Ausgewählte CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die CGRP-Antagonisten der allgemei- nen Formel

deren Tautomere, deren Diastereomere, deren Enantiomere, deren Hydrate, deren Gemische und deren Salze sowie die Hydrate der Salze, insbesondere deren physio¬ logisch verträgliche Salze mit anorganischen oder organischen Säuren, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel, deren Verwendung und Verfahren zu ihrer Herstellung.

In der obigen allgemeinen Formel (I) bedeuten

A einen Rest der Formel

X ein Sauerstoffatom, eine Methylen- oder NH-Gruppe, R1 einen Rest der Formel

-NR2R3 einen Rest der Formel

CH,

Besonders bevorzugte Verbindungen der obigen allgemeinen Formel (I) sind beispielsweise folgende:

deren Tautomere, deren Diastereomere, deren Enantiomere, deren Hydrate, deren Gemische und deren Salze sowie die Hydrate der Salze, wobei den Verbindungen

(1 ) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-oxo -2-[4-(2-piperidin- 1 -yl-ethyl)-piperidin-1 -yl]-ethylester,

(2) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4- (1-aza-bicyclo- [2.2.2]oct-3-yl)-piperazin-1-yl]-2-oxo-ethylester,

(3) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[d][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4- (5-methyl-2,5-diaza- bicyclo[2.2.1]hept-2-yl)-piperidin-1-yl]-2-oxo-ethylester,

(4) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(f?)-2-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-1-(5 -dimethylamino- pentylcarbamoyl)-ethylester,

(5) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[αf][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-oxo -2-[4-((3R,5S)- 3,4,5-trimethyl-piperazin-1-yl)-piperidin-1-yl]-ethylester,

(6) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[cy][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-CRJ-i^-amino-S-chlor-δ-trifluormethyl-benzyO^-oxo^-^ -CS.S^.δ.δ- pentamethyl-piperazin-1 -yl)-piperidin-1 -yl]-ethylester, (7) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-(f?)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4 -(4-cyclopropyl- piperazin-1 -yl)-piperidin-1 -yl]-2-oxo-ethylester,

(8) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-(f?)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4 -(1-methyl-piperidin- 4-yl)-[1 ,4]diazepan-1 -yl]-2-oxo-ethylester,

(9) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-(7- dimethylaπnino- methyl-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/lazepin-3-yl)-2-oxo-ethylester,

(10) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4- (cyclopropyl-methyl- amino)-piperidin-1 -yl]-2-oxo-ethylester,

(11 ) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifIuormethyl-benzyl)-2-[4- (hexahydro-pyrrolo- [1 ,2-a]pyrazin-2-yl)-piperidin-1 -yl]-2-oxo-ethylester,

(12) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[cf][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4- (1-ethyl-piperidin-4- yl)-piperazin-1-yl]-2-oxo-ethylester,

(13) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifIuormethyl-benzyl)-2-[4- (8-methyl-8-aza- bicyclofS^.IJoct-S-yO-piperazin-i -yll^-oxo-ethylester,

(14) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1 -(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4-(4-methyl-[1 ,4]di- azepan-1 -yl)-piperidin-1 -yl]-2-oxo-ethylester, (15) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-(f?)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-(4 -cyclopropylmethyl- piperazin-1-yl)-2-oxo-ethylester,

(16) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(f?)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-(4 -azepan-1-yl- piperidin-1-yl)-2-oxo-ethylester,

(17) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[d][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-(4- morpholin-4-yl- piperidin-1-yl)-2-oxo-ethylester,

(18) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[αf][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-(4- imidazol-1-yl- piperidin-1 -yl)-2-oxo-ethylester,

(19) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[cf][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-{(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4 -(4-cyclopropyl- piperazin-1-yl)-piperidin-1-yl]-2-oxo-ethyl}-amid,

(20) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1-(4-chlor-3-trifluormethyl-benzyl)-2-[4-(4-methy l-piperazin-1-yl)- piperidin-1-yl]-2-oxo-ethylester,

(21 ) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-(R)-1-(4-chlor-3-trifluormethyl-benzyl)-2-[4-(1 -methyl-piperidin-4-yl)- piperazin-1-yl]-2-oxo-ethylester,

(22) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[cf][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-[(f?)-1 -(4-amino-3-chlor-5-methyl-benzyl)-2-(4-cyclopropyl-piperazi n- 1 -yl)-2-oxo-ethyl]-amid, (23) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-KRJ-i^-amino-S-chlor-δ-methyl-benzyO^-C^isopropyl-pi perazin-i-yl)- 2-oxo-ethyl]-amid,

(24) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c(l[1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-{(/?)-1-(4-amino-3-chlor-5-ethinyl-benzyl)-2-[4-(4-me thyl-piperazin-1-yl)- piperidin-1-yl]-2-oxo-ethyl}-amid,

(25) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/J[1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-{(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-ethyl-benzyl)-2-[4-(4-methy l-piperazin-1-yl)- piperidin-1-yl]-2-oxo-ethyl}-amid,

(26) (S)-2-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-1-[4-(4-cycl opropyl-piperazin- 1 -yl)-piperidin-1 -yl]-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)- piperidin-1-yl]-butane-1 ,4-dion,

(27) (S)-2-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-1-[4-(cyclop ropyl-methyl- amino)-piperidin-1 -yl]-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3- yl)-piperidin-1 -yl]-butan-1 ,4-dion,

(28) (S)-2-(3-Chlor-4-hydroxy-5-trifluormethyl-benzyl)-1-(4-morph olin-4-yl-piperidin- 1 -yl)-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[α(][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -yl]- butane-1 ,4-dion,

deren Tautomeren, deren Diastereomeren, deren Enantiomeren, deren Hydraten, deren Gemischen und deren Salzen sowie den Hydraten der Salze eine heraus¬ ragende Bedeutung zukommt.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) werden nach prinzipiell bekannten Methoden hergestellt. Die folgenden Verfahren haben sich zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) besonders bewährt:

(a) Zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel

in der X das Sauerstoffatom oder die NH-Gruppe bedeutet und A und R1 bis R3 wie eingangs erwähnt definiert sind:

Umsetzung eines Piperidins der allgemeinen Formel

in der R1 wie eingangs erwähnt definiert ist,

(i) mit einem Kohlensäurederivat der allgemeinen Formel

in der G eine nucleofuge Gruppe, die gleich oder verschieden sein kann, bevorzugt die Phenoxy-, 1 H-lmidazol-1-yl-, 1 /-/-1 ,2,4-Triazol-1-yl-, Trichlor- methoxy- oder die 2,5-Dioxopyrrolidin-i-yloxy-Gruppe, bedeutet, mit der Maßgabe, dass X die NH-Gruppe darstellt, oder

(ii) mit einem Kohlensäurederivat der allgemeinen Formel

in der G eine nucleofuge Gruppe, die gleich oder verschieden sein kann, bevorzugt das Chloratom, die p-Nitrophenoxy- oder Trichlormethoxy-Gruppe, bedeutet, mit der Maßgabe, dass X das Sauerstoffatom bedeutet,

und mit einer Verbindung der allgemeinen Formel

in der X das Sauerstoffatom oder eine -NH-Gruppe bedeutet und A, R2 und R3 wie eingangs erwähnt definiert sind, mit der Maßgabe, dass R2 und R3 keine weitere freie, ungeschützte, primäre oder sekundäre aliphatische Aminofunktion enthalten. Eine gegebenenfalls in dem Rest -NR2R3 zusätzlich vorhandene primäre oder sekundäre Aminofunktion wird jeweils mit einer geeigneten Schutzgruppe versehen.

Die im Prinzip zweistufigen Reaktionen werden in der Regel als Eintopfverfahren durchgeführt, und zwar bevorzugt in der Weise, dass man in der ersten Stufe eine der beiden Komponenten (III) oder (V) mit äquimolaren Mengen des Kohlensäure¬ derivates der allgemeinen Formel (IV) in einem geeigneten Lösemittel bei tieferer Temperatur zur Reaktion bringt, anschließend wenigstens äquimolare Mengen der anderen Komponente (III) oder (V) zugibt und die Umsetzung bei höherer Temperatur beendet. Die Umsetzungen mit Bis-(trichlormethyl)-carbonat werden bevorzugt in Gegenwart von wenigstens 2 Äquivalenten (bezogen auf Bis- (trichlormethyl)-carbonat) einer tertiären Base, beispielsweise von Triethylamin, Λ/-Ethyldiisopropylamin, Pyridin, 1 ,5-Diaza-bicyclo-[4.3.0]-non-5-en, 1 ,4-Diazabicyclo- [2.2.2]octan oder 1 ,8-Diazabicyclo-[5.4.0]-un-dec-7-en, durchgeführt. Als Lösungs¬ mittel, die wasserfrei sein sollten, kommen beispielsweise Tetra h yd rofu ran, Dioxan, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, /V-Methyl-2-pyrrolidon, 1 ,3-Dimethyl-2- imidazolidinon oder Acetonitril in Betracht, bei Verwendung von Bis-(trichlormethyl)- carbonat als Carbonylkomponente werden wasserfreie Chlorkohlenwasserstoffe, beispielsweise Dichlormethan, 1 ,2-Dichlorethan oder Trichlorethylen, bevorzugt. Die Reaktionstemperaturen liegen für die erste Reaktionsstufe zwischen -3O0C und +250C, bevorzugt -5°C und +10°C, für die zweite Reaktionsstufe zwischen +150C und der Siedetemperatur des verwendeten Lösemittels, bevorzugt zwischen +2O0C und +700C (Siehe auch: H. A. Staab und W. Rohr, "Synthesen mit heterocyclischen Amiden (Azoliden)", Neuere Methoden der Präparativen Organischen Chemie, Band V, S. 53-93, Verlag Chemie, Weinheim/Bergstr., 1967; P. Majer und R.S. Randad, J. Org. Chem. 59, S. 1937-1938 (1994); K. Takeda, Y. Akagi, A. Saiki, T. Sukahara und H. Ogura, Tetrahedron Letters 24 (42), 4569-4572 (1983); S.R. Sandler und W. Karo in "Organic Functional Group Preparations", Vol. II, S. 223-245, Academis Press, New York 1971 ).

(b) Zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel

in der X die Methylengruppe bedeutet und A und R1 bis R3 wie eingangs erwähnt definiert sind, mit der Maßgabe, dass keine weitere freie, ungeschützte, primäre oder sekundäre aliphatische Aminofunktion enthalten ist:

Kupplung einer Carbonsäure der allgemeinen Formel

in der A, R2 und R3 wie eingangs erwähnt definiert sind, mit einem Piperidin der allgemeinen Formel

in der R1 die eingangs erwähnten Bedeutungen besitzt.

Die Kupplung wird bevorzugt unter Verwendung von aus der Peptidchemie bekannten Verfahren (siehe z. B. Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Bd. 15/2) durchgeführt, wobei zum Beispiel Carbodiimide, wie z.B. Dicyclohexyl- carbodiimid (DCC), Diisopropylcarbodiimid (DIC) oder Ethyl-(3-dimethylamino- propyl)-carbodiimid, O-(1 /-/-Benzotriazol-1 -yl)-/V,/V-/v\Λ/I-tetramethyluronium-hexa- fluorphosphat (HBTU) oder -tetrafluorborat (TBTU) oder 1 /-/-Benzotriazol-1 -yl-oxy- tris-(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorphosphat (BOP) eingesetzt werden. Durch Zugabe von 1-Hydroxybenzotriazol (HOBt) oder von 3-Hydroxy-4-oxo-3,4-di- hydro-1 ,2,3-benzotriazin (HOOBt) kann die Reaktionsgeschwindigkeit gesteigert werden. Die Kupplungen werden normalerweise mit äquimolaren Anteilen der Kupplungskomponenten sowie des Kupplungsreagenz in Lösemitteln wie Dichlor- methan, Tetrahydrofuran, Acetonitril, Dimethylformamid (DMF), Dimethylacetamid (DMA), Λ/-Methylpyrrolidon (NMP) oder Gemischen aus diesen und bei Tempera¬ turen zwischen -300C und +300C, bevorzugt -20°C und +250C, durchgeführt. Sofern erforderlich, wird als zusätzliche Hilfsbase Λ/-Ethyldiisopropylamin (DIEA) (Hünig- Base) bevorzugt.

