DOMAINE DE L'INVENTION

La présente invention concerne une composition cosmétique, en particulier une composition cosmétique de soin destinée à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier de la peau du visage et/ou du corps.

ETAT DE LA TECHNIQUE

La peau est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. Elle est quotidiennement soumise aux effets de facteurs d’origine exogène (ex : rayonnements UV, variations de température, pollution atmosphérique, fumée de cigarette...) et/ou endogène (ex : hormones...).

Le vieillissement entraîne des altérations au niveau de la peau du corps et/ou du visage y compris des lèvres, zones particulièrement soumises aux effets délétères de l’environnement, telles que des rides et ridules, une peau ayant perdu sa fermeté, sa souplesse et son élasticité, une diminution de l’épaisseur de l’épiderme liée notamment à un ralentissement du renouvellement des cellules de la peau.

On connaît de l’art antérieur de très nombreux actifs anti-âge tels que des peptides, des vitamines, des antioxydants et des extraits végétaux. On peut citer notamment les peptides Acetyl Hexapeptide-8 de la société Lipotec et Palmitoyl Tetrapeptide-7 de la société Sederma.

On connaît également l’utilisation de certains extraits de roses en anti-âge comme l’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat décrit dans la demande de brevet FR3090380.

Toutefois, il existe un besoin constant de trouver de nouveaux composés ou de nouvelles associations d’actifs ayant des propriétés améliorées dans la prévention et/ou le vieillissement de la peau.

De manière inattendue, la Demanderesse a mis en évidence un effet in vitro anti-âge synergique entre les peptides (Acetyl Hexapeptide-8 et le Palmitoyl tétrapeptide-7) et un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat. Elle a également démontré une synergie anti-âge entre les peptides (Acetyl Hexapeptide-8 et le Palmitoyl tétrapeptide-7), un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat et un extrait de roses sous la forme d’une fraction bioactive isolée obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat.

EXPOSE DE L'INVENTION

La présente invention porte donc notamment sur une composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable :

(i) Un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable,

(ii) Un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8, et

(iii) Un tétrapeptide Pal-GQPR-NH2 ou Pal-GQPR-OH, en particulier le tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7.

La présente invention porte encore sur un procédé cosmétique non thérapeutique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres comprenant l’application sur ladite peau et/ou lesdites lèvres, en particulier la peau, d’une composition cosmétique telle que définie dans la présente invention.

L’invention porte également sur une association d’actifs cosmétiques comprenant :

(i) Un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable,

(ii) Un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8,

(iii) Un tétrapeptide Pal-GQPR-NH2 ou Pal-GQPR-OH, en particulier le tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7, et

(iv) Eventuellement en outre une fraction bioactive isolée obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat et comprenant au moins 500 pg/pL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose, et/ou au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium.

L’invention porte en outre sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique de l’association d’actifs cosmétiques telle que définie dans la présente invention, comme association active pour prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de densité et/ou de fermeté de la peau, la diminution de l’épaisseur de l’épiderme, la diminution de la différenciation et/ou prolifération des cellules épidermiques, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.

L’invention porte encore sur un ensemble cosmétique comprenant :

(i) Un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable,

(ii) Un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8,

(iii) Un tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7, et

(iv) Eventuellement en outre une fraction bioactive isolée obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat et comprenant au moins 500 pg/pL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose, et/ou au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium, caractérisé en ce que l’un au moins des actifs (i) à (iv) est conditionné dans une composition distincte des autres actifs, et en particulier chaque actif est conditionné dans une composition distincte.

L’invention porte enfin sur un procédé cosmétique comprenant l’application successive, sur la peau et/ou les lèvres, des compositions de l’ensemble cosmétique tel que défini dans la présente invention.

DESCRIPTION DES FIGURES

[Fig. 1] Effet des différents actifs et associations d’actifs selon l’invention sur l’expression protéique du facteur KI67 dans des cultures de peau humaine reconstruite.

[Fig. 2] Effet des différents actifs et associations d’actifs selon l’invention sur l’épaisseur de l’épiderme dans des cultures de peau humaine reconstruite.

[Fig. 3] Effet des différents actifs et associations d’actifs selon l’invention sur l’expression protéique de Collagène VII dans des cultures de peau humaine reconstruite.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION

Ainsi, la présente invention porte donc notamment sur une composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable : (i) Un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable,

(ii) Un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8, et

(iii) Un tétrapeptide Pal-GQPR-NH2 ou Pal-GQPR-OH, en particulier le tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7.

Les roses ou rosiers utilisés comme matériel végétal pour la préparation des extraits utilisés selon l’invention correspondent au rosier ou rose ‘Jardin de Granville®’, une variété hybride proposée exclusivement par « Roses anciennes André Eve S.A.S » et protégée par Certificat d’Obtention Végétale sous le N°20110345 avec pour espèce la dénomination Rosa L. et pour la variété la dénomination EVANRAT. Ce rosier buisson appartient au groupe des hybrides modernes, qui, de mai à octobre, se couvre de roses en permanence, montrant ainsi un excellent caractère remontant.

Extrait de bois de rose et procédé de préparation

L’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat ou rose ‘Jardin de Granville®’, de préférence de bois de rose d’été, utilisé selon l’invention est obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable, selon les techniques décrites dans la demande FR3090380.

On parlera indifféremment d’extrait aqueux de bois de rose ou de bois de rosier ou d’extrait polaire de bois de rose ou de bois de rosier ou d’extrait hydrophile de bois de rose ou de bois de rosier ou d’éco-extrait obtenu par un procédé d’éco-extraction de bois de rose ou de bois de rosier dans la description.

L’expression « solvant polaire » signifie que le solvant a une valeur d’indice de Polarité qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L’indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de changement d’état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d’une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER : Classification of the solvent properties of common liquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230.

Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d’un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H. A titre de solvant polaire cosmétiquement acceptable, on choisit un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi l’eau, les alcools en C1-C4, tel que l’éthanol, les glycols, tels que l’éthylène glycol, le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol, et leurs mélanges. De préférence, on utilise l’eau.

Selon un mode particulier, ledit extrait est caractérisé en ce qu’il comprend de l’eau en une teneur allant de 94 à 96%, une teneur en extrait sec allant de 3 à 5% et des conservateurs en une teneur allant de 0,5 à 1 % en poids par rapport au poids total de l’extrait.

Matériel végétal

On distingue deux types de bois de rose selon le moment de l’année où ils sont récoltés :

- Les bois d’hiver, généralement récoltés entre les mois de novembre et d’avril

- Les bois d’été, généralement récoltés entre les mois de mai et d’octobre.

Selon un mode particulier et préféré, on utilisera des bois d’été. On parlera indifféremment dans la description de bois de rose ou bois de rose d’été.

Les bois de rose selon l’invention sont obtenus à partir de roses entières fraichement coupées et sont isolés du reste de la plante par séparation manuelle ou mécanique.

Dans un mode de réalisation particulier, les bois de rose sont directement utilisés en vue de l’extraction.

Dans un autre mode de réalisation, les bois de rose sont préalablement séchés avant extraction.

Selon un mode particulier et préféré, le bois de rose est broyé préalablement à l’étape d’extraction.

Les bois de rose comprennent des sucres monosaccharides (fructose, glucose), et polysaccharides en particulier disaccharides, des polyphénols (catéchine), des acides aminés (majoritairement acide aspartique tyrosine et arginine), des minéraux (cendres, sodium, potassium, calcium), des flavonoïdes (pour la plupart glycosylés) et des tanins.

En particulier, le calcium améliore la différenciation épidermique et renforce la structure de la peau, tandis que le potassium amplifie l’hydratation cutanée et booste l’assimilation de l’énergie. Les phytosucres (fructose, glucose) sont destinés à gorger les cellules cutanées d’énergie. L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est un extrait concentré en composés naturels polaires. L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention est distinct d’une eau de rose. Il s’agit ici d’un extrait de bois de rose mettant en oeuvre l’extraction de composés naturels de bois de rose en présence de solvants aqueux (polaire) avec ou sans ajout de modificateur de pH, et une mise en oeuvre, dans la formulation, sous la forme d’une solution ou concentré aqueux, le solvant du concentré pouvant être le solvant d’extraction et/ou un solvant additionnel.

