2-ALCOXY-SAS-TRIHYDROXY-ALKYLAMIDE-BENZOTHIAZEPINE ₁ LEUR PREPARATION. COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION

La présente invention concerne notamment des 2-alcoxy-3,4,5-trihydroxy- alkylamide-benzothiazépines, leur préparation, des compositions les contenant, et leur utilisation comme médicament.

Plus particulièrement, et selon un premier aspect, l'invention concerne des 2- alcoxy-3,4,5-trihydroxy-alkylamide-benzothiazépines utiles comme agents anticancéreux.

Des 2-méthoxy-3,4,5-trihydroxy-alkylamides ont été décrits dans US 6239127, US 20010044433 A1 , WO 01/85697, WO 00/29382, US 4831135, EP 687673, et US 2002128474 A1. Ces documents divulguent essentiellement des analogues et dérivés de bengamide, un produit naturel isolé d'une éponge marine, Jaspis coriaces.

Ces mêmes produits ont été décrits dans la littérature : J. Org. Chem. (1986), 51 (23), 4494-7 ; J. Org. Chem. (2001 ), 66(5), 1733-41 ; J. Med. Chem. 2001 , 44, 3692-9.

Le problème que se propose de résoudre la présente invention est d'obtenir de nouveaux produits présentant une activité anticancéreuse. En plus du maintien d'une activité anticancéreuse, certains de ces nouveaux produits peuvent également présenter des propriétés avantageuses en relation avec leur activité pharmacologique, telle que leur pharmacocinétique, biodisponibilité, solubilité, stabilité, toxicité, absorption ou métabolisme.

La présente invention a pour objet les produits répondant à la formule générale (I) suivante :

dans laquelle :

a) Ri est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par (C1- C12)alkyle, (C2-C12)alcényle, (C2-C12)alcynyle, cycloalkyle, hétérocyclyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyl(C1-C12)alkyle, cycloalkyl(C2-

C12)alcényle, cycloalkyl(C2-C12)alcynyle, hétérocyclyl(C1 -C12)alkyle, hétérocyclyl(C2-C12)alcényle, hétérocyclyl(C2-C12)alcynyle, aryl(C1 - C12)alkyle, aryl(C2-C12)alcényle, aryl(C2-C12)alcynyle, hétéroaryl(C1 - C12)alkyle, hétéroaryl(C2-C12)alcényle, hétéroaryl(C2-C12)alcynyle, le groupe aryle de chaque Ri étant éventuellement substitué par un ou plusieurs halogènes;

b) R ₂ est sélectionné dans le groupe constitué par (C1-C6)alkyle, aryl(C1 - C6)alkyle, hétéroaryl(C1-C6)alkyle, aryle, hétéroaryle, (C1 - C6)alkylthio(C1 -C6)alkyle, di(C1 -C6)alkylamino(C1 -C6)alkyle, aryloxy(C1 - C6)alkyle, (C1 -C6)alkoxy(C1 -C6)alkyle ;

c) R ₃ est sélectionné dans le groupe constitué par H, COO(R ₅ ), CONH(R ₅ ), CO(R ₅ ), 0(R ₅ ), R ₅ ;

d) R ₄ est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par H, F, Cl, Br ₁ N(Rs) ₂ , NO ₂ , CN ₁ COO(R ₅ ), CON(R ₅ ) ₂ , NHCO(R ₅ ), NHCOO(R ₅ ), OCONH(R ₅ ), 0(R ₅ ), R ₅ , ou bien, deux substituants R ₄ , liés à 2 carbones adjacents du phényl, forment ensemble un cycle choisi parmi cycloalkyle, hétérocyclyle, aryle ou hétéroaryle, éventuellement substitué par un ou plusieurs R ₄ .

e) m a pour valeur O, 1 , 2, 3, ou 4 ;

f) X est choisi parmi S, SO ou SO ₂ ;

g) R ₅ est indépendamment choisi parmi doublet d'électrons non liant, H, (C1- C12)alkyle, (C2-C12)alcényle, (C2-C12)alcynyle, halogéno(C1-C12)alkyle, aryl(C1 -C12)alkyle, hétéroaryl(C1 -C12)alkyle, hétéroarylaryl(C1- C12)alkyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, dans lequel chaque R ₅ est éventuellement substitué par au moins un substituant choisi parmi OH, halogène, (C1-C4)alkyle, (C1-C4)alkoxy, aryl(C1 -C4)alkyle, aryle, hétéroaryl(C1 -C4)alkyl, hétéroaryle, -N(CH ₃ ) ₂ , -NH ₂ , CONH ₂ ,

chacun des Rz est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par H, COO(R ₅ ), CONH(R ₅ ), CON(R ₅ ) ₂ , CO(R ₅ ), R ₅ , dans lequel chaque R ₅ est indépendamment choisi parmi (C1 -C4)alkyle, halogéno(C1 - C4)alkyle, aryl(C1-C4)alkyle, hétéroaryl(C1-C4)alkyle, dans lequel chaque R ₅ est éventuellement substitué par un substituant choisi parmi OH, halogène, (C1-C4)alkyle, (C1 -C4)alkoxy, aryl(C1 -C4)alkyle, aryle, hétéroaryl(C1-C4)alkyle, hétéroaryle ;

à la condition que lorsque R-i est (E) -CH=CH-C(CH ₃ ) ₃ , R ₂ est méthyle, X est S et m est O, alors R ₃ n'est pas un atome d'hydrogène, un groupe (3,5- difluoro-phényl)-méthyle ou un groupe -CH ₂ -CH=CH ₂ . La présente invention a pour objet les produits de formule générale (I) ci- dessus dans laquelle R ₁ est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par (C1-C12)alkyle, (C2-C12)alcényle, (C2-C12)alcynyle, cycloalkyle, hétérocyclyle, aryle, hétéroaryle, aryl(C1 -C12)alkyle, aryl(C2- C12)alcényle, aryl(C2-C12)alcynyle, hétéroaryl(C1 -C12)alkyle, hétéroaryl(C2- C12)alcényle, hétéroaryl(C2-C12)alcynyle.

La présente invention a pour objet les produits de formule générale (I) ci- dessus dans laquelle R ₂ est sélectionné dans le groupe constitué par (C1-

C6)alkyle, aryl(C1 -C6)alkyle, hétéroaryl(C1-C6)alkyle, aryle, hétéroaryle, (C2- C12)alcénylaryle, (C2-C12)alcénylhétéroaryle, (C1 -C6)alkylthio(C1 -C6)alkyle, di(C1 -C6)alkylamino(C1 -C6)alkyle, aryloxy(C1 -C6)alkyle.

Selon l'invention, Ri est préférentiellement choisi parmi -C(Re)=C(R ₇ )(Re) dans lequel R ₆ , R ₇ , et R ₈ sont indépendamment sélectionnés parmi H, (C1 - C6)alkyle, cycloalkyle, hétérocyclyle, aryle, hétéroaryle. Plus préférentiellement, R ₁ est choisi parmi (E) -CH=CH-CH(CH ₃ )(C ₂ H ₅ ), (E) - CH=CH-CH(CHa) ₂ , (E) -CH=CH-C(CH ₃ ) ₃ , ou encore parmi (E) -C(CH ₃ )=CH- CH(CH ₃ )(C ₂ H ₅ ), (E) -C(CH ₃ )=CH-CH(CH ₃ ) ₂ , et (E) -C(CH ₃ )=CH-C(CH ₃ ) ₃ . Plus préférentiellement, R1 est choisi parmi (E) -CH=CH-C ₅ H ₉ , (E) -CH=CH- C ₆ H ₁₁ , (E) -CH=CH-(CH ₂ ) _3- CH ₃ , (E) -CH=CH-C ₆ H ₅ où le phényle est éventuellement substitué par un atome de fluor.

Selon l'invention, R ₂ est préférentiellement méthyle.

Parmi les objets de la présente invention, un premier groupe est caractérisé en ce que X est S. Un second groupe est caractérisé en ce que X est SO et un troisième groupe est caractérisé en ce que X est SO ₂ .

Parmi les objets de la présente invention, un quatrième groupe est caractérisé en ce que R ₃ est indépendamment choisi parmi : méthyle, un groupe phénylméthyle ou un groupe (3,5-difluoro-phényl)-méthyle. Un cinquième groupe est caractérisé en ce que R ₃ est H.

Parmi les objets de la présente invention, un sixième groupe est caractérisé en ce que R ₄ est indépendamment choisi parmi : F, Cl, Br, phényle, cyanophényle, trifluorométhyle, méthoxy, phénoxy ou bien 2 substituants R ₄ , liés à 2 carbones adjacents du phényle, forment ensemble un cycle pyrazine. Un septième groupe est caractérisé en ce que m est 0.

De manière préférée, l'invention concerne les produits exemplifiés dans le tableau 1.

Selon un autre aspect, l'invention concerne les procédés de préparation des produits de formule générale (I) ou (I ¹ ). Les produits de formule générale (I ¹ ) sont des précurseurs, éventuellement actifs, des produits de formule générale (I). Les produits de formule générale (I) sont obtenus à partir des produits de formule générale (I ¹ ) par des procédés décrits ou par une ou plusieurs réactions classiques pour l'homme du métier telle que par exemple une cyclopropanation, une oxydation ou une séparation chirale. Notamment, les produits des exemples 1 et 2 sont obtenus par oxydation du produit 6 de formule générale (I').

Les produits de formule générale (I) ou (I ¹ ) peuvent être obtenus par hydrolyse d'un produit de formule générale (II) :

, dans lequel R ₁ , R ₂ , R ₃ , R ₄ , X et m sont tels que définis précédemment,.

Les produits de formule générale (II) peuvent être obtenus par réaction d'un produit de formule générale (III) :

, dans lequel R ₃ , R ₄ , X et m sont tels que définis précédemment, avec un produit de formule générale (IV) :

, dans lequel R ₁ , R ₂ sont tels que définis précédemment.

Les produits de formule générale (I) ou (I ¹ ) peuvent également être obtenus par réaction d'un produit de formule générale (III) tel que défini précédemment, avec un produit de formule générale (V) :

, dans lequel R ₁ , R ₂ sont tels que définis précédemment.

Les produits de formule générale (V) peuvent être obtenus par hydrolyse d'un produit de formule générale (IV) :

, dans lequel Ri, R ₂ sont tels que définis précédemment. Des produits de formule générale (V) pour lesquels R ₁ représente -CH=CH-R ¹ _T peuvent encore être obtenus par hydrolyse d'un produit de formule générale (VII) :

, dans lequel R ₂ est tel que défini précédemment, afin d'obtenir un produit de formule générale (Vl) :

, dans lequel R ₂ est tel que défini précédemment, qui subit une métathèse afin d'obtenir un produit de formule générale (V) :

, pour lesquels Ri représente -CH=CH-R ¹ I et R'i représente un groupe (C1-C6)alkyle, cycloalkyle, hétérocyclyle, aryle ou hétéroaryle.

Les produits de formule générale (VII) peuvent être obtenus par double déshydratation d'un produit de formule générale (VIII) :

, dans lequel R ₂ est tel que défini précédemment.

Les produits de formule générale (I ¹ ) et (II) tels que définis précédemment, à l'exception de ceux pour lesquels Ri est (E) -CH=CH-C(CH ₃ )3, R2 est méthyle, X est S, m est O, et R ₃ est un atome d'hydrogène, un groupe (3,5- difluoro-phényl)-méthyle ou un groupe -CH ₂ -CH=CH ₂ , sont un objet de la présente invention.

Les produits de formule générale (III) pour lesquels X est S, R ₃ est H, méthyle, phénylméthyle ou (3,5-difluorophényl)-méthyle et R ₄ est F, Cl, Br, phényle, cyanophényle, trifluorométhyle, méthoxy ou phénoxy, ou bien m a pour valeur 0, à l'exception de ceux pour lesquels X est S, m est 0, et R ₃ est un atome d'hydrogène ou un groupe (3,5-difluoro-phényl)-méthyle et à l'exception de ceux pour lesquels X est S, R ₃ est phénylméthyle et R4 est trifluorométhyle ou méthoxy, sont un objet de la présente invention. Les produits de formule générale (IV) et (V) pour lesquels R ₂ est méthyle et R1 est -(E) -CH=CH-C ₅ H ₉ ou -(E) -CH=CH-C ₆ H ₅ où le phényle est substitué par un atome de fluor sont un objet de la présente invention. Les produits de formule générale (Vl) pour lesquels R ₂ est méthyle sont un objet de la présente invention. Les produits de formule générale (VII) pour lesquels R ₂ est méthyle sont un objet de la présente invention.

Les produits selon la présente invention peuvent exister à l'état de bases, de sels d'additions avec des acides, de solvats, d'hydrates ou de prodrogues.

Les produits selon l'invention peuvent être sous forme non chirale, ou racémique, ou enrichie en un stéréo-isomère, ou enrichie en un énantiomère ; et peuvent éventuellement être salifiés. Les produits pour lesquels le carbone lié à l'aminé exocyclique est de configuration (R) sont préférés.

Un produit conforme à l'invention pourra être utilisé pour la fabrication d'un médicament utile pour prévenir ou traiter un état pathologique, en particulier un cancer.

Les produits de la présente invention peuvent également être utilisés pour la fabrication d'un médicament utile pour prévenir ou traiter un état pathologique dans lequel une néovascularisation ou angiogenèse se fait de façon inappropriée c'est-à-dire dans les cancers en général et dans des cancers particuliers tels que le sarcome de Kaposi ou l'hémoangiome infantile, mais aussi dans l'arthrite rhumatoïde, l'osthéoarthrite et/ou ses douleurs associées, les maladies inflammatoires de l'intestin telle que la recto-colite hémorragique ou la maladie de Crohn's, les pathologies de l'œil telle que la dégénérescence maculaire liée à l'âge, les rétinopathies diabétiques, l'inflammation chronique, le psoriasis. L'angiogenèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir des vaisseaux pré-existants. L'angiogenèse tumorale (formation de néovaisseaux sanguins), indispensable à la croissance tumorale, est également un des facteurs essentiels de la dissémination métastatique (Oncogene. 2003 May 19;22(20):3172-9 ; Nat Med. 1995 Jan;1 (1 ):27-31.).

La présente invention concerne aussi les compositions thérapeutiques contenant un composé selon l'invention, en association avec un excipient pharmaceutiquement acceptable selon le mode d'administration choisi. La composition pharmaceutique peut se présenter sous forme solide, liquide ou de liposomes.

Parmi les compositions solides on peut citer les poudres, les gélules, les comprimés. Parmi les formes orales on peut aussi inclure les formes solides protégées vis-à-vis du milieu acide de l'estomac. Les supports utilisés pour les formes solides sont constitués notamment de supports minéraux comme les phosphates, les carbonates ou de supports organiques comme le lactose, les celluloses, l'amidon ou les polymères. Les formes liquides sont constituées de solutions de suspensions ou de dispersions. Elles contiennent comme support dispersif soit l'eau, soit un solvant organique (éthanol, NMP ou autres) ou de mélanges d'agents tensioactifs et de solvants ou d'agents complexants et de solvants.

Les formes liquides seront de préférence injectables et, de ce fait, auront une formulation acceptable pour une telle utilisation.

Des voies d'administration par injection acceptables incluent les voies intraveineuse, intra-péritonéale, intramusculaire, et sous cutanée, la voie intraveineuse étant préférée.

