以下、本発明をさらに詳細に説明する。
 本発明のチアゾール誘導体(1)又は(1’)、及� ��チアゾール誘導体固定化マトリックス(6)に� ��ける、R ¹ 、R ² 、Arで表される置換基、R ³ 及びR ^3a で表されるアンモニウム塩(Z ^- H ₃ ⁺ N)、並びにチアゾール誘導体(1a)の合成原料で あるフタルイミド誘導体(2)におけるYで表さ� �る置換基の定義について以下に示す。

 R ¹ 及びR ² で表される炭素数1から6のアルキル基として� ��、直鎖状もしくは分枝状のいずれであって� ��よく、メチル基、エチル基、プロピル基、� ��ソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、s ec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、イ� ��アミル基、ネオペンチル基、2-ペンチル基� �3-ペンチル基、tert-ペンチル基、ヘキシル基� ��イソヘキシル基、2-ヘキシル基、3-ヘキシル 基を例示することができる。また、これらの 炭素数1から6のアルキル基はハロゲン原子等� ��置換されていてもよく、さらに具体的には� ��フルオロメチル基、トリフルオロメチル基� ��2,2,2-トリフルオロエチル基、パーフルオロ� ��チル基、ヒドロキシメチル基、カルボキシ� ��チル基、4-モルホリノカルボニルメチル基� �を例示することができる。特に本発明の固� �化マトリックスの製造に用いるチアゾール� �導体としては、免疫グロブリンの分析また� �精製において良好な性能を示す点で、R ¹ はメチル基が好ましく、R ² は水素原子が好ましい。

 R ³ 及びR ^3a で表されるアンモニウム塩はZ ^- H ₃ ⁺ N(Z ^- は共役塩基を表す。)で表される。具体的に� �Cl ^- H ₃ ⁺ N、Br ^- H ₃ ⁺ N、F ^- H ₃ ⁺ N、I ^- H ₃ ⁺ N、NO ₃ ^- H ₃ ⁺ N、1/2(SO ₄ ^2- )H ₃ ⁺ N、1/3(PO ₄ ^3- )H ₃ ⁺ N、CH ₃ SO ₃ ^- H ₃ ⁺ N、4-CH ₃ C ₆ H ₄ SO ₃ ^- H ₃ ⁺ N、CH ₃ COO ^- H ₃ ⁺ N、CF ₃ COO ^- H ₃ ⁺ N等を例示することができる。R ³ 及びR ^3a は、チアゾール誘導体(1)及びチアゾール誘導 体(1’)を合成する上での反応の操作性や単離 が簡便な点及びマトリックスへの固定化の反 応性や操作性に優れている点で、Cl ^- H ₃ ⁺ N又はBr ^- H ₃ ⁺ Nが好ましい。

 Arで表される置換されていてもよい芳香� �基としては、特に制限はないが、フラン-2-� �ル基、フリル基、チエニル基、チオフェン-3 -イル基、ピロール-2-イル基、ピロール-3-イ� �基、ピラゾール-3-イル基、ピラゾール-4-イ� �基、イソチアゾール-3-イル基、イソチアゾ� �ル-4-イル基、イソキサゾール-3-イル基、イ� �キサゾール-4-イル基、イミダゾール-2-イル� �、イミダゾール-4-イル基、イミダゾール-5-� �ル基、オキサゾール-2-イル基、オキサゾー� �-4-イル基、オキサゾール-5-イル基、チアゾ� �ル-2-イル基、チアゾール-4-イル基、チアゾ� �ル-5-イル基、1,2,4-トリアゾール-3-イル基、� �ェニル基、2-ピリジル基、3-ピリジル基、4-� �リジル基、2-ピリミジル基、4-ピリミジル基� ��5-ピリミジル基、1,2,4-トリアジン-3-イル基� �1,2,4-トリアジン-5-イル基、1,2,4-トリアジン-6 -イル基、ベンゾジオキソラン-3-イル基、ベ� �ゾフラン-2-イル基、ベンゾフラン-3-イル基� �ベンゾフラン-4-イル基、ベンゾフラン-5-イ� �基、ベンゾフラン-6-イル基、ベンゾフラン-7 -イル基、ベンゾチオフェン-2-イル基、ベン� �チオフェン-3-イル基、ベンゾチオフェン-4-� �ル基、ベンゾチオフェン-5-イル基、ベンゾ� �オフェン-6-イル基、ベンゾチオフェン-7-イ� �基、インドール-2-イル基、インドール-3-イ� �基、インドール-4-イル基、インドール-5-イ� �基、インドール-6-イル基、インドール-7-イ� �基、ベンゾチアゾール-2-イル基、ベンゾチ� �ゾール-4-イル基、ベンゾチアゾール-5-イル� �、ベンゾチアゾール-6-イル基、ベンゾチア� �ール-7-イル基、インダゾール-3-イル基、イ� �ダゾール-4-イル基、インダゾール-5-イル基� �インダゾール-6-イル基、インダゾール-7-イ� �基、ベンズイソキサゾール-3-イル基、ベン� �イソキサゾール-4-イル基、ベンズイソキサ� �ール-5-イル基、ベンズイソキサゾール-6-イ� �基、ベンズイソキサゾール-7-イル基、ナフ� �レン-1-イル基、ナフタレン-2-イル基、キノ� �ン-2-イル基、キノリン-3-イル基、キノリン-4 -イル基、キノリン-5-イル基、キノリン-6-イ� �基、キノリン-7-イル基、キノリン-8-イル基� �キノキサリニル基、キノキサリン-5-イル基� �キノキサリン-6-イル基、キナゾリニル基、� �ナゾリン-4-イル基、キナゾリン-5-イル基、� �ナゾリン-6-イル基、キナゾリン-7-イル基、� �ナゾリン-8-イル基、ベンゾオキサジン-5-イ� �基、ベンゾオキサジン-6-イル基、ベンゾオ� �サジン-7-イル基、ベンゾオキサジン-8-イル� �、ベンゾチアジン-5-イル基、ベンゾチアジ� �-6-イル基、ベンゾチアジン-7-イル基、ベン� �チアジン-8-イル基、1,3-ベンゾジオキソール- 4-イル基、1,3-ベンゾジオキソール-5-イル基、 1,3-ベンゾジオキソール-6-イル基、1,3-ベンゾ� ��オキソール-7-イル基、アントラセン-1-イル� ��を例示できる。特に、免疫グロブリンの分� ��または精製において良好な性能を示す点で� ��芳香族基としては、フェニル基、2-ピリジ� �基、3-ピリジル基あるいは4-ピリジル基が好� ��しい。

 Arで表される置換されていてもよい芳香� �基の置換基としては、特に制限はないが、� �ロゲン原子、置換されていてもよい炭素数1� ��ら6のアルキル基、置換されていてもよい炭 素数1から12のアルコキシ基、置換されていて もよい炭素数3から8のシクロアルコキシ基、� ��換されていてもよい炭素数3から6のアルケ� �ルオキシ基、置換されていてもよい炭素数3� ��ら6のアルキニルオキシ基、置換されていて もよい炭素数1から6のアシルオキシ基、置換� ��れていてもよい炭素数1から6のアルキルチ� �基、置換されていてもよい炭素数1から6のア ルキルスルフィニル基、置換されていてもよ い炭素数1から6のアルキルスルホニル基、置� ��されていてもよい炭素数1から12のアルコキ� ��カルボニル基、カルボキシル基、ニトロ基� ��置換されていてもよいアミノ基、水酸基又� ��シアノ基が好ましい。

 ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩� ��原子、臭素原子あるいはヨウ素原子を例示� ��ることができる。

 置換されていてもよい炭素数1から6のア� �キル基としては、直鎖状、分枝状もしくは� �状のいずれであってもよく、メチル基、エ� �ル基、シクロプロピル基、プロピル基、イ� �プロピル基、シクロプロピル基、ブチル基� �イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基� �ペンチル基、イソアミル基、ネオペンチル� �、2-ペンチル基、3-ペンチル基、2-メチルブ� �ル基、tert-ペンチル基、ヘキシル基、イソヘ キシル基、2-ヘキシル基、3-ヘキシル基を例� �することができる。また、これらの炭素数1� ��ら6のアルキル基はハロゲン原子、炭素数3� �ら8のシクロアルキル基、炭素数1から6のア� �コキシ基、炭素数1から6のアルコキシカルボ ニル基、カルボキシ基、アシル基、置換され ていてもよい芳香族基で1個以上置換されて� �てもよく、さらに具体的には2-クロロエチル 基、3-クロロプロピル基、ジフルオロメチル� ��、3-フルオロプロピル基、メトキシメチル� �、2-エトキシエチル基、シクロプロピルメチ ル基、シクロペンチルメチル基、シクロヘキ シルメチル基、2-メチルチオエチル基、2-エ� �ルチオエチル基、2-アリルチオエチル基、2-� ��ロパルギルチオエチル基、2-ベンジルチオ� �チル基、2-(2-クロロベンジル)チオエチル基� �2-(2,4-ジクロロベンジル)チオエチル基、2-メ� ��ルスルフィニルエチル基、2-メチルスルホ� �ルエチル基、エトキシメチル基、2-メトキシ エチル基、2-クロロエトキシメチル基、メト� ��シカルボニルメチル基、エトキシカルボニ� ��メチル基、1-メトキシカルボニルエチル基� �1-エトキシカルボニルエチル基、2-エトキシ� ��ルボニルエチル基、カルボキシメチル基、� ��セトニル基、1-アセチルエチル基、3-アセチ ルプロピル基、フェナシル基、4-クロロフェ� ��シル基、2,4-ジフルオロフェナシル基、4-メ� ��ルフェナシル基、4-イソプロピルフェナシ� �基、4-イソブチルフェナシル基、4-シクロヘ� ��シルフェナシル基、4-シアノフェナシル基� �4-ニトロフェナシル基、チエニル基、2-(チオ フェン-2-イル)エチル基、2-(チオフェン-3-イ� �)エチル基、フルフリル基、(5-メチルフラン- 2-イル)メチル基、(5-エチルフラン-2-イル)メ� �ル基、(5-クロロフラン-2-イル)メチル基、2-(5 -フルオロフラン-2-イル)エチル基、テトラヒ� ��ロフルフリル基、2-ピリジルメチル基、3-ピ リジルメチル基、4-ピリジルメチル基、2-(ピ� ��ジン-2-イル)エチル基、2-(ピリジン-3-イル)� �チル基、2-(ピリジン-4-イル)エチル基、3-(ピ� ��ジン-2-イル)プロピル基、3-(ピリジン-3-イル )プロピル基、3-(ピリジン-4-イル)プロピル基� ��例示することができる。

 置換されていてもよい炭素数1から12のア� ��コキシ基としては、直鎖状もしくは分枝状� ��いずれであってもよく、メトキシ基、エト� ��シ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオ� ��シ基、ブトキシ基、イソブチルオキシ基、s ec-ブチルオキシ基、tert-ブトキシ基、ペンチ� ��オキシ基、イソアミルオキシ基、ネオペン� ��ルオキシ基、2-ペンチルオキシ基、3-ペンチ ルオキシ基、tert-ペンチルオキシ基、ヘキシ� ��オキシ基、イソヘキシルオキシ基、2-ヘキ� �ルオキシ基、3-ヘキシルオキシ基、デセニル オキシ基を例示することができる。また、こ れらのアルコキシ基はハロゲン原子、炭素数 3から8のシクロアルキル基、炭素数1から6の� �ルコキシ基、炭素数1から6のアルコキシカル ボニル基、カルボキシ基、アシル基、置換さ れていてもよい芳香族基等で1個以上置換さ� �ていてもよく、さらに具体的には2-クロロエ トキシ基、3-クロロプロピルオキシ基、ジフ� ��オロメトキシ基、4-トリフルオロメトキシ� �、3-フルオロプロピルオキシ基、シクロプロ ピルメトキシ基、シクロペンチルメトキシ基 、シクロヘキシルメトキシ基、2-メチルチオ� ��トキシ基、2-エチルチオエトキシ基、2-アリ ルチオエトキシ基、2-プロパルギルチオエト� ��シ基、2-ベンジルチオエトキシ基、2-(2-クロ ロベンジル)チオエトキシ基、2-(2,4-ジクロロ� ��ンジル)チオエトキシ基、2-メチルスルフィ� ��ルエトキシ基、2-メチルスルホニルエトキ� �基、メトキシメトキシ基、エトキシメトキ� �基、2-メトキシエトキシ基、2-クロロエトキ� ��メトキシ基、メトキシカルボニルメトキシ� ��、エトキシカルボニルメトキシ基、1-メト� �シカルボニルエトキシ基、1-エトキシカルボ ニルエトキシ基、2-エトキシカルボニルエト� ��シ基、カルボキシメトキシ基、1-アセチル� �トキシ基、3-アセチルプロポキシ基、2-ピリ� ��ルメトキシ基、3-ピリジルメトキシ基、4-ピ リジルメトキシ基、2-(ピリジン-2-イル)エト� �シ基、2-(ピリジン-3-イル)エトキシ基、2-(ピ� ��ジン-4-イル)エトキシ基、3-(ピリジン-2-イル )プロポキシ基、3-(ピリジン-3-イル)プロポキ� ��基、ベンジルオキシ基を例示することがで� ��る。

 置換されていてもよい炭素数3から8のシク� �アルコキシ基としては、シクロプロピルオ� �シ基、シクロブチルオキシ基、シクロペン� �ルオキシ基、2-メチルシクロブチルオキシ基 、シクロヘキシルオキシ基、2-メチルシクロ� ��ンチルオキシ基、3-メチルシクロペンチル� �キシ基、4-メチルシクロペンチルオキシ基、 シクロオクチルオキシ基を例示することがで きる。
 置換されていてもよい炭素数3から6のアル� �ニルオキシ基としては、アリルオキシ基、2- メチル-2-プロペニルオキシ基、2-ブテニルオ� ��シ基、1-ブテン-3-イルオキシ基、3-ブテニル オキシ基、4-ペンテニルオキシ基、5-ヘキセ� �ルオキシ基を例示することができる。また� �これらの炭素数3から6のアルケニルオキシ基 はハロゲン原子等で置換されていてもよく、 3,3-ジフルオロアリルオキシ基、3,3-ジクロロ� ��リルオキシ基、3,3-ジブロモアリルオキシ基 を例示することができる。

 置換されていてもよい炭素数3から6のア� �キニルオキシ基としては、プロパルギルオ� �シ基、1-ブチン-3-イルオキシ基、2-ブチニル� ��キシ基、3-ブチニルオキシ基、2-ペンチニル オキシ基、3-ペンチニルオキシ基、4-ペンチ� �ルオキシ基、2-ヘキシニルオキシ基、3-ヘキ� ��ニルオキシ基、4-ヘキシニルオキシ基、5-ヘ キシニルオキシ基を例示することができる。 また、これらの置換されていてもよい炭素数 3から6のアルキニルオキシ基はハロゲン原子� ��で置換されていてもよく、4,4,4-トリフルオ� ��ブチン-2-イル基等を例示することができる� ��

 置換されていてもよい炭素数1から6のア� �ルオキシ基としては、アセトキシ基、プロ� �オニルオキシ基を例示することができる。� �た、これらの置換されていてもよいアシル� �キシ基はハロゲン原子等で置換されていて� �よく、トリフルオロアセトキシ基や2,2,2-ト� �フルオロプロピオニルオキシ基等を例示す� �ことができる。

 置換されていてもよい炭素数1から6のア� �キルチオ基としては、メチルチオ基、エチ� �チオ基、プロピルチオ基、イソプロピルチ� �基、ブチルチオ基、イソブチルチオ基、sec-� ��チルチオ基、ペンチルチオ基、イソアミル� ��オ基、ネオペンチルチオ基、2-ペンチルチ� �基、3-ペンチルチオ基、2-メチルブチルチオ� ��、ヘキシルチオ基、イソヘキシルチオ基、3 -メチルペンチルチオ基、2-メチルペンチルチ オ基を例示することができる。また、これら のアルキルチオ基はハロゲン原子、炭素数3� �ら8のシクロアルキル基等で一個以上置換さ� ��ていてもよく、さらに具体的には2-クロロ� �チルチオ基、3-クロロプロピルチオ基、ジフ ルオロメチルチオ基、3-フルオロプロピルチ� ��基、シクロプロピルメチルチオ基、シクロ� ��ンチルメチルチオ基、シクロヘキシルメチ� ��チオ基を例示することができる。

 置換されていてもよい炭素数1から6のア� �キルスルフィニル基としては、メチルスル� �ィニル基、エチルスルフィニル基、プロピ� �スルフィニル基、イソプロピルスルフィニ� �基、ブチルスルフィニル基、イソブチルス� �フィニル基、sec-ブチルスルフィニル基、ペ� ��チルスルフィニル基、イソアミルスルフィ� ��ル基、ネオペンチルスルフィニル基、2-ペ� �チルスルフィニル基、3-ペンチルスルフィニ ル基、2-メチルブチルスルフィニル基、ヘキ� ��ルスルフィニル基、イソヘキシルスルフィ� ��ル基、3-メチルペンチルスルフィニル基、2- メチルペンチルスルフィニル基を例示するこ とができる。また、これらのアルキルスルフ ィニル基はハロゲン原子、炭素数3から8のシ� ��ロアルキル基等で一個以上置換されていて� ��よく、さらに具体的には2-クロロエチルス� �フィニル基、3-クロロプロピルスルフィニル 基、ジフルオロメチルスルフィニル基、3-フ� ��オロプロピルスルフィニル基、シクロプロ� ��ルメチルスルフィニル基、シクロペンチル� ��チルスルフィニル基、シクロヘキシルメチ� ��スルフィニル基を例示することができる。