Als weiteres Kupplungsverfahren zur Synthese von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) wird das sogenannte "Anhydridverfahren" (siehe auch: M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", Springer-Verlag 1988, S. 58-59; M. Bodanszky, "Principles of Peptide Synthesis", Springer-Verlag 1984, S. 21-27) eingesetzt. Bevorzugt wird das "gemischte Anhydridverfahren" in der Variante nach Vaughan (J. R. Vaughan Jr., J. Amer. Chem. Soc. 73, 3547 (1951 )), bei der unter Verwendung von Chlorkohlen- säureisobutylester in Gegenwart von Basen, wie 4-Methylmorpholin oder 4-Ethyl- morpholin, das gemischte Anhydrid aus der zu kuppelnden Carbonsäure der allgemeinen Formel (VI) und dem Kohlensäure-monoisobutylester erhalten wird. Die Herstellung dieses gemischten Anhydrids und die Kupplung mit Aminen erfolgt im Eintopfverfahren, unter Verwendung der vorstehend genannten Lösemittel und bei Temperaturen zwischen -20 und +25°C, bevorzugt 00C und +25°C.

(c) Zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel

in der X die Methylengruppe bedeutet und A und R1 bis R3 wie eingangs erwähnt definiert sind, mit der Maßgabe, dass diese Gruppen kein freies, ungeschütztes, primäres oder sekundäres Amin enthalten:

Kupplung einer Verbindung der allgemeinen Formel

in der A, R2 und R3 wie eingangs erwähnt definiert sind, mit der Maßgabe, dass R2 und R3 kein freies, ungeschütztes, primäres oder sekundäres Amin enthalten, und Nu eine Austrittsgruppe, beispielsweise ein Halogenatom, wie das Chlor-, Brom- oder lodatom, eine Alkylsulfonyloxygruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen im Alkylteil, eine gegebenenfalls durch Chlor- oder Bromatome, durch Methyl- oder Nitrogruppen mono-, di- oder trisubstituierte Phenylsulfonyloxy- oder Naphthylsulfonyloxygruppe, wobei die Substituenten gleich oder verschieden sein können, eine 1/-/-lmidazol-1-yl-, eine gegebenenfalls durch eine oder zwei Methylgruppen im Kohlenstoffgerüst substituierte 1H-Pyrazol-1-yl-, eine 1H-1 ,2,4-Triazol-1-yl-, 1H-1 ,2,3-Triazol-1-yl-, 1H- 1 ,2,3,4-Tetrazol-1-yl-, eine Vinyl-, Propargyl-, p-Nitrophenyl-, 2,4-Dinitrophenyl-, Trichlorphenyl-, Pentachlorphenyl-, Pentafluorphenyl-, Pyranyl- oder Pyridinyl-, eine Dimethylaminyloxy-, 2(1 H)-Oκopyridin-1-yl-oxy-, 2,5-Dioxopyrrolidin-1-yloxy-, Phthal- imidyloxy-, 1 /-/-Benzo-triazol-1-yloxy- oder Azidgruppe bedeutet,

mit einem Piperidin der allgemeinen Formel

)

in der R1 wie eingangs erwähnt definiert ist.

Die Umsetzung wird unter Schotten-Baumann- oder Einhorn-Bedingungen durchgeführt, das heißt die Komponenten werden in Gegenwart von wenigstens einem Äquivalent einer Hilfsbase bei Temperaturen zwischen -500C und +1200C, bevorzugt -1O0C und +30°C, und gegebenenfalls in Gegenwart von Lösemitteln zur Reaktion gebracht. Als Hilfsbasen kommen bevorzugt Alkali- und Erdalkalihydroxide, beispielsweise Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder Bariumhydroxid, Alkali- carbonate, z. B. Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat oder Cäsiumcarbonat, Alkali- acetate, z.B. Natrium- oder Kaliumacetat, sowie tertiäre Amine, beispielsweise Pyridin, 2,4,6-Tri-methylpyridin, Chinolin, Triethylamin, /V-Ethyl-diisopropylamin, Λ/-Ethyl-dicyclohexyl-amin, 1 ,4-Di-azabicyclo[2.2.2]octan oder 1 ,8-Diazabicyclo- [5.4.0]-undec-7-en, als Lösemittel beispielsweise Dichlormethan, Tetrahydrofuran, 1 ,4-Dioxan, Acetonitril, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Λ/-Methylpyrrolidon oder Gemische davon in Betracht; werden als Hilfsbasen Alkali- oder Erdalkali¬ hydroxide, Alkalicarbonate oder -acetate verwendet, kann dem Reaktionsgemisch auch Wasser als Cosolvens zugesetzt werden.

(d) Zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel

in der A, X und R1 bis R3 wie eingangs erwähnt definiert sind: Kupplung einer Carbonsäure der allgemeinen Formel

in der A, X und R1 wie eingangs erwähnt definiert sind, mit einem Amin der allgemeinen Formel HNR2R3, in der R2 und R3 wie eingangs definiert sind, mit der Maßgabe, dass sie keine weitere freie, ungeschützte, primäre oder sekundäre aliphatische Aminofunktion enthalten.

Die Kupplung wird bevorzugt unter Verwendung von aus der Peptidchemie bekannten Verfahren (siehe z. B. Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Bd. 15/2) durchgeführt, wobei zum Beispiel Carbodiimide, wie z.B. Dicyclohexyl- carbodiimid (DCC), Diisopropylcarbodiimid (DIC) oder Ethyl-(3-dimethylamino- propyl)-carbodiimid, O-(1/-/-Benzotriazol-1-yl)-Λ/,/V-Λ/',Λ/I-tetramethyluroni um-hexa- fluorphosphat (HBTU) oder -tetrafluorborat (TBTU) oder 1 H-Benzotriazol-1 -yl-oxy- tris-(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorphosphat (BOP) eingesetzt werden. Durch Zugabe von 1-Hydroxybenzotriazol (HOBt) oder von 3-Hydroxy-4-oxo- 3,4-dihydro-1 ,2,3-benzotriazin (HOOBt) kann die Reaktionsgeschwindigkeit gesteigert werden. Die Kupplungen werden normalerweise mit äquimolaren Anteilen der Kupplungskomponenten sowie des Kupplungsreagenz in Lösungsmitteln wie Dichlormethan, Tetrahydrofuran, Acetonitril, Dimethylformamid (DMF), Dimethyl- acetamid (DMA), Λ/-Methylpyrrolidon (NMP) oder Gemischen aus diesen und bei Temperaturen zwischen -30 und +300C, bevorzugt -20 und +25°C, durchgeführt. Sofern erforderlich wird als zusätzliche Hilfsbase Λ/-Ethyldiisopropylamin (DIEA) (Hünig-Base) bevorzugt.

Als weiteres Kupplungsverfahren zur Synthese von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) wird das sogenannte "Anhydridverfahren" (siehe auch: M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", Springer-Verlag 1988, S. 58-59; M. Bodanszky, "Principles of Peptide Synthesis", Springer-Verlag 1984, S. 21-27) eingesetzt. Bevorzugt wird das "gemischte Anhydrid verfahren" in der Variante nach Vaughan (J. R. Vaughan Jr., J. Amer. Chem.Soc. 73, 3547 (1951 )), bei der unter Verwendung von Chlorkohlensäu- reisobutylester in Gegenwart von Basen, wie 4-Methylmorpholin oder 4-Ethylmorpho- lin, das gemischte Anhydrid aus der zu kuppelnden Carbonsäure der allgemeinen Formel (VIII) und dem Kohlensäuremonoisobutylester erhalten wird. Die Herstellung dieses gemischten Anhydrids und die Kupplung mit den Aminen der allgemeinen Formel HNR2R3 erfolgt im Eintopfverfahren, unter Verwendung der vorstehend genannten Lösemittel und bei Temperaturen zwischen -200C und +25°C, bevorzugt zwischen 00C und +25°C.

(e) Zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel

in der A, X und R1 bis R3 wie eingangs erwähnt definiert ist, mit der Maßgabe, dass kein freies, ungeschütztes, primäres oder sekundäres Amin enthalten ist:

Kupplung einer Verbindung der allgemeinen Formel

in der A, X und R1 wie eingangs erwähnt definiert sind und Nu eine Austrittsgruppe, beispielsweise ein Halogenatom, wie das Chlor-, Brom- oder lodatom, eine Alkylsulfonyloxygruppe mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen im Alkylteil, eine gegebenenfalls durch Chlor- oder Bromatome, durch Methyl- oder Nitrogruppen mono-, di- oder trisubstituierte Phenylsulfonyloxy- oder Naphthylsulfonyloxygruppe, wobei die Substituenten gleich oder verschieden sein können, eine 1/-/-lmidazol-1-yl-, eine gegebenenfalls durch eine oder zwei Methylgruppen im Kohlenstoffgerüst substituierte 1H-Pyrazol-1-yl-, eine 1 H-1 ,2,4-Triazol-1-yl-, 1 H-1 ,2,3-Triazol-1-yl-, 1H- 1 ,2,3,4-Tetrazol-1-yl-, eine Vinyl-, Propargyl-, p-Nitrophenyl-, 2,4-Dinitrophenyl-, Trichlorphenyl-, Pentachlorphenyl-, Pentafluorphenyl-, Pyranyl- oder Pyridinyl-, eine Dimethylaminyloxy-, 2(1H)-Oxopyridin-1-yl-oxy-, 2,5-Dioxopyrrolidin-1-yloxy-, Phthal- imidyloxy-, 1/-/-Benzo-triazol-1-yloxy- oder Azidgruppe bedeutet,

mit einem Amin der allgemeinen Formel HNR2R3, in der R2 und R3 wie eingangs definiert sind, mit der Maßgabe, dass keine freie, ungeschützte, weitere freie primäre oder sekundäre aliphatische Aminofunktion enthalten ist.

Die Umsetzung wird unter Schotten-Baumann- oder Einhorn-Bedingungen durchge- führt, das heißt, die Komponenten werden in Gegenwart von wenigstens einem Äquivalent einer Hilfsbase bei Temperaturen zwischen -500C und +1200C, bevorzugt -100C und +3O0C, und gegebenenfalls in Gegenwart von Lösungsmitteln zur Reaktion gebracht. Als Hilfsbasen kommen bevorzugt Alkali- und Erdalkalihydroxide, beispielsweise Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder Bariumhydroxid, Alkali- carbonate, z. B. Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat oder Cäsiumcarbonat, Alkali- acetate, z.B. Natrium- oder Kaliumacetat, sowie tertiäre Amine, beispielsweise Pyridin, 2,4,6-Trimethylpyridin, Chinolin, Triethylamin, Λ/-Ethyldiisopropylamin, Λ/-Ethyldicyclohexylamin, 1 ,4-Di-azabicyclo[2.2.2]octan oder 1 ,8-Diaza-bicyclo[5.4.0]- undec-7-en, als Lösungsmittel beispielsweise Dichlormethan, Tetrahydrofuran, 1 ,4-Dioxan, Acetonitril, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Λ/-Methylpyrrolidon oder Gemische davon in Betracht; werden als Hilfsbasen Alkali- oder Erdalkali¬ hydroxide, Alkalicarbonate oder -acetate verwendet, kann dem Reaktionsgemisch auch Wasser als Cosolvens zugesetzt werden.

Die erfindungsgemäßen neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) enthalten ein oder mehrere Chiralitätszentren. Sind beispielsweise zwei Chiralitätszentren vor¬ handen, dann können die Verbindungen in Form zweier diastereomerer Antipoden¬ paare auftreten. Die Erfindung umfasst die einzelnen Isomeren ebenso wie ihre Gemische.

