MARTYNOV ARTUR VIKTOROVICH (UA)
MERZLIKIN SERHII IVANOVYCH (UA)
| WO2004078172A2 | 2004-09-16 | |||
| WO2004056784A1 | 2004-07-08 | |||
| WO2000002878A1 | 2000-01-20 |
ROEDER CARL N. ET AL.: "Benzimidazole studies. I. The mechanism of benzimidazole formation from o -phenylenedi amine", THE JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY, vol. 06, no. 1, 1941, pages 25 - 35, XP055867788, DOI: 10.1021/jo01201a002
DATABASE PubChem Compound [online] 10 September 2005 (2005-09-10), ANONYMOUS: "Compound Summary for 3698260", XP055842446, retrieved from NCBI Database accession no. 3698260
HAENNI, A., LITHELL, H: "Treatment with a /?-blocker with fl2-agonism improves glucose and lipid metabolism in essential hypertension ", METABOLISM, vol. 43, no. 4, 1994, pages 455 - 461, XP023032674, DOI: 10.1016/0026-0495(94)90076-0
KRESPI PGMAKRIS TKHATZIZACHARIAS AN ET AL.: "Moxonidine effect on microalbuminuria, thrombomodulin, and plasminogen activator inhibitor - 1 levels in patients with essential hypertension", J CARDIOVASC DRUGS AND THERAPY, vol. 12, 1998, pages 463 - 467
"Guidelines for the Management of Arterial Hypertension: The Task Force for the Management of Arterial Hypertension of the European Society of Hypertension (ESH) and of the European Society of Cardiology (ESC)", J HYPERTENS, vol. 25, no. 6, 2007, pages 1105 - 87
See also references of EP 4095129A4
| Формула изобретения 1. , Производное бензимидазола формулы I Где R = Н, -СНз, -С2Н5, -Br, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -NO2, -СООН. Rs= Н, -СНз, -С2Н5. R6= 2. Производные по п.1., отличающиеся тем, что R6= 3. Производные по п.1 отличающиеся тем, что 4. Производные по п.1 отличающиеся тем, что 5. Производные по п.1., отличающиеся тем, что 6. Производные по п.1., отличающиеся тем, что 7. Производные по п.1 отличающиеся тем, что 8. Производные по п.1 отличающиеся тем, что 9. Производные по п. L, отличающиеся тем, что 10. Производные по п.1., отличающиеся тем, что Ri3,i4= -Н; - СНз, -С2Н5 RI2= - СНз 11. Производные по п.10, отличающиеся тем, что 12. Производные по п.10., отличающиеся тем, что 13. Производные по п.10., отличающиеся тем, что 15. Производные по п.10., отличающиеся тем, что 17. Производные по п.10., отличающиеся тем, что 18. Производные по p.p.I -17, отличающиеся тем, что представляют собой соли: гидрохлориды, гидробромиды, гидройодиды, соли натрия, калия, магния, кальция, железа, меди. 19. Производные по п.п. 1 -17, отличающиеся тем, что представляют собой соли с тиоктовой кислотой. 20. Производные по п.п. 1 -17, отличающиеся тем, что представляют собой соли с метформином. 21. Производные по п.п.1 -17, отличающиеся тем, что представляют собой соли с холином. 22. Производные по п.п. 1 -17, отличающиеся тем, что представляют собой комплекс с дипаглифлозином. 23. Производные по п.п. 1 -17., отличающиеся тем, что представляют собой комплекс с 3 -( 1 Н-бензимидазол-2-ил)- 1 ,2,2-триметилциклопентанкарбоновой кислотой. 24. Применение производных по п.п. 1 -17 в изготовлении лекарственных средств - селективных активаторов имидазолиновых рецепторов для лечения патологий, обусловленных старением организма. 25. Фармацевтическая композиция для лечения патологий, обусловленных старением организма, содержащая эффективное количество производных по п.п.1 - 24 от 0,5 м г до 1000 мг в сочетании с одним и более фармацевтически приемлемым эксципиентом. 26. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся наличием в своем составе тиоктовой кислоты. 27. Фармацевтическая композиция по п.25 отличающаяся наличием в своем составе метформина. 28. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся наличием в своем составе холина. 29. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся наличием в своем составе дипаглифлозина. 30. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся наличием в своем составе 3- ( 1 Н-бензимидазол-2-ил)- 1 ,2,2-триметилциклопентанкарбоновой кислоты. 31. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся наличием в своем составе также смесь дипаглифлозина, холина, метформина, тиоктовой кислоты, 3-(1Н- бензимидазол-2-ил)-1 ,2,2-триметилциклопентанкарбоновой кислоты. 32. Фармацевтическая композиция по п.25, представлена в форме инъекционных растворов или суспензий, или мультидозных флаконов, в форме простых или покрытых оболочкой таблеток, таблеток с сахарным покрытием, пластинчатых капсул, гелевых капсул, пилюль, облаток, порошков, свеч или ректальных капсул, растворов или суспензий, мазей и гелей для местного применения. 33. Фармацевтическая композиция по п.25, которая пригодна для парентерального, перорального, ректального, пермукозного или чрезкожного введения. 34. Применение фармацевтической композиции по п.25, в качестве лекарственного средства для лечения патологий, обусловленных старением организма, а именно - в качестве противораковых средств. |
Область техники
Изобретение относится к органической фармацевтической химии, может быть использовано в фармации, медицине и косметологии для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных со старением организма.