 置換されていてもよい炭素数1から6のア� �キルスルホニル基としては、メチルスルホ� �ル基、エチルスルホニル基、プロピルスル� �ニル基、イソプロピルスルホニル基、ブチ� �スルホニル基、イソブチルスルホニル基、se c-ブチルスルホニル基、ペンチルスルホニル� ��、イソアミルスルホニル基、ネオペンチル� ��ルホニル基、2-ペンチルスルホニル基、3-ペ ンチルスルホニル基、2-メチルブチルスルホ� ��ル基、ヘキシルスルホニル基、イソヘキシ� ��スルホニル基、3-メチルペンチルスルホニ� �基、2-メチルペンチルスルホニル基を例示す ることができる。また、これらのアルキルス ルホニル基はハロゲン原子、炭素数3から8の� ��クロアルキル基で一個以上置換されていて� ��よく、さらに具体的には2-クロロエチルス� �ホニル基、3-クロロプロピルスルホニル基、 ジフルオロメチルスルホニル基、3-フルオロ� ��ロピルスルホニル基、シクロプロピルメチ� ��スルホニル基、シクロペンチルメチルスル� ��ニル基、シクロヘキシルメチルスルホニル� ��を例示することができる。

 置換されていてもよい炭素数1から12のア� ��コキシカルボニル基としては、メトキシカ� ��ボニル基、エトキシカルボニル基、プロポ� ��シカルボニル基、ブトキシカルボニル基、� ��キシルオキシカルボニル基、ドデシルオキ� ��カルボニル基、ベンジルオキシカルボニル� ��、tert-ブトキシカルボニル基を例示するこ� �ができる。また、これらのアルコキシカル� �ニル基はハロゲン原子等で一個以上置換さ� �ていてもよく、さらに具体的にはトリフル� �ロメトキシカルボニル基、2,2,2-トリフルオ� �エトキシカルボニル基等を例示することが� �きる。

 置換されていてもよいアミノ基としては� ��メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチ� ��アミノ基、N-エチル-N-メチルアミノ基、ジ� �チルアミノ基、N-メチル-N-プロピルアミノ基 、N-エチル-N-プロピルアミノ基、2,2,2-トリフ� ��オロエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基� ��イソプロピルアミノ基、N-メチル-N-イソプ� �ピルアミノ基、ブチルアミノ基、N-ブチル-N- メチルアミノ基、イソブチルアミノ基、sec-� �チルアミノ基、ペンチルアミノ基、イソア� �ルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、2-ペン チルアミノ基、3-ペンチルアミノ基、2-メチ� �ブチルアミノ基、ヘキシルアミノ基、イソ� �キシルアミノ基、4-メチルペンチルアミノ基 、ベンゼンスルホニルアミノ基、N-ベンゼン� ��ルホニル-N-メチルアミノ基、p-トルエンス� �ホニルアミノ基、4-クロロベンゼンスルホニ ルアミノ基、4-ニトロベンゼンスルホニルア� ��ノ基、メチルスルホニルアミノ基、クロロ� ��チルスルホニルアミノ基、トリフルオロメ� ��ルスルホニルアミノ基、N-メチルスルホニ� �-N-メチルアミノ基、N-メチルスルホニル-N-エ チルアミノ基、N-メチルスルホニル-N-プロピ� ��アミノ基、エチルスルホニルアミノ基、N-� �チルスルホニル-N-メチルアミノ基、N-エチル スルホニル-N-エチルアミノ基、メトキシカル ボニルアミノ基、エトキシカルボニルアミノ 基を例示することができる。

 Arで表される、置換されていてもよい芳香� �基のうち置換基を有する芳香族基としては� �特に制限はないが、5-ブロモフラン-2-イル基 、5-メチルフラン-2-イル基、5-クロロチエニ� �基、5-ブロモチエニル基、5-メチルチエニル� ��、5-メトキシチエニル基、5-エトキシチエニ ル基、5-メチルチオフェン-3-イル基、5-メト� �シチオフェン-3-イル基、5-エトキシチオフェ ン-3-イル基、1-メチルピロール-2-イル基、1-� �チルピロール-3-イル基、1-エチルピラゾール -3-イル基、3-エトキシ-1-メチルピラゾール-2-� ��ル基、1-エチル-4-メトキシピラゾール-3-イ� �基、5-メトキシイソチアゾール-3-イル基、1-� ��チルイミダゾール-2-イル基、1-メチルイミ� �ゾール-4-イル基、1-メチルイミダゾール-5-イ ル基、3-メトキシチアゾール-2-イル基、4-メ� �キシチアゾール-2-イル基、2-フルオロフェニ ル基、3-フルオロフェニル基、4-フルオロフ� �ニル基、2,3-ジフルオロフェニル基、3,5-ジフ ルオロフェニル基、3,4,5-トリフルオロフェニ ル基、2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェニル基、3- フルオロ-4-メチルフェニル基、4-トリフルオ� ��メトキシフェニル基、2-クロロフェニル基� �3-クロロフェニル基、4-クロロフェニル基、4 -クロロ-3-メチルフェニル基、4-クロロ-3-エチ ルフェニル基、4-クロロ-3-メトキシフェニル� ��、4-クロロ-3-エトキシフェニル基、2,3-ジク� ��ロフェニル基、3,5-ジクロロフェニル基、3,4 ,5-トリクロロフェニル基、3-トリフルオロメ� ��ルフェニル基、4-トリフルオロメチルフェ� �ル基、3-ブロモフェニル基、4-ブロモフェニ� ��基、4-ブロモ-3-メチルフェニル基、4-ブロモ -3-エチルフェニル基、4-ブロモ-3-メトキシフ� ��ニル基、4-ブロモ-3-エトキシフェニル基、3, 5-ジブロモ-4-ヒドロキシフェニル基、3-ヨー� �フェニル基、4-ヨードフェニル基、4-ヨード- 3-メチルフェニル基、4-ヨード-3-エチルフェ� �ル基、4-ヨード-3-メトキシフェニル基、4-ヨ� ��ド-3-エトキシフェニル基、2-メチルフェニ� �基、3-メチルフェニル基、4-メチルフェニル� ��、3,4-ジメチルフェニル基、3,4,5-トリメチル フェニル基、3-ヒドロキシ-4-メチルフェニル� ��、2-トリフルオロフェニルメチルフェニル� �、3-トリフルオロフェニルメチルフェニル基 、4-トリフルオロフェニルメチルフェニル基� ��4-メトキシメチルフェニル基、3,4-ジエトキ� ��フェニル基、3-エチル-4-メチルフェニル基� �4-エチル-3-メチルフェニル基、4-エチルフェ� ��ル基、3,4-ジエチルフェニル基、4-プロピル� ��ェニル基、4-イソプロピルフェニル基、3-ブ チルフェニル基、4-ブチルフェニル基、4-イ� �ブチルフェニル基、4-(sec-ブチル)フェニル基 、4-(tert-ブチル)フェニル基、4-ペンチルフェ� ��ル基、4-イソアミルフェニル基、4-ネオペン チルフェニル基、4-(2-ペンチル)フェニル基、 4-(3-ペンチル)フェニル基、4-(2-メチルブチル) フェニル基、4-(tert-ペンチル)フェニル基、4-� ��キシルフェニル基、4-イソヘキシルフェニ� �基、4-(2-クロロエチル)フェニル基、4-(3-クロ ロプロピル)フェニル基、4-(ジフルオロメチ� �)フェニル基、4-(3-フルオロプロピル)フェニ� ��基、4-メトキシメチルフェニル基、4-エトキ シメチルフェニル基、4-シクロプロピルメチ� ��フェニル基、4-シクロペンチルメチルフェ� �ル基、シクロヘキシルメチルフェニル基、4- (2-メチルチオエチル)フェニル基、4-(2-エチル チオエチル)フェニル基、4-(2-アリルチオエチ ル)フェニル基、4-(2-プロパルギルチオエチル )フェニル基、4-(2-ベンジルチオエチル)フェ� �ル基、3-メトキシフェニル基、3-メトキシ-4-� ��チルフェニル基、4-エチル-3-メトキシフェ� �ル基、3-メトキシ-4-プロピルフェニル基、4-� ��トキシフェニル基、4-メトキシ-3-メトキシ� �ェニル基、3,4-ジメトキシフェニル基、3-エ� �キシ-4-メトキシフェニル基、4-エトキシ-3-メ トキシフェニル基、4-イソプロピルオキシ-3-� ��トキシフェニル基、3-イソプロピルオキシ-4 -メトキシフェニル基、3-エトキシフェニル基 、4-エトキシフェニル基、4-エトキシ-3-メチ� �フェニル基、4-エトキシ-3-エチルフェニル基 、4-エトキシ-3-プロピルフェニル基、4-エト� �シ-3-イソプロピルフェニル基、4-プロピルオ キシフェニル基、4-イソプロピルオキシフェ� ��ル基、4-ブトキシフェニル基、4-イソブチル オキシフェニル基、4-(sec-ブチルオキシ)フェ� ��ル基、3-(2-クロロエトキシ)フェニル基、3-(2 -クロロエトキシ)フェニル基、4-(2-クロロエ� �キシ)フェニル基、3-(3-クロロプロピルオキ� �)フェニル基、4-(3-クロロプロピルオキシ)フ� ��ニル基、3-ジフルオロメトキシフェニル基� �4-ジフルオロメトキシフェニル基、4-(3-フル� ��ロプロピルオキシ)フェニル基、4-シクロプ� ��ピルメトキシフェニル基、4-シクロペンチ� �メトキシ基、4-シクロヘキシルメトキシ基、 3-シクロプロピルオキシフェニル基、4-シク� �プロピルオキシフェニル基、4-シクロプロピ ルオキシ-3-メトキシフェニル基、4-シクロプ� ��ピルオキシ-3-メチルフェニル基、4-シクロ� �チルオキシフェニル基、4-シクロペンチルオ キシフェニル基、4-(2-メチルシクロブチルオ� ��シ)フェニル基、4-シクロヘキシルオキシフ� ��ニル基、4-アリルオキシフェニル基、4-(3,3-� ��クロロアリルオキシ)フェニル基、4-プロパ� ��ギルオキシフェニル基、3-メチル-4-プロパ� �ギルオキシフェニル基、3-エチル-4-プロパル ギルオキシフェニル基、3-メトキシ-4-プロパ� ��ギルオキシフェニル基、3-エトキシ-4-プロ� �ルギルオキシフェニル基、3-プロポキシ-4-プ ロパルギルオキシフェニル基、4-(1-ブチン-3-� ��ルオキシ)フェニル基、4-(2-ブチニルオキシ) フェニル基、3-メチルチオフェニル基、4-メ� �ルチオフェニル基、4-メチル-3-メチルチオフ ェニル基、3-メチル-4-メチルチオフェニル基� ��4-メトキシ-3-メチルチオフェニル基、3-エト キシ-4-メチルチオフェニル基、4-エトキシ-3-� ��チルチオフェニル基、3-プロポキシ-4-メチ� �チオフェニル基、4-エチルチオフェニル基、 3-プロピルチオフェニル基、4-イソプロピル� �オフェニル基、4-ブチルチオフェニル基、4-� ��ソブチルチオフェニル基、2-(sec-ブチルチオ )フェニル基、2-ペンチルチオフェニル基、2-� ��ソアミルチオフェニル基、4-ネオペンチル� �オフェニル基、4-(2-クロロエチルチオ)フェ� �ル基、3-(3-クロロプロピルチオ)フェニル基� �ジフルオロメチルチオフェニル基、3-アセト キシフェニル基、4-アセトキシフェニル基、3 -メチルスルフィニルフェニル基、4-メチルス ルフィニルフェニル基、4-メトキシ-3-メチル� ��ルフィニルフェニル基、3-メトキシ-4-メチ� �スルフィニルフェニル基、4-エトキシ-3-メチ ルスルフィニルフェニル基、3-エトキシ-4-メ� ��ルスルフィニルフェニル基、4-メチル-3-メ� �ルスルフィニルフェニル基、3-エチル-4-メチ ルスルフィニルフェニル基、4-(2-クロロエチ� ��スルフィニル)フェニル基、4-(3-クロロプロ� ��ルスルフィニル)フェニル基、4-(ジフルオロ メチルスルフィニル)フェニル基、3-メチルス ルホニルフェニル基、4-メチルスルホニルフ� ��ニル基、4-メチル-3-メチルスルホニルフェ� �ル基、4-エチル-3-メチルスルホニルフェニル 基、4-メトキシ-3-メチルスルホニルフェニル� ��、4-エトキシ-3-メチルスルホニルフェニル� �、3-メトキシ-4-メチルスルホニルフェニル基 、3-エトキシ-4-メチルスルホニルフェニル基� ��エチルスルホニルフェニル基、プロピルス� ��ホニルフェニル基、イソプロピルスルホニ� ��フェニル基、ブチルスルホニルフェニル基� ��2-クロロエチルスルホニルフェニル基、3-ク ロロプロピルスルホニルフェニル基、ジフル オロメチルスルホニルフェニル基、4-カルボ� ��シフェニル基、4-メトキシカルボニルフェ� �ル基、4-エトキシカルボニルフェニル基、3-� ��チルアミノフェニル基、4-メチルアミノフ� �ニル基、4-メトキシ-3-メチルアミノフェニル 基、3-メトキシ-4-メチルアミノフェニル基、4 -エトキシ-3-メチルアミノフェニル基、3-エト キシ-4-メチルアミノフェニル基、4-メチル-3-� ��チルアミノフェニル基、3-メチル-4-メチル� �ミノフェニル基、4-エチル-3-メチルアミノフ ェニル基、3-ジメチルアミノフェニル基、4-� �メチルアミノフェニル基、4-メトキシ-3-ジメ チルアミノフェニル基、3-メトキシ-4-ジメチ� ��アミノフェニル基、4-エトキシ-3-ジメチル� �ミノフェニル基、3-エトキシ-4-ジメチルアミ ノフェニル基、4-メチル-3-ジメチルアミノフ� ��ニル基、3-メチル-4-ジメチルアミノフェニ� �基、4-エチル-3-ジメチルアミノフェニル基、 3-メチル-4-ジメチルアミノフェニル基、3-(N-� �チル-N-メチルアミノ)フェニル基、4-(N-エチ� �-N-メチルアミノ)フェニル基、4-メトキシ-3-(N -エチル-N-メチルアミノ)フェニル基、3-メト� �シ-4-(N-エチル-N-メチルアミノ)フェニル基、4 -エトキシ-3-(N-エチル-N-メチルアミノ)フェニ� ��基、3-エトキシ-4-(N-エチル-N-メチルアミノ)� ��ェニル基、4-メチル-3-(N-エチル-N-メチルア� �ノ)フェニル基、3-メチル-4-(N-エチル-N-メチ� �アミノ)フェニル基、4-エチル-3-(N-エチル-N-� �チルアミノ)フェニル基、3-メチル-4-(N-エチ� �-N-メチルアミノ)フェニル基、3-ジエチルア� �ノフェニル基、4-ジエチルアミノフェニル基 、4-メトキシ-3-ジエチルアミノフェニル基、3 -メトキシ-4-ジエチルアミノフェニル基、4-エ トキシ-3-ジエチルアミノフェニル基、3-エト� ��シ-4-ジエチルアミノフェニル基、4-メチル-3 -ジエチルアミノフェニル基、3-メチル-4-ジエ チルアミノフェニル基、4-エチル-3-ジエチル� ��ミノフェニル基、4-メチルスルホニルアミ� �フェニル基、4-トリフルオロメチルスルホニ ルアミノフェニル基、4-アセチルアミノフェ� ��ル基、2-ヒドロキシフェニル基、3-ヒドロキ シフェニル基、4-ヒドロキシフェニル基、3-� �ドロキシ-4-メチルフェニル基、3-ヒドロキシ -4-エチルフェニル基、3-ヒドロキシ-4-メトキ� ��フェニル基、4-ヒドロキシ-3-メチルフェニ� �基、4-ヒドロキシ-3-エチルフェニル基、4-ヒ� ��ロキシ-3-メトキシフェニル基、2-シアノフ� �ニル基、3-シアノフェニル基、4-シアノフェ� ��ル基、2-ニトロフェニル基、3-ニトロフェニ ル基、3-ニトロ-4-メチルフェニル基、4-ニト� �フェニル基、5-クロロピリジン-2-イル基、5-� ��チルピリジン-2-イル基、5-エチルピリジン-2 -イル基、5-メトキシピリジン-2-イル基、5-エ� ��キシピリジン-2-イル基、2,3-ジメチルピリジ ン-6-イル基、2,3-ジメトキシピリジン-6-イル� �、2-クロロピリジン-5-イル基、2-メチルピリ� ��ン-5-イル基、2-エチルピリジン-5-イル基、2- メトキシピリジン-5-イル基、2-エトキシピリ� ��ン-5-イル基、2,3-ジメチルピリジン-5-イル基 、2-メチルピリジン-4-イル基、2-エチルピリ� �ン-4-イル基、2-メトキシピリジン-4-イル基、 2-エトキシピリジン-4-イル基、5-メチルピリ� �ジン-2-イル基、5-エチルピリミジン-2-イル基 、2-エトキシピリジン-5-イル基、
2,3-ジメチルピリジン-5-イル基、2-メチルピリ ジン-4-イル基、2-エチルピリジン-4-イル基、2 -メトキシピリジン-4-イル基、2-エトキシピリ ジン-4-イル基、5-クロロピリミジン-2-イル基� ��5-ブロモピリミジン-2-イル基、5-メトキシピ リミジン-2-イル基、1-メチルインドール-2-イ� ��基、等を例示することができる。

