本发明属于药物化学和药物治疗学领域， 具体涉及 6,7,8,9-四氢 -5Η- 苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物及其用途。 背景技术

金黄色葡萄球菌 Staphylococcus au謂 、是严重危害人类生命健康的 一种重要病原菌。 作为革兰氏阳性菌的代表， 它是引起人类化脓感染的病 原菌中最常见的， 可直接导致局部化脓感染、 肺炎、 伪膜性肠炎、 心包炎 等， 甚至败血症、 脓毒症等全身感染。 金黄色葡萄球菌的感染可分医院获 得性感染和社区获得性感染， 后者的发现更增加了这种致病菌潜在的生物 危害性和引起感染爆发的可能性。 MRS A ( Methicillin-resistant staphylococcus aureus )是具有曱氧西林耐药性的金黄色葡萄球菌， 被公认 是 "超级细菌"。 MRSA自 1961年进化出来后以惊人的速度在世界范围蔓 延。 2005年， 美国感染 MRSA致死人数达 19000多人， 已超过同期艾滋 病死亡人数。 欧洲 CDC对 29个国家的传染疾病调查发现， 英国 44%的医 院存在高耐药性的 MRSA。 2005 年发现， 在我国金葡菌感染中， MRSA 分离率占 69.2%。 在 MRSA面前， 人类一直保留有目前认为最有效的 "杀 手锏"， 也就是一种名为 "万古霉素" 的抗生素。 万古霉素的副作用很强， 有严重致聋性及肾毒性， 在临床上很少使用。 但现在， 当其他抗生素对病 原菌都无效时， 万古霉素被重新启用。 然而， 2002年在美国出现了对万古 霉素高度耐药的金黄色葡萄球菌（VRSA ), 它的出现使金黄色葡萄球菌的 感染再次成为非常棘手的临床问题。

随着生命科学及医学的发展， 人们发现病原菌包括金黄色葡萄球菌具 有致病性是因为它们通过产生各种各样的毒力 因子 （Virulence factor )对 细菌的定植、 粘附、 细胞毒性、 免疫逃避等进行帮助， 从而使得细菌成功 地实施了感染。 目前， 临床上使用的抗生素的作用机制并不是针对细 菌的 致病性环节， 而是通过直接抑制病原菌最基本的生命活动来 抑制细菌的生 长或者直接杀死细菌， 由此引发的细菌对抗生素的耐药性已经成为抗 生素 临床应用的瓶颈问题。 正是由于各种耐药细菌的出现和蔓延， 抗细菌毒力 药物（ Anti- virulence drugs )正在成为新型抗细菌感染药物研究所关注的� � 点。 目前抗细菌毒力药物主要通过 5种途径发挥作用： （1 )遏制目标菌的 毒素表达； ( 2 )阻断细菌之间的群体感应； （3 )抑制毒素分泌和传递； （4 ) 阻断细菌黏附的各个环节； （5 )抑制细菌免疫逃避。 任何一种具有上述 5 种效果之一的药物都可以降低细菌的致病性， 有效地预防和治疗多种感染 疾病。

需要强调的是， 由于抗细菌毒力药物并不直接影响菌体的存亡 ， 而是 消减细菌的致病性或解除其武装， 帮助人体的免疫系统有效地清除细菌， 因此药物对细菌的选择性压力较小。 科学家们预测它能有效降低细菌耐药 性的产生、 传播和流行， 而且对人体的正常菌群（Normal flora )具有较少 的影响， 可以与其它传统抗生素协同使用， 弥补现行传统抗生素的不足之 处。 另一方面， 抗细菌毒力药物对已经产生耐药的菌株可能有 效， 因为无 论对抗生素耐药菌株还是敏感菌株而言， 它们在致病性的分子机理方面， 一般来说都是类似的。

2005年， 美国加州大学圣地亚哥分校（UCSD )的 Victor Nizet教授发 现金黄色葡萄球菌的金黄色色素 （ Staphyloxanthin ) 具有帮助金黄色葡萄 球菌逃避人体先天免疫系统产生的活性氧的杀 害的能力， 是决定细菌致病 能力的一个关键因子。 美国伊利诺大学香槟校区的 Eric Oldfield教授等成 功发现一个已知的胆固醇合成抑制剂 BPH-652 能抑制金黄色葡萄球菌内 金黄色色素的形成， 从而消减金黄色葡萄球菌在小鼠体内的致病能 力。 也 有一些研究报道， 金黄色色素可以增加细菌对油酸的抵抗能力， 在小鼠皮 下感染模型实验中， 不能产生色素的突变株引发的脓肿区域较野生 型菌株 明显减少， 暗示色素能够通过提高细菌抗氧化的能力从而 增加细菌的毒 力。 因而， 金黄色色素是决定金黄色葡萄球菌致病能力的 一个关键因子。 这些已有的研究初步证实抑制金黄色葡萄球菌 的毒力因子金黄色色素合 成是新的、 有效的抗菌药物策略。

中国是世界上滥用抗生素最为严重的国家之一 ， 由此造成的细菌耐药 性问题尤为突出， 临床分离的一些细菌对某些抗生素的耐药性已 居世界首 位。 面对严峻的细菌抗生素耐药性， 我们亟需发现新型的抗菌药物作用靶 点和新型的抗细菌感染药物。 因此， 研究开发抗金黄色色素合成的抗菌药 物具有重要的现实意义和科学价值。 发明内容 本发明目的是提供一类对金黄色色素合成具有 强效抑制活性并且可 用于制备抗细菌感染药物的新型化合物。

用于实现上述目的的技术方案如下：

一种式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物或其 在药学上可接受的盐：

其中， 为氢或 C广 C ₄ 直链或支链烷基； R ₂ 为 C广 C ₃ 直链亚烷基， C ₃ ~C ₅ 亚环烷基， C ₂ ~C ₆ 直链或支链亚烯基、 连烯基和炔基； R ₃ 为 C广 C ₃ 直链或支 链烷基， C ₄ ~C ₇ 环烷基， C ₅ ~C ₆ 杂环基， 取代或未取代的六元芳环基， 萘环 基； n为 1-3的整数。

其中， 所述六元芳环基的取代基选自： C广 C ₆ 直链或支链烷基； C广 C ₃ 直链或支链全氟烷基； 卤素， 例如 F、 Cl、 Br或 I； 硝基； C广 C ₄ 直链或支链 烷氧基； 所述取代基的个数为 1-4的整数。

在本发明的一个优选技术方案中， R ₃ 为苯基或取代苯基， 所述苯基的取 代基选自： C广 C ₃ 直链或支链烷基， C广 C ₃ 直链或支链全氟烷基， C广 C ₃ 直链 或支链烷氧基， F , CI, Br, I, 硝基； 所述取代基的数目为 1-4的整数。

在本发明的另一个优选技术方案中， R ₃ 为苯基或取代苯基， 所述苯基的 取代基选自： F , CI, Br, 曱基， 曱氧基， 三氟曱基， 硝基； 所述取代基的 数目为 1-2的整数。

优选地，所述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合 物或其在药学上可接受的盐如下：

( )-N-曱基 -N-[( ⁶ , ⁷ , ⁸ , ⁹ -四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 _ ² _基)亚曱基 ]_ ³ _( ⁴ _曱苯基) 丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3-(4-叔丁苯 基)丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6, ⁷ ,8,9-四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3- (萘 -2-基)丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6, ⁷ ,8,9-四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3- (萘 -1-基)丙 _2-烯 -1-胺;

