Изобретение относится к медицине, а именно, к онкологии и предназначено для лечения онкологических заболеваний человека.

Предшествующий уровень техники

Высокая заболеваемость и смертность от злокачественных новообразований требу- ет изменений подходов как в диагностике, так и в лечении этого заболевания. Наиболее широко используются официальные методы лечения онкологических заболеваний: опера- тивное лечение, лучевая терапия, химиотерапия ['], недавно стали широко применяться: иммунотерапия [ ], фото динамическая терапия [ ]. В последнее время в медицинских кругах часто дискутируется вопрос о несоответствии практической эффективности со- временных методов лечения рака теоретическим расчетам и биохимическим моделям по- ведения раковой клетки при действии различных повреждающих факторов. К таким несо- ответствиям можно отнести: необъяснимость устойчивости рака к лучевой терапии [ ⁴ ], устойчивость раковых клеток к химиотерапии даже при использовании блокаторов глико- протеида Р [ ⁵ ], неэффективность иммунных реакций организма против опухоли при нали- чии мощного иммунного ответа и огромного количества противораковых антител в крови больного[ ⁶ ] и др.

Накопленные за последнее время данные об особенностях опухолевого роста и взаимодействия опухоли с системами макроорганизма могут объяснить некоторые реак- ции опухоли на лечебное воздействие.

В этой статье мы намерены обобщить последние научные данные о раковых опу- холях с целью выработки новой стратегии в борьбе с этой группой заболеваний.

Современные методы полихимиотерапии основаны на применении ряда препара- тов, блокирующих различные фазы клеточного цикла одновременно[ ]. Как правило, это комбинация антиметаболитов с бисхлорэтил аминами, в том числе препаратами платины - цисплатином, платидиамом, платинолом [ ]. Одновременное применение нескольких по- добных препаратов к различным мишеням (фазам клеточного цикла), могло бы привести к полной регрессии опухолей за счет гибели раковых клеток в фазе деления. Но позже Вах- тин Ю.Б. в своей клональной концепции опухолевого роста показал, что среди клонов быстро делящихся раковых клеток были обнаружены клоны покоящихся клеток, которые имели низкую степень дифференцировки, но не делились вовсе [ ⁹ ]. Именно эти клетки и были полностью индифферентны к полихимиотерапии. После гибели быстро делящихся клеток, в латентном клоне происходила экспрессия и амплификация гликопротеида Р, представляющего собой кальций-зависимый мембранный насос [ ¹⁰ ]. Этот гликопротеид быстро очищал раковые клетки от всех химиопрепаратов, при этом они не успевали даже попадать в ядро. Латентные клоны начинали тоже размножаться, но все они уже были ус- тойчивы к любой химиотерапии, в том числе к препаратам группы таксана, которые влия- ли только на тубулин комплекса Гольджи в клетке. Наиболее агрессивно вели себя рако- вые клетки из метастазов. Они начинали экспрессировать ряд генов "агрессивности"- ге- ны коллагеназы, трипсина, фибринолизина и других протеаз. Последние помогали клет- кам проникать через стенки сосудов и быстро метастазировать[ ^п ]. Особенно это харак- терно для меланобластом, семином и сарком. При этом клетки практически утрачивали дифференцировку и специализацию, что выводило их из - под контроля регулирующих систем организма. Так как эти клетки характеризуются медленным ростом, способно- стью к быстрому метастазированию, наличием огромного количества копий гликопротеи- да Р в клеточной мембране, то химиотерапия была практически неэффективной [10]. В по- следнее время появился ряд направлений в разработке химиопрепаратов: использование химиосенсибилизаторов для блокады гликопротеида Р[ ], а также ингибиторов протео- лиза для блокады метастазирования [ ¹³ , ¹⁴ ]. Хотя применение этих препаратов и не решает проблемы нечувствительности к химиотерапии латентных клонов опухоли с медленно де- лящимися метастатическими клетками. Как только химиотерапия была отменена, эти клетки начинали снова делиться и метастазировать.

