатора (фильтра) и дискретно-динодным детектором, который используется для регистрации отдельных ионов и их потоков. Индуктивно-связанная плазма, поддерживаемая в специальной горелке способна эффективно генерировать однозарядные ионы из атомов вводимого образца. Далее ионы фокусируются ионнооптической системой (и отделяются от полиатомных и изобарных ионов в специальных моделях приборов) и попадают в анализатор масс-спектрометра, где разделяются по отношению массы к заряду (m/z). Соответствующий ионный поток регистрируется детектором. Через масс-спектрометр в каждый момент времени пропускаются ионы со строго определенным (m/z), которые затем попадают в детектор для количественной регистрации. Число соударений за единицу времени пропорционально количеству атомов каждого определяемого изотопа в исходном образце. Линейный диапазон зависимости интенсивности сигнала от концентрации на современных приборах превышает шестьвосемь десятичных порядков, позволяя в одном цикле сканирования масс-спектра регистрировать и единичные импульсы от малых концентраций и ионные токи от высоких концентраций элементов. Для достижения такого широкого динамического диапазона в современных ИСП-МС приборах применяется двойная регистрация сигналов: импульсный режим одного сегмента детектора используется для подсчета отдельных ионов и аналоговый режим другого - для регистрации ионных токов. Таким образом, современные приборы ИСП-МС позволяют определять концентрации элементов и отдельных изотопов на уровне от сотых долей нанограммов до сотен миллиграммов на литр (0,0п*10‘ ¹² .. пх10' ² %). Достигаемые пределы обнаружения, высокие чувствительность и избирательность метода ИСП-МС позволяет количественно определять во многих биологических и медицинских объектах и материалах до 40-50 элементов втечение 2-3 мин (без учета времени пробоподготовки).

Для подготовки образцов биосубстратов и препаратов аминокислот и биологически активных веществ к анализу методом ИСП-МС используются два метода разложения: 1) кислотное растворение в открытых сосудах, без полного разрушения органической матрицы; 2) кислотное разложение («мокрое озоление») с использованием систем микроволновой пробоподготовки. Метод открытого разложения характеризуется следующими особенностями: а) высокой производительностью при небольшом расходе реактивов, что привлекательно малой поправкой на холостой опыт; б) способ не применим для разложения материалов, содержащих много жирового вещества и конкрементов (жировые ткани, новообразования во внутренних органах); в) возможность частичной или иногда полной потери летучих элементов (As, Hg, I, Se); г) органическая матрица, сохраняющаяся в растворах проб, может быть источником серьезных матричных помех при ИСП-МС измерениях, ограничивающих определение и изотопный анализ некоторых элементов.

Метод микроволнового разложения обеспечивает следующие преимущества: высокую производительность разложения; более полное окисление органической матрицы практически любых биосубстратов; существенное уменьшение потерь летучих элементов при разложении.

Характеристика масс-спектрометра с индуктивно связанной аргоновой плазмой.

Для измерений используется масс-спектрометр, обладающий следующими характеристиками: диапазон сканирования масс, а.е.м.: 2-270; динамический диапазон системы детектирования: 1 * 10 ^-1 -1 х Ю ⁹ импульсов в с; диапазон разрешения, а.е.м.: 0,3- 3,0; пределы обнаружения: Be < 3 нг/л, Со < 1 нг/л, In <0,5 нг/л, U < 0,5 нг/л; чувствительность (имп. в секунду на 1 мкг/л): ²⁴ Mg > 4000, ¹¹⁵ In > 30000, ²³⁸ U > 25000. Кратковременная стабильность, CKO: <3%. Долговременная стабильность, СКО: < 4%. Двузарядные ионы, Ва ⁺⁺ /Ва ⁺ : < 3%. Оксидные ионы, СеО/Се: < 3%. Уровень фона на массе 220: < 25 импульсов в секунду. Стандартное отклонение уровня фона на массе 220: < 5 импульсов в секунду.

Для достижения лучших пределов обнаружения до уровня сотых долей нг/л и устранения полиатомных наложений, вызванных матрицей образцов и матрицей растворителя, а также газами плазмы, рекомендуется проводить измерения на приборах с динамической реакционной системой (ДРС). Лучшие пределы обнаружения на этих приборах достигаются за счет уменьшения уровня фона и фокусировки ионов в дополнительном газонаполненном квадруполе (ДРС), расположенном перед квадруполем масс-анализатора. Устранение полиатомных и изобарных наложений осуществляется путем удаления мешающих ионов в результате реакций и взаимодействий с молекулами реакционного газа, напускаемого в ячейку (аммиак, метан и др.).