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-(2,4-二氯苯 基)丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6, ⁷ ,8,9-四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3-(4-三氟曱 基苯基)丙 -2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[( ⁶ , ⁷ , ⁸ , ⁹ -四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 _ ² _基)亚曱基 ]_ ³ _( ⁴ _氟苯基) 丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[( ⁶ , ⁷ , ⁸ , ⁹ -四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 _ ² _基)亚曱基 ]_ ³ _( ⁴ _溴苯基) 丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[( ⁶ , ⁷ , ⁸ , ⁹ -四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 _ ² _基)亚曱基 ]_ ³ _( ⁴ _氯苯基) 丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3-(4-曱氧基 苯基)丙 -2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3-(4-硝基苯 基)丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3-(2-硝基苯 基)丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[( ⁶ , ⁷ , ⁸ , ⁹ -四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 _ ² _基)亚曱基 ]_ ³ _( ² _氟苯基) 丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-苯基-丙 -2-烯 -1-胺； ( )-N-乙基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-苯基-丙 -2- 烯 -1-胺；

( )-N-异丙基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-苯基-丙 _2-烯 -1-胺;

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-4-苯基-丁 -2- 烯 -1-胺；

(2 ,4 )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-5-苯基- 戊 -2,4-二烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-环己基-丙 _2-烯 -1-胺;

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-环戊基-丙 •2-秌 -1-胺: ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3- (噻吩 -2- 基) -丙 _2-烯 -1-胺；

N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-l-[(lR,2R)-2-苯 基环丙基] -曱胺；

N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）曱基] -3-苯基-丙 -2-炔 -1- 胺；

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3- (呋喃 -2- 基) -丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N,2-二曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱基 ]-3-苯基- 丙 _2-烯 -1-胺；

( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基] -丁 -2-烯 -1-胺； N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-苯基-丙 -1-胺； 或 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-苯基-丙 -2-烯

-1-胺。

就本发明所述的具有通式 I所示结构的 6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2- 烷基胺类化合物 I _A ~I _E 及其中间体 II~XIV的制备方法而言，具体合成策略分 别如下：

式中， R ₃ 的含义与前文所述相同， 为氢或 C广 C ₃ 直链烷基。

1 )将 1-苯并环庚酮溶于三氟乙酸中， 加入三乙基硅烷， 50~80 °C下搅拌 10~20小时。 反应结束后， 浓缩， 将反应液倒入水水中， 用乙酸乙酯萃取三 次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到中间体 6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯（中间体 II )。

2 )将中间体 II、 N-碘代丁二酰亚胺溶于乙酸中， 氮气保护、 50~80 °C下 加热反应 5-15小时。反应结束后，用饱和疏代疏酸钠溶� �在 0°C下淬灭反应， 加入饱和碳酸氢钠溶液， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸 镁干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到中间体 2-碘代 -6,7,8,9-四 氢 -5/7-苯并 [7]轮烯（中间体 III )。

3 )将中间体 III、氰化亚铜加入到 N,N-二曱基曱酰胺中，加热回流 10~20 小时。 冷却至室温， 向体系中加入浓氨水， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到中间体 6, ⁷ ,8,9-四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 -2-曱腈（中间体 IV )。

4 )将中间体 IV的无水四氢呋喃溶液在零下 78°C、 氮气保护下緩慢滴 加到氢化铝锂的无水四氢呋喃混悬液中， 滴加完毕后 20~30°C下反应过夜。 向反应体系中依次加入水、 15%氢氧化钠水溶液， 水淬灭反应， 直接在反应 体系中加入无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得中间体 (6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7] 轮烯 -2-基)曱胺（中间体 V )。

5 )将中间体 V溶于四氢呋喃中， 加入氢氧化钠搅拌 5~10分钟， 水浴下 緩慢加入二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。 0~30°C下搅拌反应 1-3小时。 过 滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到中间体 [(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基]氨基曱酸叔丁酯 (中间体 VI )。

6 )将中间体 VI的无水四氢呋喃溶液在 0°C、 氮气保护下緩慢滴加到氢 化铝锂的无水四氢呋喃混悬液中， 滴加完毕后加热回流反应 10~20小时。 反 应结束后， 向反应体系中依次加入水、 15%氢氧化钠水溶液， 水淬灭反应， 直接在反应体系中加入无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得中间体 N-曱基 -( ⁶ , ⁷ , ⁸ , ⁹ _四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 _ ² _基）曱胺（中间体 VII )。

7 )将 ( )-2-R4-3-R ₃ -丙烯醛溶于曱醇中， 水浴下分批加入硼氢化钠， 室 温下反应 10~30分钟。 浓缩， 残余物中加入水， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和 食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得 中间体 ( )-2-R4-3-R ₃ -丙烯醇（中 间体 VIII )。

8 )将中间体 VIII溶于无水乙醚中， 氮气保护、 水浴下加入三溴化磷， 20~30°C下反应 10-20小时。 反应结束后， 将反应体系倒入水的饱和碳酸氢 钠溶液中， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 30 °C下浓缩得中间体 ( )-2-R4-3-R ₃ -丙烯溴（中间体 IX )。

9 )将中间体 VII、 中间体 IX、 碳酸钾加入到 N,N-二曱基曱酰胺中， 20~30°C下反应 10~20小时。 反应结束后， 向反应体系中加入水， 用乙酸乙 酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱 层析分离，得到化合物 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱 基] -2-R4-3-R ₃ -丙 -2-烯 -1-胺（ I _A )。

IB的合成:

式中， 和 的含义与前文所述相同。

1 )将中间体 、 -3-R ₃ -丙烯醛、 分子筛加入到二氯曱烷中， 加热回流 反应 15~30小时。 反应结束后， 冷却至室温， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析 分离， 得到中间体 ( , )-N-(3-R ₃ -丙 -2-烯 -1-叉基) -(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮 烯 -2-基)曱胺（中间体 X )。

2 )将中间体 X溶于曱醇中，水浴下分批加入硼氢化钠，室� �下反应 10~30 分钟。 浓缩， 残余物中加入水， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无 水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得中间体 ( )-N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -1- 基)亚曱基 ]-3-R ₃ -丙 -2-烯 -2-胺（目标物 I _B 的一类）。

3 )将目标物 I _B 溶于无水 N,N-二曱基曱酰胺中，水浴下分批加入氢化钠� � 搅拌反应 10~30分钟。 加入 取代碘， 氮气保护、 20~30 °C下反应 10~20小 时。 反应结束后， 向反应体系中加入水， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到化合物 ( )-N-R _r N-[( ⁶ , ⁷ , ⁸ , ⁹ -四氢 _ ⁵ //-苯并 [ ⁷ ]轮烯 _ ² _基）亚曱基 ]- ³ _R ₃ -丙 _ ² _烯 -1-胺

(目标物 I _B 的另一类）。

VII

式中， R ₅ 为 ( )-2- (噻吩 -2-基）乙烯基或 (lR,2R)-2-苯基环丙烷基。 1 )将 R ₅ 取代羧酸、 二氯亚砜加入到乙醇溶液中， 加热回流 1~3小时。 反应结束后， 浓缩， 洗涤， 得到中间体 R ₅ 取代羧酸乙酯（中间体 XI )。

2 )将中间体 XI溶于无水四氢呋喃中， 氮气保护、 0°C下緩慢加入二异 丁基氢化铝的曱苯溶液， 20~30°C下反应 10~20小时。 反应结束后， 加入曱 醇淬灭反应， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到中间体 R ₅ 取代曱醇