 特に免疫グロブリンの分析または精製に� ��いて良好な性能を示す点で、Arとしては4-メ チルフェニル基、4-エチルフェニル基、3,4-ジ メチルフェニル基、3-エチル-4-メチルフェニ� ��基、4-エチル-3-メチルフェニル基、4-メトキ シフェニル基、4-エトキシフェニル基、3,4-ジ メトキシフェニル基、3,4-ジエトキシフェニ� �基、3-エトキシ-4-メトキシフェニル基、4-エ� ��キシ-3-メトキシフェニル基、4-メトキシ-3-� �チルフェニル基、4-メチル-3-エトキシフェニ ル基、4-ジメチルアミノフェニル基、2-メト� �シピリジン-5-イル基、2-エトキシピリジン-5- イル基、2,3-ジメチルピリジン-5-イル基、4-ピ リジル基、2-メチルピリジン-4-イル基、2-エ� �ルピリジン-4-イル基、2-メトキシピリジン-4- イル基、2-エトキシピリジン-4-イル基、2-ク� �ロピリジン-5-イル基、3-メトキシ-4-メチルフ ェニル基、3-ヒドロキシ-4-メチルフェニル基� ��4-メチルチオフェニル基のいずれかが好ま� �い。

 Yで表される脱離基としては、塩素原子、 臭素原子、ヨウ素原子、メチルスルホニルオ キシ基、トシル基等を挙げることができる。 目的物の収率が良い点で、臭素原子が好まし い。

 Mで表されるマトリックスの材質としては 特に限定はなく、例えば、架橋結合アルブミ ンなどのポリペプチドまたはタンパク質、ア ガロース、アルギネート、カラゲナン、キチ ン、セルロース、デキストリン、デキストラ ン、澱粉などの多糖、ポリアクリルアミド、 ポリスチレン、ポリアクロレイン、ポリビニ ルアルコール、ポリメタクリレート、ポリ(2- ヒドロキシエチルメタクリレート)、ポリウ� �タンなどの合成高分子、シリカ、ガラス、� �孔質珪藻土、アルミナ、ジルコニア、酸化� �または他の金属酸化物などの無機化合物、� �記物質を2つまたはそれ以上任意に組み合わ� ��て構成される共重合体などのマトリックス� ��あげることができる。さらにそれらは、液� ��分配で使用されるデキストラン、ポリエチ� ��ングリコール、ポリビニルアルコールまた� ��加水分解澱粉などの水溶性の高分子を包含� ��るマトリックス、またはエマルジョンを形� ��するのに使用されるペルフルオロデカリン� ��どの化合物を包含するマトリックスも含ま� ��る。特に、本発明のチアゾール誘導体固定� ��マトリックス製造におけるマトリックスの� ��質としては、トヨパール(商品名)(東ソー社� ��)などのビニルポリマー、アガロース、キト サン、デキストラン、セルロース、シリカ、 ポリスチレンが好ましい。

 ここでいうビニルポリマーとは、ビニル基� ��どを持ったモノマーをビニル重合して得ら� ��たものを指し、モノマーとしてはメタクリ� ��酸メチル、2-ヒドロキシエチルメタクリレ� �ト、アクリルアミド、ビニルエステルなど� �含まれる。さらに、ここでいうビニルポリ� �ーとしては前記モノマーを2種類以上用いた� ��重合体や、架橋したものなどが含まれる。
 また、マトリックスは、粒状物または非粒� ��物、水性溶媒に対して可溶性または不溶性� ��多孔性または非多孔性、いずれであっても� ��い。

 nについては、1から12の整数から適宜選択 することができるが、特に本発明のチアゾー ル誘導体固定化マトリックスの製造に用いる チアゾール誘導体としては、nが3,4又は5が好� ��しい。

 次に、本発明のチアゾール誘導体固定化� ��トリックスの製造に用いる本発明のチアゾ� ��ル誘導体の製造方法を詳細に説明する。

 [製造方法1]

(式中、R ¹ 、R ² 、Ar及びnは前記と同じ意味を表し、R ^3a はアミノ基又はそのアンモニウム塩を表し、 Yは脱離基を表す。)
 工程1はフタルイミド誘導体(2)をアシルチオ ウレア誘導体(3)と反応させ、チアゾール誘導 体(1a)を合成する方法である。フタルイミド� �導体(2)は非特許文献2や特許文献7等を参考に 合成することができる。

 工程1の反応では、反応は溶媒中で行なう ことが好ましく、反応に害を及ぼさない溶媒 であれば使用することができる。溶媒として は、例えば、ジエチルエーテル、テトラヒド ロフラン(以下THF)、1,2-ジメトキシエタン(以� �DME)、1,4-ジオキサンなどのエーテル系溶媒、 アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン 系溶媒、酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエス テル系溶媒、アセトニトリル、プロピオニト リルなどのニトリル類、ベンゼン、トルエン 、キシレン、クロロベンゼンなどの芳香族炭 化水素系溶媒、N,N-ジメチルホルムアミド(以� ��DMF)、N-メチルピロリドン等のアミド系溶媒� ��メタノール、エタノール等のアルコール系� ��媒、ジメチルスルホキシド(以下DMSO)、水あ� ��いはこれらの混合溶媒を用いることができ� ��。収率が良い点でDMFを用いるのが好ましい� ��反応温度については特に制限はないが、0℃ から150℃の範囲から適宜選ばれた温度で反応 させることにより目的物を得ることができ、 収率が良い点で60℃から150℃の範囲で反応さ� ��るのが好ましい。本工程では、塩基存在下� ��行なうこともでき、塩基としては、水素化� ��トリウム、ナトリウムアミド、炭酸ナトリ� ��ム、炭酸カリウム、ナトリウムメトキシド� ��ナトリウムエトキシド、カリウム-tert-ブト� ��シド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム� ��どのアルカリ金属塩基、トリエチルアミン� ��トリブチルアミン、N-メチルモルホリン、� �リジン、ジメチルアニリンなどの有機アミ� �類を用いることができる。塩基の使用量は� �に制限はないが、反応基質に対して等量以� �用いて反応を実施することにより、収率良� �目的物を得ることができる。反応終了後は� �通常の後処理操作により目的物を得ること� �できるが、必要であればカラムクロマトグ� �フィーあるいは再結晶などの方法により精� �することもできる。

 工程2はチアゾール誘導体(1a)を塩基で処� �し、チアゾール誘導体(1’)を製造する方法� �ある。塩基としては、水素化ナトリウム、� �トリウムアミド、炭酸ナトリウム、炭酸カ� �ウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウム� �トキシド、カリウム-tert-ブトキシド、水酸� �ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカ� �金属塩基、メチルアミン、エチルアミン、� �メチルアミンなどの有機アミン類、ヒドラ� �ン類を用いることができる。収率が良い点� �ヒドラジンあるいはメチルアミンが好まし� �。塩基の使用量は反応基質に対して好まし� �は2等量以上用いて反応を実施することによ� ��、収率良く目的物を得ることができる。本� ��応では、反応は溶媒中で行なうことが好ま� ��く、反応に害を及ぼさない溶媒であれば使� ��することができる。溶媒としては、例えば� ��ジエチルエーテル、THF、DME、ジオキサンな� ��のエーテル系溶媒、アセトン、メチルエチ� ��ケトンなどのケトン系溶媒、酢酸エチル、� ��酸ブチルなどのエステル系溶媒、アセトニ� ��リル、プロピオニトリルなどのニトリル類� ��ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロベ� ��ゼンなどの芳香族炭化水素系溶媒、DMF、N-� �チルピロリドンなどのアミド系溶媒、メタ� �ール、エタノール、イソプロピルアルコー� �などのアルコール系溶媒、DMSO、水あるいは� ��れらの混合溶媒を用いることができる。収� ��が良い点や後処理が簡便である点でメタノ� ��ルやエタノールなどのアルコール系溶媒を� ��いることが好ましい。反応温度については� ��に制限はないが、0℃から150℃の範囲から適 宜選ばれた温度で反応させることにより目的 物を得ることができる。反応終了後は、通常 の後処理操作により目的物を得ることができ るが、必要であればカラムクロマトグラフィ ーあるいは再結晶などの方法により精製する こともできる。また、反応終了後、酸で処理 しアンモニウム塩として単離することもでき る。反応に害を及ぼさない酸であれば使用す ることができ、例えば、塩酸、臭化水素酸、 フッ酸、硝酸、硫酸、リン酸などの無機酸、 メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ト リフルオロ酢酸などの有機酸を用いることが できるが、目的物の単離が容易であることか ら塩酸を用いるのが好ましい。

 [製造方法2]

(式中、R ¹ 、R ² 、Ar及びnは前記と同じ意味を表し、Wはハロ� �ン原子を表す。)
 製造方法2は、2-置換アミノチアゾール誘導� ��(4)と酸ハロゲン化物(5)を反応させ、チアゾ� ��ル誘導体(1a)を製造する方法である。当該方 法の反応では、反応は溶媒中で行なうことが 好ましく、反応に害を及ぼさない溶媒であれ ば使用することができる。溶媒としては、例 えば、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-� �クロロエタン等のハロゲン系溶媒、ジエチ� �エーテル、THF、DME、ジオキサン等のエーテ� �系溶媒、アセトン、メチルエチルケトン等� �ケトン系溶媒、酢酸エチル、酢酸ブチル等� �エステル系溶媒、アセトニトリル、プロピ� �ニトリル等のニトリル類、ベンゼン、トル� �ン、キシレン、クロロベンゼン等の芳香族� �化水素系溶媒、DMF、N-メチルピロリドン等の アミド系溶媒、DMSO、水あるいはこれらの混� �溶媒を用いることができる。収率が良い点� �ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロ� ��エタン等のハロゲン系溶媒を用いるのが好� ��しい。反応温度については特に制限はない� ��、0℃から150℃の範囲から適宜選ばれた温度 で反応させることにより目的物を得ることが でき、収率が良い点で0℃から100℃の範囲で� �応させるのが好ましい。本工程では、塩基� �在下に行なうこともでき、塩基としては、� �素化ナトリウム、ナトリウムアミド、炭酸� �トリウム、炭酸カリウム、ナトリウムメト� �シド、ナトリウムエトキシド、カリウム-tert -ブトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カ� �ウム等のアルカリ金属塩基、トリエチルア� �ン、トリブチルアミン、N-メチルモルホリン 、ピリジン、ジメチルアニリン等の有機アミ ン類を用いることができる。塩基の使用量は 特に制限はないが、反応基質に対して等量以 上用いて反応を実施することにより、収率良 く目的物を得ることができる。反応終了後は 、通常の後処理操作により目的物を得ること ができるが、必要であればカラムクロマトグ ラフィーあるいは再結晶等により精製するこ ともできる。当該方法で合成されたチアゾー ル誘導体(1a)は、製造方法1の工程2を経由する ことによって、チアゾール誘導体(1’)へと導 くことができる。

 次に、本発明のチアゾール誘導体固定化� ��トリックスの製造方法を詳細に説明する。

 [製造方法3]

(式中、R ¹ 、R ² 、R ^3a 、M、Ar及びnは前記と同じ意味を表す。)
 製造方法3は上記工程にて製造される新規な チアゾール誘導体(1’)と活性化基(活性化基� �は、アミノ基あるいはアンモニウム塩と容� �に反応できる官能基のことである。例えば� �スクシンイミドオキシカルボニル基、ホル� �ル基、カルボキシル基、2,2,2-トリフルオロ� �チルスルホニル基(トレシル基)、塩化スルホ ニル基、トシル基、ビニルスルホニル基、及 びエポキシ基を挙げることができる。)含有� �トリックスとを反応させてチアゾール誘導� �固定化マトリックス(6)を製造する方法であ� �。なお、当該方法で用いる活性化基含有マ� �リックスの活性化基としては、スクシンイ� �ドオキシカルボニル基、ホルミル基、2,2,2-� �リフルオロエチルスルホニル基(トレシル基) 、エポキシ基、又はカルボキシル基が特に好 ましい。また、当該方法で用いる活性化基含 有マトリックスは、活性化基を有しないマト リックスから周知の方法で活性化基を付加す ることで調製しても良い。また、HiTrap NHS-act ivated HP(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエン ス社製)、エポキシトヨパール(商品名)、ホル ミルトヨパール(商品名)、トレシルトヨパー� ��(商品名)、カルボキシトヨパール(商品名)(� �上東ソー社製)、活性化キトパールK-66(商品� �)ゲル(富士紡ホールディングス社製)、BIOACT  EPO(商品名)ゲル(昭和電工社製)、POROS-EP(商品� �)ゲル(アプライドバイオシステムズ社製)、� �ルファインホルミル(商品名)ゲル(チッソ社� �)、Profinity Epoxide(商品名)ゲル(バイオラッド� ��製)、M.S.GEL Epoxy-D-50-1000AW(商品名、AGCエスア イテック社製)などのリガンド固定化用担体� �して市販されているものをそのまま用いて� �良い。

 本反応では、中性あるいは塩基性条件下� ��て反応させることにより容易に目的物を得� ��ことができる。特に塩基性条件下にて反応� ��行なうことにより、チアゾール誘導体の固� ��化率の高いマトリックスを得ることができ� ��。塩基としては、水素化ナトリウム、ナト� ��ウムアミド、炭酸ナトリウム、炭酸カリウ� ��、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエト� ��シド、カリウム-tert-ブトキシド、水酸化ナ� ��リウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金� ��塩基、トリエチルアミン、トリブチルアミ� ��、N-メチルモルホリン、ピリジン、ジメチ� �アニリンなどの有機アミン類を用いること� �できる。塩基の使用量は特に制限はないが� �反応基質に対して等モル以上用いて反応を� �施することにより、目的とするチアゾール� �導体の固定化比率の高いマトリックスを得� �ことができる。また、溶液のpHを保つために 緩衝液を加えて反応を行なうこともできる。 反応は溶媒中で行なうことが好ましく、反応 に害を及ぼさない溶媒であれば使用すること ができる。溶媒としては、例えば、ジエチル エーテル、THF、DME、ジオキサンなどのエーテ ル系溶媒、アセトン、エチルメチルケトンな どのケトン系溶媒、酢酸エチル、酢酸ブチル などのエステル系溶媒、アセトニトリル、プ ロピオニトリルなどのニトリル類、ベンゼン 、トルエン、キシレン、クロロベンゼンなど の芳香族炭化水素系溶媒、DMF、N-メチルピロ� ��ドンなどのアミド系溶媒、DMSO、水あるいは これらの混合溶媒を用いることができる。反 応温度については特に制限はないが、0℃か� �150℃の範囲から適宜選ばれた温度で反応さ� �ることにより、目的とするチアゾール誘導� �固定化マトリックスを得ることができる。� �トリックス上のチアゾール誘導体の固定化� �は、吸光度分析、高速液体クロマトグラフ� �ー、元素分析などの分析法を単独あるいは� �み合わせて用いることにより測定できる。

 次に、本発明のチアゾール誘導体固定化マ� ��リックスを用いてタンパク質を分析、分離� ��または単離、精製する方法について説明す� ��。
 製造方法3によって得られたチアゾール誘導 体固定化マトリックスをカラム管に充填し、 溶離液として緩衝液、金属塩の水溶液、アミ ノ酸溶液、アルコール溶液などの溶液を通液 し、タンパク質を分析や分離、及び単離や精 製を行なうことができる。この方法で分析、 分離、または単離、精製することができるタ ンパク質としては、血漿タンパク質成分や乳 タンパク質成分をあげることができ、天然に 存在するものでは血漿中の免疫グロブリン、 血清アルブミン、血液凝固因子、ラクトアル ブミン、ラクトフェリンを例示できる。また 遺伝子組換えタンパク質では前記に加えて、 天然には微量しか存在しない、あるいは人工 的に設計されたペプチドホルモン、インター フェロン、インターロイキン、成長因子、成 長抑制因子、ワクチンを例示できる。特に本 発明のチアゾール誘導体固定化マトリックス は、免疫グロブリンの精製に好適である。通 液する緩衝液としては、リン酸緩衝液、クエ ン酸緩衝液、Tris、PIPES、ACES、Cholamine、BES、MO PS、TES、HEPESを例示でき、金属塩としては硫� �ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸リチウム� �硫酸マグネシウム、硫酸アンモニウム、ク� �ン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、塩化� �トリウム、塩化カリウムを例示でき、アミ� �酸としてはグリシン、アルギニン、ベータ� �ラニン、ガンマアミノ酪酸を例示でき、ア� �コールとしてはエタノール、イソプロピル� �ルコール、グリセロール、エチレングリコ� �ルを例示でき、これらを混合溶媒として用� �ることもできる。pHは3から11の範囲内で目的 とするタンパク質を分離、単離または精製す ることができるが、pHは5から9の範囲内で精� �することが好ましい。また、AKTAprime plus(商� ��名)(GEヘルスケアバイオサイエンス社製)な� �のクロマトグラフィー装置を使用して、タ� �パク質を分析、分離、または単離、精製す� �こともできる。製造方法3によって得られた� ��アゾール誘導体固定化マトリックスを用い� ��免疫グロブリン、またはこれらの類縁体、� ��ラグメント、融合体を分析または精製する� ��合は、硫酸ナトリウムや硫酸アンモニウム� ��含むリン酸緩衝液を通液し、pHは5から9の範 囲で、疎水性相互作用を利用したクロマトグ ラフィーを実施することが好ましい。ここで いう免疫グロブリンの類縁体とは免疫グロブ リンの構造や機能が少なくとも部分的に保持 された天然あるいは人工的に作られたタンパ ク質あるいはタンパク質コンジュゲートを指 し、免疫グロブリンのフラグメントとは酵素 的な処理あるいは遺伝子工学的な設計によっ て作製された免疫グロブリンの部分構造を持 ったタンパク質を指し、免疫グロブリンの融 合体とは各種サイトカインあるいはサイトカ イン受容体などの生物活性をもったタンパク 質の機能部分を免疫グロブリンの全部または 一部と遺伝子工学的に融合させて作製したも のを指す。