Selon un mode particulier, l’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention comprend en outre en faible proportion un extrait de fleurs de rose représentant de 0,01 à 1 %, de préférence de 0,05 à 0,5%, de préférence 0,1 à 0,2% de l’extrait aqueux total de rose selon l’invention. Dans ce mode de réalisation, le matériel végétal d’origine comprend des bois de rose et des fleurs de rose dans une proportion 0,01 % fleurs pour 99,99% de bois à 1 % fleurs pour 99% de bois.

Procédé d’extraction

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention peut être obtenu selon différents procédés d’éco-extraction connus de l’homme du métier et notamment celui décrit ci-après.

Selon un mode particulier et préféré, on utilisera comme matériel végétal dans les procédés d’extraction adaptés à l’invention décrits ci-après, des bois de rose de la variété Evanrat, de préférence la rose Jardin de Granville®, de préférence des bois de rose préalablement séchés.

Les bois peuvent être utilisés frais, congelés ou préalablement séchés à l’aide d’outils de séchage conventionnels et connus de l’homme du métier, comme par exemple le séchage à l’air libre, en étuves, par lyophilisation ou zéodratation. Ainsi, selon un mode de réalisation, et préalablement à l’étape d’extraction elle-même, les bois peuvent avoir été séchés et/ou broyés. Selon un autre mode de réalisation, les bois sont utilisés humides puis broyés.

Selon un mode particulier, les bois sont broyés avant extraction, par exemple au moyen d’un mortier, d’un cryobroyage, d’un mixeur, d’un broyeur traditionnel ou d’un centrifugeur selon les méthodes connues de l’homme du métier.

L’extrait aqueux de bois de rose selon l’invention peut être obtenu en particulier selon des procédés d’extraction enzymatique. Selon les molécules que l’on cherche à extraire, les enzymes seront adaptées aux parois à hydrolyser pour accéder à ces dites molécules. Avantageusement, on pourra notamment utiliser des enzymes de type cellulase, hémicellulase, pectinase ou protéase, seules ou en combinaison.

On pourra ainsi utiliser une cellulase pour libérer le glucose et la cellulose ; une hemicellulase pour libérer les mono et oligomères de sucres réduits ; une pectinase pour libérer les acides uroniques ; et avantageusement une protéase pour hydrolyser les protéines de structure et améliorer la lyse de la matière première.

Dans un mode de réalisation préféré, l’éco-extraction est réalisée au moyen du protocole décrit dans la demande de brevet WO2011045387 (correspondant à la demande de brevet FR2351461) au nom de l’institut National Polytechnique de Lorraine INPL. Il s’agit d’une technologie alternative répondant aux contraintes réglementaires et environnementales tout en restant compétitif économiquement. Ce procédé innovant, permet d’extraire de la matière végétale, en une seule étape, trois types de produits à savoir une huile (riche en nutriments polyphénols, stérols, vitamine E...), un extrait aqueux ainsi qu’un tourteau (phase solide).

Ainsi, dans un mode de réalisation de l’invention, l’extrait aqueux de bois de rose utilisé selon l’invention est obtenu par un procédé d’extraction enzymatique comprenant les étapes comprenant les étapes : a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé présentant une taille de particule appropriée, b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase, c) incubation sous agitation du bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés, d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide, et e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

Ledit extrait de bois de rose utilisé selon l’invention étant obtenu après l’étape de séparation (e). Selon un mode particulier, à l’étape a), la taille de particule appropriée de la matière végétale est avantageusement obtenue par broyage de ladite matière végétale. Le broyage doit être le plus fin possible pour favoriser l'action des enzymes. Idéalement, toutes les particules doivent avoir une taille proche de 50 pm, de préférence proche de 10 pm.

De préférence, la masse d'eau ajoutée à la matière végétale est égale à 1 à 2 fois la masse de ladite matière végétale et ne dépasse pas cette quantité.

En particulier à l’étape b), le rapport entre l'activité de la pectinase et l'activité de la cellulase étant d'au moins 0,14, de préférence compris entre 0,3 et 2,5, et plus préférentiellement entre 0,35 et 0,45, et le rapport entre l'activité de la pectinase et l'activité de l'hémicellulase étant d'au moins 7.10 ^-3 ; de préférence compris entre 1.10 ^-2 et 0,5, et plus préférentiellement entre 1.10 ^-2 et 2.10 ^-2 .

Plus particulièrement, le mélange enzymatique utilisé contient au moins une cellulase, au moins une hemicellulase, au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase. Selon un mode particulier, la ou les cellulase(s), hemicellulase(s) et pectinase(s) représentent 75% du mélange enzymatique et la ou les protéase(s) représentent 25% dudit mélange enzymatique. Selon un mode particulier, les cellulases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique, les hémicellulases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique et les pectinases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique. Et avantageusement les protéases sont présentes en une teneur allant de 1 à 50%, de préférence de 20 à 30% en poids du mélange enzymatique.

Dans un mode de réalisation préféré le mélange enzymatique utilisé contient 25% de cellulases, 25% d’hémicellulases, 25% de pectinases et 25% de protéases.

De préférence, la quantité utilisée du mélange enzymatique tel que défini ci-dessus est comprise entre 0,25% et 10%, de préférence entre 1 % et 6%, en volume du mélange eau/matière végétale.

Avantageusement, l'incubation selon l'étape c) est réalisée pendant 2 à 20 heures, de préférence entre 4 et 12 heures, à une température comprise entre 25°C et 75°C, de préférence entre 40°C et 60°C, et de préférence autour de 50°C. La réaction d'hydrolyse est ensuite stoppée par désactivation des enzymes par chauffage de préférence entre 80°C et 105°C pendant par exemple 5 à 20 minutes

Puis le milieu réactionnel est séparé, selon l'étape d), en utilisant toutes les techniques de séparation connues adaptées, telle que la centrifugation ou la décantation.

Selon un mode particulier, le mélange est préfiltré sur tamis de 0.8mm puis 0.5mm afin de retirer la partie le plus importante de la phase solide, puis une filtration stérilisante est avantageusement réalisée sur plaques clarifiantes d’une taille de pores de 0.2pm, à une pression de 2 Bars.

La phase aqueuse obtenue après filtration stérilisante est stabilisée avec les conservateurs (acide citrique, sorbate de potassium, benzoate de sodium).

Selon un mode de réalisation particulier et préféré, la composition cosmétique selon l’invention est caractérisée en ce que l’extrait aqueux de bois de rose est obtenu par un procédé d’extraction enzymatique comprenant les étapes : a) addition d'eau au bois de rose préalablement broyé présentant une taille de particule appropriée, b) addition d'un mélange enzymatique contenant au moins une cellulase, au moins une hémicellulase et au moins une pectinase, et avantageusement en outre au moins une protéase, c) incubation sous agitation du bois de rose préalablement broyé et du mélange enzymatique pour libérer dans le milieu réactionnel des huiles, des protéines et des sucres fermentescibles, pendant une durée dépendant des rendements recherchés, d) séparation du milieu réactionnel pour obtenir de l'huile libre, une phase aqueuse contenant des protéines et des sucres fermentescibles, et une phase solide, e) séparation de la phase aqueuse et ajout éventuel de conservateurs.

L’extrait aqueux de bois de rose utilisé selon l’invention est caractérisé notamment par la présence d’acides aminés (acide aspartique, tyrosine, arginine) et de sucres totaux (glucose, fructose).

L’extrait aqueux de bois de rose utilisé selon l’invention se caractérise également par le fait qu’il ne s’agit pas d’un extrait fermenté. Selon un mode particulier, l’extrait aqueux de bois de rose utilisé selon l’invention comprend de l’eau en une teneur allant de 94 à 96%, une teneur en extrait sec allant de 1 à 6% et préférentiellement de 3 à 5% et des conservateurs en une teneur allant de 0,5 à 1 % en poids par rapport au poids total de l’extrait. Cet extrait de bois de rose selon l’invention est dénommé en nom INCI water (and) rose extract (and) citric acid (and) potassium sorbate (and) sodium benzoate.

L’extrait aqueux de bois de rose utilisé selon l’invention sera généralement présent en une teneur allant de 0,1 à 1 %, en particulier de 0,2 à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition.