Предшествующий уровень техники
Появление селективных агонистов II имидазолиновых рецепторов привело ко «второму рождению» класса антигипертензивных препаратов центрального действия (или симпатолитиков) в лечении артериальной гипертонии (АГ). При этом официально зафиксирован факт возврата симпатолитиков в кардиологическую практику после долгого перерыва. Препараты этой группы были одними из первых антигипертензивных препаратов, которые начали применяться в клинической практике около 40 лет назад, поскольку в патогенезе АГ симпатической нервной системе придавалось важное значение еще со времен нейрогенной теории Г.Ф. Ланга. Однако, когда выяснилось, что симпатолитики старого поколения (клофелин, метилдопа, резерпин) часто вызывают такие серьезные побочные эффекты как сонливость, депрессию, сексуальные расстройства и феномен рикошета, они перестали широко использоваться в качестве лекарственных средств для долговременной антигипертензивной терапии. Их применяли либо при гипертонических кризах, либо по экономическим соображениям из-за относительно низкой стоимости. Вместе с тем понимание значимости симпатической нервной системы в генезе АГ настолько укоренилось в сознании медицинской общественности, что попытки создания новых эффективных и безопасных симпатолитиков не прекращались. Актуальность создания таких препаратов еще более возросла, когда выяснилось, что активация симпатической нервной системы приводит к повышению артериального давления (АД) и играет роль в возникновении ряда других негативных эффектов, в том числе метаболических нарушений, которые значительно увеличивают риск развития осложнений у лиц с АГ. Среди этих эффектов достаточно назвать гипертрофию миокарда, дисфункцию эндотелия, активацию тромбоцитов, инсулинорезистентность и дислипидемию. Таким образом, одними из важнейших направлений фармакотерапии АГ являются одновременное снижение активности симпатоадреналовой системы, коррекция метаболических нарушений и органопротекция. С открытием имидазолиновых рецепторов и созданием его селективных агонистов появление новых эффективных и безопасных симпатолитиков стало реальностью. Французскими учеными было установлено, что имидазолиновые рецепторы находятся в двух важнейших органах регуляции АД — головном мозге и почках. Они расположены в боковых ретикулярных ядрах рострального отдела продолговатого мозга и в проксимальных канальцах почек. Оказалось, что указанные структуры не реагируют на катехоламины, а реагируют на химические соединения, сходные с имидазолином. Именно поэтому эти рецепторы были названы имидазолиновыми. Активация этих рецепторов на уровне головного мозга вызывает модуляцию симпатических импульсов и снижение АД, а в почках — уменьшение активности H+/Na+ насоса и замедление реабсорбции соли и воды.