Из подобной ситуации существует несколько возможных выходов: создание пре- паратов, обладающих способностью вызывать апоптоз раковых клеток путем инактивации белоксинтезирующего аппарата[ ¹⁵ ]. При этом, они должны обладать векторностью (селек- тивно накапливаться только в раковой опухоли), не вызывать блокады деления клеток ко- стного мозга, эпителия, гепатоцитов, волосяных луковиц и др. Эти вещества должны быть больше канала- гликопротеида Р по размерам, а блокада синтеза белка этими веще- ствами в клетке соответственно должна автоматически блокировать синтез протеаз, спо- собствующих метастазированию рака.

Как правило, метастазирование рака начинается после достижения опухолью сред- него размера 3 см (для аденокарцином); при этом сначала единичные метастатические клетки по кровеносной системе распространяются по организму, а далее в больших коли- чествах депонируются в лимфоузлах [ ¹⁶ ]. Наличие коллагеназы и трипсина у соответст- вующих раковых клонов способствует значительному метастазированию путем "лизиса" стенки сосудов раковыми клетками. Удаление опухоли хирургическим путем даже при отсутствии метастазов, но при размерах опухоли около 3 см требует шунтирования раз- росшейся сосудистой сети опухоли, а травмирование сосудистой системы приводит к об- ширному распространению раковых клеток по всему организму из очага оперативного вмешательства [11]. Как пишет в своей монографии В.И.Чиссов, рядом ученых была предложена схема, при которой, предполагалось, что метастазирование будет сведено к минимуму: до оперативного лечения и после него проводили лучевую обработку раковой опухоли. При этом была надежда, что даже попадание части клеток в сосудистую сеть не приведет к метастазированию, так как эти клетки будут мертвыми [ ]. Однако, практиче- ские результаты при использовании этой схемы показали, что метастазирование в некото- рых случаях даже ускорилось. Комбинация химиотерапии и лучевой терапии до и после оперативного вмешательства также не дала ожидаемого результата.

Молекулярно-биологические исследования показали, что эта неэффективность обусловлена двумя факторами: выделением материнскими раковыми клетками кейлонов, тормозящих рост дочерних метастаз; наличием огромного количества макрофагов, моно- цитов и лимфоцитов-киллеров в живой опухоли, которые тормозили и предотвращали распространение метастатических клеток [ ¹⁸ , ¹⁹ ]. Таким образом, можно предположить, что при облучении опухоли в первую очередь погибали именно клетки иммунной системы - макрофаги, Т-киллеры, моноциты и опухоль становилась полностью невидимой для им- мунной системы и начинала бурно метастазировать ещё до операции. После операции, от- почковавшиеся метастатические клетки, лишившись росттормозящего сигнала кейлонов центральной опухоли, начинали бурно делиться. При этом они оставались невидимыми для иммунитета из - за гибели макрофагов центральной опухоли.

Одним из возможных выходов из сложившейся ситуации можно считать ограни - чение локальных методов лечения (оперативного и лучевого) при размерах опухоли более 3 см и замене этих методов химиотерапией с применением блокаторов гликопротеида Р и методов специфической и адоптивной иммунотерапии в разных модификациях.

Первые попытки лечения рака с использованием иммунитета самого пациента бы- ли проведены в начале века путем прививки БЦЖ раковым больным [ ²⁰ ]. Как показал J.L.Old, при этом наблюдалась в некоторых случаях полная регрессия как первичного ра- ка, так и метастазов. Автор показал, что это было обусловлено активацией выработки так называемого фактора некроза опухоли (ФИО) [ ]. Это были первые случаи излечения ра- ка, достоверно зарегистрированные в историях болезни. С тех пор методы иммунологии значительно изменились: появились рекомбинантные лимфокины : интерфероны [ ] , ин- терлейкины [ ²³ ] , иммуноиндукторы- лектины [ ²⁴ ] и полисахариды[ ²⁵ ], аутометоды- адоп- тивная иммунотерапия рака с интерлейкином по Розенбергу[ ²⁶ ], подсадка эмбриональных тканей и аутовакцинирование собственными раковыми клетками по Говалло[ ²⁷ ]. Эти ме- тоды были эффективными на некоторых видах опухолей настолько, что были внедрены во многих клиниках и эффективно используются и до настоящего времени. При этом ряд проблем в иммунотерапии рака остался: полная невидимость отдаленных метастазов и ря- да опухолей для иммунитета, низкая чувствительность иммунитета больных к лимфоки- нам. Например, применение интерлейкина-2 в больших дозах приводит к значительным патологиям внутренних органов у пациентов: некрозу, аутоиммунным процессам [ ²⁸ ]. При этом отдаленные метастазы продолжают оставаться невидимыми для иммунитета даже после массированных доз лимфокинов. Это свидетельствует о наличии множества препят- ствий на пути реализации целого ряда иммунных реакций. Ведь в некоторых случаях при иммунотерапии наступала полная регрессия опухоли с метастазами [ J.