Peptides

Les compositions de l’invention comprennent également un acetyl hexapeptide et un palmitoyl tetrapeptide, en particulier les peptides suivants :

Acetyl hexapeptide 8 de la société LIPOTEC commercialisé sous la dénomination ARGIRELINE® Amplified peptide de nom INCI : WATER and ACETYL HEXAPEPTIDE-8 and SODIUM BENZOATE.

Selon un mode particulier, le produit commercial ARGIRELINE® Amplified peptide contenant l’acetyl hexapeptide-8 est présent dans la composition de l’invention en une teneur allant de 0,1% à 10% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 1 % à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.

En particulier l’acetyl hexapeptide-8 est présent dans la composition de l’invention en une teneur en peptide allant de 0,005% à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,05% à 0,25% en poids par rapport au poids total de la composition.

Palmitoyl tetrapeptide-7 qui est un peptide synthétique de séquence Palmitoyl-Gly-GIn-Pro- Arg (Palmitoyl-GQPR) de la société SEDERMA commercialisé sous la dénomination RIGIN® de nom INCI : Glycerin, Lactic Acid and Palmitoyl Tetrapeptide-7.

Selon un mode particulier, le produit commercial RIGIN® contenant le palmitoyl tetrapeptide- 7 est présent dans la composition de l’invention en une teneur allant de 0,1 % à 10% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 2% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition. En particulier palmitoyl tetrapeptide-7 est présent dans la composition de l’invention en une teneur en peptide allant de 0,005% à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,1 % à 0,25% en poids par rapport au poids total de la composition.

Selon un mode particulier et préféré, la composition de l’invention comprend en outre une fraction bioactive isolée de roses telle que décrite ci-après.

Ainsi, la composition de l’invention comprendra généralement :

(i) L’extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat en une teneur allant de 0,1 à 1 %, en particulier de 0,2 à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition,

(ii) L’hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8 en une teneur allant 0,05% à 0,25% en poids (de peptide) par rapport au poids total de la composition, et

(iii) Le tétrapeptide Pal-GQPR-NH2 ou Pal-GQPR-OH, en particulier le tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7 en une teneur allant de 0,1 % à 0,25% en poids (de peptide) par rapport au poids total de la composition, et

(iv) La fraction bioactive isolée de roses fraiches de la variété Evanrat, en une teneur allant de 0 à 1 %, notamment de 0,1 à 1% et en particulier de 0,2 à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition.

Fraction bioactive isolée de roses et procédé de préparation

Par « fraction bioactive » ou « fraction bioactive isolée de roses » ou « Sérum Rose De Granville® », « Zêta » ou « Zêta fraction », on entend un extrait de roses de la variété Evanrat, ou rose ‘Jardin de Granville®’, comprenant les enzymes, protéines, sucres, ions et autres molécules actives présentes dans le cytosol des cellules composant les différents tissus végétaux des roses. L’extrait selon l’invention est distinct d’un cryoextrait de pétales roses tel que décrit dans la demande FR3066388.

Matériel végétal

L’extrait de roses sous la forme d’une fraction bioactive isolée utilisé selon l’invention peut être préparée à partir de roses fraiches de la variété Evanrat, ou roses ‘Jardin de Granville®’, congelées, lyophilisées, ou d’un mélange quelconque de celles-ci. Dans le contexte de l’invention, on utilise de préférence des roses fraiches.

Selon un mode particulier, on utilisera des roses d’été pour préparer la fraction bioactive isolée de roses, en particulier des pétales de roses d’été. Selon un autre mode, on utilisera de préférence, des roses d’hiver, en particulier des pétales de roses d’hiver.

Il est particulièrement avantageux d’utiliser les pétales des roses de la variété Evanrat car ils sont riches en sucres monosaccharides (fructose, glucose, saccharose), des acides organiques (acide citrique, acide malique), des polyphénols (catéchine), de la vitamine C, des acides aminés (majoritairement acide aspartique, acide glutamique, asparagine et glutamine), des minéraux (cendres, potassium, calcium), et des caroténoïdes.

Par riche en sucres monosaccharides, on entend un extrait de roses sous la forme d’une fraction bioactive isolée, dans lequel ledit extrait comprend au moins 500 pg/pL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose.

Par riche en minéraux, on entend un extrait de roses sous la forme d’une fraction bioactive isolée, dans lequel ledit extrait comprend au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium.

Ainsi, selon un mode de réalisation, la composition selon l’invention comprend en outre un extrait de roses sous la forme d’une fraction bioactive isolée obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat et comprenant au moins 500 pg/pL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose, et/ou au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium.

Avantageusement, le calcium améliore la différenciation épidermique et renforce la structure de la peau, tandis que le potassium amplifie l’hydratation cutanée et booste l’assimilation de l’énergie. Les phyto-sucres (fructose, glucose, saccharose) permettent de gorger les cellules cutanées d’énergie.

Procédé d’extraction

On utilise comme matériel végétal des roses fraiches de la variété Evanrat ou roses ‘Jardin de Granville®’. Selon un mode préféré, il s’agit des pétales frais de roses de la variété Evanrat ou roses ‘Jardin de Granville®’.

Avantageusement, ledit procédé ne requiert l’ajout d’aucun solvant ou liquide exogène. Le procédé mis en oeuvre pour obtenir la fraction bioactive isolée utilisée selon l’invention comprend les étapes principales de : a) Nettoyage du matériel végétal, macération, pressage puis séparation mécanique du matériel végétal pour obtenir une dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) et un matériau enrichi en fibres (fraction A) ; b) « Traitement A » puis séparation mécanique de la Dispersion Colloïdale Intracellulaire (DCI) pour obtenir le Surnageant A et une Fraction Membranaire (Fraction B) ; c) « Traitement B » puis séparation mécanique du Surnageant A pour obtenir le Surnageant B et la Fraction C (Fraction Cytoplasmique) ; d) « Traitement C » puis séparation mécanique du Surnageant B pour donner une « Fraction sérique bioactive » et une Fraction D (Précipité) ; et e) Optionnellement, mélange de la « fraction sérique bioactive » avec au moins un conservateur et/ou stabilisant.

L’extrait de roses fraiches, de préférence de pétales de roses frais, de la variété Evanrat ou rose ‘Jardin de Granville®’ obtenu à l’issue de ce procédé, est une « fraction sérique bioactive » ou « fraction bioactive » au sens de l’invention.

Par « nettoyage » on entend l'élimination des débris des roses de Granville® fraîches, et de préférence des pétales frais, avant un traitement ultérieur, d'une manière qui évite de blesser la plante, ou l'élimination de composants précieux. Par exemple, il peut être effectué par rinçage à basse pression avec de l'eau potable dans des conditions où le lavage à l'eau de ruissellement ne contiendrait pas sensiblement de pigments végétaux. L'excès d'eau de lavage est ensuite éliminé des plantes lavées.

Par « macération » on entend le fait de transformer les roses de Granville® fraîches, et de préférence les pétales frais, en particules plus petites pour rompre leur intégrité et faciliter par la suite l'expulsion de la dispersion colloïdale intracellulaire (ICD) liquide. Des exemples d'instruments de macération appropriés comprennent, sans s'y limiter, des dispositifs tels qu'un concasseur, une meule ou un broyeur (par exemple, un broyeur à couteaux, un broyeur à marteaux, etc.). Pour éviter une dégradation du matériel végétal induite par la température, l'étape de macération peut inclure une surveillance de la température et la sélection des paramètres de macération garantissant qu'il n'y a pas d'augmentation significative de la température du matériel végétal au cours de cette étape. Par « pressage » on entend la séparation de la matière liquide des roses de Granville® fraîches, et de préférence des pétales frais, par application d'une force mécanique. Cela inclut, mais sans s'y limiter, des techniques telles que le drainage par gravité ambiante, le pressage par un objet lourd, la force centrifuge d'un expulseur rotatif, la pression du piston d'une presse hydraulique, ou des rouleaux ou une vis de type approprié pour une presse.

Par « matériau enrichi en fibres » ou « MEF » ou « FEM » (Fibre Enriched Material), on entend une fraction solide et/ou semi-solide enrichie en fibres de roses de Granville® fraîches, de préférence de pétales frais, dont la dispersion colloïdale intracellulaire liquide (ICD) a été éliminée par pressage.