(中间体 XII )。

3 )将中间体 ΧΠ溶于无水乙醚中， 氮气保护、 水浴下加入三溴化磷， 20~30 °C下反应 10-20小时。 反应结束后， 将反应体系倒入水的饱和碳酸氢 钠溶液中， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 30 °C下浓缩得中间体 R ₅ 取代溴曱烷（中间体 XIII )。

4 )将中间体 VII、 中间体 XIII、 碳酸钾加入到 Ν,Ν-二曱基曱酰胺中， 20~30 °C下反应 10~20小时。 反应结束后， 向反应体系中加入水， 用乙酸乙 酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱 层析分离， 得到化合物 N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱 基] -R ₅ -曱胺（I _c )。

I _D 的合成:

νπ 式中， R ₃ 的含义与前文所述相同。

1 )将 3-R ₃ -丙 -2-炔 -1-醇溶于无水乙醚中， 氮气保护、 水浴下加入三溴化 磷， 20~30°C下反应 10-20小时。 反应结束后， 将反应体系倒入水的饱和碳 酸氢钠溶液中， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 30 °C下浓缩得中间体 3-溴 -1-R ₃ -丙 -1-炔（中间体 XIV )。

2 )将中间体 VII、 中间体 XIV、 碳酸钾加入到 N,N-二曱基曱酰胺中， 20~30 °C下反应 10~20小时。 反应结束后， 向反应体系中加入水， 用乙酸乙 酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱 层析分离， 得到化合物 N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱 基] -3-R ₃ -丙 -2-炔 -1-胺 ( I _D )。

IE的合成:

式中， R ₃ 的含义与前文所述相同。

将中间体 VII、 3-R ₃ -l-溴丙烷、 碳酸钾加入到 N,N-二曱基曱酰胺中， 20~30°C下反应 10~20小时。 反应结束后， 向反应体系中加入水， 用乙酸乙 酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱 层析分离， 得到化合物 N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱 基] -3-R ₃ -丙 -1-胺（I _E )。

根据上述制备方法的教导， 本领域普通技术人员无需创造性劳动即可获 得式 I _A -I _E 所包含的所有化合物。

本发明还提供了上述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺 类化合物或其在药学上可接受的盐在制备抗细 菌感染药物中的用途。 优选 地，所述抗细菌感染药物还包含其它抗细菌感 染剂和 /或在药学上可接受的 辅料。 所述在药学上可接受的辅料可以选自填充剂、 润湿剂、 黏合剂、 崩 解剂、 润滑剂、 溶剂、 增溶剂、 防腐剂、 矫味剂、 着色剂、 pH 调节剂和 抗氧化剂中的一种或多种。

本发明还提供了上述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺 类化合物或其在药学上可接受的盐在制备金黄 色葡萄球菌金黄色色素合成 抑制剂中的用途。

本发明还提供了上述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺 类化合物或其在药学上可接受的盐在制备金黄 色葡萄球菌金黄色色素合成 抑制剂类抗细菌感染药物中的用途。

本发明还提供了一种抗细菌感染方法， 该方法包括给予人或哺乳动物 所述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物或其在药 学上可接受的盐。 本发明还提供了一种抗细菌感染方法， 该方法包括给予人或哺乳动物 所述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物或其在药 学上可接受的盐， 以及其它抗细菌感染药物。 在所述抗细菌感染方法中， 所述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物或其在药 学上可接受的盐与其它抗细菌感染药物同时或 依次分别给予人或哺乳动 物。

本发明还提供了一种抗细菌感染的药物组合物 ， 该药物组合物包含所 述式 I所示的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物或其在药学 上可接受的盐。 优选地， 所述药物组合物还包含其它抗细菌感染药物和 / 或在药学上可接受的辅料。 所述在药学上可接受的辅料可以选自填充剂、 润湿剂、 黏合剂、 崩解剂、 润滑剂、 溶剂、 增溶剂、 防腐剂、 矫味剂、 着 色剂、 pH调节剂和抗氧化剂中的一种或多种。

本发明所述的药物组合物可以釆用多种药物剂 型， 例如片剂、 胶嚢、 散剂、 颗粒、 糖浆剂、 溶液、 悬浮剂、 注射剂或气雾剂等。

本发明提供了具有全新结构的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺 类化合物。 对金黄色色素抑制活性的测试结果显示， 本发明提供的化合物 对金黄色色素合成有强效的抑制活性， 可用于制备抗细菌感染药物。

本发明提供的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物分子结构 较为简单， 制备工艺简洁， 生产成本低。 在对与细菌的致病环节有密切关系 的金黄色色素合成抑制实验中均显示出较强的 抑制活性， 因此， 其不但有望 开发成新型的单一用药方式的抗菌药物， 而且还可以开发成与现有抗生素组 合给药的抗菌药物。 附图说明

图 1为显示本发明化合物 I _A -8抑制金黄色色素合成的结果的照片，从� �� 至右， I _A -8的浓度依次为 50 μΜ、 10 μΜ、 5 μΜ、 2.5 μΜ、 1.25 μΜ、 0.625 μΜ、 0.3125 μΜ和 0 μΜ;

图 2为显示本发明化合物 I _c -1抑制金黄色色素合成的结果的照片，从� �� 至右， I _c -1的浓度依次为 50 μΜ、 10 μΜ、 5 μΜ、 2.5 μΜ、 1.25 μΜ、 0.625 μΜ、 0.3125 μΜ和 0 μΜ;

图 3为化合物 Ι _Α -8抑制金黄色色素合成的量效关系曲线图� ��

图 4为化合物 Ι _Α -9抑制金黄色色素合成的量效关系曲线图� �� 图 5为化合物 I _A -6抑制金黄色色素合成的量效关系曲线图� �� 实施发明的最佳方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步详 细描述， 给出的实施例 仅为了阐明本发明， 而不是为了限制本发明的范围。 对于实施例中所有参 数以及其余的说明而言， 除另有说明外， 都是以质量 （克） 为单位。 实施例 1 6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并7]轮烯（中间体 II ) 的制备

II

将 1克 1-苯并环庚酮溶于 7.2毫升三氟乙酸中， 加入 1.5毫升三乙基硅 烷， 60°C下搅拌过夜。 反应结束后， 旋蒸浓缩除去部分三氟乙酸， 然后将反 应液倒入水水中，用乙酸乙酯萃取三次，饱和 食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离得到标题化合物， 0.91克无色油， 收率为 90%。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.17-6.96 (m, 4Η), 2.79 (dd, J = 7.0, 4.1 Hz, 4H), 1.95 -1.73 (m, 2H), 1.65 (dd, J = 10.0, 4.8 Hz, 4H)。 实施例 2 2-碘代 -6,7,8,9-四氢 -5/7- [7]轮烯（中间体 III ) 的制备

III

将 675毫克中间体 II、 1.14克 N-碘代丁二酰亚胺溶于 20毫升乙酸中， 氮气保护、 70 °C下加热反应 7小时。 反应结束后， 用适量饱和硫代硫酸钠溶 液在 0°C下淬灭反应， 加入饱和碳酸氢钠溶液， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和 食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离得到标题 化合物， 867毫克无色油， 收率为 69%。

^-NMR C ^O MHz, 丙酮） （5 7.68 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 2.74 (t, J = 10.2 Hz, 4H), 1.83 (s, 2H), 1.60 (s, 4H)。 实施例 3 6,7,8,9-四氢 -5/7- [7]轮烯 -2-曱腈 （中间体 IV ) 的制备