Как показал в своей монографии А.Ф. Фролов, большинство вирусов после инфи- цирования персистируют в различных тканях организма человека [ ³⁰ ]. Как видно на при- мере наиболее распространенной группы вирусов- семейства Herpesviridae, иммунодефи- циты вызванные такими представителями этого семейства как цитомегаловирус (ЦМВ), герпес простой (1 и 2 типов) коррелируют с наличием раковых опухолей у обследованных больных . При дальнейшем изучении лимфоцитов у этих людей оказалось, что ЦМВ пер- систировал именно в Т-лимфоцитах СД4+ и СД8+ (киллеров и хелперов) и часто у лей- козн х больных вызывал энтероколиты [ ³¹ ]. При этом количество лимфоцитов оставалось нормальным, а вот способность к бластной трансформации, фагоцитоз и способность реа- гировать на ИЛ-2 были значительно снижены, а в некоторых случаях использование ИЛ-2 приводило к активации персистирующих в лимфоцитах аденовирусов, ЦМВ и вирусов гриппа [ ³² ]. В культуре инфицированные лимфоциты фактически не лизировали раковые клетки, тогда как лимфоциты из здорового организма продолжали их фагоцитировать, что в некоторых случаях позволяло проводить успешные трансплантации костного мозга при наличии в материале ЦМВ [ ]. При раке шейки матки у женщин была обнаружена сле- дующая закономерность: практически все случаи рака шейки матки сопровождались пер- систенцией и частым обострением вируса простого герпеса 2 типа [ ³⁴ ]. При этом досто- верно известна тропность этого вируса к макрофагам шейки матки и яичников у женщин, а макрофаги являются основным барьером на пути распространения вновь возникшей опухоли и являются основными представителями местного иммунитета [21] . Это свиде- тельствует как о косвенной роли вирусов в этиологии рака, так и о прямой их роли в ин- дифферентности иммунной системы к уже возникшей опухоли в процессе иммунотера- пии.

Исходя из перечисленных выше фактов можно предположить, что одним из эффек- тивных направлений в повышении активности иммунной реакции при раке можно считать очистку Т-лимфоцитов и макрофагов от персистирующих вирусов, в частности семейства Herpesviridae- как наиболее распространенного среди людей. В настоящее время досто- верно известна определенная этиологическая роль персистирующих вирусов гриппа, па- рагриппа, кори, герпеса, аденовирусов, паповавирусов в канцерогенезе. Хотя и отсутст- вуют лекарственные препараты для очистки иммунной системы пациента от персисти- рующих вирусов, мы надеемся, что в ближайшее время будут обнаружены как естествен- ные механизмы очистки генома от транспозонов вирусов, так и новые лекарственные пре- параты, связанные с этими механизмами.

Одним из новых направлений в быстрой блокаде репликации вирусов, остановке синтеза вирусных белков без гибели самой клетки является применение нового вида ле- карственных препаратов с антивирусной активностью - динамических квазиживых сис- тем, способных адаптироваться к конкретному организму и вирусам. Данная система представляет собой композицию из тысяч низкомолекулярных олигопептидов с изменен- ными зарядами, представляющих собой динамический фармакофор с нечеткой структу- рой.