Par « dispersion colloïdale intracellulaire » ou « DCI » ou « ICD » (Intracellular Colloidal Dispersion) on entend la matière liquide expulsée par pressage de roses de Granville® fraîches, de préférence des pétales frais. Le liquide résultant contient des particules solides et/ou semi-solides dispersées et, potentiellement, des gouttelettes de liquides non miscibles à l'eau de diverses tailles (collectivement appelées particules), dans un milieu aqueux contigu. Les particules sont principalement constituées d'organites de cellules végétales, de fragments d'organites et de matières résiduelles enrichies en fibres. Le milieu aqueux est principalement constitué de cytosols et de vacuoles.

Par « séparation » on entend la séparation de particules solides et/ou semi-solides, et de gouttelettes de liquide non aqueux à partir d'un liquide aqueux en exploitant la densité et/ou la taille des particules. Cela inclut, mais sans s'y limiter, des techniques telles que l’égouttage, la filtration (y compris la filtration utilisant un gradient de pression), l'écumage, la sédimentation par gravité ambiante, la décantation, la centrifugation ou une combinaison de ce qui précède. De préférence, on utilisera la séparation mécanique en flux continu, mais cela n'exclut pas le traitement par lots. « Séparation 1 » et « Séparation 2 » se réfèrent aux étapes respectives du procédé, effectuées avec des paramètres respectifs.

Par « surnageant », il est fait référence à un matériau aqueux à partir duquel des particules ont été séparées. « Surnageant A » et « Surnageant B » désignent les surnageants résultant des étapes de séparation respectives du procédé.

Par « précipité », il est fait référence aux particules à partir desquelles un matériau aqueux a été séparé. « Fraction B » et « Fraction C » désignent les précipités résultant des étapes de séparation respectives du procédé. Les termes « fraction de sérum de roses de Granville® fraîches » et « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » désignent des compositions produites par le procédé tel que représenté ci-dessus sans conservateurs et/ou stabilisants ajoutés pour protéger la composition de l'ingrédient contre les facteurs environnementaux tels que la température, l'atmosphère (par exemple, l'oxygène), la lumière et les micro-organismes.

Par « conservateurs et/ou stabilisants » on entend des substances qui, lorsqu'elles sont ajoutées à une « fraction de sérum de roses de Granville® fraîches », de préférence une « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® », la protègent contre les facteurs environnementaux tels que la température, l'atmosphère (par exemple l'oxygène), la lumière et les micro-organismes. Des substances appropriées particulières peuvent comprendre, sans limitation, un conservateur, un stabilisant et/ou un mélange de ceux-ci.

Le terme « sérum de roses de Granville® » ou « extrait de roses de Granville® fraîches » tel qu'utilisé ici signifie une combinaison d'une fraction de sérum de roses de Granville® fraîches et de conservateurs et/ou de stabilisants.

Le terme « sérum de pétales de roses de Granville® » ou « extrait de pétales frais de roses de Granville® » tel qu'utilisé ici signifie une combinaison d'une fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® et de conservateurs et/ou de stabilisants. Dans un mode de réalisation préféré, l’extrait utilisé selon l’invention est obtenu par la mise en oeuvre du procédé d’extraction divulgué dans les brevets EP2919757, JP 6130924, CN

ZL201380057567.6, EP2491939B1 , CN1929851 B, les brevets américains n° 8 734 861 et n° 7 473 435 ; la demande de brevet US n° 16/078925.

De préférence, les fleurs de roses (Roses de Granville®) et 4 à 5 cm de tige sont récoltés de manière à éviter le hachage ou l’écrasement de la biomasse collectée pour éviter la perturbation de la structure cellulaire des fleurs. La viabilité des plantes collectées peut être testée à l’aide d’un fluoromètre à chlorophylle multimode OS5p (Opti-Sciences Inc, Hudson, NH, États-Unis).

Selon un mode de réalisation particulier les fleurs fraîches vivantes, y compris les pétales, le pistil et l’étamine, ont été retirées de la tige, y compris le sépale et le réceptacle, et emballées dans des sacs de stockage et sont placé(e)s immédiatement à des températures négatives comprises entre -20°C et -80°C, comme par exemple -20°C, -40°C ou -60°C. Les fleurs peuvent ainsi être stockées sur de longues périodes, comme par exemple plusieurs mois, ou plusieurs années, avant d’être utilisées aux fins du procédé d’extraction. Selon un mode de réalisation préféré, les fleurs fraîches vivantes, y compris les pétales, le pistil et l’étamine, sont retirées de la tige, y compris le sépale et le réceptacle, et emballées dans des sacs de stockage et placées dans un stockage à une température comprise entre 0 et 20°C et de préférence à une température comprise entre 2 et 6°C jusqu’à ce que la récolte soit terminée.

Etape a

Une fois la récolte terminée, les roses, de préférence les pétales de roses, sont immédiatement rincés par pulvérisation avec de l'eau de 10°C à 15°C pendant 0,1 à 0,3 minutes avec un débit de 5 à 6 litres par minute. L'excès d'eau est de préférence éliminé des fleurs rincées en les laissant égoutter pendant au moins 1 minute. Les fleurs rincées peuvent alors subir une macération, un pressage et une séparation par pressage mécanique, à rouleaux, hydrauliques, ou extracteur à jus pour extraire le contenu de la dispersion colloïdale intercellulaire liquide (DC I) du matériau enrichi en fibres (« Fraction A »).

A l’issue de ces étapes, le rendement de la fraction A est compris entre 30% et 65%, de préférence entre 35% et 60% et de manière encore préférée entre 40 % et 55 % (poids/poids).

Le DCI comprend typiquement de 2% à 20% de matière sèche, de préférence de 4% à 16% de matière sèche, et de manière encore préférée de 6 % à 12 % de matière sèche.

A cette étape, le DCI peut être congelé pour stockage. Typiquement, il est congelé à -20°C.

Etape b

Lorsque le DCI a été congelé pour stockage, il doit préalablement être décongelé doucement. Typiquement, il est placé à décongeler à 4°C ou dans de la glace.

Le « traitement A » est réalisé par un traitement de déstabilisation du DCI avec des ondes électromagnétiques produites à partir de magnétrons fonctionnant à une fréquence comprise entre 2,45 et 5,8 GHz. Les paramètres du traitement de déstabilisation sont fixés pour obtenir la diminution de la valeur de la composante réelle de la constante diélectrique basse fréquence (e'o) d'environ 20 Farads par mètre (F/m) par rapport à sa valeur avant le traitement. Ce traitement dégrade la stabilité du DCI en provoquant l'agglomération et/ou l'agrégation de particules (c'est-à-dire des organites, fragments d'organites, matière fibreuse résiduelle) en assemblages suffisamment grands et stables pour permettre et/ou améliorer la séparation mécanique. En effet, on considère la suspension colloïdale intracellulaire obtenue comme une dispersion colloïdale relativement stable composée d'une phase continue (cytoplasme et contenu de vacuoles) et d'une phase dispersée (organites suspendus et leurs fragments). Selon la théorie de Derjaguin-Laundau-Verwey-Overbeek (DLVO), cette stabilité est maintenue par la somme des forces attractives de van der Waals et des forces répulsives des doubles couches électriques. La barrière énergétique résultant de la force répulsive empêche les particules de la phase dispersée de s'approcher à moins qu'elles n'aient suffisamment d'énergie pour surmonter cette barrière, auquel cas la force d'attraction les mettra en contact (elles adhéreront alors de manière irréversible). La théorie DLVO décrit l'interaction et l'énergie potentielle des particules en fonction de leurs paramètres, de leur distance les unes des autres et des caractéristiques de la phase continue. La modification des valeurs des variables affectant la force répulsive affecte la stabilité de la dispersion. Dans des conditions normales de stabilité colloïdale, une augmentation de l'énergie potentielle à mesure que les particules s'approchent les unes des autres constitue une barrière énergétique potentielle qu'il est impossible de surmonter sans apport énergétique externe. Cette barrière énergétique maintient les particules séparées et la dispersion stable. Les conditions modifiées lors du traitement A, permettent à la force de répulsion de la double couche de diminuer au point qu’il il n'existe plus de barrière énergétique potentielle et que les particules peuvent s'approcher et s'agglomérer librement.

Le rétablissement des conditions initiales ne rend pas la stabilité, car les particules se sont irréversiblement agglomérées. Elles sont ainsi facilement éliminables par des moyens mécaniques (Koganov et coll., sofw journal 2017).