Программное обеспечение масс-спектрометра должно обеспечивать выполнение следующих функций: а) поддержку следующих методов анализа: количественного, полуколичественного (обзорного), методов изотопного отношения и изотопного разбавления; б) проведение автоматических измерений без участия оператора; для проведения автоматических измерений спектрометр должен быть оборудован устройством автоматического пробоотбора; в) автоматизацию процедур калибровки и настройки шкалы масс и рабочих параметров спектрометра; г) статистическую обработку и сохранение результатов в общепринятых форматах; д) возможность повторной обработки данных без проведения дополнительных измерений; е) возможность использования аппарата контроля качества, для оперативного автоматического управления ходом измерений в соответствии с заданными критериями качества и расчет статистических параметров качества.

Оборудование, материалы, реактивы

Для сведения к минимуму уровня лабораторного фона, все операции по подготовке образцов к измерениям и сами измерения следует проводить в чистом помещении, в котором не скапливается пыль. Для анализа сверхнизких концентраций, загрязнения из окружающей среды являются основным фактором, ограничивающим пределы обнаружения и определения методом ИСП-МС. Для количественного определения элементов, распространенных в окружающей среде, как например, Na, Mg, К, Са, Fe, и других, на уровне концентраций порядка и ниже 1 мкг/л, подготовку образцов и измерения следует проводить в помещениях класса 1000 (< 1000 взвешенных частиц на 1 м ³ воздуха). Это является ограничением для достижимых характеристик метода лишь для некоторых наиболее распространенных в конкретной лаборатории элементов, и является рекомендацией для работы в сверхчистой среде. Для подготовки образцов необходимо пользоваться сосудами из фторопласта (PTFE, Viton™, Teflon™) или перфторалкоксиполимера (PFA). Для временного хранения образцов и рабочих градуировочных растворов настоятельно рекомендуется пользоваться одноразовой посудой из полипропилена (пробирки вместимостью 15-20 мл для хранения образцов, и вместимостью 50 мл с винтовой крышкой для хранения рабочих стандартов). Требования к квалификации лиц, работающих на масс-спектрометре

К выполнению измерений на масс-спектрометре допускаются лица, прошедшие обучение навыкам работы на приборе ИСП-МС, подтвержденное аттестатом фирмыпроизводителя прибора; изучившие техническое описание измерительного прибора и методику выполнения измерений; обученные в соответствии с ГОСТ 12.0.004- 79 и имеющие квалификационную группу не ниже 1 согласно «Правилам технической эксплуатации электроустановок потребителей», утвержденных Госэнергонадзором от 21.12.1984 г.; прошедшие инструктаж по технике безопасности на рабочем месте и ознакомленные с правилами обслуживания спектрометра. Для работы с источниками огнеопасных и токсичных газов допускаются лица, прошедшие соответствующую подготовку.

К проведению пробоподготовки допускаются операторы с квалификацией лаборант, имеющие опыт работы в химической лаборатории.

Условия выполнения измерений

Выполнение измерений проводят при нормальных климатических условиях испытаний в соответствии с ГОСТ 15150. Помещение не должно содержать токсичных паров и газов. Температура окружающего воздуха в лаборатории 18-25°С. Атмосферное давление 84-106 кПа (630-800 мм рт. ст.). Относительная влажность воздуха 75±5 %. Градиент температуры не должен превышать 1,5°С/час. При использовании электроприборов частота переменного тока 50±1 Гц, напряжение сети 220±10 В. Освещение помещения естественное или искусственное, не ограничивается особыми требованиями.