La dose administrée des composés de l'invention sera adaptée par le praticien en fonction de la voie d'administration du patient et de l'état de ce dernier.

Les composés de la présente invention peuvent être administrés seuls ou en mélange avec d'autres anticancéreux. Parmi les associations possibles on peut citer :

• les agents alkylants et notamment le cyclophosphamide, le melphalan, l'ifosfamide, le chlorambucil, le busulfan, le thiotepa, la prednimustine, la carmustine, la lomustine, la semustine, la steptozotocine, la decarbazine, la témozolomide, la procarbazine et l'hexaméthylmélamine

• les dérivés du platine comme notamment le cisplatine, le carboplatine ou l'oxaliplatine

• les agents antibiotiques comme notamment la bléomycine, la mitomycine, la dactinomycine

• les agents antimicrotubules comme notamment la vinblastine, la vincristine, la vindésine, la vinorelbine, les taxoides (paclitaxel et docétaxel)

• les anthracyclines comme notamment la doxorubicine, la daunorubicine, l'idarubicine, l'épirubicine, la mitoxantrone, la losoxantrone

• les topoisomérases des groupes I et II telles que l'étoposide, le teniposide, l'amsacrine, l'irinotecan, le topotecan et le tomudex

• les fluoropyrimidines telles que le 5-fluorouracile, l'UFT, la floxuridine

« les analogues de cytidine telles que la 5-azacytidine, la cytarabine, la gemcitabine, la 6-mercaptomurine, la 6-thioguanine

• les analogues d'adénosine telles que la pentostatine, la cytarabine ou le phosphate de fludarabine

• le méthotrexate et l'acide folinique

« les enzymes et composés divers tels que la L-asparaginase, l'hydroxyurée, l'acide trans-rétinoique, la suramine, la dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptin ainsi que les hormones oestrogéniques, androgéniques

• les agents antivasculaires tels que les dérivés de la combretastatine ou de la colchicine et leurs prodrogues.

• les agents antivasculaires tels que les dérivés de la combretastatine, par exemple la CA4P, des chalcones ou de la colchicine, par exemple le ZD6126, et leurs prodrogues.

• Les inhibiteurs de kinases tels que l'ertonilib ou l'imatinib.

• Les agents biothérapeutiques comme les anticorps tels que le rituximab, le bevacizumab, le cetuximab, le trastuzumab ou l'alemtuzumab.

• Les inhibiteurs du protéasome tel que le bortesomib.

Il est également possible d'associer aux composés de la présente invention un traitement par des radiations. Ces traitements peuvent être administrés simultanément, séparément, séquentiellement. Le traitement sera adapté par le praticien en fonction du malade à traiter.

Définitions

Le terme « halogène » fait référence à un élément choisi parmi F, Cl, Br, et I.

Le terme « alkyle » fait référence à un substituant hydrocarboné saturé, linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 12 atomes de carbone. Les substituants méthyle, éthyle, propyle, 1 -méthyléthyl, butyle, 1-méthylpropyl, 2-méthylpropyle, 1 ,1-diméthyléthyle, pentyle, 1-méthylbutyle, 2-méthylbutyle, 3-méthylbutyle, 1 ,1-diméthylpropyle, 1 ,2-diméthylpropyle, 2,2-diméthyl- propyle, 1-éthylpropyle, hexyle, 1 -méthylpentyle, 2-méthylpentyle, 1 -éthyl- butyle, 2-éthylbutyle, 3,3-diméthylbutyle, heptyle, 1 -éthylpentyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle, et dodécyle sont des exemples de substituant alkyle.

Le terme « alcényle » fait référence à un substituant hydrocarboné linéaire ou ramifié ayant une ou plusieurs insaturations, ayant de 2 à 12 atomes de carbone. Les substituants éthylènyle, 1 -méthyléthylènyle, prop-1-ènyle, prop- 2-ènyle, Z-1 -méthylprop-1 -ènyle, E-1-méthylprop-1-ènyle, Z-1 ,2-diméthyl- prop-1-ènyle, E-1 ,2-diméthylprop-1-ènyle, but-1 ,3-diényle, 1-méthylidènyl- prop-2-ènyle, Z-2-méthylbut-1 ,3-diényle, E-2-méthylbut-1 ,3-diényle, 2-méthyl- 1-méthylidènylprop-2-ènyle, undéc-1 -ènyle et undéc-10-ènyle sont des exemples de substituant alkylène.

Le terme « alcynyle » fait référence à un substituant hydrocarboné linéaire ou ramifié ayant au moins deux insaturations portées par une paire d'atomes de carbone vicinaux, ayant de 2 à 12 atomes de carbone. Les substituants éthynyle; prop-1-ynyle; prop-2-ynyle; et but-1 -ynyle sont des exemples de substituant alkynyle.

Le terme « aryle » fait référence à un substituant aromatique mono- ou polycyclique ayant de 6 à 14 atomes de carbone. Les substituants phényle,

napht-1 -yle ; napht-2-yle ; anthracen-9-yl ; 1 ,2,3,4-tetrahydronapht-5-yle ; et 1 ,2,3,4-tetrahydronapht-6-yle sont des exemples de substituant aryle.

Le terme « hétéroaryle » fait référence à un substituant hétéroaromatique mono- ou polycyclique ayant de 1 à 13 atomes de carbone et de 1 à 4 hétéroatomes. Les substituants pyrrol-1-yle ; pyrrol2-yle ; pyrrol3-yle ; furyle ; thienyle ; imidazolyle ; oxazolyle ; thiazolyle ; isoxazolyle ; isothiazolyle ;

1 ,2,4-triazolyle ; oxadiazolyle ; thiadiazolyle ; tetrazolyle ; pyridyle ; pyrimidyle ; pyrazinyle ; 1 ,3,5-triazinyle ; indolyle ; benzo[b]furyle ; benzo[b]thiényle ; indazolyle ; benzimidazolyle ; azaindolyle ; quinoléyle ; isoquinoléyle ; carbazolyle ; et acridyle sont des exemples de substituant hétéroaryle.

Le terme « hétéroatome » fait référence ici à un atome au moins divalent, différent du carbone. N; O; S; et Se sont des exemples d'hétéroatome.

Le terme « cycloalkyle » fait référence à un substituant hydrocarboné cyclique saturé ou partiellement insaturé ayant de 3 à 12 atomes de carbone. Les substituants cyclopropyle; cyclobutyle; cyclopentyle; cyclopentènyle; cyclopentadiényle; cyclohexyle; cyclohexènyle; cycloheptyle; bicyclo[2.2.1]heptyle ; cyclooctyle; bicyclo[2.2.2]octyle ; adamantyle ; et perhydronapthyle sont des exemples de substituant cycloalkyle.

Le terme « hétérocyclyle » fait référence à un substituant hydrocarboné cyclique saturé ou partiellement insaturé ayant de 1 à 13 atomes de carbone et de 1 à 4 hétéroatomes. De préférence, le substituant hydrocarboné cyclique saturé ou partiellement insaturé sera monocyclique et comportera 4 ou 5 atomes de carbone et 1 à 3 hétéroatomes.

Concernant le phényle fusionné, lorsque m a pour valeur zéro on entend qu'il s'agit d'un phényle non substitué (ou substitué par 4 atomes d'hydrogène), et lorsque m a pour valeur 1 , 2, 3 ou 4, on entend qu'1 , 2, 3 ou 4 atomes d'hydrogènes sont substitués par un substituant R ₄ .

Les avantages de l'invention seront plus particulièrement illustrés par les exemples suivants :

Abréviations :

Ac acétate ; Bn benzyle ; ⁰ C degré Celsius ; cat. catalyseur ; CCM chromatographie sur couche mince ; CCP chromatographie sur colonne préparative ; cm centimètre ; δ déplacement chimique ; d doublet ; dd doublet de doublets ; DMF diméthylformamide ; DMSO-d ⁶ diméthylsulfoxyde deutéré ; dt doublet de triplets ; éq. équivalent ; ES+/- electrospray (modes positif / négatif) ; Et éthyle ; g gramme ; h heure ; Hz hertz ; IC _5O constante d'inhibition à 50% d'activité ; iPr isopropyle ; j. jour ; J constante de couplage ; LCMS chromatographie liquide couplée à une spectrométrie de masse; m multiplet ; Me méthyle ; mg milligramme ; MHz mégahertz ; ml_ millilitre ; μl_ microlitre ; mm millimètre ; μm micromètre ; mmol millimole ; mn minute ; N mol. L ^"1 ; PF point de fusion ; Ph phényle ; ppm parties par million ; q quadruplet ; Rdt rendement ; Rf rapport frontal ; RMN ¹ H résonance magnétique nucléaire du proton ; s singulet ; si singulet large ; t triplet ; TA température ambiante ; tBu tertiobutyle ; TFA acide trifluoroacétique ; THF tetrahydrofuranne ; t _R temps de rétention ; U.V. ultraviolet ; V volt.

Ex1 : N-[(1 R,3R)-5-(3,5-difluoro-benzyl)-1 ^-dioxo^.SAδ-tetrahydro-i ,5- benzothiazépin-3-yl]-((6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2 -méthoxy-8,8- diméthyl-non-6-énamide et Ex2: N-[(1 S,3R)-5-(3,5-difluoro-benzyl)-1 ,4-dioxo- 2 _I 3,4,5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-((6E)-(2R _I 3R,4S,5R)-3 _I 4 _I 5- trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl-non-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (3R)-[5-(3,5-difluoro-benzyl)-4-oxo-2,3,4,5- tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-carbamate de tert-butyle (2)

Dans un ballon de 100 ml_, sous agitation et atmosphère d'argon, contenant

40 ml_ de THF et 1 ,3 g de 1 (4,4 mmol), on introduit à TA 177 mg d'hydrure de sodium en suspension à 60% dans l'huile (4,42 mmol). On agite le milieu pendant 1 h, puis ajoute 1 ,8 g (8,83 mmol) de bromure de 3,5-difluorobenzyl.

On laisse le milieu sous agitation pendant une nuit. On ajoute 100 ml_ d'AcOEt, lave la phase organique avec 2 fois 100 ml_ d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. On obtient 3 g d'une huile jaune, qui donne après chromatographie sur une cartouche de silice (120 g) en éluant avec un mélange Heptane/AcOEt (en gradient : AcOEt 12 à 100%) 1 ,59 g de produit 2.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,35 (s, 9H) ; 3,11 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,48 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 4,15 (m, 1 H) ; 5,03 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 5,13 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; de 6,98 à 7,10 (m, 3H) ; 7,28 (t large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,39 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; de 7,47 à 7,53 (m, 2H) ; 7,63 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H).

Etape 2: Préparation du chlorhydrate de (3R)-3-amino-5-(3,5-difluoro-benzyl)- 2,3-dihydro-5H-1 ,5-benzothiazépin-4-one (3)

On reprend 1 ,59 g de 2 (3,78 mmol) dans un ballon de 100 ml_ et on ajoute

25 ml_ d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite le milieu pendant 5h à TA sous argon. Après évaporation du solvant, on obtient 1 ,44 g d'aminé 3 sous forme de chlorhydrate qui est utilisé directement pour l'étape suivante.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,25 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,75 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,94 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 5,09 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 5,24 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; de 6,97 à 7,15 (m, 3H) ; 7,33 (m, 1 H) ; de 7,48 à 7,59 (m, 2H) ; 7,68 (dd, J = 1 ,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 8,63 (s large, 3H).

Etape 3: Préparation du (3R,4R,5S)-4-hydroxy-5-((2E)-(2R)-1-hydroxy-4,4- diméthyl-pent-2-ényl)-3-méthoxy-dihydro-furan-2-one (5)

y< OH OH

4 5

Dans un ballon de 250 ml_ conteant 40 ml_ d'eau et 3,6 g de 4 (qui peut être préparé selon les modes opératoires décrites dans Org. Process Res. Dev. 2003, 7(6), 856-865) en suspension, on ajoute 17 mL de TFA en solution dans 10 mL d'eau. On agite le milieu pendant 1 ,5 h à TA puis dilue le milieu avec 290 mL d'eau, congèle et lyophilise. On obtient 4 g d'une huile qui

cristallise dans 20 ml_ d'éther isopropylique à TA. Après essorage, lavage à l'éther isopropylique, et séchage sous vide à 40 ⁰ C, on obtient 2,46 g de produit attendu 5 (cristaux blanc).

PF : 123°C.

IC : m/z = 262 MNH ₄ ⁺ .

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,00 (s, 9H) ; 3,41 (s, 3H) ; 3,93 (dd, J

= 2,5 et 9,0 Hz, 1 H) ; de 4,22 à 4,31 (m, 3H) ; 5,19 (d, J = 5,0 Hz, 1 H) ; 5,42

(dd, J = 5,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,43 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 5,87 (d, J = 16,0 Hz,

1 H) .

IR (KBr): 3239; 2964; 2914; 1701 ; 1499; 1312; 1253; 1047 & 751 cm ^"1 .

Etape 4: Préparation du N-[(3R)-5-(3,5-difluoro-benzyl)-4-oxo-2,3,4,5- tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-(6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy -2- méthoxy-8,8-diméthyl-non-6-énamide (6)

On introduit successivement dans 2,0 ml_ de THF dans un tube Wheaton, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 99 mg de 5 (405 μmol), 362 mg de 3 (1.0 mmol), 135 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,81 mmol). On agite à TA pendant 24 h. On ajoute 3 ml_ d'acétate d'éthyle au milieu réactionnel. On lave successivement avec 3 ml_ d'une solution de HCI (1 N), puis 5 mL d'une solution saturée de NaHCO ₃ et 3 mL d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. On obtient 300 mg d'un solide marron, qui est chromatographié sur une cartouche de silice (10g, éluant Heptane/AcOEt- en gradient : AcOEt 25 à 100%). On recueille 123 mg de produit attendu 6 . ES : 565(+)=(M+H)(+); 547(+)=(M+H)(+) -H ₂ O.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,95 (s, 9H) ; 3,20 (s, 3H) ; 3,21 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; de 3,32 à 3,47 (m masqué, 1 H) ; 3,48 (dd, J = 7,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 3,50 (m partiellement masqué, 1 H) ; 3,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,92 (m, 1 H) ; 4,30 (m large, 2H) ; 4,45 (m, 1 H) ; 4,54 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 5,03 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 5,21 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 5,28 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,61 (d large, J = 16,0 Hz, 1 H) ; de 7,00 à 7,10 (m, 3H) ; 7,29 (m, 1 H) ; de 7,45 à 7,55 (m, 2H) ; 7,61 (dd, J = 1 ,5 et 7,5Hz, 1 H) ; 8,49 (d, J = 8,0 Hz, 1 H)

Etape 4 Préparation de N-[(1 R,3R)-5-(3,5-difluoro-benzyl)-1 ,4-dioxo- 2,3,4 ₎ 5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-((6E)-(2R,3R,4S ₎ 5R)-3,4 _I 5- trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl-non-6-énamide (Ex1) et N-[(1 S,3R)-5-(3,5-

difluoro-benzyl)-1 ,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-((6E)-

(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl-n on-6-énamide

On introduit dans un tube Wheaton, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 100 mg de 6 (177 μmol), 1 ml_ d'hexafluoro-2-propanol et 35 μl d'eau oxygénée à 33%. On maintient l'agitation à TA pendant 5h. On rajoute encore 70 μl d'eau oxygénée, laisse le milieu pendant 24 h. On ajoute 3 ml_ d'une solution de Na ₂ Sθ ₃ au milieu réactionnel. On extrait 2 fois avec 3 ml_ de CH ₂ CI ₂ . La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. On obtient 65 mg de produit brut, qui est chromatographié sur une plaque de silice préparative (éluant CH ₂ CI ₂ /MeOH ; 90/10). On recueille 11 ,5 mg de produit attendu Ex1 et 28,5 mg de produit attendu Ex2. ES: m/z = 579 (M-H)-.