De préférence, à l’issue du « traitement A », on réalise l’étape de séparation mécanique du DCI par centrifugation afin de produire le « Surnageant A » et la « Fraction B ».

Typiquement, le "surnageant A" a une turbidité inférieure à environ 100 NTU.

La « fraction B » comprend typiquement de 10% à 30% de matière sèche, de préférence de 13% à 27% de matière sèche, et de manière encore préférée environ 15,0 % à 25,0 % de matière sèche.

Etape c

Le « traitement B » est réalisé par ajustement du niveau de pH dans le « surnageant A » par titrage avec, par exemple, un alcali jusqu'à obtenir un pH supérieur à 6, de préférence un pH allant de 6,5 à 7,5. Typiquement, on utilisera comme alkali préféré le carbonate de potassium.

A l’issue du « traitement B », on réalise de préférence l’étape de séparation mécanique du « Surnageant A » par centrifugation afin de produire le « Surnageant B » et la « Fraction C ».

La « fraction C » comprend typiquement de 5% à 25% de matière sèche, de préférence de 8% à 22% de matière sèche, et de manière encore préférée environ 10,0% à 20,0% de matière sèche.

Etape d

Le « traitement C » est réalisé par ajustement du niveau de pH dans le « surnageant B », notamment par titrage avec, par exemple, de l'acide jusqu’à obtenir un pH inférieur à 4,5. Typiquement, on utilisera comme acide préféré une solution d’acide citrique.

A l’issue du « traitement C », on réalise de préférence l’étape de séparation mécanique du « Surnageant B » par centrifugation afin de produire la « fraction de sérum de roses de Granville® fraîches », de préférence la « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » (Extrait Non Conservé) et la « Fraction D ».

La « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » comprend typiquement de 2% à 20% de matière sèche, de préférence de 4% à 16% de matière sèche, et de manière encore préférée de de 6,0% à 10,0% de matière sèche.

Etape e

Selon certains modes de réalisation, la fraction de sérum obtenue à l’issue de l’étape d) est mélangée avec au moins un conservateur ou au moins un stabilisant pour donner un ingrédient fini, ou avec une combinaison de ceux-ci pour donner l'extrait de roses de Granville® fraîche ou « Sérum Rose De Granville® », de préférence l'extrait de pétales frais de roses de Granville® ou « Sérum de pétales de Roses De Granville® ».

Des agents stabilisants particulièrement appropriés peuvent comprendre, sans limitation, un conservateur, un stabilisant et/ou des mélanges de ceux-ci. Les conservateurs et stabilisants appropriés à utiliser dans la présente invention comprennent, sans s'y limiter, le sorbate de potassium, le benzoate de sodium, le métabisulfite de sodium, la glycérine, le propylène glycol, le dipropylène glycol, le butylène glycol, le pentylène glycol, l'hexylène glycol et le caprylyl glycol. Dans un mode de réalisation particulier, les agents stabilisants peuvent comprendre au moins un conservateur, au moins un stabilisant, au moins un antioxydant ou leurs mélanges.

Ainsi, selon un mode de réalisation, la fraction bioactive isolée de roses et utilisée selon l’invention est obtenue par le procédé comprenant les étapes de : a) nettoyage du matériel végétal, macération, pressage puis séparation mécanique du matériel végétal pour obtenir une dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) et un matériau enrichi en fibres (fraction A) ; b) déstabilisation du DCI avec des ondes électromagnétiques puis séparation mécanique de la dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) pour obtenir le surnageant A et une Fraction Membranaire (fraction B) ; c) ajustement du niveau de pH dans le surnageant A jusqu'à obtenir un pH supérieur à 6, de préférence un pH allant de 6 à 7, puis séparation mécanique du surnageant A pour obtenir le surnageant B et la fraction C (fraction cytoplasmique) ; d) ajustement du niveau de pH dans le surnageant B jusqu’à obtenir un pH inférieur à 4,5 puis séparation mécanique du surnageant B pour donner une « Fraction sérique bioactive » et une fraction D (précipité) ; et e) Optionnellement, mélange de la « fraction sérique bioactive » avec au moins un conservateur et/ou stabilisant.

Selon un mode particulier, la fraction bioactive isolée de roses, de préférence de pétales de roses, utilisée selon l’invention comprend de l’eau en une teneur allant de 90 à 94%, une teneur en extrait sec allant de 6 à 10%. Cette fraction bioactive isolée de roses utilisée selon l’invention est dénommée en nom INCI Rosa Hybrid Flower Extract.

Selon un autre mode particulier, la fraction bioactive isolée de roses, de préférence de pétales de roses, obtenu selon l’invention comprend de l’eau en une teneur allant de 89 à 93%, une teneur en extrait sec allant de 6 à 10% et des conservateurs et/ou stabilisants en une teneur allant de 0,3 à 1 % en poids par rapport au poids total de l’extrait.

La fraction bioactive isolée de roses pourra être présente dans la composition de l’invention en une teneur allant de 0,1 à 1 % en poids, en particulier de 0,2 à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition.

Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, la composition cosmétique selon l’invention comprend : 1 . un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat en une teneur allant de 0,1 à 1 %, en particulier de 0,2 à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition,

2. un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8 en une teneur allant de 0,05% à 0,25% en poids (de peptide) par rapport au poids total de la composition,

3. un tétrapeptide Pal-GQPR-NH2 ou Pal-GQPR-OH, en particulier le tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7 en une teneur allant de 0,1 % à 0,25% en poids (de peptide) par rapport au poids total de la composition, et

4. une fraction bioactive isolée de roses fraiches de la variété Evanrat, en une teneur allant de 0,1 à 1 %, en particulier de 0,2 à 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition.

Composition cosmétique et galénique

Par « composition cosmétique » on entend toute composition à visée cosmétique, c’est à dire esthétique, pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain et plus particulièrement avec les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du cou.

Par « milieu physiologiquement acceptable » on entend tout excipient convenant à une utilisation topique, en contact avec les matières kératiniques, sans risque de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité et/ou de réponse allergique.

Le milieu physiologiquement acceptable représente généralement de 1 à 99% en poids, par rapport au poids total de ladite composition.

Par « utilisation topique » ou « application topique », on entend une composition destinée à une application sur les matières kératiniques. De fait, une composition orale n’est pas destinée à une application topique sur la peau.

Selon un mode de réalisation particulier, la composition cosmétique selon l’invention est caractérisée en ce qu’il s’agit d’une composition de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres, en particulier d’une composition de soin de la peau. Une composition pour l’application topique selon l’invention pourra être par exemple sous forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, solution, suspension, gel, lait, lotion, sérum, de baume, de stick, ou encore de poudre.

Selon un mode particulier, la composition cosmétique de l’invention est sous la forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, solution, suspension, gel, lait, lotion, ou sérum.

Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition utilisée selon l’invention est sous la forme d’une crème ou d’un sérum.

La phase aqueuse de la composition selon l'invention comprend de l'eau et éventuellement un solvant hydrosoluble.

On entend par ‘solvant hydrosoluble’ selon l’invention, un composé liquide à température ambiante et miscible à l'eau (miscibilité dans l'eau supérieure à 50 % en poids à 25 °C et pression atmosphérique). On peut citer notamment : les mono-alcools inférieurs en C1 -C5 tels que l'éthanol, l'isopropanol et leurs mélanges; les glycols en C2-C8 tels que l'éthylène glycol, le propylène glycol, le 1 ,3-butylène glycol, le dipropylène glycol, et leurs mélanges ; les polyols en C2-C32 tels que les polyglycérols, les polyéthylènes glycols, et leurs mélanges, et leurs mélanges.

Elle peut comprendre également des gélifiants hydrophiles, des antioxydants, des conservateurs et leurs mélanges.

La composition cosmétique selon l’invention peut comprendre en outre une phase grasse (corps gras solides) ou huileuse.

On entend par « phase huileuse » une huile ou un mélange d'huiles miscibles entre elles, ou non. Par « huile », on entend, au sens de l'invention, un corps gras, non soluble dans l'eau, liquide à 25°C et pression atmosphérique. Ces huiles peuvent être volatiles ou non volatiles, végétale, minérale ou synthétique.

