技术领域 本发明涉及一种实体瘤被动靶向性抗癌前药及 其制备方法， 属于抗肿瘤药物领域。 背景技术 正常组织中的微血管内皮间隙致密、结构完整 ，大分子和脂质颗粒不易透过血管壁。 与正常组织中的微血管相比，实体瘤组织血管 丰富， 微血管形状构造不规则、 膨胀、 管 壁缺失、 内皮细胞排列疏松、 结构完整性差，内皮细胞连接间隙宽大， 淋巴回流缺失， 造成大分子类物质和脂质颗粒具有选择性高通 透性和滞留性，这种现象被称作实体瘤组 织的高通透性禾口滞留效应， 简称 EPR效应（ en-hanced permeabi l ity and retention effect) ₀ 扫描电镜显示人结肠腺癌微血管内皮细胞连接 间隙达 400nm， 而正常组织中微 血管内皮细胞连接间隙平均不到 100nm。 实体瘤组织的病理结构特点， 使得大分子抗癌 药对实体瘤具有被动的靶向性或者选择性的特 征，全身给药后在肿瘤组织中有较多的分 布，又称为实体瘤的被动靶向性； 而小分子抗癌药能够自由通过正常组织和肿瘤 组织的 血管壁，在正常组织和肿瘤组织中的药物分布 一致，是造成抗癌效应选择性差、毒副作用 较强的重要原因之一，不具备被动靶向作用。 Greish K等报道， 相对分子量 >40000的大 分子物质可以克服肾脏的滤过清除， 具有较长的血浆半衰期， 大分子物质体循环时间延 长利于实现 EPR效应，同时减少给药频率。

果胶常是天然的大分子多糖聚合物， 广泛存在于植物的细胞壁中， 是由 α _ (1→ 4) -D-吡喃半乳糖醛酸单位组成的酸性大分子多糖 （Hyunjo Kim, et al. International

Journal of Pharmaceutics, 1998, 161 : 149-159) 。 果胶可通过增强单核巨噬细胞系统， 激 活巨噬细胞、 T细胞和 B细胞、 NK细胞和补体系统， 促进细胞因子分泌， 增强红细胞免疫 等提高宿主免疫功能； 通过改变实体癌细胞膜的生长特性、 影响实体癌细胞内信号传递 途径、 抗自由基作用、 诱导分化与凋亡、 抑制实体癌细胞的核酸与蛋白质合成、 影响实 体癌细胞超微结构、 影响癌基因、 抗突变作用、 抑制实体癌血管形成而发挥直接的抗癌 作用 （中国中医药信息杂志， 1999, 5 : 64) 。 本发明的发明人从 2005年开始研究以果胶 为载体的大分子抗癌前药， 并申请了 3件中国发明专利申请， 申请号分别为

200610020596. 7、 200710201724. 2、 200810306463. 5。 采用小分子果胶， 抗癌药能够自 由通过正常组织和肿瘤组织的血管壁，也容易 排泄。 但是由于其在正常组织和肿瘤组织 中的药物分布一致， 抗癌效应选择性差， 药物在体内停留时间短， 需给药频率较高。 采 用大分子果胶作为载体制备得到的抗癌前药， 能够产生基于 EPR的肿瘤被动靶向性， 在 肿瘤组织有显著的蓄积作用， 而且多次给药并不影响它的分布。 由于果胶在体内不容易 降解， 只能通过肾脏排泄， 过多的大分子果胶聚集体内会造成有可能沉积 到肺、 肾脏等 组织脏器对其功能产生影响， 具体后果目前还没见有相关报道。 发明内容 本发明所要解决的技术问题是果胶抗癌前药基 于 EPR效应的肿瘤被动靶向性， 同时 能够在进入实体瘤组织后， 释放药物并将载体分解为小分子， 利于排泄。