Die Trennung der jeweiligen Diastereomeren gelingt auf Grund ihrer unterschied¬ lichen physikochemischen Eigenschaften, z.B. durch fraktionierte Kristallisation aus geeigneten Lösemitteln, durch Hochdruckflüssigkeits- oder Säulenchromatographie unter Verwendung chiraler oder bevorzugt achiraler stationärer Phasen.

Die Trennung von unter die allgemeine Formel (I) fallenden Racematen gelingt beispielsweise durch HPLC an geeigneten chiralen stationären Phasen (z. B. Chiral AGP, Chiralpak AD). Racemate, die eine basische Funktion enthalten, lassen sich auch über die diastereomeren, optisch aktiven Salze trennen, die bei Umsetzung mit einer optisch aktiven Säure, beispielsweise (+)- oder (-)-Weinsäure, (+)- oder (-)- Diacetylweinsäure, (+)- oder (-)-Monomethyltartrat oder (+)-Camphersulfonsäure entstehen.

Nach einem üblichen Verfahren zur Isomerentrennung wird das Racemat einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) mit einer der vorstehend angegebenen optisch aktiven Säuren in äquimolarer Menge in einem Lösemittel umgesetzt und die erhaltenen kristallinen, diastereomeren, optisch aktiven Salze unter Ausnutzung ihrer verschiedenen Löslichkeit getrennt. Diese Umsetzung kann in jeder Art von Lösemitteln durchgeführt werden, solange sie einen ausreichenden Unterschied hinsichtlich der Löslichkeit der Salze aufweisen. Vorzugsweise werden Methanol, Ethanol oder deren Gemische, beispielsweise im Volumenverhältnis 50:50, verwendet. Sodann wird jedes der optisch aktiven Salze in Wasser gelöst, mit einer Base, wie Natriumcarbonat oder Kaliumcarbonat, oder mit einer geeigneten Säure, beispielsweise mit verdünnter Salzsäure oder wässeriger Methansulfonsäure, vorsichtig neutralisiert und dadurch die entsprechende freie Verbindung in der (+)- oder (-)-Form erhalten.

Jeweils nur das (R)- oder (S)-Enantiomer bzw. ein Gemisch zweier optisch aktiver, unter die allgemeine Formel (I) fallender diastereomerer Verbindungen wird auch dadurch erhalten, dass man die oben beschriebenen Synthesen mit jeweils einer geeigneten (R)- bzw. (S)-konfigurierten Reaktionskomponente durchführt. Die Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel (III) erhält man, soweit sie nicht literaturbekannt oder gar käuflich sind, entsprechend den in der internationalen Patentanmeldung WO 98/11128 und DE 199 52 146 angegebenen Verfahren. Die Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel (IV) sind käuflich. Verbindungen der allgemeinen Formel (V) lassen sich nach dem Peptidchemiker geläufigen Methoden aus geschützten Phenylalaninen und Aminen der allgemeinen Formel HNR2R3 herstellen.

Die zur Herstellung der optisch reinen Verbindungen der allgemeinen Formel (V) nötigen Phenyalaninderivate können aus den Verbindungen der allgemeinen Formel

in der A wie eingangs erwähnt definiert ist und R eine unverzweigte Alkylgruppe, bevorzugt die Methyl- oder Ethylgruppe, darstellt, durch Racematspaltung hergestellt werden.

Diese Racematspaltung kann mit Hilfe enzymatischer Methoden durchgeführt werden, wobei nur ein Enantiomer des Racemates transformiert wird und das entstehende Gemisch dann mit Hilfe physikochemischer Methoden, bevorzugt mit Hilfe chromatographischer Methoden, getrennt wird. Ein geeignetes Enzymsystem für diesen Schritt stellt das Enzym Alcalase 2.4 L FG (Novozymes A/S; DK 2880 Bagsvaerd) dar. Die Verbindungen der allgemeinen Formel (X) können dann mit für Peptidchemiker geläufigen Methoden in die enantiomerenreinen Verbindungen der allgemeinen Formel (V) überführt werden.

Falls die Gruppe X in Verbindungen der allgemeinen Formel (V) das Sauerstoffatom darstellt, können die für die Synthese benötigten Hydroxycarbonsäuren der allgemeinen Formel

in der A wie eingangs erwähnt definiert ist, aus Verbindungen der allgemeinen Formel (X) gewonnen werden, mit der Maßgabe, dass R das Wasserstoffatom darstellt.

Unter der Maßgabe, dass der Rest A nicht die Amino- oder Methylaminogruppe enthalten, können durch Diazotierung von Verbindungen der allgemeinen Formel (X) mit einem geeigneten Diazotierungsreagenz, bevorzugt Natriumnitrit in saurem Milieu, die Verbindungen der allgemeinen Formel (Xl) erhalten werden. Bei Einsatz enantiomerenreiner Verbindungen werden die entsprechenden enantiomerenreinen Hydroxycarbonsäureverbindungen erhalten, wobei die Reaktion unter Retention der Konfiguration abläuft.

Ein weiterer Zugang zu Verbindungen der allgemeinen Formel (Xl)1 in der die Reste A wie eingangs erwähnt definiert sind, besteht in der Alkylierung der Verbindung

mit entsprechend substituierten Benzylchloriden, Benzylbromiden oder Benzyliodiden der allgemeinen Formel

in der A wie eingangs erwähnt definiert ist und X ein Chlor-, Brom- oder Jodatom bedeutet, in Analogie zu literaturbekannten Methoden (Michael T. Crimmins, KyIe A. Emmitte und Jason D. Katz, Org. Lett. 2, 2165-2167 [2000]).

Die entstehenden diastereomeren Produkte können dann mit Hilfe physiko¬ chemischer Methoden, bevorzugt mit Hilfe chromatographischer Methoden, getrennt werden. Die hydrolytische Abspaltung des chiralen Auxiliars, Kupplung mit Aminen der allgemeinen Formel HNR2R3 und Abspaltung der Benzylschutzgruppe eröffnet ebenfalls einen Zugang zu enantiomerenreinen Hydroxycarbonsäureverbindungen des allgemeinen Formel (V).

Verbindungen der allgemeinen Formel (Xl), in der die Reste A wie eingangs erwähnt definiert sind, können weiterhin durch Verkochen von 2-Acetylamino-3-phenyl- acrylsäuren der Formel

mittels starker Säuren und anschließender Reduktion der entstandenen 2-Hydroxy-3- phenyl-acrylsäuren erhalten werden.

Die Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel (VI) erhält man beispielsweise durch Umsetzung von Aminen der allgemeinen Formel HNR2R3 mit 2-(Alkoxy- carbonylmethyl)-3-aryl-propansäuren und anschließende hydrolytische Abspaltung der Alkylgruppe. Die erforderlichen 2-(Alkoxycarbonylmethyl)-3-aryl-propansäuren können in Analogie zu iiteraturbekannten Methoden (David A. Evans, Leester D. Wu, John J. M. Wiener, Jeffrey S. Johnson, David H. B. Ripin und Jason S. Tedrow, J. Org.Chem 64, 6411-6417 [1999]; Saul G. Cohen und Aleksander Milovanovic, J. Am. Chem. Soc. 90, 3495-3502 [1968]; Hiroyuki Kawano, Youichi Ishii, Takao Ikariya, Masahiko Saburi, Sadao Yoshikawa, Yasuzo Uchida und Hidenori Kumobayashi, Tetrahedron Letters 28, 1905-1908 [1987]) hergestellt werden. Carbonsäuren der allgemeinen Formel (VIII) können nach den in der WO 98/|11128 {angegebenen Verfahren aus allgemein zugänglichen Ausgangsmaterialien hergestellt werden.

Die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können, sofern sie geeignete basische Funktionen enthalten, insbesondere für pharmazeutische Anwendungen in ihre physiologisch verträglichen Salze mit anorganischen oder organischen Säuren übergeführt werden. Als Säuren kommen hierfür beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Schwefelsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Essigsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Milchsäure, Mandelsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Weinsäure oder Maleinsäure in Betracht.

Die vorliegende Erfindung betrifft Racemate, sofern die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) nur ein Chiralitätselement besitzen. Die Anmeldung umfasst jedoch auch die einzelnen diastereomeren Antipodenpaare oder deren Gemische, die dann vorliegen, wenn mehr als ein Chiralitätselement in den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) vorhanden ist, sowie die einzelnen optisch aktiven Enantiomeren, aus denen sich die erwähnten Racemate zusammensetzen.

Ebenfalls mit vom Gegenstand dieser Erfindung umfasst sind die erfindungs- gemäßen Verbindungen, einschließlich deren Salze, in denen ein oder mehrere Wasserstoffatome durch Deuterium ausgetauscht sind.

Die neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und deren physiologisch verträgliche Salze weisen wertvolle pharmakologische Eigenschaften auf, die auf ihre selektiven CGRP-antagonistischen Eigenschaften zurückgehen. Ein weiterer Gegen¬ stand der Erfindung sind diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel, deren Verwendung und deren Herstellung. Die voranstehend genannten neuen Verbindungen und deren physiologisch verträgliche Salze besitzen CGRP-antagonistische Eigenschaften und zeigen gute Affinitäten in CGRP-Rezeptorbindungsstudien. Die Verbindungen weisen in den nachstehend beschriebenen pharmakologischen Testsystemen CGRP-antagonisti- sehe Eigenschaften auf.

Zum Nachweis der Affinität der voranstehend genannten Verbindungen zu humanen CGRP-Rezeptoren und ihrer antagonistischen Eigenschaften wurden die folgenden Versuche durchgeführt:

A. Bindungsstudien mit (den humanen CGRP-Rezeptor exprimierenden) SK-N- MC-Zellen

SK-N-MC-Zellen werden in "Dulbecco's modified Eagle Medium" kultiviert. Das Medium konfluenter Kulturen wird entfernt. Die Zellen werden zweimal mit PBS- Puffer (Gibco 041-04190 M) gewaschen, durch Zugabe von PBS-Puffer, versetzt mit 0.02% EDTA, abgelöst und durch Zentrifugation isoliert. Nach Resuspension in 20 ml "Balanced Salts Solution" [BSS (in mM): NaCI 120, KCl 5.4, NaHCO3 16.2, MgSO4 0.8, NaHPO4 1.0, CaCI2 1.8, D-Glucose 5.5, HEPES 30, pH 7.40] werden die Zellen zweimal bei 100 x g zentrifugiert und in BSS resuspendiert. Nach Bestimmung der Zellzahl werden die Zellen mit Hilfe eines Ultra-Turrax homogenisiert und für 10 Minuten bei 3000 x g zentrifugiert. Der Überstand wird verworfen und das Pellet in Tris-Puffer (10 mM Tris, 50 mM NaCI, 5 mM MgCI2, 1 mM EDTA, pH 7.40), angereichert mit 1 % Rinderserum-Albumin und 0.1% Bacitracin, rezentrifugiert und resuspendiert (1 ml / 1000000 Zellen). Das Homogenat wird bei -8O0C eingefroren. Die Membranpräparationen sind bei diesen Bedingungen für mehr als 6 Wochen stabil.

Nach Auftauen wird das Homogenat 1 :10 mit Assay-Puffer (50 mM Tris, 150 mM NaCI, 5 mM MgCI2, 1 mM EDTA, pH 7.40) verdünnt und 30 Sekunden lang mit einem Ultra-Turrax homogenisiert. 230 μl des Homogenats werden für 180 Minuten bei Raumtemperatur mit 50 pM 125l-lodtyrosyl-Calcitonin-Gene-Related Peptide (Amersham) und ansteigenden Konzentrationen der Testsubstanzen in einem Gesamtvolumen von 250 μl inkubiert. Die Inkubation wird durch rasche Filtration durch mit Polyethylenimin (0.1 %) behandelte GF/B-Glasfaserfilter mittels eines Zellharvesters beendet. Die an Protein gebundene Radioaktivität wird mit Hilfe eines Gammacounters bestimmt. Als nichtspezifische Bindung wird die gebundene Radioaktivität nach Gegenwart von 1 μM humanem CGRP-alpha während der Inkubation definiert.