IV

将 272毫克中间体 III、 179毫克氰化亚铜加入到 10毫升 Ν,Ν-二曱基曱 酰胺中， 加热回流过夜。 中间体 III反应完全后， 冷却至室温， 向体系中加 入浓氨水至溶液澄清， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁 干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到标题化合物， 122毫克浅黄 色固体， 收率为 71%。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.47-7.28 (m, 2Η), 7.16 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 2.82 (t, J = 9.4 Hz, 4H), 1.86 (s, 2H), 1.65 (s, 4H)。 实施例 4 (6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）曱胺 (中间体 V ) 的制备

V

将 6.3克中间体 IV的 20毫升无水四氢呋喃溶液， 在零下 78°C、 氮气保 护下緩慢滴加到 5.6克氢化铝锂的 50毫升无水四氢呋喃混悬液中，滴加完毕 后室温下反应过夜。 向反应体系中依次加入 5.6毫升水、 5.6毫升 15%氢氧 化钠水溶液， 5.6毫升水淬灭反应， 直接在反应体系中加入无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得 5.9克浅黄色油状标题化合物， 收率为 91%。

^J H-NMR ( 400 MHz, 丙酮） 3 7.19-6.80 (m, 3H), 4.59—4.15 (m, 2H), 2.85-2.71 (m, 4H), 1.87-1.77 (m, 2H), 1.66—1.54 (m, 4H)。 实施例 5 [(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基]氨基曱酸叔丁酯 (中间体 VI ) 的制备

VI

将 5克中间体 V溶于 50毫升四氢呋喃溶液中， 加入 1.4克氢氧化钠搅 拌 5分钟， 水浴下緩慢加入 7.5克二碳酸二叔丁酯的 20毫升四氢呋喃溶液。 室温下搅拌反应 1小时。 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到标题化合 物， 7.1克浅黄色固体， 收率为 91%。

^J H-NMR ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.15-6.83 (m, 3Η), 4.41-4.10 (m, 2H), 2.87-2.59 (m, 4H), 1.93-1.74 (m, 2H), 1.62 (d, J = 2.9 Hz, 4H), 1.46 (d, J = 3.7 Hz, 9H)。 实施例 6 N-曱基 -(6, ⁷ ,8,9-四氢 _ ⁵ //-苯并 [η轮烯 -2-基）曱胺（中间体 VII ) 的制备

VII

将 8克中间体 VI的 20毫升无水四氢呋喃溶液在 0°C、 氮气保护下緩慢 滴加到 4.4克氢化铝锂的 50毫升无水四氢呋喃混悬液中，滴加完毕后加� ��回 流反应 12小时。 反应结束后， 向反应体系中依次加入 4.4毫升水、 4.4毫升 15%氢氧化钠水溶液， 4.4 毫升水淬灭反应， 直接在反应体系中加入无水硫 酸钠干燥， 过滤， 浓缩得标题化合物， 5克黄色油状物， 收率为 90%。

^J H-NMR ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.19-6.84 (m, 3Η), 3.87-3.47 (m, 2H), 2.93-2.64 (m, 4H), 2.47 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.83 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 1.74-1.47 (m, 4H)。 实施例 7 ( )-3-(4-曱苯基) -丙 -2-婦 -1-醇 (中间体 VIII-1 ) 的制备

VIII-1

将 100毫克 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛溶于 10毫升曱醇中， 水浴下分批加 入 26毫克硼氢化钠， 室温下反应 15分钟。 浓缩， 残余物中加入水， 用乙酸 乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩得标题化合 物， 99毫克油， 直接投下一步反应， 收率为 98%。 实施例 8 ( )-1-(4-曱苯基 )-3-溴 -丙烯（中间体 IX-1 ) 的制备

IX-1

将 370毫克中间体 VIII-1溶于 20毫升无水乙醚中， 氮气保护、 水浴下 加入 85微升三溴化磷， 室温下反应过夜。 反应结束后， 将反应体系倒入水 的饱和碳酸氢钠溶液中， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸 镁干燥， 过滤， 30°C下浓缩得标题化合物， 395毫克白色固体， 收率为 85%。

!Η-ΝΜΚ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) δ Ί2Ί (t, J= 7.4 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 6.61 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.34 (dt, J = 15.6, 7.8 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 7.7 Hz _; 2H), 2.34 (s, 3H)。 实施例 9 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(4-曱苯基)丙 -2-烯 -1-胺 备

将 105毫克中间体 VII、 105毫克中间体 IX-1、 83毫克碳酸钾加入到 10 毫升 N,N-二曱基曱酰胺中， 室温下反应过夜。 反应结束后， 向反应体系中加 入水， 用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓 缩， 残余物经柱层析分离， 得到标题化合物， 124毫克无色油状物， 收率为 70%。 为了将其纯化， 将化合物溶于 1毫升乙酸乙酯中， 通入氯化氢气体一 分钟，将其做成盐酸盐，蒸干溶剂，加入 1/100的石油酸 /乙酸乙酯混合溶剂， 析出白色盐酸盐固体， 抽滤， 洗涤， 得化合物 I _A -1盐酸盐。 ^-NMR为其盐 酸盐形式的数据。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.39 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 7.21 (dd, J = 17.3, 8.8 Hz, 5H), 6.86 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.37-6.15 (m, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.19 (s, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.87 (s, 1H), 2.93-2.81 (m, 4H), 2.78 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 1.88 (s, 2H), 1.64 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 320.1 [M+H]+。 实施例 10 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基 ]_3-(4-叔丁苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I -2) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(4-叔丁苯基) -丙烯醛之外， 其 余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 123毫克油状标题化合物， 收率是 82%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz,MeOD ) δ 7.45 (s, 4H), 7.28 (dd,J=22.7, 8.3 Hz, 3H), 6.99—6.80 (m, IH), 6.37-6.23 (m, IH), 4.42 (d, J = 12.6 Hz, IH), 4.20 (d, J = 13.1 Hz, IH), 4.10-3.93 (m, IH), 3.89 (d,J= 7.8 Hz, IH), 2.90 (t,J= 19.0 Hz, 4H), 2.81 (s, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.66 (s, 4H), 1.34 (s, 9H);

MS ( ESI ) m/z 362.2 [M+H]+。 实施例 11 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3- (萘 -2-基)丙 -2-烯 -1-胺

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3- (萘 -2-基) -丙烯醛外， 其余所需 原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 109毫克无色油状标题化合物， 收率是 72%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 8.03-7.78 (m, 4Η), 7.75 (d, J= 8.7 Hz, IH), 7.53 (s, 2H), 7.27 (d,J= 10.4 Hz, 2H), 7.10 (d,J= 15.9 Hz, IH), 6.55-6.41 (m, IH), 4.45 (s, IH), 4.26 (s, IH), 4.09 (s, IH), 3.96 (s, IH), 2.98-2.75 (m, 6H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (s, 4H);

MS (ESI) m/z 356.0 [M+H]+。 实施例 12 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3- (萘 -1-基)丙 -2-烯 -1-胺（ -4 ) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3- (萘 -1-基) -丙烯醛外， 其余所需 原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 113毫克无色油状标题化合物， 收率是 75%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) (5 8.19 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.98-7.86 (m, 2H), 7.84-7.71 (m, 2H), 7.56 (dt, J = 18.3, 7.2 Hz, 3H), 7.27 (dd, J = 12.6, 9.4 Hz, 3H), 6.56-6.28 (m, 1H), 4.38 (d, J = 45.7 Hz, 2H), 4.11 (s, 2H), 2.89 (s, 7H), 1.90 (s, 2H);

MS ( ESI ) m/z 356.1 [M+H]+。 实施例 13 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] _ ³ _( ² , ⁴ -二氯苯基)丙 _ ² _烯 -1-胺（化合物 I _A -5 ) 的制备