Ex1 :Q RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,95 (s, 9H) ; 3,22 (s, 3H) ; de 3,26 à 3,32 (m masqué, 1 H) ; 3,38 (dd, J = 11 ,0 et 14,5 Hz, 1 H) ; 3,52 (m, 1 H) ; 3,71 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,84 (dd, J = 7,5 et 14,5 Hz, 1 H) ; 3,93 (m, 1 H) ; 4,25 (d, J = 7,0 Hz, 1 H) ; 4,32 (d, J = 5,5 Hz, 1 H) ; 4,55 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 4,67 (m, 1 H) ; 4,75 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) ; 5,24 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) ; 5,29 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,61 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,07 (tt, J = 2,0 et 9,5 Hz, 1 H) ; 7,15 (m, 2H) ; 7,34 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,42 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; de 7,63 à 7,68 (m, 2H) ; 8,59 (d, J = 7,5 Hz, 1 H). Ex2: RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,95 (s, 9H) ; de 3,15 à 3,32 (m masqué, 2H) ; 3,22 (s, 3H) ; 3,49 (m, 1 H) ; 3,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,92 (m, 1 H) ; 4,17 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 4,30 (m, 2H) ; 4,44 (m, 1 H) ; 4,55 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 4,94 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; 5,19 (d, J = 15,5 Hz ₁ 1 H) ; 5,28 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,61 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 6,96 (m, 2H) ; 7,13 (tt, J = 2,0 et 9,5 Hz, 1 H) ; 7,53 (m, 1 H) ; de 7,62 à 7,73 (m, 3H) ; 8,54 (d, J = 7,5 Hz, 1 H).

Ex3: N-[(3R)-5-benzyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]- (6E)-(2R,3R,4S _I 5R)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl-non-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (3R)-[5-benzyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl]-carbamate de tert-butyle (7)

Dans un ballon de 50 ml_, sous agitation et atmosphère d'argon, contenant 20 ml_ de THF et 315 mg de I (1 ,07 mmol), on introduit à TA 42 mg d'hydrure de sodium en suspension à 60% dans l'huile (1 ,07 mmol). On agite le milieu pendant 1 h, et puis ajoute 183 mg (1 ,07 mmol) de bromure de benzyl. On laisse le milieu sous agitation pendant une nuit, on ajoute 30 ml_ d'AcOEt, lave la phase organique avec 50 ml_ d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. On obtient 0,4 g d'une huile translucide, qui donne après chromatographie sur une cartouche de silice (10 g) en éluant avec un mélange CH ₂ CVMeOH {en gradient : MeOH 1 à 10%) 0,28 g de produit 7. RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm):: 1 ,35 (s, 9H) ; 3,09 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,45 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) 4,15 (m, 1 H) ; 4,97 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; 5,20 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; de 7,13 à 7,30 (m, 6H) ; 7,39 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,47 (m, 2H) ; 7,58 (d, J = 7,5 Hz, 1 H).

Etape 2: Préparation du chlorhydrate de (3R)-amino-5-benzyl-2,3-dihydro-5H- 1 ,5-benzothiazépin-4-one (8)

On reprend 0,28 g de 7 (0,73 mmol) dans un ballon de 50 ml_ et on ajoute 6 ml_ d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite le milieu pendant 5 h à TA sous argon. Après évaporation du solvant, et trituration avec un mélange de CH ₂ CI ₂ et éther isopropylique, après essorage on obtient 0,24 g d'aminé 8 (meringue jaune) sous forme de chlorhydrate qui est utilisé directement dans l'étape suivante.

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,22 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,73 (dd, J

= 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,91 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 4,97 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; 5,33 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; de 7,17 à 7,34 (m, 6H) ; de 7,48 à 7,59 (m,

2H) ; 7,62 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,60 (s large, 3H) .

IR ( KBr): 2923; 2613; 1680; 1471 ; 1453; 1261 ; 1203; 774; 743; 698; 629 &

458 cm ^"1

Etape 3: Préparation du N-((3R)-5-benzyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl)-(R)-2-[(4R,5S,6R)-6-((1 E)-3,3-diméthyl-but-1-ényl)-5- hydroxy-2,2-diméthyl-1 ,3-dioxinan-4-yl]-2-méthoxy-acétamide (9)

On introduit successivement dans un tube Wheaton, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 50 mg de 4 (176 μmol), 113 mg de 8 (0,35 mmol), 73 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,44 mmol) dans 1 ml_ de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24h. On ajoute 3 ml_ d'acétate d'éthyle au milieu réactionnel. On lave successivement avec 3 ml_ d'une solution de HCI (1 N), puis 3 mL d'une solution saturée de NaHCO ₃ et 3 ml_ d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (12 g, éluant CH ₂ CI ₂ /MeOH- en gradient : MeOH 1 à 10%), on recueille 100 mg de produit attendu 9. RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,98 (s, 9H) ; 1 ,22 (s, 3H) ; 1 ,28 (s, 3H) ; 3,15 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; de 3,22 à 3,34 (m masqué, 1 H) ; 3,23 (s, 3H) ; 3,47 (m, 1 H) ; 3,80 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 3,90 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 4,25 (d, J = 7,0 Hz, 1 H) ; 4,36 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 4,47 (m, 1 H) ; 4,96 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; 5,24 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; 5,44 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,67 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; de 7,14 à 7,30 (m, 6H) ; 7,52 (m, 2H) ; 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 8,52 (d, J = 8,5 Hz, 1 H).

Etape 4: Préparation du N-[(3R)-5-benzyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl]-(6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2- méthoxy-8,8- diméthyl-non-6-énamide (Ex3)

Dans un ballon de 20ml, on mélange 101 mg de 9 (178 μmol) dans 0,85 mL de THF et 1 ,78 mL d'acide chlorhydrique 1 N, sous agitation et sous argon. L'agitation est maintenue 5 heures à TA. Puis, on refroidit la solution à 0 ⁰ C. On neutralise à pH 7,0 avec de la soude 1 N. On extrait 2 fois avec 5 mL d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de magnésium et filtrées puis amenées à sec. On obtient 66 mg de produit brut,

qui après purification sur une plaque de silice préparative (éluant CH ₂ CI ₂ /Me0H : 90/10) donne 16,5 mg de produit attendu Ex3. IC : m/z = 546 MNH ₄ ⁺ . ; m/z = 529 MH ⁺ .

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm):: 0,95 (s, 9H) ; 3,17 (t partiellement masqué, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,21 (s, 3H) ; de 3,25 à 3,33 (m masqué, 1 H) ; de 3,40 à 3,53 (m, 2H) ; 3,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,93 (m, 1 H) ; 4,32 (m, 2H) ; 4,47 (m, 1 H) ; 4,54 (d large, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 4,94 (d, J = 15,5 Hz, 1 H) ; de 5,25 à 5,32 (m, 2H) ; 5,61 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; de 7,14 à 7,30 (m, 6H) ; de 7,45 à 7,54 (m, 2H) ; 7,59 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H).

Ex4: N-[(3R)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]- (6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl -non-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (3R)-[5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl]-carbamate de tert-butyle (10)

Dans un ballon de 100 ml_, sous agitation et atmosphère d'argon, contenant 15 mL de THF et 1 ,5 g de I (5,1 mmol), on introduit à TA 224 mg d'hydrure de sodium en suspension à 60% dans l'huile (5,6 mmol). On agite le milieu pendant 1 h, et puis ajoute 0,80 g (5,6 mmol) d'iodure de méthyle. On laisse le milieu sous agitation pendant 1 ,5 h, on ajoute 50 mL de CH ₂ CI ₂ , lave la phase organique avec 2 fois 30 mL d'eau et 1 fois 30 ml d'une solution saturée en NaCI. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (120 g) avec un mélange Heptane/AcOEt (75/25) donnant 1 ,31 g de produit 10 . PF: 118°C+ /- 2°C. ES: m/z = 309 MH ⁺ .

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,32 (s, 9H) ; 3,01 (t, J = 11 ,5 Hz ₁ 1 H) ; 3,29 (s, 3H) ; 3,41 (dd J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 4,07 (m, 1 H) 7,25 (d , J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,30 (m, 2H) ; 7,57 (m, 2H) ; 7,63 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) .

Etape 2: Préparation de chlorhydrate de (3R)-amino-5-méthyl-2,3-dihydro-5H- 1 ,5-benzothiazépin-4-one (H)

On reprend 1 ,01 g de 10 (3,28 mmol) dans un ballon de 100 ml_ et on ajoute 20 ml_ d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite le milieu pendant 2 h à TA sous argon. Après évaporation du solvant, trituration avec l'éther, et essorage, on obtient 0,83 g d'aminé H (poudre jaune claire) sous forme de chlorhydrate qui est utilisé directement pour l'étape suivante. IE: m/z = 208 M ⁺ .

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,15 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,35 (s, 3H) ; 3,67 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,85 (dd J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 7,36 (m, 1 H) ; 7,56 à 7,63 (m, 2H) ; 7,69 (m, 1 H) ; 8,41 (s large, 3H).

Etape 3: Préparation du N-[(3R)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl]-(6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2- méthoxy-8,8- diméthyl-non-6-énamide (Ex4)

On introduit successivement dans un ballon de 30 ml_, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 293 mg de 5 (1 ,2 mmol), 441 mg de H(1 ,8 mmol) , 399 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (2,4 mmol) dans 10 mL de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 94 h. On ajoute 20 mL de CH ₂ Cb au milieu réactionnel. On lave avec 15 mL d'une solution de HCI (0,5 N), puis 10 mL d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (25 g, éluant CH ₂ Cl ₂ /isopropanol : 95/5). On recueille 345 mg de produit attendu Ex4. ES : m/z = 451 (M-H) ^" .

IR (KBr): 3396; 2958; 1659; 1585; 1517; 1475; 1394; 1110; 975 & 766 cÏ€V ¹ RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,95 (s, 9H) ; 3,07 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,20 (s, 3H) ; 3,29 (m partiellement masqué, 4H) ; 3,43 (dd, J = 6,5 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,49 (m, 1 H) ; 3,66 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,91 (m, 1 H) ; 4,32 (m, 2H) ; 4,41 (m, 1 H) ; 4,52 (d large, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 5,28 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,61 (d large, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,32 (m, 1 H) ; 7,56 (m, 2H) ; 7,65 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 1 H).

Ex5 N-((3R)-9-chloro-4-oxo-7-trifluorométhyl-2,3,4,5-tetrahydro -1 ,5- bθnzothiazépin-3-yl)-(6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4 _> 5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8- diméthyl-non-6-énamide

Etape 1 : Préparation de l'acide (2R)-2-tert-butoxycarbonylamino-3-(2-chloro- 6-nitro-4-trifluorométhyl-phenylsulfanyl)-propionique (13)

Dans un tricol contenant 0,91 g de L-Boc-Cys-OH (4,1 mmol), 7,2 ml_ d'eau et 1 ,0 g de NaHCθ ₃ (2,89 mmol), on introduit goutte à goutte une solution de 12 (1 ,0g, 4,1 mmol) dans 8,6 ml_ d'éthanol. On porte le milieu au reflux pendant 2 h, et concentre l'éthanol. On lave la phase aqueuse avec 25 ml_ d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on rajoute 25 ml_ d'AcOEt, et amène la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N). Après agitation et décantation la phase aqueuse est extraite de nouveau avec 25 ml_ d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4, filtrées puis évaporées à sec. On obtient 2,0 g de produit attendu 13 (huile jaune) qui est utilisé directement pour le stade suivant.

Etape 2: Préparation de l'acide (2R)-(2-amino-6-chloro-4-trifluorométhyl- phenylsulfanyl)-2-tert-butoxycarbonylamino-propionique (14)

Dans un autoclave contenant 1 ,85g de 13 (4,2 mmol), 186 mg de Pd/C (10%) et 45 ml_ de MeOH, on hydrogène sous 5 bars pendant 5,5 h à 20 ⁰ C. Après filtration sur célite du catalyseur, et évaporation du solvant, on obtint 1 ,45 g de produit 14 attendu qui est utilisé directement pour le stade suivant. RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm):1 ,36 (s large, 9H) ; 3,01 (m, 1 H) ; 3,10 (dd, J = 4,5 et 13,5 Hz, 1 H) ; 3,98 (m, 1 H) ; 6,25 (s large, 2H) ; 6,94 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 7,00 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 7,14 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 12,8 (m très étalé, 1 H).

Etape 3: Préparation du ((3R)-9-chloro-4-oxo-7-trifluorométhyl-2 _> 3,4,5- tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl)-carbamate de tert-butyle (15)

Dans un tricol de 500 ml_ contenant 1 ,35 g de 14 (3,3 mmol), 50 ml_ de CH ₂ CI ₂ et 0,325 g de TEA (3,3 mmol), on introduit, à 0 ⁰ C, une solution d'EDCI (0,624, 3,3 mmol, chlorhydrate de 1 -(3-diméthylaminopropyl)-3- éthylcarbodiimide) et 1-hydroxybenzotriazole (0,44g, 3,3 mmol) dans 200 mL de CH ₂ CI ₂ . On laisse le milieu réactionnel revenir à TA, agite pendant 24 h.

On lave le milieu avec 2 fois 200 ml_ d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée et évaporée au sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (70 g) avec éluant CH ₂ CI _2Z MeOH (gradient : MeOH 0 à

5%). On obtient 0,44 g de produit attendu 15 (meringue beige).

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,34 (s, 9H) ; 3,24 (t, J = 11 ,5 Hz,

1 H) ; 3,58 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 4,12 (m, 1 H) ; 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,43 (s large, 1 H) ; 7,84 (s large, 1 H) ; 10,3 (s, 1 H) .

Etape 4: Préparation de chlorhydrate de (3R)-3-amino-9-chloro-7- trifluorométhyl-

Dans un ballon de 25 mL contenant 582 mg de 15 (1 ,47 mmol), on ajoute 11 mL d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite pendant 4 h à TA sous argon. Un précipité blanc se forme, qui est essoré, lavé avec 3 mL de dioxane puis 5 mL d'éther isopropylique. On obtient ainsi 450 mg d'aminé 16 sous forme de chlorhydrate. RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,39 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,79 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 4,18 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 7,43 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 7,91 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 8,57 (s large, 3H) ; 10,9 (s, 1 H).

Etape 5 : Préparation du N-((3R)-9-chloro-4-oxo-7-trifluorométhyl-2,3,4,5- tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl)-(6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy -2- méthoxy-8,8-diméthyl-non-6-énamide (Ex5)

On introduit successivement dans un ballon de 25 ml_, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 210 mg de 5 (0,43 mmol), 287 mg de 16 (0,86 mmol), 179 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (1 ,1 mmol) dans 2,5 ml_ de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24 h. On ajoute 10 ml_ d'acétate d'éthyle au milieu réactionnel. On lave successivement avec 2 fois 10 mL d'une solution de HCI (1 N). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (20g, éluant CH ₂ CVMeOH : en gradient MeOH 0 à 10%). On recueille 176 mg de produit attendu Ex5. ES : m/z = 539 (M-H)-.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,95 (s, 9H) ; 3,19 (s, 3H) ; de 3,27 à 3,38 (m masqué, 2H) ; 3,49 (m, 1 H) ; 3,58 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,67 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,93 (m, 1 H) ; 4,27 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 4,31 (d, J = 5,5 Hz, 1 H) ; 4,45 (m, 1 H) ; 4,55 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 5,28 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,62 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,42 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 7,86 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 8,35 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 10,45 (s, 1 H).