Die Analyse der Konzentrations-Bindungskurven erfolgt mit Hilfe einer computergestützten nichtlinearen Kurvenanpassung.

Die eingangs erwähnten Verbindungen zeigen in dem beschriebenen Test IC50- Werte < 10000 nM.

B. CGRP-Antagonismus in SK-N-MC-Zellen

SK-N-MC-Zellen (1 Mio. Zellen) werden zweimal mit 250 μl Inkubationspuffer (Hanks' HEPES, 1 mM 3-lsobutyl-1-methylxanthin, 1 % BSA, pH 7.4) gewaschen und bei 37°C für 15 Minuten vorinkubiert. Nach Zugabe von CGRP (10 μl) als Agonist in steigenden Konzentrationen (10~11 bis 10~6 M) bzw. zusätzlich von Substanz in 3 bis 4 verschiedenen Konzentrationen wird nochmals 15 Minuten inkubiert.

Intrazelluläres cAMP wird anschließend durch Zugabe von 20 μl 1M HCl und Zentrifugation (2000 x g, 40C für 15 Minuten) extrahiert. Die Überstände werden in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -2O0C gelagert.

Die cAMP-Gehalte der Proben werden mittels Radioimmunassay (Fa. Amersham) bestimmt und die pA2-Werte antagonistisch wirkender Substanzen graphisch ermittelt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen in dem beschriebenen In vitro Testmodell CGRP-antagonistische Eigenschaften in einem Dosisbereich zwischen 10~12 bis 10~5 M. Aufgrund ihrer pharmakologischen Eigenschaften eignen sich die erfindungs¬ gemäßen Verbindungen und deren Salze mit physiologisch verträglichen Säuren somit zur akuten und prophylaktischen Behandlung von Kopfschmerzen, insbeson¬ dere Migräne- bzw. Cluster-Kopfschmerz. Weiterhin beeinflussen die erfindungs- gemäßen Verbindungen auch die folgenden Erkrankungen positiv: Nicht-insulinabhängigen Diabetes mellitus ("NIDDM"), complex regional pain Syndrome (CRPS1 ), cardiovaskuläre Erkrankungen, Morphintoleranz, Clostri- tiumtoxin-bedingte Durchfallerkrankungen, Erkrankungen der Haut, insbesondere thermische und strahlenbedingte Hautschäden inklusive Sonnenbrand, entzündliche Erkrankungen, z.B. entzündliche Gelenkerkrankungen (Arthritis), neurogene Entzündungen der oralen Mucosa, entzündliche Lungenerkrankungen, allergische Rhinitis, Asthma, Erkrankungen, die mit einer überschießenden Gefäßerweiterung und dadurch bedingter verringerter Gewebedurchblutung einhergehen, z.B. Schock und Sepsis. Darüber hinaus zeigen die erfindungsgemäßen Verbindungen eine lindernde Wirkung auf Schmerzzustände im allgemeinen. Die Symptomatik menopausaler, durch Gefäßerweiterung und erhöhten Blutfluss verursachter Hitzewallungen östrogendefizienter Frauen sowie hormonbehandelter Prostatakarzinompatienten wird durch die CGRP-Antagonisten der vorliegenden Anwendung präventiv und akut-therapeutisch günstig beeinflusst, wobei sich dieser Therapieansatz vor der Hormonsubstitution durch Nebenwirkungsarmut auszeichnet.

Die zur Erzielung einer entsprechenden Wirkung erforderliche Dosierung beträgt zweckmäßigerweise bei intravenöser oder subkutaner Gabe 0.01 bis 3 mg/kg Körpergewicht, vorzugsweise 0.01 bis 1 mg/kg Körpergewicht, bei oraler Gabe 0.01 bis 20 mg/kg Körpergewicht, vorzugsweise 0.1 bis 10 mg/kg Körpergewicht, und bei nasaler oder inhalativer Gabe 0.01 bis 10 mg/kg Körpergewicht, vorzugsweise 0.1 bis 10 mg/kg Körpergewicht, jeweils 1 bis 3 x täglich.

Sofern die Behandlung mit CGRP-Antagonisten oder/und CGRP-Release-Hemmern in Ergänzung zu einer üblichen Hormonsubstitution erfolgt, empfiehlt sich eine Verringerung der vorstehend angegebenen Dosierungen, wobei die Dosierung dann 1/5 der vorstehend angegebenen Untergrenzen bis zu 1/1 der vorstehend angegebenen Obergrenzen betragen kann. Die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen können entweder alleine oder gegebenenfalls in Kombination mit anderen Wirksubstanzen zur Behandlung von Migräne intravenös, subkutan, intramuskulär, intrarektal, intranasal, durch Inhalation, transdermal oder oral erfolgen, wobei zur Inhalation insbesondere Aerosol¬ formulierungen geeignet sind. Die Kombinationen können entweder simultan oder sequentiell verabreicht werden.

Als Kombinationspartner denkbare Wirkstoffklassen sind z.B. Angiotensin-Il Rezeptorantagonisten, α-Agonisten und α-Antagonisten, 5-HTiB/iD-Agonisten, AMPA-Antagonisten, schwachen Analgetica, Antidepressiva, Antiemetika, Antikonvulsiva, Antimuscarinika, ß-Blocker, Calcium-Antagonisten, Corticosteroide, Ergot-Alkaloiden, Histamin-H1 -Rezeptorantagonisten, Neurokinin-Antagonisten, Neuroleptika, nichtsteroidale Antiphlogistika, NO-Synthase-Hemmer, Prokinetika, selektive Serotonin-Wiederaufnahme-Hemmer oder andere Antimigränemitteln, die zusammen mit einem oder mehreren inerten üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln, z.B. mit Maisstärke, Milchzucker, Rohrzucker, mikrokristalliner Zellulose, Magnesiumstearat, Polyvinylpyrrolidon, Zitronensäure, Weinsäure, Wasser, Wasser/Ethanol, Wasser/Glycerin, Wasser/Sorbit, Wasser/Polyethylen- glykol, Propylenglykol, Cetylstearylalkohol, Carboxymethylcellulose oder fetthaltigen Substanzen wie Hartfett oder deren geeigneten Gemischen, in übliche galenische Zubereitungen wie Tabletten, Dragees, Kapseln, Pulver, Suspensionen, Lösungen, Dosieraerosole oder Zäpfchen eingearbeitet werden können.

Für die oben erwähnten Kombinationen kommen somit als weitere Wirksubstanzen beispielsweise die nicht-steroidalen Antiphlogistika Aceclofenac, Acemetacin, Acetyl¬ salicylsäure, Azathioprin, Diclofenac, Diflunisal, Fenbufen, Fenoprofen, Flurbiprofen, Ibuprofen, Indometacin, Ketoprofen, Leflunomid, Lornoxicam, Mefenaminsäure, Naproxen, Phenylbutazon, Piroxicam, Sulfasalazin, Tenoxicam, Zomepirac oder deren physiologisch verträgliche Salze sowie Meloxicam und andere selektive COX2-lnhibitoren, wie beispielsweise Rofecoxib und Celecoxib, in Betracht.

Weiterhin können z.B. Candesartan, Eprosartan, Irbesartan, Losartan, Olmesartan, Tasosartan, Telmisartan, Valsartan, Duloxetin, Ergotamin, Dihydroergotamin, Metoclopramid, Domperidon, Diphenhydramin, Cyclizin, Promethazin, Chlorpromazin, Vigabatrin, Timolol, Isomethepten, Pizotifen, Botox, Gabapentin, Topiramat, Riboflavin, Montelukast, Lisinopril, Prochlorperazin, Dexamethason, Flunarizin, Dextropropoxyphen, Meperidin, Metoprolol, Propranolol, Nadolol, Atenolol, Clonidin, Indoramin, Carbamazepin, Phenytoin, Valproat, Amitryptilin, Lidocain oder Diltiazem und andere 5-HT^/iD-Agonisten wie z.B. Almotriptan, Avitriptan, Donitriptan, Eletriptan, Frovatriptan, Naratriptan, Rizatriptan, Sumatriptan und Zolmitriptan sowie deren physiologisch verträgliche Salze verwendet werden.

Die Dosis für diese Wirksubstanzen beträgt hierbei zweckmäßigerweise 1/5 der üblicherweise empfohlenen niedrigsten Dosierung bis zu 1/1 der normalerweise empfohlenen Dosierung, also beispielsweise 20 bis 100 mg Sumatriptan.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen als wertvolle Hilfsmittel zur Erzeugung und Reinigung (Affinitäts¬ chromatographie) von Antikörpern sowie, nach geeigneter radioaktiver Markierung, beispielsweise durch Tritiierung geeigneter Vorstufen, beispielsweise durch katalytische Hydrierung mit Trithium oder Ersatz von Halogenatomen durch Tritium, in RIA- und ELISA-Assays und als diagnostische bzw. analytische Hilfsmittel in der Neurotransmitter-Forschung.

Experimenteller Teil

Für die hergestellten Verbindungen liegen in der Regel IR-, 1H-NMR und/oder Massenspektren vor. Wenn nicht anders angegeben, werden RrWerte unter Verwen¬ dung von DC-Fertigplatten Kieselgel 60 F254 (E. Merck, Darmstadt, Artikel-Nr. 1.05714) ohne Kammersättigung bestimmt. Die unter der Bezeichnung Alox ermittelten Rf-Werte werden unter Verwendung von DC-Fertigplatten Aluminiumoxid 60 F254 (E. Merck, Darmstadt, Artikel-Nr. 1.05713) ohne Kammersättigung bestimmt. Die bei den Fliessmitteln angegebenen Verhältnisse beziehen sich auf Volumeneinheiten der jeweiligen Lösungsmittel. Die angegebenen Volumeneinheiten bei NH3 beziehen sich auf eine konzentrierte Lösung von NH3 in Wasser. Soweit nicht anders vermerkt sind die bei den Aufarbeitungen der Reaktionslösungen verwendeten Säure-, Basen- und Salzlösungen wässrige Systeme der angebenen Konzentrationen. Zu chromatographischen Reinigungen wird Kieselgel der Firma Millipore (MATREX™, 35-70 μm) verwendet. Zu chromatographischen Reinigungen wird Alox (E. Merck, Darmstadt, Aluminiumoxid 90 standardisiert, 63-200 μm, Artikel-Nr: 1.01097.9050) verwendet. Die angegebenen HPLC-Daten werden unter nachstehend angeführten Parametern gemessen: Analytische Säule: Zorbax-Säule (Agilent Technologies), SB (Stable Bond) - C18; 3.5 μm; 4.6 x 75 mm; Säulentemperatur: 3O0C; Fluss: 0.8 ml_ / min; Injektionsvolumen: 5 μl_; Detektion bei 254 nm

Methode A:

Bei präparativen HPLC-Reinigungen werden in der Regel die gleichen Gradienten verwendet, die bei der Erhebung der analytischen HPLC-Daten benutzt wurden. Die Sammlung der Produkte erfolgt massengesteuert, die Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und gefriergetrocknet. Falls nähere Angaben zur Konfiguration fehlen, bleibt offen, ob es sich um reine Enantiomere handelt oder ob partielle oder gar völlige Racemisierung eingetreten ist.

