Compositions topiques sous forme de gel contenant un rétinoïde particulier solubilisé

L'invention se rapporte à une composition de type gel aqueux, de préférence hydroglycolique, et qui comprend, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un rétinoïde de formule générale (I)

dans laquelle : i est un atome d'hydrogène, un radical alkyle de 1 à 4 atomes de carbone ou un radical - CF ₃ ;

R ₂ est un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou aikoxy de 1 à 4 atomes de carbone ou un atome de chlore ;

R ₃ est un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou aikoxy de 1 à 10 atomes de carbone linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un groupement méthoxy;

- R ₄ est un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ;

R ₅ est un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ;

ou bien R ₄ et R ₅ forment ensemble avec la liaison -N-C(=Y)- un cycle de type pyrrolidine, pyrrolidinone, piperidine ou piperidinone ;

Y représente deux atomes d'hydrogène ou un hétéroatome comme l'oxygène, le soufre ; - Ar représente un cycle 1,4-phényl, 2,5-pyridyl, 5,2-pyridyl ou 2,5-thiophényl ;

X représente un atome d'oxygène éventuellement substitué par une chaîne alkyl ou alkylamine ou une liaison simple C-C;

A représente un atome d'hydrogène ou la formule suivante : dans laquelle, o Q est un atome d'oxygène ou la liaison -N H- ;

o R ₆ représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, un radical cycloalkyle de 3 à 6 atomes de carbone, un radical -C(0)CH ₂ ou - C(0)CH ₂ CH ₃ ;

o R ₇ et R ₇ ' représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement hydroxyle, à la condition que R ₇ et R ₇ ' ne soient pas simultanément un groupement hydroxyle ;

n vaut 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 .

Ces composés, décrits dans le brevet EP1831149, sont de puissants rétinoïdes modulateurs du récepteur nucléaires de l'acide rétinoïque (RAR). Plus spécifiquement du sous-type gamme de ce récepteur (RARy).

Les récepteurs RARs activent la transcription en se liant à des éléments de séquences d'ADN, appelés les éléments de réponse des RAR Elément (RARE), sous forme d'un hétérodimère avec les récepteurs X des rétinoïdes (appelés les RXRs).

Trois sous-types de RARs humains ont été identifiés et décrits : les RARoc, RARfi et RARy.

Les récepteurs RAR gamma étant situés dans l'épiderme, il est important que la libération des composés décrits par la formule générale (I) s'effectue dans cette partie de la peau pour avoir une efficacité clinique.

Or l'application topique de rétinoïdes peut entraîner une irritation de la peau, une sécheresse et un érythème. De nombreux articles décrivent cet effet irritant comme les articles de Stucker & al. Skin Res Technol. 2002 May;8(2): 133-40 ou de Thielitz & al. Am J Clin Dermatol. 2008;9(6):369-81.

Pour obtenir des préparations topiques à usage pharmaceutique contenant des rétinoïdes, de nombreuses techniques sont utilisées, en particulier des émulsions comme par exemple le brevet EP- 826366 qui décrit des émulsions pouvant contenir des rétinoïdes ou encore le brevet EP-989846 qui décrit des émulsions contenant des rétinoïdes et au moins un émulsionnant.

Or les émulsionnant font partie de la famille chimique des molécules amphiphiles qui sont souvent irritantes. Les compositions sans émulsionnant sont de ce fait moins irritantes que celles en contenant. Le fait de ne pas utiliser d'émulsionnant dans les compositions contenant des retinoïdes permettrait donc de limiter l'irritation cutanée due à la présence de cette classe de molécules.

L'art antérieur décrit des émulsions H/E avec ou sans émulsionnant. On peut citer notamment le brevet US 5,851,538 qui décrit des formulations avec ou sans émulsionnant avec des microsphères poreuses contenant un réseau pratiquement continu de pores ouverts vers l'extérieur et comprenant des rétinoïdes.

Il existe par conséquent un besoin d'avoir des compositions pharmaceutiques stables et bien tolérées, contenant des composés décrits par la formule générale (I).

Le développement de formes galéniques de type gel hydroglycolique qui ne contiennent en général pas d'émulsionnant apportera donc un avantage en terme de tolérance cutanée.

Selon la FDA, un gel est une forme galénique semi-solide qui contient un agent gélifiant conférant de la consistance à une solution ou une dispersion colloïdale. Un gel hydroglycolique est donc un gel selon cette définition dont la phase gélifiée contient de l'eau et un ou plusieurs glycols.