IA-5

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(2,4-二氯苯基) -丙烯醛之外，其 余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 118毫克油状标题化合物， 收率是 80%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^J H-NMR ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.73 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 10.5 Hz, 4H), 6.47-6.34 (m, 1H), 4.34 (d, J = 61.5 Hz, 2H), 4.02 (d, J = 49.2 Hz, 2H), 2.98-2.72 (m, 7H), 1.89 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 1.66 (s, 4H); MS ( ESI ) m/z 374.0 [M+H]+。 实施例 14 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(4-三氟曱基苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -6 ) 的制备

IA-6

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(4-三氟曱基苯基) -丙烯醛之 夕卜， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 114毫克油状标题 化合物， 收率是 77%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

JH-NMR ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.71 (s, 4Η), 7.26 (d,J= 8.6 Hz, 3H), 7.00

(d, J= 15.7 Hz, 1H), 6.51 (dt, J = 15.3, 7.5 Hz, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.07 (s, 1H), 3.94 (s, 1H), 2.98-2.68 (m, 6H), 1.90 (s, 2H), 1.66 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 374.0 [M+H]+。 实施例 15 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(4-氟苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -7) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(4-氟苯基) -丙烯醛外， 其余所 需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 107毫克无色油状标题化合物， 收率是 68%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.66-7.47 (m, 2Η), 7.25 (d, J= 8.4 Hz, 3H), 7.14 (t,J= 8.5 Hz, 2H), 6.91 (d,J= 15.8 Hz, 1H), 6.38-6.20 (m, 1H), 4.31 (d, J = 70.2 Hz, 2H), 3.95 (d, J =41.8 Hz, 2H), 2.86 (t, J= 11.5 Hz, 4H), 2.81 (s, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (s, 4H);

MS (ESI) m/z 324.1 [M+H]+。 实施例 16 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(4-溴苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -8) 的制备

IA-8

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(4-溴苯基) -丙烯醛外， 其余所 需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 91毫克无色油状标题化合物， 收率是 62%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz,MeOD ) (57.54 (d,J=8.2 Hz, 2H), 7.43 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.23 (d,J=8.9Hz, 3H), 6.87 (d,J= 15.6 Hz, 1H), 6.36 (dt,J= 15.2, 7.4 Hz _; 1H), 4.30 (d, J =71.2 Hz, 2H), 3.93 (d, J =49.8 Hz, 2H), 2.85 (d,J= 6.4 Hz, 4H) _: 2.79 (s, 3H), 1.88 (s, 2H), 1.64 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 384.0 [M+H]+。 实施例 17 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(4-氯苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -9) 的制备

IA-9

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(4-氯苯基) -丙烯醛外， 其余所 需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 100毫克无色油状标题化合物， 收率是 65%。 该化合物盐酸盐为白色固体。 ^! H-NMR( 400 MHz,MeOD ) (57.53 (d,J=8.4 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.26 (d,J= 8.3 Hz, 3H), 6.91 (d,J= 15.9 Hz, IH), 6.43-6.29 (m, IH), 4.43 (d, J= 12.9 Hz, IH), 4.21 (d, J= 13.0 Hz, IH), 4.04 (dd, J = 12.9, 6.8 Hz, IH), 3.97-3.80 (m, IH), 2.88 (d, J= 6.8 Hz, 4H), 2.81 (s, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.66 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 340.0 [M+H]+。 实施例 18 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(4-曱氧基苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -10 ) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(4-曱氧基苯基) -丙烯醛外， 其 余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 104毫克无色油状标题化 合物， 收率是 67%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

!Η-ΝΜΚ( 400 MHz,MeOD ) 07.41 (d,J=7.3 Hz, 2H), 7.31-7.13 (m, 5H),

6.88 (d,J= 16.2 Hz, IH), 6.32-6.21 (m, IH), 4.40 (s, IH), 4.21 (s, IH), 4.01 (s, IH), 3.88 (s, IH), 2.87 (s, 4H), 2.80 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (s, 4H);

MS (ESI) m/z 336.1 [M+H]+。 实施例 19 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基 ]_3-(4-硝基苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -11 ) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(4-硝基苯基) -丙烯醛外， 其余 所需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 112毫克黄色油状标题化合 物， 收率是 74%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz,MeOD ) δ 8.28 (d,J= 8.6 Hz, 2H), 7.77 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.26 (t,J= 10.1 Hz, 3H), 7.04 (d,J= 15.9 Hz, 1H), 6.67-6.53 (m, 1H), 4.35 (d, J =65.6 Hz, 2H), 4.03 (d, J =49.6 Hz, 2H), 2.98-2.76 (m, 7H), 1.90 (s, 2H), 1.66 (s, 4H);

MS (ESI) m/z 351.1 [M+H]+。 实施例 20 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(2-硝基苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -12) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(2-硝基苯基) -丙烯醛外， 其余 所需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 103毫克黄色油状标题化合 物， 收率是 68%。 该化合物盐酸盐为黄色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz,MeOD ) δ 8.06 (d,J= 8.2 Hz, 1H), 7.76 (q,J= 7.6 Hz, 2H), 7.61 (t,J= 6.7 Hz, 1H), 7.34 (t,J= 12.9 Hz, 1H), 7.26 (t,J= 10.4 Hz, 3H), 6.32 (dt, J = 15.2, 7.4 Hz, 1H), 4.43 (s, 1H), 4.27 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.96 (s, 1H), 2.88 (d, J =9.2 Hz, 7H), 1.90 (d,J=5.1 Hz, 2H), 1.67 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 351.0 [M+H]+。 实施例 21 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-(2-氟苯基)丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -13) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3-(2-氟苯基) -丙烯醛外， 其余所 需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 104毫克无色油状标题化合物， 收率是 66%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.65 (t,J= 7.6 Hz, 1H), 7.39 (d,J= 6.2 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 19.8, 10.6 Hz, 4H), 7.16 (t,J=9.7 Hz, 1H), 7.06 (d,J= 16.0 Hz, 1H), 6.52-6.38 (m, 1H), 4.43 (d,J= 13.1 Hz, 1H), 4.23 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 4.08 (dd,J= 13.0, 7.0 Hz, 1H), 4.01-3.83 (m, 1H), 2.97-2.63 (m, 7H), 1.82 (d,J =58.7 Hz, 2H), 1.66 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 324.7 [M+H]+。 实施例 22 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基 ]_4-苯基-丁 -2-烯 -1-胺（化 I _A -14) 的制备

除了将中间体 VIII-1 换成中间体 ( )-4-苯基-丁 -2-烯 -1-醇外， 其余所需 原料、 试剂及制备方法同实施例 8-9, 得到 89毫克无色油状标题化合物， 收 率是 56%。 该化合物盐酸盐为黄色油状物。

JH-NMR ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.36-7.13 (m, 8Η), 6.30-6.18 (m, 1H),

5.73-5.63 (m, 1H), 4.33 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 4.12 (d,J= 12.8 Hz, 1H), 3.84 (dd, J= 13.1, 6.7 Hz, 1H), 3.74-3.60 (m, 1H), 3.47 (t, J= 32.1 Hz, 2H), 2.84 (t,J = 10.0 Hz, 4H), 2.73 (s, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.60 (d, J = 42.4 Hz, 4H);

MS (ESI) m/z 320.1 [M+H]+。 实施例 23 (2 ,4 )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱 基 ]_5-苯基-戊 -2,4-二烯 -1 -胺（化合物 I _A -15) 的制备