Агонисты имидазолиновых рецепторов
Агонисты имидазолиновых рецепторов (АИР), обладая схожей с имидазолином структурой, связываются с указанными рецепторами в головном мозге и почках. Воздействуя на имидазолиновые рецепторы головного мозга, они уменьшают симпатическую активность, в результате чего снижается периферическое сопротивление, активность ренин-ангиотензиновой системы и обратное всасывание соли и воды. С другой стороны, благодаря высокому сродству к имидазолиновым рецепторам, АИР практически не связываются с другими адренергическими рецепторами — например, с а2, вследствие чего в терапевтических дозах значительно реже вызывают побочные эффекты, характерные для других препаратов центрального действия. Как известно, появление указанных побочных эффектов связано со стимуляцией а2-адренорецепторов, через которые осуществляют свой антигипертензивный эффект как селективные (a-метилдопа), так и неселективные (клонидин) агонисты а2-адренорецепторов. Данные ряда исследований свидетельствуют об антигипертензивной эффективности агонистов II имидазолиновых рецепторов, сопоставимой с эффективностью наиболее известных и широко используемых представителей основных классов антигипертензивных препаратов. У них отсутствует эффект «ускользания» или развития толерантности к лечению. С другой стороны, АИР хорошо переносятся в связи с тем, как уже было сказано выше, что в терапевтических дозах они не связываются с другими типами адренэргических рецепторов. Особый интерес представляет анализ данных о метаболических эффектах АИР. Наиболее убедительные результаты получены в исследованиях Haenni A. et al. с применением метода эугликемического клэмп-теста. Было установлено, что моксонидин снижает инсулинорезистентность. В российском исследовании, проведенном на базе ГНИЦ ПМ, в которое были включены пациенты с мягкой и умеренной АГ и компенсированным СД 2, также было установлено положительное влияние моксонидина на инсулинорезистентность. После 3-х месячного лечения моксонидином произошло достоверное снижение уровней инсулина и глюкозы в крови, определенных через 2 ч после стандартного завтрака (эквивалент теста толерантности к глюкозе). Эти результаты свидетельствуют об улучшении чувствительности тканей к инсулину, поскольку для поддержания более низкого, чем до лечения, уровня глюкозы, после лечения моксонидином требуется меньшее количество инсулина. В сравнительном рандомизированном исследовании АЛМАЗ, в котором участвовало 202 пациента с инсулинорезистентностью, было изучено влияние моксонидина и метформина на метаболизм глюкозы у больных АГ, ассоциированной с ожирением. Исследование показало, что моксонидин снижал уровень глюкозы натощак, инсулинорезистентность, вес пациентов, а также повышал скорость утилизации глюкозы. Была также проведена оценка влияния данных препаратов на гликемический профиль у пациентов с избыточным весом, мягкой АГ, инсулинорезстентностью и нарушением толерантности к глюкозе. На фоне применения моксонидина уровень глюкозы натощак снижался менее выраженно, чем на фоне метформина, но значимо снижался уровень инсулина, при этом снижение индекса массы тела было сопоставимо на фоне применения обоих препаратов. Интересные данные получены в исследовании одновременного влияния агонистов имидазолиновых рецепторов на симпатическую активность и метаболические показатели. В исследование, в котором изучалась эффективность моксонидина, был включен 41 пациент с АГ 1-3 степени (III степень риска). С целью оценки активности всем больным до и после лечения симпатоадреналовой системы дополнительно к стандартному исследованию биохимических показателей крови (уровень гликемии, HbAlc, липидный спектр крови) проводили двойной динамический тест (ДДТ) на катехоламины (дофамин, норадреналин, адреналин). Также у всех больных исследовали уровень лептина. После 8- недельного лечения моксонидином достижение целевого уровня АД сопровождалось достоверным снижением уровня гормонов стресса, индекса массы тела, инсулинорезистентности и концентрации лептина. Следует отметить, что на фоне лечения было зафиксировано смещение липидного спектра крови в сторону антиатерогенности — достоверное снижение триглицеридов и увеличение холестерина липопротеинов высокой плотности(ЛПВП). Таким образом, препарат Моксогамма воспроизводит не только антигипертензивный, но и благоприятные метаболические эффекты оригинального препарата, что, безусловно, позиционирует его как современный качественный дженерический препарат.
Влияние на функцию эндотелия
Клиническое значение имеет и способность данной группы препаратов улучшать эндотелиальную функцию. Дисфункцию эндотелия в настоящее время рассматривают как универсальный механизм реализации атерогенного влияния различных факторов риска. Коррекция дисфункции эндотелия в дополнение к антигипертензивному действию может обеспечить эффективное снижение риска сердечно-сосудистых осложнений при долговременной терапии АГ. Одним из показателей, позволяющих оценить функцию эндотелия, является фибринолитическая активность плазмы крови. Как известно, нормальная фибринолитическая активность обеспечивается балансом между уровнями тканевого активатора плазминогена (tPA) и его ингибитора (PAI-1), которые синтезируются в клетках эндотелия. Увеличение синтеза PAI-1 приводит к снижению фибринолитической активности, повышая риск прогрессирования сердечно-сосудистых заболеваний. Установлено достоверное снижение уровня PAI-1 на фоне терапии моксонидином у больных с АГ, одним из возможных механизмов которого является уменьшение инсулинорезистентности и активности симпатоадреналовой системы [11]. Также обнаружено снижение в плазме уровня тромбомодулина — гликопротеина клеточных мембран эндотелиальных клеток, который является рецептором для тромбина и появляется в плазме крови при повреждении эндотелия. Поэтому уменьшение тромбомодулина на фоне терапии моксонидином, вероятно, связано с подержанием целостности эндотелия сосудов. Таким образом, результаты последних исследований показали, что селективные агонисты II имидазолиновых рецепторов обеспечивают не только адекватный и долговременный контроль АД, но и обладают рядом положительных метаболических эффектов: уменьшение инсулинорезистентности, увеличение уровня холестерина ЛПВП, улучшение функции эндотелия и фибринолитической активности плазмы крови. В Европейских рекомендациях по диагностике и лечению АГ АИР отнесены к лучшему классу препаратов по благоприятному влиянию на чувствительность тканей к инсулину [12]. В российских рекомендациях по диагностике и лечению АГ ниша АИР обозначена как лечение АГ в сочетании с метаболическим синдромом в комбинации с ингибиторами АПФ или блокаторами рецепторов ангиотензина II. При этом подчеркивается, что указанные комбинации не только хорошо снижают АД, но и благоприятно влияют на органы-мишени и снижают риск развития сахарного диабета [13]. Таким образом, положительные метаболические эффекты и органопротекция АИР получили официальное признание.