Un premier objet selon l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule générale (I)

dans laquelle : i est un atome d'hydrogène, un radical alkyle de 1 à 4 atomes de carbone ou un radical - CF ₃ ;

- R ₂ est un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou aikoxy de 1 à 4 atomes de carbone ou un atome de chlore ;

R ₃ est un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou aikoxy de 1 à 10 atomes de carbone linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un groupement méthoxy;

R ₄ est un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ; - R ₅ est un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ;

ou bien R ₄ et R ₅ forment ensemble avec la liaison -N-C(=Y)- un cycle de type pyrrolidine, pyrrolidinone, piperidine ou piperidinone ;

Y représente deux atomes d'hydrogène ou un hétéroatome comme l'oxygène, le soufre ; Ar représente un cycle 1,4-phényl, 2,5-pyridyl, 5,2-pyridyl ou 2,5-thiophényl ;

- X représente un atome d'oxygène éventuellement substitué par une chaîne alkyl ou alkylamine ou une liaison simple C-C;

A représente un atome d'hydrogène ou la formule suivante : dans laquelle, o Q est un atome d'oxygène ou la liaison -NH- ;

o ₆ représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, un radical cycloalkyle de 3 à 6 atomes de carbone, un radical -C(0)CH ₂ ou - C(0)CH ₂ CH ₃ ;

o R ₇ et R ₇ ' représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement hydroxyle, à la condition que R ₇ et R ₇ ' ne soient pas simultanément un groupement hydroxyle ;

n vaut 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 ;

de l'eau,au moins un agent gélifiant, au moins un solvant hydrophile du composé de formule (I) et au moins un co-solvant hydrophile du composé de formule (I)

Préférentiellement la composition est un gel hydroglycolique caractérisée en ce que l'actif de formule générale (I) est solubilisé.

Un second objet selon l'invention concerne une composition pharmaceutique telle que décrite ci- dessus pour son utilisation en tant que médicament.

Un troisième objet selon l'invention concerne une composition pharmaceutique telle que décrite ci- dessus pour son utilisation dans le traitement des pathologies telles que :

1) les affections dermatologiques liées à un désordre de la kératinisation portant sur la différenciation et sur la prolifération cellulaire notamment pour traiter les acnés vulgaires, comédoniennes, polymorphes, rosacées, les acnés nodulokystiques, conglobata, les acnés séniles, les acnés secondaires telles que l'acné solaire, médicamenteuse ou professionnelle ;

2) les troubles de la kératinisation, notamment les ichtyoses, les états ichtyosiformes, l'ichtyose lamellaire, la maladie de Darrier, les kératodermies palmoplantaires, les leucoplasies, le pityriasis rubra pilaire et les états leucoplasiformes, le lichen cutané ou muqueux (buccal) ;

3) les affections dermatologiques avec une composante immuno-allergique inflammatoire, avec ou sans trouble de la prolifération cellulaire, et notamment toutes les formes de psoriasis, qu'il soit cutané, muqueux ou unguéal, et même le rhumatisme psoriasique, ou encore la dermatite atopique _et | _es différentes formes d'eczema;

4) les désordres cutanés dus à une exposition aux rayonnements U.V. ainsi que pour réparer ou lutter contre le vieillissement de la peau, qu'il soit photo-induit ou chronologique ou pour réduire les pigmentations et les kératoses actiniques, ou toutes pathologies associées au vieillissement chronologique ou actinique, telle la xérose, les pigmentations et les rides ;

5) Toute condition liée à des proliférations dermiques ou épidermiques bénignes, qu'elles soient ou non d'origine virale telles que verrues vulgaires, les verrues planes, le molluscum contagiosum et l'épidermodysplasie verruciforme, les papillomatoses orales ou florides,;

6) les désordres dermatologiques tels que les dermatoses immunes comme le lupus érythémateux, les maladies immunes bulleuses et les maladies du collagène, telle la sclérodermie ;

7) les stigmates de l'atrophie épidermique et/ou dermique induite par les corticostéroïdes locaux ou systémiques, ou toute autre forme d'atrophie cutanée,

8) les troubles de la cicatrisation, ou pour prévenir ou pour réparer les vergetures, ou encore pour favoriser la cicatrisation,

9) dans le traitement de toute affection d'origine fongique au niveau cutané tel que le tinea pedis et le tinea versicolor,

10) les désordres de la pigmentation, tel l'hyperpigmentation, le mélasma, l'hypopigmentation ou le vitiligo ;

11) les états cancéreux ou précancéreux, cutanés ou muqueux comme les kératoses actiniques, la maladie de Bowen, les carcinomes in-situ, le kératoacanthome et les cancers cutanés comme le carcinome basocellulaire (BCC), le carcinome spinocellulaire (SCC) et les lymphomes cutanés tek que le lymphome T ;

Un quatrième objet selon l'invention concerne un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique telle que décrite précédemment et comprenant les étapes suivantes : a) Solubilisation des additifs hydrophiles dans l'eau sous agitation

b) Solubilisation sous agitation, du rétinoïde de formule générale (I) dans le solvant préféré c) Ajout de l'éthanol et du propylène glycol

d) Gélification de la phase aqueuse en ajoutant le gélifiant

e) Ajout de la phase active (b) dans (d) Un cinquième objet selon l'invention concerne des compositions de type gel hydroglycolique comprenant un composé de formule générale (I)

et au moins un agent gélifiant polyacrylamide caractérisées en ce que la quantité maximale de principe actif absorbée dans le derme et l'épiderme 16 heures après application soit comprise entre 5 ng/cm ² et 15 ng/cm ² .