IA-15

除了将中间体 VIII-1换成中间体 (2 ,4 )-5-苯基-戊 -2,4-二烯 -1-醇外， 其 余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 8-9, 得到 111毫克无色油状标题化 合物， 收率是 71%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.50 (d,J= 7.5 Hz, 2H), 7.40-7.32 (m, 2H), 7.27 (dd, J = 18.1, 7.7 Hz, 4H), 6.98 (dd, J = 15.3, 10.6 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 28.9, 13.4 Hz, 2H), 5.92 (dt, J = 14.8, 7.5 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.17 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 3.96 (dd, J = 13.1, 7.4 Hz, 1H), 3.87-3.75 (m, 1H), 2.84 (d, J =30.7 Hz, 4H), 2.78 (s, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 332.0 [M+H]+。 实施例 24 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-环己基-丙 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -16) 的制备

IA-16

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3- (环己基) -丙烯醛外， 其余所需 原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 53毫克无色油状标题化合物， 收 率是 33%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

iH-NMR OOMHz, MeOD) δΊ22 (d,J=7.1 Hz, 3H), 6.02 (dd,J= 15.3, 6.9 Hz, 1H), 5.84 (t, J = 10.6 Hz, 1H), 5.53 (ddd, J = 26.1, 16.2, 7.5 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 12.5, 4.5 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 30.2, 12.7 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 18.1, 10.6 Hz, 1H), 3.69-3.53 (m, 1H), 2.87 (s, 4H), 2.76 (d, J = 24.3 Hz, 3H), 2.27 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 2.13 (s, 1H), 1.90 (s, 2H), 1.84-1.58 (m, 8H), 1.27 (ddd,J=39.5, 18.7, 8.3 Hz, 6H);

MS (ESI) m/z 312.1 [M+H]+。 实施例 25 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3-环戊基-丙 -2-烯 -1-胺（ -17) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3- (环戊基) -丙烯醛外， 其余所需 原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 63毫克无色油状标题化合物， 收 率是 38%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^J H-NMR ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.22 (q,J= 7.5 Hz, 3H), 6.05 (dd,J= 15.2, 7.8 Hz, 1H), 5.60 (dt, J = 15.0, 7.4 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.13 (s, 1H), 3.80 (s, 1H), 3.70-3.58 (m, 1H), 2.96-2.80 (m, 4H), 2.75 (d,J= 18.2 Hz, 3H), 2.61 (dd,J = 16.1, 8.0 Hz, 1H), 1.90 (d, J =4.9 Hz, 4H), 1.80-1.50 (m, 8H), 1.41 (s, 2H);

MS (ESI) m/z 298.1 [M+H]+。 实施例 26 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3- (呋喃 -2-基) -丙 -2-烯 -1- 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-3- (呋喃 -2-基) -丙烯醛外， 其余所 需原料、试剂及制备方法同实施例 7-9,得到 51毫克浅黄色油状标题化合物, 收率是 31%。 该化合物盐酸盐为浅黄色固体。 Ή-NMR ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.56 (s, 1H), 7.25 (d, J= 9.3 Hz, 3H), 6.77 (d, J= 15.7 Hz, 1H), 6.52 (d, J= 12.2 Hz, 2H), 6.18 (dt, J = 15.4, 7.6 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.08-3.97 (m, 1H), 3.93-3.75 (m, 1H), 2.88 (d, J= 5.1 Hz, 4H), 2.78 (s, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 296.6 [M+H]+。 实施例 27 ( )-N,2-二曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱 基 ]_3-苯基-丙 -2-烯 -1-胺（化 I _A -19) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 ( )-2-曱基 -3-苯基-丙烯醛外， 其余所 需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 91毫克无色油状标题化合物， 收率是 57%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

JH-NMR ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.48-7.10 (m, 8Η), 6.83 (d, J= 31.7 Hz,

1H), 4.39 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 4.24 (t, J= 11.5 Hz, 1H), 3.98 (t, J= 12.4 Hz, 1H) _; 3.81 (d,J= 12.8 Hz, 1H), 2.93-2.73 (m, 7H), 2.09-1.93 (m, 3H), 1.87 (d,J= 5.3 Hz, 2H), 1.64 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 304.0 [M+H]+。 实施例 28 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基] - 丁 -2-烯 -1-胺（化合物 I _A -20)

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 丁 -2-烯 -1-醛外， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施例 7-9, 得到 93 毫克无色油状标题化合物， 收率是 49%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

iH-NMR OOMHz, MeOD ) (57.22 (dd,J=9.3, 7.0 Hz, 3H), 6.10 (dq,J = 13.1, 6.5 Hz, 1H), 5.66 (dt,J= 14.0, 6.9 Hz, 1H), 4.35 (d,J= 12.9 Hz, 1H), 4.11 (d,J= 12.8 Hz, 1H), 3.85-3.74 (m, 1H), 3.70-3.57 (m, 1H), 2.94-2.80 (m, 4H), 2.72 (s, 3H), 1.97-1.73 (m, 5H), 1.67 (s, 4H);

MS (ESI) m/z 244.1 [M+H]+。 实施例 29 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基 ]_3-苯基-丙 -2-烯 -1-胺（化 I _A -21) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成 肉桂醛外， 其余所需原料、 试剂 及制备方法同实施例 7-9,得到 116毫克无色油状标题化合物， 收率是 71%。 该化合物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) (57.53 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 7.36 (ddd, J= 10.7 10.0, 5.3 Hz, 3H), 7.25 (dd, J = 12.0, 9.5 Hz, 3H), 6.93 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.45-6.27 (m, 1H), 4.42 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.91 (s, 1H), 2.91-2.84 (m, 4H), 2.81 (s, 3H), 2.01-1.78 (m, 2H), 1.66 (d,J = 4.0 Hz, 4H);

MS ( ESI ) m/z 306.0 [M+H]+。 实施例 30 ( , )-N-(3-苯基-丙 -2-烯 -1-叉基) -(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮 烯 -2-基)曱胺（中间体 X-1 ) 的制备

X-l

将 525毫克中间体 V、 264毫克反式肉桂醛、 1克分子筛加入到 25毫升 二氯曱烷溶液中， 加热回流反应 17小时。 反应结束后， 冷却至室温， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得到标题化合物， 416毫克浅黄色固体， 收率 为 72%。

^J H-NMR ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.46-7.34 (m, 3Η), 7.27 (dt,J= 19.7, 7.1 Hz, 4H), 7.05-6.92 (m, 4H), 4.57 (d,J= 9.6 Hz, 2H), 2.70 (dd,J= 10.2, 4.8 Hz, 4H), 1.74 (d, J =5.0 Hz, 2H), 1.55 (d,J=4.2Hz, 4H)。 实施例 31 ( )-N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基] -3-苯基- 丙 -2-婦 -1-胺（化合物 I _B -1 ) 的制备

除了将 ( )-3-(4-曱苯基) -丙烯醛换成中间体 X-l 夕卜， 其余所需原料、 试 剂及制备方法同实施例 7, 得到 97毫克黄色油状标题化合物， 收率是 96%。 该化合物盐酸盐为黄色固体。

iH-NMR OOMHz, MeOD ) (57.50 (d,J=7.1 Hz, 2H), 7.36 (dt,J=20.1, 7.0 Hz, 3H), 7.31-7.13 (m, 3H), 7.02-6.75 (m, IH), 6.42-6.18 (m, IH), 4.17 (d,J = 13.7 Hz, 2H), 3.81 (dd, J = 30.6, 7.2 Hz, 2H), 2.86 (dd, J = 10.6, 5.3 Hz, 4H), 1.89 (d,J=5.5Hz, 2H), 1.66 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 292.0 [M+H]+。 实施例 32 ( )-N-乙基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基 ]_3-苯基-丙 -2-烯 -1-胺（化 I _B -2 ) 的制备