为了实现本发明的目的， 本发明的技术方案是这样实现的：

先将大分子果胶切断为 Mw 0. 5-4. 5万的小分子的果胶，优选 Mw 1_3万，由 Mw 0. 5〜

4. 5万的小分子的果胶与阿霉素反应得到的 Mw为 10〜100万的果胶-阿霉素偶联物 （优 选 20万〜 80万， 进一步优选 40万 -60万）， 果胶 -阿霉素偶联物制成混悬剂 （果胶-阿 霉素偶联物加入水中， 再加入 PVP和甘油混匀）后然后通过纳米超高压均质机 处理， 得 到粒径 100nm〜200nm，优选 130nm_180nm，熔点 220 °C〜245 °C实体瘤被动靶向性抗癌前 药。 其中所述果胶 -阿霉素偶联物中， 果胶与阿霉素通过酰胺键连接， 果胶与果胶之间 通过果胶分子的羧基与羟基缩合成的酯键连接 。 该抗癌前药能够在进入实体瘤组织后， 能够产生基于 EPR的肿瘤被动靶向性， 在肿瘤组织有显著的蓄积作用， 具有较长的血浆 半衰期， 体循环时间延长； 同时释放药物并将载体分解为小分子， 利于排泄。 本发明所 述分子量为均为重均分子量 Mw。

所述实体瘤被动靶向性抗癌前药的水溶解度为 42 mg/L。

制备实体瘤被动靶向性抗癌前药的方法由以下 步骤完成：

a、 Mw 0. 5〜4. 5万 （优选 Mw 1〜3万） 的小分子果胶溶解于水， 加入盐酸阿霉素， 混合均匀后与 EDC - HC1反应，透析，干燥得到 MwlO万〜 100万的果胶-阿霉素偶联物； b、 果胶 -阿霉素偶联物加入水中， 再加入 PVP和甘油 （也可以加入一定量的卵磷脂 或 DMS0, 加入量不超过果胶-阿霉素偶联物的 2%)， 混合均匀制成混悬剂， 经纳米超高 压匀质仪处理， 即得粒径 100 _n m-200nm的实体瘤被动靶向性抗癌前药。

所述果胶-阿霉素偶联物是由小分子的果胶与� �霉素于 pH为 5〜7， EDC · HC1作 用下， 40〜60°C反应得到。

进一步地， b步骤中， PVP的用量为果胶-阿霉素偶联物质量的 1倍〜 6倍， 甘油的 用量为果胶-阿霉素偶联物质量的 0. 1%-0. 8%。 优选的处理方法是： 混悬剂分 3次进纳米超高压匀质仪处理， 第一次压力 120mpa， 第二次压力 180mpa， 第三次压力 190mpa。

其中， 所述小分子果胶是将果胶溶于水， 与 NaOH溶液在 pH=13条的条件下反应， 然后用浓盐酸调 pH到中性， 截留分子量得到。

本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药在溶酶中的 水解， 酰胺键断裂， 释放阿霉素。 水解、超滤后截留下的滤饼， 用 95%乙醇反复洗涤滤饼直至液体无红色以去除残 留的阿 霉素， 蒸干溶剂， 加入蒸熘水溶解沉淀， 凝胶渗透色谱测定分子量为 1万〜 3万。

在相同的阿霉素浓度下 （2mg/ml) ， 本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药 （果胶-阿 霉素偶联物）注射剂对人源性肺癌细胞 NCI-H446和 A549的细胞抑制率分别为 65.23% 和 68.52%， 与盐酸阿霉素的相当 （63.33%和 67.62%)。 在黑色素瘤 B16肺转移模型小 鼠的疗效研究中， 果胶-阿霉素偶联物组小鼠的荷瘤生存期为 42.3 ± 12. 4天， 明显高于 盐酸阿霉素组 （23.1 ± 10.2天）。 附图说明 图 1、 紫外光谱；

图 2、 红外光谱图； a、 阿霉素； b、 果胶一阿霉素轭合物； c、 果胶； d、 阿霉素和果胶 的物理混合物；

图 3、 本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药粒径分布图 ；

图 4、 本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药溶酶体水解 试验； 系列 1为实验组， 系列 2为空 白组； 横坐标时间 （小时， h)， 纵坐标是药物释放百分率 （％);

图 5、 本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药对肺癌荷瘤 小鼠生存时间的影响。 具体实施方式 先将大分子果胶切断为丽 0. 5-4. 5万的小分子的果胶， 优选 M _w l〜3万， 然后合 成小分子果胶-阿霉素（通过酰胺键连接）， 同时通过果胶分子之间中的羧基与羟基缩合 联成大分子。 然后通过纳米超高压均质机处理， 得到 100nm〜200nm， 分子量为 10万〜 100万实体瘤被动靶向性抗癌前药。