 製造方法3によって得られたチアゾール誘 導体固定化マトリックスは、水酸化ナトリウ ム水溶液、水酸化カリウム水溶液などのアル カリ性水溶液、塩酸水溶液、硫酸水溶液、硝 酸水溶液、リン酸水溶液などの酸性水溶液、 塩酸グアニジン水溶液、尿素水溶液などのタ ンパク変性剤水溶液、アルギニンやヒスチジ ンなどのアミノ酸を含んだ水溶液、SDS、Tween� ��どの界面活性剤水溶液、メタノール、エタ� ��ール、イソプロパノール、グリセロール、� ��チレングリコールなどのアルコール溶液、� ��るいは、これらを含んだ混合水溶液を用い� ��洗浄することによって、初期状態に復帰さ� ��ることができ、繰り返し使用することがで� ��る。

 以下、実施例により本発明をさらに詳細� ��説明するが、本発明の解釈がこれらに限定� ��れるものではない。

 [実施例1] チアゾール誘導体の合成
 (合成例1)

 6-フタルイミド-1-ヘキサナール(4.95g,20.2mmol)� ��四塩化炭素(100mL)に溶解し臭素(1.03mL,20.2mmol)� ��四塩化炭素溶液(100mL)を滴下し2時間反応し� �。反応液を水(100mL)、次いで飽和食塩水(100mL) で洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥した後 、乾燥剤を濾別し溶媒を減圧留去し油状物を 得た。得られた油状物をDMF(100mL)に溶解し、4- メチルベンゾイルチオウレア(5.87g,26.3mmol)を� �え、10時間加熱還流した。反応終了後、反応 混合物に1M塩酸(300mL)を加え、酢酸エチル(300mL )で二回抽出し、有機層を合わせて飽和食塩� �(300mL)で二回洗浄した。有機層を無水硫酸マ� ��ネシウムで乾燥した後、乾燥剤を濾別し、� ��媒を減圧留去した。得られた混合物をシリ� ��ゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/� �酸エチル=2/1)で精製することによって、4-メ� ��ル-N-[5-{4-(フタルイミド)ブチル}チアゾール- 2-イル]ベンズアミドの白色固体(0.424g,5%)を得� ��。m.p.203から205℃; ¹ H-NMR(CDCl ₃ ,TMS,ppm):δ 1.58から1.82(m,4H),2.44(s,3H),2.82(t,J=7.5Hz ,2H),3.72(t,J=7.5Hz,2H),6.97(s,1H),7.32(d,J=7.5Hz,2H),7.69� �ら7.86(m,4H),7.91(d,J=7.5Hz,2H)。アミドのプロトン は帰属できなかった。

 (合成例2)

 2-アミノ-4-メチル-5-{4-(フタルイミド)ブチル }チアゾール(0.50g,1.66mmol)のクロロホルム(10mL)� ��液に、4-メチルベンゾイルクロリド(0.31g,1.99 mmol)とトリエチルアミン(1mL)を加え、2日間撹� ��した。反応終了後、反応液を水(10mL)で洗浄� ��、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し� ��後、乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧留去した� ��得られた混合物をシリカゲルカラムクロマ� ��グラフィー(酢酸エチル/ヘキサン=1/2)で精製 し、4-メチル-N-[4-メチル-5-{4-(フタルイミド)� �チル}チアゾール-2-イル]ベンズアミドの白色 固体(0.40g,56%)を得た。m.p.178から180℃; ¹ H-NMR(CDCl ₃ ,TMS,ppm):δ 1.58から1.66(m,4H),2.21(s,3H), 2.41(s,3H),2 .73(t,J=7.4Hz,2H),3.72(t,J=7.5Hz,2H),7.26(d,J=7.5Hz,2H),7.76 から7.86(m,6H)。アミドのプロトンは帰属でき� �かった。

 (合成例3)

 N-(5-ブロモ-6-オキソヘプチル)フタルイミド( 1.30g,3.85mmol)のDMF(20mL)溶液に、N-(3-アセトキシ- 4-メチルベンゾイル)チオウレアを加え、80℃� ��7時間反応させた。反応終了後、反応混合物 に1M塩酸(30mL)を加え、次いで酢酸エチル(50mL)� ��二回抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水( 30mL)で二回洗浄した。有機層を無水硫酸マグ� ��シウムで乾燥した後、乾燥剤を濾別し、溶� ��を減圧留去した。得られた混合物を自動設� ��中圧カラムクロマトグラフィーシステム(山 善社製;Rf=0.32:ヘキサン/酢酸エチル=1/1)で精製 し、得られた褐色固体を酢酸エチル/ヘキサ� �の混合溶媒で洗浄することによって、白色� �体の3-アセトキシ-4-メチル-N-[4-メチル-5-{4-(� �タルイミド)ブチル}チアゾール-2-イル]ベン� �アミド(0.823g,49%)を得た。:m.p.170から172℃; ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.60から1.66(m,4H),2.20(s,3H),2.21(s,3H),2. 35(s,3H),2.72から2.74(m,2H),3.53から3.64(m,2H),7.45(d,J= 7.5Hz,1H),7.79から7.93(m,6H),12.4(br s,1H)。

 (合成例4)

 モノテレフタル酸メチルクロリド(1.41g,7.10mm ol)のクロロホルム(30mL)溶液に、氷冷下にて2-� ��ミノ-4-メチル-5-{4-(フタルイミド)ブチル}チ� ��ゾール(1.56g,4.74mmol)とトリエチルアミン(1.20m L,7.98mmol)のクロロホルム(10mL)溶液を加え、一� ��反応させた。反応終了後、反応混合物を水( 20mL)、飽和食塩水(20mL)で順次洗浄し、有機層� ��無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、乾燥� ��を濾別し溶媒を減圧留去した。得られた混� ��物を自動設定中圧カラムクロマトグラフィ� ��システム(山善社製;Rf=0.16:ヘキサン/酢酸エ� �ル=2/1)で精製し、4-メトキシカルボニル-N-[4-� ��チル-5-{4-(フタルイミド)ブチル}チアゾール- 2-イル]ベンズアミドの白色固体(0.815g,33%)を得 た。:m.p.173から174℃; ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.60から1.67(m,4H),2.22(s,3H),2.72(t,J=7.5H z,2H),3.62(t,J=7.5Hz,2H),3.90(d,3H),7.80から7.90(m,4H),8.0 6から8.20(m,4H),12.7(br s,1H)。

 (合成例5)

 2-アミノ-4-メチル-5-{4-(フタルイミド)ブチル }チアゾール(1.0g,3.17mmol)のクロロホルム(10mL)� �液に、3-シアノベンゾイルクロリド(0.79g,4.75m mol)を氷冷下にて加えた。次いでトリエチル� �ミン(0.72mL,4.79mmol)のクロロホルム(10mL)溶液を 滴下し、一晩反応させた。反応終了後、反応 混合物を水(20mL)、飽和食塩水(20mL)で順次洗浄 し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し た後、乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧留去した 。得られた混合物をシリカゲルカラムクロマ トグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン=1/2)で精� �し、3-シアノ-N-[4-メチル-5-{4-(フタルイミド)� ��チル}チアゾール-2-イル]ベンズアミドの白� �固体(0.57g,40%)を得た。m.p.170から172℃; ¹ H-NMR(CDCl ₃ ,TMS,ppm):δ 1.69から1.70(m,4H),1.97(s,3H),2.74(t,J=6.5,2 H),3.73(t,J=6.8,2H),7.56(dd,J=8.0 and 8.0Hz,1H),7.71から 7.86(m,5H),8.05(m,1H),8.16(s,1H)。アミドのプロトン� ��帰属できなかった。

 (参考例1)
 アルゴン雰囲気下、4-メチル-N-{5-(4-フタル� �ミドブチル)チアゾール-2-イル}ベンズアミド (0.105g,0.25mmol)とフェロセン(0.023g,0.125mmol)に、D MSO(1.5mL)、3M-ヨウ化トリフルオロメチル/DMSO溶 液(0.25mL,0.75mmol)、及び1M-硫酸/DMSO溶液(0.25mL,0.2 5mmol)を加えて撹拌した。この溶液に、室温下 で31%過酸化水素水(75μL,0.75mmol)を滴下した。� �応終了後、反応溶液を水(200mL)にあけ、しば� ��く撹拌した。クロロホルムで抽出し、得ら� ��た有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した後� ��乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧留去した。残� ��をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで� ��製することにより、4-メチル-N-{4-トリフル� �ロメチル-5-(4-フタルイミドブチル)チアゾー� ��-2-イル}ベンズアミドの白色固体(0.023g,19%)を 得た。 ¹ H-NMR(CDCl ₃ ,TMS,ppm):δ 1.79から1.82(m,4H),2.47(s,3H),3.01(t,J=7.5Hz ,2H),3.76(t,J=7.5Hz,2H),7.34(d,J=7.5Hz,1H),7.72から7.90(m, 6H),9.37(s,1H); ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ ,TMS,ppm):-60.87。

 (合成例6から81)
 合成例1または2の方法に準じて、表1から12� �記載したチアゾール誘導体を得た。

 (合成例82)

 4-メチル-N-{5-(4-フタルイミドブチル)チアゾ� ��ル-2-イル}ベンズアミド(0.60g,1.43mmol)のエタ� �ール(10mL)溶液に、ヒドラジン一水和物(0.35mL� ��7.12mmol)を室温にて加え、一晩撹拌した。反� ��終了後、反応溶液を減圧留去し、1M 塩酸(6m L)を加えた。析出した固体を濾別し、濾液を� ��酸エチルで洗浄し、水層を減圧留去した。� ��られた固体にエタノールとトルエンを加え� ��沸し十分に乾燥し、固体を瀘取した。得ら� ��た固体を酢酸エチルにて洗浄することによ� ��て、4-{2-(4-メチルベンゾイル)アミノチアゾ� ��ル-5-イル}ブチルアミン塩酸塩の白色固体(0. 44g,収率:95%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.64から1.67(m,4H),2.40(s,3H),2.77から2.8 0(m,4H),7.32(s,1H),7.35(d,J=7.5Hz,2H),8.01(d,J=7.5Hz,2H),8.0 7(br s,3H)。アミドのプロトンは帰属できなか� ��た。

 (合成例83)

 2-クロロ-N-[4-メチル-5-{4-(フタルイミド)ブチ ル}チアゾール-2-イル]ベンズアミド(0.22g,0.48mm ol)のエタノール(5mL)溶液に、0.05Mのヒドラジ� �エタノール溶液(34mL)を室温にて加え、一晩� �拌した。反応終了後、反応溶液を減圧留去� �、1M 塩酸(3mL)を加えた。析出した固体を濾� �し、濾液を減圧留去した。得られた固体を� �タノール並びに酢酸エチルを用いて洗浄す� �ことにより、4-{2-(2-クロロベンゾイルアミノ )-4-メチルチアゾール-5-イル}ブチルアミン塩� ��塩の褐色固体(0.050g,収率:21%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.42から1.77(m,4H),2.21(s,3H),2.63から2.9 2(m,4H),7.33から7.67(m,4H),7.68から8.16(m,3H)。アミ� �のプロトンは帰属できなかった。

 (合成例84)

 3,4-ジクロロ-N-[4-メチル-5-{4-(フタルイミド)� ��チル}チアゾール-2-イル]ベンズアミド(0.25g,0 .51mmol)のエタノール(5mL)溶液に、ヒドラジン� �水和物(0.07mL,1.53mmol)を室温にて加え、一晩撹 拌した。反応終了後、反応溶液を留去し、1M� �塩酸(3mL)を加え、室温で一晩撹拌した。析出 した固体を濾別し、濾液を減圧留去した。得 られた固体をエタノール並びに酢酸エチルを 用いて洗浄することにより、4-{2-(3,4-ジクロ� �ベンゾイルアミノ)-4-メチルチアゾール-5-イ� ��}ブチルアミン塩酸塩の白色固体(0.10g, 収率 :50%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.46から1.74(m,4H),2.24(s,3H), 2.62から2 .91(m,4H),7.82(d,J=8.4Hz,1H),7.85から7.99(m,3H),8.03から 8.13(m,1H),8.04(dd,J=2.0 and 8.4Hz,1H),8.33(d,J=2.0Hz,1H)� ��

 (合成例85)

 4-メチル-N-[4-メチル-5-{4-(フタルイミド)ブチ ル}チアゾール-2-イル]ベンズアミド(0.23g,0.53mm ol)のエタノール(5mL)溶液に、ヒドラジン一水� ��物(0.23mL,5.30mmol)を加え3時間還流した。反応� ��了後、反応溶液を留去し、残渣に1M 塩酸(5m L)を加え、撹拌した。析出した固体を濾別し� ��濾液を減圧留去した。得られた固体をエタ� ��ール並びに酢酸エチルを用いて洗浄するこ� ��により、4-{4-メチル-2-(4-メチルベンゾイル� �ミノ)チアゾール-5-イル}ブチルアミン塩酸塩 の白色固体(0.043g,収率:24%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.55から1.80(m,4H),2.24(s,3H),2.39(s,3H),2. 64から2.92(m,4H),7.34(d,J=8.2Hz,2H),7.78から8.05(m,3H),7 .99(d,J=8.2Hz,2H)。アミドのプロトンは帰属でき� ��かった。

 (合成例86)

 4-トリフルオロメチル-N-[4-メチル-5-{4-(フタ� ��イミド)ブチル}チアゾール-2-イル]ベンズア� ��ド(0.30g,0.62mmol)のエタノール(5mL)溶液に、0.05 M ヒドラジンエタノール溶液(30mL)を室温にて 加え、2時間還流した。反応終了後、反応溶� �を留去し、1M 塩酸(3mL)を加え、室温で2時間� ��拌した。析出した固体を濾別し、濾液を減� ��留去した。得られた固体をエタノール並び� ��酢酸エチルを用いて洗浄することにより、4 -{4-メチル-2-(4-トリフルオロメチルベンゾイ� �アミノ)チアゾール-5-イル}ブチルアミン塩酸 塩の白色固体(0.10g,収率:41.7%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.49から1.73(m,4H),2.24(s,3H),2.60から2.9 0(m,4H),7.91(d,J=8.1Hz,2H),7.97から8.19(m,3H),8.26(d,J=8.1 Hz,2H)。アミドのプロトンは帰属できなかった 。

 (合成例87)

 4-メトキシカルボニル-N-[4-メチル-5-{4-(フタ� ��イミド)ブチル}チアゾール-2-イル]-ベンズア ミド(0.535g,1.12mmol)に0.5Mヒドラジンエタノール 溶液(13.5mL)を加え常温で一晩反応させた。反� ��終了後、反応溶液を減圧留去した。残渣に1 M塩酸を加え超音波で懸濁し、セライトを敷� �たガラスフィルターで固体を濾別した。濾� �を減圧留去し、固体を再度析出させ、少量� �熱エタノールを加え洗浄することによって� �4-[2-{4-(メトキシカルボニル)ベンゾイルアミ� ��}-4-メチルチアゾール-5-イル]ブチルアミン� �酸塩の白色固体(0.36g,収率:84%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.60から1.70(m,4H),2.42(s,3H),2.72から2.8 0(m,4H),3.90(s,3H),7.97(br s,3H),8.07から8.21(m,4H)。ア ミドのプロトンは帰属できなかった。

 (合成例88)

 3-アセトキシ-4-メチル-N-[4-メチル-5-{4-(フタ� ��イミド)ブチル}チアゾール-2-イル]ベンズア� ��ド(0.80g,1.62mmol)に0.5Mヒドラジンエタノール� �液(10mL)を加え常温で一晩反応させた。反応� �了後、反応溶液を減圧留去した後、残渣に1M 塩酸を加え超音波で懸濁し、セライトを敷い たガラスフィルターで固体を濾別した。濾液 を減圧留去し、固体を再度析出させ、少量の 熱エタノールを加え洗浄することによって、 4-{2-(3-ヒドロキシ4-メチルベンゾイルアミノ)- 4-メチルチアゾール-5-イル}ブチルアミン塩酸 塩の白色固体(0.48g,収率:75%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.60から1.70(m,4H),2.19(s,3H),2.23(s,3H),2. 72から2.81(m,4H),7.20(d,J=7.5Hz,1H),7.44から7.50(m,2H),7 .94(br s,3H)9.80(br s,1H)。アミドのプロトンは帰 属できなかった。