Агматин как высокоафинный лиганд имидазолиновых рецепторов
Гипотеза о существовании имидазолиновых рецепторов была выдвинута группой исследователей, изучавших центральное гипотензивное действие агониста 12- адренорецепторов клонидина, имеющего в своей структуре имидазолиновую группу. Впоследствии в экспериментах на нейронах ростральной вентролатеральной зоны продолговатого мозга (RVLM) крыс были получены доказательства того, что не менее 36% специфических мест связывания в этой зоне отличаются от адренергических и распознают имидазолиновые производные. На основании экспериментов с радиолигандами различной селективности были выделены основные типы имидазолиновых рецепторов. II, -рецепторы маркируются [ЗН]-клонидином и “узнают” все имидазолиновые и имидазоловые соединения, а также оксазолиновые производные. 12, -рецепторы обладают высоким аффинитетом к имидазолиновым производным (клонидин, моксонидин), средним — к имидазоловым производным (идазоксан, фентоламин) и низким — к гуанидиновым производным (амилорид, гуанабенз) . I, -рецепторы принимают участие в реализации центрального гипотензивного эффекта клонидина.
12-рецепторы маркируются [ЗН]-идазокеаном, распознают некоторые имидазолины, бензодиазепины и гуанидиновые соединения. 12-рецепторы обладают высоким афинитетом к имидазоловым и гуанидиновым соединениям, средним — к имидазол и новым соединениям. 12-рецепторы разделяют на 2 подтипа: 12а — с высоким и 12Ъ — с низким аффинитетом к амилориду . Недавно классификация имидазолиновых рецепторов была дополнена 13 -рецепторами. Они были обнаружены в поджелудочной железе. Имидазолиновые рецепторы разных типов локализованы в центральной и периферической нервной системе, а также в сердце, почках, желудке, поджелудочной железе, печени, толстом кишечнике, плаценте, предстательной железе. Эти рецепторы вовлечены в реакции сердечно-сосудистой системы, регуляцию внутриглазного давления, контроль секреции хлористоводородной кислоты в желудке, высвобождение инсулина, модуляцию ноцицептивных ответов. Имидазолиновые рецепторы изучались также в связи с их возможным участием в развитии патологических процессов старения, таких как депрессия, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, опухоли глии. Существование имидазолиновых мест связывания, как отдельного типа рецепторов, предполагало наличие их эндогенного лиганда. В последние годы из тканей животных были выделены три основных кандидата на эту роль: классическая клонидинзамещающая субстанция (cCDS), иммунореактивная клонидинзамещающая субстанция (iCDS) и агматин. Из трех кандидатов структура определена только у агматина. Агматин выделен из мозга млекопитающих в 1994 г., представляет декарбоксилированный аргинин :
Агматин связывается с имидазолиновыми рецепторами всех подтипов в диапазоне концентраций 0,5-5 мМ. Утверждать в настоящее время, что агматин является селективным эндогенным лигандом имидазолиновых рецепторов нельзя из-за его относительно невысокого аффинитета и недостаточности данных об эффектах агматина, связанных с воздействием на эти рецепторы.
Т ерминол огия
Антигериатрическое действие - фармакологические эффекты, направленные на продление жизни живого организма: к таким препаратам относят ингибиторы гистондеацетилазы, ингибиторы фосфодиестеразы, стимуляторы имидазолиновых рецепторов II и 12 типов, активаторы экспрессии теломеразы, иммуномодуляторы и антивирусные средства, противораковые средства, статины, антигипергликемические препараты (метформин). Общим родовым признаком данного фармакологического действия является физическое продление жизни человека или животных.
