SCHMITZ THOMAS
NICKISCH KLAUS
| DE19543052A1 | 1997-05-07 |
| 1. | Verfahren zur Herstellung von Fludarabinphosphat Lithium, Natrium, Kalium, Calciumund Magnesiumsalze, wobei Fludarabinphosphat in Waser gelöst, zu dieser Lösung unter Rühren und bei Temperaturen von unterhalb 30 °C eine Alkali oder Erdalkalibasenlösung gegeben und diese Lösung langsam in 4555° C warmes Aceton eingefällt, gekühlt und der ausgefallene Niederschlag gegebenenfalls filtriert und gegebenenfalls getrocknet wird. |
| 2. | Verfahren zur Herstellung von Fludarabinphosphat, wobei die Lithium, Natrium, Kalium, Calciumund Magnesiumsalze nach Anspruch 1 hergestellt und anschließend mit Mineralsäure freigesetzt werden. |
| 3. | Verfahren zur Herstellung von Fludarabinphosphat, wobei die Lithium, Natrium, Kalium, Calciumund Magnesiumsalze in lagerstabilerer Form nach Anspruch 1 hergestellt und anschließend mit Mineralsäure freigesetzt werden. |
| 4. | Verfahren zur Reinigung von Fludarabinphosphat, wobei rohes Fludarabin phosphat in Waser gelöst, zu dieser Lösung unter Rühren und bei Temperaturen von unterhalb 30 °C eine Alkalioder Erdalkalibasenlösung gegeben und diese Lösung langsam in 4555 °C warmes Aceton eingefällt, gekühlt und der ausgefallene Niederschlag filtriert und gegebenenfalls getrocknet und in einer lagerstabilen Form als Lithium, Natrium, Kalium, Calciumoder Magnesiumsalze erhalten wird und anschließend diese lagerstabile Form in Wasser gelöst und mit Mineralsäure angesäuert und der ausgefällte Niederschlag filtriert und getrocknet wird. |
| 5. | Fludarabinphosphat mit einer Reinheit von mindestens 99,5 %. |
| 6. | Fludarabinphosphat mit einer Reinheit von größer 99,55 %. |
| 7. | Fludarabinphosphat mit einer Reinheit von größer 99,6 %. |
| 8. | Fludarabinphosphat mit einer Reinheit von größer 99,7 %. |
| 9. | Fludarabinphosphat mit einer Reinheit von größer 99,8 %. |
| 10. | Fludarabinphosphat mit einer Reinheit von größer 99,85 %. |
Fludarabin-phosphat ist der"International Nonproprietary Name" (INN) von 9-ß-D-Arabinofuranosyl-2-fluroadenin-5'-O-dihydrogenphospha t. Die erste Synthese der Vorstufe des Fludarabin-phosphat, dem 9-ß-D-Arabinofuranosyl-2-fluroadenin, wird in US-PS 4,188,378 beschrieben. Diese Substanz weist stark cytotoxische Eigenschaften auf, und es wurden verschiedene Derivate davon, mit dem Ziel der Reduzierung von Nebenwirkungen, hergestellt. Innerhalb der US-PS 4,357,324 wird das 5'-Phosphat (Prodrug), also das Fludarabin-phosphat und dessen Herstellung beschrieben. In weiteren Schriften, beispielsweise US-PS 4,210,745, WO 91/08215 und WO 94/12514 werden alternative Herstellungsverfahren offenbart.
Der derzeit benutzte Herstellungsweg geht von 9-ß-D-Arabinofuranosyl-2-fluroadenin aus, das mit Trimethylphosphat und Phosphoroxychlorid umgesetzt wird (Phosphorylierung). Diese Edukte werden zur Reaktion gebracht und anschließend aus Wasser kristallisiert. Die bei der Umkristallisation anzuwendende Temperatur von etwa 75 °C zerstört einen Teil der Substanz, da Fludarabin-phosphat bei dieser Temperatur im Wasser thermisch instabil ist. Nachteilig ist weiter, daß diese aus dem Stand der Technik bekannte Umkristallisation nur zu einer schwachen Verbesserung der Reinheit führt und das Verfahren nur in Ansatzgrößen, auch für eine technische Herstellung, von etwa unter 1 kg ausgeführt werden kann. Die innerhalb der DE 41 41 454 A 1 beschriebenen Salze des Fludarabin-phosphats sind nach der Lehre dieser Schrift nicht herstellbar. Bei der Anwendung der beschriebenen Reaktions- bedingungen würde es hauptsächlich zu einer Spaltung von Phosphorsäure im Molekül kommen.
