CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se encuentra dentro del campo de la medicina y la farmacia, y se refiere al uso de compuestos agonistas PPARa ( receptor alfa activados por proliferadores de peroxisomas) para la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento del trastorno por uso de alcohol, en combinación con al menos un antagonista del receptor CB1 (receptor cannabinoide) y/o con un agonista PPARy (receptor gamma activados por proliferadores de peroxisomas).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El consumo de alcohol está ampliamente extendido en nuestra sociedad. Según la última Encuesta Sobre Alcohol y Otras Drogas en España (Plan Nacional Sobre Drogas, EDADES 2015-2016) el 77 % de la población entre 15 y 64 años (82,9 % de hombres y 72,1 % de mujeres) ha consumido alcohol en el último año, y el alcohol es una de las drogas de inicio de consumo más temprano (16,6 años) junto con el tabaco (Plan Nacional Sobre Drogas, EDADES 2015-2016). En este sentido, más del 75 % de los jóvenes españoles estudiantes de secundaria de entre 14-18 años consumen alcohol, un ~32 % presenta un consumo de riesgo o de atracón ( binge drinking) y un ~22 % se ha emborrachado en el último mes (Plan Nacional Sobre Drogas, ESTUDES 2014/2015). Por otra parte, en función del estudio epidemiológico ESEMeD-España (Haro et al. 2006. Med Clin (Barc.), 126(12):445-51), el alcoholismo o trastorno por abuso o por dependencia de alcohol (en inglés alcohol use disorder- AUD-) es uno de los de mayor prevalencia a lo largo de la vida en nuestro país, cifrándose en un 3,6% y siendo más frecuente en hombres (6,47%) que en mujeres (0,96%). Se hace notar que para separar el número entero del decimal se utiliza una coma.

Es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad y pocos medicamentos disponibles han llegado al mercado para ayudar a combatir este devastador trastorno crónico. Múltiples sistemas de señalización se han relacionado con el abuso del alcohol, incluidos la dopamina, la serotonina, la noradrenalina, el glutamato, los péptidos opioides, la nociceptina o el factor liberador de corticotrofina [Koob GF. 2014. Handb Clin Neurol. 125:33-54] El abuso crónico de alcohol resulta en el desequilibrio de estos sistemas de neurotransmisores, y las terapias disponibles actuales intentaron corregirlos. De hecho, este es el caso de los antagonistas opiáceos naltrexona y nalmefeno, o el antagonista del receptor NMDA glutamato acamprosato. Sin embargo, los medicamentos actualmente aprobados solo se dirigen a las subpoblaciones de pacientes que responden a estos fármacos y éstos no cubren más que una parte del total de los pacientes afectos por el trastorno por uso de alcohol. Tenemos una falta de terapias alternativas para cubrir las necesidades terapéuticas de los pacientes con AUD.

Entre los múltiples sistemas de señalización afectados por el alcohol, se ha demostrado que los lípidos relacionados con los endocannabinoides (anandamida, 2- AG, aciletanolamidas, y otros derivados del ácido araquidónico) están implicados en diferentes etapas del ciclo de adicción al alcohol, incluida la intoxicación, el comportamiento de búsqueda del alcohol y la recaída en el consumo tras un periodo de abstinencia. También en la ansiedad y los trastornos afectivos asociados a la adicción al alcohol, la neuroinflamación inducida por el alcohol o la hepatopatía relacionada con el alcohol (Serrano et al. Neuropsychopharmacology. 43, pages1840- 1850 (2018) ). Por otra parte, los estudios genéticos han identificado variantes genéticas en los genes que codifican las proteínas implicadas en la señalización endocannabinoide que se asociaron con el trastorno por consumo de alcohol. Este hallazgo confirma el importante papel de este sistema de señalización en la iniciación y el mantenimiento del abuso del alcohol.

Sobre la base de estos descubrimientos, múltiples programas de química médica han producido fármacos específicos relacionados con el sistema endocannabinoide que se han utilizado en modelos preclínicos del trastorno por consumo de alcohol. Incluyen a) agonistas y antagonistas del receptor cannabinoide CB1 , b) agonistas y antagonistas del receptor cannabinoide CB2, c) agonistas del receptor alfa activado por proliferadores de peroxisomas

(PPARa), d) agonistas del receptor gamma (PPARy) activados por proliferadores de peroxisomas, e) inhibidores de la amido hidrolasa de ácidos grasos (FAAH, una de las principales enzimas de degradación para endocannabinoides), o f) inhibidores de la captación de endocannabinoides (como AM404).

Sin embargo, la estrategia de usar un tratamiento combinatorio no se ha probado hasta la fecha, debido probablemente a que los posibles efectos secundarios no deseados derivados del uso de dos entidades químicas independientes podrían ser mayores que los derivados del uso de un solo fármaco.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Fig. 1. Inhibición dependiente de la dosis de la autoadministración de alcohol en ratas después de la administración aguda de OLHHA. Los resultados se presentan como porcentajes de las respuestas de autoadministración del grupo de control frente a Log [dosis de OLHHA, en mg/kg]. Los CE50 se calcularon mediante regresión no lineal. A. Efecto del agonista de PPARy Ciglitazone; B. ligando de oleoiletanolamida endógena de PPARa; C. Sintético agonista de PPARy .WY14643; D. Antagonista del receptor cannabinoide CB1/agonista inverso Rimonabant.

Fig. 2. A. A. Efectos de 1 mg/kg de NF10-360 en el uso del paradigma de elección de dos botellas en ratas Wistar. B. Efecto de 1 mg/kg de NF10-360 sobre la autoadministración de alcohol en ratas Wistar. Los datos son medias ± SEM. * P <0.05 vs vehículo.