Ближайшим прототипом вещества, которое патентуется, являются модифициро- ванные белки и их использование для контроля вирусных инфекций [35]. Это обработан- ные разными ангидридами и ацилирующими средствами белки: альбумины, лактоферрин, трансферин, лактальбумин. Авторы запатентовали также механизм действия этих белков - торможение вирусной адгезии. Эти белки должны иметь молекулярную массу больше 60000 с небольшим колебанием. Показано значительное профилактическое антивирусное действие этих белков в опытах на культурах клеток. Вещества проявили активность отно- сительно вирусов ВИЧ (человека и мартышки), гриппа, цитомегаловируса, полиовирусу, вируса леса Селмики, вируса Сендай, парагриппа, Коксаки вируса. Авторы показали, что ацилированные белки нетоксичны и могут защищать животных против инфицирования вирусами.

Прототип имеет ряд недостатков: он является сугубо профилактическим средством (на клетки, которые уже инфицированы вирусом такие белки лечебного эффекта не ока- зывали) и не имеет лечебных свойств у инфицированных животных. В связи с тем, что прототип является высокомолекулярным белком, он может быть использован только для парентерального применения, препарат представляет собой индивидуальное соединение и не представляет из себя динамической самоорганизующейся системы и соответственно вирусы будут быстро адаптироваться к препарату, также препарат не проявил противора- ковой активности или способности к иммунореабилитации организмов раковых больных. Раскрытие изобретения

В основу изобретения поставлена задача синтезировать смесь (ансамбль) модифи- цированных олигопептидов с противораковыми свойствами и с новым механизмом дейст- вия, использование которых позволит значительно увеличить эффективность лечения и сократить сроки лечения онкологических больных, предотвратить метастазирование им- муноконтрастных опухолей.

Поставленная задача решается путем синтеза смеси (ансамбля) химически моди- фицированных пептидов с противораковыми свойствами, который отличается тем, что сначала проводят частичный гидролиз белок-содержащего сырья, а затем проводят про- цесс химической модификации суммы полученных олигопептидов с заменой заряда их молекул на противоположный.

Для синтеза могут быть использованы такие белки: овальбумин (OA), человече- ский сывороточный альбумин (ЛСА), бычий сывороточный альбумин (БСА), смесь мо- лочных белков (СМБ), кроличий сывороточный альбумин (КСА), лизоцим (ЛЦ), лактоа- льбумин (ЛА), казеин (КЗ), соевый белок (СБ), их смесь, молоко (М), цельный яичный бе- лок (ЦЯБ). Для ферментативного гидролиза могут быть использованы пепсин, трипсин, химотрипсин, папаш, протешаза К, клострипаш, тромбин, термолизин, эластаза. В качест- ве модифицирующих агентов могут быть использованы модификаторы представленные на Фиг.1. В эксперименте была подтвержденная эффективность препарата на различных моделях рака in vivo, in vivo, описанных ниже. Синтезированные олигопептиды способны тормозить активность гетеродимера а- б - импортинов клетки, которые транспортируют вирусные полинуклеотиды из цитоплазмы в ядро. Соответственно торможение этих транспортных белков приведет к блокаде вирусов, репликация которых зависит от функ- ций ядра клетки, также избирательно останавливается синтез белка в раковых клетках. Кроме того, препарат эффективен при пероральном применении.

Авторами использован ансамбль из олигопептидов - продуктов гидролиза поли- нуклеотидов, но с измененными на противоположные зарядами молекул. Ансамбль - тер- мин из супрамолекулярной химии. Объекты супрамолекулярной химии— супрамолеку- лярные ансамбли, строящиеся самопроизвольно из комплементарных, т. е. имеющих гео- метрическое и химическое соответствие фрагментов, подобно самопроизвольной сборке сложнейших пространственных структур в живой клетке [ ³⁶ , ³⁷ ] Краткое описание чертежей

Фиг. 1.- Структуры химических модификаторов, применимых для изменения зарядов мо- лекул олигопептидов МП

Фиг. 2- Саркома. Окраска гематоксилин - эозин.