Подготовка к проведению измерений

Подготовка проб указанных продуктов к анализу на содержание химических элементов должна обеспечивать надлежащее хранение проб, правильные процедуры пробоотбора и извлечения микроэлементов из проб, а также подготовку рабочего места для обработки доставленных в лабораторию проб. Все процедуры подготовки проб к анализу должны исключать возможность внесения в них загрязнений. Отбор и хранение проб (см. далее). Разложение проб биосубстратов

Волосы. Ногти. Другие твердые образцы. Открытое разложение. На аналитических весах берут навеску высушенных, обезжиренных (обработка ацетоном в течение 10-15 минут, а затем тройная промывка деионизованной водой) и измельченных волос массой 0,01-0,1 г. Образец волос помещают во фторопластовый цилиндр, приливают 0,2-1 мл концентрированной азотной кислоты, накрывают кусочком лабораторной пленки и помещают в термоблок, разогретый до температуры 115°С, выдерживают в течение 0,51,0 часов до полного растворения пробы. Растворенный образец количественно переносят в мерную полипропиленовую пробирку, троекратно смывая со стенок фторопластового цилиндра, и доводят деионизованной водой до 10 мл. Герметично закрывают кусочком лабораторной пленки, перемешивают и передают на анализ.

Жидкие образцы. Открытое разложение. Навеску анализируемого объекта 0,1 -0,5 г (0,1 -0,5 мл) берут на аналитических весах во фторопластовые цилиндры, определяя массу навески по разнице массы пробирки до и после взятия навески. В пробирку приливают 0,3-1 мл концентрированной азотной кислоты, накрывают кусочком лабораторной пленки и помещают в термоблок, разогретый до 115°С. Выдерживают в термоблоке в течение 0,51,0 часов до гомогенизации пробы.

При работе с гомогенными водными средами, такими как моча, лимфа, плазма и даже цельная кровь допускается простое разбавление образца 2-3%-ной азотной кислотой, непосредственно перед анализом. Для этого к навеске образца в мерной пробирке приливается 5-7 мл деионизованной воды, затем 0,3-0, 5 мл концентрированной азотной кислоты и проба доводится до 10-15 мл деионизованной водой. В этом случае не рекомендуется уменьшать фактор разбавления пробы ниже, чем 1 :100, во избежание осаждения белков, а также для компенсации высокой вязкости образцов и склонности к ценообразованию. Пробы, растворенные таким способом не рекомендуется хранить до анализа долгое время (свыше суток).

Микроволновая пробоподготовка. Навеску образца помещают во фторопластовый вкладыш и добавляют 5 мл азотной кислоты. Автоклав с пробой во вкладыше помещают в микроволновую печь и разлагают пробу, используя программу разложения, рекомендованную производителем печи. В общем случае, для мягких тканей, волос и жидкостей можно применять следующий режим нагрева: подъем температуры до 200°С в течение 5 мин, выдерживание в течение 5 мин при 200°С, охлаждение до 45°С. Охлажденный автоклав встряхивают для перемешивания содержимого и приоткрывают крышку для уравновешивания давления. Качественно разложенная проба после отгона окислов азота должна представлять собой бесцветный или желтоватый прозрачный раствор, без нерастворившихся частиц на дне и на стенках вкладыша. Растворенную пробу количественно переносят в пробирку объемом 15 мл, троекратно встряхивая вкладыш с крышкой с 1 мл деионизованной воды и перенося каждый смыв в пробирку, доводят объем до 10 мл деионизованной водой, закрывают и перемешивают. Автоматическим дозатором со сменным наконечником отбирают аликвотную часть 1 мл и доводят до 10 мл 0,5% азотной кислотой, закрывают, передают на анализ. Данные об объеме аликвотной части и объеме разведения вводят в программное обеспечение спектрометра вместе с названием и навеской образца. Допускается непосредственный отбор аликвотной части объемом 0,1 -0,5 мл из разложенной пробы в автоклаве. Чтобы скомпенсировать при этом погрешность разбавления, перед разложением в пробу нужно добавить раствор внутреннего стандарта (In или Rh), чтобы концентрация внутреннего стандарта в конечном растворе, направляемом на анализ, составляла примерно 10 мкг/л (например, добавить в пробу 100 мкл раствора, содержащего 10 мг/л Rh, затем из 5 мл разложенной пробы взять аликвотную часть 0,5 мл и довести до 10 мл). Раствор внутреннего стандарта необходимо добавлять во все холостые пробы и в калибровочные растворы. Заданную концентрацию внутреннего стандарта (10 мкг/л) в холостых и стандартных растворах необходимо точно соблюдать. Раствор холостой пробы готовят с выполнением всех указанных выше операций, за исключением операции взятия навески. Подготовка прибора