Теломераза - фермент, добавляющий особые повторяющиеся последовательности ДНК (TTAGGG у позвоночных) к 3 '-концу цепи ДНК на участках теломер, которые располагаются на концах хромосом в эукариотических клетках. Теломеры содержат уплотнённую ДНК и стабилизируют хромосомы. При каждом делении клетки теломерные участки укорачиваются. Существование механизма, компенсирующего укорочение теломер (теломеразы), было предсказано в 1973 году А. М. Оловниковым. Теломераза является обратной транскриптазой, причём с ней связана особая молекула РНК, которая используется в качестве матрицы для обратной транскрипции во время удлинения теломер. В результате деятельности теломеразы длина теломерных участков хромосом клетки увеличивается или сохраняется на постоянном уровне, компенсируя таким образом концевую недорепликацию и позволяя клетке делиться неограниченно долго. В ходе исследования этого фермента (состоящего, как описано ниже, из РНК-компонента и белкового компонента) выяснилось, что РНК-компонент экспрессируется на постоянном уровне практически во всех клетках, и для индуцирования теломеразной активности необходима экспрессия белкового компонента, названного поэтому каталитическим компонентом теломеразы. Искусственно индуцированная экспрессия гена каталитического компонента теломеразы (путём введения гена при помощи методов генной инженерии) делает клеточную культуру бессмертной, то есть способной делиться неограниченно долго, отменяя тем самым для культуры предел Хейфлика. Теломераза экспрессируется в стволовых, половых и некоторых других типах клеток организма, которым необходимо постоянно делиться для функционирования определённых тканей (например, клетки эпителия кишечника). Обычные соматические клетки организма лишены теломеразной активности. Клетки 85 % раковых опухолей обладают теломеразной активностью, поэтому считается, что активация теломеразы является одним из событий на пути клетки к злокачественному перерождению.
Известны соединения, обладающие активностью в отношении рецепторов имидазолина (Заявка W02000002878A1), представляющие собой трехчленные циклы - карболины, имеющие в своем составе фрагмент бензимидазола. Синтезированные вещества предполагается использовать в качестве гипотензивных средств, нейропротекторов, нефро- и кардиопротекторов. Авторы показали более, чем 100-кратную афинность к 12-рецепторам (по результатам моделирования) у бензодиоксана, чем к адренорецепторам. Показано накопление некоторых веществ в мозге кроликов. Недостатком данных соединений является отсутствие геропротекторного действия (продление сроков жизни), иная химическая природа соединений, чем предложенные нами, сложность их получения, отсутствие достоверных фармакологических данных о биологической активности. Раскрытие изобретения
Задачей изобретения является получение новых производных бензимидазола, их солей, композиций, проявляющих антигериатрическое действие.
Поставленная задача решается путем синтеза новых производных бензимидазола следующей структуры:
Где R = Н, -СНз, -С 2 Н5, -Br, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -СООН.
Rs= Н, -СНЗ, -С 2 Н 5 .
Заместитель R 6 может иметь одну из таких структур:
RI3,I4 — -H; - СНз, -C2H5 R12 — СНз Указанные выше структуры могут представлять собой соли: гидрохлориды, гидробромиды, гидройодиды, соли натрия, калия, магния, кальция, железа, меди. Также они могут представлять собой соли с тиоктовой кислотой, метформином, холином, дипаглифлозином и комплекс с 3-(1Н-бензимидазол-2-ил)-1,2,2-тримети лциклопентанкарбоновой кислотой. Данные комплексы и соли могут быть использованы в изготовлении лекарственных средств - селективных активаторов имидазолиновых рецепторов для лечения патологий, обусловленных старением организма. На основе данных структур могут быть получены фармацевтические композиции для лечения патологий, обусловленных старением организма, содержащие эффективное количество указанных выше производных от 0,5 мг до 1000 мг в сочетании с одним и более фармацевтически приемлемым эксципиентом. Отдельно композиция может содержать в виде смеси тиоктовую кислоту, метформин, холин дипаглифлозин, 3-(l Н-бензимидазол-2-ил)- 1 ,2,2-триметилциклопентанкарбонов ю кислоту отдельно или в смеси друг с другом. Полученная фармацевтическая композиция может быть использована для получения таких лекарственных форм, как инъекционные растворы или суспензии, в т.ч. в мультидозных флаконах, в форме простых или покрытых оболочкой таблеток, таблеток с сахарным покрытием, пластинчатых капсул, гелевых капсул, пилюль, облаток, порошков, свеч или ректальных капсул, растворов или суспензий, мазей и гелей для местного применения. Разработанные и описанные выше фармацевтические композиции могут быть использованы для парентерального, перорального, ректального, пермукозного или чрезкожного введения. Данные лекарственные формы могут быть использованы для лечения патологий, обусловленных старением организма, а именно - в качестве противораковых средств, средств продления жизни, нефропротекторов, кардиопротекторов, церебропротекторов, гепатопротекторов, веществ, повышающих чувствительность тканей к инсулину, гипотензивных препаратов. Пример 1. Синтез производного (III)
(I) (II) (III)
RJ_4= H, -CH 3 -C 2 H 5 -Br, - Cl, -I, -F, -OH, -CN, -N0 2 -COOH. R 5 = H, -CH 3 -C 2 H 5 . ’ Смесь 2,05 г (0,01 моль ) тиоктовой кислоты (I) , 1,08 г 0,01 моль ) орто-фенилендиамина замещенного (II), 15 мл ледяной уксусной кислоты и 5 мл диметилформамида кипятят в течение 60 минут. Раствор охлаждают, выпавший осадок (III) отфильтровывают и высушивают . Кристаллизуют из этанола. Выход 70-85 %. Вместо незамещенного (II) могут быть использованы его замещенные производные с Ri- 4= Н, -СНз, -С 2 Н 5 , -Br, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -СООН. R 5 = Н, -СН 3 , -С 2 Н 5 , 1.