Лучший вариант осуществления изобретения Пример 1. Получение смеси модифицированных пептидов (МП) с антивирусными свой- ствами, которые способны к самоорганизации на импортинах. В асептических условиях 500 мг овальбумина растворяют в 50 мл дистиллированной воды, доводят рН до 8,0 1 М раствором гидроксида натрия, добавляют 5 мг трипсина, оставляют раствор на 3-45 часов, наблюдается гидролиз овальбумина с образованием смеси пептидов. К этой смеси добав- ляют 501-2000 мг янтарного ангидрида, перемешивают при температуре 16-65 ⁰ С 20 ми- нут. Смесь пропускают через мембранные фильтры с целью стерилизации и разливают в стеклянные флаконы.

Пример 2. Противораковая активность МП. Определение противораковой активности ан- тикана в клеточной культуре проводили в культуре клеток HeLa-2. Для этого к среде 199 добавляли разное количество МП от 20 до 120 мкг/мл среды, (см.таб 2) Для контроля ис- пользовали культуру без МП. Наблюдение за культурами клеток вели в течение 5 суток с ежедневным просмотром. Минимальной активной дозой (МАД) антикана считали такое его минимальное количество, которое вызывало дегенерацию 90-95% клеток (Таб. 2)

Таблица 2 - Сравнительная характеристика чувствительности культуры опухоле- вых клеток HeLa-2 относительно антикану.

¹ Цитопатическое действие;

++++ дегенерация 100% клеток

0 отсутствие дегенерации.

При установлении минимальной концентрации МП, которая тормозит рост клеток проведено сопоставление количества клеток, которые выжили, и концентрацией МП в растворе.

Таблица 3 - Влияние МП на клетки HeLa

Как видно из таблицы 3, эффективная доза МП находится в пределах между 80-120 мкг/мл раствора.

МП приводил к 100 % дегенерации опухолевых клеток в дозе 80-120 мкг/мл. Для подтверждения противоопухолевого действия in vivo МП был исследован на моделях бен- зидиновой кожной саркомы и перевивной асцитной аденокарциномы у барбадосских мышей. На 5 мышах с аденокарциномой также исследовали распределение липосом МП по организму животных благодаря флуоресцентному зонду (флюоресцеинизотиоцианату).

Пример 4. Изучение противораковой активности антикана на модели бензидиновой сар- комы. Перед применением к силикагелю добавляли 7 мл раствору 2% бензидина в 0,9 % натрия хлориде до образования опалесцирующей суспензии ( 1 г силикагеля на 5 мл физ. раствора). Двадцати пяти мышам барбадосской линии массой 18-20 г обоего пола, кото- рых удерживали на рационе вивария через каждых 3 суток подкожно вводили возле шеи иммобилизированные на силикагеле бензидин и форболацетат . Через две недели у 18 жи- вотных появились опухоли разных размеров в виде небольшого бугра на шее около сили- кагелевой грануломы. Цитология опухоли представлена на Фиг. 2. Каждой группе живот- ных вводили парентерально соответствующее соединение в дозе 100 мкг/кг массы два раза на сутки два недели, начиная с 16 дня после введения канцерогена

Таблица 4 - Сравнение противоопухолевого действия МП против соединения - ана- лога (таксотера) и плацебо (физ.раствор).

Примечание: п=7, р>0,05 по сравнению с контролем и предыдущими данными.

Как видно из таблицы 4, МП уменьшал массу подопытных животных на 1 1 г, при этом у контрольных животных масса тела продолжала расти, и некоторые из них умерли. После анатомического исследования силикагелевой грануломы было установлено, что животные, которых лечили МП, не имели признаков злокачественного превращения гра- нуломы в саркому.

Сроки гибели животных приведены в таб 5.

Таблица 5 - Время гибели животных с бензидиновой саркомой кожи

Примечание: п=10, р>0,05 по сравнению с контролем и предыдущими данными. Таким образом, МП увеличивает против таксотера продолжительность жизни жи- вотных более чем в 10 раз. Пример 5. Исследование противоопухолевого действия МП на асцитной аденокарциноме Эрлиха. Противоопухолевое действие композиций исследовали на моделях асцитной кар- циномы Эрлиха у молодых мышей барбадосской линии обоего пола массой 15-17 г (70 штук), которых выдерживали на рационе вивария.