 (合成例89)

 3-シアノ-N-[4-メチル-5-{4-(フタルイミド)ブチ ル}チアゾール-2-イル]ベンズアミドに0.5Mヒド ラジンエタノール溶液(7mL)を加え常温で一晩� ��応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し� ��残渣に1M塩酸を加え超音波で懸濁し、セラ� �トを敷いたガラスフィルターで濾過した。� �媒を減圧留去し、少量のエタノールを加え� �解した後、酢酸エチルで再沈殿させて精製� �、4-{2-(3-シアノベンゾイルアミノ)-4-メチル� �アゾール-5-イル}ブチルアミン塩酸塩の白色� ��体(0.25g,収率:46%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.62から1.65(m,4H),2.24(s,3H),3.43から3.4 6(m,4H),7.56(dd,J=8.0 and 8.0Hz,1H),8.05(d,J=8.0Hz,1H),8.1 0から8.22(m,4H),8.49(s,1H)。アミドのプロトンは� �属できなかった。

 (合成例90から179)
 合成例89の方法に準じて、表13から26に記載� ��たチアゾール誘導体を得た。

 合成例1から81に例示した方法によって合� ��した本発明に関わるチアゾール誘導体(1a)を 表27から32にまとめて例示した。

 また、合成例82から179に例示した方法に� �って合成した本発明に関わるチアゾール誘� �体(1’)を表33から41にまとめて例示した。

 (参考例2)

 化合物276(2.50g,8.64mmol)のクロロホルム(50mL)溶 液にトリエチルアミン(2.50mL,18mmol)を添加した 。次に氷冷下でメタクリル酸クロリド(0.93mL,9 .5mmol)を滴下した後、氷冷下で30分反応させた 。反応終了後、反応混合物にクロロホルム(50 mL)を添加し、水(100mL)、飽和炭酸ナトリウム� �溶液(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次洗浄した 。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した 後、乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧留去した。 得られた混合物をシリカゲルクロマトグラフ ィー(酢酸エチル/ヘキサン=1/2(v/v))で精製する ことで、淡黄色粘性液体の4-メチル-N-[4-メチ� ��-5-{3-(2-プロペニルカルボニルアミノ)プロピ ル}チアゾール-2-イル]ベンズアミド(1.07g,3.0mmo l,収率:35%)を得た。 ¹ H-NMR(DMSO-d ₆ ,DMSO,ppm):δ 1.70から1.82(m,2H),1.87(s,3H),2.21(s,3H),2. 39(s,3H),2.68(t,J=7.5Hz,2H),3.10から3.25(m,2H),5.32(s,1H), 5.64(s,1H),7.34(d,J=8.5Hz,2H),7.90(s,1H),7.98(d,J=8.5Hz,2H)� ��

 [実施例2] チアゾール誘導体のアガロース� �ルへの固定化(その1)
 チアゾール誘導体を40μmol/mLになるようDMSO� �溶解し、これに等量の0.5M 塩化ナトリウム� �含む0.2M 炭酸ナトリウム緩衝液(pH8.3)を加え� ��濃度20μmol/mLのチアゾール誘導体溶液を調製 した。N-ヒドロキシスクシニミド(NHS)にて活� �化されたアガロースゲルであるHiTrap NHS-activ ated HP 1mL(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエ ンス社製;以下HiTrapカラムと略記する)に、非� ��許文献3に記載された方法に従って前記チア ゾール誘導体溶液を2mL通液することによって 固定化を行なった。未反応のスクシンイミド オキシカルボニル基のブロッキングは、非特 許文献3に記載された方法に従って行なった� �固定化量は非特許文献3に記載された方法の� ��ち「B.酸性条件法」に従って、HiTrapカラム� �液前後のリガンド(チアゾール誘導体)溶液の 紫外吸収極大波長(300nm付近)における吸光度� �U-2900スペクトロフォトメーター(日立製作所� ��)で測定することにより算出した。当該方法 で固定化した各化合物の固定化リガンド密度 を表42に示す。なお、本実施例以降で記載の� ��合物番号は表33から41記載の化合物番号に対 応する。

 [実施例3] チアゾール誘導体のアガロース� �ルへの固定化(その2)
 チアゾール誘導体を20μmol/mL及びトリエチル アミンを40μmol/mL含むDMSO溶液を調製した。HiTr apカラムをDMSOで置換後、これに前記チアゾー ル誘導体-トリエチルアミンのDMSO溶液を2mL通� ��した。一時間放置した後、HiTrapカラムに3mL� ��DMSOを通液して、さらに5mLの0.5M 塩化ナトリ ウムを含む0.2M 炭酸ナトリウム緩衝液(pH8.3)� �通液した。未反応のスクシンイミドオキシ� �ルボニル基のブロッキングは、非特許文献3� ��記載された方法に従って行なった。固定化� ��は非特許文献3に記載された方法のうち「B.� ��性条件法」に従って、HiTrapカラム通液前後� ��リガンド(チアゾール誘導体)溶液の紫外吸� �極大波長(300nm付近)における吸光度をU-2900ス� ��クトロフォトメーター(日立製作所製)で測� �することにより算出した。当該方法で固定� �した化合物304の固定化リガンド密度を表43に 示す。

 [実施例4] チアゾール誘導体固定化アガロ� �スゲルを用いたタンパク質の吸脱着(その1)
 実施例2あるいは3に記載の方法にて調製し� �チアゾール誘導体固定化HiTrapカラムをAKTAprim e plus(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス 社製クロマトグラフィー装置)に取り付け、0. 7M 硫酸ナトリウムを含む10mM リン酸ナトリ� �ム-10mM クエン酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)(以� �、平衡化緩衝液と呼ぶ)を20mL通液し平衡化し た。AKTAprime plusを流速1mL/minで自動運転し、� �衡化緩衝液を10mL通液後、同緩衝液に溶解し� ��ヒト血漿由来免疫グロブリン製剤(化血研製 、本製剤の免疫グロブリンは免疫グロブリン Gである)0.5mg(OD ₂₈₀ =0.7)を添加してカラムに通液した。さらに平� ��化緩衝液を10mL通液後、平衡化緩衝液から10m M リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウ� �緩衝液(pH7.5)への硫酸ナトリウムに関する直� ��濃度勾配クロマトグラフィーを行なった。� ��疫グロブリンのカラムからの溶出は280nmに� �ける吸光度をモニターして検出した。溶出� �は1mLずつ分画し、各フラクションの280nmにお ける吸光度をU-2900スペクトロフォトメーター (日立製作所製)で測定し回収率を算出した。� ��アゾール誘導体を固定化したHiTrapカラムを� ��いて行なったクロマトグラフィーの結果を� ��1から図6に示し、これらのクロマトグラフ� �ーにおける免疫グロブリンの回収率を表44に 示す。いずれのチアゾール誘導体を用いたと きも免疫グロブリンは50%以上の回収率で回収 され、チアゾール誘導体固定化HiTrapカラムに よる免疫グロブリンの吸脱着が確認された。 特に化合物286、304、329を用いた場合の回収率 は90%以上と極めて高かった。

 それぞれの吸脱着操作後には100mM 水酸化ナ トリウム水溶液を10mL通液してカラムの再生� �行なった。前記のチアゾール誘導体固定化Hi Trapカラムはいずれもこの再生処理によって� �期状態に復帰させることができ、繰り返し� �用によってもその特性は変化しなかった。

 [実施例5] チアゾール誘導体固定化アガロ� �スゲルを用いたタンパク質の吸脱着(その2)
 実施例2あるいは3に記載の方法にて調製し� �チアゾール誘導体固定化HiTrapカラムをAKTAprim e plus(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス 社製クロマトグラフィー装置)に取り付け、� �記平衡化緩衝液を20mL通液し平衡化した。AKTA prime plusを流速1mL/minで自動運転し、平衡化緩 衝液を10mL通液後、同緩衝液に溶解したウシ� �清アルブミン(SIGMA社製)0.5mg(OD ₂₈₀ =0.3)を添加してカラムに通液した。さらに平� ��化緩衝液を10mL通液後、平衡化緩衝液から10m M リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウ� �緩衝液(pH7.5)への硫酸ナトリウムに関する直� ��濃度勾配クロマトグラフィーを行なった。� ��シ血清アルブミンのカラムからの溶出は280n mにおける吸光度をモニターして検出した。� �出液は1mLずつ分画し、各フラクションの280nm における吸光度をU-2900スペクトロフォトメー ター(日立製作所製)で測定し回収率を算出し� ��。各種チアゾール誘導体を固定化したHiTrap� ��ラムを用いて行なったクロマトグラフィー� ��結果を図7から12に示す。また、これらのク� ��マトグラフィーにおけるウシ血清アルブミ� ��の回収率を表45に示す。いずれのチアゾー� �誘導体を用いたときもウシ血清アルブミン� �10番目の画分までに溶出しており、カラムへ の吸着はほとんど見られなかった。また、図 1から6に示した免疫グロブリンを通液したと� ��の結果とは大きく異なっていた。よって、� ��発明のチアゾール誘導体固定化マトリック� ��を用いることで、試料中の免疫グロブリン� ��ウシ血清アルブミンとの分離が可能である� ��とが示された。

 それぞれの吸脱着操作後には100mM 水酸化ナ トリウム水溶液を10mL通液してカラムの再生� �行なった。前記のチアゾール誘導体を固定� �HiTrapカラムはいずれもこの再生処理によっ� �初期状態に復帰させることができ、繰り返� �使用によってもその特性は変化しなかった� �

 [実施例6] チアゾール誘導体固定化アガロ� �スゲルを用いたタンパク質の吸脱着(その3)
 実施例2に記載の方法にて調製した化合物286 を固定化したHiTrapカラムをAKTAprime plus(商品� �)(GEヘルスケアバイオサイエンス社製クロマ� ��グラフィー装置)に取り付け、前記平衡化緩 衝液を20mL通液し平衡化した。AKTAprime plusを� �速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝液を10mL通 液後、同緩衝液に溶解したリボヌクレア-ゼA� ��リゾチ-ム、αキモトリプシノ-ゲンAの混合� �(リボヌクレア-ゼA 0.15mg、リゾチ-ム 0.03mg、 αキモトリプシノ-ゲンA 0.04mg)(OD ₂₈₀ =0.24)を添加してカラムに通液した。さらに平 衡化緩衝液を10mL通液後、平衡化緩衝液から10 mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウ� ��緩衝液(pH7.5)への硫酸ナトリウムに関する直 線濃度勾配クロマトグラフィーを行なった。 タンパク質のカラムからの溶出は280nmにおけ� ��吸光度の吸光度をモニターして検出した。� ��出液は1mLずつ分画し、各フラクションの280n mにおける吸光度をU-2900スペクトロフォトメ� �ター(日立製作所製)で測定し回収率を算出し た。化合物286を固定化したHiTrapカラムを用い て行なったクロマトグラフィーの結果を図13� ��示し、このクロマトグラフィーにおけるタ� ��パク質の回収率を表46に示す。いずれのタ� �パク質も10番目の画分以内に溶出しており、 免疫グロブリン(25番目から45番目までの画分� ��溶出、図1参照)とは異なる画分となった。� �のことから、本発明のチアゾール誘導体固� �化マトリックスを用いることで、試料中の� �疫グロブリンとリボヌクレア-ゼA、リゾチ-� �、αキモトリプシノ-ゲンAとの分離が可能で� ��ることが示された。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウム水 溶液を10mL通液してカラムの再生を行なった� �前記のチアゾール誘導体固定化HiTrapカラム� �この再生処理によって初期状態に復帰させ� �ことができ、繰り返し使用によってもその� �性は変化しなかった。

 [実施例7] チアゾール誘導体固定化アガロ� �スゲルを用いたタンパク質の吸脱着(その4)
 ヒト-マウスキメラ抗体であるリツキサン(� �品名)(中外製薬社製、10mg/mL)を固定化パパイ� ��(Immobilized Papain、PIERCE社製)を用い、同説明� ��記載の方法で37℃、10時間処理することによ って、限定加水分解物を得た。

 実施例2に記載の方法にて調製した化合物286 を固定化したHiTrapカラムをAKTAprime plus(商品� �)(GEヘルスケアバイオサイエンス社製クロマ� ��グラフィー装置)に取り付け、前記平衡化緩 衝液を20mL通液し平衡化した。AKTAprime plusを� �速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝液を10mL通 液後、上記パパイン処理抗体を1.2mg(OD ₂₈₀ =1.7)添加してカラムに通液した。さらに平衡� ��緩衝液を10mL通液後、平衡化緩衝液から10mM  リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウム� �衝液(pH7.5)への硫酸ナトリウムに関する直線� ��度勾配クロマトグラフィーを行なった。タ� ��パク質のカラムからの溶出は280nmにおける� �光度のモニターにより検出し、溶出液は1mL� �つ分画した。このクロマトグラフィーの結� �を図14に示す。またこのうち7、29、39、43番� �の画分(それぞれI、II、III、IVと表記)につい� ��それぞれ5μLを還元条件下で15%アクリルアミ ドを含むSDS-PAGEにかけ、銀染色試薬(銀染色「 第一」(商品名)、第一化学薬品社製)を用いて 染色した(図15)。これにより、IはFab(H鎖に由� �する27kDaタンパク質とL鎖である27kDaタンパク 質より構成される)、IIはFc(H鎖に由来する30kDa タンパク質のダイマーで構成される)、IIIは� �分消化抗体(H鎖である60kDaタンパク質とH鎖に 由来する30kDaタンパク質とL鎖である27kDaタン� ��ク質で構成される)、IVは未消化抗体(H鎖で� �る60kDaタンパク質のダイマーとL鎖である27kDa タンパク質のダイマーで構成される)と同定� �れ、抗体に由来する各フラグメントの分離� �可能であることが示された。

 [実施例8] チアゾール誘導体のビニルポリ� �ーゲルへの固定化(その1)
 遠沈管に化合物286(102mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、緩衝液(組成:0.2M NaHCO ₃ 、0.5M NaCl、pH8.3;8mL)、トリエチルアミン(90μL� ��0.6mmol)を添加して化合物286が溶解したこと� �確認した後、0.3gのエポキシトヨパール(商品 名)ゲル(東ソー社製、エポキシ基含量:804μmol/ g(gel))を添加した。上記操作によって得られ� �混合物の入った遠沈管を内温40℃に設定した 卓上振盪機にセットし、165rpmで16時間攪拌振� ��した。反応終了後、遠沈管にアセトニトリ� ��(5mL)を添加し、グラスフィルターでトヨパ� �ルゲルと反応溶液を分離した。次にグラス� �ィルター上のトヨパールゲルを洗浄液(組成: CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物286を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物286が127μmol/mL (gel)固定化されていることを確認した。更に� ��上記の操作によって得られたトヨパールゲ� ��中の未反応のエポキシ基をブロックするた� ��、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入れ� ��ロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノール� �ミン、0.5M 塩化ナトリウム、pH8.3(溶媒は水); 5mL)を添加した。反応溶液が入った遠沈管を� �内温40℃に設定した卓上振盪機にセットし、 165rpmで16時間攪拌振盪することによりゲル中� ��残存エポキシ基をモノエタノールアミンで� ��ロックした。反応終了後、遠沈管にアセト� ��トリル(5mL)を添加し、グラスフィルターに� �トヨパールゲルとブロッキング溶液を分離� �た。次いで、ゲルをエタノール(5mL)、水(5mL)� ��それぞれ2回ずつ洗浄し、化合物286が固定化 されたエポキシトヨパールゲルを得た。また 、ブロッキング溶液と洗浄液を合わせた溶液 中に残存する化合物286を高速液体クロマトグ ラフィーで測定したところ、ブロッキング溶 液と洗浄液を合わせた溶液中に化合物286は残 存していないことが確認された。

 [実施例9] チアゾール誘導体のビニルポリ� �ーゲルへの固定化(その2)
 遠沈管に化合物329(107mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、0.5M 水酸化ナトリウム 水溶液(2.4mL)、水(5.6mL)を添加して化合物329が� ��解したことを確認したのち、0.3gのエポキシ トヨパール(商品名)ゲル(東ソー社製、エポキ シ基含量:804μmol/g(gel))を添加した。上記操作� ��よって得られた混合物の入った遠沈管を内� ��40℃に設定した卓上振盪機にセットし、165rp mで24時間攪拌振盪した。反応終了後、遠沈管 にアセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� ��ターでトヨパールゲルと反応溶液を分離し� ��。次にグラスフィルター上のトヨパールゲ� ��を洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物329を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物329が81μmol/mL( gel)固定化されていることが確認された。更� �、上記の操作によって得られたトヨパール� �ル中の未反応のエポキシ基をブロックする� �め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� �ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノール アミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(溶 媒は水);5mL)を添加した。反応溶液が入った遠 沈管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ� ��トし、165rpmで20時間攪拌振盪することによ� �ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノール� �ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管� �アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィル ターにてトヨパールゲルとブロッキング溶液 を分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL)� ��水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物329� ��固定化されたエポキシトヨパールゲルを得� ��。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ� ��た溶液中に残存する化合物329を高速液体ク� ��マトグラフィーで測定したところ、ブロッ� ��ング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合� ��329は残存していないことが確認された。