Une phase huileuse selon l’invention peut comprendre des huiles naturelles, hydrocarbonées, siliconées, et leurs mélanges. La teneur en phase grasse ou huileuse dans la composition cosmétique de l’invention ira généralement de 0,2 % à 45 %, de préférence de 0,5 % à 30 %, et de préférence encore de 2 % à 25 % en poids par rapport au poids total de ladite composition.

La composition de l'invention peut également comprendre tout additif usuellement utilisé en cosmétique tels que des antioxydants, des parfums, des agents actifs cosmétiques, comme par exemple des agents émollients, des agents hydratants, des vitamines, des agents antiâge, des agents liftants, des agents tenseurs, des agents repulpants, des agents éclaircissants, des charges, des nacres et leurs mélanges.

Ainsi selon un mode de réalisation particulier, l’invention porte sur une composition cosmétique pour application topique sur la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau du visage et/ou du corps, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait aqueux de bois de rose, de l’Acetyl Hexapeptide-8, du Palmitoyl tétrapeptide-7 et éventuellement une fraction bioactive isolée obtenue à partir de rose fraiche, et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les antioxydants, les parfums, les agents émollients, les agents hydratants, les vitamines, les agents anti-âge, les agents liftants, les agents tenseurs, les agents repulpants, les agents éclaircissants, les charges, les nacres et leurs mélanges.

Procédé cosmétique

L’invention porte aussi sur un procédé cosmétique non thérapeutique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres comprenant l’application sur la peau et/ou les lèvres, en particulier la peau, d’une composition telle que définie selon l’invention.

Par « peau et/ou lèvres » selon l’invention, on entend notamment une peau et/ou des lèvres saines, c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets ‘non sains’, atteints d’une pathologie).

Selon un mode particulier, l’application de la composition telle que définie selon l’invention sur la peau et/ou les lèvres permet de prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de densité et/ou de fermeté de la peau, la diminution de l’épaisseur de l’épiderme, la diminution de la différenciation et/ou prolifération des cellules épidermiques, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules. Association d’actifs et utilisations

La présente invention concerne aussi une association d’actifs cosmétiques comprenant :

(i) Un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable,

(ii) Un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8,

(iii) Un tétrapeptide Pal-GQPR-NH2 ou Pal-GQPR-OH, en particulier le tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7, et

(iv) Eventuellement en outre une fraction bioactive isolée obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat et comprenant au moins 500 pg/pL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose, et/ou au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium.

L’invention porte également sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique de l’association d’actifs cosmétiques telle que définie ci-dessus, comme association active pour prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier la perte de densité et/ou de fermeté de la peau, la diminution du de l’épaisseur de l’épiderme, la diminution de la différenciation et/ou prolifération des cellules épidermiques, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.

Ensemble cosmétique et utilisation

La présente invention concerne aussi un ensemble cosmétique comprenant :

(i) Un extrait aqueux de bois de rose de la variété Evanrat, de préférence de bois de rose d’été, obtenu par extraction enzymatique au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable,

(ii) Un hexapeptide de nom INCI : Acetyl Hexapeptide-8,

(iii) Un tétrapeptide de nom INCI : Palmitoyl Tetrapeptide-7, et

(iv) Eventuellement en outre une fraction bioactive isolée obtenue à partir de roses fraiches de la variété Evanrat et comprenant au moins 500 pg/pL d’au moins un sucre monosaccharide choisi parmi le fructose, glucose et le saccharose, et/ou au moins 500 mg/Kg d’au moins un minéral choisi parmi le potassium, le calcium et le sodium, caractérisé en ce que l’un au moins des actifs (i) à (iv) est conditionné dans une composition distincte des autres actifs, et en particulier chaque actif est conditionné dans une composition distincte.

Un autre objet est un procédé cosmétique comprenant l’application successive, sur la peau et/ou les lèvres, des compositions de l’ensemble cosmétique tel que défini ci-dessus.

L’invention va désormais être illustrée dans les exemples non limitatifs suivants. Sauf indication contraire, les pourcentages (%) sont exprimés en pourcentages (%) en poids par rapport au poids total de la composition.

EXEMPLES

Exemple 1 : Matériels et méthodes 1.1 Préparation des cultures cellulaires

Les différents tests des ingrédients seuls ou en combinaison selon l’invention ont été effectués sur des échantillons de peau reconstruite par bioimpression par extrusion avec des cellules issues d’un donneur d’âge mature (= 42 ans). Cellules utilisées

L’ensemble des cellules utilisées a été extrait par LabSkin Creations à partir de résidus opératoires de donneurs ayant subi une chirurgie plastie ou réparatrice. Le recueil de ces résidus opératoires a été obtenu selon la réglementation Française en vigueur et autorisée par le Ministère de la Recherche sous le numéro DC2020-4346. Afin de garantir leur utilisation en ingénierie tissulaire, des banques de cellules primaires ont été réalisées à différents passages selon le type cellulaire considéré. Les cellules ont été sécurisées d’un point de vue microbiologique et sont exempts de mycoplasmes. [Table 1]

Bioimpression et culture des peaux reconstruites

Bioimpression des dermes

Les fibroblastes issus de donneurs âgés ont été trypsinés et comptés. Les cellules ont été mises en suspension dans la bioencre constituée d’alginate, gélatine et fibrinogène (LabSkin Creations) à raison de 250,000 cellules par mL d’encre. Les bio-encres ont été transférées dans des seringues stériles montées sur des canules de 10 gauges.

Les objets imprimés ont été modélisés avec le logiciel Slic3r (GNU Affero General Public License) et Repetier (Hot-World GmbH & Co. KG). Les dermes ont été imprimés grâce à une imprimante 3D (LabSkin Creations) selon une taille de 1.5cm x 1.5cm et comportaient deux couches de cellules extrudées dans la bioencre.

Les construits ont ensuite été polymérisés 1 heure dans une solution de calcium et thrombine (LabSkin Creations) permettant la consolidation de la bioencre. Après trois rinçages dans un tampon salin, les dermes équivalents ont été mis en culture dans du contenant du DMEM supplémenté de 10% de sérum de veau et de 1% d’antibiotiques et antifongique et placés à l’incubateur (37°C, 5% CO2) pendant 12 jours. Le milieu de culture a été renouvelé tous les 2 jours.

Épidermisation

Les kératinocytes à confluence ont été trypsinés puis comptés. L’équivalent de 500,000 cellules a été ensemencé à la surface de chaque derme bioimprimé. Après 30 minutes d’adhésion à 37°C, du milieu de culture contenant du DMEM supplémenté de 10% de sérum de veau foetal, d’hydrocortisone et d’insuline a été ajouté pour submerger les construits dermo-épidermiques bioimprimés.

Maturation et différenciation

Les ensembles dermo-épidermiques bioimprimés ont été cultivés durant 7 jours dans du milieu de culture contenant du DMEM supplémenté de 10% de sérum de veau foetal, d’hydrocortisone et d’insuline permettant la prolifération des kératinocytes. Ils ont ensuite été élevés à l’interface air/liquide afin d’initier la différenciation des épidermes. Cette ultime étape de culture de 7 jours a permis d’obtenir des épidermes pluristratifiés.

Traitements

Les traitements par les ingrédients actifs seuls ou en combinaisons ont été dissous dans les milieux de culture. Les concentrations finales en ingrédients actifs sont précisées pour chaque exemple.

Préparation de l’extrait de bois de rose :

Les bois de rose de la variété Evanrat, en particulier de la variété rose Jardin de Granville®, éventuellement additionnés de fleurs de rose, ont été réduites en poudre en trois étapes.

Etape 1 : passage dans un broyeur de jardin afin d’obtenir des tronçons de deux centimètres Etape 2 : passage dans un broyeur industriel

Mise en solution

L’extraction enzymatique a été réalisée dans un réacteur d'une contenance maximale de 70I. Le réacteur est agité par hélice et est thermostaté par double enveloppe.

16Kg de poudre de bois de rose à 0.1 % de fleurs de rose sont dispersés et mis en suspension dans 47,5Kg d'eau.

Afin de désactiver les enzymes endogènes, le mélange a été élevé à une température de 85°C pendant 1 min puis stabilisé à 50°C.

Lyse des parois végétales

0.8 Kg d’un cocktail Enzymatique HEL1 PR1 comprenant un mélange de cellulases, d’hémicellulases et de pectinases à 75% et des protéases à 25%, ont été ajoutés au mélange réactionnel correspondant (5% w/w). La réaction est poursuivie pendant 4 heures, la température est maintenue à 50°C.