50 мышам инокулировали от мыши с аденокарциномой инсулиновым шприцем

0,1 мл асцитной жидкости в область печенки. Через 7 суток у 46 мышей появились при- знаки опухоли (увеличилась масса тела и размеры живота), 3 мыши погибли на второй день, 1 мышь не подала признаки опухоли.

15 мышам вводили МП внутрибрюшинно (см. Таб 6), еще 15 мышам вводили МП внутривенно, еще 15 - 0,9% раствор натрия хлорида.

Таблица 6 - Количественные биологические и статистические характеристики при исследовании противоопухолевой активности МП.

Примечание: п=10, р>0,05 в сравнении с контролем и предыдущими данными. МП вводили тем мышам, в которых брали кровь. Мыши с аденокарциномой Эрли- ха после перевивки опухоли и лечения композицией модифицированных пептидов жили 48-52 суток, что в среднем в 10 раз дольше чем в контроле. При достоверности больше 99,5% можно утверждать о значительной противораковой активности МП против контро- ля - таксотера. После анатомирования животных признаков опухолей и метастазов в орга- нах животных найдено не было.

Пример 6.- Исследование распределения МП по организму животных._Для исследования распределения липосом по органам животных использовали МП меченный флюоресцеи- низотиоцианатом (ФИТЦ) (после ферментативного гидролиза к раствору пептидов добав- ляли 0,01 % ФИТЦ, а затем ацилировали). Наибольшая флуоресценция наблюдалась в ас- цитной жидкости, которая подтверждает тропность МП к опухоли. В контроле МП рас- пределялся в селезенку, печень и лимфоузлы.

Распределение МП изучали в организме мышей- опухоленосителей (5 животных) и здоровых крыс (5 животных) после инфузионного введения МП-ФИТЦ. МП-ФИТЦ вводили в дозе 240 мкг/кг. Через 5 часов животным проводили эвтаназию, и исследовали интенсивность флюоресценции на флюориметре HP-F-40M.

Таблица 7 - Накопление МП в зависимости от скорости введения.

Животные Орган Форма введения анти- Флуоресценция, % *

кана

-II- нирки 2 ±0,5

-II- асцитная 52 ±0,5

жидкость

быстрое в/в введение

-II- плазма 15 ±0,5

-II- печень 44 ±0,5

-II- легкие 1 ±0,5

-II- селезенка 8 ±0,5

-II- почки 2 ±0,5

-II- асцитная 30 ±0,5

жидкость

* относительная флуоресценция - процент флуоресценции относительно интенсив- ности флуоресценции клеток той же ткани у животных, не получавших флюоресцентно меченный препарат.

Как видно из таблицы, при наличии опухоли, накопление МП идет там, но в зави- симости от интенсивности инфузии. Чем быстрее вводится МП, тем больше его накапли- вается в печени. Поэтому рациональным является введение МП либо в виде медленных инфузий либо в виде ректальных свечей с замедленным высвобождением .

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а конкретно к онкологии, и мо- жет быть использовано в лечение онкологических инфекций животных и человека.

V Промышленная применимость

Изобретение относится к медицине, а конкретно к онкологии, и может быть использовано для созданий новых лекарственных препаратов на основе динамических самоадаптирующихся и самоорганизующихся систем для лечения онкологических заболеваний. Полученные таким образом препараты являются полностью экологически безопасными, биодеградируемыми и полностью метаболизируемыми как в организме пациентов, так и в окружающей среде, а технологии их получения относятся к группе полностью безотходных, не требует нового уникального оборудования и оригинальных реактивов и может производиться на любом фармацевтическом предприятии с унифицированными производственными линиями.

Использованные источники информации

Трещалина Е.М., Седакова Л. А., Фирсова Г.А. Выбор моделей для скрининга природных веществ на противоопухолевую активность.// Антиб.и химиотерапия. -1990. -Т.35, N° 2.- С.26-29

² Огарков В. И., Добкин А.И., Рыжова Е.В., Окулов В. Б., Киселев О.И. Интерлейкин-2 и иммунотерапия рака.// Вопр. онкологии.- 1989.-Т.З 5 ,N°2.-C.141-151.