Ex6: N-((3R)-9-bromo-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl)- (6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl -non-6-énamide

Etape 1 : Préparation de l'acide (3R)-(2-bromo-6-nitro-phenylsulfanyl)-2-tert- butoxycarbonylamino-propionique (18)

Dans un tricol contenant 3,02 g de L-Boc-Cys-OH (13,6 mmol), 24 mL d'eau et 3,31 g de NaHCO ₃ (39,4 mmol), on introduit goutte à goutte une solution de 17 (3,0 g, 13,6 mmol) dans 28,5 mL d'éthanol. On porte le milieu au reflux pendant 2 h, puis évapore l'éthanol. On lave ensuite la phase aqueuse avec 50 mL d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on rajoute 25 mL d'AcOEt et amène la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N). Après agitation et décantation la phase aqueuse est extraite de nouveau avec 50 mL

d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées et enfin évaporées à sec. On obtient 5,92 g de produit attendu 18 qui est utilisé directement pour le stade suite.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,36 (s, 9H) ; 3,12 (dd, J = 9,5 et 13,0 Hz, 1 H) ; 3,32 (dd, J = 4,5 et 13,0 Hz, 1 H) ; 3,93 (m, 1 H) ; 7,09 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,55 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,90 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,05 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 12,7 (m étalé, 1 H).

Etape 2: Préparation de l'acide (3R)-3-(2-amino-6-bromo-phenylsulfanyl)-2- tert-butoxycarbonylamino-propionique (19)

Dans un autoclave contenant 5,92 g de 18 (14,1 mmol), 882 mg de Pd/C (10%) et 100 ml_ de MeOH, on hydrogène sous 5 bars pendant 5 h à 20 ⁰ C. Après filtration du catalyseur sur célite. On évapore le solvant et obtient 5,1 g de produit attendu 19 qui est utilisé directement pour l'étape suivante.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,37 (s, 9H) ; 2,92 (dd, J = 9,5 et 13,0 Hz, 1 H) ; 3,02 (dd, J = 4,5 et 13,0 Hz, 1 H) ; 3,95 (m, 1 H) ; 6,72 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,83 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,96 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,22 (m masqué, 1 H) ; 12,75 (m étalé, 1 H).

Etape 3: Préparation du ((3R)-9-bromo-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl)-carbamate de tert-butyle (20)

19 20

Dans un tricol de 500 ml_ contenant 5,02 g de 19 (12,8 mmol), 150 ml_ de CH ₂ CI ₂ et 1 ,30 g de TEA (12,8 mmol), on introduit, à O ⁰ C, une solution d'EDCI (2,46, 12,8 mmol, chlorhydrate de 1 -(3-diméthylaminopropyl)-3- éthylcarbodiimide) et 1-hydroxybenzotriazole (1 ,73 g, 12,8 mmol) dans 65 ml_ de CH ₂ CI ₂ . On laisse revenir à TA le milieu réactionnel et poursuit l'agitation pendant 24 h. On lave le milieu avec 2 fois 500 ml_ d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (300 g) avec éluant CH ₂ CI ₂ /MeOH (en gradient : MeOH 0 à 5%). On obtient 2,91 g de produit attendu 20 (meringue beige).

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-Cl ₆ ), δ(ppm): 1 ,33 (s, 9H) ; 3,13 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,52 (dd, J = 7,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,04 (m, 1 H) ; 7,17 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,28 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,34 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,59 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 10,15 (s, 1 H).

Etape 4: Préparation du chlorhydrate de (3R)-3-amino-9-bromo-2,3-dihydro- 5H-1 ,5-benzothiazépin-4-one (21)

Dans un ballon de 25 ml_ contenant 500 mg de 20 (1 ,34 mmol), on ajoute 10 mL d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite durant 4 h à TA sous argon. Un précipité blanc se forme, qui est essoré, lavé avec 3 mL de dioxane, puis 5 mL d'éther isopropylique. On obtient ainsi 386 mg d'aminé 21 (solide beige) sous forme de chlorhydrate. RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm):: 3,29 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,78 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,96 (m, 1 H) ; 7,19 (dd, J = 1 ,5 et 8,0 Hz, 1 H) ; 7,38 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,64 (dd, J = 1 ,5 et 8,0 Hz, 1 H) ; 8,53 (s large, 3H) ; 10,75 (s, 1 H).

Etape 5: Préparation du N-((3R)-9-bromo-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl)-(6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2- méthoxy-8,8- diméthyl-non-6-énamide (Ex6)

On introduit successivement dans un ballon de 25 mL, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 80 mg de 5 (327 μmol), 101 mg de 21 (327 μmol), 163 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,98 mmol) dans 2,0 mL de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24 h. On ajoute 5 mL d'acétate d'éthyle au milieu réactionnel. On lave successivement avec 5 mL d'une solution de HCI (1 N), 5 mL d'une solution saturé de NaHCO ₃ , et 5 mL d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (5 g,

éluant CH ₂ CI ₂ /Me0H en gradient : MeOH 1 à 10%). On recueille 95 mg de produit attendu Ex6.

ES : m/z = 515 (M-H) ^" .

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,96 (s, 9H) ; de 3,17 à 3,32 (m partiellement masqué, 2H) ; 3,20 (s, 3H) ; 3,49 (m, 1 H) ; 3,53 (dd partiellement masqué, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,68 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,93

(m, 1 H) ; 4,30 (m, 2H) ; 4,38 (m, 1 H) ; 4,57 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 5,29 (dd, J =

7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,62 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,18 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ;

7,35 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,61 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,29 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 10,3 (s, 1 H).

Ex7: N-((3R)-8-chloro-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl)-(6E)- (2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl-non- 6-énamide

Etape 1 : Préparation de l'acide (3R)-3-(3-chloro-6-nitro-phenylsulfanyl)-2-tert- butoxycarbonylamino-propionique (23)

Dans un tricol contenant 1 ,26 g de L-Boc-Cys-OH (5,70 mmol), 10 ml_ d'eau et 1 ,38 g de NaHCO ₃ (16,5 mmol), on introduit goutte à goutte une solution de 22 (1 ,0 g, 5,7 mmol) dans 12 mL d'éthanol. On porte le milieu au reflux pendant 6 h. On évapore l'éthanol. On lave ensuite la phase aqueuse avec 30 mL d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on acidifie la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N) puis on extrait avec 2 fois 30 ml de CH ₂ CI ₂ . Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées puis évaporées à sec. On obtient 2,1 g de produit attendu 23 (meringue jaune) qui est utilisé pour le stade suivant.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,35 (s, 9H) ; 3,24 (dd, J = 10,0 et 13,5 Hz, 1 H) ; 3,59 (dd, J = 4,0 et 13,5 Hz, 1 H) ; 4,13 (m, 1 H) ; 7,29 (d large, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,48 (dd, J = 2,0 et 9,0 Hz, 1 H) ; 7,72 (d, J = 2,0 Hz ₁ 1 H) ; 8,20 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 13,0 (m étalé, 1 H).

Etape 2: Préparation de l'acide (3R)-3-(2-amino-4-chloro-phenylsulfanyl)-2- tert-butoxycarbonylamino-propionique (24)

Dans un tricol contenant 2,1 g de 23 (5,55 mmol), 0,59g de chlorure d'ammonium et 70 ml_ de MeOH, on ajoute 7,3 g de Zinc (0,11 mol). On agite le milieu réactionnel à TA pendant 2 h et puis on chauffe à 75°C pendant 2h. On filtre sur célite, lave avec 20 ml de MeOH bouillant. On évapore à sec, le résidu brut est repris dans 50 ml_ d'eau puis extrait avec 2 fois 50 ml_ de CH ₂ Cb. Les phases organiques réunies sont séchées sur MgSO4, filtrées et évaporées à sec pour donner 1 ,62 g de produit attendu 24 (meringue crème) qui est utilisé pour le stade suivant. RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,36 (s, 9H) ; 2,93 (dd, J = 8,5 et 13,0 Hz, 1 H) ; 3,12 (dd, J = 4,0 et 13,0 Hz, 1 H) ; 3,93 (m, 1 H) ; 5,49 (s large, 2H) ; 6,59 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,70 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,04 (dd, J = 2,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,26 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) .

Etape 3: Préparation du (3R)-8-chloro-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl)-carbamate de tert-butyle (25)

24 25

Dans un ballon de 100 ml_ contenant 1 ,62 g de 24 (4,67 mmol) et 30 ml_ de DMF, on ajoute 2,07 g d'hexafluorure de benzotriazol-1 - yloxytris(diméthylamino)-phosphonium (4,67 mmol) et 1 ,96 g de NaHCO ₃ . Le milieu réactionnel est agité pendant 24 h à TA. On ajoute 70 mL d'AcOEt, lave en suite avec 50 mL de HCI (1 N), 50 mL d'une solution saturée en NaHCO ₃ et 50 mL d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée et évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (40 g) avec éluant Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 12 à 50 %). On obtient 1 ,14 g de produit attendu 25 (meringue jaune pâle). RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,33 (s, 9H) ; 3,10 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,54 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 4,08 (m, 1 H) ; 7,16 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,27 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,51 (dd, J = 2,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,64 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 10,1 (s, 1 H).

Etape 4: Préparation du chlorhydrate de (3R)-3-amino-8-chloro-2,3-dihydro- 5H-1 ,5-benzothiazépin-4-one (26)

Dans un ballon de 25 ml_ contenant 500 mg de 25 (1 ,52 mmol), on ajoute 10 ml_ d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite pendant 4 h à TA sous argon. Un précipité blanc se forme, qui est essoré, lavé avec 5 ml_ de dioxane puis 5 ml_ d'éther isopropylique, on obtient après séchage sous vide 510 mg d'aminé 26 ( sous forme de chlorhydrate). RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,26 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,81 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,97 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 7,20 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,55 (dd, J = 2,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,70 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 8,55 (s large, 3H) ; 10,65 (s, 1 H).

Etape 5: Préparation du N-((3R)-8-chloro-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl)-(6E)-(2R,3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-2- méthoxy-8,8- diméthyl-non-6-énamide (Ex7)

On introduit successivement dans un ballon de 25 mL, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 87 mg de 5 (352 μmol), 187 mg de 26 (704 μmol), 146 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,88 mmol) dans 2,0 mL de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24 h. On ajoute 5 mL d'acétate d'éthyle au milieu réactionnel. On lave successivement avec 5 mL d'une solution de HCI (1 N), 5 mL d'une solution aqueuse saturée de NaHCO ₃ et 5 mL d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (25 g, éluant CH ₂ CI ₂ /MeOH : en gradient MeOH : 1 à 10%). On recueille 70 mg de produit attendu Ex7.

ES : m/z = 495 MNa ⁺ ; m/z = 473 M H ⁺ .

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,96 (s, 9H) ; 3,18 (t partiellement masqué, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,21 (s, 3H) ; de 3,25 à 3,34 (m masqué, 1 H) ; 3,49 (m, 1 H) ; 3,56 (dd, J = 7,0 et 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,67 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,91 (m, 1 H) ; 4,29 (m large, 2H) ; 4,41 (m, 1 H) ; 4,53 (m large, 1 H) ; 5,28 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,62 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,17 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,52 (dd, J = 2,0 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,67 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 8,24 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 10,2 (s, 1 H).

Ex8: (6E)-(2R,3R,4S,5R)-8-éthyl-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-N-(( 3R)-5- méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5-bθnzothiazépin-3-yl)-déc-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (4R,4aS,7R,7aR)-7-méthoxy-2,2-diméthyl-4-vinyl- tetrahydro-furo[3,2-d

Dans un ballon de 4000 mL, équipé d'une agitation mécanique, on charge sous azote 178,2 g de PPh ₃ (0,679 mol), 84,1 g d'imidazole (1 ,235 mol), et 2430 mL de THF anhydre, On additionne avec précaution 156,8 g d'Iode bisublimé (0,618 mol) en maintenant la température du mélange réactionnel à 30 ⁰ C. On porte ce milieu au reflux (66°C) durant 1 h, puis on ajoute progressivement 81 g de 27 (0,309 mol) (qui peut être préparé selon les modes opératoires décrits dans Org. Process Res. Dev. 2003, 7(6), 856-865) à 66°C +/- 2°C. Le milieu homogène ainsi obtenu est chauffé au reflux pendant 3 h. On laisse revenir à 20 ⁰ C +/- 5°C, puis on coule 1000 mL d'une solution de NaHCO ₃ à 10% (effervescence, athermique) (pH 8,0-8,5). Ensuite on additionne 185,5 g de Na ₂ SaO ₃ jusqu'à la décoloration quasi totale (apparition d'un précipité minéral). Après agitation à 20 ⁰ C +/- 5°C pendant 30 minutes, on filtre et rince avec du THF le solide. Le filtrat THF/H ₂ O est concentré partiellement à l'évaporateur rotatif à une température inférieure à 35°C. Le concentrât aqueux est saturé avec NaCI et extrait avec 1500ml de CH ₂ CI ₂ . La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée et évaporée à sec. Le résidu est repris dans 2000 mL d'un mélange H ₂ O/Acétone (75/25), les insolubles sont filtrés, et rincés avec le mélange H ₂ O/Acétone (75/25). Les filtrats sont concentrés à l'évaporateur rotatif à 50 ⁰ C et 20 mbars, et filtrés de nouveau sur un verre fritte (porosité N°4). La phase aqueuse est saturée avec NaCI, est extraite 3 fois avec CH ₂ CI ₂ (1000 mL, 500 mL, et 250 mL). Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées et évaporées à sec pour donner 60 g de produit brut, qui est dissout dans 250 mL de CH ₂ CI ₂ . On ajoute ensuite dans la solution 30 g de silice. Après agitation pendant 15 min, on filtre la silice, rince 2 fois avec de CH ₂ CI ₂ (250 mL et 100 mL). Le filtrat est concentré à sec et séché sous 1 mbar à 20 ⁰ C pour donner 54,8 g de produit attendu 28 (solide blanc)

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-Cl ₆ ), δ(ppm): 5.85 (m, 1 H) ; 5.35 (d, 1 H) ; 5.25 (d, 1 H) ; 4.80 (m, 1 H) ; 4.69 (m, 1 H) ; 4.43 (d, 1 H) ; 4.22 (m, 1 H) ; 3.40 (s, 3 H) ; 1.49 (s, 3 H) ; 1.30 (s, 3 H).