In den Versuchsbeschreibungen werden die folgenden Abkürzungen verwendet:

abs. absolutiert Boc fe/f.-Butoxycarbonyl CDI Λ/./V-Carbonyldiimidazol CDT 1 ,1 '-Carbonyldi-(1 ,2,4-triazol) Cyc Cyclohexan DCM Dichlormethan DMAP 4-Dimethylaminopyιϊdin DMF Λ/,Λ/-Dimethylformamid EtOAc Essigsäureethylester EtOH Ethanol halbkonz. halbkonzentriert HCl Salzsäure HOAc Essigsäure HOBt 1-Hydroxybenzotriazol-hydrat i. vac. in vacuo (im Vakuum) KOH Kaliumhydroxid konz. konzentriert MeOH Methanol NaCI Natriumchlorid NaOH Natriumhydroxid NMP N-Methylpyrrolidon org. organisch PE Petrolether RT Raumtemperatur TBME te/t-Butyl-methylether TBTU 2-(1 H-Benzotriazol-1-yl)-1 ,1 ,3,3-tetramethyluronium-Tetrafluorborat TFA Trifluoressigsäure THF Tetrahydrofuran

Beispiel 1

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[d][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonsäure-(R)- 1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-oxo-2-[4-(2-pi peridin-1-yl-ethyl)-piperi- din-1-yl]-ethylester

(1a) (£)-2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-5-trifluornnethyl-phen vπ-acrylsäure Eine Mischung aus 50.0 g (224 mmol) 4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzaldehyd, 39.3 g (335 mmol) Λ/-Acetylglycin, 27.5 g (335 mmol) Natriumacetat und 200 ml Acet- anhydrid wurde 2 Stunden in einem Ölbad bei 128°C Ölbadtemperatur gerührt. Nach Abkühlen auf 900C Ölbadtemperatur wurden 100 ml Wasser zugetropft und die entstehende Suspension auf eine Mischung aus 1000 ml Wasser und 500 ml Toluol gegeben. Der ausgefallene Niederschlag wurde abgesaugt, mit 300 ml Toluol und 500 ml Wasser gewaschen und im Umlufttrockenschrank bei 60°C über Nacht getrocknet. Ausbeute: 51.0 g (71 % der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 323 / 325 (Cl)

(1 b) (£V3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-2-hvdroxy-ac rylsäure 51.0 g (158 mmol) (£)-2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-pheny l)- acrylsäure, gelöst in 408 ml NMP, wurden mit 612 ml wässeriger 4-molarer Salz¬ säurelösung versetzt und 3 Stunden bei einer Badtemperatur von 13O0C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde abgekühlt und unter Rühren auf 2000 ml Wasser gegossen. Der entstandene Niederschlag wurde abgesaugt, mit 400 ml Wasser gewaschen, bei 6O0C über Nacht getrocknet und aus 1000 ml siedendem Toluol umkristallisiert. Ausbeute: 24.2 g (54% der Theorie) MS: (M)+ = 281 / 283 (Cl)

(1c) (R)-3-f4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenvπ-2-hvdroxy-Dr opionsäure Zu einer auf -2O0C gekühlten Mischung aus 24.5 g (86.9 mmol) (E)-3-(4-Amino-3- chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-2-hydroxy-acrylsäure, 12.1 ml (86.9 mmol) Triethylamin und 98 ml THF wurde unter Stickstoff Schutzgas 33,5 g (104.3 mmol) (->-DIP-chlorid gelöst in 195 ml THF zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1.5 Stunden bei -200C gerührt, auf Raumtemperatur gebracht und unter vermindertem Druck einge¬ engt. Der Rückstand wurde mit 200 ml wässeriger 1 -molarer Natronlauge und 150 ml TBME versetzt und gut verrührt. Die wässerige Phase wurde abgetrennt, unter Rühren mit 2-molarer Salzsäurelösung angesäuert und zweimal mit je 250 ml TBME extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Aktivkohle filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit 500 ml Wasser zum Sieden erhitzt und die heiße Lösung über Celite klar filtriert. Der bei Raumtemperatur entstehende Niederschlag wurde abgesaugt und im Umluftrockenschrank bei 650C getrocknet. Ausbeute: 14.3 g (58% der Theorie) MS: (M+H)+ = 284 / 286 (CI)

(1d) (f?)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenvπ-2-hvdroxy-p ropionsäure- ethylester Eine Mischung aus 14.3 g (50.0 mmol) (f?)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl- phenyl)-2-hydroxy-propionsäure und 100 ml Ethanol wurde mit 100 ml einer ca. 12- molaren ethanolischen Salzsäurelösung versetzt und über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 15.7 g (100% der Theorie) MS: (M+H)+ = 312 / 314 (CI)

(1e) 4-(2-Oxo-1.2.4.5-tetrahvdro-benzofcπH .31diazepin-3-vO-piperidin-1 -carbon- säure-^^^-amino-S-chlor-δ-trifluormethvI-phenvπ-i-ethoxyc arbonvI-ethyl- ester Zu der Mischung aus 3.1 g (25.6 mmol) DMAP und 70 ml Pyridin wurden unter Stick¬ stoff Schutzgas 5.2 g (25.6 mmol) Chlorameisensäure-4-nitrophenylester zugegeben und 1.5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 8.0 g (25.7 mmol) (R)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-2-hydroxy-pr opionsäureethyl- ester, gelöst in 30 ml Pyridin, langsam bei Raumtemperatur zugetropft, das Reaktionsgemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur nachgerührt, 6.3 g (25.6 mmol) 3- Piperidin-4-yl-1 ,3,4,5-tetrahydro-1 ,3-benzdiazepin-2-on als Festsubstanz zugegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt und zwischen 200 ml Essigester und 200 ml wässriger 10%-iger Zitronensäurelösung verteilt. Die organische Phase wurde zweimal mit je 200 ml 10%-iger Zitronensäurelösung und fünfmal mit je 150 ml 15%- iger wässriger Kaliumcarbonatlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromato- graphisch gereinigt. Ausbeute: 5.0 g (33% der Theorie) MS: (M+H)+ = 583 / 585 (Cl)

(1f) 4-(2-Oxo-1.2.4.5-tetrahvdro-benzoft/iπ ,31diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-2-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-1-car boxyethylester Zu der Mischung aus 13.0 g (22.3 mmol) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/]- [I .Sjdiazepin-S-yO-piperidin-i-carbonsäure^R^^-amino-S-chlor- S-trifluormethyl- phenyl)-1 -ethoxycarbonyl-ethylester und 120 ml THF wurde eine Lösung von 804 mg (33.5 mmol) Lithiumhydroxid gelöst in 80 ml Wasser zugetropft. Das Gemisch wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, unter vermindertem Druck von THF befreit, mit 150 ml Wasser versetzt, und durch Zugabe von wässeriger 4-molarer Salzsäure¬ lösung angesäuert. Danach wurde die wässerige Phase mit 300 ml Essigester extrahiert, die organische Phase getrocknet und unter vermindertem Druck einge¬ engt. Der Rückstand wurde aus 50 ml Isopropanol umkristallisiert. Ausbeute: 5.3 g (43% der Theorie)

(1g) 4-(2-Oxo-1.2,4.5-tetrahvdro-benzorcππ .3ldiazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-(R)-1 -(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-oxo-2-r4-(2-pip eridin-1 - yl-ethvπ-piperidin-1-vπ-ethylester Eine Mischung aus 100 mg (0.18 mmol) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/]- [1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonsäure-(R)-2-(4-amino-3- chlor-5-trifluormethyl- phenyl)-1-carboxyethylester, 35.3 mg (0.18 mmol) 4-(2-piperidin-1-yl-ethyl)-piperidin, 64.2 mg (0.20 mmol) TBTU, 0.028 ml (0.20 mmol) Triethylamin und 2.0 ml DMF wurde 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde säulenchromatographisch aufgereinigt. Ausbeute: 84 mg (64% der Theorie) MS: (M+H)+ = 733 / 735 (Cl) Retentionszeit HPLC: 6.5 min (Methode A)

Analog wurden folgende Verbindungen aus jeweils 100 mg 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetra- hydro-benzo[d][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonsäure-(R)-2-(4-amino-3- chlor-5- trifluormethyl-phenyl)-1-carboxy-ethylester und der entsprechenden Menge an Amin hergestellt:

Beispiel 2

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonsäure-{(R)- 1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-[4-(4-cyclopro pyl-piperazin-1-yl)-piperi- din-1 -yl]-2-oxo-ethyl}-amid

(2a) (f?)-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-pro pionsäure-ethyl- ester Eine Lösung von 3.5 g (10.97 mmol) (R)-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl- phenyl)-propionsäure in 100 ml_ EtOH und 70 ml_ ethanolischer Salzsäurelösung (11.5 M) wurde über Nacht bei RT gerührt. Man engte i. vac. ein, nahm den Rückstand in 150 ml_ Wasser auf, versetzte mit 30 mL 15%-iger K2CO3-Lösung, extrahierte mit 150 mL EtOAc, trennte die organische Phase ab und trocknete diese über Na2SO4. Nach Entfernen des Trocken- und Lösungsmittels erhielt man das gewünschte Produkt. Ausbeute: 3.5 g (92% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 311/313 (Cl)

(2b) (R)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-2-fr4-(2-oxo -1.2.4.5-tetrahvdro- 1.3-benzdiazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonyll-amino)-propions äureethylester Zu einer auf O0C gekühlten Lösung von 3.2 g (10.2 mmol) (R)-2-Amino-3-(4-amino-3- chlor-5-trifluormethyl-phenyl)-propionsäureethylester und 1.8 mL (10.3 mmol) Ethyl- diisopropylamin in 150 mL THF wurden 1.8 g (11.0 mmol) CDT zugegeben und das Reaktionsgemisch 45 min bei dieser Temperatur und nach Entfernen des Eisbades weitere 30 min gerührt. Dann erfolgte die Zugabe von 2.5 g (10.2 mmol) 3-Piperidin- 4-yl-1 ,3,4,5-tetrahydro-1 ,3-benzdiazepin-2-on, suspendiert in 50 mL THF. Zur Reaktionslösung wurden 40 mL DMF zugegeben und diese 2 h bei 8O0C gerührt. Man engte i. vac. ein, versetzte mit 200 mL EtOAc und 200 mL 10% Zitronensäure- Lösung, trennte die organische Phase ab, extrahierte diese mit 150 mL NaHCO3- Lösung und trocknete über Na2SO4. Nach Entfernen des Trocken- und Lösungs- mittels erhielt man das gewünschte Produkt. Ausbeute: 5.9 g (100% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 582/584 (Cl) Rf : 0.4 (Kieselgel, EtOAc)

(2c) (f?)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-phenvn-2-(r4-(2-oxo -1.2.4.5-tetrahvdro- 1.3-benzdiazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonvn-amino)-propionsà ¤ure Zu einer Suspension von 6.0 g (10.31 mmol) (R)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl- phenyl)-2-{[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-i ,3-benzdiazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonyl]- amino}-propionsäureethylester in 50 ml_ THF wurde eine Lösung von 0.64 g (15 mmol) Lithiumhydroxid Hydrat in 100 mL Wasser gegeben. Zu dieser Suspension wurden erneut jeweils.100 mL Wasser und THF gegeben, wobei sich nach 5 min eine Lösung bildete. Man rührte 1 Stunde bei RT, zog das THF i.vac. ab, verdünnte mit 100 mL Wasser und tropfte unter Eiskühlung 1 M wässriger Salzsäurelösung bis zur sauren Reaktion zu. Die ausgefallene Substanz wurde filtriert, mit Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet. Ausbeute: 5.5 g (96% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 554/556 (Cl)

(2d) 4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahvdro-benzofc/iri .31diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbon- säure-((f?)-1-(4-amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-2-r 4-(4-cvclopropyl- piperazin-1-yl)-piperidin-1-yl1-2-oxo-ethyl)-amid Zu einer Lösung von 500 mg (0.90 mmol) (R)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl- phenyl)-2-{[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-1 ,3-benzdiazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonyl]- amino}-propionsäure in 100 mL THF wurden 321 mg (1.0 mmol) TBTU, 0.28 mL (2.0 mmol) Triethylamin und 200 mg (0.9 mmol) 1-Cyclopropyl-4-piperidin-4-yl-piperazin gegeben und das Reaktionsgemisch über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand zwischen 150 ml Essig¬ ester und 150 ml 15%-iger wässriger Kaliumcarbonatlösung verteilt, die organische Phase abgetrennt, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde anschließend säulenchromatographisch aufgerei¬ nigt (Kieselgel, Gradient aus Methylenchlorid/Methanol/Ammoniak von 100/0/0 auf 0/90/10 innerhalb von 60 Minuten). Die entsprechenden Fraktionen wurden unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand mit 50 ml Diisopropylether verrieben, abgesaugt und getrocknet. Ausbeute: 440 mg (65% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 746/748 (Cl) Rf: 0.55 (Methylenchlorid/Methanol/Ammoniak = 90/10/1)