Fig. 3. A. Las figuras 3A y 3B muestran los efectos del agonista de PPARa y antagonista del receptor CB1 , OLHHA, en la autoadministración de etanol (Figuras 3A y 3B) en ratas Wistar macho adultas. Las figuras 3C a 3F muestran los efectos de la administración diaria de 5 mg/kg de OLHHA a las 2, 8. y 24 horas después de su administración. OLHHA redujo el consumo de alcohol a las 2 horas después de la inyección, F (1.14) = 39.5, P <0.0001 , (Figura 3C). Este efecto se observó también a las 8 horas después de la administración de OLHHA, F (1.14) = 23.9, P <0.001 , (Figura 3D), y casi desapareció después de 24 h F (1.14) = 4.7, P = 0.047, (Figura 3E). La ingesta total de alcohol a lo largo de tratamiento OLHHA se redujo significativamente, en cualquier caso, F (1 ,14) = 5.1 , P <0.05 (Figura 3F). Por último, la figura 3G muestra los efectos de OLHHA sobre la autoadministración del opiáceo oxicodona en ratas Long-Evans. Los valores de EC50 se midieron usando regresión no lineal. Los datos son medias ± SEM. * P <0.05 vs vehículo.

Fig.4. Niveles plasmáticos de glucosa (A), triglicéridos (B), colesterol (C), ácido úrico (D), urea (E) y creatinina (F), en ratas msP o 20% de agua, y tratados a diario con vehículo u OLHHA 5 mg / kg. Actividad de transaminasas (paneles G y H) y concentraciones de citoquinas IL-6 (I) y TNFa (J) en plasma de los mismos animales. Paneles K a O, expresión de ARNm en el hígado de las principales enzimas lipogénicas [Acetil Coenzima A Carboxilasa (ACACa, panel K), Stearoyl Coenzima A Desaturasa 1 (SCD-1 , panel L), y Sintasa de Ácido Graso (Fasn, panel M) ], Cytochrome C Oxidase 4 (N) y el receptor nuclear PPARa (O) después del tratamiento con OLHHA. Los datos son medias ± SEM. * P <0.05, ** P <0.01 , *** P <0.001 vs. control respectivo.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Los autores de la presente invención han demostrado, tal como se muestra en los ejemplos, que fármacos que combinan dos perfiles farmacológicos presentan efectos farmacológicos aditivos/sinérgicos, disminuyendo la ingesta de alcohol.

USOS MÉDICOS DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN

Por tanto, un primer aspecto de la invención se refiere a una preparación combinada que comprende al menos al menos un agonista PPARa y al menos un antagonista del receptor CB1 , de ahora en adelante primera preparación combinada de la invención, para su uso en la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento del trastorno por uso de alcohol.

En la presente invención el trastorno por uso de alcohol incluye tanto los efectos del uso como los del consumo abusivo.

El término "preparación combinada" o también denominada "yuxtaposición", en esta memoria, significa que los componentes de la preparación combinada no necesitan encontrarse presentes como unión, por ejemplo en una composición verdadera, para poder encontrarse disponibles para su aplicación combinada, separada o secuencial en el tiempo. De esta manera, la expresión "yuxtapuesta" implica que no resulta necesariamente una combinación verdadera, a la vista de la separación física de los componentes.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, la primera preparación combinada de la invención comprende al menos un agonista PPARa y al menos un antagonista del receptor CB1 , preferiblemente como únicos principios activos, aunque dicha preparación puede comprender adicionalmente excipientes y vehículos farmacológicamente aceptables.

En otra realización preferida de este aspecto de la invención, el agonista PPARa de la primera preparación combinada de la invención se selecciona de la lista que consiste en: clofibrato, gemfibrozilo, fenofibrato, elafibranor, prasterona, ciprofibrato, Oleiletanolamida, CP 775146, GW 7647, WY 14643, o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, o ásteres, tautómeros, polimorfos, o hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida de este aspecto de la invención el antagonista del receptor CB1 de la primera preparación combinada de la invención se selecciona de entre los antagonistas AVE-1625, CP-945598, SLV319, V24343 AM 251 , AM 4113, AM 6545, CP 945598 clorhidrato, MJ 15, NIDA 41020, PF 514273, (±)-SLV 319, propacetamol, tetrahidrocannabivarina o los agonistas inversos que se seleccionan de entre AM 281 , Hemopressin, LY 320135, SR 141716A, TC-C 14G, o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, ásteres, tautómeros, polimorfos, hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, derivados, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones.

Si bien el uso combinatorio de dos fármacos podría ofrecer acciones aditivas/sinérgicas, los posibles efectos secundarios no deseados derivados del uso de dos entidades químicas independientes podrían ser mayores que los derivados del uso de un solo fármaco con un perfil doble. La identificación y el uso de ligandos duales, es decir, moléculas individuales que actúan en dos objetivos farmacológicos diferentes, pueden ofrecer ventajas de seguridad y eficacia.

Por tanto, una realización más preferida del primer aspecto de la invención se refiere a un compuesto que presenta simultáneamente actividad agonista PPARa y antagonista del receptor CB1 , de ahora en adelante primer compuesto de la invención, para su uso en la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de trastorno por uso de alcohol. Más preferiblemente, el compuesto es el compuesto de fórmula (I) o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, o ásteres, tautómeros, polimorfos, o hidratos farmacéuticamente aceptables, o isómeros, profármacos, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones:

Fórmula (I) A/-[1-(3,4-dihidroxifenil)propan-2-yl]oleamida (OLHHA)

Otros compuesto que presenta simultáneamente actividad agonista PPARa y antagonista del receptor CB1 se encuentran recogidos en la fórmula (III)

Fórmula (III) donde

X e Y pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H, halógeno y metilo; n es un número entero desde 1 a 4;

Ri y R ₂ pueden ser iguales o diferentes de forma independiente y se seleccionan entre H y un alquilo CrC ₆ o pueden estar unidos por un enlace simple entre los dos átomos de oxígeno, formando un nuevo ciclo;

R ₃ se selecciona entre H, alquilo CrC ₆ y alquenilo C _r C ₄ ;

R ₄ se selecciona entre H, halógeno y alquilo C _r C ₄ ;

R ₅ es un compuesto de fórmula general (IV):

donde:

R ₆ se selecciona entre H y alquilo C _r C ₄ ;

R ₇ se selecciona entre alquilo C ₈ -C ₃₀ y alquenilo C ₈ -C ₃₀ ; o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal far acéuticamente aceptable, o ásteres, tautómeros, polimorfos, o hidratos farmacéuticamente aceptables, o un isómero, profármacos, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones.