³ Berlin К., Jain R., Richert С. Are porphyrin mixtures favorable photodynamic anticancer drugs? A model study with combinatorial libraries of tetraphenylporphyrins.// Biotechnol Bio- eng.- 1998.-Vol.61 ,No.2.-P.107-1 18

⁴ Denecke J., Fiedler K.,Hacker-Klom U.,Molenkamp GJurgens H., Wolff J.E. Multiple drug- resistant C6 glioma cells cross-resistant to irradiation.// Anticancer Res.- 1997.- Vol.17, No.6D.- P. 4531-4534

⁵ Hendrikse N.H., de Vries E.G., Eriks-Fluks L.,et al. A new in vivo method to study P- glycoprotein transport in tumors and the blood-brain barrier.// Cancer Res.- 1999. -Vol.59.- P.241 1-2416.

⁶ Городилова В. В., Боева М.Н. Иммунобиология опухолевого роста.-М.:Медицина,1983.- 236.

⁷ Блохин Н.Н., Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний.- Моск- ва. :Медицина, 1986.-303с.

⁸ Gergel D.,Misik V.,Ondrias К. Effect of cisplatin, carboplatin and stobadine on lipid peroxida- tion of kidney homogenate and phosphatidylcholine liposomes.// Physiol Res. -1992. -Vol.41 ,N 2.-P. 129-134

⁹ Бахтин Ю.Б.,Пинчук В. Г., Швембергер И.Н., Бутенко З.А. Клонально-селекционная концепция опухолевого роста.-Киев: Наук.думка, 1987.-215 с.

¹⁰ Morassutti С, Scaggiante В., Xodo L.E., Dapas В., Paroni G., Tolazzi G., et al. Reduction of mdrl gene amplification in human multidrug-resistant LoVo DX cell line is promoted by triple helix-forming oligonucleotides. Antisense Nucleic Acid Drug Dev 1999;9:261-70.

^{1 1} Liotta T. Tumor invasion and metastases- role of the extracellular matrix // Cancer.res.-1986.- Vol.46.,N 1.-P.1-7.

¹² Tian H., Pan O.C. Modulation of multidrug resistance by three bisbenzyl-isoquinolines in comparison with verapamil.// Chung Kuo Yao Li Hsueh Pao.- 1997. -Vol.18. -P.455-458.

¹³ Rogelj В., Popovic Т., Ritonja A., Strukelj В., Brzin J. Chelidocystatin, a novel phytocystatin from Chelidonium majus.// Phytochemistry.- 1998.-Vol.49,No.6.-P.1645-1649 r ¹⁴ Zhang Y., Guo X., Lin E.T., Benet L.Z. Overlapping substrate specificities of cytochrome P450 ЗА and P- glycoprotein for a novel cysteine protease inhibitor.// Drug Metab. Dispos.- 1998.-Vol.26.-P.360-366.

¹⁵ Bantel H, Engels IH, Voelter W, Schulze-Osthoff K, Wesselborg S. Mistletoe lectin activates caspase-8/FLICE independently of death receptor signaling and enhances anticancer drug- induced apoptosis.//Cancer Res.- 1999.-Vol.59.-P.2083-2090.

¹⁶ Schirrmacher V. Cancer metasthasis: experimental approaches, theoretical concepts and im- pacts for treatment strategies// Advances in cancer research. Acad.Press. - 1985-Vol.43.-P. l -73

¹⁷ Чиссов В. И., Киселева Е.С., Антошечкина А. Г. и др. Комбинированное и комплексное лечение больных со злокачественными опухолями. -М.:Медицина,1989. -559.

¹⁸ Lian F, Li Y, Bhuiyan M, Sarkar FH. p53 -independent apoptosis induced by genistein in lung cancer cells.// Nutr. Cancer.- 1999.-Vol.33.-P.125-131.

¹⁹ Mori S, Murakami-Mori K, Bonavida B. Oncostatin M (OM) promotes the growth of DU 145 human prostate cancer cells, but not PC-3 or LNCaP, through the signaling of the OM specific receptor.// Anticancer Res.- 1999.-Vol.19.-P.101 1-1005.

