技术领域

本发明涉及异类叶升麻苷在抑制淀粉样 β肽生成、 积累或聚集的抑制 剂的新用途， 尤其涉及使用异类叶升麻苷预防或治疗与淀粉 样 β肽相关的 疾病或状况的新用途。 背景技术

阿滋海默氏症 (Alzheimer's disease)被认为与一种具有 39-43个胺基酸 的肽的积累相关， 该肽被称为淀粉样 β肽 (amyloid β peptides) (筒称 Αβ) , 其为类淀粉前体蛋白 APP (amyloid precursor protein)的一种水解产物。其 中 Αβ1-40最为大量且毒性低， 而 Αβ1-42则对神经元有较高的毒性， 且具 高度纤维形成性 (fibrillogenic), 被认为是与阿滋海默氏症的发病最为相关 的 Αβ形式。 Αβ单体可经寡聚化而形成可溶性的 Αβ寡聚体 (oligomer) , 进 一步聚集于细胞外形成不可溶性的纤维丝或老 年斑块 (senile plaque)。

一般认为与 Αβ相关的疾病或状况包含唐氏症 (Down syndrome)、荷兰 型遗传生^ ϊ出血伴淀粉样变病 (Hereditary cerebral hemorrhage with amyl oid (HCHWA) Dutch),关岛帕金森氏症-失智症复合症 (Parkinsonism-deme ntia complex on Guam) (Clinical Neurology and Neurosurgery (1990) 92:

305-310); 大脑淀粉样血管病 (J. Neuropath. Exp. Neuro. (2002) 61 : 282 -293); 包涵体肌炎 (Neurology (2006) 66: 65-68); 额颞叶型失智症 (Neuro report (2002) 13-5: 719-723); 年龄相关黄斑变性 (Experimental Eye Rese arch (2004) 78: 243-256); 皮克病（Pick's disease)(Neuroscience Letters (1 994) 171 : 63-66)及其它。

所述 Αβ相关的疾病或状况一般而言与 Αβ的生成、 积累或聚集有关， 包括因先天如遗传、 或后天如老化或环境等因素而导致生物体中存 在不正 常的 Αβ或 Αβ聚集体数量。

一般认为如果能抑制 Αβ的生成、 积累或聚集， 应可作为有效预防或 发明内容

鉴于淀粉样 β肽和其聚集体， 容易在生物体内引发各种疾病或状况， 因此本发明的目的之一是提供一种抑制淀粉样 β肽生成、 积累或聚集的有 效成份， 其可作为食品、 饮品、 咀嚼物、 贴片、 皮肤保养品或其它添加剂。 本发明的另一目的则是提供一种预防或治疗淀 粉样 β肽相关疾病或状况的 药物及方法。

为达到上述目的， 本发明揭示了以异类叶升麻苷或其医药学上可 接受 的盐抑制淀粉样 β肽生成、 积累或聚集的用途， 以及制备预防或治疗淀粉 样 β肽相关的疾病或状况的药物的用途。

作为优选， 上述异类叶升麻苷或其医药学上可接受的盐用 以抑制该淀 粉样 β肽导致神经元的损伤或凋亡， 进而保留、 改善或恢复学习与记忆能 力。

作为优选， 上述药物对人类的有效剂量相当于每日每公斤 体重 0.2毫 克至 4.0毫克的异类叶升麻苷或其医药学上可接受的 盐。

为使本发明的上述目的、 特征和优点能更明显易懂， 下文特举出实施 例， 并配合附图作详细说明。 附图的简要说明

图 1示出了各井 (well)的细胞外 Αβ1-40含量百分比， 结果显示本发明 的异类叶升麻苷 (D)具有显著降低 Αβ 1 -40在细胞外积累的极佳活性；

图 2示出了各井的细胞内的 Αβ1-40含量百分比；

图 3示出了各测试样品对 ΑΡΡ表现量的影响；

图 4示出了各测试样品对 Αβ1-40降解的影响；

图 5示出了各测试样品对 Αβ1-42寡聚化的影响；

图 6示意地示出了 Αβ的生成、 清除与聚集过程；

图 7示出了动物试验的时程表；

图 8示出了各测试样品对实验大鼠的探索能力影� �；

图 9示出了各测试样品对实验大鼠的被动回避反� �的影响；

图 10示出了各测试样品对实验大鼠进行水迷宫空� ��表现的影响； 图 11示出了各测试样品对实验大鼠进行水迷宫参� ��记忆试验的影响； 图 12A-12E示出了实验大鼠的脑部组织染色结果；