Inactivation des enzymes

Le mélange a été porté à 85°C pendant 1 min afin d'inactiver les enzymes, puis ramené à 35°C.

Pré filtration

Le mélange est préfiltré sur tamis de 0.8mm puis 0.5mm afin de retirer la partie le plus importante de la phase solide, puis sur un drap. Filtration stérilisante

Une filtration a été réalisée sur plaques clarifiantes (PALL corporation) d’une taille de pores de 0.2pm, à une pression de 2 Bars.

Formulation

La phase aqueuse obtenue après filtration stérilisante est stabilisée avec les conservateurs suivants :

- Acide citrique,

- Sorbate de potassium et

- Benzoate de sodium.

On obtient, après filtration, un extrait aqueux de bois de rose à 3.7% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’extrait.

Préparation de la fraction active de roses fraîches (ZETA fraction) :

On utilise comme matériel végétal des pétales frais de roses de la variété Evanrat ou rose « Jardin de Granville® ».

La fraction bioactive de pétales de rose utilisée selon l’invention est obtenue selon le protocole suivant : a1 ) nettoyage des pétales frais de roses par pulvérisation avec de l'eau d’une température d’environ 12°C, pendant 0,1 à 0,3 minutes à un débit de 5 à 6 litres par minute, a2) macération, pressage puis séparation mécanique des roses à l'aide d'une presse à vis mécanique (modèle CP-6 Vincent Corporation, FL) pour extraire le contenu de la dispersion colloïdale intercellulaire liquide (DCI) du matériau enrichi en fibres (« Fraction A ») ; b1 ) déstabilisation du DCI avec des ondes électromagnétiques produites à partir de magnétrons fonctionnant à une fréquence comprise entre 2,45 et 5,8 GHz, b2) centrifugation de la dispersion colloïdale intracellulaire (DCI) pour obtenir le surnageant A et une Fraction Membranaire (fraction B) ; c1 ) ajustement du niveau de pH dans le surnageant A par un alkali (Le., le carbonate de potassium), afin d’obtenir un pH allant de 6 à 7, c2) séparation mécanique du surnageant A pour obtenir le surnageant B et la fraction C (fraction cytoplasmique) ; d1 ) ajustement du niveau de pH dans le surnageant B par de l’acide citrique afin d’obtenir un pH inférieur à 4,5, d2) séparation mécanique du surnageant B pour donner une « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » et une fraction D (précipité) ; et e) mélange de la « fraction de sérum de pétales frais de roses de Granville® » avec du sorbate de potassium et du benzoate de sodium.

Le sérum de pétales de roses de Granville® (aussi appelé « Zêta sérum », ou « Zf sérum » ou « ZETA FRACTION » ou « ZETA fraction » dans les exemples suivants) contient 8% matière sèche (matière active), 91 ,5% en poids d’eau, 0,15% en poids de sorbate de potassium et 0,3% en poids de benzoate de sodium. Ces teneurs s’entendent en en poids par rapport au poids total de l’extrait. Le nom INCI de cet extrait est Rosa Hybrid Flower Extract, Potassium Sorbate, and Sodium Benzoate.

Acetyl hexapeptide 8 de la société LIPOTEC est commercialisé sous la dénomination ARGIRELINE® Amplified peptide de nom INCI : WATER and ACETYL HEXAPEPTIDE-8 and SODIUM BENZOATE. Dans les exemples, on entend par « Acetyl hexapeptide 8 » le produit commercial ARGIRELINE® Amplified peptide comprenant 0,05% de peptide.

Les pourcentages indiqués dans les exemples correspondent aux pourcentages en poids de produit commercial dans les milieux de culture ou dans les formules cosmétiques.

Palmitoyl tetrapeptide-7 est un peptide synthétique de séquence Palmitoyl-Gly-GIn-Pro-Arg (Palmitoyl-GQPR) de la société SEDERMA commercialisé sous la dénomination RIGIN® de nom INCI : Glycerin, Lactic Acis and Palmitoyl Tetrapeptide-7. Dans les exemples, on entend par « Palmitoyl tetrapeptide-7» le produit commercial RIGIN® comprenant 0,05% de peptide. Les pourcentages indiqués dans les exemples correspondent aux pourcentages en poids de produit commercial dans les milieux de culture ou dans les formules cosmétiques.

Les concentrations des actifs ou des combinaisons ont été sélectionnées sur la base des résultats de cytotoxicité pré-effectué.

Les peaux reconstruites ont été traitées pendant la reconstruction dermique, de J5 à J 12 et épidermique de J14 à J18 puis de J20 à J26.

Arrêt des cultures

La culture des échantillons des 12 conditions a été arrêtée au jour 26. La moitié des échantillons a été fixée en solution de formol tamponné 4% (Alphapath, France) puis inclus en paraffine. 1.2 Méthodes d’analyse des échantillons de peau reconstruite par bioimpression après tests

Les différents traitements (ingrédients actifs seuls ou en combinaison) ont été testés sur les échantillons de peau reconstruite par bioimpression selon l’exemple 1. Différentes analyses ont été effectuées sur ces échantillons de peau reconstruite par bioimpression pour déterminer l’effet de chaque traitement sur la peau.

Coloration Hématoxyline-Phloxine- Safran

Des coupes paraffine de 5 pm ont été réalisées sur les différents échantillons de peau reconstruite par bioimpression. Après déparaffinage et réhydratation, les échantillons ont été colorés à l’Hématoxyline, Phloxine et Safran (HPS) par trois bains successifs de 5 min. Après rinçage, les coupes ont été déshydratées avant d’être montées sur lamelle avec un milieu de montage hydrophobe à base de xylène.

Immunofluorescence sur coupes paraffine

L’ensemble des marquages a été réalisé sur des coupes de 5pm d’épaisseur. Après un démasquage à la chaleur, une étape de saturation en PBS/BSA 5% a permis de bloquer les sites antigèniques aspécifiques. Les cellules ont ensuite été incubées sur la nuit avec un anticorps primaire spécifique de l’antigène d’intérêt :

- Anticorps anti Ki-67 : 1/50ème monoclonal, souris, Dako ;

- Anticorps anti Collagène VII : 1/50ème, monoclonal, souris, Santa Cruz.

Le lendemain, après des étapes de rinçages, les coupes ont été incubées avec un anticorps secondaire Alexa-Fluor 568 anti-souris dilué au 1/1000ème (Thermo Fisher Scientific) et le colorant nucléaire Hoechst (Thermo Fisher Scientific). Un témoin négatif sans anticorps primaire a été réalisé en parallèle.

Acquisition des images

Les colorations histologiques et marquages immunohistologiques ont été observés avec le système microscope optique Axio Observer D1 / caméra haute résolution Axiocam (Zeiss, Le Pecq, France). Les images ont été acquises à l’aide du logiciel ZEN pro 2012 et sauvegardées en format « tif » (haute résolution).

Analyse d’images

L’analyse des images a été réalisée avec le logiciel Imaged (Rasband, W.S., Imaged, U. S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, http://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2017). Pour chaque paramètre une analyse statistique a été réalisée avec un test Student, qui est significatif si sa valeur est inférieure à 0,05. Les résultats sont indiqués selon : * P < 0.05, ** P < 0.01 et *** P < 0.001.

Mesure épaisseur

L’épaisseur des couches cohésives de l’épiderme est mesurée à l’aide d’une carte de distance euclidienne. Les pixels correspondant à l’épiderme sont segmentés des autres pixels de l’image. L’image segmentée est ensuite binarisée puis convertie en carte de distance euclidienne. La membrane basale de l’épiderme est sélectionnée et appliquée sur la carte de distance pour mesurer en chaque point la distance entre la membrane basale aux couches terminales de l’épiderme. La valeur obtenue correspond alors à la distance moyenne entre la membrane basale et les couches terminales de l’épiderme. 9 images sont analysées pour chaque condition.

Exemple 2 : Effets des actifs et combinaisons selon l’invention sur le facteur KI67 L’effet des actifs seuls ou en combinaisons selon l’invention, sur la production du facteur KI67 par les échantillons de peau reconstruite par bioimpression a été analysé. Chaque test a été effectué en triplicate.