Масс-спектрометр подготавливают к работе в соответствии с руководством пользователя (инструкцией по эксплуатации). Необходимые режимы работы устанавливают в соответствии с рекомендациями производителя. Для конкретного типа прибора оптимальные режимы могут быть установлены экспериментально. После запуска прибора производят проверку рабочих характеристик прибора, включая проверку чувствительности во всем диапазоне масс, проверку уровня фона, уровня вторичных оксидных и двузарядных ионов, воспроизводимости (путем расчета СКО по 5-6 последовательным измерениям сигналов). Калибровка масс-спектрометра

Калибровку спектрометра выполняют перед началом измерений полностью подготовленных проб, используя градуировочные растворы. Определение градуировочной зависимости, обработка и хранение результатов калибровки выполняются программным обеспечением спектрометра.

Проверка калибровок проводится перед началом анализа образцов. Проверка заключается в измерении внутрилабораторного проверочного стандарта или стандартного аттестованного образца исследуемой матрицы. Современные программные пакеты для ИСП-МС систем позволяют задавать критерии допустимого качества калибровок, основанные на точности и воспроизводимости результатов для проверочных стандартов, а также на коэффициенте корреляции и программировать алгоритм автоматических измерений, который может включать повторные проверки калибровок и перекалибровки без участия оператора. Для выявления и учета дрейфа чувствительности прибора, повторные измерения проверочных стандартов и/или полные перекалибровки рекомендуется проводить каждые 1-2 часа работы (через каждые 15-30 образцов), в зависимости от стабильности окружающей температуры, питающего напряжения и других условий в лаборатории.

Выполнение измерений

Ввод в масс-спектрометр подготовленной пробы, измерение сигналов изотопов проводят при нормальных условиях и с учетом требований руководства (инструкции) по эксплуатации прибора. Устанавливают оптимальный режим регистрации масс-спектров и измерений в соответствии с рекомендациями производителя прибора. Первичная обработка сигналов и расчет концентраций проводится программным обеспечением автоматически, на основании параметров метода и данных проведенной калибровки. Вычисление результатов

Аналитические сигналы обрабатываются программным обеспечением массспектрометра, основываясь на построенных калибровочных линейных регрессиях, рассчитанных методом наименьших квадратов, с учетом коррекции фона, сигнала внутренних стандартов, а также с учетом влияния изобарных и полиатомных спектральных наложений. Результат определения каждого элемента представляется как среднее из нескольких (типично 2-х) параллельных измерений анализируемого образца. Обработка результатов измерений соответствует ГОСТ 8.207. Результаты измерений отображаются на мониторе, распечатываются и/или сохраняются в виде файла на жестком диске компьютера.

Требования к организации взятия крови: взятие крови производится в стационаре. Кровь рекомендуется брать утром (между 8 и 10 часами). Кровь может быть получена из локтевой вены (венозная) или из пальца руки (капиллярная); объем крови должен быть не менее 1 мл (достаточно для определения макроэлементов - железа, цинка и меди). Оптимальное количество 3-5 мл (достаточно для определения 12-16 элементов). Забор крови производится в пробирки-контейнеры (например, «S-Monovette», «Venoject», «Vacuett®»), специально предназначенные для получения цельной крови. В качестве антикоагулянта используют гепарин, он может быть в виде гранул или аэрозоля. Применение других антикоагулянтов (ЭДТА, оксалатов, цитратов, гепаринатов, прочих катионсодержащих соединений) не допускается. Возможно использование обычных пробирок с самостоятельным добавлением антикоагулянта (гепарина с активностью 1000 ЕД в 1 мл) из расчета 0,01 мл на 5 мл крови. После взятия крови пробирку необходимо мягко перевернуть не менее 5 раз для предотвращения образования микросгустков. Кровь хранится в обычном холодильнике до 3-5 суток (от 0 до +4°С). Для длительного хранения кровь может быть заморожена (при -18-20°С), лиофилизована или высушена в сушильном шкафу. В этом случае каждый образец должен сопровождаться данными о первоначальном объеме (сыром весе) крови с точностью до 0,05 мл (0,05 г). Примечание: рекомендуется использовать МН -гепарин; при использовании Li-гепарина не возможно определение Li; при использовании Na-гепарина не возможно определение Na. при использовании К-гепарина не возможно определение К.