图 13A示出了实验大鼠脑部皮质区和海马区的乙酰 胆碱含量检测结 果；

图 13B示出了实验大鼠脑部皮质区和海马区的胆碱 含量检测结果； 图 14A示出了实验大鼠脑部皮质区所测得的乙酰胆 碱酯酶活性结果； 图 14B示出了实验大鼠脑部海马区所测得的乙酰胆 碱酯酶活性结果。 实施发明的最佳方式

许多由淀粉样 β肽引发的疾病均具有一种共通的特征， 即淀粉样 β肽 聚集体的形成。 这些淀粉样 β肽聚集体可以如纤维或斑块的形态出现， 并 且沉淀在生物体的系统、 器官、组织或体液中， 进而引发各种疾病或状况。 如能有效抑制淀粉样 β肽的生成、 积累或聚集， 应可避免淀粉样 β肽形成 聚集体而引发的各种疾病或状况， 其应可作为有效预防或治疗淀粉样 β肽 相关疾病或状况的方式之一。

有鉴于此， 本发明以具有下式的异类叶升麻苷或其医药学 上可接受的 盐作为抑制（例如降低或避免)淀粉样 β肽生成、 积累或聚集的有效成份， 尤其是抑制淀粉样 β

美国专利 7,087,252 Β2揭示了一种从管花肉苁蓉 (Cistanche tubulosa (Schenk) Wight)的肉质茎所制备的含 25-50 wt%松果菊苷 (echinacoside)及 5-15 wt%类叶升麻苷 (acteoside)的制剂， 其可用于抗老年痴呆症 (senile dementia) 异类叶升麻苷及多种其它苯乙醇苷类（phenyleth anoid glycosides) 已知被包含于该制剂中。

在本发明中， 异类叶升麻苷的水合物或其它溶剂溶合物、 前药及代谢 物均被视为异类叶升麻苷的功能上的等同物。 所述"前药"指某种前趋化合 物可于生物条件 (活体内或活体外）下水解、 氧化或进行其它反应而产生异 类叶升麻苷。 所述"代谢物 "指异类叶升麻苷于细胞或生物体内被代谢所� � 成的化合物。

当异类叶升麻苷的"医药学上可接受盐"施予生� ��体时， 其通常可具有 与异类叶升麻苷相同或类似的医疗功效， 在生理上可忍受， 且不会产生过 敏或类似反应。 所述异类叶升麻苷的医药学上可接受盐可包含 但不限于铁 盐、 钙盐或镁盐等。

所述"预防"指避免或延迟疾病或状况在生物体� ��出现， 而所述"治疗" 则指减緩或阻止疾病或状况的发展， 或使生物体的状况回复至较佳或正常 的状态。

所述"淀粉样 β肽相关性疾病或状况 "指此疾病或状况的发生通常与淀 粉样 β肽的生成、 积累或聚集相关， 尤其指此疾病或状况的发生为淀粉样 β肽所导致。 而当在具有某种疾病或状况的一定比例的生物 体上发现有淀 粉样 β肽的不正常生成、 积累或聚集现象时， 也可认为此疾病或状况为淀 粉样 β肽相关。 另外， 当淀粉样 β肽的聚集处与疾病或状况所发生的病理 特征影响位置相近时， 亦可认为此疾病或状况为淀粉样 β肽相关。

本发明所提供的抑制淀粉样 β肽的有效成份， 亦可作为食品、 饮品等 添加剂使用， 以达到抑制淀粉样 β肽生成、 积累或聚集的方便性使用。

物或医 组合物， 包含异类叶升麻苷或其医药学上可接受的盐作 为有效成份， 并可 包含适当的载剂、 稀释剂或赋形剂等， 以呈现如散剂（powder)、 颗粒剂

(granule) , I 剂（tablet) , 片剂（troche), 丸剂（pill)、 胶嚢（capsule) , 水性或 油性溶液 (solution) , 悬浮液 (suspension) , 孔膏 (cream)、 软膏 (ointment)、 凝 胶 (gel)、 气雾剂（aerosol) , 栓剂（suppository), 贴剂（patch)或其它所需形式。 上述药物或医药组合物可通过口腔、 局部、 非经肠、 皮肤、 鼻、 眼、 眼内 或其它途径给药。