Beispiel 3

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonsäure-(R)- 1 -(4-chlor-3-trifluormethyl-benzyl)-2-[4-(4-methyl-piperazin- 1 -yl)-piperidin-1 -yl]-2-oxo- ethylester

(3a) (E)-2-Acetylamino-3-(4-chlor-3-trifluormethyl-phenyl)-acryls äure Hergestellt analog Beispiel 1a. Ausbeute: 75% der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 308 / 310 (Cl)

(3b) (E)-3-(4-Chlor-3-trifluormethyl-phenyl)-2-hvdroxy-acrylsäur e Hergestellt analog Beispiel 1 b. Ausbeute: 55% der Theorie MS: (M-H)- = 265 / 267 (Cl)

(3c) (RV3-(4-Chlor-3-trifluormethyl-phenvπ-2-hvdroxy-propionsäu re Hergestellt analog Beispiel 1c. Ausbeute: 64% der Theorie ESI-MS: (M-H)- = 267 /269 (Cl) (3d) (R)-3-(4-Chlor-3-trifluormethyl-phenvπ-2-hvdroxy-DroDionsä uremethylester Hergestellt analog Beispiel 1 d. Ausbeute: 78% der Theorie ESI-MS: (M)+ = 282 /284 (Cl)

(3e) 4-C2-OXO-1 ,2.4.5-tetrahvdro-benzofc/lf1.3ldiazepin-3-yl)-piDeridin-1 -carbon- säure-(R)-2-(4-chlor-3-trifluormethyl-phenyl)-1-methoxycarb onyl-ethylester Hergestellt analog Beispiel 1 e. Ausbeute: 22% der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 554 /556 (Cl)

(3f) 4-(2-Oxo-1 ,2,4.5-tetrahvdro-benzo[c/iπ .31diazepin-3-vπ-piperidin-1-carbon- säure-(R)-2-(4-chlor-3-trifluormethyl-phenyl)-1-carboxyethy lester Hergestellt analog Beispiel 1f. Ausbeute: 77% der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 540 /542 (Cl)

(3g) 4-(2-Oxo-1.2,4,5-tetrahvdro-benzorc/iπ .31diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbon- säure-(R)-1-(4-chlor-3-trifluormethyl-benzyl)-2-r4-(4-methy l-piperazin-1-yl)- piperidin-1-vπ-2-oxo-ethylester Hergestellt an analog Beispiel 1g. Ausbeute: 40% der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 705 /707 (Cl) Rf: 0.4 (Methylenchlorid/Cyclohexan/Methanol/Ammoniak = 70/15/15/2)

Beispiel 3.1

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[αO[1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonsäure-(R)- 1-(4-chlor-3-trifluormethyl-benzyl)-2-[4-(1-methyl-piperidin -4-yl)-piperazin-1-yl]-2-oxo- ethylester

Hergestellt analog Beispiel 3g. Ausbeute: 26% der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 705 /707 (Cl) Rf: 0.4 (Methylenchlorid/Cyclohexan/Methanol/Ammoniak = 70/15/15/2)

Beispiel 4

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonsäure-[(R)- i^-amino-S-chlor-S-methyl-benzyl^^-cyclopropyl-piperazin-i-y l^-oxo-ethyl]- amid

(4a) (E)-2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-5-rnethyl-phenyl)-acryl säuremethylester Unter Stickstoff Schutzgas wurde zu der Mischung aus 25.0 g (113 mmol) 4-Brom-2- chlor-6-methyl-anilin,19.9 g (136 mmol) 2-Acetamidoacrylsäuremethylester, 350 ml Triethylamin und 150 ml Acetonitril bei Raumtemperatur 2.02 g (9.0 mmol) PaIIa- dium(ll)acetat sowie 2.82 g (9.0 mmol) Tri-o-tolylphosphin gegeben. Das Reaktions¬ gemisch wurde 18 Stunden bei 800C gerührt, unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand mit je 600 ml Dichlormethan und Wasser versetzt und vom unlöslichen Niederschlag abfiltriert. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, unter vermindertem Druck eingeengt und anschließend mit 200 ml Essigester/Cyclohexan (3/1) versetzt. Der unlösliche Anteil wurde abgesaugt und die Mutterlauge säulenchromatograhisch über Kieselgel gereinigt. Die entsprechenden Fraktionen wurden unter vermindertem Druck eingeengt und mit dem zuvor abgesaugten, unlöslichen Anteil vereinigt. Ausbeute: 20.7 g (64% der Theorie) MS: (M-H)- = 281 /283 (Cl)

(4b) 2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-5-methyl-phenyl)-propionsä uremethylester 20.6 g (73.0 mmol) (E^-Acetylamino-S^-amino-S-chlor-δ-methyl-phenyl^acryl- säuremethylester, 0.445 g (0.90 mmol) Bis(1 ,5-cyclooctadien)-di-rhodium(l)-dichlorid, 0.744 g (1.8 mmol) 1 ,3-Bis(diphenylphosphino)-propan wurden in 400 ml entgastem Methanol und 12 ml entgastem Triethylamin gelöst und anschließend bei Raumtemperatur und 3 bar Wasserstoffdruck hydriert. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt und in Essigester aufgenommen. Vom unlöslichen Niederschlag wurde abgesaugt und das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch aufgereinigt. Ausbeute: 21.1 g (quantitativ) MS: (M+H)+ = 285 /287 (Cl)

(4c) (R)-2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-5-methyl-phenyl)-propio nsäuremethyl- ester Zu einer 370C warmen Lösung von 27.3 g (178 mmol) Dinatriumhydrogenphosphat Dihydrat in 1000 ml_ Wasser wurden 22 ml_ Alcalase 2.4 L FG (Novozymes A/S; DK 2880 Bagsvaerd) gegeben und mittels Zugabe von Natriumdihydrogenphosphat Dihydrat ein pH-Wert von 7.5 eingestellt. Anschließend wurde bei 37°C unter Rühren 21.1 g (74 mmol) 2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-5-methyl-phenyl)-propionsä ure- methylester gelöst in 210 ml_ Aceton zugetropft. Der pH-Wert des Reaktions¬ gemisches wurde dabei durch Zugabe von 1 M NaOH stets in einem Bereich von pH 7.4 bis pH 7.6 gehalten. Nach erfolgter Zugabe wurde 3 h bei 37 0C nachgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 500 ml 15%-iger Kaliumcarbonat-Lösung versetzt und zweimal mit je 250 ml Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet, unter vermindertem Druck eingeengt und säulenchromatographisch über Kieselgel gereinigt. Ausbeute: 2.57 g (12% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 285 / 287 (Cl)

(4d) (/?)-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor-5-methyl-phenyl)-propionsäu reethylester Eine Mischung aus 2.6 g (9.0 mmol) (R)-2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-5-methyl- phenyl)-propionsäuremethylester und 15 ml 4-molare Salzsäurelösung wurde 6 Stunden am Rückfluss gekocht, das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck eingeengt und mit 15 ml 12-molare ethanolische Salzsäurelösung 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zur Trockene eingeengt, der Rückstand mit 50 ml Wasser aufgenommen und mit 50 ml Essigester extrahiert. Die wässerige Phase wurde durch Zugabe von Kaliumcarbonat alkalisch gestellt und wiederholt mit Essigester extrahiert. Die vereinigten Essigester-Extrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 2.09 g (90% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 257 / 259 (Cl)

(4e) (f?)-3-(4-Amino-3-chlor-5-methyl-phenvn-2-(r4-(2-oxo-1.2.4.5 -tetrahvdro- benzo[(/iri ,3ldiazepin-3Λd)-piperidin-1-carbonyll-amino)-propionsäure ethyl- ester Eine eisgekühlte Mischung aus 2.09 g (8.1 mmol) (R)-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor-5- methyl-phenyl)-propionsäureethylester und 100 ml DMF wurde mit 1.6 g (9.7 mmol) CDT versetzt und 30 Minuten unter Eiskühlung gerührt. Anschließend wurde unter Eiskühlung 2.0 g (8.1 mmol) 3-Piperidin-4-yl-1 ,3,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]di- azepin-2-on, gelöst in 80 ml DMF, zugetropft und 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 300 ml Eiswasser gegossen, der Niederschlag abgesaugt und im Umluftrockenschrank bei 300C getrocknet. Ausbeute: 4.1 g (95% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 528 / 530 (CI)

(4f) (R)-3-(4-Amino-3-chlor-5-methyl-phenyl)-2-(r4-(2-oxo-1.2.4.5 -tetrahvdro- benzofcπH ,31diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonvπ-amino)-propionsäure Die Mischung aus 4.1 g (7.8 mmol) (fi)-3-(4-Amino-3-chlor-5-methyl-phenyl)-2-{[4-(2- oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[α(][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonyl]-amino}- propionsäureethylester, 60 ml Methanol und 60 ml THF wurde mit einer Lösung von 1.5 g (36.8 mmol) Lithiumhydroxid in 30 ml Wasser versetzt und 20 Stunden bei 400C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand in 50 ml Wasser aufgenommen und durch Zugabe von 2-molarer Salzsäurelösung sauer gestellt. Der entstehende Niederschlag wurde abgesaugt und im Umlufttrockenschrank bei 35°C getrocknet. Ausbeute: 3.6 g (94% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 500 / 502 (Cl)

(4g) 4-(r2-Oxo-1.2.4.5-tetrahvdro-benzofαππ .31diazepin-3-vπ-Diperidin-1-carbon- säure-r(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-methyl-benzyl)-2-(4-cvclopr opyl-piperazin- 1 -yl)-2-oxo-ethyll-amid Zu der Mischung aus 100 mg (0.20 mmOl) (f?)-3-(4-Amino-3-chlor-5-methyl-phenyl)- 2-{[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/l[1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonyl]- aminoj-propionsäure, 10 ml THF, 1 ml DMF wurde 0.1 ml Diisopropylethylamin, 64.2 mg (0.20 mmol) TBTU und 27.0 mg (0.20 mmol) HOBt gegeben, 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend mit 80 mg (0.60 mmol) 1-Cyclopropyl- piperazin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, mit 20 ml halbgesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung versetzt und zweimal mit je 20 ml Essigester extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden einmal mit 20 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromatograhisch über Kieselgel aufgereinigt. Ausbeute: 89.5 mg (74% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 608 / 610 (CI)

Beispiel 4.1

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[d][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonsäure-[(R)- 1-(4-amino-3-chlor-5-methyl-benzyl)-2-(4-isopropyl-piperazin -1-yl)-2-oxo-ethyl]-amid

Hergestellt analog Beispiel 4g. Ausbeute: 65% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 610 / 612 (Cl)

Beispiel 5

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/|[1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonsäure-{(R)- 1-(4-amino-3-chlor-5-ethinyl-benzyl)-2-[4-(4-methyl-piperazi n-1-yl)-piperidin-1-yl]-2- oxo-ethyl}-amid

(5a) (E)-2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-phenyl)-acrylsäuremeth ylester Hergestellt analog Beispiel 4a. Ausbeute: 56% der Theorie MS: (M+H)+ = 269 /271 (Cl)

(5b) 2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-phenyl)-propionsäuremethyl ester Hergestellt analog Beispiel 4b. Ausbeute: 100% der Theorie

(5c) (f?)-2-Acetylamino-3-(4-amino-3-chlor-phenvπ-propionsäurem ethylester Hergestellt analog Beispiel 4c. Ausbeute: 39% der Theorie MS: (M+H)+ = 271 /273 (Cl)