Вместо ледяной уксусной кислоты может быть использована смесь из 1,5 мл толуола и 5 мл диметилформамида. Вместо перекристаллизации можно использовать осаждение из раствора ледяной уксусной кислоты изопропиловым спиртом путем добавления к охлажденной реакционной смеси 5 мл изопропилового спирта и отстаиванием раствора в течении суток. Выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают из ледяной уксусной кислоты изопропанолом, как описано выше.
В таблице 1 приведены данные анализа некоторых из синтезированных соединений.
Таблица 1. Результаты ЯМР 13 С анализа некоторых из синтезированных соединений (III) и выход синтеза
Пример 2. Синтез производного (V) Смесь 3,9 г (0,01 моль ) урсодеоксихолевой кислоты (IV) , 1,08 г ( 0,01 моль ) орто- фенилендиамина (II), 10 мл ледяной уксусной кислоты и 3 мл диметилформамида кипятят в течение 90 минут. Раствор охлаждают, выпавший осадок (V) отфильтровывают и высушивают . Кристаллизуют из метанола. Выход 70-85 %.
Вместо незамещенного (II) могут быть использованы его замещенные производные с RI- 4 = Н, -СН 3 , -С 2 Н 5 , -Br, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -СООН. R 5 = Н, -СН 3 , -С 2 Н 5 , 1.
Вместо ледяной уксусной кислоты может быть использована смесь из 9 мл толуола и 9 мл диметилформамида. Вместо перекристаллизации можно использовать осаждение из раствора ледяной уксусной кислоты изопропиловым спиртом путем добавления к охлажденной реакционной смеси 5 мл воды и отстаиванием раствора в течении суток. Выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают из ледяной уксусной кислоты водой, как описано выше.
В таблице 2 приведены данные анализа некоторых из синтезированных соединений. Таблица 2. Результаты ЯМР 13 С анализа некоторых из синтезированных соединений (V) и выход синтеза
Пример 3. Синтез производного (VII)
R 5 = Н, -СН 3 -С 2 Н 5 . Смесь 2,7 г (0,01 моль ) модафинила (VI) , 1,08 г ( 0,01 моль ) орто-фенилендиамина (II), 5 мл ледяной уксусной кислоты и 3 мл диметилформамида кипятят в течение 90 минут. Раствор охлаждают, выпавший осадок (VII) отфильтровывают и высушивают . Кристаллизуют из метанола. Выход 60-65%. Вместо незамещенного (II) могут быть использованы его замещенные производные с RI- = Н, -СНЗ, -С2Н5, -ВГ, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -СООН. R 5 = Н, -СНз, -С 2 Н 5 , 1.
Вместо ледяной уксусной кислоты может быть использована смесь из 5 мл толуола и 5 мл диметилформамида. Вместо перекристаллизации можно использовать осаждение из раствора ледяной уксусной кислоты добавления к охлажденной реакционной смеси 5 мл воды и отстаиванием раствора в течении суток. Выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают из ледяной уксусной кислоты водой, как описано выше.
В таблице 3 приведены данные анализа некоторых из синтезированных соединений.
Таблица 3. Результаты ЯМР 13 С анализа некоторых из синтезированных соединений (VII) и выход синтеза
Пример 4. Синтез производного (IX)
Смесь 0,01 моль аминокислоты (VIII), 0,01 моль орто-фенилендиамина (II), 10 мл ледяной уксусной кислоты кипятят в течение 60 минут. Раствор охлаждают, добавляют 7 мл изопропилового спирта, через сутки выпавший осадок (IX) отфильтровывают и высушивают. Переосаждают из ледяной уксусной кислоты изопропанолом, как описано выше. Выход 70-85%.
Вместо незамещенного (II) могут быть использованы его замещенные производные с RI- 4 = Н, -СНЗ, -С2Н5, -ВГ, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -СООН. R 5 = Н, -СНз, -С 2 Н 5 , 1.
В качестве аминокислоты (VIII) могут быть использованы незамещенные или замещенные производные глутаминовой, аспарагиновой кислот, аргинина, лизина, амидов глутаминовой и аспарагиновой кислот, валина, триптофана, аланина.