在本文中， 所述"或"一般定义为"及 /或"， 除非另有特别说明。

随着世界人口老龄化的日益严重， 与衰老有关的许多疾病例如失智症 (dementia)已然成为现今老年疾病的重点医疗研� �之一，而在各种失智症中 又以阿滋海默氏症最为普遍。 阿滋海默氏症是一种慢性的神经退化性疾 病， 其特征为病人逐渐失去认知能力且出现严重的 行为异常， 后续也会造 成语言和运动能力的丧失， 对病患本身与其家人的生活质量容易造成极大 的影响。 有鉴于罹患阿滋海默氏症的患者人数有逐渐增 加的趋势， 造成家 庭与社会的严重负担， 因此本发明特捡选与阿滋海默氏症较为相关的 Αβ 进行试验。

在下列实施例中， 利用表一所提供的测试样品进行 Αβ试验， 并且与 未加入任何测试样品处理的对照组 (Vehicle)进行比较。 表一： 进行试验的样品

松果菊苷 (Echinacoside)、 类叶升麻苷 (Acteoside)和异类叶升麻苷 (Isoacteoside)分别具有下列结构式：

松果菊苷：

类叶升麻苷:

异类叶升麻苷:

实施例一： 神经瘤母细胞株的培养

将原生型（wild type)人类神经瘤母细胞 SH-SY5Y培养于 Eagle's Minimum essential Medium (EMEM)/Ham's F12 medium (1 : 1混合物) (含 10% FBS, 10 units/ml penicillin, 10 g/ml Streptomycin)中， 而原生型小鼠神 经瘤母细胞 Neuro-2a则培养于 minimum essential medium (MEM)培养基 (含 10% FBS, 10 units/ml penicillin, lO g/ml Streptomycin)中。 实施例二： 各样品对 ΑβΙ-40于细胞外的积累测试

将实施例一中的原生型人类神经瘤母细胞 SH-SY5Y的培养基置换成 化学成份培养基 (EMEM/F12 medium (Cat.No.12500-062), Hepes 5 mM, 葡 萄糖 0.6%, NaHC03 3 mM, 麸酰胺 2.5 mM, 胰岛素 25 g/ml, Transferin 100 g/ml, Progestrone 20 nM, Putrescine 60 μΜ, 亚石西酸 ] (Sodium selenite) 30 nM, Heparin 2 g/ml)。 每个井 (well)具有 1x105个 SH-SY5Y细胞， 而培 养基体积为 300 μ1。 30分钟后， 将表一中所示的测试样品 A-D分别以 50 g/ml的浓度加入至不同井中处理 24小时， 接着以 Human Αβ1-40

Immunoassay kits(Catalog # KHB3482 Invitrogen)分析各井的培养基中的 Αβ1-40含量。

人类神经瘤母细胞 SH-SY5Y会积累 Αβ于细胞外的培养基中， 而图 1 示出了 SH-SY5Y井分别经各测试样品 A-D处理后， Αβ1-40于培养基中的 含量百分比， 其以未加入任何测试样品处理的对照组为比较 基准。 结果显 示为平均值士标准误差， 而对照组和测试样品组间的统计差异标示 *表示 Ρ<0.05 , **表示 Ρ<0·01 , ***表示 Ρ<0·001。

参考图 1所示，测试样品 Α (含苯乙醇苷的制剂）和测试样品 C (类叶升 麻苷)减少培养基中的 Αβ1-40含量约 20%, 而测试样品 D (异类叶升麻苷) 则减少培养基中的 Αβ1-40含量达 47.44 ± 16.62%。图 1结果显示异类叶升 麻苷 (D)具有显著降低 Αβ 1 -40于细胞外积累的极佳活性。 实施例三： 各测试样品对 ΑβΙ-40于细胞内的积累实验

每个井均具有 1x105个 SH-SY5Y细胞， 而培养基体积为 300 μ1。 将 各井中的 SH-SY5Y细胞以浓度 50 g/ml的测试样品 A-D处理 24小时后， 分别将各井中的细胞部份制成细胞均质液， 并利用 Human Αβ1-40

Immunoassay kits(Catalog # KHB3482 Invitrogen)分析其 Αβ1-40含量。

图 2示出了 SH-SY5Y井的细胞内的 Αβ1-40含量百分比， 以未加入任 何测试样品处理的对照组为比较基准。如图 2所示， 测试样品 A-D均未明 显造成 Αβ于细胞中积累。 实施例四： 各测试样品对 APP在细胞中表现的影响实验