 [実施例10] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その3)
 遠沈管に化合物286(30mg、88μmol)を計り取り、 1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� �(1mmol/mL)を0.1mL添加した。次いで、遠沈管に� �セトニトリル(2.4mL)、緩衝液(組成:0.1M Na ₂ HPO ₄ -NaH ₂ PO ₄ 、pH7.0;2.5mL)、トリエチルアミン(30μL、0.2mmol)� ��添加して化合物286が溶解したことを確認し� ��のち、3mLのホルミルトヨパール(商品名)ゲ� �(東ソー社製、ホルミル基含量:65μmol/g(gel))を 添加した。上記操作によって得られた混合物 の入った遠沈管を内温25℃に設定した卓上振� ��機にセットし、165rpmで攪拌振盪した。攪拌� ��盪を開始してから30分後、遠沈管にボラン-� ��リジン複合体(250μL、2.5mmol)を添加し、さら� ��165rpmで2.5時間攪拌振盪した。反応終了後、� ��沈管にアセトニトリル(5mL)を添加し、グラ� �フィルターでトヨパールゲルと反応溶液を� �離した。次にグラスフィルター上のトヨパ� �ルゲルを洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物286を定量することによっ� �、化合物286が19μmol/mL(gel)固定化されたホル� �ルトヨパールゲルを得た。

 [実施例11] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その4)
 遠沈管に化合物320(111mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、0.5M 水酸化ナトリウム 水溶液(0.6mL)、水(7.4mL)を添加して化合物320が� ��解したことを確認したのち、0.3gのエポキシ トヨパール(商品名)ゲル(東ソー社製、エポキ シ基含量:804μmol/g(gel))を添加した。上記操作� ��よって得られた混合物の入った遠沈管を内� ��40℃に設定した卓上振盪機にセットし、165rp mで24時間攪拌振盪した。反応終了後、遠沈管 にアセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� ��ターでトヨパールゲルと反応溶液を分離し� ��。次にグラスフィルター上のトヨパールゲ� ��を洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV254nm)に� ��残存する化合物320を定量することによって� ��エポキシトヨパールに化合物320が176μmol/mL(g el)固定化されていることが確認された。更に 、上記の操作によって得られたトヨパールゲ ル中の未反応のエポキシ基をブロックするた め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入れ ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノール� ��ミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液(溶媒は水 )、pH8.3;5mL)を添加した。反応溶液が入った遠� ��管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ� �トし、165rpmで20時間攪拌振盪することにより ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノールア ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管に アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィル� ��ーにてトヨパールゲルとブロッキング溶液� ��分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL)� �水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物320� �固定化されたエポキシトヨパールゲルを得� �。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ� �た溶液中に残存する化合物320を高速液体ク� �マトグラフィーで測定したところ、ブロッ� �ング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合� �320は残存していないことが確認された。

 [実施例12] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その5)
 遠沈管に化合物384(112mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、0.5M 水酸化ナトリウム 水溶液(0.9mL)、水(7.1mL)を添加して化合物384が� ��解したことを確認したのち、0.3gのエポキシ トヨパール(商品名)ゲル(東ソー社製、エポキ シ基含量:804μmol/g(gel))を添加した。上記操作� ��よって得られた混合物の入った遠沈管を内� ��40℃に設定した卓上振盪機にセットし、165rp mで24時間攪拌振盪した。反応終了後、遠沈管 にアセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� ��ターでトヨパールゲルと反応溶液を分離し� ��。次にグラスフィルター上のトヨパールゲ� ��を洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物384を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物384が126μmol/mL (gel)固定化されていることが確認された。更� ��、上記の操作によって得られたトヨパール� ��ル中の未反応のエポキシ基をブロックする� ��め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� ��ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノー� �アミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(� �媒は水);5mL)を添加した。反応溶液が入った� �沈管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ ットし、165rpmで20時間攪拌振盪することによ� ��ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノール� ��ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管� ��アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� �ターにてトヨパールゲルとブロッキング溶� �を分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL) 、水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物384 が固定化されたエポキシトヨパールゲルを得 た。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ せた溶液中に残存する化合物384を高速液体ク ロマトグラフィーで測定したところ、ブロッ キング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合 物384は残存していないことが確認された。

 [実施例13] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その6)
 遠沈管に化合物423(111mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、0.5M 水酸化ナトリウム 水溶液(0.9mL)、水(7.1mL)を添加して化合物423が� ��解したことを確認したのち、0.3gのエポキシ トヨパール(商品名)ゲル(東ソー社製、エポキ シ基含量:804μmol/g(gel))を添加した。上記操作� ��よって得られた混合物の入った遠沈管を内� ��40℃に設定した卓上振盪機にセットし、165rp mで24時間攪拌振盪した。反応終了後、遠沈管 にアセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� ��ターでトヨパールゲルと反応溶液を分離し� ��。次にグラスフィルター上のトヨパールゲ� ��を洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物423を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物423が114μmol/mL (gel)固定化されていることが確認された。更� ��、上記の操作によって得られたトヨパール� ��ル中の未反応のエポキシ基をブロックする� ��め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� ��ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノー� �アミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(� �媒は水);5mL)を添加した。反応溶液が入った� �沈管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ ットし、165rpmで20時間攪拌振盪することによ� ��ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノール� ��ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管� ��アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� �ターにてトヨパールゲルとブロッキング溶� �を分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL) 、水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物423 が固定化されたエポキシトヨパールゲルを得 た。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ せた溶液中に残存する化合物423を高速液体ク ロマトグラフィーで測定したところ、ブロッ キング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合 物423は残存していないことが確認された。

 [実施例14] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その7)
 遠沈管に化合物283(94mg、0.3mmol)を計り取り、 1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� �(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� �セトニトリル(1.7mL)、緩衝液(組成:0.2M NaHCO ₃ 、0.5M NaCl、pH8.3;8mL)、トリエチルアミン(90μL� ��0.6mmol)を添加して化合物283が溶解したこと� �確認したのち、0.3gのエポキシトヨパール(商 品名)ゲル(東ソー社製、、エポキシ基含量:804 μmol/g(gel))を添加した。上記操作によって得� �れた混合物の入った遠沈管を内温40℃に設定 した卓上振盪機にセットし、165rpmで16時間攪� ��振盪した。反応終了後、遠沈管にアセトニ� ��リル(5mL)を添加し、グラスフィルターでト� �パールゲルと反応溶液を分離した。次にグ� �スフィルター上のトヨパールゲルを洗浄液(� ��成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物283を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物283が102μmol/mL (gel)固定化されていることが確認された。更� ��、上記の操作によって得られたトヨパール� ��ル中の未反応のエポキシ基をブロックする� ��め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� ��ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノー� �アミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(� �媒は水);5mL)を添加した。反応溶液が入った� �沈管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ ットし、165rpmで16時間攪拌振盪することによ� ��ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノール� ��ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管� ��アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� �ターにてトヨパールゲルとブロッキング溶� �を分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL) 、水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物283 が固定化されたエポキシトヨパールゲルを得 た。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ せた溶液中に残存する化合物283を高速液体ク ロマトグラフィーで測定したところ、ブロッ キング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合 物283は残存していないことが確認された。

 [実施例15] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その8)
 遠沈管に化合物284(98mg、0.3mmol)を計り取り、 1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� �(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� �セトニトリル(1.7mL)、緩衝液(組成:0.2M NaHCO ₃ 、0.5M NaCl、pH8.3;8mL)、トリエチルアミン(90μL� ��0.6mmol)を添加して化合物284が溶解したこと� �確認したのち、0.3gのエポキシトヨパール(商 品名)ゲル(東ソー社製、エポキシ基含量:804μm ol/g(gel))を添加した。上記操作によって得ら� �た混合物の入った遠沈管を内温40℃に設定し た卓上振盪機にセットし、165rpmで16時間攪拌� ��盪した。反応終了後、遠沈管にアセトニト� ��ル(5mL)を添加し、グラスフィルターでトヨ� �ールゲルと反応溶液を分離した。次にグラ� �フィルター上のトヨパールゲルを洗浄液(組� ��:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物284を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物284が117μmol/mL (gel)固定化されていることが確認された。更� ��、上記の操作によって得られたトヨパール� ��ル中の未反応のエポキシ基をブロックする� ��め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� ��ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノー� �アミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(� �媒は水);5mL)を添加した。反応溶液が入った� �沈管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ ットし、165rpmで16時間攪拌振盪することによ� ��ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノール� ��ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管� ��アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� �ターにてトヨパールゲルとブロッキング溶� �を分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL) 、水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物284 が固定化されたエポキシトヨパールゲルを得 た。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ せた溶液中に残存する化合物284を高速液体ク ロマトグラフィーで測定したところ、ブロッ キング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合 物284は残存していないことが確認された。

 [実施例16] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その9)
 遠沈管に化合物292(191mg、0.5mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.5mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.5mL)、緩衝液(組成:0.2M NaHCO ₃ 、0.5M NaCl、pH8.3;4mL)、トリエチルアミン(140μL 、1.0mmol)を添加して化合物292が溶解したこと� ��確認したのち、0.3gのエポキシトヨパール(� �品名)ゲル(東ソー社製、エポキシ基含量:804μ mol/g(gel))を添加した。上記操作によって得ら� ��た混合物の入った遠沈管を内温40℃に設定� �た卓上振盪機にセットし、165rpmで16時間攪拌 振盪した。反応終了後、遠沈管にアセトニト リル(5mL)を添加し、グラスフィルターでトヨ� ��ールゲルと反応溶液を分離した。次にグラ� ��フィルター上のトヨパールゲルを洗浄液(組 成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物292を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物292が56μmol/mL( gel)固定化されていることが確認された。更� �、上記の操作によって得られたトヨパール� �ル中の未反応のエポキシ基をブロックする� �め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� �ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノール アミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(溶 媒は水);5mL)を添加した。反応溶液が入った遠 沈管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ� ��トし、165rpmで16時間攪拌振盪することによ� �ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノール� �ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管� �アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィル ターにてトヨパールゲルとブロッキング溶液 を分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL)� ��水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物292� ��固定化されたエポキシトヨパールゲルを得� ��。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ� ��た溶液中に残存する化合物292を高速液体ク� ��マトグラフィーで測定したところ、ブロッ� ��ング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合� ��292は残存していないことが確認された。

 [実施例17] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その10)
 遠沈管に化合物364(193mg、0.5mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.5mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.5mL)、緩衝液(組成:0.2M NaHCO ₃ 、0.5M NaCl、pH8.3;8mL)、トリエチルアミン(140μL 、1.0mmol)を添加して化合物364が溶解したこと� ��確認したのち、0.3gのエポキシトヨパール(� �品名)ゲル(東ソー社製、エポキシ基含量:804μ mol/g(gel))を添加した。上記操作によって得ら� ��た混合物の入った遠沈管を内温40℃に設定� �た卓上振盪機にセットし、165rpmで16時間攪拌 振盪した。反応終了後、遠沈管にアセトニト リル(5mL)を添加し、グラスフィルターでトヨ� ��ールゲルと反応溶液を分離した。次にグラ� ��フィルター上のトヨパールゲルを洗浄液(組 成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物364を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物364が257μmol/mL (gel)固定化されていることが確認された。更� ��、上記の操作によって得られたトヨパール� ��ル中の未反応のエポキシ基をブロックする� ��め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� ��ブロッキング溶液(組成:0.5M モノエタノー� �アミン、0.5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(� �媒は水);5mL)を添加した。反応溶液が入った� �沈管を、内温40℃に設定した卓上振盪機にセ ットし、165rpmで16時間攪拌振盪することによ� ��ゲル中の残存エポキシ基をモノエタノール� ��ミンでブロックした。反応終了後、遠沈管� ��アセトニトリル(5mL)を添加し、グラスフィ� �ターにてトヨパールゲルとブロッキング溶� �を分離した。次いで、ゲルをエタノール(5mL) 、水(5mL)でそれぞれ2回ずつ洗浄し、化合物364 が固定化されたエポキシトヨパールゲルを得 た。また、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ せた溶液中に残存する化合物364を高速液体ク ロマトグラフィーで測定したところ、ブロッ キング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に化合 物364は残存していないことが確認された。

 [実施例18] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その11)
 遠沈管に化合物286(102mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、緩衝液(組成:0.2M NaHCO ₃ 、0.5M NaCl、pH8.3;4mL)、トリエチルアミン(90μL� ��0.6mmol)を添加して化合物286が溶解したこと� �確認したのち、0.3gのトレシルトヨパール(商 品名)ゲル(東ソー社製、トレシル基含量:非公 開)を添加した。上記操作によって得られた� �合物の入った遠沈管を内温40℃に設定した卓 上振盪機にセットし、165rpmで16時間攪拌振盪� ��た。反応終了後、遠沈管にアセトニトリル( 5mL)を添加し、グラスフィルターでトヨパー� �ゲルと反応溶液を分離した。次にグラスフ� �ルター上のトヨパールゲルを洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物286を定量することによっ� �、トレシルトヨパールに化合物286が94μmol/mL( gel)固定化されていることが確認された。更� �、上記の操作によって得られたトヨパール� �ル中の未反応のトレシル基をブロックする� �め、得られたトヨパールゲルを遠沈管に入� �ブロッキング溶液(組成:0.5M トリスヒドロキ シメチルアミノメタン塩酸塩、0.5M 塩化ナト リウム水溶液、pH8.3;5mL)を添加した。反応溶� �が入った遠沈管を、内温40℃に設定した卓上 振盪機にセットし、165rpmで16時間攪拌振盪す� ��ことによりゲル中の残存トレシル基をトリ� ��ヒドロキシメチルアミノメタンでブロック� ��た。反応終了後、遠沈管にアセトニトリル( 5mL)を添加し、グラスフィルターにてトヨパ� �ルゲルとブロッキング溶液を分離した。次� �で、ゲルをエタノール(5mL)、水(5mL)でそれぞ� ��2回ずつ洗浄し、化合物286が固定化されたト レシルトヨパールゲルを得た。また、ブロッ キング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に残存 する化合物286を高速液体クロマトグラフィー で測定したところ、ブロッキング溶液と洗浄 液を合わせた溶液中に化合物286は残存してい ないことが確認された。

 [実施例19] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その12)
 遠沈管に化合物329(30mg、84μmol)を計り取り、 1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� �(1mmol/mL)を0.1mL添加した。次いで、遠沈管に� �セトニトリル(2.4mL)、緩衝液(組成:0.1M Na ₂ HPO ₄ -NaH ₂ PO ₄ 、pH7.0;2.5mL)、トリエチルアミン(30μL、0.2mmol)� ��添加して化合物329が溶解したことを確認し� ��のち、3mLのホルミルトヨパール(商品名)ゲ� �(東ソー社製、ホルミル基含量:65μmol/mL(gel))� �添加した。上記操作によって得られた混合� �の入った遠沈管を内温25℃に設定した卓上振 盪機にセットし、165rpmで攪拌振盪した。攪拌 振盪を開始してから30分後、遠沈管にボラン- ピリジン複合体(250μL、2.5mmol)を添加し、さら に165rpmで2.5時間攪拌振盪した。反応終了後、 遠沈管にアセトニトリル(5mL)を添加し、グラ� ��フィルターでトヨパールゲルと反応溶液を� ��離した。次にグラスフィルター上のトヨパ� ��ルゲルを洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物329を定量し、化合物329が14 μmol/mL(gel)固定化されたホルミルトヨパール� �ルを得た。

 [実施例20] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その13)
 遠沈管に化合物286(170mg、0.5mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.5mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.5mL)、緩衝液(組成:0.2M NaHCO ₃ 、0.5M NaCl、pH8.3;8mL)、トリエチルアミン(140μL 、1.0mmol)を添加して化合物286が溶解したこと� ��確認したのち、0.3gのエポキシトヨパール(� �品名)ゲル(東ソー社製、エポキシ基含量:804μ mol/g(gel))を添加した。上記操作によって得ら� ��た混合物の入った遠沈管を内温40℃に設定� �た卓上振盪機にセットし、165rpmで63時間攪拌 振盪した。反応終了後、遠沈管にアセトニト リル(5mL)を添加し、グラスフィルターでトヨ� ��ールゲルと反応溶液を分離した。次にグラ� ��フィルター上のトヨパールゲルを洗浄液(組 成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;10mL)で2回洗浄した。反応溶液と洗浄液� �合わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラ� ��:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物286を定量することによっ� �、エポキシトヨパールに化合物286が167μmol/mL (gel)固定化されたことを確認した。この化合� ��286固定化エポキシトヨパールゲル中の窒素� ��子含有量及び硫黄原子含有量を測定したと� ��ろ、窒素原子が1.2重量%、硫黄原子が0.89重� �%含まれることを確認した。