Un sixième objet selon l'invention concerne des compositions de type gel hydroglycolique comprenant un composé de formule générale (I)

et au moins un agent gélifiant polyacrylamide caractérisées en ce que la quantité maximale de principe actif absorbée dans l'épiderme est obtenue entre 1 et 6 heures après application.

L'invention sera décrite plus en détail dans la description et les exemples qui suivent, ainsi que dans les figures annexées dans lesquelles :

Les Figures 1 et 2 présentent les résultats d'une étude de cinétique de pénétration dans l'épiderme d'une composition selon l'invention et d'un gel de référence.

Description détaillée de l'invention :

A des fins de facilité de lecture, on considérera la formule générale (I) et le composé A dans la suite du texte comme étant décrits comme il suit : Formule générale (I) :

dans laquelle : i est un atome d'hydrogène, un radical alkyle de 1 à 4 atomes de carbone ou un radical - CF ₃ ;

R ₂ est un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou aikoxy de 1 à 4 atomes de carbone ou un atome de chlore ;

R ₃ est un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou aikoxy de 1 à 10 atomes de carbone linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un groupement méthoxy;

- R ₄ est un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ;

R ₅ est un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ;

ou bien R ₄ et R ₅ forment ensemble avec la liaison -N-C(=Y)- un cycle de type pyrrolidine, pyrrolidinone, piperidine ou piperidinone ;

Y représente deux atomes d'hydrogène ou un hétéroatome comme l'oxygène, le soufre ; - Ar représente un cycle 1,4-phényl, 2,5-pyridyl, 5,2-pyridyl ou 2,5-thiophényl ;

X représente un atome d'oxygène éventuellement substitué par une chaîne alkyl ou alkylamine ou une liaison simple C-C;

A représente un atome d'hydrogène ou la formule suivante : dans laquelle, o Q est un atome d'oxygène ou la liaison -NH- ;

o ₆ représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, un radical cycloalkyle de 3 à 6 atomes de carbone, un radical -C(0)CH ₂ ou - C(0)CH ₂ CH ₃ ;

o R ₇ et R ₇ ' représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement hydroxyle, à la condition que R ₇ et R ₇ ' ne soient pas simultanément un groupement hydroxyle ;

n vaut 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 .

Composé A : comme étant l'acide 3"-tert-butyl-4'-(2-hydroxy-ethoxy)-4"-pyrrolidin-l-yl-[l,l' ;3',l"]- terphenyl-4-carboxylique

Au vu des caractéristiques physico-chimiques de l'actif, la Demanderesse a dû faire face à un certain nombre de contraintes de mise en œuvre des composés décrits par la formule générale (I) . Ces composés:

-sont insolubles dans l'eau,

-sont particulièrement solubles dans deux solvants déterminés à partir des études de préformulation telles que décrites en exemple 1,

-sont stables dans seulement deux co-solvants du composé A, déterminés à partir des études de pré-formulation telles que décrites en exemple 1.

De plus les concentrations maximum des solvants principaux dans les compositions pharmaceutiques sont de préférence limitées pour optimiser la tolérance. Ainsi, la composition selon l'invention contient de préférence une quantité maximale de 1% en poids de phénoxyéthanol. Elle contient également de préférence une quantité maximale de 30% en poids d'éthanol.

Un premier objet selon la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques contenant au moins un actif qui est un composé de formule générale (I), ces compositions se présentant sous la forme de gel aqueux, de préférence hydroglycolique, et dans lesquelles l'actif est solubilisé. De tels gels présentent une bonne stabilité physique et chimique, une vitesse de pénétration rapide et un niveau de pénétration élevé dans l'épiderme. Selon la FDA, un gel est une forme galénique semi-solide qui contient un agent gélifiant conférant de la consistance à une solution ou une dispersion colloïdale. Un gel hydroglycolique est donc un gel selon cette définition dont la phase gélifiée contient de l'eau et un ou plusieurs glycols.

Dans l'invention, les compositions contiennent l'actif décrit par la formule générale (I) à des concentrations allant de préférence de 0.00001% à 1% en poids, plus préférentiellement de 0.0001 à 0.1 % en poids et plus préférentiellement de 0.001 à 0.1 % en poids par rapport au poids total de la composition.