每个井具有 1x105个 SH-SY5Y细胞， 而培养基体积为 300 μ1。 将各 井中的 SH-SY5Y细胞以浓度 50 g/ml的测试样品 A-D处理 24小时后， 将细胞部分以均质緩沖液 (50 mM Hepes pH 7.5, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 1 mM PMSF, 5 g/ml aprotinin, lO g/ml leupeptin)进行均 质， 利用超高速离心除去不溶物质。 将蛋白质以 SDS-聚丙烯酰胺胶电泳 (polyacrylamide gel electrophoresis)分离， 并转渍到 PVDF月莫后再利用免疫 转渍法（immunoblot) (antiA i-17, 6E10或 antiAPP-c端抗体）来检测 holoAPP含量。

图 3示出了测试样品 A-D对 APP在细胞中表现的影响， 其以百分比 表示， 并以未加入任何测试样品处理的对照组 (Vehicle)为基准。 如图 3所 示， 测试样品 A-D并未降低 APP表现的活性。 实施例五： 各测试样品对 ΑβΙ-40于细胞外的降解实验

小鼠神经瘤母细胞 neuro-2a会在化学成份培养基中释放出分解 Αβ的 酵素， 但不会在培养基中积累足以侦测的 Αβ量。 将 neuro-2a在培养基中 培养 24小时， 之后将不含细胞的培养基取出， 并分别以浓度 50 g/ml的 测试样品 A-D及 10ng人工合成的 Αβ1-40处理 24小时， 之后检视各测试 样品是否具有可促进培养基中的酵素降解 Αβ的活性。利用 Human Αβ1-40 Immunoassay kits(Catalog # KHB3482 Invitrogen)分别检验各井中的 Αβ1-40 之残留量， 其显示为百分比， 并以未加入任何测试样品处理的对照组 (Vehicle)为比较基准。 如图 4所示， 测试样品 D (异类叶升麻苷)并未促进 Αβ于细胞外的降解。 实施例六： 各测试样品对 ΑβΙ-42寡聚化的实验

将干燥的 Human Api-42 自从冰箱取出静置至室温， 加入

l,l, l,3,3,3-Hexa-fluro-2-propanol(HFIP)溶解 Αβ1-42至浓度为 ImM, 然后 在室温下静置 1小时。以 Hamilton注射器将上述 ΑβΙ-42/HFIP容易进行分 装，并且以氮气将 HFIP吹干，接着存放于 -20。C。将 HFIP处理后的 Αβ1-42 以 PBS溶解，并分别以浓度 50 g/ml的测试样品 A-D且于 4 °C下振荡处理 24小时， 以制备 Αβ1-42的寡聚物（oligomer), 并利用 thioflavine T结合荧 光 (Ex=450 nm, Em=482 nm)以分析 Αβ1-42的寡聚化程度。 图 5示出了测试样品 A-D分别对 Αβ1-42寡聚化 (oligomerization)的影 响， 结果以百分比显示， 并以未加入任何测试样品处理的对照组为基准 。 参考图 5所示测试样品 A (含苯乙醇苷的制剂）、 B (松果菊苷)、 C (类叶升 麻苷)和 D (异类叶升麻苷)均具有抑制 Αβ1-42寡聚化的活性， 其中异类叶 升麻苷 (D)可抑制 Αβ1-42寡聚化程度达 98.93士 1.70,亦即异类叶升麻苷 (D) 可有效降低 Αβ1-42的寡聚化， 进而可抑制 Αβ形成纤维丝或老年斑块。

图 6示意地示出了 Αβ的生成、 清除与聚集过程 (参考来源：

Pharmacology & Therapeutics (2005) 108: 131)。 图 6表明培养基中细胞外的 Αβ积累（1)会受到 Αβ细胞内积累量 (2)、 ΑΡΡ表现 (3)、 Αβ降解 (4)、 Αβ寡 聚化 (5)以及 Αβ生成 (6)等影响。 根据上述实施例二至六的细胞实验结果， 相较于其它测试样品 A-C而言，异类叶升麻苷 (D)具有降低细胞外 Αβ积累 (1)的作用， 并且对于降低 Αβ的寡聚化程度 (5)有极佳的效用， 应可进一步 用以抑制 Αβ的聚集。 此外， 异类叶升麻苷 (D)降低 Αβ于细胞外积累（1)的 作用并非源于异类叶升麻苷增进了 Αβ于细胞内的积累（2)、 降低了细胞的 ΑΡΡ表现 (3)、 或增进了 Αβ于细胞外进行降解 (4), 因此推测异类叶升麻苷 (D)可直接减少 Αβ的生成 (6)。