Les échantillons de peau reconstruite par bioimpression ont été testés respectivement avec les actifs et combinaisons suivantes (dissous dans les milieux de culture) : l’extrait aqueux de bois de rose seul (concentration finale 0,07%) ; un mélange d’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8 (concentration finale 0,62pg/ml) et de tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7 (concentration finale 0,19%) ; un mélange d’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8 (concentration finale 0,62pg/ml ) et de tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7 (concentration finale 0,19%) + l’extrait aqueux de bois de rose (concentration finale 0,025%).

Un témoin négatif non traité a été effectué, sans composition selon l’invention.

Résultats

Les résultats sont représentés sur la figure 1 . La significativité des différences observées entre les différentes conditions testées est mesurée par le test de Student, qui est dit significatif si sa valeur est inférieure à 0,05 (* p<0,05 ; ** p<0,01 ; *** p<0,001) ; ns= non significatif. Le mélange d’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8, de tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7, et de l’extrait aqueux de bois de rose permet de stimuler KI67, marqueur de prolifération cellulaire, au niveau de l’épiderme. Ce résultat démontre que cette association stimule la prolifération des couches basales de l’épiderme et donc favorise son renouvellement.

Exemple 3 : Effets des actifs et combinaisons selon l’invention sur l’épaisseur du derme

L’effet des actifs seuls ou en combinaisons selon l’invention, sur l’épaisseur du derme des échantillons de peau reconstruite par bioimpression a été analysé. Chaque test a été effectué en triplicate.

Les échantillons de peau reconstruite par bioimpression ont été testés respectivement avec les actifs et combinaisons suivantes (dissous dans les milieux de culture): l’extrait aqueux de bois de rose seul (concentration finale 0,07%) ; un mélange d’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8 (concentration finale 0,62pg/ml) et de tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7 (concentration finale 0,19%) ; un mélange d’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8 (concentration finale 0,62pg/ml) et de tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7 (concentration finale 0,19%) + l’extrait aqueux de bois de rose (concentration finale 0,025%).

Un témoin négatif non traité a été effectué, sans composition selon l’invention.

Résultats

Les résultats sont représentés sur la figure 2 La significativité des différences observées entre les différentes conditions testées est mesurée par le test de Student, qui est dit significatif si sa valeur est inférieure à 0,05 (* p<0,05 ; ** p<0,01 ; *** p<0,001) ; ns= non significatif. Ces résultats démontrent que le mélange contenant l’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8, le tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7, et l’extrait aqueux de bois de rose augmente l’épaisseur de l’épiderme. Cette association est donc très intéressante pour combattre l’amincissement de l’épiderme observé avec l’âge.

L’ensemble de ces résultats montre que l’utilisation combinée d’un extrait aqueux de bois de rose, d’un acetyl hexapeptide-8, d’un palmitoyl tetrapeptide-8 et éventuellement en outre d’une fraction bioactive isolée de pétales de roses, permet d’obtenir un effet synergique antiâge. Exemple 4 : Effets des actifs seuls ou en combinaisons selon l’invention sur le Collagène VII

L’effet des actifs seuls ou en combinaisons selon l’invention, sur la production de Collagène VII par les échantillons de peau reconstruite par bioimpression, a été analysé. Chaque test a été effectué en triplicate.

Les échantillons de peau reconstruite par bioimpression ont été testés respectivement avec les actifs et combinaisons suivantes selon l’invention (dissous dans les milieux de culture) : la fraction bioactive isolée de roses fraiches autrement nommée ZETA fraction, seule (concentration finale 0,05%) ; un mélange d’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8 (concentration finale 0,21 g/ml) et de tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7 (concentration finale 0,06%) + l’extrait aqueux de bois de rose (concentration finale 0,005%) ; un mélange d’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8 (concentration finale 0,10pg/ml) et de tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7 (concentration finale 0,003%) + l’extrait aqueux de bois de rose (concentration finale 0,004%) + ZETA fraction (concentration finale 0,003%).

Un témoin négatif non traité a été effectué, sans actifs ni combinaisons d’actifs selon l’invention.

Résultats

Les résultats sont représentés sur la figure 3. La significativité des différences observées entre les différentes conditions testées est mesurée par le test de Student, qui est dit significatif si sa valeur est inférieure à 0,05 (* p<0,05 ; ** p<0,01 ; *** p<0,001) ; ns= non significatif. Ces résultats montrent que le mélange contenant l’hexapeptide Acetyl Hexapeptide-8, le tétrapeptide Palmitoyl Tetrapeptide-7, l’extrait aqueux de bois de rose et la ZETA fraction stimule de façon très significative et de façon synergique l’expression du collagène de type VII, essentiel pour la bonne structure de la peau. En effet, le collagène VII est une composante essentielle de la matrice extra cellulaire, et donne à la peau sa fermeté. Cette association est donc très avantageuse pour empêcher la perte d’expression du collagène VII observé avec le vieillissement, et donc combattre les signes de l’âge.

Exemple 5 : Formulations cosmétiques selon l’invention 5.1 Composition sous la forme d’une émulsion

Eau déminéralisée qsp 100,0%

Glycols 20,0%

Conservateurs 0,6%

Chélatant 0,04%

Carbomer (Carbopol® 981 ) 0,3%

Sodium polyacrylate (Covacryl® MV60) 0,2%

Sodium Hydroxide 0,15%

Extrait aqueux de bois de rose * 1%

Acetyl hexapeptide-8 (ARGIRELINE® Amplified peptide comprenant 0.05% de peptide) 3% (soit 0,0015% peptide)

Palmitoyl tetrapeptide-7 (RIGIN® comprenant

0.05% de peptide) 4% (soit 0,002% peptide)

Huile végétale, esters 16%

Anti-oxydant 0,2%

Concentré de parfum 0,4%

Steareth-2 0,8%

Steareth-21 1 ,5%

* tel que décrit dans l’exemple 1

Appliquée sur la peau, en particulier la peau du visage, cette composition confère tonicité, élasticité et fermeté, les traits sont réhaussés, le visage est regalbé.

5.2 : Composition sous la forme d’une crème riche pour le visage Eau déminéralisée qsp 100,0%

Glycols 13,0%

Carbomer (Carbopol® 981 ) 0,3%

Sodium polyacrylate (Covacryl® MV60) 0,2%

Sodium Hydroxide 0,15%

Extrait aqueux de bois de rose * 0,5%

ZETA fraction ** 0,3%

Acetyl hexapeptide-8 (ARGIRELINE® Amplified peptide comprenant 0.05% de peptide) 2% (soit 0,001% peptide) Palmitoyl tetrapeptide-7 (RIGIN® comprenant

0.05% de peptide) 3% (soit 0,0015% peptide)

Huile végétale, esters 16%

Triglycérides d’acides gras 4%

Beurre de karité 1 %

Antioxydantt 0,2%

Concentré de parfum 0,4%

Steareth-2 0,8%

Steareth-21 1 ,5%

Conservateurs qs

* et ** tel que décrit dans l’exemple 1

Appliquée sur la peau du visage, cette composition confère tonicité, élasticité et fermeté, les traits sont réhaussés, le visage est regalbé.

5.3 : Composition sous la forme d’un gel-sérum pour le contour des yeux

Eau purifiée Qsp 100.00%

Glycols 13,0%

Conservateurs 0,60%

Carbomer 0,80%

Glyceryl stearate citrate 0,70%

Lécithine et sodium acrylates copolymer (Lecigel PCR négatif) 1 ,20%

Isostearate isostearyle 9,0%

Bis-diglyceryl polyacyladipate-2 (Softisan 649 MB) 1 ,0%

Silice 2,0%

Nacres 1 ,0%

Extrait de Centella asiatica 0,5%

Extrait de marron d’inde 0,1 %

Extrait aqueux de bois de rose * 0,5%

Acetyl hexapeptide-8 (ARGIRELINE® Amplified peptide comprenant 0.05% de peptide) 3% (soit 0,0015% peptide)

Palmitoyl tetrapeptide-7 (RIGIN® comprenant 0.05% de peptide) 4% (soit 0,002% peptide)

ZETA Fraction ** 0,3% Tocopheryl acetate 0,10%

Parfum de rose 0,20%

* et ** tels que décrits dans l’exemple 1 Après application sur le contour des yeux de ce gel-sérum contribue à défroisser rides et ridules, la zone du regard est raffermie. La jeunesse du regard se reconstitue au fil des applications.