Etape 2: Préparation du (3R,4R,5S)-4-hydroxy-5-((1 R)-hydroxy-allyl)-3- méthoxy-dihydro-fu

Dans un ballon de 100 ml_ contenant 1 ,0 g de 28 (4,38 mmol), 10 mL d'eau et 14 mL de THF, on ajoute à 0 ⁰ C goutte à goutte 10 mL de TFA. On laisse le milieu revenir à TA et agite pendant 1 nuit. On concentre ensuite le milieu à pression réduite à TA et ajoute 50 mL d'eau, congèle et lyophilise. Le lyophilisât est empâté dans de l'heptane en présence d'un minimum de méthanol, après évaporation des solvants, on obtient 778 mg de 29 attendu (solide blanc). MS : m/z = 211 [M+Na] ⁺ , 189 [M+H] ⁺

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,42 (s, 3H) ; 3,98 (dd, J = 2,5 et 9,0 Hz, 1 H) ; de 4,25 à 4,34 (m, 3H) ; 5,22 (dm, J = 10,5 Hz, 1 H) ; 5,29 (d, J = 5,0 Hz, 1 H) ; 5,44 (d partiellement masqué, J = 16,5 Hz, 1 H); 5,46 (m, 1 H) ; 5,97 (m, 1 H).

Etape 3: Préparation du ((3R,4R,5S)-5-((2E)-(1 R)-4-éthyl-1-hydroxy-héx-2- ényl)-4-hydroxy-3-méthoxy-dihydro-furan-2-one (30)

Dans un vial de 5 mL, on ajoute 100 mg de 29 (0,53 mmol), 0,52g de 3-éthyl- 1 -pentène (5,3 mmol), 4 mL de CH ₂ CI ₂ et 90 mg de catalyseur de Grubbs 2° génération (C46H65CI2N2PRu, PM 848,98, 0,11 mmol). La solution rouge brique capsulée est chauffée pendant 10 minutes à 60 ⁰ C au micro-ondes

(Smithsynthesizer, 300 Watt). On évapore le solvant, le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (25 g) en éluant avec un mélange Heptane/AcOEt (55/45). On obtient 54 mg de produit attendu 30

(solide marron).

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,81 (t, J = 7,5 Hz, 6 H) ; 1 ,23 (m, 4H) ; de 1 ,32 à 1 ,49 (m, 2H) ; 1 ,78 (m, 1 H) ; 3,42 (s, 3H) ; 3,97 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 4,20 à 4,31 (m, 3H) ; 5,11 à 5,75 (m, 4 H).

Etape 4: Préparation du (6E)-(2R,3R ₎ 4S ₎ 5R)-8-éthyl-3 ₎ 4,5-trihydroxy-2- méthoxy-N-((3R)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl)- déc-6-énamide (Ex8)

On introduit successivement dans un ballon de 30 ml_, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 50 mg de 30 (0,19 mmol), 71 mg de H (0,29 mmol), 64 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,39 mmol) dans 2,0 ml_ de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 96 h. On ajoute 4 ml_ de CH ₂ Ck au milieu réactionnel. On lave successivement avec 3 ml_ d'une solution de HCI (0,5N), 3 mL d'eau. La phase aqueuse est réextraite avec 2 fois 4 ml de CH ₂ CI ₂ . Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de magnésium anhydre, filtrées puis évaporées à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (12 g, éluant, CH ₂ CI ₂ /isopropanol : 95/5). On recueille 63 mg de produit attendu Ex8. ES : m/z = 465 (M-H)-.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm) : 0,75 à 0,82 (m, 6H) ; 1 ,10 à 1 ,37 (m, 4H) ; 1 ,70 (m, 1 H) ; 3,06 (t, J = 11 ,5 Hz, 1 H) ; 3,20 (s, 3H) ; 3,25 à 3,3 (m, 4H) ; 3, 44 (dd, J = 7,0 et 11 , 5 Hz, 1 H) ; 3,50 (m, 1 H) ; 3,65 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,92 (m, 1 H) ; 4,30 (ml, 2H) ; 4,41 (m, 1 H) ; 4,51 (m, 1 H) ; 5,26 à 5,37 (m, 2H) ; 7,32 (m, 1 H) ; 7,57 (m, 1 H) ; 7,66 (d, J = 7,5Hz, 1 H) ; 8,20 (dl, J = 8,0 Hz, 1 H).

Ex9: (2f?,3fî,4S ₎ 5/?,6E)-7-cyclopentyl-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-λ/-[(3fî )-5- méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]hept-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (3/?,4R,5S)-5-[(1 fî,2E)-3-cyclopentyl-1-hydroxyprop- 2-én-1 -yl]-4-hydroxy-3-méthoxydihydrofuran-2(3H)-one (31)

29 31

Dans un vial de 5 ml_, introduire 100 mg (0,53 mmol) de 29, 4 ml_ de CH ₂ CI ₂ , 726 μl_ (5,3 mmol) de vinylcyclopentane puis 90,2 mg (106 μmol) de catalyseur de Grubbs de seconde génération. Chauffer la solution 10 min à 60 ⁰ C au micro-ondes. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 12-M (éluant : Hept/AcOEt 40/60). Le produit 31 (76,3 mg, Rf = 0.35 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide marron. MS : m/z = 279 [M+Na] ⁺ , 257 [M+H] ⁺

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 5.82 (dd, 1 H, J=8 Hz et 16 Hz,), 5.50 (dd, 1 H, J=6 Hz et 16 Hz), 5.39 (d, 1 H, J=4.5 Hz), 5.15 (d, 1 H, J=6 Hz), 4.27 (m, 3H), 3.95 (dd, 1 H, J=3 Hz et 8 Hz), 3.41 (s, 3H), 2.43 (m, 1 H), 1.73 (m, 2H), 1.56 (m, 4H), 1.26 (m, 2H).

Etape 2: Préparation du (2f?,3/?,4S,5fî,6E)-7-cyclopentyl-3,4,5-trihydroxy-2- méthoxy-λ/-[(3/?)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3- yl]hept-6-énamide (Ex9)

Dans un monocol de 30 mL, introduire 60 mg (234 μmol) de 31, 68,7 mg (281 μmol) de H, 58,3 mg (351 μmol) de 2-éthylhexanoate de sodium dans 2,5 mL de THF. La solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 1 semaine. La solution est ensuite reprise avec 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis lavée avec 4 mL d'HCI 0,5 N puis 4 mL d'eau. La phase aqueuse est ensuite extraite par 2 ^* 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium puis filtrées. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 12-M (éluant : CH ₂ CI ₂ /lsopropanol 97/3). Le produit Ex9 (91 ,7 mg, Rf = 0.25 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc.

MS : m/z = 929 [2M+H] ⁺ , 465 [M+H] ⁺ , 447 [(M-H ₂ O)+H] ⁺ , 429 [(M-2H ₂ O)+H] ⁺ RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 8.24 (d, 1 H, J=8 Hz), 7.67 (d, 1 H, J=8Hz), 7.57 (m, 2H), 7.33 (m, 1 H), 5.57 (dd, 1 H, J=6.5 Hz et 15 Hz), 5.34 (dd, 1 H, J=6.5 Hz et 15 Hz), 4.53 (d, 1 H, J=4.5 Hz), 4.41 (m, 1 H), 4.33 (d, 1 H,

J=4.5 Hz), 4.30 (d, 1 H, J=5 Hz), 3.91 (m, 1 H), 3.66 (d, 1 H ₁ J=8 Hz), 3.47 (m, 1 H), 3.41 (m, 1 H), 3.31 (m, 1 H), 3.29 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.07 (t, 1 H, J=12 Hz), 2.38 (m, 1 H), 1.70 (m, 2H), 1.54 (m, 4H), 1.22 (m, 2H).

Ex10: (2fî,3fî ₎ 4S,5R,6£)-3 _I 4,5-trihydroxy-2-méthoxy-λ/-[(3fî)-5-méthyl-4-oxo- 2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]undéc-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (3fî,4fî,5S)-4-hydroxy-5-[(1 fî,2E)-1 -hydroxyhept-2- én-1 -yl]-3-méthoxydihydrofuran-2(3/-/)-one (32)

29 32

Dans un vial de 5 mL, introduire 100 mg (0,53 mmol) de 29, 4 ml_ de CH ₂ CI ₂ , 665 μl_ (5,3 mmol) d'hexène-1 puis 90,2 mg (106 μmol) de catalyseur de Grubbs de seconde génération. Chauffer la solution 10 min à 60 ⁰ C au microondes. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 12-S (éluant : Hept/AcOEt 40/60). Le produit 32 (57,3 mg, Rf = 0.29 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide beige.

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 5.81 (m, 1 H), 5.51 (dd, 1 H, J=5 Hz et 15.5 Hz), 5.38 (d, 1 H, J=4.2 Hz), 5.14 (d, 1 H, J=4.9 Hz), 4.26 (m, 3H), 3.96 (dd, 1 H, J=2.2 Hz et 8.8 Hz), 3.41 (s, 3H), 2.03 (q, 2H, J=6 Hz), 1.32 (m, 4H), 0.87 (t, 3H, J=8 Hz)

Etape 2: Préparation du (2fî,3/ ^: ?,4S,5/ ^: ? _I 6£)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-λ/- [(3fî)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]undéc-6- énamide (Ex10)

Dans un monocol de 20 mL, introduire 60 mg (246 μmol) de 32, 72,1 mg (294 μmol) de H, 61 ,2 mg (368 μmol) de 2-éthylhexanoate de sodium dans 2,5 mL de THF. La solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 48 heures. La solution est ensuite reprise avec 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis

lavée avec 4 ml_ d'HCI 0,5 N puis 3 ml_ d'eau. La phase aqueuse est ensuite extraite par 2 ^* 5 ml_ de CH ₂ CI ₂ puis les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium puis filtrées. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice biotage 12-M (éluant : CH ₂ CI ₂ /lsopropanol 98/2). Le produit Ex10 (30,2 mg, Rf = 0.19 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc.

MS : m/z (ES ⁺ ) = 926 [2M ₊ Na] ⁺ , 474 [M ₊ Na] ⁺ , 453 [M ₊ H] ⁺ , 435 [(M-H ₂ O) ₊ H] ⁺ RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 8.24 (d, 1 H, J=8 Hz), 7.66 (d, 1 H, J=8Hz), 7.56 (m, 2H), 7.33 (m, 1 H), 5.55 (m, 1 H), 5.36 (dd, 1 H ₁ J=7.5 Hz et 16 Hz), 4.52 (d, 1 H, J=4 Hz), 4.40 (m, 1 H), 4.31 (d, 1 H, J=4.5 Hz), 4.28 (d, 1 H, J=5 Hz), 3.91 (m, 1 H), 3.65 (d, 1 H, J=8 Hz), 3.48 (m, 1 H), 3.43 (m, 1 H), 3.34 (m, 1 H), 3.32 (s, 3H), 3.19 (s, 3H), 3.06 (t, 1 H, J=12 Hz), 1.95 (m, 2H), 1.26 (m, 4H), 0.86 (t, 3H, J=7.5 Hz)

Ex11 : (2fî,3R,4S,5fî,6£)-7-cyclohexyl-3,4,5-trihydroxy-2-métho xy-λ/-[(3fî)-5- méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]hept-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (3fî,4fî,5S)-5-[(1 fî,2£)-3-cyclohexyl-1 -hydroxyprop- 2-én-1-yl]-4-hydroxy-3-méthoxydihydrofuran-2(3H)-one (33)

Dans un vial de 5 mL, introduire 100 mg (0,53 mmol) de 29, 4 mL de CH ₂ CI ₂ , 728 μL (5,3 mmol) de vinylcyclohexane puis 90,2 mg (106 μmol) de catalyseur de Grubbs de seconde génération. Chauffer la solution 10 min à 60 ⁰ C aux micro-ondes. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 25-M (éluant : Hept/AcOEt 45/55). Le produit 33 (130,4 mg, Rf = 0.33 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide beige. MS : m/z (ES ⁺ ) = 293 [M ₊ Na] ⁺ (ES ^" ) = 315 [(M ₊ HCOOH)-H]-, 269 [M-H] ^"

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 5.8 (dd, 1 H, J=6 Hz et 16 Hz), 5.48 (dd, 1 H ₁ J=4.5 Hz et 16 Hz), 5.16 (br s, 2H), 4.29 (m, 2H), 4.25 (d, 1 H, J=4.5

Hz), 3.95 (dd, 1 H, J=3 Hz et 9 Hz), 3.42 (s, 3H), 1.96 (m, 1 H), 1.66 (m, 4H), 1.15 (m, 6H)

Etape 2: Préparation du (2fî,3fî,4S,5fî,6E)-7-cyclohexyl-3,4,5-trihydroxy-2- méthoxy-λ/-[(3/^-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3- yl]hept-6-énamide (Ex11)

Dans un monocol de 20 ml_, introduire 120 mg (444 μmol) de 33, 130,4 mg (533 μmol) de H, 177 mg (1 ,065 mmol) de 2-éthylhexanoate de sodium dans 6 ml_ de THF. La solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 1 semaine. La solution est ensuite reprise avec 6 mL de CH ₂ CI ₂ puis lavée avec 2 ^* 5 mL d'HCI 0,5 N puis 5 mL d'eau. La phase aqueuse est ensuite extraite par 2 ^* 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium puis filtrées. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 12-S (éluant : Hept/AcOEt 15/85). Le produit Ex11 (91 ,1 mg, Rf = 0.24 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc.

MS : m/z (ES ⁺ ) = 979 [2M+Na] ⁺ , 501 [M+Na] ⁺ , 479 [M+H] ⁺ ,461 [(M-H ₂ O)+H] ⁺ RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 8.28 (d, 1 H, J=8 Hz), 7.70 (d, 1 H, J=8Hz), 7.60 (m, 2H), 7.37 (m, 1 H), 5.57 (dd, 1 H, J=6.5 Hz et 15 Hz), 5.35 (dd, 1 H, J=6.5 Hz et 15 Hz), 4.58 (br s, 1 H), 4.44 (m, 1 H), 4.35 (br s, 2H), 3.93 (t, 1 H, J=6.5 Hz), 3.69 (d, 1 H, J=8 Hz), 3.50 (m, 1 H), 3.44 (m, 1 H), 3.40 (m, 1 H), 3.36 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.10 (t, 1 H, J=12 Hz), 1.92 (m, 1 H), 1.65 (m, 4H), 1.15 (m, 6H)

Ex12: (2fî,3fî,4S,5fî,6£)-7-(2-fluorophényl)-3,4,5-trihydroxy -2-méthoxy-λ/-

[(3fî)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]hept-6- énamide

Etape 1 : Préparation du (3fî,4fî,5S)-5-[(1 fî,2E)-3-(2-fluorophényl)-1- hydroxyprop-2-én-1-yl]-4-hydroxy-3-méthoxydihydrofuran-2(3 /-/)-one (34)

Dans un vial de 5 ml_, introduire 100 mg (0,53 mmol) de 29, 4 ml_ de CH2CI2, 633 μl_ (5,3 mmol) de 2-fluorostyrène puis 90,2 mg (106 μmol) de catalyseur de Grubbs de seconde génération. Chauffer la solution 10 min à 60 ⁰ C au micro-ondes. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice biotage 25-M (éluant : Hept/AcOEt 40/60). Le produit 34 (64,4 mg, Rf = 0.24 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc. MS : m/z (ES ⁺ ) = 265 [(M-H ₂ O)+H] ⁺

(ES ^" ) = 327 [(M+HCOOH)-H]\ 281 [M-H] ^"

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 7.61 (t, 1 H, J=9 Hz), 7.31 (m, 1 H), 7.19 (t, 2H, J=9 Hz), 6.89 (d, 1 H ₁ J=16.1 Hz), 6.50 (dd, 1 H, J=4.9 Hz et 16.1 Hz), 5.55 (d, 2H, J=5.5 Hz), 4.49 (m, 1 H), 4.42 (m, 1 H), 4.28 (d, 1 H, J=4.3 Hz), 4.09 (dd, 1 H ₁ J=2.8 Hz et 8.3 Hz), 3.43 (s, 3H)

Etape 2: Préparation du (2fî,3fî,4S,5fî,6£)-7-(2-fluorophényl)-3,4,5- trihydroxy-2-méthoxy-λ/-[(3fî)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tà ©trahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl]hept-6-énamide (Ex12)

Dans un monocol de 30 mL, introduire 60 mg (212 μmol) de 34, 62,4 mg (255 μmol) de H, 53 mg (319 μmol) de 2-éthylhexanoate de sodium dans 2,5 mL de THF. La solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 6 jours. La solution est ensuite reprise avec 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis lavée avec 4 mL d'HCI 0,5 N puis 4 mL d'eau. La phase aqueuse est ensuite extraite par 2 ^* 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium puis filtrées. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 12-M (éluant : CH ₂ CI ₂ /lso-propanol 98/2). Le produit Ex12 (45,7 mg, Rf = 0.37 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc.