综合上述结果，异类叶升麻苷 (D)或其医药学上可接受的盐可作为抑制 Αβ生成、 积累或聚集的有效成份， 预计异类叶升麻苷 (D)可有效抑制 Αβ 导致神经元的损伤或凋亡， 以进而保留、 改善或恢复学习与记忆能力。 此 外，根据上述结果，异类叶升麻苷 (D)或其医药学上可接受盐应可用于预防 或治疗 Αβ相关疾病或状况， 以及用于抑制 Αβ的生成、 积累或聚集。

所述 Αβ相关疾病或状况可包含但不限于阿滋海默� �症、 轻度认知障 碍、 路易氏体失智症、 唐氏症、 荷兰型类淀粉变性症、 关岛帕金森氏症- 失智症复合症、 大脑淀粉样血管病、 包涵体肌炎、 额颞叶型失智症、 年龄 相关性黄斑变性、 皮克病以及其它。 另外， 所述 Αβ虽以 Αβ中最大量的 Αβ1-40或具有高度纤维形成性的 Αβ1-42为例， 但也可包含其它胺基酸片 段。

在上述测试样品中， 异类叶升麻苷 (D)具有降低 Αβ生成、 积累和聚集 的最佳效用。 下列实施例七至十一中， 首先于 250~300公克重的雄性 SD 大鼠 (购自乐斯科股份有限公司）的侧脑室内输注 Αβ1-42, 以造成大鼠的神 经损坏， 影响大鼠的记忆与学习操作能力， 并可诱导大鼠脑中形成似老年 斑块的沉积， 以作为拟似阿滋海默氏症的动物模式。 经 Αβ诱导的阿滋海 默氏症的动物模式可参考 Nabeshima等人的文献数据 (Neuroscience Letters (1994) 170: 63-66)(British Journal of Pharmacology (1999) 126: 235-244)。 将大鼠麻醉后， 在大鼠的左脑室设置输注管， 进行缝合后归回饲养笼 中照顾。 图 7示出了动物试验的实验排程， 在开始输注 Αβ1-42后的第 7 天进行探索能力（exploration behavior)评估， 第 8至 9天进行被动回避反应 (passive avoidance learning)评估, 第 10至 13天进行水迷宫 (water maze)评 估，第 14天则进行空间性探索实验 (probe test)。实验组别设计如表二所示， 其中假手术组 (Sham)以 TFA溶液 (64.9% sterile ddH20, 35% acetonitrile, 0.1% trifluoroacetic acid)进行处理， 而其它实验组则每小时以 0.5μ1溶解于 TFA溶液的 Αβ1-42处理，相当于每天给予 300ρηιο1/12μ1的 Αβ1-42 (Tocris 1428; MW: 4514.08)。 整个试验期间， 在进行探索能力、 被动回避反应 以及水迷宫等测试的训练前经口投予测试样品 给实验大鼠。 表二显示各个 实验组别的条件， 其中测试样品 D为表一中的异类叶升麻苷， 而 Aricept 则为市售用以治疗失智症例如阿滋海默氏症的 药物。 所有测试样品均以二 次蒸馏水每日制备， 并以胃管经口灌胃方式给予。

在实施例七至十一中， 结果显示为平均值 ±标准误差， 而 Αβ1-42对照 组和其它实险组间的统计差异标示 *表示 ΡΟ.05 , **表示 PO.01 , ***表示 Ρ<0·001。

最后牺牲所有实验大鼠， 取其脑部进行切片和染色， 并进行神经传递 物质的测定。 动物实验设计

实施例七： 探索能力的设备与测定 探索能力测定装置系由一长、 宽、 高均 40 cm及一个不锈钢底板所组 成， 底板上有 16 个直径 3 cm的洞， 距两侧 7 cm, 各洞的间距为 4 cm。 每只大鼠的测定时间为 10分钟， 测试大鼠穿洞的次数。