In der US 5,296,589 wird in Spalte 10, Zeilen 37-40, die Wasserlöslichkeit des Natriumsalzes von Fludarabin-phosphat (2-Fluor-ara-adenosin 5'-phosphat) beschrieben. Weiter wird in Spalte 9, Zeilen 61-69, beschrieben, daß sich das Salz durch Umkristallisation aus Wasser nicht reinigen läßt, da diese Bedingungen zur
Zersetzung der Verbindung führen würden (siehe auch DE 195 43 052 A1, WO 92/0312 AI und US 5,506,352).
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, ein Reinigungsverfahren bereitzustellen, welches zu einer deutlich verbesserten Qualität (Reinheit) von Fludarabin-phosphat führt und das im großtechnischen Verfahren problemlos auch auf Mengen von über einem Kilogramm angewendet werden kann.
Gelöst wird diese Aufgabe gemäß der Lehre der Patentansprüche.
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Fludarabin-phosphat Lithium-, Natrium-, Kalium-, Calcium-und Magnesiumsalze, wobei Fludarabin- phosphat in Wasser suspendiert, zu dieser Lösung unter Rühren und bei Temperaturen von unterhalb 30 °C eine Alkali-oder Erdalkalibasenlösung gegeben und diese Lösung langsam in 45-55 °C warmes Aceton eingefällt, gekühlt und der ausgefallene Nieder- schlag gegebenenfalls filtriert und gegebenenfalls getrocknet wird und weiter ein Verfahren zur Herstellung von Fludarabin-phosphat, wobei die Lithium-, Natrium-, Kalium-, Calcium-und Magnesiumsalze nach Anspruch 1 hergestellt und anschließend mit Mineralsäure freigesetzt werden.
Als geeignete Basen werden Hydroxide und Carbonate der Alkalien oder Erdalkalien verwendet, die gut in Wasser löslich sind ; beispielsweise Lithium-, Natrium-, Kalium- oder Calciumhydroxid ; Natrium-oder Kaliumcarbonat.
Wie überraschenderweise gefunden wurde, können Alkali-und Erdalkalisalze des Fludarabin-phosphats als stabile, kristalline und gut charakterisierbare Substanzen hergestellt werden, die sich durch Kristallisation reinigen lassen. Es hat sich gezeigt, daß sich diese Alkali-und Erdalkalisalze des Fludarabin-phosphats problemlos isolieren lassen ; auch eine Lagerung über längere Zeit überstehen diese, ohne Instabilitäten zu zeigen. Besonders geeignet sind die Lithium-, Natrium-, Kalium-, Calcium-und Magnesiumsalze.
Hier hat sich mit Vorteil herausgestellt, daß diese Kristallisation besonders gut aus Wasser/Aceton erfolgt. So wird Fludarabin Phosphat durch Zugabe von Natrium- carbonatlösung oder den analogen Basenlösungen der anderen Elemente gelöst und diese wäßrige Lösung in Aceton eingefällt. Beispielsweise werden 6,1 kg Fludarabin- Phosphat in 35 1 Wasser suspendiert ; es werden 1,79 kg Natriumcarbonat, gelöst in 7,9 1 Wasser, zugegeben und diese Lösung in 150 1 Aceton bei 45-55 °C,
vorzugsweise bei 50 °C, eingefällt. Die Temperatur darf keinesfalls über 60 °C steigen, da sonst als Nebenreaktion die Substitution von Fluor durch Hydroxyl erfolgt, was unerwünscht ist. Bei der Abkühlung der Mischung bleiben die NICHT-Phospha- tierten Derivate in Lösung, das gewünschte Produkt kristallisiert.
Diese Fludarabin-phosphat-Salze der Alkalien und Erdalkalien führen beim Auflösen in Wasser nicht zu stark sauren, sondern zu fast neutralen Lösungen. Die Rückführung dieser Salze in freies Fludarabin-phosphat gelingt durch Versetzen mit starker Mineralsäure ohne Schwierigkeiten. Als Mineralsäuren finden beispielsweise Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure oder Phosphorsäure Anwendung. Bei der Freisetzung der freien Base bleiben die MEHRFACH-phosphatierten Nebenprodukte in Lösung.
Die beanspruchten Salze des Fludarabin-phosphats können als Vorstufen von Fludarabin-phosphat problemlos über längere Zeit gelagert werden und im Bedarfsfall der Wirkstoff freigesetzt werden.