具体制备方法：

1、 小分子果胶的准备： 采用果胶溶解于蒸熘水后用 NaOH反应， 然后用浓盐酸调 pH到中性， 截留得到分子量为 Mw 0. 5〜4. 5万 （优选 1〜3万） 的小分子果胶。

一个具体实施方式： 称量 13.3g果胶， 加蒸熘水 1L搅拌溶解后， 用 5M NaOH调 pH， 使 pH值 =13， 于 65°C反应 10h， 停止反应。 用盐酸将反应液调到中性， 使用截留 分子量为 3万的 millipore过滤， 滤液再通过截留分子量为 1万的 millipore过滤， 收 集没有透过的截留分子量为 1万的固体， 减压浓缩干， 真空干燥得到分子量为 1〜3万 的小分子果胶。

果胶 e

2、 阿霉素的负载及小分子果胶的交联:

2.1反应式

分子量为 1-3万的小分子果胶溶解， 与盐酸阿霉素溶液在 pH为 5〜7， EDC · HC1 ( 1-乙基 -3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐） 作用下， 40-60°C反应， 透析， 干燥， 即 得红褐色固体 （果胶 -阿霉素偶联物）， 红褐色固体难溶于水， 溶解度为 42 mg/L, 熔点 220°C-245°C。

测得载药量为 15-35%， 分子量为 MwlO万〜 100万， 优选 20万〜 80万， 进一步优选

40万 -60万。

紫外可见分光光度反分析， 果胶无吸收， 阿霉素在 479. 5nm处有最大吸收峰， 果胶 与阿霉素混合物在 488. 5nm处有最大吸收峰， 果胶-阿霉素偶联物 P (A)„在 498nm处有最 大吸收峰，吸收发生红移， 这说明阿霉素与果胶发生化学键偶联。

红外光谱上扫描， 与果胶相比， ？(^„在 1620 cm— ¹ 处出现酰胺 I带和酰胺 II带的混 合吸收峰， 与 1750 cm- ¹ 的酯键峰相比峰面积比值显著增加， 说明果胶之间是以酯键交 联。 且在 1100 _£ ； ₁ ^ ¹ 和 1017 cm— ¹ 处出现明显的阿霉素的蒽环特征吸收峰， 1411. 23处出 现伯酰胺的吸收峰， 说明果胶与阿霉素是以酰胺键的形式结合。

上述红褐色固体研磨处理后加入一定量的 PVP， 纳米超高压匀质仪（T-200D型河北 廊坊通用机器制造有限公司）处理， 得到分子量 10〜100万， 粒径 100 _n m-200nm的实体 瘤被动靶向性抗癌前药。

3、 大分子难溶性果胶-阿霉素偶联物经研磨处理� �加入一定量的 PVP， 纳米超高压 匀质仪处理，得到分子量 10万〜 100万，粒径 100nm-200nm的实体瘤被动靶向性抗癌前 药。

以下通过具体实施例对本发明作进一步详述， 但不应理解为是对本发明的限制。 实施例 1本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药 Ρ (Α) _Π 的制备

1、 小分子果胶的准备：

称量 13.3g果胶， 加蒸熘水 1L搅拌溶解后， 用 5M NaOH调 pH， 使 pH值 =13， 于 65°C反应 10h，停止反应。用浓盐酸将反应液调到中性， 使用截留分子量为 3万的 millipore 过滤， 滤液再通过截留分子量为 1万的 millipore过滤， 收集没有透过的截留分子量为 1 万的固体， 减压浓缩干， 真空干燥得到分子量为 1〜3万的小分子果胶。

2、 阿霉素的负载及小分子果胶的交联：

称量分子量为 1〜3万的小分子果胶阿霉素 lg加到反应瓶中， 加 100ml水， 搅拌溶 解， 称盐酸阿霉素 0.5g， 加 50ml蒸熘水超声溶解， 将盐酸阿霉素溶液加到反应瓶中， 另用 50ml蒸熘水洗涤瓶上附着的阿霉素。 称 lg EDC · HC1加入到反应瓶中后升温 50 °C反应 6. 5h， 反应完毕后， 装入截留分子量 （丽） 为 3500的透析袋中透析 ld， 每 3h 换一次蒸熘水。 蒸干溶剂， 真空干燥 12h， 得红褐色固体， 大分子难溶果胶 -阿霉素偶联 物 1. lg， 难溶于水， 溶解度为 42 mg/L, 熔点 220°C-245°C。