图 8示出了根据表二所示的动物探索行为（explorat ion behavior)的实验 结果。 如图 8所示， Αβ1-42经脑室输注予实验大鼠后， 会造成实验大鼠的 探索能力低下， 而测试样品 D (异类叶升麻苷)和 Aricept均可有效增进实验 大鼠的探索能力， 且测试样品 D (异类叶升麻苷)在 5 mg/kg的剂量下优于 Aricept 0.75 mg/kg的功效。 实施例八： 被动回避反应实验

被动回避装置由一明室、 一暗室以及一介于两室间的闸门所构成。 将大鼠置入明室， 同时开启闸门， 以大鼠在 90秒内进入暗室者， 供 做本实验。

训练期： 将筛选过的大鼠置入明室， 同时开启闸门， 待大鼠进入暗室 后， 关闭闸门， 同时将底板通以电流刺激 5秒， 之后自暗室取出大鼠， 归 回饲养笼。

于训练后 24小时， 再将大鼠置入明室， 同时开启闸门， 记录大鼠在 明室之滞留时间 （ step-through latency, STL ) 。

图 9示出了根据表二所示动物进行被动回避反应� �实验结果。 参考图 9 , 实验大鼠经脑室输注给予 Αβ1-42后， 会显著造成实验大鼠的被动回避 学习反应的障碍， 而经测试样品 D (异类叶升麻苷)和 Aricept的治疗均可 改善实验大鼠因脑室输注 Αβ1-42导致实验大鼠被动回避的学习障碍现象� �� 如图 9所示， 测试样品 D (异类叶升麻苷)于 2.5 mg/kg的剂量下与 Aricept 0.75 mg/kg的效果相当， 而测试样品 D (异类叶升麻苷)于 5 mg/kg的剂量 下则优于 Aricept 0.75 mg/kg的功效。 实施例九： 水迷宫实验

本实验将泳池分成四个象限， 将隐藏平台固定置于第四象限上， 并且 置于水面下方 1公分处。 每一大鼠每天均给予两次训练， 两次训练间隔为 4小时， 每次训练均给予 2分钟以找寻隐藏平台。 第一次训练为空间表现 (spatial performance)试验， 每只大鼠最多给予 120秒的时间游泳找寻隐藏 平台， 若大鼠于 120秒内成功找到隐藏平台， 则让大鼠于平台上休息 30 秒钟；而若大鼠于时间终止前尚未找到隐藏平 台，则将大鼠的分数计为 120 秒， 并将其抓至隐藏平台休息 30秒钟。 此空间表现试验一共进行 4天。 于第 5天将隐藏平台自水迷宫泳池取走， 再将大鼠置于第一象限， 并且给 予 60秒钟的时间游泳， 记录大鼠在泳池内原隐藏平台的象限所花的时 间， 以进行参考记忆试验 (probe test)。

图 10示出了根据表二所示动物进行空间表现试验� ��果， 而图 11示出 了根据表二所示动物进行参考记忆试验的实验 结果， 并与假手术组

(Sham), Αβ1-42对照组和正对照组 Aricept的结果作比较。 参考图 10及图 11所示， 动物实验结果显示测试样品 D和药物 Aricept均可改善 Αβ 1 -42 诱发水迷宫空间表现和参考记忆缺失的现象， 而测试样品 D 5 mg/kg则优 于对照组 Aricept 0.75 mg/kg的效果。 实施例十： 大鼠脑部组织染色结果

将进行水迷宫实验后的大鼠断头， 并且快速将脑自头盖骨内移开， 进 行脑部海马区 Αβ1-42免疫组织染色。 图 12A至 12E示出了脑部组织染色 结果。 在图 12B中， 在连续输注 Αβ1-42的大鼠脑中发现大量的斑块， 而 在图 12C和图 12D中， 经测试样品 D (异类叶升麻苷) 2.5mg/kg处理后的大 鼠脑中仅发现极少量的斑块，而经测试样品 D (异类叶升麻苷） 5mg/kg处理 后的大鼠脑中则几乎没有斑块产生。 比较图 12C至图 12E, 经测试样品 D (异类叶升麻苷)处理后的大鼠脑中， 其斑块数量明显小于经药物 Aricept 处理过后的结果。 由此结果可知， 测试样品 D (异类叶升麻苷)可有效抑制 Αβ经聚集而形成斑块， 或者可消除斑块。 实施例十一： 大鼠大脑皮质区及海马区中的神经传导物质含 量