Además e independientemente de lo recogido anteriormente, los autores de la presente invención demuestran que la activación simultánea de los receptores de PPARa y PPARy da lugar a un efecto aditivo/sinérgico en la reducción del comportamiento de búsqueda de alcohol.

Por tanto, un segundo aspecto de la invención se refiere a una preparación combinada que comprende al menos un agonista PPARa y de al menos un agonista PPARy, de ahora en adelante segunda preparación combinada de la invención, para su uso en la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento del trastorno por uso de alcohol.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, la segunda preparación combinada de la invención comprende al menos un agonista PPARa y al menos un agonista PPARy, preferiblemente como únicos principios activos, aunque dicha preparación puede comprender adicionalmente excipientes y vehículos farmacológicamente aceptables.

En otra realización preferida de este aspecto de la invención el agonista PPARa de la segunda preparación combinada de la invención se selecciona de la lista que consiste en: clofibrato, gemfibrozilo, fenofibrato, elafibranor, prasterona, Ciprofibrato, Oleiletanolamida, CP 775146, GW 7647, WY 14643, o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, o ásteres, tautómeros, polimorfos, o hidratos farmacéuticamente aceptables, o isómeros, profármacos, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones.

En otra realización preferida de este aspecto de la invención el agonista PPARy de la segunda preparación combinada de la invención se selecciona de la lista que consiste en: ácido (2S)-2-(4-clorofenoxi)-3-fenilpropanoico, (2S)-2-(bifenil-4-iloxi)-3- fenilpropanoico, ácido (2S)-2-etoxi-3-{4-[2-(10H-fenoxacin-10-il)etoxi]fenil}propan oico, ácido (S)-3-(4-(2-Carbazol-9-il-etoxi)-fenil)-2-etoxi-propionico, 2-cloro-5-nitro-N- fenilbenzamida, ácido 2-{5-[3-(7-propil-3-trifluorometilbenzo[D]isoxazol-6- iloxi)propoxi]indol-1-il}etanoico, ácido 3-(5-metoxi-1 H-indol-3-il)propanoico, ácido 3-[5- (2-nitropent-1-en-1-il)furan-2-il]benzoico, 3-fluoro-N-[1-(4-fluorofenil)-3-(2-thienil)-1 H- pirazol-5-il]benzenosulfonamida, balsalazida, Glipizida, Mesalazina, Mitiglinida, Nateglinida, Repaglinida, Sulfasalazina, T131 , Telmisartan, Baroxolona, thiazolidinona, 15-deoxi-delta 12,14-prostaglandina J2, S26948, nTZDpa, LG 100754, GW 1929 clorhidrato, Edaglitazone, Ciglitazone, Inolitazone, SR 2595, GW1929, o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, o ásteres, tautómeros, polimorfos, o hidratos farmacéuticamente aceptables, o isómeros, profármacos, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones.

Si bien el uso combinatorio de dos fármacos podría ofrecer acciones aditivas/ sinérgicas, los posibles efectos secundarios no deseados derivados del uso de dos entidades químicas independientes podrían ser mayores que los derivados del uso de un solo fármaco con un perfil doble. La identificación y el uso de ligandos duales, es decir, moléculas individuales que actúan en dos objetivos farmacológicos diferentes, pueden ofrecer ventajas de seguridad y eficacia.

Por tanto, una realización más preferida del segundo aspecto de la invención se refiere a un compuesto que presenta simultáneamente actividad agonista PPARa y agonista PPARy, de ahora en adelante segundo compuesto de la invención, para su uso en la prevención, alivio, mejora y/o tratamiento de trastorno por uso de alcohol. Más preferiblemente, el segundo compuesto de la invención se selecciona de la lista que consiste en Indeglitazar, Sodelglitazar, Aleglitazar, Fenofibrato, Elafibranor, Indometacina, Reglixana, Bezafibrato, Elafibranor, Ibuprofeno, Icosapent, Pioglitazona, Rosiglitazona, Troglitazona, Muraglitazar, BMS 687453, WY-14643 (ácido pirinixico), LT175, o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, o ásteres, tautómeros, polimorfos, o hidratos farmacéuticamente aceptables, o isómeros, profármacos, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones.

Aún más preferiblemente, el segundo compuesto de la invención es el compuesto de fórmula (II) o cualquiera de sus sales, preferiblemente cualquier sal farmacéuticamente aceptable, o ásteres, tautómeros, polimorfos, o hidratos farmacéuticamente aceptables, o isómeros, profármacos, solvatos o análogos, o cualquiera de sus combinaciones.

(Fórmula II) El compuesto de fórmula (II) tiene de nombre 3-((4-bencil-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-N- (4-(pentilcarbamoil)fenil)benzamida (NF 10-360)

Otros compuesto que presenta simultáneamente actividad agonista PPARa y PPARy se encuentran recogidos en la fórmula (V):

Fórmula (V) Donde: - X es un grupo amida secundaria, que puede estar en dos posiciones diferentes, X1 y X2:

(X1)

(X2)

R es una estructura que se selecciona de entre la 1 a la 9 (R ₁ R _2, R _3, R _4, R _5, R _6, R?, Rs y R9):

Se hace notar que los dos signos (Ph) arriba indicados para X1 y X2, hacen referencia a los anillos aromáticos identificados en la formula (V) y separados por el grupo X.

R ^' es una estructura que se selecciona de entre la 1 a la 4 (R R ^' _2, R ^' 3 _, y R ^' ₄ ):

5 En una realización más preferida de este aspecto, los compuestos estarán formados por combinación R-Ph-X-Ph-R’ donde:

Para X _! y R’i, R serán preferentemente: R ₁ R _2, R _3, R _4, R _5, R ₆ y R ₇

Para X _! y R’ ₂ , R serán preferentemente: R _2, R ₃ y R ₄

Para X ₂ y R’ ₃ , R serán preferentemente: R ₈ y Rg

Para X ₂ y R’ ₄ , R serán preferentemente: R ₈ y Rg

Como ya se ha indicado, cualquiera de los compuestos de la presente invención pueden incluir isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples, incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo de la presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiómeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de la presente invención, es decir, el término isómero también se refiere a cualquier mezcla de isómeros, como diastereómeros, racémicos, etc., incluso a sus isómeros ópticamente activos o las mezclas en distintas proporciones de los mismos. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales.

Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los profármacos de cualquiera de los compuestos de la invención. El término“prodroga” o“profármaco” tal y como aquí se utiliza, comprende cualquier derivado de un compuesto de la invención, como por ejemplo derivados de aquellos compouestos de fórmula (l),por ejemplo y no limitativamente: ásteres (incluyendo ásteres de ácidos carboxílicos, ásteres de aminoácidos, ásteres de fosfato, ásteres de sulfonato de sales metálicas, etc.), carbamatos, amidas, etc.- que al ser administrado a un individuo puede ser transformado directa o indirectamente en dicho compuesto de la invención en el mencionado individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del compuesto de la invención cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación del compuesto de la invención en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de la invención en un compartimento biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.

Tal como aquí se utiliza, el término "análogo" incluye tanto a compuestos farmacéuticamente aceptables, es decir, análogos del compuesto de la invención que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento o composiciones alimentarias, como derivados farmacéuticamente no aceptables, ya que éstos pueden ser útiles en la preparación de derivados farmacéuticamente aceptables.

Los compuestos de la invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos. En este sentido, el término“solvato”, tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos del compuesto de la invención que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación conocidos por los expertos en la materia.

Para su aplicación en terapia, los compuestos de la invención, sus sales, profármacos o solvatos, se encontrarán, preferentemente, en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, y todavía más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% de compuesto de la invención, o de sus sales, solvatos o profármacos.

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y FORMAS FARMACÉUTICAS DE LA INVENCIÓN

Un tercer aspecto de la invención se refiere al uso de una composición farmacéutica que comprende al menos una preparación combinada o un compuesto de la invención, o un tautómero, una sal farmacéuticamente aceptable, un análogo o un profármaco del mismo, preferiblemente junto con un transportador o vehículo farmacéuticamente aceptable, y/o uno o más excipientes, de ahora en adelante composición farmacéutica de la invención, para su uso en la prevención, alivio y/o tratamiento del trastorno por uso de alcohol.

Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos conocidos por los técnicos en la materia y utilizados habitualmente en la elaboración de composiciones terapéuticas. En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión“cantidad terapéuticamente efectiva” se refiere a la cantidad del agente o compuesto capaz de desarrollar la acción terapéutica determinada por sus propiedades farmacológicas, calculada para producir el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de los compuestos, incluyendo la edad, estado del paciente, la severidad de la alteración o trastorno, y de la ruta y frecuencia de administración.

Los compuestos descritos en la presente invención, sus sales, profármacos y/o solvatos así como las composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros fármacos, o principios activos, adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a la de la composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención, o una sal, profármaco o solvato del mismo.

Por tanto, en una realización preferida, la composición farmacéutica además comprende otro principio activo.

Como se emplea aquí, el término "principio activo", "substancia activa", "substancia farmacéuticamente activa", "ingrediente activo" ó "ingrediente farmacéuticamente activo" significa cualquier componente que potencialmente proporcione una actividad farmacológica u otro efecto diferente en el diagnóstico, cura, mitigación, tratamiento, o prevención de una enfermedad, o que afecta a la estructura o función del cuerpo del hombre u otros animales. El término incluye aquellos componentes que promueven un cambio químico en la elaboración del fármaco y están presentes en el mismo de una forma modificada prevista que proporciona la actividad específica o el efecto.

En otra realización preferida, la composición farmacéutica de la invención comprende, preferiblemente como únicos principios activos el agonista PPARa y el antagonista del receptor CB1 , o el agonista PPARa y el agonista PPARy, o cualquiera de los compuestos con actividad dual descritos a lo largo de la presente memoria, aunque dicha composición farmacéutica pueda comprender adicionalmente excipientes y/o vehículos farmacéuticamete aceptables. Preferiblemente la composición farmacéutica de la invención comprende, por tanto, cualquiera de las preparaciones o compuestos de la invención.

Otro aspecto de la invención se refiere a una forma farmacéutica, de ahora en adelante forma farmacéutica de la invención, que comprende cualquiera de las preparaciones o compuestos de la invención.

En esta memoria se entiende por "forma farmacéutica" la mezcla de uno o más principios activos con o sin aditivos que presentan características físicas para su adecuada dosificación, conservación, administración y biodisponibilidad.

En otra realización preferida de la presente invención, las composiciones y formas farmacéuticas de la invención son adecuadas para la administración oral, en forma sólida o líquida. Las posibles formas para la administración oral son tabletas, cápsulas, siropes o soluciones y pueden contener excipientes convencionales conocidos en el ámbito farmacéutico, como agentes agregantes (p.e. sirope, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinil pirrolidona), rellenos (p.e. lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina), disgregantes (p.e. almidón, polivinil pirrolidona o celulosa microcristalina) o un surfactante farmacéuticamente aceptable como el lauril sulfato de sodio. Otras formas farmacéuticas pueden ser los sistemas coloidales, dentro de los cuales se incluyen nanoemulsiones, nanocápsulas y nanopartículas poliméricas.

Las composiciones para administración oral pueden ser preparadas por métodos los convencionales de Farmacia Galénica, como mezcla y dispersión. Las tabletas se pueden recubrir siguiendo métodos conocidos en la industria farmacéutica.

Las composiciones y formas farmacéuticas se pueden adaptar para la administración parenteral, como soluciones estériles, suspensiones, o liofilizados de los productos de la invención, empleando la dosis adecuada. Se pueden emplear excipientes adecuados, como agentes tamponadores del pH o surfactantes.

Las formulaciones anteriormente mencionadas pueden ser preparadas usando métodos convencionales, como los descritos en las Farmacopeas de diferentes países y en otros textos de referencia.

El término "medicamento", tal y como se usa en esta memoria, hace referencia a cualquier sustancia usada para prevención, diagnóstico, alivio, tratamiento o curación de enfermedades en el hombre y los animales.

