La présente invention a trait à des inclusions de stéroïdes à noyau A saturé et de leurs métabolites dans les cyclodextrines, inclusions qui peuvent présenter la forme de complexes et qui s'appliquent en particulier à des stéroïdes sexuels endogènes. Elle concerne également un procédé pour leur fabrication.

Les stéroïdes ont généralement une très faible solubilité dans l'eau, ce qui rend leur utilisation très difficile, sinon impossible dans de nombreux cas, par exemple pour leur administration par voie intraveineuse. Il est connu d'augmenter la solubilité des stéroïdes en ajoutant des agents solubilisants tels que la lécit ine, mais cette technique est peu satisfaisante en raison de l'instabilité chimique qui en résulte.

On remarquera également que, toujours en raison de leur mauvaise solubilité dans l'eau, les stéroïdes administrés par voie orale ont une mauvaise biodisponibilité et un faible taux de dissolution.

Il est connu que, lorsqu'on dissous, dans une solution aqueuse de cyclodextrine, une autre substance dont les molécules sont au moins partiellement apolaires, cette fraction moléculaire apolaire présente une tendance à s'insérer dans les cavités de la cyclodextrine également apolaires. Mais il est bien

connu que les complexes d'inclusion ainsi obtenus sont beaucoup plus difficilement solubles dans l'eau que la cyclodextrine libre elle-même (voir Chem.Berichte, 90,2561-2573(1957)). Mais, comme la cyclodextrine elle- même ne présente qu'une solubilité faible à température ordinaire, les complexes ainsi formés ont tendance à se séparer des solutions sous formes cristallines d'où la quasi impossibilité de les administrer oralement et plus encore par injection. L'utilisation de diméthyl-béta-cylodextrine proposée par le brevet français 2 484 252 permet d'augmenter la solubilité de composés tels que la nortestostérone, l'hydrocortisone, l'androstène-dione, l'oestrone, la méthyltestostérone ou la progestérone, tous ces composés étant des stéroïdes dont le noyau A est insaturé ; ce procédé ne semble pas avoir donné de résultats satisfaisants avec d'autres types de stéroïdes et en particulier il ne semble pas avoir pu être appliqué à des stéroïdes dont le noyau A est saturé. Il en va de même avec la solution utilisée par le brevet américain 4 877 774 (PITHA) qui utilise de la gammacyclodextrine pour complexer de la testostérone, de l'oestradiol ou de la progestérone caractérisés par leurs noyaux A insaturés. Les mêmes remarques s'imposent pour le brevet américain 326 196 (AKZO) ou encore le brevet belge 894 825 (RICHTER Gédéon) qui concerne également des inclusions, dans une

gammacyclodextrine, de méthyltestostérone, de spironolactone, d'hydrocortisone, de prednisolone, dexaméthasone et de triamcinolone, stéroïdes présentant tous un noyau A insaturé. On peut donc considérer que les techniques antérieures étaient inapplicables à des stéroïdes à noyau A saturé et estimer qu'actuellement, il n'existe pas de solution réellement satisfaisante pour rendre suffisamment solubles des stéroïdes à noyau A saturé, par exemple pour les administrer par voie orale et plus encore par injection et notamment par voix intraveineuse.

La présente invention concerne donc plus particulièrement la mise en solution de stéroïdes comprenant de 18 à 27 atomes de carbone et présentant un noyau A saturé. Par ailleurs, comme on le verra ci-après, la présente invention s'applique tout particulièrement aux stéroïdes de ce type présentant :

- au moins un groupe méthyle en position 10 et/ou 13

- éventuellement un autre radical méthyle en position 1 ou 2,

- en position 17, l'hydrogène et/ou un radical hydrocarbure linéaire ou ramifié, - éventuellement en positions 3,7,11,12,14,17 ou sur ladite chaîne hydrocarbure, au moins une fonction alcool et/ou cétone et/ou acide.

- éventuellement un radical acide en position 2.

- éventuellement un hétérocycle nitré entre les positions 2 et 3. II convient de rappeler à ce sujet que les stéroïdes présentent comme structure de base celle du perhydrocyclopentanophénanthrène

PERHYDR0CYCL0PENTANOPHENANTHRENE

qui est le dérivé saturé du cyclo(a) phénanthrène

. _? s ^C \ / ^CH "^ CYCLO(A) PHENANTHRENE

Les repères numériques des positions sont portés sur la formule A.

Dans la plupart des cas, les cycles de ces molécules de type cyclohexane sont conformés en "chaises de pont" c'est-à-dire qu'ils présentent des plis extrêmes opposés par rapport à la partie centrale, comme on le voit sur les formules suivantes :

Selon l'orientation du noyau cyclohexane A extrême (à gauche sur les formules) par rapport aux autres cycles de la molécule, on distingue les formes

5alpha-trans(formule C) qui correspondent aux séries

allô et les formes 5béta-cis (formule D) qui correspondent aux séries normales.