采用分光光度法测定载药量：

标准曲线的建立： 准确配制盐酸阿霉素标准溶液， 浓度分别为 10. 00、 20. 00、

30. 00、 40. 00、 50. 00 μ g/mL标准液， 于 479. 5 nm (紫外可见分光光度计光谱扫描确定） 处测定吸光度。

样品载药量的测定： 准确称取一定量的 Ρ (Α) _Π ， 溶于二次水中配成待测溶液，测定吸 光度， 测得载药量为 21. 4%。

结构表征

为了避免 Ρ (Α) _Π 中羧酸盐对酯键和酰胺键的影响， 通过调节 ρΗ值， 将 Ρ (Α) _Π 非盐处 理， 制备成前药样品。用二次水溶解阿霉素、果胶 、本发明样品、果胶与阿霉素混合物， 紫外光谱和红外光谱分别如图 1， 图 2所示。

图 1中， 阿霉素在 479. 5nm处有最大吸收峰， 果胶与阿霉素混合物在 488. 5nm处有 最大吸收峰， ？^^在 498nm处有最大吸收峰， 果胶无吸收。 P (A)„在 498nm处吸收发生 红移， 这说明阿霉素与果胶发生化学键偶联。

图 2中， 与果胶相比， 果胶一阿霉素在 1620 cm— ¹ 处出现酰胺 I带和酰胺 II带的混 合吸收峰与 1750 cm" ¹ 的酯键峰相比峰面积比值显著增加，说明 果胶与果胶之间以酯键交 联。 且在 1100 cm— ¹ 和 1017 cm— ¹ 处出现明显的阿霉素的蒽环特征吸收峰， 1411. 23处出 现伯酰胺的吸收峰， 说明果胶与阿霉素是以酰胺键的形式结合的。

3、 实体瘤被动靶向性抗癌前药的制备：

0. 468g大分子难溶性果胶-阿霉素偶联物 （载药量 21. 4%) 加入 lg PVP, 3ml甘油 和 50ml水， 研磨处理制成混悬剂， 经纳米超高压匀质仪 （T-200D型河北廊坊通用机器 制造有限公司）处理。 分 3次分别进纳米超高压匀质仪处理， 第一次压力 120mpa， 第二 次压力 180mpa，第三次压力 190mpa。经过纳米超高压匀质仪处理后的粒径分 布图如图 3。

纳米超高压匀质仪处理后是悬浮液， 得到分子量 10-100万， 粒径 100nm-200nm的 实体瘤被动靶向性抗癌前药。 实施例 2本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药 Ρ (Α) _Π 的制备

1、 小分子果胶的准备： 称量 13. 3g果胶， 加蒸熘水 1L搅拌溶解后， 用 5M NaOH调 pH， 使 pH值 =13， 于 65 °C反应 10h， 停止反应。 用浓盐酸将反应液调到中性， 使用截留分子量为 1 万的 mi l l ipore过滤， 滤液再通过截留分子量为 7000的透析袋透析， 收集透析液， 减压浓缩 干， 真空干燥得到分子量为 7000-10000的小分子果胶。

2、 阿霉素的负载及小分子果胶的交联：

称量分子量为 7000〜 10000的小分子果胶阿霉素 lg加到反应瓶中， 加 100ml水， 搅拌溶解， 称盐酸阿霉素 0. 5g， 加 50ml蒸熘水超声溶解， 将盐酸阿霉素溶液加到反应 瓶中， 另用 50ml蒸熘水洗涤瓶上附着的阿霉素。 称 lg EDC * HCl加入到反应瓶中后升 温 50°C反应 6. 5h， 反应完毕后， 装入截留分子量（Mw)为 3500的透析袋中透析 ld， 每 3h换一次蒸熘水。 蒸干溶剂， 真空干燥 12h， 得红褐色固体， 大分子难溶果胶-阿霉素 偶联物 1. 2g， 载药量 24. 2%。