La administración de los compuestos, composiciones o formas farmacéuticas de la presente invención puede ser realizada mediante cualquier método adecuado, como la infusión intravenosa y las vías oral, tópica o parenteral. La administración oral es la preferida por la conveniencia de los pacientes y por el carácter crónico de las enfermedades a tratar. La cantidad administrada de un compuesto de la presente invención dependerá de la relativa eficacia del compuesto elegido, la severidad de la enfermedad a tratar y el peso del paciente. Sin embargo, los compuestos de esta invención serán administrados una o más veces al día, por ejemplo 1 , 2, 3 ó 4 veces diarias, con una dosis total entre 0.1 y 1000 mg/Kg/día. Es importante tener en cuenta que puede ser necesario introducir variaciones en la dosis, dependiendo de la edad y de la condición del paciente, así como modificaciones en la vía de administración.

Los compuestos y composiciones de la presente invención pueden ser empleados junto con otros medicamentos en terapias combinadas. Los otros fármacos pueden formar parte de la misma composición o de otra composición diferente, para su administración al mismo tiempo o en tiempos diferentes.

Otro aspecto de la invención se refiere a una composición alimentaria tal y como una composición nutracéutica o una composición del tipo “medical food’ o alimento funcional, de ahora en adelante composición alimentaria de la invención, que comprende al menos uno de los compuestos de la invención en una cantidad eficaz para la prevención, alivio y/o tratamiento del trastorno por uso de alcohol en mamíferos, incluyendo un ser humano.

Las composiciones alimentarias preferidas se seleccionan de la lista que consiste en: una bebida, leche, yogur, queso, leche fermentada , bebida de leche aromatizada, leche de soja, cereales precocinados, pan, pasteles, mantequilla, margarina, salsas, aceites para freír, aceites vegetales, aceite de maíz, aceite de oliva, aceite de soja, aceite de palma, aceite de girasol, aceite de semilla de algodón, condimentos, aderezos para ensaladas, zumos de frutas, jarabes, postres, glaseados y rellenos, productos congelados blandos, dulces, chicles y alimentos intermedios. La composición alimentaria de la invención puede ser un suplemento nutricional o dietético. En otra realización preferida, el suplemento nutricional o dietético comprende una composición estéril que contiene el compuesto de la invención, preferentemente provisto de un revestimiento resistente a los ácidos gástricos, siendo una composición de liberación retardada. En otra realización preferida, la composición alimentaria, incluyendo el compuesto de la invención y/o el suplemento nutricional o dietético comprende "portadores" apropiados tales como diluyentes, adyuvantes, excipientes o vehículos con los que se administra el compuesto de la invención. Excipientes apropiados adecuados incluyen, pero no se limitan a almidón, glucosa, fructosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, sulfato de calcio, gel de sílice , estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol, y similares. Tales suplementos nutricionales se pueden utilizar para combatir problemas hepáticos, y ayudan a mantener la salud o un estilo de vida saludable al mamífero, preferiblemente un ser humano.

El término "tratamiento" tal como se entiende en la presente invención se refiere a combatir los efectos causados como consecuencia de una enfermedad o condición patológica de interés en un sujeto(preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano) que incluye:

(i) inhibir la enfermedad o condición patológica, es decir, detener su desarrollo;

(ii) aliviar la enfermedad o la condición patológica, es decir, causar la regresión de la enfermedad o la condición patológica o su sintomatología;

(iii) estabilizar la enfermedad o la condición patológica.

El término "prevención" tal como se entiende en la presente invención consiste en evitar la aparición de la enfermedad, es decir, evitar que se produzca la enfermedad o la condición patológica en un sujeto(preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano), en particular, cuando dicho sujeto tiene predisposición por la condición patológica.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

EJEMPLOS DE LA INVENCIÓN Material y métodos

Animales

Para los estudios de autoadministración del alcohol, 48 ratas Wistar machos adultas (8 por grupo) (Harían, Barcelona, España) que pesaban 375-425 g al comienzo de los experimentos se alojaron individualmente en un ciclo de luz/oscuridad de doce horas (se apaga a las 12:00 p.m.) en una habitación a temperatura constante (23 ± 1 °C). La comida estándar y el agua del grifo estaban disponibles ad-libitum en la jaula de la casa. A los animales se les permitió acostumbrarse a las instalaciones de alojamiento durante 2 semanas antes del comienzo del protocolo de autoadministración de alcohol. Para la autoadministración de oxicodona, se usaron ratas macho Long-Evans (275- 325 g) (Charles-River Laboratories, Raleigh, N.C.) a lo largo de este estudio. A su llegada, fueron alojados individualmente en una instalación para animales bajo un ciclo de luz-oscuridad invertido de 12 h (luz encendida a las 7:00 p.m.) con acceso libre a comida y agua. Se les permitió aclimatarse al nuevo entorno al menos durante 7 días antes del inicio del estudio. Para el consumo de alcohol en el paradigma de elección de dos botellas, utilizamos ratas wistar machos que pesan 250 g al comienzo de los experimentos, o machos sardos de Marchigian genéticamente seleccionados (msP) que prefieren el alcohol.

Todos los procedimientos experimentales en animales se realizaron de conformidad con la Directiva Europea 2010/63/U E sobre la protección de los animales utilizados con fines científicos y con la normativa española (RD 53/2013 y RD 178/2004). Todos los protocolos fueron aprobados por el Comité de Ética de la Universidad Complutense de Madrid (Estudios de Alcohol en ratas Wistar), o la Universidad de Camerino (ratas msP). Los estudios de oxicodona fueron aprobados por el Instituto Nacional de Abuso de Drogas de EE. UU. (NIDA) y fueron consistentes con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio del Consejo Nacional de Investigación de EE. UU. Se tuvo especial cuidado en minimizar el sufrimiento y la cantidad de animales para lograr nuestros objetivos de investigación.