De manière préférentielle, l'actif décrit par la formule générale (I) est le composé A.

Dans l'invention, les compositions contiennent au moins un solvant hydrophile du composé A .

Par solvant on entend un liquide qui a la propriété de dissoudre, de diluer ou d'extraire des substances sans provoquer de modification chimique de ces substances et sans lui-même se modifier. Selon l'invention, le solvant hydrophile est un tel liquide, dans lequel les composés de formule générale (I) (et plus particulièrement le composé A) présentent une solubilité, à température ambiante et pression atmosphérique, supérieure ou égale à 0,1% en poids.

Au vu des résultats de pré-formulation (Exemple 1) le solvant hydrophile peut être avantageusement sélectionné dans la liste comprenant le méthyl pyrolidone, l'éthoxy diglycol, l'alcool benzylique, le polyéthylène glycol 400, le phénoxyethanol et l'éthanol .

Le solvant comprend préférentiellement le phénoxyéthanol vendu par exemple sous le nom de phénoxétol par Clariant , et pouvant être utilisé en une teneur allant de 0.2 à 5% en poids et plus préférentiellement de 0.5 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition. Le solvant peut également comprendre de l'éthanol pouvant être utilisé de 5 à 50% en ppids et préférentiellement de 15 à 30% en poids par rapport au poids total de la composition.

Dans l'invention, les compositions contiennent au moins un co-solvant.

Par co-solvant on entend une substance ayant un rôle de solvant en association avec une autre substance.

Au vu des résultats de pré-formulation (Exemple 1) le co-solvant peut être choisi parmi les glycols comme le monopropylène glycol et le dipropylène glycol et peut être utilisé à des teneurs allant de 2 à 50% en poids et préférentiellement de 10 à 40% en poids par rapport au poids total de la composition. Dans l'invention, les compositions contiennent au moins un agent gélifiant. .

Par agent gélifiant, on entend un composé polymère apte à conférer à la composition la texture d'un gel. Le ou les agents gélifiants peuvent être notamment choisis parmi les polymères d'origine végétale, les gommes, les pectines, la cellulose et ses dérivés, les polymères d'origine microbiologiques tel que la gomme xanthane, et les polymères gélifiants d'origine synthétique.

A titre d'exemple non limitatif d'agents gélifiants pouvant entrer dans les compositions, on peut citer l'Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer vendu sous le nom de Pemulen T -1 ou Pemulen TR-2 par la société Lubrizol, les gélifiants de la famille des polyacrylamides comme le mélange Sodium acrylamide/acryloyldimethyltaurate copolymer / isohexadecane / polysorbate 80 vendu sous le nom de Simulgel 600PHA par la société SEPPIC, le mélange polyacrylamide/isoparaffine C13-14/laureth-7 vendu sous le nom de Sepigel 305 par la société SEPPIC, les carbomers vendus sous le nom d'Ultrez 20®, d'Ultrez 10®, de Carbopol 1382® ou de Carbopol ETD2020NF®, de Carbopol 981 ou encore Carbopol 980 par la Société Lubrizol, les polysaccharides avec à titre d'exemples non limitatifs la gomme de xanthane telle que le Xanturall80® vendu par la société Kelco, la gellan gum vendu sous le nom de Kelcogel par la société Kelco, la gomme guar, la cellulose et ses dérivés tel que la microcristalline cellulose et carboxymethyl cellulose de sodium vendue sous le nom d' Avicel CL-611 par la société FMC Biopolymer, l'hydroxypropylmethylcellulose en particulier le produit vendu sous le nom de Methocel E4M premium par la société Dow Chemical ou l'hydroxyéthylcellulose , en particulier, le produit vendu sous le nom de Natrosol HHX 250® par la société Ashland, la sodium carboxymethylcellulose en particulier la Blanose cellulose gum 7F vendu par la société Ashland, la famille des aluminium magnésium silicates tel que le Veegum K vendu par la société Vanderbilt, la famille des polymères acryliques couplés à des chaînes hydrophobes tel que le PEG-150/decyl/SMDI copolymer vendu sous le nom de Aculyn 44 (polycondensat comprenant au moins comme éléments, un polyéthylèneglycol à 150 ou 180 moles d'oxyde d'éthylène, de l'alcool décylique et du méthylène bis(4-cyclohexylisocyanate) (SMDI), à 35% en poids dans un mélange de propylèneglycol (39%) et d'eau (26%)), la famille des amidons modifiés tels que l'amidon de pomme de terre modifié vendu sous le nom de Structure Solanace ou bien leurs mélanges, la famille des carraghénanes en particulier réparties sous quatre grandes familles : κ, λ, β, ω tel que les Viscarin ^® et les Gelcarin ^® commercialisés par la société IMCD

De façon préférentielle un agent gélifiant de type polyacrylamide comme le Simulgel 600 PHA® est utilisé, à des concentrations allant de 0,005 à 5 % en poids et préférentiellement, allant de 1% à 4% en poids, seul ou associé à au moins un des gélifiants cités ci-dessus à des concentrations allant de 0,005 à 3 % en poids.