Die Erfindung betrifft auch Fludarabin-phosphat mit einer Reinheit von mindestens 99,5 %. Gemäß des Standes der Technik konnte der Wirksoff bisher nur in einer Reinheit von etwa 98,0-98,5 % erhalten werden. Es ist unmöglich, durch die herkömmlichen Kristallisationsverfahren, beispielsweise aus Wasser, einen Reinheitsgrad von 98,5 % zu überschreiten ; auch dann, wenn mehrfach dieselbe Charge kristallisiert wird. Problematisch ist diese herkömmliche Reinigungsmethode dann, wenn die Zeit für das Aufheizen und Filtration der beispielsweise wäßrigen Lösung zu lange Zeit benötigt ; dies sind Zeiten von 25 min. und mehr. Es kommt in diesem Fall zur Bildung von diversen Verunreinigungen, gummiartigen Massen, die sich nicht mehr durch Kristallisationsmethoden entfernen lassen.
Durch das erfindungsgemäße Verfahren lassen sich Fludarabin-phosphat Reinheiten beispielsweise von 99,5 ; 99,55 ; 99,6 ; 99,65 ; 99,7 ; 99,75 ; 99,8 ; 99,9 oder 99,95 % erhalten ; bereits dann, wenn Fludarabin-phosphat nur einmal nach dem erfindungs- gemäßen Verfahren gereinigt wird. Es ist aber auch möglich, das Verfahren für eine Fludarabin-phosphat-Charge zwei-und mehrfach anzuwenden.
Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern : Beispiel 1 FLUDARABIN-PHOSPHAT-DINATRIUMSALZ 5,0 g Fludarabin-phosphat in einer Reinheit von 98,5 % werden in 30 ml Wasser suspendiert und etwa 3-5 Minuten gerührt. Zu dieser Suspension werden unter Rühren und bei Temperaturen von unterhalb 30 °C 6,5 ml einer Sodalösung (18,5 Gewichtsprozent) gegeben. Nach beendeter Zugabe wird die Mischung 15 Minuten gerührt und anschließend vom ungelösten Material filtriert. Die so erhaltene klare Lösung wird langsam in Aceton (bei 50 °C) eingefällt. Es wird 2 Stunden nachgerührt und gekühlt. Der ausgefallene Niederschlag wird filtriert, mit Aceton gewaschen und getrocknet ; es werden 5,0 g des Fludarabin-phosphats dinatriumsalz erhalten, 98 % der Theorie.
Schmelzpunkt : 235 °C ; Reinheit : 98,5 % Analyse : Ber.. für C1oHllFNa2Nso7px2H2o (445,20) C, 26,98 ; H, 3,39 ; F, 4,27 ; N, 15,73 ; P, 6,96 ; NalO, 33 Gefunden : C 27,15 ; H 3,93 ; N15,72 ; Na 9,65 ; P 6,15 IR (KBr) : and 980 cm-1.
NMR (D2O) : 4,05-4,22 m (3H ; H-4' ; both H-5') ; 4,45-4,60 m (2H ; H-2'und H-3') ; 6,2 d (1H ; H-l) ; 8,45 s (1H ; H-8).
Beispiel 2 FREISETZUNG VON FLUDARABIN-PHOSPHAT AUS DEM DINATRIUMSALZ 5,0 g Fludarabin-phosphat Dinatriumsalz nach Beispiel 1 werden innerhalb von 3-5 Minuten in 35 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird filtriert, langsam mit 5 ml Salzsäure (37 % ig) versetzt und 1-2 Stunden gerührt. Der ausgefallene Niederschlag wird abgesaugt, mit Eiswasser und Ethanol gewaschen und ergibt 4,0 g Fludarabin- phosphat, 90 % der Theorie.
Schmelzpunkt 202-203 °C ; Reinheit : 99,6 % Analyse, Ber. : ClOH13FN507P (365,21) C, 32,89 ; H, 3,59 ; N, 19,17 ; F, 5,20 ; P, 8,48 Gefunden :. : C, 32,81 ; H, 3,65 ; N, 19,03 ; P, 8,41 IR (KBr) : 3443,3326,3123,2925,2950-2100,1663,1591,1211,1126, und 1050cm- !.