Drogas

El NF 10-360 fue sintetizado por el Instituto de Química Médica, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, Madrid como se describe en Fresno et al., 2015 ( J Med Chem. 58(16):6639-52). N- [1- (3,4-dihydroxyphenyl) propan-2-yl] oleamida (OLHHA) se sintetizó como se describe en Almeida et al., 2010. ChemMedChem. 5(10): 1781 -7. Oxicodona HCI, sacarosa y 2-hidroxipropil^-ciclodextrina se adquirieron de Sigma/RBI (St Louis, MO, EE. UU.). La oxicodona se disolvió en solución salina fisiológica. Se disolvió 2-hidroxipropil^-ciclodextrina en 25% de 2-hidroxipropil^-ciclodextrina en agua destilada. Los fármacos de reanimación (Ciglitazone, WY 14643, oleoiletanolamida (OEA) y Rimonabant) se adquirieron en Tocris-Bioscience (Biogen Científica, Madrid, España). Se preparó una solución nueva diariamente (antes de la inyección) disolviendo los fármacos en la solución del vehículo (1 % de Tween 80 en solución salina al 0,9%). Todos los medicamentos se inyectaron en un volumen de 2 ml/kg. Se seleccionaron dosis de OLHHA y NF10-360 basadas en publicaciones previas del grupo de investigación [24, Fresno et al., 2015. J Med Chem. 27 58(16):6639-52.

Modelo de auto-administración del alcohol.

Se entrenaron animales para la auto-administración de alcohol como se ha descrito previamente (Cippitelli et al., 2005. Eur J Neurosci. 21 (8):2243-51), en la habitación (Letica, modelo LE 850, Panlab, Barcelona, España) encerrados en cajas atenuadoras de sonido y equipados con un extractor de aire. Las cámaras estaban equipadas con dos palancas retráctiles, ubicadas a cada lado de un cazo de agua.

El lado de la palanca activa se equilibra entre las sesiones para evitar el desarrollo de preferencias de localización. Presionando la palanca activa de los 0.1 mi de la solución, que estaba presente al animal seguido de un tiempo de espera de 2.5 segundos, mientras que presionar la palanca inactiva no tuvo consecuencias. Todas las sesiones de alcohol operatorio duraron 30 minutos por día durante 5 d/semana (de lunes a viernes). La cantidad de respuestas y las presentaciones de inmersión fueron registradas automáticamente por el software de la computadora. Los animales se pesaron diariamente antes de las sesiones de autoadministración del alcohol. El entrenamiento se llevó a cabo empleando una modificación del procedmiento tradicional de desvanecimiento de la sacarina (Samson et al., 1999) descrito en Alen et al., 2009 ( Nicotine Tob Res. 11 (11 ): 1304-11). Durante los primeros 3 días de entrenamiento, los animales recibieron 0.2% de solución de sacarina en el cucharón para facilitar la adquisición del nivel de presión de la palanca. A partir de entonces, la siguiente secuencia en un ratio 1 fijo fue usado: 0.16% sacarina y 2% de alcohol durante tres sesiones, 0.12% de sacarina y 4% de alcohol para tres sesiones, 0.08% de sacarina y 6% de alcohol durante cuatro sesiones, 0.04% de sacarina y 8% de alcohol por cuatro sesiones, 0.02% de sacarina más 10% de alcohol, y finalmente 10% de alcohol solo por el resto de las sesiones. La primera investigación fue relativamente similar, seguida de un período de al menos 6 semanas de acceso al alcohol (10% p/v). Ciglitazona (0.01 , 1. 5 y 20 mg / kg), OEA (0.1 , 1.5 y 20 mg/kg), WY 14643 (0.1 , 5, 20 y 40) mg / kg), Rimonabant (0.03, 0,3, 1 y 3 mg/kg), OLHHA (0.01 , 0.1 , 1 y 5 mg / kg) y NF10-360 (1 mg / kg). Los medicamentos se inyectaron 30 minutos antes de la sesión de autoadministración. Los animales se dejaron entonces durante un período de 24 horas, y luego los 30 minutos diarios. Las sesiones de autoadministración de EtOH se reintrodujeron y monitorizaron. Consumo de alcohol en el modelo de elección de dos botellas.

La ingesta voluntaria de alcohol se evaluó en una prueba de elección de dos botellas, como se describió anteriormente [Stopponi et al., 2011. Biol Psychiatry. 69(7):642-]. Ratas Wistar o seleccionadas por su preferencia alcohólica (msP) fueron entrenados para beber agua, 10% de alcohol (v / v) (Wistar) o 20% de alcohol (msP) durante 24 horas por día hasta que se alcanzó una base de consumo de alcohol estable. En este punto, las ratas se dividieron en diferentes grupos (n = 9-10 / grupo) para ser tratados con vehículo, NF10-360 (0 o 1 mg / kg) u OLHHA (5 mg / kg). En el caso de ratas msP, el tratamiento con OLHHA se continuó durante 14 días consecutivos, y el fármaco o vehículo se administró una vez al día antes del comienzo del período oscuro del ciclo de luz-oscuridad. Los consumos se registraron diariamente a las 2, 8 y 24 horas tras la administración de OLHHA. El consumo de alcohol, agua y alimentos se monitoreaba diariamente. Los animales se sacrificaron el día 14, 2 horas después de la última administración de OLHHA.