Лобашевский А.Л., Кочемасова З.Н. Туморнекротизирующий фактор. Противоопухо- левая активность некоторых микробов и их компонентов.// Успехи совр. био- логии.-1988.-Т.Ю5, вып.2.- с.217-230

1 Old J.L. Tumor necrosis factor (TNF).// Science.- 1985.-Vol. 230, No.4726.- P. 630-632

²² Arora Т., Floyd-Smith G., Espy M.J., Jelinek D.F. Dissociation between IFN-alpha-induced anti-viral and growth signaling pathways.// J. Immunol.- 1999. -Vol.162. -P.3289-3297.

²³ Fu J, Zheng J, Fang W, Wu B. Effect of interleukin-6 on the growth of human lung cancer cell line.// Chin. Med. J. (Engl)- 1998.-Vol.l 1 1.-P.265-268.

²⁴ Timoshenko A.V., Kayser K, Drings P, Kolb G, Havemann K, Gabius H.J. Modulation of lectin-triggered superoxide release from neutrophils of tumor patients with and without chemo- therapy.// Anticancer Res.- 1993. -Vol.13. -P.1789- 1792.

²⁵ Burger R.A., Torres A.R., Warren R.P., Caldwell V.D., Hughes B.G. Echinacea-induced cyto- kine production by human macrophages.// Int J Immunopharmacol.- 1997. -Vol.19. -P.371 -379.

²⁶ Rosenberg S.A., Packard B.S., Aebersold P.M. Use of tumor-infiltrating lymphocytes and interleukin-2 in the immunotherapy of patients with metastatic melanoma.// New England Jour- nal of Medicine.-1988.-Vol.319,N.25.-P. 1676-1680

²⁷ Говалло В.И. Иммунология против рака.// -М., "Знание". ,1987.

²⁸ Kendall A. Smith. Interleukin-2: inception, impact and implication.// Science. -1988.- Vol.240,No.4856, P.l 169-1 176. Mazumder A.M., Grimm E.A., Zhang H.Z. and al. Lysis of fresh human solid tumors by autologous lymphocytes activated in vitro by lectins.// Cancer res. -1982. -Vol.42. -P.913-918.

³⁰ Фролов А.Ф. Персистенция вирусов (Механизмы и клинико-эпидемиологические аспек- ты).-В.,Изд. Винницкого медицинского Университета им. Н.И.Пирогова.-1995.-233 с.

³¹ Ohata J, Matsuoka М, Yamashita Т, Tojo A, Tani К, Asano S. CD4/CD8 double-positive adult T cell leukemia with preceding cytomegaloviral gastroenterocolitis.// Int. J. Hematol.- 1999.-Vol.69.-P.92-95.

³² Kline J.N., Hunninghake G.M., He B, Monick M.M., Hunninghake G.W. Synergistic activa- tion of the human cytomegalovirus major immediate early promoter by prostaglandin E2 and cy- tokines.// Exp. Lung. Res.- 1998.-Vol.24,P.3-14.

³³ Goi K, Sugita K, Miyamoto N, et al. Cord blood stem cell transplantation for infantile acute lymphoblastic leukemia after primary cytomegalovirus infection.// Rinsho Ketsueki.- 1997.- Vol.38,P.1229-1233.

³⁴ Инфекционные вирусы и канцерогенез./под ред. В.И.Струка.- Киев : Наук думка, 1987.- 255 с.

³⁵ Robert Walter Jansen, Dirk Klaas Fokke Meijer, Grietje Molema, Erik Desire Alice De Clercq, Rudi Wilfried Jan Pauwels, Dominique Schols Modified proteins and their use for con- trolling viral infection // A61K 3804; A61K 3816, US Patent iY° 5869457, Reg. 9.02.1999. Appl. Sep 4, 1997

³⁶ http://dic.academic.ru/dic.nsf/ruwiki/79240

³⁷ Jean-Marie Lehn. Supramolecular Chemistry. Concepts and Perspectives.- Weinheim; New York; Basel; Cambridge; Tokyo: VCH Verlagsgesellschaft mbH, 1995.-P. 103 (Chapter 7)