Требования к организации взятия сыворотки крови: для исследования необходимо не менее 1,5 мл сыворотки. Для получения сыворотки антикоагулянт не добавляют. Забор крови производится в пробирки-контейнеры (например, «S- Monovette», «Venoject», «Vacuett®»), специально предназначенные для получения сыворотки крови, с активатором свертывания в виде геля или гранул. После взятия крови в пробирку-контейнер, её необходимо мягко перевернуть не менее 5 раз для обеспечения быстрого и полного контакта крови с активатором. Пробирку оставляют в вертикальном положении на 2030 мин, для уверенного образования сгустка. Возможен забор крови в обычную пробирку без использования активатора свертывания. В данном случае, для получения сыворотки, пробирку отстаивают при комнатной температуре до полного образования сгустка. Далее проводят центрифугирование пробирки при 1500 об/мин 15 мин. Сыворотку, полученную при центрифугировании и при использовании гранул активатора свертывания, переносят в микропробирку типа эппендорф. При использовании пробирок-контейнеров с гелем перенос сыворотки в другие пробирки не обязателен. Сыворотку желательно использовать для лабораторных исследований в день взятия крови.

Условия хранения материала: при температуре +2+8°С в течение 5 суток; притемпературе -20°С в течение 1 месяца; - при температуре -70°С длительно.

Требования к организации взятия плазмы крови: для исследования необходимо не менее 1,5 мл плазмы. Забор крови производится в пробирки-контейнеры (например, «SMonovette», «Venoject», «Vacuet®»), специально предназначенные для получения плазмы крови. В качестве антикоагулянта используют гепарин, он может быть в виде гранул, геля или аэрозоля. Применение других антикоагулянтов (ЭДТА, оксалатов, цитратов, гепаринатов, прочих катионсодержащих соединений) не допускается. Возможно использование обычных пробирок с самостоятельным добавлением антикоагулянта (гепарина с активностью 1000 ЕД в 1 мл) из расчета 0,01 мл на 5 мл крови. После взятия крови пробирки необходимо мягко перевернуть не менее 5 раз для предотвращения образования микросгустков. Цельную кровь с гепарином центрифугируют при 1500 об/мин 15 мин. Полученную плазму отбирают в микропробирку типа эппендорф и доставляют в лабораторию. При использовании пробирок-контейнеров с гелем перенос плазмы в другие пробирки не обязателен. Примечание: рекомендуется использовать ЫШ-гепарин; при использовании Li-гепарина не возможно определение Li; при использовании Na-гепарина не возможно определение Na. при использовании К-гепарина не возможно определение К. Условия хранения материала: при температуре +2+8°С в течение 5 суток; при температуре -20°С в течение 1 месяца; - при температуре -70°С длительно.

Требования к организации взятия грудного молока: объем пробы должен составлять 10-15 мл. Отбор образцов проводится в пробирки с крышкой. Хранить образцы необходимо в замороженном виде.

Требования к организации взятия слюны: за 12 часов до сбора слюны исключают прием пищи, алкоголя и лекарственных препаратов. Непосредственно перед сбором слюны исключить использование зубной пасты и удалить зубные протезы. Производится трехкратное полоскание полости рта дистиллированной водой и вновь образовавшаяся слюна выплевывается в одноразовые стерильные сухие флаконы (пробирки) или отсасывается со дна ротовой полости одноразовым шприцем и переносится в сухие одноразовые стерильные сухие флаконы (пробирки). Объем пробы должен быть не менее 3-5 мл. Образцы необходимо хранить при температуре +4°С.

Требования к организации взятия спермальной жидкости: отбирается в стандартные пластиковые контейнеры с крышкой в количестве не менее 1 мл. Образцы должны храниться в замороженном виде.

Требования к организации взятия мочи: в зависимости от задачи исследования сбор мочи может производиться в течение 24-х часов или быть средней порцией утренней мочи (10 мл). Если требуется суточная моча, в этом случае, вся моча, собранная за сутки смешивается, и из общего объема отбирается 10 мл в стандартные пластиковые контейнеры (пробирки) с крышкой. При необходимости длительного хранения образцов мочу следует высушить (лиофилизовать). В этом случае каждый образец должен сопровождаться данными о первоначальном объеме (сыром весе) мочи с точностью до

0,05 мл (0,05 г).