(5d) (ffl-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor-phenyl)-propionsäureethyles ter Hergestellt analog Beispiel 4d. Ausbeute: 80% der Theorie MS: (M+H)+ = 243 /245 (CI)

(5e) (R)-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor-5-iod-phenyl)-propionsäureet hylester Zu der Mischung aus 1.95 g (7.7 mmol) lod, 2.4 g (7.7 mmol) Silbersulfat und 70 ml Ethanol wurde eine Lösung von 1.85 g (7.6 mmol) (R)-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor- phenyl)- propionsäureethylester zugetropft. Das Reaktionsgemisch wurde 4 Tage bei Raumtemperatur gerührt, nochmals mit einer Lösung von 195 mg (0.77 mmol) lod und 240 mg (0.77 mmol) Silbersulfat in 10 ml Ethanol versetzt und weitere 3 Tage gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert, das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt, mit 100 ml 15%-iger Kaliumcarbonatlösung versetzt und zweimal mit je 100 ml Essigester extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, eingeengt und über Kieselgel säulenchromatographisch gereinigt. Ausbeute: 1.5 g (54% der Theorie) MS: (M+H)+ = 369 /371 (Cl)

(5f) (f?)-2-Amino-3-(4-amino-3-chlor-5-trimethylsilanylethinyl-ph enyl)-propion- säureethylester Unter Argon-Schutzgas wurde eine Mischung aus 235 mg (0.64 mmol) (R)-2-Amino- 3-(4-amino-3-chlor-5-iod-phenyl)-propionsäureethylester, 45.9 mg (0.064 mmol) Bis- (thphenylphosphin)-palladium(ll)-dichlorid, 6.0 mg (0.032 mmol) Kupfer(l)- iodid und 15 ml Triethylamin mit 0.19 ml (1.32 mmol) Trimethylsilylacetylen versetzt und 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 30 ml Wasser versetzt und mit 40 ml Essigester extrahiert. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, unter vermindertem Druck eingeengt und der Rückstand säulenchromatographisch über Kieselgel aufgereinigt. Ausbeute: 168 mg (78% der Theorie) MS: (M+H)+ = 339 /341 (Cl)

(5g) (R)-3-(4-Amino-3-chlor-5-trimethylsilanylethinyl-phenyl)-24f 4-(2-oxo-1 , 2,4,5- tetrahvdro-benzorc/iπ .Sldiazepin-S-vO-piperidin-i-carbonvIl-aminol-propion- säureethylester Hergestellt analog Beispiel 4e. Ausbeute: 89% der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 610 / 61-2 (Cl)

(5h) (ffl-3-(4-Amino-3-chlor-5-ethinyl-phenyl)-2-(r4-(2-oxo-1.2,4 ,5-tetrahvdro- benzofc/iπ ,31diazepin-3-yl)-piperidin-1-carbonvn-amino)-propionsäure Herstellung analog Beispiel 4f. Ausbeute: 91 % der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 510 / 512 (CI)

(5i) 4-(2-Oxo-1 ,2,4.5-tetrahvdro-benzorc/iri ,3ldiazepin-3-vπ-piperidin-1-carbon- säure-{(R)-1-(4-amino-3-chlor-5-ethinyl-benzyl)-2-r4-(4-met hyl-piperazin-1-yl)- piperidin-1-vn-2-oxo-ethyl|-amid Herstellung analog Beispiel 4g. Ausbeute: 75% der Theorie ESI-MS: (M+H)+ = 675 / 677 (Cl) Retentionszeit (HPLC): 5.4 min (Methode A)

Beispiel 6

4-(2-Oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 -carbonsäure-{(R)- 1-(4-amino-3-chlor-5-ethyl-benzyl)-2-[4-(4-methyl-piperazin- 1-yl)-piperidin-1-yl]-2- oxo-ethyl}-amid

54 mg (73.0 mmol) 4-(2-Oxo-1 ^Aδ-tetrahydro-benzotcflti ,3]diazepin-3-yl)-piperidin- 1 -carbonsäure-{(/?)-1 -(4-amino-3-chlor-5-ethinyl-benzyl)-2-[4-(4-methyl-piperazin -1 - yl)-piperidin-1-yl]-2-oxo-ethyl}-amid, 10 mg (0.02 mmol) Bis(1 ,5-cyclooctadien)-di- rhodium(l)-dichlorid, 16.5 mg (0.04 mmol) 1 ,3-Bis(diphenylphosphino)-propan wurden in 10 ml entgastem Methanol und 0.1 ml entgastem Triethylamin gelöst und anschließend 2 Stunden bei Raumtemperatur und 3 bar Wasserstoffdruck hydriert. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt und in Essigester aufgenommen. Vom unlöslichen Niederschlag wurde abgesaugt und das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch aufgereinigt. Ausbeute: 23.3 mg (43% der Theorie) MS: (M+H)+ = 679 /681 (Cl) Retentionszeit (HPLC): 5.4 min (Methode A)

Beispiel 7

(S)-2-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-1-[4-(4-c yclopropyl-piperazin-1-yl)- piperidin-1 -yl]-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 ■ yl]-butane-1 ,4-dion (7a) 1-Benzyl-4-cvcloprOPyl-piperazin Eine gerührte und im Eisbad gekühlte Mischung aus 1.946 ml (10.5 mmol) Benzyl- piperidon, 3.0 g (10.4 mmol) 1-Cyclopropyl-piperazin und 300 ml DCM wurde portionsweise mit 5.58 g (25.0 mmol) Natriumacetoxyborhydrid versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend mit 60 ml 1 -molarer Natronlauge versetzt, die organische Phase abgetrennt und unter vermin¬ dertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Alox aufgereinigt (Fließmittel: Petrolether / Essigester = 4 / 1 ). Ausbeute: 1.50 g (48% der Theorie) MS: (M)+ = 300 Rf: 0.75 (PE / EtOAc = 1 /1 )

(7b) 1-Cvclopropyl-4-piperidin-4-yl-piperazin 1.5 g (5.0 mmol) 1-Benzyl-4-cyclopropyl-piperazin in 50 ml Methanol wurde unter Zugabe von 250 mg Palladium auf Kohle (10%) 7 Stunden bei RT und 5 bar Druck hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, die Mutterlauge unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 1.05g (100% der Theorie) MS: (M)+ = 210

(7c) (S)-2-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzvπ-1-f4-(4-cvcl opropyl-piperazin-1- yl)-piperidin-1 -yl1-4-r4-(2-oxo-1 ,2,4.5-tetrahvdro-benzorc/iri ,31diazepin-3-vO- piperidin-1 -yll-butane-1 ,4-dion Eine Mischung aus 499 mg (0.90 mmol) (S)-2-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl- benzyl)-4-oxo-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[αf][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1- yl]-butansäure, 199 mg (0.95 mmol) 1-Cyclopropyl-4-piperidin-4-yl-piperazin, 321 mg (1.00 mmol) TBTU, 0.277 ml Triethylamin und 100 ml THF wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt und der Rückstand zwischen 150 ml Essigester und 150 ml 15%-iger Kaliumcarbonatlösung verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt, getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromato¬ graphisch über Kieselgel aufgereinigt. Ausbeute: 360.0 mg (54% der Theorie) MS: (M+H)+ = 744 / 746 (CI) Rf: . 0.55 (DCM/MeOH/wäss. Ammoniak = 90/10/1 )

Beispiel 8

(S)-2-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl-benzyl)-1-[4-(cyc lopropyl-methyl-amino)- piperidin-1 -yl]-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c(][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 - yl]-butan-1 ,4-dion

Eine Mischung aus 500 mg (0.90 mmol) (S)-2-(4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl- benzyl)-4-oxo-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1 - yl]-butansäure, 207 mg (0.91 mmol) Cyclopropyl-methyl-piperidin-4-yl-amin Dihydro- Chlorid, 385 mg (1.20 mmol) TBTU, 0,695 ml Triethylamin, 50 ml DMF und 50 ml THF wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck vom THF befreit und in 200 ml 15%-ige Kaliumcarbonatlösung eingerührt. Der entstehende feste Niederschlag wurde abgesaugt, getrocknet und anschließend säulenchromatographisch über Kieselgel aufgereinigt. Ausbeute: 450.0 mg (72% der Theorie) MS: (M+H)+ = 689 / 691 (Cl) Rf: 0.55 (DCM/MeOH/wäss. Ammoniak = 85/15/1.5)

Beispiel 9

(S)-2-(3-Chlor-4-hydroxy-5-trifluormethyl-benzyl)-1-(4-mo rpholin-4-yl-piperidin-1-yl)-4- [4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c/j[1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-yl]-butane-1 ,4- dion

(9a) 4-Hvdroxy-3-trifluormethyl-benzoesäure Eine Mischung aus 10.0 g (45.4 mmol) 4-Methoxy-3-trifluormethyl-benzoesäure und 75 g (649 mmol) Pyridin hydrochlorid wurden 5 Stunden bei 18O0C unter Stickstoff¬ begasung gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend auf 1 L 10%-ige Zitronensäurelösung gegossen, mit 500 ml EtOAc extrahiert, die organische Phase mit 1 L Wasser gewaschen, getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 11.7 g Rohprodukt ESI-MS: (M+H)- = 205 Retentionszeit HPLC: 6.1 min (Methode A)

(9b) 3-Chlor-4-hvdroxy-5-trifluormethyl-benzoesäure Eine Mischung aus 11.7 g (57 mmol) 4-Hydroxy-3-trifluormethyl-benzoesäure und 40 ml Essigsäure wurde unter Rühren bei 400C Badtemperatur tropfenweise mit 5.15 ml (63 mmol) Sulfurylchlorid versetzt und 2 Stunden bei 4O0C gerührt. Anschließend wurde nochmals 2.5 ml (31 mmol) Sulfurylchlorid zugegeben und 4 Stunden bei 600C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 300 ml Wasser gegossen und mit 200 ml EtOAc extrahiert. Die organische Phase wurde zweimal mit 500 ml Wasser gewa- sehen, getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit 80 ml Petrolether verrührt, der Niederschlag abgesaugt, mit 20 ml Petrolether gewaschen und getrocknet. Ausbeute: 7.7 g (56% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 239 / 241 (Cl) Retentionszeit HPLC: 6.5 min (Methode A)

(9c) 2-Chlor-4-hvdroxymethyl-6-trifluormethyl-phenol 7.7 g ( 32 mmol) S-Chlor^-hydroxy-ö-trifluormethyl-benzoesäure gelöst in 100 ml THF wurden mit 5.76 g (36 mmol) Carbonyldiimidazol versetzt und 1 Stunde bei 40°C gerührt. Anschließend wurde die Mischung auf Raumtemperatur abgekühlt und unter Stickstoffatmosphäre langsam zu einer gerührten Lösung von 3.78 g (100 mmol) Natriumborhydrid in 40 ml Wasser zugegeben und weitere 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 200 ml Wasser verdünnt, mit 50 ml halbkonzentrierter Salzsäure angesäuert und zweimal mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organische Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 5.9 g (81 % der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 225 / 227 (CI) Rf: 0.85 (EtOAc)

(9d) 3-Chlor-4-hvdroxy-5-trifluormethyl- benzaldehvd Zu der Mischung aus 5.90 g (26 mmol) 2-Chlor-4-hydroxymethyl-6-trifluormethyl- phenol und 100 ml Dichlormethan wurde unter Rühren, portionsweise 30.0 g (345 mmol) Mangandioxid zugegeben und 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde von Feststoff abgesaugt, die Lösung unter vermindertem Druck eingeengt und als Rohprodukt weiter umgesetzt.