MS : m/z (ES ⁺ ) = 491 [M+H] ⁺ , 473 [(M-H ₂ O)+H] ⁺ (ES ^" ) = 535 [(M+HCOOH)-H]\ 489 [M-H] ^"

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-Cl ₆ ) : δ (ppm) = 8.27 (d, 1 H, J=8 Hz), 7.65 (d, 1 H, J=8Hz), 7.54 (m, 3H), 7.32 (m, 1 H), 7.26 (m, 1 H), 7.16 (m, 2H), 6.65 (d, 1 H, J=16 H), 6.38 (dd, 1 H ₁ J=6 Hz et 16 Hz), 4.95 (d, 1 H, J=4 Hz), 4.55 (d, 1 H, J=6 Hz), 4.47 (d, 1 H, J=6.5 Hz), 4.41 (m, 1 H), 4.18 (m, 1 H), 3.70 (d, 1 H, J=8 Hz), 3.53 (m, 1 H), 3.44 (m, 1 H), 3.42 (m, 1 H), 3.28 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.07 (t, 1 H, J=12 Hz)

Ex13: (2fî,3R,4S,5fî,6E)-7-(4-fluorophényl)-3,4,5-trihydroxy-2- méthoxy-λ/-

[(3fQ-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]hept-6- énamide

Etape 1 : Préparation du (3fî,4fî,5S)-5-[(1 fî,2E)-3-(4-fluorophényl)-1- hydroxyprop-2-én-1-yl]-4-hydroxy-3-méthoxydihydrofuran-2(3 /-/)-one (35)

Dans un vial de 5 ml_, introduire 100 mg (0,53 mmol) de 29, 4 ml_ de CH ₂ Cb, 636 μl_ (5,3 mmol) de 4-fluorostyrène puis 90,2 mg (106 μmol) de catalyseur de Grubbs de seconde génération. Chauffer la solution 10 min à 60 ⁰ C au micro-ondes. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 25-M (éluant : CH ₂ CI ₂ / Iso- propanol 9/1 ). Le produit 35 (99,2 mg, Rf = 0.15 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc. MS : m/z (%) = 282 [MH ⁺ ], 152 (100)

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 7.5 (dd, 2H ₁ J=6 Hz et 9 Hz,), 7.17 (t, 2H, J=9 Hz), 6.76 (d, 1 H ₁ J=16 Hz), 6.33 (dd, 1 H, J=6 Hz et 15 Hz), 5.52 (br s, 1 H), 5.46 (d, 1 H ₁ J=5.5 Hz), 4.46 (m, 1 H), 4.42 (m, 1 H), 4.28 (d, 1 H ₁ J=4.5 Hz), 4.08 (dd, 1 H, J=3 Hz et 9 Hz), 3.42 (s, 3H)

Etape 2: Préparation du (2fî,3fî ₎ 4S ₎ 5fî,6£)-7-(4-fluorophényl)-3,4,5- trihydroxy-2-méthoxy-λ/-[(3fî)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tà ©trahydro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl]hept-6-énamide (Ex13)

Dans un monocol de 30 ml_, introduire 90 mg (319 μmol) de 35, 93,6 mg (383 μmol) de H, 127,2 mg (765 μmol) de 2-éthylhexanoate de sodium dans 4 mL de THF. La solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 28 heures. La solution est ensuite reprise avec 6 mL de CH ₂ Cb puis lavée avec 5 mL d'HCI 0,5 N puis 5 mL d'eau. La phase aqueuse est ensuite extraite par 2 ^* 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium puis filtrées. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 12-M (éluant : Hept/AcOEt 15/85). Le produit Ex13 (55,5 mg, Rf = 0.17 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc. MS : m/z (ES ⁺ ) = 513 [M+Na]\ 491 [M+H] ⁺

(ES ^" ) = 535 [(M+HCOOH)-H]-, 489 [M-H] ^"

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 8.26 (d, 1 H, J=8 Hz), 7.65 (d, 1 H, J=8Hz), 7.56 (m, 2H), 7.43 (dd, 2H, J=6 Hz et 9 Hz), 7.32 (m, 1 H), 7.13 (t, 2H, J=9 Hz), 6.52 (d, 1 H, J=16 Hz), 6.20 (dd, 1 H, J=6 Hz et 16 Hz), 4.86 (d, 1 H, J=4 Hz), 4.49 (d, 1 H, J=6 Hz), 4.44 (d, 1 H, J=6.5 Hz), 4.40 (m, 1 H), 4.15 (m, 1 H), 3.70 (d, 1 H, J=8 Hz), 3.53 (m, 1 H), 3.47 (m, 1 H), 3.45 (m, 1 H), 3.28 (s, 3H), 3.19 (s, 3H), 3.07 (t, 1 H, J=12 Hz)

Ex14: (2fî,3fî,4S ₎ 5fî,6£)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-λ/-[(3fî)-5-méthyl- 4-oxo- 2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-7-phénylhept-6-énamide

Etape 1 : Préparation du (3fî,4fî,5S)-4-hydroxy-5-[(1 F?,2E)-1 -hydroxy-3- phénylprop-2-én-1 -yl]-3-méthoxydihydrofuran-2(3/-/)-one) (36)

Dans un vial de 5 mL, introduire 100 mg (0,53 mmol) 29, 4 mL de CH ₂ CI ₂ , 615 μL (5,3 mmol) de styrène puis 90,2 mg (106 μmol) de catalyseur de

Grubbs de seconde génération. Chauffer la solution 10 min à 60 ⁰ C au microondes. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 25-M (éluant : CH ₂ CI ₂ / Iso- propanol 98/2). Le produit 36 (79,6 mg, Rf = 0.24 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide marron. MS : m/z (ES ) = 527 [2M-H] ^" , 309 [(M ₊ HCOOH)-H]-, 263 [M-H] ^" RMN ¹ H (300 MHz, DMSOd ₆ ) : δ (ppm) = 7.45 (d, 2H, J=7.5 Hz), 7.35 (t, 2H, J=7.5 Hz), 7.25 (t, 1 H, J=7.5 Hz), 6.77 (d, 1 H, J=16 Hz), 5.88 (dd, 1 H, J=5.5 Hz et 16 Hz), 5.54 (d, 1 H, J=3 Hz), 5.46 (d, 1 H, J=5 Hz), 4.48 (m, 1 H), 4.42 (m, 1 H), 4.48 (d, 1 H, J=4 Hz), 4.09 (dd, 1 H ₁ J=3 Hz et 9 Hz), 3.41 (s, 3H)

Etape 2: Préparation du (2fî,3fî,4S,5fî,6E)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-λ/- [(3fî)-5-méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-7- phénylhept-6-énamide (Ex14)

Dans un monocol de 20 mL, introduire 70 mg (265 μmol) de 36, 77,8 mg (318 μmol) de H, 106 mg (636 μmol) de 2-éthylhexanoate de sodium dans 4 mL de THF. La solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 43 heures. La solution est ensuite reprise avec 6 mL de CH ₂ Cl ₂ puis lavée avec 2 ^* 5 mL d'HCI 0,5 N puis 5 mL d'eau. La phase aqueuse est ensuite extraite par 2 ^* 5 mL de CH ₂ CI ₂ puis les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium puis filtrées. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite puis le résidu est purifié sur colonne de silice Biotage 12-S (éluant : Hept/AcOEt 15/85). Le produit Ex14 (62,4 mg, Rf = 0.3 dans les conditions d'élution utilisées) est obtenu sous forme d'un solide blanc. MS : m/z (ES ⁺ ) = 495 [M ₊ Na] ⁺ , 473 [M+H] ⁺

(ES ⁺ ) = 517 [(M ₊ HCOOH)-H]-, 471 [M-H] ^" RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ) : δ (ppm) = 8.26 (d, 1 H, J=8 Hz), 7.65 (d, 1 H, J=8Hz), 7.55 (m, 2H), 7.39 (d, 2H, J= 6.5 Hz), 7.33 (m, 2H), 7.29 (m, 1 H), 7.21 (t, 1 H), 6.53 (d, 1 H, J=16 Hz), 6.25 (dd, 1 H, J=6 Hz et 16 Hz), 5.34 (d, 1 H, J=4.5 Hz), 4.48 (d, 1 H, J=6 Hz), 4.44 (d, 1 H, J=6.5 Hz), 4.38 (m, 1 H), 4.15 (m, 1 H), 3.70 (d, 1 H, J=7.5 Hz), 3.53 (m, 1 H), 3.46 (m, 1 H), 3.42 (m, 1 H), 3.32 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.06 (t, 1 H, J=12 Hz)

Ex15: (2fî,3fl,4S,5R,6E)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthy l-λ/-[(3fî)-4- oxo-9-phényl-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]non-6-énamide

Etape 1 : Préparation du 2-fluoro-3-nitrobiphényl (37)

Dans un ballon de 5OmL, sous agitation et atmosphère d'argon, contenant 10 ml_ d'eau, 3 ml_ de dioxane et 500 mg de 17 (2,273 mmol), on introduit 277 mg d'acide phenylboronique (2,273 mmol), 46,41 mg de chlorure de 1 ,1 '- bis(diphenylphosphino)ferrocene palladium (C35H30CI4FeP2Pd, PM 816,65, 0,057 mmol) et 2,96 g de carbonate de Césium (9,09 mmol). On chauffe à 100 ⁰ C le milieu sous agitation pendant 3 h.. On ajoute ensuite 20 ml d'AcOEt et lave avec 2 fois 20 ml_ d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO4, filtrée et évaporé à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (30 g) en éluant avec Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 10 à 50%). On recueille 360 mg de produit attendu 37 (Huile Jaune). El : 217 ⁺

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): De 7,45 à 7,63 (m, 6H) ; 7,91 (dt, J = 2,0 et 9,0 Hz, 1 H) ; 8,14 (dt, J = 2,0 et 9,0 Hz, 1 H).

Etape 2: Préparation de λ/-[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]-S-(3-nitrobiphényl-2- yl)-L-cystéine (38)

Dans un tricol de 25 mL contenant 367 mg de L-Boc-Cys-OH (1 ,657 mmol), 2,5 mL d'eau et 402 mg de NaHCO ₃ (4,789 mmol), on introduit goutte à goutte une solution de 37 (360 mg, 1 ,657 mmol) dans 2,8 mL d'éthanol. On porte le milieu au reflux pendant 6 h, puis évapore l'éthanol et ajoute 5 mL d'eau distillée. On lave ensuite 2 fois la phase aqueuse avec 5 mL d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on amène la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N), et extrait 2 fois avec 5 mL d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées et enfin évaporées à

sec. On obtient 0.81 g de produit brut 38 qui est utilisé directement pour le stade suivant.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,32 (s, 9H) ; de 2,39 à 2,57 (m partiellement masqué, 2H) ; 3,57 (m, 1 H) ; 6,77 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; de 7,40 à 7,55 (m, 5H) ; 7,59 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,65 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,86 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 12,15 (m étalé, 1 H).

Etape 3: Préparation de S-(3-aminobiphényl-2-yl)-λ/-[(2,2- diméthylpropanoyl)oxy]-L-cystéine (39)

Dans un autoclave contenant 810 mg de 38 (1 ,936 mmol), 69,84 mg de Pd/C (10%) et 20 ml_ de MeOH, on hydrogène sous 5 bars pendant 10 h à 20 ⁰ C. Après filtration du catalyseur sur célite, on évapore le solvant et obtient 580 mg de produit attendu 39 qui est utilisé directement pour l'étape suivante. RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,33 (s, 9H) ; de 2,60 à 2,75 (m, 2H) ; 3,81 (m, 1 H) ; 5,60 (m très étalé, 2H) ; 6,47 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,78 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,89 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,09 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; de 7,24 à 7,41 (m, 5H) ; 12,2 (m très étalé, 1 H).

Etape 4: Préparation du (3fî)-3-{[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]amino}-9- phényl-2,3-dihydro-1 ,5-benzothiazépi

Dans un tricol de 25 ml_ contenant 580 mg de 39 (1 ,493 mmol), 7 ml_ de DMF, on introduit, à 0 ⁰ C, 0,269 ml de Cyanophosphonate de diéthyle (289,4 mg, 1 ,774 mmol), et 10 minute après, 0,201 ml de TEA (1 ,43 mmol). On agite le milieu réactionnel à 0 ⁰ C pendant 2 h. On ajoute 20 ml d'AcoEt, puis lave avec 2 fois 20 ml_ d'eau distillée. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. Le brut (600 mg d'huile jaune) est chromatographié sur une cartouche de silice (30 g) avec un éluant Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 10 à 50%). On obtient 410 mg de produit attendu 40 (solide blanc).

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,35 (s, 9H) ; 3,02 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,45 (dd, J = 7,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,20 (m, 1 H) ; de 7,12 à 7,25 (m, 3H) ; de 7,33 à 7,51 (m, 6H) ; 10,05 (s, 1 H).

Etape 4: Préparation du (3fî)-3-amino-9-phényl-2,3-dihydro-1 ,5- benzothiazépin-4(5H)-one chlorhydrate (41)

Dans un ballon de 50 ml_ contenant 410 mg de 40 (1 ,107 mmol), on ajoute 8 ml_ d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite durant 4 h à TA sous argon. Un précipité blanc se forme, qui est essoré, lavé avec 3 ml_ de dioxane, puis 5 ml_ d'éther isopropylique. On obtient ainsi 260 mg d'aminé 4J _. (solide blanc) sous forme de chlorhydrate. RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,17 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,65 (dd, J = 8,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,08 (dd, J = 8,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 7,21 (dd, J = 1 ,5 et 8,0 Hz, 1 H) ; 7,28 (dd, J = 1 ,5 et 8,0 Hz, 1 H) ; de 7,35 à 7,49 (m, 5H) ; 7,52 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 8,39 (s large, 3H) ; 10,65 (s, 1 H).

Etape 5: Préparation du (2fî,3/ ^: ? _I 4S,5/?,6E)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8 ₎ 8- diméthyl-λ/-[(3fî)-4-oxo-9-phényl-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3- yl]non-6-énamide (Ex15)

On introduit successivement dans un ballon de 25 ml_, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 100 mg de 5 (409 μmol), 151 mg de 4J _. (491 μmol), 102 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,61 mmol) dans 2,3 ml_ de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24 h. On concentre le milieu réactionnel à sec. Les résidus sont chromatographiés sur une cartouche de silice (15 g, éluant CH ₂ CI ₂ /MeOH en gradient : MeOH 1 à 10%). On recueille 145 mg de produit attendu Ex15. ES : m/z = 513 (M-H ⁺ )

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,96 (s, 9H) ; 3,10 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,22 (s, 3H) ; 3,30 (m masqué, 1 H) ; de 3,40 à 3,55 (m, 2H) ; 3,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,94 (m, 1 H) ; 4,29 (m, 2H) ; 4,54 (m, 2H) ; 5,30 (dd, J = 7,0 et

16,0 Hz, 1 H) ; 5,63 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,19 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,23 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; de 7,35 à 7,46 (m, 5H) ; 7,49 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,25 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 10,2 (s, 1 H).