Условия хранения материала: при комнатной температуре - в течение 1 суток; при температуре +2+8°С - в течение 1 недели; при температуре - 20°С - в течение 1 месяца; - при температуре - 70°С - длительно.

Требования к организации взятия конкрементов, зубов, фрагментов костной ткани: особых условий хранения не требуют (кроме помещения в герметичную упаковку из лабораторного пластика, стекла или в конверт). Масса образца должна быть не менее 50 мг.

Требования к организации взятия аутопсийного материала и биоптатов тканей (мышцы, кожа, печень и др.): сразу же после взятия, препарирования, удаления крови взвешиваются с точностью до 5 мг и помещаются в лабораторную пластиковую или стеклянную посуду, обеспечивающую герметичность хранения. Масса образца ткани от 0,1 г (минимальная, определение макроэлементов - железо, цинк, медь), до 1-3 г (определение содержания более 20 химических элементов). Хранение в холодильнике при температуре 0+4°С до 7 суток или в морозильной камере до 20 суток, либо высушивание (лиофилизация) образца для длительного хранения. В этом случае каждый образец должен сопровождаться данными о первоначальном объеме (сыром весе) материала с точностью до 0,05 г.

Принципиальная схема коррекции нарушений минерального обмена

Смысл предлагаемой медицинской технологии заключается в интерпретации результатов многоэлементного анализа биосубстратов (волосы, ногти, кровь, сыворотка, плазма, моча и др.) с последующей коррекцией установленных отклонений, имеющих этиопатогенетическое значение.

Для формирования заключения о состоянии минерального обмена в обязательном порядке указывается информация, критичная для выполнения анализа и первичной интерпретации результатов анализа: фамилия, имя, отчество, дата рождения, пол, естественный цвет волос, производилось ли какое-либо химическое воздействие на волосы (окраска, химическая завивка и т.д.), точно установленные заболевания. Предварительное заключение формируется с учетом имеющейся о пациенте информации путем сравнения полученных результатов многоэлементного анализа с нормативами, разработанными в АНО «Центр биотической медицины» и сопоставимыми с другими источниками (Bertram, 1992; Caroli et al., 1992; Панченко Л.Ф. и др. 2004; Zimmermann М., 2004).

На основании данных о дефиците, избытке или дисбалансе ХЭ происходит подбор моно- или поликомпонентных препаратов, содержащих макро- и микроэлементы, которые назначаются врачом-консультантом. Длительность курса коррекции составляет 36 месяцев, после чего рекомендуется повторная консультация и повторный анализ. При принятии решения о назначении курса коррекции врач- консультант принимает во внимание данные анамнеза, а также рутинных (общепринятых) клинико-биохимических исследований и анализов.

Интерпретация отклонений и рекомендуемый объем дополнительных исследований.

Нормативы содержания химических элементов (ХЭ) представлены в Таблице 4 (для волос), Таблице 5 (для ногтей), Таблице 8 (для крови), Таблице 9 (для плазмы крови и сыворотки крови), Таблице 10 (для мочи). Для повышения качества интерпретации полученных аналитических данных для результатов анализа волос и ногтей (наибольшее количество выполненных) используется разделение отклонений, в зависимости от их выраженности, на 4 степени, для остальных биосубстратов используется сравнение с нормативами содержания по принципу «Понижено/ Повышено» («Дефицит/Избыток»).

Степени отклонений содержания ХЭ в волосах и ногтях определены эмпирически на основании динамических наблюдений за состоянием здоровья пациентов и исходами заболеваний (см. Таблицу 6). Изменения 1-2 степеней в целом соответствуют стадии предболезни или функциональных расстройств. Они корректируются целенаправленными изменениями в индивидуальных рационах питания (оптимизация рационального питания, введение средств, влияющих на усвоение питательных веществ (про- или пребиотики, ферментныепрепараты), обогащенных пищевых продуктов, естественных концентраторов макро- и микроэлементов, соответствующих биологически активным добавкам к пище (БАДП) 1-2 курсами длительностью по 2 месяца), оптимизацией приема лекарственных препаратов и других средств, влияющих на метаболизм макро- и микроэлементов, лечением заболеваний, влияющих на минеральный обмен, таких как патология ЖКТ, мочевыделительной системы, дизрегуляционная патология центральной нервной и эндокринной систем, устранением или снижением времени контакта с вредными производственными или экологическими факторами.