将进行水迷宫实验后的大鼠牺牲掉， 并快速将脑自头盖骨内移开， 按 Glowinski & Iversen 的方法，将大脑皮质区及海马区分别取出，分 别称重， 并加入 50 mM Na-phosphate buffer(pH 7.8) 进行均质， 以供进行神经传递 物质浓度及酶含量的测定。

表三和表四分别为根据表二所示实验大鼠于其 脑部皮质区和海马区 的神经传导物质多巴胺 (DA)与其代谢物 DOPAC和 HVA的含量检测结果。 参考表三和表四所示的结果， Αβ1-42造成实验大鼠的皮质区和海马区的 DA含量降低， 而测试样品 D和 Aricept均可改善 Αβ 1 -42所造成的实验大 鼠皮质区和海马区的 DA含量降低的现象。 表三： 根据表二所示实验大鼠于其脑部皮质区的神经 传导物质多巴胺

(DA)与其代谢物 DOPAC和 HVA的含量检测结果

DOPAC HVA DA

Sham 3.7l±0.58

Vehicle 2,33±8 2S

D 2.5 g/kg :12,53±3,.33 2,¾±0,5S

D 5 mg kg 2. 4±0.69 滅 4

Aricept 2. 2±0,7S

表 4: 根据表 2所示实验大鼠于其脑部海马区的神经传导物� �多巴胺 (DA)与其代谢物 DOPAC和 HVA的含量检测结果

DOPAC DA

Sham 5.S7±0,92 3.6S±flil

Vehicle 5,13±O..S0: 3.39±0.36 1,Q ±0.21

D 2.5 mg kg i. S±I.15 3.68±0.46 5.41±l.f

D 5 mg kg 3-2¾^),25

Aricept 3,19±1.00 .2,45 3:S 2.33±0.37

图 13A为根据表二所示实验大鼠于其脑部皮质区和 海马区的神经传 导物质乙酰胆碱 (Acetylcholine)的含量检测结果， 而图 13B则为根据表二 所示实验大鼠于其脑部皮质区和海马区的胆碱 (Choline)含量检测结果。 参 考图 13A和图 13B所示结果， Αβ1-42造成实验大鼠之皮质区和海马区的 乙酰胆碱含量降低，而测试样品 D和 Aricept均可改善 Αβ1-42所造成的实 验大鼠皮质区和海马区的乙酰胆碱含量降低的 现象， 且其中以测试样品 D (异类叶升麻苷） 5 mg/kg的结果最佳。

图 14A和图 14B分别示出了根据表二所示实验大鼠于其脑部 皮质区和 海马区所测得的乙酰胆碱酯酶 (acetylcholinesterase)活性结果。 参考图 14A 和图 14B所示结果， Αβ1-42造成实验大鼠皮质区和海马区的乙酰胆� ��酯 酶活性增加，而测试样品 D和 Aricept均可改善 Αβ1-42所造成的实验大鼠 皮质区和海马区的乙酰胆碱酯酶活性增加的现 象。

由于 Αβ的聚集体会损伤细胞， 进而引发各种疾病或状况。 根据实施 例二至六的细胞试验结果， 异类叶升麻苷可有效抑制 Αβ的生成、 积累或 聚集， 进而避免 Αβ形成聚集体， 其可用于预防或治疗阿滋海默氏症以及 其它 Αβ相关疾病或状况。

根据实施例七至九的动物试验结果， 异类叶升麻苷具有显著改善 Αβ 所致的记忆或学习能力衰退的效果。 而根据实施例十所示结果， 异类叶升 麻苷可有效抑制 Αβ经聚集而形成斑块， 或者消除斑块。 此外， 根据实施 例十一， 异类叶升麻苷可有效改善神经传导物质因 Αβ而减少的现象， 故 可具有改善记忆或学习能力衰退的效果。 根据上述细胞和动物试验结果， 如将异类叶升麻苷或其医药学上可接受的盐以 某种有效治疗量， 如相当于 约 0.2毫克 /公斤至 4毫克 /公斤（即对 60公斤成人的建议剂量约为 12毫克 至 240毫克)的异类叶升麻苷的每日剂量投予至某� �人类个体，其应可作为

、 、 i然本发明 以数个 佳 ϊ施例揭露如上: 但其 ^; 并非用以限定本发 明， 本领域技术人员在未脱离本发明所揭示的精神 下所进行的等效替换或 修饰， 均应包含在本发明权利要求的范围内。