On a également représenté sur ces formules C et

D l'orientation des substitués axiaux (a) et equatoriaux (e). Sur un carbone donné, la liaison (a) et (e) la plus proche de l'observateur est généralement représentée en traits pleins (béta) et l'autre en pointillés (alpha). Si l'orientation est inconnue, on la représente en zigzag (xi). Dans les stéroïdes naturels, les cycles B et C sont toujours en position respective trans et les cycles C et D presque toujours également en position respective trans.

La présente invention concerne les stéroïdes à cycle A saturé, ce qui exclut, par exemple, l'oestrone ou hydroxy-3-oestratriène l,3,5(10)-one-17.

OESTRONE

HYDR0XY-3-0ESTRATRIENE 1 , 3 , 5 ( 10 ) -ONE-17

mais inclut en particulier les trois composés suivants que l'on retrouvera dans les exemples : 1) la prégnanol-3alpha-one-20.

2) la dihydro-4-progestérone ou prégnane-diol-

DIHYDR ₀ -4-PR ₀ GESTER0NE PREGNANE-DIOL-3 ,20

3 ) la dihydro-4-testotérone ou stanolone ou encore hydroxy-17β-androstane-5alpha-one-3

7B-ANDR0STANE NE-3 -TESTOTERONE

Les stéroïdes visés par l'invention présentent de 18 à 27 atomes de carbone et répondent à la formule

dans laquelle :

- les noyaux A et B sont saturés,

R*L est de l'hydrogène et/ou un radical

alcool (-OH) ou cétone (=OH);

- l'un au plus de R ₂ et R ₃ est un hydrogène, au moins l'un de R ₂ et R ₃ étant un radical méthyle; ~ ^R 4 ^{est un} hydrogène, un alcool ou une chaîne hydrocarbure aliphatique éventuellement ramifiée et portant éventuellement une ou plusieurs fonctions alcool et/ou cétone et/ou acide; - R ₅ est un atome d'hydrogène ou un radical alcool ou un hydrocarbure aliphatique.

- Dans la formule ci-dessus R ₄ et/ou R ₅ peuvent être un radical cétone ; un hétérocycle éventuellement aminé peut être formé entre les positions 2 et 3 en incluant les deux atomes de carbone correspondants et un ou plusieurs atomes d'azote et éventuellement d'oxygène. Par ailleurs un radical méthyle peut être fixé en positon 1 ou 2, un radical acide peut être fixé en position 2, et une double liaison peut exister entre les positions 5 et 6. Une fonction cétone, et/ou une fonction alcool et/ou un hydrogène peuvent être fixés en positions 7 et/ou 11 et/ou 12.

Les principaux .stéroïdes répondant à la définition qui vient d'être donnée sont présentés dans le tableau suivant avec indication des différents radicaux ou fonctions selon les positions numérotées en tête du tableau.

TABLEAU 1

[D (2) Rl(3) (5) (7) R ₂ (10) (11) (12) R ₃ (13) R ₄ (17) R ₅ (17)

OESTRANE CH,

ANDROSTANE CH, CH

PREGHANE CH, CH*; C ₂ H ₅

CHOLESTANE CH, CH, (CH-CH ₃ )-(CH ₂ )3-CH(CH ₃ )2

PREGNANOLONE OH CH, CH, CO-CH-,

TETRAHYDROCORTISOL OH CH- _j CH, CO-CH ₂ OH OH

TETRAHYDROCORTISONE OH CH, CO-CH ₂ OH OH

CORTOL OH CH, OH CHOH-CH ₂ OH OH

CORTOLONE OH Cll _j O CHOH-CH ₂ OH OH

HYDROXY-ll-CHOLANOLONE OH CH, OH CH-* CHOH-CH ₂ OH OH

KETO-11-CHOLANOLONE OH CH, CH, CHOH-CH ₂ OH OH

HYDROXY-llbéta-ANDROSTERONE OH CH, OH CH ₃ R ₄ +R ₅ : =0 KETO-llbéta-ANDROSTERONE OH CH, O CH, R ₄ +R ₅ : ^~~ 0

ACIDE DESOXYCHOLIQUE OH CH, OH CH, (CH-CH3)-(CH ₂ ) ₂ -COOH

ACIDE CHOLIQUE OH OH CH, OH CH, (CH-CH3)-(CH ₂ ) ₂ -COOH

PREGNANE-DIOL OH CH, CH, CHOH-CH3

CHOLESTEROL OH CH, CH, ( CH-CH3 ) - ( CH ₂ ) ₃ -CH ( CH3 ) ₂

HYDROXYPREGNANOLONE OH CH, CH, CO-CH, OH

DEHYDROXYEPIAHDROSTERONE OH CH, CH, R ₄ +R ₅

TABLEAU 3

M

En ce qui concerne les cyclodextrines, on rappellera qu'il s'agit d'oligosaccharides cycliques composés généralement de 6 à 8 unités de glucoses

(alpha, béta, gamma cyclodextrine) reliés entre eux par une liaison covalente alpha o^ 1-4.