В случае обнаружения отклонений 3-4 степеней в результатах анализа волос или ногтей необходимы углубленные клинико-лабораторные исследования, направленные на выявление патологии, этиопатогенетически связанной с нарушением минерального обмена. Коррекция выявленных отклонений 3-4 степеней выраженности предполагает, не только оптимизацию питания, лечение и профилактику. Необходимо устранить или снизить время контакта с токсичными ХЭ на производстве и в быту, провести целенаправленные персонализированные лечебные мероприятия. В эти мероприятия входит не только прием препаратов, влияющих на обмен эссенциальных макро- и микроэлементов, но и восполнение их недостатка в организме, выведение из организма токсичных и избыточно накопившихся эссенциальных ХЭ с помощью специальных лекарственных препаратов и специально разработанных средств индивидуальной коррекции. Средства коррекции минерального обмена представлены в Таблице 3, назначаются курсами по 2-3 месяца и более с периодическим мониторингом элементного статуса каждые 6-8 месяцев.

В случае неявки пациента на повторное обследование дальнейшее назначение средств коррекции без соответствующего контроля не рекомендуется.

В таблице 4 приведены нормативы содержания химических элементов в волосах (в мкг/г).

В таблице 5 приведены нормативы содержания химических элементов в ногтях (в мкг/г).

В таблице 6 показано установление значимости (степени) дефицита или избытка химического элемента на основании кратности отклонения от верхней или нижней границы нормы (для волос и ногтей).

Коррекция нарушений минерального обмена проводится назначением БАДП в дозах (для взрослого человека весом 70 кг, при степенях отклонения 1-2), представленных в Таблице 7. Дозировки для детей - 1/3 дозы (для детей до 10 лет) и 1/2 дозы (для детей 10-15 лет).

Если 3-я степень отклонения - к табличному значению необходимо добавить 1/3 от дозы, 4-я степень + 2/3. Коррекция по весу - на каждые 20 кг свыше 70 кг + 1/3 от дозы, 20 кг ниже - снижение дозы на 1/3.

В таблице 7 приведены средства коррекции нарушений минерального обмена и их дозировка. Примечание к таблице 7: % от адекватного уровня поступления и % от верхнего допустимого уровня поступления взяты из МР 2.3.1.1915-04 от 02.07.2004. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ.

В таблице 8 приведены нормативы содержания химических элементов в цельной крови (в мкг/мл).

В таблице 9 приведены нормативы содержания химических элементов в плазме и сыворотке крови (в мкг/мл).

В таблице 10 приведены нормативы содержания химических элементов в моче (в мкг/мл).

Назначение средств коррекции по результатам анализа цельной крови, плазмы и сыворотки крови, мочи (а также других биосубстратов) - индивидуально, для заключения о мерах для коррекции минерального обмена используется критерий повышено или понижено, исходя из абсолютной величины полученной концентрации.

Возможные осложнения при использовании медицинской технологии и способы ее устранения

В единичных случаях возможны побочные эффекты от применения препаратов, содержащих макро- и микроэлементы (обострение хронических воспалительных процессов, появление диспепсических расстройств, головокружения), вызванные индивидуальной непереносимостью компонентов препаратов, их взаимодействием между собой и с другими принимаемыми лекарственными средствами. Каждый пациент предупреждается о возможных побочных эффектах, и при появлении последних ему рекомендуется связаться с врачом-консультантом. Врач-консультант анализирует ситуацию с помощью оценки клинических и лабораторных показателей и принимает решение об отмене препаратов или их замене на аналоги, отличающиеся по химическому составу или форме выпуска (например, таблетки на сироп и др.).

За 18 лет применения на практике методики коррекции нарушений минерального обмена ни одного случая осложнений или побочного эффекта, не устраняемых в ходе перечисленных выше мероприятий, не зафиксировано.

В общей сложности на базе АНО «ЦВМ» выполнено более 160 000 анализов элементного состава волос и ногтей. Практическая применимость и терапевтический эффект метода продемонстрированы результатами массовых профилактических и лечебных мероприятий, проведенных АНО «ЦВМ» в крупных промышленных центрах и городах России. При проведении исследований минерального состава биосубстратов, взятых у населения (38 569 человек из различных регионов России) выявлены дефициты следующих макро- и микроэлементов, частота их представлена в Таблице 11.