Dans l'invention, les compositions peuvent contenir des additifs parmi lesquels on peut citer les catégories suivantes (utilisés seuls ou en combinaison): -Des agents conservateurs, tels le methyl paraben, le propyl paraben, le chlorure de benzalkonium, le phénoxyéthanol vendu sous le nom de phénoxétol par Clariant, l'alcool benzylique vendu sous le nom d'alcool benzylique par Merck, le Sorbate de potassium vendu sous le nom de Sorbate de potassium par VW , l'acide benzoique vendu sous le nom Acide benzoïque par VWR, le 2-Bromo-2-Nitropropane-l,3-Diol vendu sous le nom de Bronopol par Jan Dekker International la chlorhexidine vendu sous le nom de Chlorexidine digluconate 20% solution par Arnaud Pharmacie, le chlorocrésol et ses dérivés, le sodium benzoate vendu sous le nom de Probenz SP par Unipex, l'alcool éthylique et la diazolidinylurée. Ces conservateurs peuvent être utilisés seul ou en association afin de protéger efficacement les formules contre toute contamination bactérienne.

-Des agents permettant d'améliorer les propriétés des formules à l'application comme Cyclomethicone (St-Cyclomethicone 5NF) ou la Dimethicone (Q7 9120 silicon fluid viscosité de 20 est à 12500 est de Dow Corning).

-Des agents chélatant comme l'EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) et ses dérivés ou sels, la dihydroglycerine, les acides citriques et tartriques, la gluconolactone vendu sous le nom glucono-delta-lactone SG par Jungbunzlauer ou des mélanges de ceux-ci.

-Des agents antioxydants tel que la vitamine E et ses dérivés, comme le DL alpha Tocophérol ou l'acétate de tocophérol de Roche, la vitamine C et ses dérivés, comme l'Ascorbyl Palmitate de Roche, le Butylhydroxytoluene vendu sous le nom de Nipanox BHT par Clariant.

-Des agents apaisants et/ou anti-irritants tels que le PPG-12/SMDI copolymer vendu par la société Bertek pharmaceuticals sous le nom commercial de Polyolprepolymer-2, l'acide glycyrrhetinique ou ses dérivés comme par exemple l'Enoxolone vendu par la société BASF, l'acide hyaluronique tel quel ou sous sa forme hyaluronate de sodium vendu sous le nom commercial de HYAL. NA PWD PH 15-51-45 par la société Contipro, l'allantoine vendue sous le nom de RONACARE ALLANTOINE par MERCK.

- Tout autre additif usuellement utilisé dans le domaine pharmaceutique et cosmétique permettant de conférer à la dite préparation des propriétés spécifiques.

La composition selon l'invention présente avantageusement la composition générale suivante, les pourcentages étant exprimés en poids par rapport au poids total de la composition : - de 0,00001% à 1% en poids, préférentiellement de 0.0001 à 0.1 % en poids, et de manière plus préférée de 0,001 à 0.1 % en poids de composé A,

de l'eau,

de 0,005 à 10 % en poids et préférentiellement de l à 4% en poids d'agent gélifiant , de 0,2 à 50% en poids et préférentiellement de 0,5 à 30% en poids de solvant hydrophile, de 2 à 50% en poids et préférentiellement de 10 à 40% en poids de co-solvant,

en option, de 0 à 15% en poids et préférentiellement de 0,1 à 10% en poids d'un ou plusieurs additifs.

Un autre objet selon l'invention concerne un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique décrite telle que précédemment et comprenant les étapes suivantes :

A) Préparation de la phase aqueuse : solubiliser les additifs hydrophiles dans l'eau sous agitation.

B) Préparation de la phase active :

Solubiliser sous agitation le composé A dans le solvant hydrophile (par exemple le phénoxyéthanol), si nécessaire à chaud.

A température ambiante, ajouter le ou les cosolvants (par exemple l'éthanol et le propylène glycol).

C) Mélange des deux phases :

Gélifier la phase aqueuse en ajoutant l'agent épaississant (par exemple le Simulgel) 600Pha sous agitation, puis ajouter ensuite la phase active.

Une fois ce mélange homogène, ajouter la cyclomethicone-5 (si présente dans la formule) sous agitation.

Exemples :

Afin de réaliser un gel hydro-glycolique contenant une quantité d'éthanol inférieure à 30%, dans lequel le composé A est solubilisé, des études de préformulations ont été réalisées afin de mettre en évidence les excipients permettant une bonne solubilisation ainsi qu'une bonne stabilité de l'actif.