0、 468g大分子难溶性果胶-阿霉素偶联物， 加入 lg PVP， 3ml甘油和 2%的卵磷脂溶 液 50ml做溶剂， 研磨处理制成混悬剂， 经纳米超高压匀质仪 （T-200D型河北廊坊通用 机器制造有限公司） 处理。 分 3次分别进纳米超高压匀质仪处理， 第一次压力 120mpa， 第二次压力 lSOmpa, 第三次压力 l ⁹ 0mpa。

得到分子量 10-100万， 粒径 100nm-200nm的实体瘤被动靶向性抗癌前药。

实施例 3本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药 Ρ (Α) _Π 的制备

1、 小分子果胶的准备：

称量 13. 3g果胶， 加蒸熘水 1L搅拌溶解后， 用 5M NaOH调 pH， 使 pH值 =13， 于 65 °C反应 10h， 停止反应。 用浓盐酸将反应液调到中性， 使用截留分子量为 5 万的 mi l l ipore过滤， 滤液使用截留分子量为 2万的透析袋透析 48h， 每 3h换一次蒸熘水。 透析液减压浓缩干， 真空干燥得到分子量为 2万 -5万的小分子果胶。

2、 阿霉素的负载及小分子果胶的交联：

称量分子量为 2-5万的小分子果胶 lg加到反应瓶中， 加 100ml水， 搅拌溶解， 称 盐酸阿霉素 0.5g，加 50ml蒸熘水超声溶解，将盐酸阿霉素溶液加到� �应瓶中，另用 50ml 蒸熘水洗涤瓶上附着的阿霉素。称 lg EDC -HC1加入到反应瓶中后升温 50°C反应 6. 5h， 反应完毕后， 装入截留分子量 （Mw) 为 3500的透析袋中透析 ld， 每 3h换一次蒸熘水。 蒸干溶剂， 真空干燥 12h， 得红褐色固体， 大分子难溶果胶-阿霉素偶联物 1. 2g， 载药 量 25· 2%。

0. 468g大分子难溶性果胶-阿霉素偶联物， 加入 lg PVP, 50ml水和 DMS0的混合溶 剂 （水： DMS0=0. 75 : 0. 25)， 制成混悬剂， 经纳米超高压匀质仪 （T-200D型河北廊坊通 用机器制造有限公司）处理。分 3次分别进纳米超高压匀质仪处理，第一次压� � 120mpa， 第二次压力 180mpa， 第三次压力 190mpa。

得到分子量 10-100万， 粒径 100nm-200nm的实体瘤被动靶向性抗癌前药。 试验例 1本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药溶酶体水� �试验

溶酶体来源： 参照 《细胞生物学实验方法与技术》 提取得到纯化的溶酶体。

实验组： 25mL的锥形瓶中加入 10mL磷酸盐缓冲液（PBS ) (pH=5 )溶液， lmg/mL 实施例 2 制备的实体瘤被动靶向性抗癌前药 10 mg， 再加入 0.4mL 溶酶体的蔗糖 (0.25mol/L)混悬液， 置于 37°C恒温箱中摇床避光孵育。

对照组不加入溶酶体， 其他条件相同。

分别于保温 0.25h， 0.5h， lh， 2.5h和 18h取样， 每次取样 0.5 mL, 取样后依次加 入 0.5 mL 超纯水， 0.2 mL 1 mol/L 的 Na ₂ C0 ₃ /NaHC0 ₃ (pH 9.8)缓冲液， 2.5 mL CHCl ₃ -MeOH (3 : 1), 混合均匀， 3,500 rpm离心 20 min， 阿霉素分布在有机相。

高效液相色谱检测阿霉素含量。 色谱柱： Phenomenex Luna C ₁₈ (250x4.6 mm, 5 μιη); 流动相为： 甲醇： 乙腈： 磷酸缓冲盐 =7:4:6; 检测波长 480nm; 流速： 0.8 mL/min。

实验结果如图 4: 实验组最大释放为 35%， 在 6h后达到 30%， 并且在 6-30h范围内 基本稳定在 30%， 对照组最大释放为 7%， 在整个释放过程中的始终释放很低。 说明本 发明实体瘤被动靶向性抗癌前药在溶酶中水解 ， 酰胺键断裂， 释放阿霉素。