将 200毫克 I _B -1溶于 10毫升无水 N,N-二曱基曱酰胺中， 水浴下分批加 入 56毫克氢化钠， 搅拌反应 15分钟。 随后加入 0.6毫升碘乙烷， 氮气保护、 室温下反应过夜。反应结束后， 向反应体系中加入水，用乙酸乙酯萃取三次， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分离， 得 到标题化合物， 162毫克油状物， 收率为 74%。 该化合物盐酸盐为黄褐色油 状物。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.61-7.46 (m, 2Η), 7.45-7.32 (m, 3H), 7.25 (t, J = 9.0 Hz, 3H), 6.91 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.39-6.23 (m, 1H), 4.46-4.21 (m, 2H), 4.10-3.81 (m, 2H), 3.26 (dd, J = 14.4, 7.2 Hz, 2H), 2.99-2.75 (m, 4H), 1.89 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.75-1.53 (m, 4H), 1.50-1.36 (m, 3H);

MS ( ESI ) m/z 320.1 [M+H]+。 实施例 33 ( )-N-异丙基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基 ]_3-苯基-丙 -2-烯 -1-胺（化 I _B -3 ) 的制备

I _B -3

除了将碘乙烷换成 2-碘丙烷外， 其余所需原料、 试剂及制备方法同实施 例 32 , 得到 158毫克黄色油状标题化合物， 收率是 69%。 该化合物盐酸盐 为浅黄色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.44 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 7.36 (dd, J = 15.4, 7.6 Hz, 3H), 7.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 6.85 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.21-6.07 (m, 1H), 4.44 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 13.5, 7.5 Hz, 1H), 3.92 (dd, J = 13.6, 7.2 Hz, 1H), 3.76 (dt, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H) 2.95-2.74 (m, 4H), 1.88 (d, J= 5.1 Hz, 2H), 1.73-1.54 (m, 4H), 1.55-1.41 (m _; 6H);

MS ( ESI ) m/z 334.0 [M+H]+。 实施例 34 ( )-3- (噻吩 -2-基)丙烯酸乙酯 （中间体 XI-1 ) 的制备 将 1克 ( )-3- (噻吩 -2-基)丙烯酸、 1毫升二氯亚砜加入到 10毫升乙醇溶 液中， 加热回流 2 小时。 反应结束后， 浓缩， 洗涤， 得到标题化合物， 1.2 克无色油状物， 收率为 98%。

^J H-NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.78 (d, J= 15.7 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 7.29-7.19 (m, 1H), 7.09-6.97 (m, 1H), 6.24 (d,J= 15.7 Hz, 1H), 4.25 (q,J=7.1 Hz, 2H), 1.35-1.31 (m, 3H)。 实施例 35 ( )-3- (噻吩 -2-基）丙 -2-烯 -1-醇 (中间体 XII-1 ) 的制备

H

XII-1

将 549毫克中间体 XI-1溶于 25毫升无水四氢呋喃中， 氮气保护、 0°C 下緩慢加入 3.9毫升 1.5摩尔 /升的二异丁基氢化铝曱苯溶液， 室温下搅拌反 应过夜。 反应结束后， 加入曱醇淬灭反应， 过滤， 浓缩， 残余物经柱层析分 离得到标题化合物， 368毫克无色油状物， 收率为 87%。

^J H-NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.16 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 6.96 (d,J=2.7 Hz, 2H), 6.75 (d,J= 15.7 Hz, 1H), 6.20 (dt,J= 15.6, 5.7 Hz, 1H), 4.28 (d,J= 5.7 Hz 2H)。 实施例 36 ( )-1-溴 -3- (噻吩 -2-基)丙烯 (中间体 XIII-1 ) 的制备

r

XIII-1 除了将中间体 VIII-1换成中间体 XII-1夕卜， 其余所需原料、 试剂及制备 方法同实施例 8, 得到 471毫克黄色油状标题化合物， 收率是 88%。

^J H-NMR ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) (5 7.13 (s, 1H), 6.97-6.83 (m, 2H), 6.66 (t, J = 27.3 Hz, 1H), 6.22-6.03 (m, 1H), 4.08—4.05 (m, 2H)。 实施例 37 ( )-N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -3- (噻吩 -2-基) -丙 -2-烯 -1- -1 ) 的制备

除了将中间体 IX-1换成中间体 XIII-1 夕卜， 其余所需原料、 试剂及制备 方法同实施例 9 , 得到 68毫克褐色油状标题化合物， 收率是 42%。 该化合 物盐酸盐为红褐色油状物。

^J H-NMR ( 400 MHz, MeOD ) (5 7.40 (t, J = 20.3 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 11.8 Hz, 4H), 7.04 (dd, J = 35.2, 15.6 Hz, 2H), 6.20-6.00 (m, 1H), 4.40 (t, J = 11.6 Hz 1H), 4.23-4.15 (m, 1H), 4.02 (dd, J = 13.1, 6.9 Hz, 1H), 3.93-3.75 (m, 1H), 2.96-2.66 (m, 7H), 1.90 (s, 2H), 1.66 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 312.0 [M+H]+。 实施例 38 N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）亚曱 基] -l-[(lR,2R)-2-苯基环丙基] - -2 ) 的制备

Ic -2

除了将 ( )-3- (噻吩 -2-基)丙烯酸换成 (l&2i?)-2-苯基环丙烷羧酸外， 其余 所需原料、 试剂及制备方法同实施例 34-37 , 得到 52毫克黄色油状标题化合 物， 收率是 33%。 该化合物盐酸盐为黄色油状物。 ^! H-NMR( 400 MHz, MeOD ) δ 7.37-7.04 (m, 8H), 4.45 (t, J = 13.1 Hz, IH), 4.24-4.15 (m, IH), 3.37 (s, IH), 3.17 (dd, J = 20.3, 12.1 Hz, IH), 2.86 (d, J = 7.3 Hz, 7H), 1.90 (s, 2H), 1.66 (s, 4H), 1.47 (s, IH), 1.16-1.04 (m, IH), 1.01-0.82 (m, 2H);

MS ( ESI ) m/z 320.1 [M+H]+。 实施例 39 1-苯基 -3-溴丙 IV-1 ) 的制备

XIV-1

除了将中间体 VIII-1换成 3-苯基-丙 -2-炔 -1-醇外， 其余所需原料、 试剂 及制备方法同实施例 8 , 得到 458毫克黄色油状标题化合物， 收率是 84%。

JH-NMR ( 400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7.44 (d, J= 4.5 Hz, 2H), 7.32 (s, 3H), 4.16

(s, 2H)。 实施例 40 N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基）曱基] -3-苯基- 丙 -2-炔 -1-胺 (化合物 I _D -1 )

除了将中间体 IX-1换成中间体 XIV-1外， 其余所需原料、 试剂及制备 方法同实施例 9 , 得到 116毫克无色油状标题化合物， 收率是 71%。 该化合 物盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.58 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.52-7.37 (m, 3H), 7.28 (d, J = 11.3 Hz, 3H), 4.34 (d, J = 49.5 Hz, 4H), 2.99 (s, 3H), 2.88 (s, 4H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 304.0 [M+H]+。 实施例 41 N-曱基 -N-[(6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-基)亚曱基 ]-3-苯 基-丙小胺 （化合物 I _E -1 ) 的制备