(1) Liste des excipients ou de mélange d'excipients hydrophiles dans lesquels la solubilité maximale a été déterminée par HPLC :

Cette étude montre que 6 solvants peuvent être considérés comme des « solvants principaux » du composé A (Pharmasolve, Transcutol, alcool benzylique, PEG 400, Phenoxetol et éthanol), les autres pouvant être utilisés comme « co-solvants » mis à part la glycérine dans laquelle le composé A est pratiquement insoluble. (2) Stabilité du composé A dans ses solvants principaux déterminée par HPLC

Ces études de stabilité montrent que parmi les « solvants principaux » identifiés, le composé A est stable uniquement dans le phénoxyéthanol et l'éthanol.

(3) Stabilité du composé A dans ses co-solvants déterminée par HPLC

Ces études de stabilité montrent que parmi les « co-solvants » identifiés, le composé A est stable uniquement dans le dipropylène glycol et le propylène glycol.

Exemple 2 : Formulations Dans les exemples suivants, les formules réalisées sont caractérisées à T0. La stabilité physique et chimique des formulations est réalisée après conservation à température ambiante (TA) et +40°C après T+lMois et/ou T+2Mois ou T+3Mois ou T+6Mois. Le matériel et les méthodes utilisés pour ces caractérisations sont décrits ci-dessous.

-Dosage chimique du composé A: -Matériel: HPLC

-Expression des résultats: le titre de l'actif est exprimé en % relatif par rapport au % initial effectué à T0. Les limites fixées pour une bonne stabilité sont 95%-105%

-Observation macroscopique:

- L'observation macroscopique permet de garantir l'intégrité physique des produits à T0 et après stabilité.

- L'observation microscopique permet d'évaluer la bonne solubilisation du COMPOSÉ A dès T0, la non recristallisation au cours du temps ainsi que la taille des globules de la phase huileuse.

-Matériel: Microscope AXIO ZEISS

-JDH :

-Matériel: pH mètre METTLE TOLEDO Seven Multi

-Méthode : Mesures effectuées à température ambiante après stabilisation 24h dans une enceinte à 25°C de tous les échantillons.

-Viscosité: -La mesure de la viscosité permet d'évaluer la consistance des formules réalisées. -Matériel: Brookfield V DVII + Pro

-Méthode: Mesures effectuées à température ambiante après stabilisation 24h dans une enceinte à 25°C de tous les échantillons. La valeur est lue après 1 minute. Le choix du mobile et de la vitesse seront décrits dans chaque exemple de composition. Les valeurs obtenues sont exprimées en centipoises (Cps)

-Centrifugation:

-La centrifugation permet d'évaluer la résistance des formules à une contrainte mécanique. -Matériel: Galaxy 14D VWR

-Méthode: 30 minutes à 5000 rpm

-Un résultat conforme signifie qu'il n'y a ni séparation de phases, ni exudat.

Formule n°l

Ces résultats montrent une bonne stabilité physique et chimique de l'actif et de la composition dans son ensemble dans le temps. Formule n°2

Ces résultats montrent une bonne stabilité physique et chimique de l'actif et de la composition dans son ensemble dans le temps. _{bli a}

Form _h cule n°3

DENOMINAT os _i ION COMMERCIALE DENOMINATION INCI %

COMPOSE A COMPOSE A 0,010

PROPYLENE GLYCOL Propylene glycol 40,000

ETHANOL 95-96% Ethanol 20,000

RONACARE ALLANTOIN Allantoin 0, 200

Acrylamide, AMPS Copolymer Dispersion 3,000

SIMULGEL 600 PHA

40%/ Isohexadecane/ polysorbate 80

ST-CYCLOMETH ICONE 5NF Cyclopentasiloxane 2,000

PHENOXETOL Phenoxyethanol 1,000

EAU PURIFIEE Purified water QSP 100.000

SUIVI DE STABILITE lMois 2Mois 3Mois 6Mois

Conforme, pas de Conforme, pas de Conforme, pas de Conforme, pas de

Aspect microscopique

recristallisation recristallisation recristallisation recristallisation

Aspect mascrosopique Conforme Conforme Conforme Conforme

< TA 100,10 96,60 97,90 97,10

Έ

Έ 40°C 101,10 95,50 97,00 93,90 o

Ces résultats montrent une bonne stabilité physique et chimique de l'actif et de la composition dans son ensemble dans le temps. Formule n°4