Les types de cyclodextrines auxquels fait appel la présente invention sont notamment la bétacyclo- dextrine, la gammacyclodextrine et 1'hydroxypropyl- bétacyclodextrine, en tout ou partie substituée. Les cyclodextrines sont caractérisées par le fait que la partie intérieure des molécules est apolaire, tandis que la partie extérieure est polaire. Les stéroïdes en solution aqueuse (ou hydroalcoolique dans un rapport judicieusement choisi) s'incluent dans la cyclodextrine par interaction hydrophobe, que l'on peut assimiler dans une certaine mesure à une microencapsulation. L'expérience amène à considérer que les inclusions obtenues sont des complexes qui constituent une forme galénique; on en vient actuellement à considérer le complexe principe actif/bétacyclodextrine comme une entité propre ; les propriétés physiques de la molécule deviennent différentes dans la molécule complexée. De ce fait, on peut donner le nom "d'excipient actif" à la cyclodextrine. En ce qui concerne l'inclusion elle-même dans les types de cyclodextrine précédemment cités, l'expérience a montré que les stéroïdes à noyau A

saturé et en particulier les stéroïdes du type 5fl ci- dessus représenté (stéroïdes sexuels endogènes et autres) permettent d'obtenir des résultats particulièrement significatifs. Pour mieux faire comprendre les caractéris¬ tiques techniques et les avantages de la présente invention, on va décrire des exemples de réalisation étant bien entendu que ceux-ci ne sont pas limitatifs quant à leurs modes de mise en oeuvre et aux applications qu'on peut en faire.

On se référera aux figures suivantes qui représentent schématiquement des courbes de solubilité: La figure 1, la solubilité de la prégnane 5- béta-ole-3-alpha-one-20 ou pregnanolone (en mg/1) en

« fonction de la concentration de la betacyclodextrine (en 10- ³ M) dans l'eau ; la figure 2, la solubilité de cette même pregnanolone en fonction de la concentration de l'hydroxypropylcyclodextrine dans l'eau (mêmes unités que pour la figure 1) ; la figure 3, la solubilité de la dihydro-4- testostérone (en mg/1) en fonction de la concentration de la betacyclodextrine dans l'eau (en 10- ³ M) ; la figure 4, la solubilité de cette même dihydro-testostérone (en mg/1) en fonction de la concentration de l'hydroxypropylbétacyclodextrine dans l'eau (en 10- ³ M) ;

la figure 5, la solubilité de la dihydro-4- progestérone (en mg/1) en fonction de la concentration de la betacyclodextrine dans l'eau (en 10- ³ M) ; la figure 6, la solubilité de la dihydro-4- progestérone (en mg/1) en fonction de la concentration de l'hydroxypropylbétacyclodextrine dans l'eau (en 10- ³ M) ; la figure 7, la solubilité de la prégnane-5- béta-ole-3-alpha-one-20 (en %) en fonction du temps dans divers cas comparés ; la figure 8, la solubilité de la dihydro-4- testostérone (en %) en fonction du temps, dans divers cas comparés ;

EXEMPLE 1

SOLUBILITE DE LA PREGNANE 5-BETA-OL-3-ALPHA- ONE-20 EN FONCTION DE LA CONCENTRATION DE BETACYCLO¬ DEXTRINE DANS L'EAU.

On réalise des solutions de bétacyclodextrines à différentes concentrations de 0 à 5mM. A ces différentes solutions, on ajoute de la prégnane-5-béta- ol-3alpha-one-20 par pincées et ce jusqu'à apparition d'un précipité. On met sous agitation magnétique à 25° pendant 72 heures en prenant soin de vérifier à intervalles réguliers qu'il y a toujours saturation en stéroïdes. Au bout de 72 heures, on filtre les solutions ainsi réalisées et on dose le surnageant. Les

résultats obtenus font l'objet de la courbe de la figure 1.

EXEMPLE 2 SOLUBILITE DE LA PREGNANE-5BETA-OLE-3ALPHA-ONE

20 EN FONCTION DE LA CONCENTRATION D'HYDROXYPROPYL- BETACYCLODEXTRINE DANS L'EAU.

Excepté la concentration en ladite cyclo¬ dextrine qui varie de 0 à 32mM, on procède selon le même protocole qu'a l'exemple 1 ; les résultats sont illustrés par la courbe de la figure 2.

EXEMPLE 3 SOLUBILITE DU DIHYDRO-4-TESTOSTERONE EN FONCTION DE LA CONCENTRATION EN BETACYCLODEXTRINE DANS L'EAU.