Вместо ледяной уксусной кислоты может быть использована смесь из 5 мл толуола и 5 мл диметилформамида. Вместо перекристаллизации можно использовать осаждение из раствора ледяной уксусной кислоты добавления к охлажденной реакционной смеси 5 мл воды и отстаиванием раствора в течении суток. Выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают из ледяной уксусной кислоты водой, как описано выше.
В таблице 4 приведены данные анализа некоторых из синтезированных соединений.
Таблица 4. Результаты ЯМР 13 С анализа некоторых из синтезированных соединений (IX) и выход синтеза Пример 5. Синтез производного (XI)
Смесь 0,01 моль пангамовой кислоты (X), 0,01 моль орто-фенилендиамина (II), 10 мл ледяной уксусной кислоты кипятят в течение 30 минут. Раствор охлаждают, добавляют 5 мл изопропилового спирта, через сутки выпавший осадок (XI) отфильтровывают и высушивают. Переосаждают из ледяной уксусной кислоты изопропанолом, как описано выше. Выход 60-75%.
Вместо незамещенного (II) могут быть использованы его замещенные производные с R I-4 = Н, -СНЗ, -С 2 Н 5 , -ВГ, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -СООН. R 5 = Н, -СНз, -С 2 Н 5 , 1.
Вместо пангамовой кислоты (X) могут быть использованы биотин, пантотеновая кислота, фолевая кислота, цианокобаламин.
Вместо ледяной уксусной кислоты может быть использована смесь из 5 мл толуола и 5 мл диметилформамида. Для очистки продукта можно использовать осаждение из раствора ледяной уксусной кислоты добавления к охлажденной реакционной смеси 5 мл воды и отстаиванием раствора в течении суток. Выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают из ледяной уксусной кислоты водой, как описано выше.
В таблице 5 приведены данные анализа некоторых из синтезированных соединений. Таблица 5. Результаты ЯМР 13 С анализа некоторых из синтезированных соединений (XI) и выход синтеза
Пример 6. Синтез производного (XIII)
R ]-4 = И, -СН 3 -С 2 Н 5 -ВГ, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 -СООН;
R 5 = Н, -СН 3 -С 2 Н 5 ; Смесь 0,01 моль оротовой кислоты (XII), 0,01 моль орто-фенилендиамина (II), 10 мл ледяной уксусной кислоты кипятят в течение 90 минут. Раствор охлаждают, добавляют 5 мл изопропилового спирта, через сутки выпавший осадок (ХШ) отфильтровывают и высушивают. Переосаждают из ледяной уксусной кислоты изопропанолом, как описано выше. Выход 65-75%. Вместо незамещенного (II) могут быть использованы его замещенные производные с RI- 4 = Н, -СН З , -С 2 Н 5 , -ВГ, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -СООН. R 5 = Н, -СН 3 , -С 2 Н 5 , 1.
Вместо ледяной уксусной кислоты может быть использована смесь из 5 мл толуола и 5 мл диметилформамида. Для очистки продукта можно использовать осаждение из раствора ледяной уксусной кислоты добавления к охлажденной реакционной смеси 5 мл воды и отстаиванием раствора в течении суток. Выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают из ледяной уксусной кислоты водой, как описано выше.
В таблице 6 приведены данные анализа некоторых из синтезированных соединений. Таблица 6. Результаты ЯМР 13 С анализа некоторых из синтезированных соединений (XIII) и вь!ход синтеза
Смесь 0,01 моль акридонуксусной кислоты (XIV), 0,01 моль орто-фенилендиамина (II), 10 мл ледяной уксусной кислоты кипятят в течение 90 минут. Раствор охлаждают, добавляют 5 мл изопропилового спирта, через сутки выпавший осадок (XV) отфильтровывают и высушивают. Переосаждают из ледяной уксусной кислоты изопропанолом, как описано выше. Выход 55-60%.
Вместо незамещенного (И) могут быть использованы его замещенные производные с RI- = Н, -СНЗ, -С 2 Н 5 , -Br, - Cl, -I, -F, -ОН, -CN, -N0 2 , -COOH. R 5 = Н, -СН 3 , -С 2 Н 5 , 1.
Вместо ледяной уксусной кислоты может быть использована смесь из 5 мл толуола и 5 мл диметилформамида. Для очистки продукта можно использовать осаждение из раствора ледяной уксусной кислоты добавления к охлажденной реакционной смеси 5 мл воды и отстаиванием раствора в течении суток. Выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают из ледяной уксусной кислоты водой, как описано выше.