Ex16: (2fî,3fî,4S,5fî,6£)-λ/-[(3fî)-9-(3-cyanophényl)-4-oxo -2 ₎ 3,4,5-tétrahydro- 1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-dim éthylnon-6- énamide

Etape 1 : Préparation du 2'-fluoro-3'-nitrobiphényl-3-carbonitrile (42)

Dans un ballon de 5OmL, sous agitation et atmosphère d'argon, contenant 10 ml_ d'eau, 3 ml_ de dioxane et 500 mg de 17 (2,273 mmol), on introduit 334 mg d'acide 3-cyano-phenylboronique (2,273 mmol), 46,41 mg de chlorure de 1 ,1 '-bis(diphenylphosphino)ferrocene palladium (C35H30CI4FeP2Pd, PM 816,65, 0,057 mmol) et 2,96 g de carbonate de Césium (9,09 mmol). On chauffe à 100 ⁰ C le milieu sous agitation pendant 3 h.. On ajoute ensuite 20 ml d'AcOEt et lave avec 2 fois 20 ml_ d'eau. La phase organique est séchée sur MgSO4, filtrée et évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (30 g) en éluant avec Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 10 à 50%). On recueille 230 mg de produit attendu 42 (solide blanc).

RMN ¹ H (500 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 7,59 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,77 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; de 7,93 à 8,04 (m, 3H) ; 8,12 (s large, 1 H) ; 8,22 (dt, J = 2,0 et 8,0 Hz ₁ I H).

Etape 2: Préparation de S-(3'-cyano-3-nitrobiphényl-2-yl)-λ/-[(2,2- diméthylpropanoyl)oxy]-L-cystéine (43)

Dans un tricol de 25 mL contenant 210 mg de L-Boc-Cys-OH (0,950 mmol), 2,5 mL d'eau et 231 mg de NaHCO ₃ (2,746 mmol), on introduit goutte à

goutte une solution de 42 (360 mg, 1 ,657 mmol) dans 3,0 ml_ d'éthanol. On porte le milieu au reflux pendant 2 h, puis évapore l'éthanol et ajoute 5 mL d'eau distillée. On lave ensuite 2 fois la phase aqueuse avec 10 mL d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on amène la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N), et extrait 2 fois avec 10 mL d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées et enfin évaporées à sec. On obtient 0.41 g de produit brut 43 qui est utilisé directement pour le stade suivant.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,33 (s, 9H) ; de 2,47 à 2,60 (m partiellement masqué, 2H) ; 3,54 (m, 1 H) ; 6,79 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; de 7,63 à 7,73 (m, 3H) ; de 7,84 à 7,95 (m, 3H) ; 7,98 (s large, 1 H) ; 12,55 (m étalé, 1 H).

Etape 3: Préparation de S-(3-amino-3'-cyanobiphényl-2-yl)-λ/-[(2,2- diméthylpropanoyl)oxy]-L-cystéine (44)

Dans un autoclave contenant 410 mg de 43 (0,925 mmol), 41 mg de Pd/C (10%) et 20 mL de MeOH, on hydrogène sous 7 bars pendant 10 h à 20 ⁰ C. Après filtration du catalyseur sur célite. On évapore le solvant et obtient 350 mg de produit attendu 44 qui est utilisé directement pour l'étape suivante. RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,32 (s, 9H) ; de 2,60 à 2,79 (m, 2H) ; 3,72 (m, 1 H) ; 5,70 (m très étalé, 2H) ; 6,48 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,70 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,80 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,11 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; de 7,52 à 7,83 (m, 4H) ; 12,5 (m très étalé, 1 H).

Etape 4: Préparation du 3-[(3F7)-3-{[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]arnino}-4-oxo- 2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-9-yl]benzonitrile (45)

Dans un tricol de 25 mL contenant 350 mg de 41 (0,846 mmol), 4,1 mL de DMF, on introduit, à 0 ⁰ C, 0,153 ml de Cyanophosphonate de diéthyle (0,164 mg, 1 ,01 mmol), et 10 minute après, 0,114 ml de TEA (0,811 mmol). On agite le milieu réactionnel à O ⁰ C pendant 2 h. On ajoute 20 ml d'AcoEt, puis lave avec 2 fois 20 mL d'eau distillée. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ ,

filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (15 g) avec un éluant CH ₂ CI ₂ /Me0H (en gradient MeOH : 0 à 3%). On obtient 139 mg de produit attendu 45 (solide jaune orangé). RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,34 (s, 9H) ; 3,02 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,54 (dd, J = 7,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,21 (m, 1 H) ; de 7,19 à 7,30 (m, 3H) ; 7,50 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,63 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,79 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,83 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,98 (s large, 1 H) ; 10,05 (s, 1 H).

Etape 4: Préparation du 3-[(3fî)-3-amino-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5- benzothiazépin-9-yl]benzonitrile chlorhydr

Dans un ballon de 25 ml_ contenant 139 mg de 45 (0,352 mmol), on ajoute 2,6 ml_ d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite durant 4 h à TA sous argon. Un précipité blanc se forme, qui est essoré, lavé avec 3 ml_ de dioxane, puis 5 ml_ d'éther isopropylique. On obtient ainsi 72 mg d'aminé 46 (solide blanc) sous forme de chlorhydrate. RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,19 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,68 (dd, J = 7,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,15 (dd, J = 7,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; 7,25 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,32 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,57 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,69 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,77 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,89 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,92 (s large, 1 H) ; 8,31 (s large, 3H) ; 10,7 (s, 1 H).

Etape 5: Préparation du (2F?,3F?,4S,5fî,6E)-λ/-[(3F?)-9-(3-cyanophényl)-4-oxo- 2,3,4 ₎ 5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8- diméthylnon-6-énamide (Ex16)

On introduit successivement dans un tube Wheatton, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 55 mg de 5 (225 μmol), 74,7 mg de 46 (225 μmol), 74 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,44 mmol) dans 1 ,3 ml_ de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 48 h. On concentre le milieu réactionnel à sec. Les résidus sont chromatographiés sur une cartouche de silice (5 g,

éluant CH ₂ CI ₂ /Me0H en gradient : MeOH 1 à 10%). On recueille 100 mg de produit attendu Ex16 (solide blanc).

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,96 (s, 9H) ; 3,12 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ;

3,22 (s, 3H) ; 3,30 (m masqué, 1 H) ; de 3,53 à 3,57 (m, 2H) ; 3,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,94 (m, 1 H) ; 4,24 (d, J = 7,0 Hz, 1 H) ; 4,29 (d large, J = 6,5 Hz, 1 H) ; 4,53

(m, 2H) ; 5,30 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,63 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,23 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,30 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,52 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ;

7,65 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,75 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,85 (d large, J = 7,5 Hz,

1 H) ; 7,91 (s large, 1 H) ; 8,29 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 10,2 (s, 1 H).

Ex17: (2fî ₎ 3fî,4S,5fî,6E)-λ/-[(3fî)-6-fluoro-4-oxo-2,3,4,5-tétrahy dro-1 ,5- benzothiazépin-3-yl]-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-dimét hylnon-6-énamide

Ex17

Etape 1 : Préparation λ/-[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]-S-(3-fluoro-2- nitrophényl)-L-cystéine (48)

Dans un tricol de 50 ml_ contenant 2,78 g de L-Boc-Cys-OH (12,57 mmol), 22 ml_ d'eau et 3,05 g de NaHCû ₃ (36,33 mmol), on introduit une solution de 2,6- difluoro-nitrobenzène 47 (2,0 g, 12,57 mmol) dans 26 ml_ d'éthanol. On laisse le milieu réactionnel à TA pendant 1 nuit, puis porte le milieu à 75°C pendant 1 h. On évapore l'éthanol, lave ensuite la phase aqueuse avec 20 ml_ d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on amène la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N), et extrait 2 fois avec 25 ml_ d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées et enfin évaporées à sec. On obtient 1 ,29 g de produit brut 48 (huile jaune) qui est utilisé directement pour le stade suivant.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,36 (s, 9H) ; 3,24 (dd, J = 10,0 et 13,5 Hz, 1 H) ; 3,53 (dd, J = 5,0 et 13,5 Hz, 1 H) ; 4,08 (m, 1 H) ; 7,20 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,57 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,69 (dt, J = 6,0 et 8,0 Hz, 1 H) ; 12,8 (m étalé, 1 H).

Etape 2: Préparation de S-(2-amino-3-fluorophényl)-λ/-[(2,2- diméthylpropanoyl)oxy]-L-cystéine (49)

Dans un autoclave contenant 790 mg de 48 (2,192 mmol), 79 mg de Pd/C

(10%) et 20 ml_ d'éthanol, on hydrogène sous 7 bars pendant 10 h à 20 ⁰ C.

Après filtration du catalyseur sur célite, on évapore le solvant et obtient 670 mg de produit attendu 49 (huile jaune) qui est utilisé directement pour l'étape suivante.

ES : m/z = 329 (M-H ⁺ )

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,38 (s, 9H) ; 2,94 (dd, J = 10,0 et

13,5 Hz, 1 H) ; 3,09 (dd, J = 5,0 et 13,5 Hz, 1 H) ; 3,94 (m, 1 H) ; 5,30 (s large,

2H) ; 6,52 (dt, J = 6,0 et 8,0 Hz, 1 H) ; de 6,99 à 7,15 (m, 4H).

Etape 3 Préparation du (3fî)-3-{[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]amino}-6-fluoro- 2,3-dihydro-1 ,5-benzothiazépin-4(5H)-one (50)

Dans un tricol de 25 ml_ contenant 670 mg de 49 (2,028 mmol), 10 mL de DMF, on introduit, à 0 ⁰ C, 0,366 ml de Cyanophosphonate de diéthyle (0,393 mg, 2,41 mmol), et 10 minute après, 0,273 ml de TEA (1 ,943 mmol). On agite le milieu réactionnel à 0 ⁰ C pendant 2 h. On ajoute 30 ml d'AcOEt, puis lave avec 2 fois 30 mL d'eau distillée. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (70 g) avec un éluant Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 8 à 50%). On obtient 68,4 mg de produit attendu 50 (solide blanc). ES : m/z = 311 (M-H ⁺ ) RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,33 (s, 9H) ; 3,09 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,52 (dd, J = 8,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,09 (m, 1 H) ; 7,27 (m, 2H) ; 7,39 (t, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,44 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 9,96 (s, 1 H).

Etape 4: Préparation du (3fî)-3-amino-6-fluoro-2,3-dihydro-1 ,5- benzothiazépin-4(5H)-one chlorhydrate (5_1)

Dans un ballon de 25 ml_ contenant 68,4 mg de 50 (0,219 mmol), on ajoute 1 ,6 ml_ d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite durant 4 h à TA sous argon. Apres avoir concentré le milieu réactionnel à sec, on obtient ainsi 51 mg d'aminé 51 (solide jaune) sous forme de chlorhydrate. RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,23 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,75 (dd, J = 7,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,03 (dd, J = 7,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; 7,32 (dt, J = 6,0 et 8,0 Hz, 1 H) ; 7,43 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,50 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 8,42 (s large, 3H) ; 10,55 (s, 1 H).

Etape 5: Préparation du {2R,3RAS,5R,6E)-N-[{3R)-6-f\uoro-4-oxo-2,3,4,5- tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8- diméthylnon-6-énamide (Ex17)

S 51 Ex17

On introduit successivement dans un tube Wheatton, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 50 mg de 5 (204 μmol), 51 mg de 5J _. (204 μrnol), 69 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,42 mmol) dans 1 ,2 ml_ de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 48 h. On concentre le milieu réactionel à sec. Les résidus sont chromatographiés sur une cartouche de silice (5 g, éluant CH ₂ CVMeOH en gradient : MeOH 1 à 10%). On recueille 70 mg de produit attendu Ex17 (solide blanc). ES : m/z = 457 (MH ⁺ )

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,96 (s, 9H) ; 3,18 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,21 (s, 3H) ; 3,30 (m masqué, 1 H) ; de 3,45 à 3,59 (m, 2H) ; 3,68 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,92 (m, 1 H) ; 4,29 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; 4,42 (m, 1 H) ; 4,52 (d, J = 5,0 Hz, 1 H) ; 5,29 (dd, J = 7,5 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,62 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,29 (m, 1 H) ; 7,40 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,48 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,23 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 10,1 (s, 1 H).

Ex18: (2fî,3R,4S,5fî,6£)-3 ₎ 4,5-trihydroxy-2-méthoxy-λ/-[(3fî)-6-méthoxy-4- oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-8,8-diméthylnon-6-énamide

Etape 1 : Préparation de 1-fluoro-3-méthoxy-2-nitrobenzène (52)

47

«

Dans un tricol de 100 ml_ contenant 10ml de THF et 0,255 ml_ de MeOH, on ajoute 252 mg de d'hydrure de sodium en suspension à 60% dans l'huile (6,29 mmol). On agite à TA pendant 1 h, et on introduit une solution de 2,6- difluoro-nitrobenzène 47 (1 ,0 g, 6,29 mmol) dans 10 mL de THF. On laisse le milieu réactionnel à TA pendant 16h. On ajoute 10 ml d'AcOEt, et lave 2 fois avec 20 mL d'eau distillée. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée et enfin évaporée à sec. On obtient 0,93 g de produit 52 (solide crème) RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,95 (s, 3H) ; 7,15 (t large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,21 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,65 (dt, J = 6,0 et 8,0 Hz, 1 H) .

Etape 2: Préparation de l'acide λ/-[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]-S-(3- méthoxy-2-nitrophén

Dans un tricol de 100 mL contenant 1 ,422 g de L-Boc-Cys-OH (6,428 mmol), 13 mL d'eau et 1 ,561 g de NaHCθ ₃ (18,58 mmol), on introduit une solution de 52 (1 ,1 g, 6,428 mmol) dans 17 mL d'éthanol. On chauffe le milieu à 100 ⁰ C pendant 6h. On évapore l'éthanol, lave ensuite la phase aqueuse avec 20 mL d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on amène la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N), et extrait 2 fois avec 25 mL d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées et enfin évaporées à sec. Les résidus sont chromatographiés sur une cartouche de silice (25 g, éluant CH ₂ CI ₂ /MeOH en gradient : MeOH 1 à 10%), on obtient 2,43 g de produit 53 (solide crème). RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,39 (s, 9H) ; 3,17 (dd, J = 10,0 et 14,0 Hz, 1 H) ; 3,40 (dd, J = 4,0 et 14,0 Hz, 1 H) ; 3,89 (s, 3H) ; 4,03 (m, 1 H) ; 7,20 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,23 (m, 2H) ; 7,54 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 12,8 (m étalé, 1 H).