NMR (DMSO) : 3,94-3,99 m (1H ; H-4') ; 4,06-4,14 m (3H ; H-3' ; both H-5') ; 4,14- 4,18 m (1H ; H-2') ; 5,4-6,1 broad (OH protons) ; 6,17 d (1H ; H-1') ; 7,6-8,0 broad (NH-protons) ; 8,14 s (1H ; H-1') 9-11 broad (P-OH).
Beispiel 3 FLUDARABIN-PHOSPHAT DILITHIUMSALZ 10,0 g Fludarabin-phosphat in einer Reinheit von 97,4 % werden in 70 ml Wasser innerhalb von etwa 5 Minuten suspendiert und mit einer wäßrigen Lithium- Hydroxydlösung (10 %) versetzt. Diese Lösung wird eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt und anschließend filtriert. Die so erhaltene klare Lösung wird in 250 ml Aceton (bei 50 °C) eingefällt und 1 Stunde nachgerührt. Der ausgefallene Niederschlag wird filtriert, mit Aceton gewaschen und ergibt nach Trocknung 4,3 g des Fludarabin-phosphat-dilithiumsalz. (90 % der Theorie).
Schmelzpunkt 240-260 °C, Reinheit : 98,5 % Analyse : Ber. : für CloHnFLiOyP x 3H20 (431,12) C, 27,86 ; H, 3,98 ; F, 4,41 ; N, 16,25 ; P, 7,18 ; Li, 3,22 Gef. : C 27,15 ; H 3,86 ; N15,76 ; Li, 3,05 ; P 6,72 NMR (D20) : 4,05-4,22 m (H-4' ; H-5') ; 4,45-4,55 m (H-2'und H-3') ; 6,25 d (H-1') ; 8,50 s (H-8).
Die Freisetzung gemäß dem Beispiel 2 führt zu einer Fludarabin-phosphat Reinheit von 99,85%.
Beispiel 4 FLUDARABIN-PHOSPHAT-DIKALIUMSALZ 5,0 g Fludarabin-phosphat in einer Reinheit von 96,1 % werden in 30 ml Wasser gelöst ; zu dieser Lösung werden unterhalb von 30 °C 6,5 ml einer Kaliumcarbonat- lösung (18,5 Gew. %) zugegeben. Es wird 15 Minuten nachgerührt, danach vom festen Material filtriert. Die so erhaltene klare Lösung wird bei 50° in Aceton eingefällt, auf Raumtemperatur abgekühlt und 2 Stunden nachgerührt. Der ausgefallene Niederschlag wird filtriert und zweimal mit Aceton gewaschen.
Erhalten werden 4,5 g Fludarabin-phosphat Dikaliumsalz.
Schmelzpunkt 220-230 °C, Reinheit : 98,55 %.
IR (KBr) : und 980 cm-l.
NMR (D20) : 4,0-4,2 m (H-4' ; H-5') ; 4,4-4,60 m (H-2'und H-3') ; 6,25 d (H-1') ; 8,5 s (H-8).
Die Freisetzung gemäß dem Beispiel 2 führt zu einer Fludarabin-phosphat Reinheit von 99,80 %.
Beispiel 5 FLUDARABIN-MAGNESIUMSALZ 10,0 g Fludarabinphosphat in einer Reinheit von 97,5 % werden in 100 ml Wasser innerhalb von etwa 5 Minuten suspendiert ; zu dieser Lösung wird Magnesiumoxyd gegeben. Die Mischung wird eine Stunde bei Raumtemperatur nachgerührt und anschließend filtriert. Die klare Lösung wird in 200 ml Aceton eingefällt, 1 Stunde nachgerührt und das Kristallisat durch Filtration getrennt. Es werden 10,0 g (95 % der Theorie) des Fludarabin-phosphat Magnesiumsalz erhalten.
Schmelzpunkt : 260 °C, Reinheit : 98,45 % Analyse : Ber. für C1oHllFMgNsO7P x2H20 (423,525) C, 28,36 ; H, 3,57 ; F, 4,49 ; Mg, 5,74 ; N, 16,54 ; P, 7,31 Gefunden : C, 27,99 ; H, 3,92 ; Mg, 5,54 ; N, 16,38 ; IR (KBr) : and 980 cm-1.
NMR (D20) : 4,0-4,2 m (H-4' ; H-5') ; 4,5-4,60 m (H-2'und H-3') ; 6,2 d (H-l') ; 8,4 s (H-8).
Die Freisetzung gemäß dem Beispiel 2 führt zu einer Fludarabin-phosphat Reinheit von 99,55 %.