Дефицит марганца регистрировался с частотой: у детей - 27%, у взрослых - 62%, у работников предприятий - 37%.

Дефицит магния регистрировался с частотой: у детей - 40%, у взрослых - 42%, у работников предприятий - 39%.

Дефицит калия регистрировался с частотой: у детей - 42%, у взрослых - 41%, у работников предприятий - 42%.

Дефицит меди регистрировался с частотой: у детей - 30%, у взрослых - 9%, у работников предприятий - 12%.

Дефицит цинка регистрировался с частотой: у детей - 47%, у взрослых - 22%, у работников предприятий - 19%.

Дефицит селена регистрировался с частотой: у детей - 34%, у взрослых - 46%, у работников предприятий - 50%.

Дефицит кобальта регистрировался с частотой: у детей - 35%, у взрослых - 18%, у работников предприятий - 15 %.

Дефицит кальция регистрировался с частотой: у детей - 40 %, у взрослых - 13 %, у работников предприятий - 21 %.

Дефицит хрома регистрировался с частотой: у детей - 38 %, у взрослых - 29 %, у работников предприятий -22 %.

В таблице 11 показана частота встречаемости дефицитов макро- и микроэлементов у населения.

Из 38 569 человек, 4 351 человек сделали повторный анализ (обнаружено 10 097 дефицитов макро- и микроэлементов при первом анализе), что позволило получить следующие данные по изучению коррекции минерального обмена:

1) С участием 1 415 лиц, с обнаруженным недостатком марганца, показано, что после курса приема препарата Био-марганец дефицит марганца устраняется в 35% случаев, что проявлялось в увеличении содержания марганца при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 41% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине — в 24% случаев.

2) С участием 976 лиц, с обнаруженным недостатком магния, показано, что после курса приема препарата Био-магний дефицит магния устраняется в 30% случаев, что проявлялось в увеличении содержания магния при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 33% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 37% случаев.

3) С участием 1 213 лиц, с обнаруженным недостатком калия, показано, что после курса приема препарата Био-калий дефицит калия устраняется в 35% случаев, что проявлялось в увеличении содержания калия при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 34% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 31% случаев.

4) С участием 1 089 лиц, с обнаруженным недостатком меди, показано, что после курса приема препарата Био-медь дефицит меди устраняется в 45% случаев, что проявлялось в увеличении содержания меди при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 36% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 19% случаев.

5) С участием 1 103 лиц, с обнаруженным недостатком цинка, показано, что после курса приема препарата Био-цинка дефицит цинка устраняется в 40% случаев, что проявлялось в увеличении содержания цинка при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 35% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 25% случаев.

6) С участием 2 068 лиц, с обнаруженным недостатком селена, показано, что после курса приема препарата Селенохела дефицит селена устраняется в 50% случаев, что проявлялось в увеличении содержания селена при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 42% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 8% случаев.

7) С участием 1 317 лиц, с обнаруженным недостатком кобальта, показано, что после курса приема препарата Кобахела дефицит кобальта устраняется в 40% случаев, что проявлялось в увеличении содержания кобальта при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 45% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 15% случаев.

8) С участием 1 862 лиц, с обнаруженным недостатком кальция, показано, что после курса приема препарата Кальцихела дефицит кальция устраняется в 35% случаев, что проявлялось в увеличении содержания кальция при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 38% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 27% случаев.

9) С участием 854 лиц, с обнаруженным недостатком хрома, показано, что после курса приема препарата Хромохела дефицит хрома устраняется в 40% случаев, что проявлялось в увеличении содержания хрома при повторных анализах и достоверном снижении выраженности клинических проявлений. Дефицит снизился, но не устранен в 42% случаев, выраженность клинических проявлений уменьшилась. Изменений не произошло ни в анализах, ни в клинической картине - в 18% случаев.

В таблице 12 показана эффективность устранения дефицитов макро- и микроэлементов с помощью курса коррекции минерального обмена организма человека.

Дефициты 3-4 степени отклонения не всегда могут быть устранены в течение одного курса коррекции, после повторно сданного анализа (через 4-6 месяцев с момента первого анализа) при выявлении дефицита, лечение может быть продолжено.

Способ коррекции минерального обмена организма может быть рекомендован в широкую клиническую практику.