Autoadministración de oxicodona

Lo estudios de autoadministración de oxicodona se realizaron como se describe anteriormente en [You et al., 2017. Neuropharmacology. 126:190-199] Las ratas utilizadas en los experimentos de auto-administración de oxicodona se implantaron con un catéter intravenoso (i.v.) (Braintree Scientific, Inc., Braintree, MA, EE.UU.). Cada rata se anestesió primero con pentobarbital (30 mg/kg i.p.) suplementado con hidrato de doral (140 mg/kg, i.p.) y luego una pequeña incisión se hizo a la derecha de la línea media del cuello para exponer la vena yugular externa. Un extremo del catéter estaba al lado del catéter llegando a la aurícula derecha. El catéter se asegura entonces a la vena con sutura de seda y el otro extremo alimenta por vía subcutánea en la parte posterior del cuello para salida cerca de la parte posterior del cráneo, conectado a una cánula doblada de calibre 24 de acero inoxidable (Plastics One Inc., Roanoke, VA, EE. UU.) con una cánula ficticia y, durante la experimentación, una línea de infusión. El catéter y la cánula guía se fijaron al cráneo con cuatro tornillos y pernos de acero inoxidable. La incisión fue luego suturada. Después de la cirugía, los catéteres se lavaron a diario con una solución de gentamicina-heparina-solución salina (0,1 mg/ml de gentamicina y 30 Ul/ml de heparina, ION Biochemicals, Cleveland, OH, EE.UU.) como medida de precaución contra la obstrucción del catéter y la infección. Se permitió que los animales se recuperaran durante al menos 5 días antes de que comenzara el entrenamiento comportamental. La autoadministración de oxicodona se lleva a cabo en una cámara operante con dos palancas de respuesta y una caseta de luz de 15 W (Med Associates Inc., Georgia, VT, EE. UU.)· Las dos palancas se ubicaron a 6.4 cm por encima del piso de la cámara; estaba activo mientras que el otro estaba inactivo. Han estado 12 cm por encima del amanecer activo (Xi y Gardner, 2007). Después de la recuperación total de la cirugía, las ratas se entrenaron para autoadministrarse oxicodona. Para ello, fueron transportadas cada día de entrenamiento a la sala de pruebas y conectadas por un tubo de polietileno (protegido por un muelle helicoidal de acero) y a una bomba de jeringa con un canal giratorio líquido (Razel Sci., Stamford, CT, EE.UU.) controlada por microprocesador, y colocado en la cámara. Cada sesión de entrenamiento comienza con la presentación de la respuesta a la cámara y la iluminación de la luz de la casa, que se mantuvo al final de cada sesión de entrenamiento. Cada rata se ha entrenado diariamente en sesiones de 3 horas para la persona activa que busca infusiones de oxicodona en un esquema de refuerzo de ratio fija 1 (FR-1). La respuesta en la palanca activa resultó en la activación de una señal compuesta de tono claro y la infusión de una solución de oxicodona de 0,08 mi durante 4,6 s. Este tiempo también es un período de tiempo de espera durante el cual el tono de luz se mantiene en la respuesta del animal. La respuesta de cada animal se ha registrado durante todo el proceso de entrenamiento y prueba.

Muestreo de plasma y de hígado

Las ratas fueron asesinadas 2 horas después de la última dosis. Se anestesiaron animales tratados y tratados con OLHHA con pentobarbital sódico (50 mg kg-1 , i.p.), y se recogieron muestras de sangre y de hígado. La sangre se centrifugó (2100 g durante 8 min, 4°C) y el plasma se mantuvo para un análisis posterior. Las muestras de hígado se congelaron rápidamente en N2 líquido y se almacenaron a -80 ° C hasta el análisis.

Medidas metabólicas y de citoquinas en plasma

Los siguientes metabolitos, hormonas metabólicas y citoquinas se midieron en plasma: Los metabolitos glucosa, triglicéridos, colesterol, el ácido úrico, urea, creatinina, aspartato transaminasa (GOT), alanina transaminasa (GPT), interleucina-6, factor de necrosis tumoral a (TNF-a) se analizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante en un analizador automático Hitachi 737 (Hitachi, Tokio, Japón). Los niveles de leptina, IL-6 y TNF-a se midieron usando kits comerciales de ensayo de inmunoabsorción ligados a enzimas de rata (Abcam, Cambridge, Reino Unido). Aislamiento de ARN y análisis RTqPCR

La reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT qPCR) se utilizó para medir la cuantificación relativa de los niveles de ARNm de las enzimas y proteínas relacionadas con la oxidación de ácidos grasos lipogénicos mano, como se describe en estudios previos con OLHHA. [Decara et al., 2015. Dis Model Mech. 8(10): 1213-25] El ARNm total se aisló usando el método Trizol®, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Gibco BRL Life Technologies, Baltimore, MD, EE. UU.). Los ADNc resultantes se utilizaron como plantillas para la RT qPCR con un sistema iCycler (BioRad) utilizando el kit Quanti-Test SYBR Green PCR (Qiagen, Hilden, Alemania). Los autores fueron proporcionados por Sigma-Proligo (Proligo France SAS, París, Francia). La cuantificación se realizó de acuerdo con los siguientes criterios [Decara et al., 2015. Dis Model Mech. 8(10): 1213-25]. Los valores absolutos de cada muestra se normalizaron para observar el ARNm (gen constitutivo) b-actina, que se utilizó como referencia estándar.

Análisis de datos

GraphPad Prism v5.04 (GraphPad Software, San Diego, CA, EE. UU.). Los datos fueron medios ± SEM. Los valores de CE ₅₀ para la inhibición de la autoadministración de alcohol, cocaína u oxicodona se calcularon usando ecuaciones de regresión no lineales incorporadas. La suplementación con alcohol y el análisis de los efectos de la variabilidad (ANOVA) con medidas repetidas (factores: tratamiento y tratamiento). En cuanto a los parámetros metabólicos plasma, citoquinas y de ARNm de hígado resultados de la expresión de circulación se analizaron mediante ANOVA de dos vías (factores: tratamiento (vehículo/OLHHA) y la bebida de acceso (octanol/agua)) y ha se realizó prueba múltiple post hoc de comparación (Bonferroni). Se consideró que el valor P inferior a 0,05 es estadísticamente significativo.

Resultados

1. Acciones de los ligandos de referencia para los receptores PPARa, PPARy y CB1 en la autoadministración del alcohol (Figura 1)

Con el fin de que tener una visión comparativa de la eficacia de los agonistas de referencia para los receptores PPARa y PPARy, CB1 y de antagonistas de los receptores de cannabinoides en la autoadministración de alcohol, se calculó la CE 50 y la inhibición máxima de ciglitazona (referencia PPARy agonista), OEA (ligando endógeno para los receptores PPARa), Wy14643 (estándar de referencia para receptores de ligando PPARa) y Rimonabant (también codificado SR141716A el antagonista del receptor canabinoid referencia/agonista inverso). De estos compuestos, Rimonabant logró la máxima inhibición, seguida de OEA, ciglitazone y WY14643. Los agonistas de los receptores PPARy y PPARy, que son selectivamente interesantes, parecen estar limitados en el efecto inhibidor de la autoadministración del alcohol, alcanzando efectos máximos dosis de 20 mg/kg. Valores de CE50 para los efectos de esos compuestos (CI50): Ciglitazona (Figura 1 A): CE50 = 5,9 (IC = 2,7 a 15,7); OEA (Figura 1 B): EC50 = 6.5 (IC = 3.2 a 13.2); WY14643 (Figura 1C): CE50 = 23,6 (IC = 11 ,3 a 60,9); Rimonabant (Figura 1 D): EC50 = 0.5 (IC = 0.5 a 1.1).