Etape 3: Préparation de S-(2-amino-3-méthoxyphényl)-λ/-[(2,2- diméthylpropanoyl)oxy]-L-cystéine (54)

Dans un autoclave contenant 2,43 g de 53 (6,53 mmol), 285 mg de Pd/C (10%) et 174 ml_ de méthanol, on hydrogène sous 5 bars pendant 10 h à 20 ⁰ C. Après filtration du catalyseur sur célite, on évapore le solvant et obtient 1 ,8 g de produit attendu 54 (huile marron) qui est utilisé directement pour l'étape suivante.

Etape 4 : Préparation du (3/ ^: ?)-3-{[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]amino}-6- méthoxy-2,3-dihydro-1 ,5-benzothiazépin-4(5H)-one (55)

Dans un tricol de 100 ml_ contenant 1 ,80 g de 54 (5,26 mmol), 25 ml_ de DMF, on introduit, à 0 ⁰ C, 0,948 ml de Cyanophosphonate de diéthyle (1 ,019 g, 6,245 mmol), et 10 minute après, 0,708 ml de TEA (5,04 mmol). On agite le milieu réactionnel à 0 ⁰ C pendant 2 h. On ajoute 50 ml d'AcoEt, puis lave avec 2 fois 50 ml_ d'eau distillée. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (150 g) avecun éluant Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 10 à 50%). On obtient 450 mg de produit attendu 55 (solide blanc). RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,32 (s, 9H) ; 3,05 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,48 (dd, J = 7,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 3,82 (s, 3H) ; 4,04 (m, 1 H) ; de 7,10 à 7,12 (m, 4H) ; 9,40 (s, 1 H).

Etape 5: Préparation du (3f?)-3-amino-6-méthoxy-2,3-dihydro-1 ,5- benzothiazépin-4(5/-/)-one chlorhydrate (56)

55 56 Dans un ballon de 100 mL contenant 450 mg de 55 (1 ,387 mmol), on ajoute 10,4 mL d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On agite durant 3 h à TA sous argon. Un précipité blanc se forme, qui est essoré, lavé avec 3 mL de dioxane, puis 5 mL d'éther isopropylique. On obtient ainsi 259 mg d'aminé 56 (solide crème) sous forme de chlorhydrate. RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,19 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,71 (m, 1 H) ; 3,82 (s, 3H) ; 3,83 (m, 1 H) ; de 7,17 à 7,30 (m, 3H) ; 8,39 (s, 3H) ; 10,05 (s, 1 H).

Etape 6: Préparation du (2/?,3fi,4S,5fî,6E)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-/V- [(3/?)-6-méthoxy-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]-8,8- diméthylnon-6-énamide (Ex18)

On introduit successivement dans un tube Wheatton, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 100 mg de 5 (409 μmol), 107 mg de 56 (409 μmol), 170 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (1 ,02 mmol) dans 2 ml_ de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24 h. On concentre le milieu réactionel à sec. Les résidus sont chromatographiés sur une cartouche de silice (12 g, éluant AcOEt). On recueille 175 mg de produit attendu Ex18 (meringue blanche).

ES : m/z = 467 (M-H ⁺ )

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,96 (s, 9H) ; 3,09 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,20 (s, 3H) ; 3,30 (m masqué, 1 H) ; de 3,45 à 3,55 (m, 2H) ; 3,68 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,82 (s, 3H) ; 3,92 (m, 1 H) ; de 4,30 à 4,45 (m, 3H) ; 4,55 (s large, 1 H) ; 5,29 (dd, J = 7,0 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,62 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; de 7,12 à 7,26 (m, 3H) ; 8,10 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 9,58 (s, 1 H).

Ex19: (2f? ₎ 3fî _I 4S,5fî,6E)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl-λ/-[( 3fî)-4- oxo-6-phénoxy-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]non-6-énamide

Etape 1 : Préparation de 1-fluoro-2-nitro-3-phénoxybenzène (57)

Dans un tricol de 50 ml_ contenant 10ml de DMF et 0,592 g de phénol, on ajoute 252 mg de d'hydrure de sodium en suspension à 60% dans l'huile (6,29 mmol). On agite à TA pendant 1 h, et on introduit une solution de 2,6- difluoro-nitrobenzène 47 (1 ,0 g, 6,29 mmol) dans 10 mL de DMF. On laisse le milieu réactionnel à TA pendant 24h. On ajoute 50 ml d'AcOEt, et lave 2 fois avec 20 mL d'eau distillée. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée et enfin évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (120 g) avecun éluant Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 0 à 50%). On obtient 1 ,07 g de produit attendu 57 (huile jaune).

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-Cl ₆ ), δ(ppm): 6,92 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,17 (d large, J = 7,5 Hz, 2H) ; 7,29 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,36 (t large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,48 (t, J = 7,5 Hz, 2H) ; 7,65 (dt, J = 6,0 et 8,0 Hz, 1 H).

Etape 2: Préparation λ/-[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]-S-(2-nitro-3- phénoxyphényl)-L-cystéine (58)

Dans un tricol de 25 ml_ contenant 0,693 g de L-Boc-Cys-OH (3,13 mmol), 6,3 ml_ d'eau et 0,76 g de NaHCO ₃ (9,05 mmol), on introduit une solution de 57 (0,73 g, 3,13 mmol) dans 8 ml_ d'éthanol. On chauffe le milieu à 75°C pendant 6h. On évapore l'éthanol, ajoute 10 ml d'eau distillée, lave ensuite 2 fois la phase aqueuse avec 10 ml_ d'éther, une fois la phase éthérée décantée, on amène la phase aqueuse jusqu'à pH2-3 avec du HCI (1 N), et extrait 2 fois avec 10 ml_ d'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO ₄ , filtrées et enfin évaporées à sec. Les résidus sont chromatographiés sur une cartouche de silice (50 g, éluant CH ₂ CI ₂ /MeOH en gradient : MeOH 1 à 10%), on obtient 760 mg de produit 58 (huile jaune). RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,38 (s, 9H) ; 3,22 (dd, J = 9,0 et 14,0 Hz, 1 H) ; 3,50 (dd, J = 5,0 et 14,0 Hz, 1 H) ; 4,08 (m, 1 H) ; 6,96 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,10 (d, J = 8,0 Hz, 2H) ; de 7,18 à 7,28 (m, 2H) ; de 7,39 à 7,49 (m, 3H) ; 7,56 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 12,85 (m étalé, 1 H).

Etape 3: Préparation de S-(2-amino-3-phénoxyphényl)-λ/-[(2,2- diméthylpropanoyl)oxy]-L-cystéine (59)

Dans un autoclave contenant 0,76 g de 58 (1 ,75 mmol), 76 mg de Pd/C (10%) et 34,5 mL de méthanol, on hydrogène sous 5 bars pendant 10 h à 20 ⁰ C. Après filtration du catalyseur sur célite, on évapore le solvant et obtient 0,63 g de produit attendu 59 (huile marron) qui est utilisé directement pour l'étape suivante.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,39 (s, 9H) ; 2,96 (m, 1 H) ; 3,11 (m, 1 H) ; 3,98 (m, 1 H) ; 5,10 (m étalé, 2H) ; 6,58 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,80 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 6,92 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; de 7,00 à 7,20 (m, 3H) ; 7,34 (t, J = 7,5 Hz, 2H) ; 12,5 (m très étalé, 1 H).

Etape 4 : Préparation du (3fî)-3-{[(2,2-diméthylpropanoyl)oxy]amino}-6- phénoxy-2,3-dihydro-1 ,5-benzothiazépin-4(5H)-one (60)

Dans un tricol de 25 ml_ contenant 0,63g de 59 (1 ,56 mmol), 7,5 ml_ de DMF, on introduit, à 0 ⁰ C, 0,281 ml de Cyanophosphonate de diéthyle (0,302 g, 1 ,85 mmol), et 10 minute après, 0,21 ml de TEA (1 ,49 mmol). On agite le milieu réactionnel à 0°C pendant 2 h. On ajoute 15 ml d'AcoEt, puis lave avec 2 fois 15 ml_ d'eau distillée. La phase organique est séchée sur MgSO ₄ , filtrée puis évaporée à sec. Le brut est chromatographié sur une cartouche de silice (120 g) avec un éluant Heptane/AcOEt (en gradient AcOEt : 0 à 30%). On obtient 188 mg de produit attendu 60 (solide blanc).

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 1 ,35 (s, 9H) ; 3,09 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,52 (dd, J = 7,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,21 (m, 1 H) ; de 6,97 à 7,05 (m, 3H) ; de 7,08 à 7,18 (m, 2H) ; 7,21 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,37 (t, J = 7,5 Hz, 2H) ; 7,42 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 9,81 (s, 1 H).

Etape 5: Préparation du (3/ ^: î)-3-amino-6-phénoxy-2,3-dihydro-1 ,5- benzothiazépin-4(5H)-one chlorhydrate (61)

Dans un ballon de 100 mL contenant 188 mg de 60 (0,487 mmol), on ajoute 3,65 mL d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane (4M). On concentre à sec le milieu réactionnel, et reprend par 10 mL d'éther isopropylique. On obtient, après filtration, 100 mg d'aminé 6_1 (solide blanc) sous forme de chlorhydrate.

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 3,22 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,79 (dd, J = 7,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 4,08 (dd, J = 6,0 et 12,0 Hz, 1 H) ; 6,97 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,04 (d, J = 7,5 Hz, 2H) ; 7,19 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,23 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 7,42 (m, 3H) ; 8,44 (s large, 3H) ; 10,45 (s, 1 H).

Etape 6: Préparation du (2fî,3fî,4S,5fî,6£)-3 _> 4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8- diméthyl-λ/-[(3fî)-4-oxo-6-phénoxy-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3- yl]non-6-énamide (Ex19)

On introduit successivement dans un tube Wheatton, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 75 mg de 5 (307 μmol), 99,1 mg de 61 (307 μmol), 127 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,77 mmol) dans 1 ,6 mL de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24 h. On concentre le milieu réactionnel à sec. Les résidus sont chromatographiés sur une cartouche de silice (5 g, éluant AcOEt). On recueille 56 mg de produit attendu Ex19 (meringue blanc). ES : m/z = 529 (M-H ⁺ )

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,95 (s, 9H) ; 3,12 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,19 (s, 3H) ; 3,30 (m masqué, 1 H) ; 3,50 (m, 1 H) ; 3,54 (dd, J = 6,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; 3,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,94 (m, 1 H) ; 4,32 (m, 2H) ; 4,52 (m, 1 H) ; 4,58 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 5,30 (dd, J = 6,5 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,62 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,00 (m, 3H) ; 7,12 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,22 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,38 (t, J = 7,5 Hz, 2H) ; 7,42 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,19 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 9,97 (s, 1 H).

Ex20: (2f?,3f?,4S,5/ ^: ?,6Z)-3,4,5-trihydroxy-2-méthoxy-8,8-diméthyl-λ/-[(3fî)- 5- méthyl-4-oxo-2,3,4,5-tétrahydro-1 ,5-benzothiazépin-3-yl]non-6-énamide

On introduit successivement dans un ballon de 5 mL, sous agitation et sous atmosphère d'argon, 50 mg de 62 (205 μmol) (préparé selon le mode opératoire décrite à l'étape 3 de Iεx1 , à partir de (4S,4aS,7R,7aR)-4-((Z)-3,3- diméthyl-but-1 -enyl)-7-méthoxy-2,2-diméthyl-tetrahydro-furo[3,2-d]-1 ,3-dioxin- 6-one, obtenu minoritairement lors de la préparation de 4, selon les modes opératoires décrites dans Org. Process Res. Dev. 2003, 7(6), 856-865), 61 mg de H (246 μmol), 51 mg de 2-éthylhexanoate de sodium (0,31 mmol) dans 1 mL de THF. On maintient l'agitation à TA pendant 24 h. On ajoute 10 mL de CH ₂ Ck au milieu réactionnel. On lave avec 5 mL d'une solution de HCI (1 N). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée à sec. Le brut (0,15 g) est chromatographié sur une cartouche de silice (5 g, éluant Heptane/AcOEt : 10/90). On recueille 68 mg de produit attendu Ex20. ES : m/z = 451 (M-H) ^" .

RMN ¹ H (300 MHz, DMSO-d ₆ ), δ(ppm): 0,95 (s, 9H) ; 3,12 (t, J = 12,0 Hz, 1 H) ; 3,19 (s, 3H) ; 3,30 (m masqué, 1 H) ; 3,50 (m, 1 H) ; 3,54 (dd, J = 6,5 et

12,0 Hz, 1 H) ; 3,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 3,94 (m, 1 H) ; 4,32 (m, 2H) ; 4,52 (m, 1 H) ; 4,58 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) ; 5,30 (dd, J = 6,5 et 16,0 Hz, 1 H) ; 5,62 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) ; 7,00 (m, 3H) ; 7,12 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,22 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,38 (t, J = 7,5 Hz, 2H) ; 7,42 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,19 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 9,97 (s, 1 H).

Activité biologique des produits préparés:

Au jour du dépôt de la demande, il a été mesuré que le Caco2-TC7 du produit de l'exemple 5 est Papp single point = 23.10 ⁷ cm. sec ^"1 . Ce composé présente une meilleure stabilité métabolique totale (11 % de métabolisation chez la souris) que le produit de l'exemple 20 (99%) décrit dans la demande de brevet WO2006/056696.

L'activité antiproliférative des produits des exemples du tableau 1 a été déterminée par mesure de l'inhibition de la prolifération cellulaire de cellules HCT116. Les cellules sont ensemencées dans un milieu de culture cellulaire à une concentration de 10 000 cellules par puits, dans 0.17 mL de milieu, et 20 μL de produit à tester, à différentes concentrations, et 10 μL de Thymidine [méthyl-14C] (100 μCi/ml - activité spécifique 47.90 mCi/mmol; NEN Technologies référence NEC568 batch 3550-001) sont ajoutés, puis les cellules sont incubées à 37°C et 5% de CO ₂ .

Milieu utilisé pour la culture de cellules HCT116 : milieu DMEM 2 mM L- glutamine, 200 Ul/ml pénicilline, 200 μg/ml streptomycine and 10% (V/V) Sérum de veau fœtal (Life Technologies).

Après 96 heures, l'incorporation de ¹⁴ C-thymidine est comptée dans un compteur à scintillation liquide 1450 Microbeta Wallac Trilux. Les résultats R sont exprimés en cpm (coups par minute) et convertis en pourcentage d'inhibition de croissance Gl% en faisant premièrement la soustraction de la moyenne du nombre de cpm des puits sans cellules B et en divisant ensuite par le nombre de cpm des puits des cellules non traitées C comprenant 20μL de milieu de dilution du produit contentant 1% d'éthanol. (Gl % = (R - B) x

1007 C %).

Les valeurs d'IC-50 sont calculées à l'aide de l'équation 205 du logiciel XLFit (IDBS company, UK) par analyse de régression non linéaire utilisant

l'algorithme Marquardt (Donald W. MARQUARDT, J.Soc.industry.appI, vol 11 , No. 2, June, 1963).

Les produits du tableau 1 présentent une IC50 sur les cellules HCT116 généralement inférieure à 30μM et de préférence inférieure à 10OnM. Par exemple, le produit de l'exemple 3 a une IC50 de 10 nM et le produit de l'exemple 5 a une IC50 de 14 nM. Le produit de l'exemple 1 a une IC50 de 9 nM, le produit de l'exemple 2 a une IC50 de 20 nM, le produit de l'exemple 4 a une IC50 de 19 nM et le produit de l'exemple 9 a une IC50 de 7 nM.

- Tableau 1 -