 [実施例21] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その14)
 遠沈管に化合物358(134mg、0.4mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.4mL添加した。次いで、遠沈管に1 ,4-ジオキサン(10mL)、トリエチルアミン(120μL� �0.9mmol)を添加して化合物358が溶解したことを 確認したのち、2.5mLのトヨパールCM-650S(商品� �)ゲル(東ソー社製;イオン交換容量:0.1mol/L(gel) )と1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カ� �ボジイミド塩酸塩(154mg、0.8mmol)を添加した。 上記操作によって得られた混合物の入った遠 沈管を内温25℃に設定した卓上振盪機にセッ� ��し、165rpmで14時間攪拌振盪した。反応終了� �、グラスフィルターでトヨパールゲルと反� �溶液を分離した。次にグラスフィルター上� �トヨパールゲルを1,4-ジオキサン(10mL)で2回洗 浄したのち、洗浄液(組成:0.05%トリフルオロ� �酸含有CH ₃ CN/0.05%トリフルオロ酢酸水溶液=45/55;10mL)で2回 洗浄した。反応溶液と洗浄液を合わせ、高速 液体クロマトグラフィー(カラム:東ソー社製� �TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:0.05%トリ フルオロ酢酸含有CH ₃ CN/0.05%トリフルオロ酢酸水溶液、流速:1mL/min� �温度:25℃、検出:UV254nm)にて残存する化合物35 8を定量し、化合物358が16μmol/mL(gel)固定化さ� �たトヨパールCM-650Sゲルを得た。

 [実施例22] チアゾール誘導体固定化ビニル� ��リマーゲルを用いたタンパク質の吸脱着(そ の1)
 実施例8に記載の方法にて調製した化合物286 固定化エポキシトヨパールゲル1mLをTRICORNカ� �ム(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス社 製)に充填し、AKTAprime plus(商品名)(GEヘルスケ アバイオサイエンス社製クロマトグラフィー 装置)に取り付け、前記平衡化緩衝液を20mL通� ��し平衡化した。AKTAprime plusを流速1mL/minで自 動運転し、平衡化緩衝液を10mL通液後、同緩� �液に溶解したヒト血漿由来免疫グロブリン� �剤(化血研製)0.5mg(OD ₂₈₀ =0.7)を添加してカラムに通液した。さらに平� ��化緩衝液を10mL通液後、平衡化緩衝液から10m M リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウ� �緩衝液(pH7.5)への硫酸ナトリウムに関する直� ��濃度勾配クロマトグラフィーを行なった。� ��疫グロブリンのカラムからの溶出は280nmに� �ける吸光度をモニターして検出した。溶出� �は1mLずつ分画し、各フラクションの280nmにお ける吸光度をU-2900スペクトロフォトメーター (日立製作所製)で測定し回収率を算出した。� ��合物286固定化エポキシトヨパールゲルを用� ��て行なったクロマトグラフィーの結果を図1 6に示し、このクロマトグラフィーにおける� �疫グロブリンの回収率を表47に示す。免疫グ ロブリンはHiTrapカラムを用いたとき(図1参照) よりもいくぶん幅広く20番目から50番目まで� �画分に溶出していた。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウムを 10mL通液してカラムの再生を行なった。化合� �286固定化エポキシトヨパールゲルはこの再� �処理によって初期状態に復帰させることが� �き、繰り返し使用によってもその特性は変� �しなかった。

 [実施例23] チアゾール誘導体固定化ビニル� ��リマーゲルを用いたタンパク質の吸脱着(そ の2)
 実施例8に記載の方法にて調製した化合物286 固定化エポキシトヨパールゲル1mLをTRICORNカ� �ム(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス社 製)に充填し、AKTAprime plus(商品名)(GEヘルスケ アバイオサイエンス社製クロマトグラフィー 装置)に取り付け、0.7M 硫酸ナトリウム、10mM� �リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウム� ��衝液(pH7.5)を20mL通液し平衡化した。AKTAprime  plusを流速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝液� ��10mL通液後、同緩衝液に溶解したヒト化モノ クローナル抗体0.5mg(OD ₂₈₀ =0.7)を添加した。さらに平衡化緩衝液を10mL通 液後、10mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸� �トリウム緩衝液(pH7.5)を用いた硫酸ナトリウ� ��の濃度勾配クロマトグラフィーを行なった� ��ヒト化モノクローナル抗体のカラムからの� ��出は280nmにおける吸光度のモニターにより� �出した。溶出液は1mLずつ分画し、各フラク� �ョンの280nmにおける吸光度をU-2900スペクトロ フォトメーター(日立製作所製)で測定し回収� ��を算出した。化合物286固定化エポキシトヨ� ��ールゲルを用いて行なったクロマトグラフ� ��ーの結果を図17に示し、このクロマトグラ� �ィーにおけるヒト化モノクローナル抗体の� �収率を表48に示す。ヒト化モノクローナル抗 体は30番目から45番目までの画分に溶出し、� �疫グロブリン(図16参照)と比べていくぶん後� ��の位置で溶出していた。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウムを 10mL通液してカラムの再生を行なった。化合� �286固定化エポキシトヨパールゲルはこの再� �処理によって初期状態に復帰させることが� �き、繰り返し使用によってもその特性は変� �しなかった。

 [実施例24] チアゾール誘導体固定化ビニル� ��リマーゲルを用いたタンパク質の吸脱着(そ の3)
 実施例8に記載の方法にて調製した化合物286 固定化エポキシトヨパールゲル1mLをTRICORNカ� �ム(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス社 製)に充填し、AKTAprime plus(商品名)(GEヘルスケ アバイオサイエンス社製クロマトグラフィー 装置)に取り付け、0.7M 硫酸ナトリウム、10mM� �リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウム� ��衝液(pH7.5)を20mL通液し平衡化した。AKTAprime  plusを流速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝液� ��10mL通液後、同緩衝液に溶解したウシ血清ア ルブミン0.5mg(OD ₂₈₀ =0.3)を添加した。さらに平衡化緩衝液を10mL通 液後、10mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸� �トリウム緩衝液(pH7.5)を用いた硫酸ナトリウ� ��の濃度勾配クロマトグラフィーを行なった� ��ウシ血清アルブミンのカラムからの溶出は2 80nmにおける吸光度のモニターにより検出し� �。溶出液は1mLずつ分画し、各フラクション� �280nmにおける吸光度をU-2900スペクトロフォト メーター(日立製作所製)で測定し回収率を算� ��した。化合物286固定化エポキシトヨパール� ��ルを用いて行なったクロマトグラフィーの� ��果を図18に示し、このクロマトグラフィー� �おけるウシ血清アルブミンの回収率を表49に 示す。ウシ血清アルブミンは10番目の画分ま� ��に溶出し、これは免疫グロブリン(図16参照) とは異なる画分であり、HiTrapカラムを用いた とき(図1及び図7参照)と同様な結果になった� �このことから、チアゾール誘導体と固定化� �るマトリックスをアガロースからトヨパー� �に変更しても同様な免疫グロブリンの分離� �能を有していることが示された。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウムを 10mL通液してカラムの再生を行なった。化合� �286固定化エポキシトヨパールゲルはこの再� �処理によって初期状態に復帰させることが� �き、繰り返し使用によってもその特性は変� �しなかった。

 [実施例25] チアゾール誘導体固定化ビニル� ��リマーゲルを用いたタンパク質の吸脱着(そ の4)
 実施例9に記載の方法にて調製した化合物329 固定化エポキシトヨパールゲルをTRICORNカラ� �(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス社製 )に充填し、AKTAprime plus(商品名)(GEヘルスケア バイオサイエンス社製クロマトグラフィー装 置)に取り付け、0.7M 硫酸ナトリウム、10mM � �ン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウム緩� ��液(pH7.5)を20mL通液し平衡化した。AKTAprime plu sを流速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝液を1 0mL通液後、同緩衝液に溶解したヒト化モノク ローナル抗体0.5mg(OD ₂₈₀ =0.7)を添加した。さらに平衡化緩衝液を10mL通 液後、10mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸� �トリウム緩衝液(pH7.5)を用いた硫酸ナトリウ� ��の濃度勾配クロマトグラフィーを行なった� ��ヒト化モノクローナル抗体のカラムからの� ��出は280nmにおける吸光度のモニターにより� �出した。溶出液は1mLずつ分画し、各フラク� �ョンの280nmにおける吸光度をU-2900スペクトロ フォトメーター(日立製作所製)で測定し回収� ��を算出した。化合物329固定化エポキシトヨ� ��ールゲルを用いて行なったクロマトグラフ� ��ーの結果を図19に示し、このクロマトグラ� �ィーのヒト化モノクローナル抗体の回収率� �表50に示す。ヒト化モノクローナル抗体は30� ��目から45番目までの画分に溶出と、化合物28 6をチアゾール誘導体として用いたとき(図17� �照)と同じ画分の位置で溶出していた。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウムを 10mL通液してカラムの再生を行なった。化合� �329固定化エポキシトヨパールゲルはこの再� �処理によって初期状態に復帰させることが� �き、繰り返し使用によってもその特性は変� �しなかった。

 [実施例26] チアゾール誘導体固定化ビニル� ��リマーゲルを用いたタンパク質の吸脱着(そ の5)
 実施例9に記載の方法にて調製した化合物329 固定化エポキシトヨパールゲルをTRICORNカラ� �(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス社製 )に充填し、AKTAprime plus(商品名)(GEヘルスケア バイオサイエンス社製クロマトグラフィー装 置)に取り付け、0.7M 硫酸ナトリウム、10mM � �ン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウム緩� ��液(pH7.5)を20mL通液し平衡化した。AKTAprime plu sを流速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝液を1 0mL通液後、同緩衝液に溶解したウシ血清アル ブミン0.5mg(OD ₂₈₀ =0.3)を添加した。さらに平衡化緩衝液を10mL通 液後、10mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸� �トリウム緩衝液(pH7.5)を用いた硫酸ナトリウ� ��の濃度勾配クロマトグラフィーを行なった� ��ウシ血清アルブミンのカラムからの溶出は2 80nmにおける吸光度のモニターにより検出し� �。溶出液は1mLずつ分画し、各フラクション� �280nmにおける吸光度をU-2900スペクトロフォト メーター(日立製作所製)で測定し回収率を算� ��した。化合物329固定化エポキシトヨパール� ��ルを用いて行なったクロマトグラフィーの� ��果を図20に示し、このクロマトグラフィー� �ウシ血清アルブミンの回収率を表51に示す。 ウシ血清アルブミンは10番目の画分までに溶� ��し、これはヒト化モノクローナル抗体(図19� ��照)とは異なる画分であり、化合物286をチア ゾール誘導体として用いたとき(図18参照)と� �様な結果になった。このことから、チアゾ� �ル誘導体を化合物286から化合物329に変更し� �も同様なタンパク質の分離性能を有してい� �ことが示された。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウムを 10mL通液してカラムの再生を行なった。化合� �329固定化エポキシトヨパールゲルはこの再� �処理によって初期状態に復帰させることが� �き、繰り返し使用によってもその特性は変� �しなかった。

 [実施例27] チアゾール誘導体固定化ビニル� ��リマーゲルを用いたタンパク質の吸脱着(そ の6)
 実施例10に記載の方法にて調製した化合物28 6固定化ホルミルトヨパールゲルを1mL TRICORN� �ラム(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス 社製)に充填し、AKTAprime plus(商品名)(GEヘルス ケアバイオサイエンス社製クロマトグラフィ ー装置)に取り付け、0.7M 硫酸ナトリウム、10 mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウ� ��緩衝液(pH7.5)を20mL通液し平衡化した。AKTAprim e plusを流速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝� ��を10mL通液後、同緩衝液に溶解したヒト化モ ノクローナル抗体0.5mg(OD ₂₈₀ =0.8)を添加した。さらに平衡化緩衝液を10mL通 液後、10mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸� �トリウム緩衝液(pH7.5)を用いた硫酸ナトリウ� ��の濃度勾配クロマトグラフィーを行なった� ��ヒト化モノクローナル抗体のカラムからの� ��出は280nmにおける吸光度のモニターにより� �出した。溶出液は1mLずつ分画し、各フラク� �ョンの280nmにおける吸光度をU-2900スペクトロ フォトメーター(日立製作所製)で測定し回収� ��を算出した。化合物286固定化ホルミルトヨ� ��ールゲルを用いて行なったクロマトグラフ� ��ーの結果を図21に示し、このクロマトグラ� �ィーのヒト化モノクローナル抗体の回収率� �表52に示す。ヒト化モノクローナル抗体は30� ��目から45番目までの画分に溶出と、エポキ� �トヨパールをチアゾール誘導体の固定化に� �いたとき(図17参照)と同じ画分の位置で溶出� ��ていた。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウムを 10mL通液してカラムの再生を行なった。化合� �286固定化ホルミルトヨパールゲルはこの再� �処理によって初期状態に復帰させることが� �き、繰り返し使用によってもその特性は変� �しなかった。

 [実施例28] チアゾール誘導体固定化ビニル� ��リマーゲルを用いたタンパク質の吸脱着(そ の7)
 実施例10に記載の方法にて調製した化合物28 6固定化ホルミルトヨパールゲルをTRICORNカラ� ��(商品名)(GEヘルスケアバイオサイエンス社� �)に充填し、AKTAprime plus(商品名)(GEヘルスケ� �バイオサイエンス社製クロマトグラフィー� �置)に取り付け、0.7M 硫酸ナトリウム、10mM � ��ン酸ナトリウム-10mM クエン酸ナトリウム緩 衝液(pH7.5)を20mL通液し平衡化した。AKTAprime pl usを流速1mL/minで自動運転し、平衡化緩衝液を 10mL通液後、同緩衝液に溶解したウシ血清ア� �ブミン0.5mg(OD ₂₈₀ =0.3)を添加した。さらに平衡化緩衝液を10mL通 液後、10mM リン酸ナトリウム-10mM クエン酸� �トリウム緩衝液(pH7.5)を用いた硫酸ナトリウ� ��の濃度勾配クロマトグラフィーを行なった� ��ウシ血清アルブミンのカラムからの溶出は2 80nmにおける吸光度のモニターにより検出し� �。溶出液は1mLずつ分画し、各フラクション� �280nmにおける吸光度をU-2900スペクトロフォト メーター(日立製作所製)で測定し回収率を算� ��した。化合物286固定化ホルミルトヨパール� ��ルを用いて行なったクロマトグラフィーの� ��果を図22に示し、このクロマトグラフィー� �ウシ血清アルブミンの回収率を表53に示す。 ウシ血清アルブミンは10番目の画分までに溶� ��し、これはヒト化モノクローナル抗体(図21� ��照)とは異なる画分であり、エポキシトヨパ ールをチアゾール誘導体の固定化に用いたと き(図18参照)と同様な結果になった。このこ� �から、チアゾール誘導体の固定化に用いる� �トリックスの有する活性化基をエポキシ基� �らホルミル基に変更しても同様なタンパク� �の分離性能を有していることが示された。

 吸脱着操作後には100mM 水酸化ナトリウムを 10mL通液してカラムの再生を行なった。化合� �286固定化ホルミルトヨパールゲルはこの再� �処理によって初期状態に復帰させることが� �き、繰り返し使用によってもその特性は変� �しなかった。

 [実施例29] チアゾール誘導体のキトサンゲ� ��への固定化
 水で洗浄した5mLの活性化キトパールK-66(商� �名)ゲル(富士紡ホールディングス社製;スク� �ンイミドオキシカルボニル基含量:15μmol/mL(ge l))を遠沈管に計り取り、これにDMSOを10mL添加� ��た。次に化合物286のDMSO溶液(0.25M)を900μL、1M の1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル� �液を225μL、トリエチルアミンを68μL、順次添 加した。上記操作によって得られた混合物の 入った遠沈管を内温40℃に設定した卓上振盪� ��にセットし、165rpmで3時間攪拌振盪した。反 応終了後、グラスフィルターでキトパールゲ ルと反応溶液を分離し、グラスフィルター上 のキトパールゲルをジメチルスルホキシド(5m L)、洗浄液(組成:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5;15mL)で洗浄した。反応溶液と洗浄液を合 わせ、高速液体クロマトグラフィー(カラム:� ��ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (商品名)(内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:CH ₃ CN/MeOH/50mM NH ₄ H ₂ PO ₄ =4/1/5、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)� �て残存する化合物286を定量し、化合物286が5. 0μmol/mL(gel)固定化されているキトパールゲル� ��得た。