DENOMINATION COMMERCIALE DENOMINATION INCI %

COMPOSÉ A COMPOSÉ A 0,010

DIPROPYLENE GLYCOL CARE Dipropylene glycol 40,000

ETHANOL 95-96% Ethanol 20,000

RONACARE ALLANTOIN Allantoin 0, 200

Acrylamide, AMPS Copolymer Dispersion 3,000

SIMULGEL 600 PHA

40%/ Isohexadecane/ polysorbate 80

ST-CYCLOMETHICONE 5NF Cyclopentasiloxane 2,000

PHENOXETOL Phenoxyethanol 1,000

EAU PURIFIEE Purified water QSP 100.000

Formule n°5:

DENOMINATION COMMERCIALE DENOMINATION INCI %

COMPOSÉ A COMPOSÉ A 0,020

DIPROPYLENE GLYCOL CARE Dipropylene glycol 40,000

ETHANOL 95-96% Ethanol 20,000

RONACARE ALLANTOIN Allantoin 0, 200

Acrylamide, AMPS Copolymer Dispersion 3,000

SIMULGEL 600 PHA

40%/ Isohexadecane/ polysorbate 80

PHENOXETOL Phenoxyethanol 2,000

EAU PURIFIEE Purified water QSP 100.000 Formule n°6:

Formule n°7:

DENOMINATION COMMERCIALE DENOMINATION INCI %

COMPOSÉ A COMPOSÉ A 0,005

PROPYLENE GLYCOL Propylene glycol 40,000

ETHANOL 95-96% Ethanol 20,000

RONACARE ALLANTOIN Allantoin 0, 200

Acrylamide, AMPS Copolymer Dispersion 3,000

SIMULGEL 600 PHA

40%/ Isohexadecane/ polysorbate 80

PHENOXETOL Phenoxyethanol 1,000

EAU PURIFIEE Purified water QSP 100.000 Formule n°8:

Formule n°9: Exemple 3 : Caractérisation des formulations par des études de pénétration cutanée sur peau humaine:

Les études de pénétration cutanée permettent de caractériser les formulations, et de mettre en évidence des paramètres propres à chacune des formulations.

Deux types d'études de pénétration cutanée sur peau humaine ex vivo ont été réalisés.

Dans ces études le composé A correspond à l'acide 3"-tert-butyl-4'-(2-hydroxy-ethoxy)-4"-pyrrolid l-yl-[l,l';3',l"]-terphenyl-4-carboxylique. Le gel de référence étant décrit comme suivant

Dans ces 2 études, la composition « gel optimisé » correspondant à la formule 3 est évaluée en comparaison à une composition « gel de référence ».

1- Etude de pénétration cutanée « temps unique »:

Dans cette étude, la formule est appliquée pendant 16h à la surface de la peau. A la fin de l'application, le composé A est quantifié dans les différents compartiments de la peau : stratum corneum, épiderme, derme et liquide récepteur selon une méthode de bioanalyse validée.

Les détails de l'application cutanée sont donnés dans le tableau ci-dessous. Peau : 3 donneurs, 2 échantillons par donneur

Source Peau humaine abdominale entière

Epaisseur 0.79-1.22mm

Age 39-64 ans.

Cellules de Franz 2 cm ²

Volume liquide récepteur 3mL

Fonction barrière Evaluée par détermination de la Perte

Insensible en Eau, acceptable sauf contre- indication

Formulations

A: Gel de référence contenant 10C^g/g B: Gel (hydroglycolique)contenant 10C^g/g composé A composé A correspondant à la formule 3

Application

Application ~2mg/cm ²

Quantité d'actif appliqué 142~241ng/cm ²

Temps d'exposition 16h

Echantillons repris

Lavage compartiment donneur

Kleenex (permettant de retirer

rplus de produit) "Excès" / Dose non absorbée '

1 ^er strip

Balance des masses

Stratum corneum (2-15 strips

max

Epiderme Peau Totale

Pénétration totale

Derme

}

Liquide Récepteur Dose absorbée La bioanalyse a été réalisée par spectrométrie de masse en tandem par ionisation électrospray positive, et utilisant un appareil Xevo (Waters). La limite de quantification pour le composé A est de Ing/mL.

Les conditions de LC/MS/MS mises au point ont permis de détecter jusqu'à 0,1% de la dose appliquée dans chacun des compartiments (dose non absorbée, stratum, épiderme, derme et liquide récepteur).

Les conditions techniques sont données dans le tableau ci-dessous.