碱法降脂并且超滤后的小分子果胶分子量测定 ：

收集超滤后截留下的滤饼， 用 95%乙醇反复洗涤滤饼直至液体无红色， 蒸干溶剂， 加入蒸熘水溶解沉淀， 凝胶渗透色谱测定分子量。

色谱条件： Aglientl lOO系列 HPLC， 1362A视差检测器和 G1310A单元泵；色谱柱： Ultrahydrogel™ linear column ( 7.8 X 300mm, Waters); 柱温： 40°C ; 流通池温度： 35 °C ; 流动相： 0.005M KNO ₃ ; 流速： 0.5mL/min; 样品浓度： 5mg/mL， 用 0.05 %叠氮化钠溶 解； 进样量： 20 μ ί 。

标准曲线的制备：用葡聚糖作用标准品 Dextrans (Mw= 5000， 25000， 50000， 80000， 270000)

测得其分子量为 1-3万。

同等条件下对市售柑橘高酯果胶分子量测定： 测得其绝对分子量为 30000〜600000。 试验例 2应用 MTT法观察本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药对 体外肿瘤细胞系生 长活性的抑制

1、 受试药物

盐酸阿霉素， 购自浙江海正药业股份有限公司， 用生理盐水溶解配制成含阿霉素 2mg/ml,

本试验采用的实体瘤被动靶向性抗癌前药为实 施例 1制备 (相当于阿霉素 2mg/ml)。

2、方法：将用 RPMI 1640培养基培养的对数生长期生长的细胞溶液� �浓度为 50000 个 /ml) 接种于 96孔板上， 0.1ml /孔。 孵育 24小时后给予相应药物的处理。 待药物处 理 24小时后， 加入 0.02ml的 3-(4， 5-二甲基噻唑 -2)-2， 5-二苯基四氮唑溴盐（MTT)

( 5mg/ml)处理 4小时，移去培养液加入 0.15ml的二甲亚砜（DMSO)，用酶标仪在 570nm 处测定其光吸收值。

抑制率(％)= ( 1— 吸收值吸收值 /空白对照组吸收值） χ ΐοο%， 各组不同药物的细胞 抑制率见表 1。

不同药物对各种肿瘤细胞的抑制率

试验例 3本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药对肺转移� �的实验研究

1. 主要材料

盐酸阿霉素， 购自浙江海正药业股份有限公司；

果胶 -阿霉素偶联物为本发明实体瘤被动靶向性抗� �前药为实施例 2 样品 （相当于 阿霉素 2mg/ml)。

细胞和动物： 清洁级近交系 C57BL/6小鼠购自四川大学华西实验动物中心， 雌性， 6-7周龄， 体重 20±3g。 实验过程中自由饮水及进食。 每日光照 12小时， 小鼠（5只 /笼) 笼均采用中央换气系统通气。小鼠黑色素瘤细 胞株 B16购于上海细胞生物研究所， 由本 实验室保种。 2.方法：

细胞培养： 常规培养于 RPMI 1640 100mL/L胎牛血清加双抗 （青霉素 100U/mL， 链霉素 100mg/L)的培养液内， 置于 37°C， 50mL/L二氧化碳培养箱中培养.稳定传代 3， 4代后， 取对数生长期细胞， 经 2.5g/L胰酶消化后用无血清培养液重悬收集细胞 ， 用无 血清的 1640培养基调整细胞密度备用。

小鼠肺部转移肿瘤模型的建立： 取 C57BL/6小鼠， 随机分为数个组， 用 750mL/L 质量浓度的乙醇消毒小鼠尾部皮肤， 取 B16黑色素瘤细胞溶液于小鼠尾静脉注射， 接种 剂量为 0.1mL。

于小鼠接种肿瘤细胞后 4〜5天开始给药，每只小鼠每周给药 2次， 40〜50μ1/只 /次。 观察小鼠的荷瘤生存期。

本发明实体瘤被动靶向性抗癌前药对肺癌荷瘤 小鼠生存时间的影响见图 5。 由图 5 可见在黑色素瘤 B16肺转移模型小鼠的疗效研究中， 果胶-阿霉素偶联物组小鼠的荷瘤 生存期为 42.3 ± 12. 4天， 明显高于盐酸阿霉素组 （23. 1 ± 10. 2天）。