 [実施例30] チアゾール誘導体のビニルポリ� ��ーゲルへの固定化(その15)
 遠沈管に化合物286(102mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、1M 水酸化ナトリウム� �溶液(1.2mL)、水(6.8mL)を添加して化合物286が溶 解したことを確認したのち、0.5gのBIOACT-EPO(商 品名)ゲル(昭和電工社製、エポキシ基含量:200 μmol/g(gel))を添加した。上記操作によって得� �れた混合物の入った遠沈管を内温40℃に設定 した卓上振盪機にセットし、165rpmで43時間攪� ��振盪した。反応終了後、遠沈管にアセトニ� ��リル(5mL)を添加し、グラスフィルターでBIOAC T-EPOゲルと反応溶液を分離した。次にグラス� ��ィルター上のBIOACT-EPOゲルを洗浄液(組成:0.05 %トリフルオロ酢酸含有CH ₃ CN/0.05%トリフルオロ酢酸水溶液=1/1;10mL)で2回� �浄した。反応溶液と洗浄液を合わせ、高速� �体クロマトグラフィー(カラム:東ソー社製 T SK-gel ODS-80T _M (内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:0.05%トリフルオ� �酢酸含有CH ₃ CN/0.05%トリフルオロ酢酸水溶液=1/1、流速:1mL/m in、温度:25℃、検出:UV 254nm)にて残存する化� �物286を定量することによって、BIOACT-EPOゲル� ��化合物286が46μmol/mL(gel)固定化されているこ� ��が確認された。更に、上記の操作によって� ��られたBIOACT-EPOゲル中の未反応のエポキシ基 をブロックするため、得られたBIOACT-EPOゲル� �遠沈管に入れブロッキング溶液(組成:アセト ニトリル;2mL、0.5M モノエタノールアミン、0. 5M 塩化ナトリウム水溶液、pH8.3(溶媒は水);4mL )を添加した。反応溶液が入った遠沈管を、� �温40℃に設定した卓上振盪機にセットし、165 rpmで23時間攪拌振盪することによりゲル中の� ��存エポキシ基をモノエタノールアミンでブ� ��ックした。反応終了後、遠沈管にアセトニ� ��リル(5mL)を添加し、グラスフィルターにてBI OACT-EPOゲルとブロッキング溶液を分離した。� ��いで、ゲルをエタノール(5mL)、水(5mL)でそれ ぞれ2回ずつ洗浄することで、化合物286が固� �化されたBIOACT-EPOゲルを得た。また、ブロッ� ��ング溶液と洗浄液を合わせた溶液中に残存� ��る化合物286を高速液体クロマトグラフィー� ��測定したところ、ブロッキング溶液と洗浄� ��を合わせた溶液中に化合物286は残存してい� ��いことが確認された。

 [実施例31] チアゾール誘導体のスチレン-ジ ビニルベンゼン共重合体ゲルへの固定化
 遠沈管に化合物286(102mg、0.3mmol)を計り取り� �1,2-ジメトキシベンゼンのアセトニトリル溶� ��(1mmol/mL)を0.3mL添加した。次いで、遠沈管に� ��セトニトリル(1.7mL)、1M 水酸化ナトリウム� �溶液(1.2mL)、水(6.8mL)を添加して化合物286が溶 解したことを確認したのち、0.3gのPOROS-EP(商� �名)ゲル(アプライドバイオシステムズジャパ ン社製、エポキシ基含量:非開示)を添加した� ��上記操作によって得られた混合物の入った� ��沈管を内温40℃に設定した卓上振盪機にセ� �トし、165rpmで36時間攪拌振盪した。反応終了 後、遠沈管にアセトニトリル(5mL)を添加し、� ��ラスフィルターでPOROS-EPゲルと反応溶液を� �離した。次にグラスフィルター上のPOROS-EPゲ ルを洗浄液(組成:0.05%トリフルオロ酢酸含有CH ₃ CN/0.05%トリフルオロ酢酸水溶液=1/1;10mL)で2回� �浄した。反応溶液と洗浄液を合わせ、高速� �体クロマトグラフィー(カラム:東ソー社製 T SK-gel ODS-80T _M (内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:0.05%トリフルオ� �酢酸含有CH ₃ CN/0.05%トリフルオロ酢酸水溶液=1/1、流速:1mL/m in、温度:25℃、検出:UV 254nm)にて残存する化� �物286を定量することによって、POROS-EPゲルに 化合物286が91μmol/mL(gel)固定化されていること が確認された。更に、上記の操作によって得 られたPOROS-EPゲル中の未反応のエポキシ基を� ��ロックするため、得られたPOROS-EPゲルを遠� �管に入れブロッキング溶液(組成:アセトニト リル;2mL、0.5M モノエタノールアミン、0.5M � �化ナトリウム水溶液、pH8.3(溶媒は水);4mL)を� �加した。反応溶液が入った遠沈管を、内温40 ℃に設定した卓上振盪機にセットし、165rpmで 6時間攪拌振盪することによりゲル中の残存� �ポキシ基をモノエタノールアミンでブロッ� �した。反応終了後、遠沈管にアセトニトリ� �(5mL)を添加し、グラスフィルターにてPOROS-EP� ��ルとブロッキング溶液を分離した。次いで� ��ゲルをエタノール(5mL)、水(5mL)でそれぞれ2� �ずつ洗浄することで、化合物286が固定化さ� �たPOROS-EPゲルを得た。また、ブロッキング溶 液と洗浄液を合わせた溶液中に残存する化合 物286を高速液体クロマトグラフィーで測定し たところ、ブロッキング溶液と洗浄液を合わ せた溶液中に化合物286は残存していないこと が確認された。

 [実施例32] チアゾール誘導体のセンサーチ� ��プへの固定化
 化合物286を4mg/mLになるようにDMSOに溶解し、 これを10mMホウ酸-1M NaCl緩衝液(pH8.5)で8倍に希 釈して0.5mg/mL濃度の化合物溶液を調製した。B IACOREセンサーチップCM5(商品名、GEヘルスケア バイオサイエンス社製)をBIACORE2000(商品名、GE ヘルスケアバイオサイエンス社製)に装着し� �BIACOREアミンカップリングキット(商品名、GE� ��ルスケアバイオサイエンス社製)を用いてセ ンサーチップCM5上のカルボキシメチルデキス トランをN-ヒドロキシスクシニミド(NHS)で活� �化した。これに前記0.5mg/mL濃度の化合物286溶 液を25℃で5分間接触させることにより固定化 を行なった。その後1M モノエタノールアミ� �水溶液を用いて未反応のスクシンイミドオ� �シカルボニル基のブロッキングを行なった� �一連の固定化過程はセンサーチップCM5表面� �SPR共鳴単位(RU)の増加によってモニタリング� ��た。

 [実施例33] BIACORE(商品名)を用いた親和性解� ��
 実施例32によって調製したリガンド-マトリ� ��クス複合体(化合物286を固定化したセンサー チップCM5)に対して、HBS-EP緩衝液(組成:10mM HEP ES(pH7.4),0.15M NaCl,3mM EDTA,0.005% SP20)で希釈した マウスIgM(10μg/mL、試料A)、マウスIgG(320μg/mL、 試料B)、ニワトリIgY(400μg/mL、試料C)、ウシ血� ��アルブミン(320μg/mL、試料D)をそれぞれ120秒� ��通液(結合相)し、その後280秒間HBS-EP緩衝液� �置換(解離相)して親和性を解析した。またそ れぞれの分析終了ごとに10mM水酸化ナトリウ� �を80秒間通液してセンサーチップCM5の再生を 行った。化合物286を固定化したセンサーチッ プCM5のセンサーグラムを図23に示す。また解� ��時間240秒後の残存RUを表54に示す。

 図23及び表54より、マウスIgM(試料A)が他の試 料(試料B、C、D)と比較し、化合物286を固定化� ��たセンサーチップCM5に対する親和性が高い� ��とが示された。よって、化合物286を固定化� ��たデキストランゲルが、マウスIgMを特異的� ��吸着することが判明した。

 [実施例34] チアゾール誘導体のセルロース� ��ルへの固定化
 0.1M N-シクロヘキシル-2-アミノエタンスル� �ン酸緩衝液(pH9.0)/アセトニトリル=1/1の混合� �を調製し、これを溶媒として、化合物486と� �酸化ナトリウムとをそれぞれ41mMとなるよう� ��加えた。遠沈管に3.0mLのセルファインホル� �ル(商品名)ゲル(チッソ社製、ホルミル基を10 から15μmol/mL含有)をとり、そこに前記の化合� ��486を含んだ溶液を5mL加え、卓上振盪機を用� ��て、30分間、25℃、160rpmで振盪した後、ボラ ン-ピリジン複合体(0.17mL、1.7mmol)を添加し、� �じ条件で16時間振盪した。反応混合物をグラ スフィルターで濾過し、アセトニトリル5mLで 1回、次いで、洗浄液(アセトニトリル/水/ト� �フルオロ酢酸=45/55/0.05)で5mLずつ4回洗浄した� ��これらのろ液と洗浄液をあわせ、高速液体� ��ロマトグラフィー(カラム:東ソー社製 TSK-ge l ODS-80T _M (内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:洗浄液と同じ組� ��、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)にて 残存する化合物486を定量することによって、 セルファインホルミルゲルに化合物486が5μmol /mL(gel)固定化されたことを確認した。

 [実施例35] チアゾール誘導体のアクリルア� ��ド-ビニル共重合体ゲルへの固定化
 0.1M N-シクロヘキシル-2-アミノエタンスル� �ン酸緩衝液(pH9.0)/アセトニトリル=1/1の混合� �媒に、化合物486と水酸化ナトリウムとをそ� �ぞれ41mMとなるように加えた。遠沈管に0.3gの Profinity Epoxide(商品名)ゲル(バイオラッド社製 、エポキシ基を50から132μmol/g含有)をとり、� �こに前記の化合物486を含んだ溶液を5mL加え� �卓上振盪機を用いて、15時間、40℃、160rpmで� ��盪した。反応混合物をグラスフィルターで� ��過し、アセトニトリル5mLで1回、次いで、洗 浄液(アセトニトリル/水/トリフルオロ酢酸=45 /55/0.05)で5mLずつ4回洗浄した。これらのろ液� �洗浄液をあわせ、高速液体クロマトグラフ� �ー(カラム:東ソー社製 TSK-gel ODS-80T _M (内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:洗浄液と同じ組� ��、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)にて 残存する化合物486を定量することによって、 Profinity Epoxideゲルに化合物486が4μmol/mL(gel)固� ��化されたことを確認した。

 [実施例36] チアゾール誘導体のシリカゲル� ��の固定化
 2-ヒドロキシ-3-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピ� ��ラジニル]プロパンスルホン酸緩衝液(0.1M、p H8.0)/アセトニトリル=1/1の混合溶媒に、化合� �486と水酸化ナトリウムとをそれぞれ41mMとな� ��ように加えた。遠沈管に1.3gのM.S.GEL Epoxy-D-5 0-1000AW(商品名、AGCエスアイテック社製、エポ キシ基を73μmol/g含有)をとり、そこに、6.1mLの 前記の溶液を加え、卓上振盪機を用いて、4� �間、40℃、160rpmで振盪した。反応混合物をグ ラスフィルターで濾過し、アセトニトリル5mL で1回、次いで、洗浄液(アセトニトリル/水/� �リフルオロ酢酸=45/55/0.05)で5mLずつ4回洗浄し� ��。これらのろ液と洗浄液をあわせ、高速液� ��クロマトグラフィー(カラム:東ソー社製 TSK -gel ODS-80T _M (内径4.6mm×長さ15cm)、溶離液:洗浄液と同じ組� ��、流速:1mL/min、温度:25℃、検出:UV 254nm)にて 残存する化合物486を定量することによって、 M.S.GEL Epoxy-D-50-1000AWに化合物486が22μmol/mL(gel)� ��定化されたことを確認した。

 [実施例37] 4-メチル-N-[4-メチル-5-{3-(2-プロ� �ニルカルボニルアミノ)プロピル}チアゾール -2-イル]ベンズアミドのポリスチレンビーズ� �の固定化(その1)
 200mLのナス型フラスコに塩化銅(I)(159mg,1.61mmo l)、ペンタメチルジエチレントリアミン(419mg, 2.42mmol)、メタノール(19.5mL)、及び2-ヒドロキ� �エチルメタクリレート(19.5mL,161mmol)を順次添� ��し、室温で撹拌して反応混合物が均一に溶� ��したことを確認した。次に反応溶液に1.4gの クロロメチル化ポリスチレンビーズ(渡辺化� �工業社製、クロロメチル基含量:1.15meq/g)を添 加し、凍結脱気により反応溶液中の溶存酸素 を除去したのち、反応容器を40℃で12時間撹� �した。反応終了後、ポリスチレンビーズと� �応溶液を分離し、ポリスチレンビーズをメ� �ノール(200mL)で2回洗浄した後、エタノール/5% アンモニア水=9/1(v/v)(1L)で3回洗浄した。洗浄� ��了後、ポリスチレンビーズと洗浄液を分離� ��た後、真空乾燥することで淡青色をしたポ� ��(2-ヒドロキシエチルメタクリレート)修飾ポ リスチレンビーズ(18.4g、グラフト率:1200%)を� �た。なおここでグラフト率は、
グラフト率=(反応後のポリスチレンビーズ重� ��-反応前のポリスチレンビーズ重量)/(反応前 のポリスチレンビーズ重量)
と定義する。

 次に50mLのナス型フラスコに塩化銅(I)(22mg,0.2 2mmol)、1,4,8,11-テトラメチル-1,4,8,11-テトラア� �テトラデカン(56mg,0.22mmol)、参考例2で合成し� ��4-メチル-N-[4-メチル-5-{3-(2-プロペニルカル� �ニルアミノ)プロピル}チアゾール-2-イル]ベ� �ズアミド(525mg,1.47mmol)、及び2-ブタノン/2-プ� �パノール=7/3(v/v)の混合溶媒(3mL)を順次添加し 、室温で撹拌して反応混合物が均一に溶解し たことを確認した。次に反応溶液に2.5gのポ� �(2-ヒドロキシエチルメタクリレート)修飾ポ� ��スチレンビーズを添加し、凍結脱気により� ��応溶液中の溶存酸素を除去したのち、反応� ��器を60℃で63時間撹拌した。反応終了後、ポ リスチレンビーズと反応溶液を分離し、エタ ノール(300mL)で2回、エタノール/5%アンモニア� ��=9/1(v/v)(300mL)で2回、DMF(200mL)で1回洗浄した。 洗浄終了後、ポリスチレンビーズと洗浄液を 分離した後、真空乾燥することでチアゾール 誘導体が結合した薄茶色のポリ(2-ヒドロキシ エチルメタクリレート)修飾ポリスチレンビ� �ズ(2.61g)を得た。得られたポリスチレンビー� ��の重量増加分から計算した結果、グラフト� ��末端にチアゾール誘導体が平均2分子結合し ており、その当量は0.12meq/gであると見積られ た。FT-IR,ν(cm ^-1 ,reflect):3440(br,O-H),2949(w),1720(s,C=O),1637(w,C=O),1450( m),1243(m),1149(s),1074(s)。

 [実施例38] 4-メチル-N-[4-メチル-5-{3-(2-プロ� �ニルカルボニルアミノ)プロピル}チアゾール -2-イル]ベンズアミドのポリスチレンビーズ� �の固定化(その2)
 200mLのナス型フラスコに塩化銅(I)(500mg,5.0mmol )、ペンタメチルジエチレントリアミン(1.30g,7 .5mmol)、2-プロパノール(22mL)、及びアクリルア ミド水溶液(組成:17.8g/22mL;250mmol)を順次添加し 、室温で撹拌して反応混合物が均一に溶解し たことを確認した。次に反応溶液に5.0gのク� �ロメチル化ポリスチレンビーズ(ペプチド研� ��所製、クロロメチル基含量:0.97meq/g)を添加� �、凍結脱気により反応溶液中の溶存酸素を� �去したのち、反応容器を80℃で18時間撹拌し� ��。反応終了後、ポリスチレンビーズと反応� ��液を分離し、ポリスチレンビーズをエタノ� ��ル(150mL)で洗浄した後、エタノール/5%アンモ ニア水=9/1(v/v)(200mL)で2回洗浄した。洗浄終了� ��、ポリスチレンビーズと洗浄液を分離した� ��、真空乾燥することで淡青色をしたポリア� ��リルアミド修飾ポリスチレンビーズ(12.3g、� ��ラフト率:146%)を得た。なおここでグラフト� ��は
グラフト率=(反応後のポリスチレンビーズ重� ��-反応前のポリスチレンビーズ重量)/(反応前 のポリスチレンビーズ重量)
と定義する。

 次に50mLのナス型フラスコに塩化銅(I)(60mg,0.6 0mmol)、トリス(2-(ジメチルアミノ)エチル)アミ ン(208mg,0.9mmol)、参考例2で合成した4-メチル-N- [4-メチル-5-{3-(2-プロペニルカルボニルアミノ )プロピル}チアゾール-2-イル]ベンズアミド(1. 07g,3.0mmol)、及び2-プロパノール/水=2/1(v/v)の混 合溶媒(3mL)を順次添加し、室温で撹拌して反� ��混合物が均一に溶解したことを確認した。� ��に反応溶液に1.5gのポリアクリルアミド修飾 ポリスチレンビーズを添加し、凍結脱気によ り反応溶液中の溶存酸素を除去したのち、反 応容器を80℃で87時間撹拌した。反応終了後� �反応溶液にエタノール(30mL)及び5%アンモニア 水(5mL)を添加し、室温で1時間撹拌した。次に ポリスチレンビーズと反応溶液を分離し、エ タノール/5%アンモニア水=9/1(v/v)(50mL)で2回、DM F(250mL)で1回洗浄した。洗浄終了後、ポリスチ レンビーズと洗浄液を分離した後、真空乾燥 することでチアゾール誘導体が結合した薄緑 色のポリアクリルアミド修飾ポリスチレンビ ーズ(1.84g)を得た。得られたポリスチレンビ� �ズの重量増加分から計算した結果、グラフ� �鎖末端にチアゾール誘導体が平均2分子結合� ��ており、その当量は0.52meq/gであると見積ら� ��た。FT-IR,ν(cm ^-1 ,reflect):3336(br),2922(m),1654(s,C=O),1600(m),1492(m),1450( m),1028(w),756(m),698(s)。