除了将中间体 IX-1换成 (3-溴丙基)苯外， 其余所需原料、 试剂及制备方 法同实施例 9 , 得到 121毫克无色油状标题化合物， 收率是 75%。 该化合物 盐酸盐为白色固体。

^! Η-ΝΜΚ ( 400 MHz, MeOD ) δ 7.35-7.25 (m, 2Η), 7.26-7.10 (m, 6H), 4.19 (d, J = 50.0 Hz, 2H), 3.13 (s, 2H), 2.90-2.83 (m, 4H), 2.80 (s, 3H), 2.71 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.18-1.98 (m, 2H), 1.89 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 1.65 (s, 4H);

MS ( ESI ) m/z 308.1 [M+H]+。 实施例 42 本发明化合物抑制金黄色色素合成活性的初步 筛选实验 实验用菌株： 新鲜活化的金黄色葡萄球菌 Newman 野生株 ( Staphylococcus aureus subsp. aureus str. Newman )及其同源的 criN插入笑 变株（无金黄色色素合成） 。

实验用培养基： 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 ( Tryptone Soy broth, TSB ) , 英国 Oxid公司产品， 加单蒸水配制， 121 °C：、 15分钟灭菌后， 备用。

初筛实险方法：

( 1 )化合物的配制： 将本发明的化合物用二曱基亚砜（DMSO )溶解， 配置成浓度为 10 mM的母液。 取 100 母液加 400 的 DMSO稀释至浓 度为 2 mM, 混匀后取 250 ( 2 mM )溶液继续加等量 DMSO进行 2倍稀 释， 直至溶液浓度为 0.0625 mM, 待用。

( 2 )菌株的培养：从 TSA平板上挑取 Newman菌株单克隆至装有 4 mL 无菌 TSB培养基的试管中， 37 °C、 250 rpm培养 12小时后， 备用。

( 3 )本发明的化合物抑制金黄色葡萄球菌中金黄� �色素合成能力的初 筛：取无菌试管， 向每支试管中加入新鲜灭菌的 TSB培养基 3980 L。 随后， 向试管中分别加入 20 已配制好的浓度为 10 mM、 2 mM、 1 mM、 0.5 mM、 0.25 mM, 0.125 mM, 0.0625 mM的化合物溶液， 使本发明的化合物终浓度 分别为 50 μΜ、 10 μΜ、 5 μΜ、 2.5 μΜ、 1.25 μΜ、 0.625 μΜ、 0.3125 μΜ。 同时， 向另一支试管中加入 20 的 DMSO溶液（终浓度为 0.5% ) , 作为 无化合物的阴性对照。向每支试管中分别加入 40 培养 12小时的菌液（接 种量： 培养基 =1 : 100 ) , 并于 37 °C、 250 rpm培养 24小时后， 取出菌液 1.5 mL, 14000 g离心 2分钟后， 去上清， 观察菌株在加入特定浓度的本发明化 合物后合成的金黄色色素与阴性对照相比是否 有明显减少。

图 1和 2显示了 2个本发明化合物抑制金黄色色素合成活性初� �筛选实 验结果，其中图 1为显示本发明化合物 I _A -8抑制金黄色色素合成的效果的照 片，从左至右随着 I _A -8的浓度依次降低，金黄色色素合成量增� ��，颜色加深。 图 2为显示本发明化合物 I _c -1抑制金黄色色素合成的效果的照片，从� ��至右 随着 I _c -1的浓度依次降低， 金黄色色素合成量增加， 颜色加深。 实施例 43 本发明化合物抑制金黄色色素合成活性的 IC _5Q 测定实验 化合物浓度的选择： 根据初 结果， 确定各个化合物抑制金黄色色素合 成的能力。 对于有较强活性的化合物， 如其在初筛最低浓度时仍可强烈抑制 色素的产生， 则可按初筛类似方法继续实验， 直至化合物基本不能抑制金黄 色色素的产生。 根据实验结果， 针对每个化合物设计 11个不同的浓度梯度， 使其抑制色素合成的能力基本包含 0%~100%。

菌株的培养： 从 TSA平板上挑取 Newman菌株及 crtN突变株单克隆至 装有 4 mL无菌 TSB培养基的试管中， 37 °C、 250 rpm培养 12小时后，备用。

IC ₅₀ 的测定： 取无菌试管， 向每支试管中加入新鲜灭菌的 TSB培养基 3980 L。 随后， 向试管中分别加入 20 已配制好的 11个浓度梯度的本发 明化合物。 同时， 向另两支试管中， 分别加入 20 L的 DMSO溶液（终浓度 0.5% )作为无化合物的对照。向加入 DMSO溶液的两支试管中分别加入 40 μΐ 培养 12小时的 Newman (阴性对照 )和 crtN突变株（阳性对照 ) 。 其余加 入化合物的试管中分别加入 40 μ∑培养 12小时的 Newman菌株。 所有试管 于 37 °C、 250 rpm培养 12小时后换至 30 °C、 250 rpm继续培养 36小时以增 加色素的积累。 完成培养后， 取 3 mL菌液于 2 mL EP管中， 14000 g离心 2 分钟后， 去上清， 用 PBS緩冲液洗涤两次（每次 1 mL )后， 加入 300 曱 醇溶液， 蜗旋混勾后于 55 °C水浴锅中加热 3分钟提取色素。 随后 14000 g离 心 2分钟， 吸取曱醇提取液于 1.5 mL EP管， 再加入等量曱醇溶液， 重复提 取两次， 合并三次提取的色素。 以 criN突变体的曱醇提取液为空白对照， 测 定 450 nm波长下各样品的吸光度值，并测定无化合物� ��性对照的吸光度值。

本发明化合物在各浓度下， 色素合成的相对水平 =A450 (样品） I A450 (阴性对照） *100%。 以化合物的摩尔浓度为横座标， 以色素合成的相对水 平为纵座标， 在 Graphpad prism 5.0 软件中进行抑制剂浓度-抑制率

( log(inhibitor) response )的曲线拟合， 并由软件根据拟合结果计算化合物 抑制色素合成的 IC ₅₍₎ 。

对合成的 6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物， 选取金黄色 葡萄球菌进行抑制金黄色色素合成活性的 IC ₅ 。测试， 活性数据如表 1所示， 共发现了 14个本发明化合物对抑制金黄色色素合成具有� ��效活性， 其中半 数有效抑制浓度 IC ₅₀ <10 nM的活性化合物有 2个，半数有效抑制浓度 10 nM <IC ₅₀ <100 nM的活性化合物有 8个， 半数有效抑制浓度 100 nM <IC ₅ 。<1000 nM的活性化合物有 4个。

表 1. 6,7,8,9-四氢 -5/7-苯并 [7]轮烯 -2-烷基胺类化合物对金黄色色素合成的抑 制活性数据 ( IC ₅₀ , nM )

化合物编号 IC ₅₀ ( nM ) 化合物编号 IC ₅₀ ( nM )

IA-2 131.0 IA-16 〉10000

IA-3 15.4 IA-17 〉10000

IA-4 〉10000 IA-18 >2500

IA-5 92.2 IA-19 〉10000

IA-8 7.7 IB-1 〉10000

IA-10 11.6 IB-3 〉10000

IA-12 >5000 Ic-2 〉10000

IA-14 〉10000 IE-1 〉10000 由表 1 可以看出， 本发明的具有结构通式 I的 6,7,8,9-四氢 -5H-苯并 [7] 轮烯 -2-烷基胺类化合物大部分具有很强对金黄色色 素合成的抑制活性，说明 本发明的化合物可以发展为新型的、靶向抑制 金黄色葡萄球菌毒力因子金黄 色色素合成的抗菌药物。