Colonne LC Hypersil gold 50*2.1mm (UPLC)

Phase Mobile Phase A : ACN + 0.1% Formic Acid Phase B : H ₂ 0 + 0.1% Formic acid

Lavage ACN

aiguille

Lavage septum ACN/H ₂ 0 50:50

Gradient Temps(min) débit %A %B Courbe

1. Initial 0.700 15.0 85.0 0

2. 2.5 0.700 90.0 10.0 6 3. 3.20 0.700 90.0 10.0 6 4. 3.25 0.700 15.0 85.0 6

Température

de colonnes

Détection ESI+ MRM (Electrospray Positif)

MSMS

Canal Réaction Dwell (secs) Voltage (cône) Col. Energy Tr (min) Composé 1: 460.26 > 318.20 0.100 50.0 40.0 1.58 Composé

1: 464.06 > 372.10 0.100 55.0 40.0 1.58 Standard

Volume 5μί

Injection

Temps de run 4 minutes a- Profil de distribution dans les différents compartiments (données qualitatives) :

La distribution entre les différents compartiments est du même type pour les 2 formules évaluées : accumulation dans le stratum corneum et taux de pénétration plus faible dans l'épiderme. Le composé A n'est pas détecté dans le liquide récepteur et est très faiblement présent dans le derme.

b-Valeurs de pénétration dans le compartiment épiderme + derme :

Les valeurs de pénétration pour le gel optimisé (Exemple 3) contenant 10C^g/g (0.01%) de composé A sont aux alentours de 9 ng/cm ² . Les niveaux de pénétration du composé A après application du gel optimisé (Exemple 3) tendent à être plus élevés que ceux obtenus après application du gel de référence.

1- Etude de cinétique de pénétration - Figure 1

Dans ce type d'étude, la pénétration de l'actif est quantifiée dans chaque compartiment de la peau après 0.5h, lh, 3h 6h et 24h d'application. Une cinétique de pénétration dans chaque compartiment est alors déterminée et caractérisée. Les détails de l'application cutanée sont donnés dans le tableau ci-dessous

Peau 3 donneurs, 2 échantillons par donneur par

temps, n=6

Source Peau humaine abdominale dermatomée de

cadavre

Epaisseur 500μηι

Age Non Communiqué

Cellules de Franz l-2cm ²

Volume Liquide Récepteur Non Communiqué

Fonction Barrière Evaluée par eau tritiée

Produits Gel de référence 10C^g/g Gel optimisé (gel hydroglycolique) 10C^g/g

correspondant à la formule 3

Application Formule ~2mg/cm ² Quantité actif appliquée Entre 100-200ng/cm ² Temps d'exposition Jusqu'à 24h

Echantillons repris

Temps d'exposition 0.5, 1, 3, 6, 24h

Lavage compartiment donneur

Kleenex (permettant de retirer

rplus de produit) "Excès" / Dose non absorbée

1 ^er strip

Balance des masses

Stratum corneum (2-15 strips

max

Epiderme Peau Totale

Pénétration totale

Derme

}

Liquide Récepteur Dose absorbée

Analyses LC/UV et LC/MS

Limite de quantification lng/ml

La quantité d'actif dans chaque compartiment à chaque temps a été déterminée par LC/UV ou par LC/MS. La méthode de bioanalyse a été validée de sorte à détecter au minimum 0,1% de la dose appliquée dans chaque compartiment.

Dans ce type d'étude, les paramètres retenus sont :

a. Le profil de la cinétique de pénétration dans l'épiderme (données qualitatives) b. La vitesse initiale de la pénétration dans l'épiderme

c. La quantité maximale pénétrée dans l'épiderme a. Profil de la cinétique de pénétration dans l'épiderme - Figure 2 :

La cinétique de libération du composé A obtenue pour le gel optimisé (Exemple 3) présente une pente initiale élevée, suivie d'un plafond pendant lequel la pénétration du composé A n'augmente plus au cours du temps. La formule de référence (gel) montre le même profil avec une libération rapide au cours des premières heures et ensuite atteinte d'un plateau.

Comme vu dans le paragraphe 1 (Etude de pénétration cutanée « temps unique »), ces deux formules ont des niveaux de pénétration à 16h qui sont différents, la pénétration du composé A dans l'épiderme après application du gel optimisé (Exemple 3) tend à être plus élevée que celle obtenue après application du gel de référence.

b. Vitesse initiale de la cinétique La valeur de vitesse initiale de la cinétique ou pente sur les 3 premières heures est de 4.12ng/cm ² /h.

c. Quantité maximale dans l'épiderme : La quantité maximale dans l'épiderme est de 12.07ng/cm ² .

Exemple 4 : Etude cosmétique d'amélioration du toucher :

Essais pour amélioration du toucher:

Afin d'obtenir un toucher acceptable pour l'acné (non gras, non collant) tout en gardant une bonne solubilité du composé A dans la formule, des essais d'introduction de ST-cyclométhicone 5 ont été effectués sachant que la ST-cyclométhicone 5NF est un non-solvant du composé A et que cet ajout peut donc provoquer la recristallisation du composé A:

Ces essais nous ont permis d'optimiser la quantité de ST+cyclomethicone 5NF à 2% pour obtenir un toucher acceptable d'un point de vue cosmétique.