2 Efectos del doble PPARa/ agonista NF 10-360 sobre la ingesta de alcohol y la autoadministración de alcohol (Figura 2).

Utilizamos una dosis de 1 mg / kg del compuesto NF 10-360 para analizar los efectos de este compuesto en el consumo voluntario de alcohol (Figura 2A) y la autoadministración (Figura 2B). Los datos indican que este compuesto redujo el consumo de alcohol, F (1.84) = 4.33, P <0.05. Este compuesto también redujo los estudios de autoadministración de alcohol, donde NF10-360 redujo las respuestas operantes a una solución de etanol al 10%, t = 3.26, df = 10, número de pares = 11 , P <0.01.

3 Efectos del ligando OLHHA dual del receptor PPARa/CB-i en la autoadministración del alcohol (Figura 3A y 3B)

Se estudiaron los efectos del agonista de PPARa antagonista del receptor CB1 OLHHA en la autoadministración de etanol (Figuras 3A y 3B) en ratas Wistar macho adultas. Esta es una tasa de respuesta reducida dosis-dependiente para una dosis máxima de 5 mg/kg (Figura 3B). EC50 = 0.2 mg / kg (IC = 0.08 a 0.4). Este efecto no afectó la autoadministración del alcohol cuando se analizó 24 horas después de su administración (Figura 3B).

4 Efectos del ligando doble del receptor PPARa/CB1 OLHHA sobre el consumo voluntario de alcohol en ratas MSP que prefieren el alcohol (Figura 3C a 3F)

En este estudio, informamos los efectos de OLHHA en el paradigma de elección de dos botellas, estudiamos los efectos de la administración diaria de 5 mg/kg 2, 8 y 24 horas después de su administración, (Figuras 3C a 3F). OLHHA redujo el consumo de alcohol a las 2 horas después de la inyección, F (1.14) = 39.5, P <0.0001 , (Figura 3C). Este efecto se observó también a las 8 h después de la administración de OLHHA, F (1.14) = 23.9, P <0.001 , (Figura 3D), y casi desapareció después de 24 h F (1.14) = 4.7, P = 0.047, (Figura 3E), lo que sugiere que los efectos farmacológicos de OLHHA tienen un límite de tiempo. Esta observación está de acuerdo con la ausencia de efectos de OLHHA en la autoadministración de alcohol cuando este comportamiento se prueba 24 horas después de su administración (Figura 4). La ingesta total de alcohol de grabación a lo largo de tratamiento OLHHA se redujo significativamente, en cualquier caso, F (1 ,14) = 5.1 , P <0.05 (Figura 3F), indicando indicación reducción a largo plazo de la ingesta de alcohol como resultados de OLHHA tratamiento diario Cuando se hace etanol disponible continuamente

5 Efectos del ligando OLHHA dual del receptor PPARa/CB 1 en la autoadministración de oxicodona (Figura 3G).

Debido a las conocidas acciones inhibitorias de la administración del receptor cannabinoide CB1 en la autoadministración de opioides, probamos si OLHHA era capaz de reducir la autoadministración de oxicodona en Long-Evans. OLHHA redujo la autoadministración de oxicodona con una inhibición máxima que alcanzó el 45% de las respuestas de control para este opioide. La CE50 calculada fue de 11 ,3 mg / kg (IC = 5,1 a 25,1). Estos datos sugieren que la potencia de OLHHA para reducir la oxidación es al menos 50% más baja que la observada para el alcohol. Es importante señalar que se ha demostrado que el agonismo de PPARa afecta las acciones de los opioides en los circuitos dopaminérgicos del antagonismo del receptor CB1.

6 Efectos de la administración repetida del ligando OLHHA del receptor dual PPARa / CB 1 en los parámetros metabólicos plasmáticos y hepáticos en ratas MSP que beben alcohol (Figura 4).

Debido a que la administración de alcohol podría tener un impacto deletéreo en el metabolismo hepático, y se reportó que el OLHHA produce una mejoría en el metabolismo de lípidos en el hígado de ratas adiposas con deficiencia de leptina, se probó si la administración de OLHHA podría tener un impacto en el metabolismo hepático, eventualmente mejorando o agravando la toxicidad del etanol (ver Figura 4). Los resultados obtenidos indican que como se describió anteriormente en ratas grasas con deficiencia de leptina, el tratamiento con OLHHA redujo los triglicéridos circulantes, F(1 ,28)=25.6, P<0.001 , (Figura 4B).colesterol, F(1 ,28)=25.4, P0.001 , (Figura 4C); y ácido úrico, F(1 ,28)=17.4, P<0.01 , (Figura 4D), reduciendo ligeramente los niveles de glucosa (Figura 4A) en ratas expuestas al alcohol F(1 ,28)=5.6, P<0.02. OLHHA no indujo toxicidad (ningún impacto sobre las transaminasas, (Figuras 4G y 4H) ni en la creatinina, (Figura 4F)) ni inflamación (ningún efecto tanto en las concentraciones plasmáticas de IL-6 (Figura 4I) como en las de TNF (Figura J)). Además, como se describe para la mayoría de los agonistas PPAR y antagonistas CB1 , OLHHA inhibió la expresión de ARNm de enzimas lipogénicas como Fasn, F(1 ,28)=25.5, P0.001 (Figura 4M) y SCD1 , F(1 ,28)=13.1 , P<0.01 (Figura L), e incrementó la expresión de citocromo c oxidasa 4, F(1 ,28)=10.3, P<0.01 (Figura 4N) y receptor PPAR, F(1 ,28)=23.6, P<0.001 , (Figura 40), sugiriendo la promoción del metabolismo oxidativo.