On procède selon le même protocole qu'à l'exemple 1. Les résultats sont représentés par la courbe de la figure 3.

EXEMPLE 4 SOLUBILITE DE LA DIHYDRO-4-TESTOSTERONE EN FONCTION DES CONCENTRATIONS D'HYDROXYPROPYLBETA- CYCLODEXTRINE DANS L'EAU. On travaille selon les mêmes conditions qu'à l'exemple 1. Les résultats obtenus sont schématisés par la courbe de la figure 4.

EXEMPLE 5 SOLUBILITE DE LA DIHYDRO-4-PROGESTERONE EN FONCTION DE LA CONCENTRATION DE LA BETACYCLODEXTRINE DANS L'EAU. On suit encore le même protocole qu'à l'exemple 1 sauf en ce que la concentration en betacyclodextrine varie de 0 à 4mM et les résultats font l'objet de la courbe de la figure 5.

EXEMPLE 6

SOLUBILITE DE LA DIHYDRO-4-PROGESTERONE EN FONCTION DE LA CONCENTRATION DE L'HYDROXYPROPYLBETA- CYCLODEXTRINE DANS L'EAU.

Ici encore on suit le même protocole qu'à l'exemple 1 sauf en ce que la concentration en hydroxypropybéta-cyclodextrine varie de 0 à 32mM et les résultats sont représentés par la courbe de la figure 6.

Les solubilités optimales des trois stéroïdes faisant l'objet des exemples précédents pour les concentrations adéquates de betacyclodextrine et d'hydroxy-béta-cyclodextrine que l'on peut relever sur les courbes précédentes sont notées au tableau 2 suivant :

TABLEAU 2 : SOLUBILITE DES STEROÏDES

EXEMPLE 7

PREPARATION D'UN COMPLEXE DE LA PREGNANE-5- BETA-OLE-3-ALPHA-ONE-20 ET COMPARAISONS.

On dissout 0,5 gramme de betacyclodextrine dans 50ml d'eau et 50mg de prégnane-5béta-ole-3alpha-one-20 dans 50ml d'ethanol à 95% V/V. On réunit les deux fractions que l'on place sous agitation magnétique pendant 30 minutes à environ 25°C. On évapore l'éthanol. Un précipité se forme. On place la fraction aqueuse restante et son précipité sous agitation magnétique pendant 24 heures à 25°C + 1°C. On filtre la solution. On élimine l'eau ; on homogénéise la poudre ainsi obtenue. On effectue sur le complexe une dissolution après avoir dosé le taux de stéroïdes qui est de 5%. Les résultats sont illustrés par les courbes de la figure 7 qui permettent de comparer la solubilité de la prégnane-5béta-ole-3alpha-one-20 ou pregnanolone seule (courbe inférieure) (courbe intermédiaire) avec

celle du simple mélange physique de ce stéroïde et de la betacyclodextrine (courbe intermédiaire) et avec la solubilité du complexe stéroïde/bétacyclodextrine (courbe supérieure). On remarquera d'ailleurs que dès la mise en contact des constituants c'est-à-dire ce qui est nommé ici le mélange physique, avant même que ne se complète l'inclusion une première augmentation de la solubilité apparaît de façon extrêmement nette.

EXEMPLE 8

PREPARATION D'UN COMPLEXE DE LA DIHYDRO-4- TESTOSTERONE ET COMPARAISONS.

On suit le même protocole qu'à l'exemple 7 et on constate que le taux de stéroïdes est également de 5%. Les courbes de solubilité sont représentées à la figure 8 comme à la figure 7 la courbe inférieure représente la solubilité du stéroïde seul, c'est-à-dire de la dihydro-4-testostérone, la courbe intermédiaire correspond au mélange physique stéroïde + cyclodextrine avec la même remarque que précédemment, et la courbe supérieure représente la solubilité du complexe dihydro-4-testostérone/hydroxypropylbétacyclodextrine.

Il ressort de tous. les exemples précédents que le choix très particulier d'une betacyclodextrine, et en notamment de l'hydroxypropylbétacyclodextrine, convient tout particulièrement à la solubilisation des stéroïdes appartenant à la famille plus haut définie.

Il en va d'ailleurs de même avec la gammacyclodextrine. Comme on vient de le remarquer la simple mise en présence physique des constituants augmente déjà la solubilité mais lorsque la complexation ou des phénomènes équivalents se produisent on obtient une augmentation considérable de la solubilité, puisque dans certains cas on a constaté une multiplication du taux de solubilité par un coefficient de plusieurs centaines (voir, par exemple, au tableau 2 la solubilité la dihydro-4-testostérone) .

L'invention concerne les formes galéniques des produits ainsi obtenus et les applications thérapeutiques des stéroïdes actifs ainsi inclus.