(9e) 2-[1-(3-Chlor-4-hydroxy-5-trifluoromethyl-phenyl)-meth-(Z)-y liden1-bernstein- säure-1-methylester Eine Mischung aus 3.0 g (14.4 mmol) 3-Chlor-4-hydroxy-5-trifluormethyl- benzalde- hyd und 100 ml THF wurde mit 10.48 g (26.7 mmol) 3-(Triphenyl-λ5-phosphan- ylidene)-pentanedisäure-monomethylester versetzt und 6 Tage bei 420C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand in Wasser und EtOAc aufgenommen. Die organische Phase wurde abgetrennt, mit Wasser gewaschen und dreimal mit 15%-iger Kaliumcarbonatlösung extrahiert. Die vereinigten wässerigen Extrakte wurden mit EtOAc gewaschen, mit 200 ml EtOAc versetzt und unter Rühren durch Zugabe von konz. Salsäure sauer gestellt. Die organische Phase wurde abgetrennt, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Kieselgel (Fließmittel: PE/EtOAc = 1/1 ) aufgereinigt. Ausbeute: 2.5 g (55% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 337 / 339 (Cl) Rf: 0.75 (EtOAc)

(9f) (S)-2-(3-Chlor-4-hvdroxy-5-trifluormethyl-benzvπ-bernsteins äure-1-methylester 2.3 g (6.7 mmol) 2-[1-(3-Chlor-4-hydroxy-5-trifluoromethyl-phenyl)-meth-(Z)-y liden]- bernsteinsäure - 1 -methylester wurde in einer entgasten Lösung von 30 ml Methanol und 2.5 ml Triethylamin gelöst und mit 100 mg (-)-1 ,2-Bis-((2/?,5/?)-2,5-diethyl- phospholano)benzol-(cyclooctadien)-rhodium-(l) Tetrafluoroborat versetzt. Die Reaktionslösung wurde 8 Stunden mit 50 bar Wasserstoff bei RT hydriert. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand in 100 ml EtOAc gelöst und zweimal mit 70 ml 2-molarer Salzsäure gewaschen. Die organische Phase wurde anschließend dreimal mit 15%-iger Kaliumcarbonatlösung extrahiert, die vereinigten wässerigen Phasen mit konz. Salzsäure sauer gestellt und zweimal mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 1.7 g (74% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 341 / 343 (Cl) Retentionszeit HPLC: 7.1 min (Methode A)

(9g) (S)-2-(3-Chlor-4-hvdroxy-5-trifluormethyl-benzyl)-4-oxo-4-r4 -(2-oxo-1.2.4.5- tetrahvdro-benzofGπM .3ldiazepin-3-vO-piperidin-1-vπ-butansäuremethylester Eine Mischung aus 1.19 g (4.9 mmol) (S)-2-(3-Chlor-4-hydroxy-5-trifluormethyl- benzyl)-bernsteinsäure-1 -methylester, 1.56 g (4.9 mmol) TBTU, 0.73 ml (5.0 mmol) Triethylamin, 1 .65 g (4.8 mmol) S-Piperidin^-yl-I .SΛδ-tetrahydro-benzotcOπ .Sp- azepin-2-on und 30 ml DMF wurde 12 Stunden bei RT gerührt. Das Reaktions- gemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand in 200 ml EtOAc aufgenommen, mit 200 ml 10%-iger Zitronensäurelösung und 50 ml gesättigter wässeriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 1.8 g (65% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 568 / 570 (Cl) Retentionszeit HPLC: 8.1 min (Methode A) (9h) (SV 2-(3-C h lor-4-h vd roxy-5-trifluormeth yl-benzyl )-4-oxo-4-r4-(2-oxo- 1.2.4.5- tetrahvdro-benzorcnn .31diazepin-3-vn-piDeridin-1-yll-butansäure 1.8 g (S)-2-(3-Chloro-4-hydroxy-5-trifluoromethyl-benzyl)-4-oxo-4- [4-(2-oxo-1 ,2,4,5- tetrahydro-benzo[d][1 ,3]diazepin-3-yl)-piperidin-1-yl]-butansäuremethylester gelöst in 50 ml THF, wurde mit einer Lösung von 115.2 mg (4.8 mmol) Lithiumhydroxid in 50 ml Wasser versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck eingeengt, mit 150 ml Wasser versetzt und mit 150 ml EtOAc gewaschen. Die wässerige Phase wurde mit konz. Salzsäure sauer gestellt und mit 150 ml EtOAc extrahiert. Die organische Phase wurde abgetrennt, getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Ausbeute: 1.5 g (85% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 554 / 556 (CI) Retentionszeit HPLC: 7.2 min (Methode A)

(9i) (S)-2-(3-Chlor-4-hvdroxy-5-trifluormethyl-benzyl)-1-(4-morph olin-4-yl-piperidin- 1 -yl)-4-f4-(2-oxo-1.2,4,5-tetrahydro-benzorc/if1.3ldiazepin-3 -yl)-piperidin-1 -yll- butan-1 ,4-dion Herstellung analog Beispiel (1g) aus 70 mg (0.126 mmol) (S)-2-(3-Chlor-4-hydroxy-5- thfluormethyl-benzyl)-4-oxo-4-[4-(2-oxo-1 ,2,4,5-tetrahydro-benzo[c(][1 ,3]diazepin-3- yl)-piperidin-1-yl]-butansäure und 22 mg (0.130 mmol) 4-Piperidin-4-yl-morpholin. Ausbeute: 47 mg (53% der Theorie) ESI-MS: (M+H)+ = 706 / 708 (CI) Retentionszeit HPLC: 6.0 min (Methode A)

Die nachfolgenden Beispiele beschreiben die Herstellung pharmazeutischer Anwendungsformen, die als Wirkstoff eine beliebige Verbindung der allgemeinen Formel (I) enthalten:

Beispiel I:

Kapseln zur Pulverinhalation mit 1 mg Wirkstoff

Zusammensetzung: 1 Kapsel zur Pulverinhalation enthält: Wirkstoff 1.0 mg Milchzucker 20.0 mg Hartgelatinekapseln 50.0 mα 71.0 mg

Herstellungsverfahren: Der Wirkstoff wird auf die für Inhalative erforderliche Korngröße gemahlen. Der gemahlene Wirkstoff wird mit dem Milchzucker homogen gemischt. Die Mischung wird in Hartgelatinekapseln abgefüllt.

Beispiel II:

Inhalationslösung für Respimat® mit 1 mg Wirkstoff

Zusammensetzung: 1 Hub enthält: Wirkstoff 1.0 mg Benzalkoniumchlorid 0.002 mg Dinatriumedetat 0.0075 mg Wasser gereinigt ad 15.0 μl

Herstellungsverfahren:

Der Wirkstoff und Benzalkoniumchlorid werden in Wasser gelöst und in Respimat®- Kartuschen abgefüllt.

Beispiel III:

Inhalationslösung für Vernebler mit 1 mg Wirkstoff

Zusammensetzung: 1 Fläschchen enthält: Wirkstoff 0.1 g Natriumchlorid 0.18 g Benzalkoniumchlorid 0.002 g Wasser gereinigt ad 20.0 ml

Herstellunαsverfahren: Wirkstoff, Natriumchlorid und Benzalkoniumchlorid werden in Wasser gelöst.

Beispiel IV:

Treibgas-Dosieraerosol mit 1 mg Wirkstoff

Zusammensetzung: 1 Hub enthält: Wirkstoff 1.0 mg Lecithin 0.1 % Treibgas ad 50.0 μl

Herstellunqsverfahren: Der mikronisierte Wirkstoff wird in dem Gemisch aus Lecithin und Treibgas homogen suspendiert. Die Suspension wird in einen Druckbehälter mit Dosierventil abgefüllt.

Beispiel V:

Nasalspray mit 1 mg Wirkstoff

Zusammensetzung: Wirkstoff 1.0 mg Natriumchlorid 0.9 mg Benzalkoniumchlorid 0.025 mg Dinatriumedetat 0.05 mg Wasser gereinigt ad 0.1 ml Herstellungsverfahren: Der Wirkstoff und die Hilfsstoffe werden in Wasser gelöst und in ein entsprechendes Behältnis abgefüllt.

Beispiel VI:

Injektionslösung mit 5 mg Wirksubstanz pro 5 ml

Zusammensetzung: Wirksubstanz 5 mg Glucose 250 mg Human-Serum-Albumin 10 mg Glykofurol 250 mg Wasser für Injektionszwecke ad 5 ml

Herstellung: Glykofurol und Glucose in Wasser für Injektionszwecke auflösen (WfI); Human- Serum-Albumin zugeben; Wirkstoff unter Erwärmen auflösen; mit WfI auf Ansatzvolumen auffüllen; unter Stickstoff-Begasung in Ampullen abfüllen.

Beispiel VII:

Injektionslösung mit 100 mg Wirksubstanz pro 20 ml

Zusammensetzung: Wirksubstanz 100 mg Monokaliumdihydrogen- phosphat = KH2PO4 12 mg Dinatriumhydrogen phosphat = Na2HPθ4>2H2θ 2 mg Natriumchlorid 180 mg Human-Serum-Albumin 50 mg Polysorbat 80 20 mg Wasser für Injektionszwecke ad 20 ml

Herstellung: Polysorbat 80, Natriumchlorid, Monokaliumdihydrogenphosphat und Dinatriumhydro- genphosphat in Wasser für Injektionszwecke (WfI) auflösen; Human-Serum-Albumin zugeben; Wirkstoff unter Erwärmen auflösen; mit WfI auf Ansatzvolumen auffüllen; in Ampullen abfüllen.

Beispiel VIII:

Lyophilisat mit 10 mg Wirksubstanz

Zusammensetzung: Wirksubstanz 10 mg Mannit 300 mg Human-Serum-Albumin 20 mg

Herstellung: Mannit in Wasser für Injektionszwecke (WfI) auflösen; Human-Serum-Albumin zugeben; Wirkstoff unter Erwärmen auflösen; mit WfI auf Ansatzvolumen auffüllen; in Vials abfüllen; gefriertrocknen.

Lösungsmittel für Lyophilisat: Polysorbat 80 = Tween 80 20 mg Mannit 200 mg Wasser für Injektionszwecke ad 10 ml

Herstellung: Polysorbat 80 und Mannit in Wasser für Injektionszwecke (WfI) auflösen; in Ampullen abfüllen.

Beispiel IX: Tabletten mit 20 mg Wirksubstanz

Zusammensetzung: Wirksubstanz 20 mg Lactose 120 mg Maisstärke 40 mg Magnesiumstearat 2 mg Povidon K 25 18 mg

Herstellung: Wirksubstanz, Lactose und Maisstärke homogen mischen; mit einer wässerigen Lösung von Povidon granulieren; mit Magnesiumstearat mischen; auf einer Tablettenpresse abpressen; Tablettengewicht 200 mg.

Beispiel X:

Kapseln mit 20 mg Wirksubstanz

Zusammensetzung: Wirksubstanz 20 mg Maisstärke 80 mg Kieselsäure, hochdispers 5 mg Magnesiumstearat 2.5 mg

Herstellunα: Wirksubstanz, Maisstärke und Kieselsäure homogen mischen; mit Magnesiumstearat mischen; Mischung auf einer Kapselfüllmaschine in Hartgelatine-Kapseln Grosse 3 abfüllen.

Beispiel Xl:

Zäpfchen mit 50 mg Wirksubstanz Zusammensetzung: Wirksubstanz 50 mg Hartfett (Adeps solidus) q.s. ad 1700 mg

Herstellung: Hartfett bei ca. 38°C aufschmelzen; gemahlene Wirksubstanz im geschmolzenen Hartfett homogen dispergieren; nach Abkühlen auf ca. 35°C in vorgekühlte Formen ausgiessen.

Beispiel XII:

Injektionslösung mit 10 mg Wirksubstanz pro 1 ml

Zusammensetzung: Wirksubstanz 10 mg Mannitol 50 mg Human-Serum-Albumin 10 mg Wasser für Injektionszwecke ad 1 ml

Herstellung: Mannitol in Wasser für Injektionszwecke auflösen (WfI); Human-Serum-Albumin zugeben; Wirkstoff unter Erwärmen auflösen; mit WfI auf Ansatzvolumen auffüllen; unter Stickstoff-Begasung in Ampullen abfüllen.