В таблице 7 приведены данные анализа некоторых из синтезированных соединений. Таблица 7. Результаты ЯМР 13 С анализа некоторых из синтезированных соединений (XV) и выход синтеза
Пример S. Геропротекторное действие компонентов Основным геропротекторным эффектом активаторов имидазолиновых реецепторов является увеличение продолжительности жизни животных. Наиболее изученной моделью является модель выживаемости дрозофилл ввиду их небольшой продолжительности жизни. Линии Drosophila melanogaster, отселектированные на различия по репродуктивной функции Начиная с 1966 года была проведена селекция родственных линий дрозофилы по репродуктивной функции (половой активности самцов). Отбор сопровождали тесным инбридингом — индивидуальными скрещиваниями в каждом поколении полных братьев и сестер. В процессе селекции неоднократно получали с помощью возвратного отбора серию линий, отличающихся по селектируемым признакам (В А— , НА—, НА+). Такой отбор привел к приобретению низкоактивными линиями комплекса генетически контролируемых изменений, важнейшие из которых затронули нейроэндокринную систему мух, что стало предметом специальных исследований). В линиях, заложенных из природной популяции «ЛР», вели отбор по эмбриональной смертности, сопровождаемый тесным инбридингом. В итоге были получены контрастные инбредные линии: с высокой (линия ВЭС) и низкой эмбриональной смертностью (линия НЭС). Параллельно поддерживали без отбора в массовых культурах выборку мух из природной популяции ЛР. Было установлено, что линии ВЭС и ЛР характеризуются трехкратными различиями в численности жизнеспособного потомства, не отличаясь при этом по плодовитости, определяемой по числу отложенных яиц за единицу времени. В линии ВЭС 81 % яиц останавливаются в развитии уже на ранних стадиях онтогенеза, то есть этой линии свойственна высокая частота ранних доминантных леталей (РДЛ), причем она возрастает от 65 % в первые сутки яйцекладки до 95 % на четвертые. По показателю поздних доминантных леталей различий между изученными линиями выявлено не было. Проведенный генетический анализ показал, что частота и динамика возникновения РДЛ в линии ВЭС полностью определяется генотипом самки. Кроме того, было обнаружено, что в линии ВЭС к 86-му поколению направленной селекции возникла система сбалансированных летальных мутаций, создающая перманентную гетерозиготность на небольшом участке второй хромосомы.
Исходное количество имаго в течение первых шести часов после вылета подвергали эфирной наркотизации и размещали по индивидуальным стеклянным стаканчикам (от 5 до 10 виргинных самок и самцов в каждом). Культурам присваивали индивидуальные номера. В дальнейшем регулярно производили визуальный подсчет умерших особей отдельно в каждом стаканчике, без эфирной наркотизации, после чего оставшихся в живых мух переносили на свежую среду, сохраняя при этом порядковый номер стаканчика. Объем каждой когорты составлял от 100 до 500 особей. Рассчитывали следующие параметры: медиану кривой выживания — как МТ50 в уравнении кривой (далее МПЖ — медианная продолжительность жизни)
100 где U — процент живых особей когорты, X — возраст когорты, МТ50 и HS — параметры уравнения регрессии. Наклон кривой выживания — как HS — Hill Slope в том же уравнении (далее НКВЖ). Нетрудно заметить, что параметр МТ50 является близким аналогом средней продолжительности жизни. При этом его вычисляют методом наименьших квадратов — соответственно, он является стандартным коэффициентом регрессии, и такие коэффициенты можно сравнивать с помощью F-критерия Фишера.
Параметр HS — статистически оценивает наклон кривой, а значит, косвенно оценивает максимальную продолжительность жизни. Поскольку данная кривая при увеличении возраста когорты асимптотически стремится к нулю, мы также предлагаем оценивать точку на оси X, которой соответствует значение функции (доля живых особей), равное 0,1 %. Этот возраст мы будем называть «ожидаемой максимальной продолжительностью жизни» (ОМПЖ). Коэффициенты детерминации регрессионной модели во всех случаях превышают 90 %. В таблице ниже приведена МПЖ для исследованных соединений, которые вводили в корм насекомых путем распыления 1% раствора.
Таблица 8. Параметры кривых выживания в разных вариантах опыта для синтезированных бензимидазолов
Таким образом, практически все производные бензимидазолов значительно продлевали жизнь дрозофил, часто в 3-4 раза. Наиболее эффективными соединениями- геропротекторами следует выделить вещества: Illh; IXa; IXb; XIa; Xlllh; XVa; XVg; XVh; XVi, которые продлевали жизнь дрозофил до 50 и более дней, тогда как в контроле этот показатель был 21-26 дней при ожидаемом значении 30 дней. Наиболее эффективным оказалось соединение XVg, которое продлевало продолжительность жизни дрозофил практически в 3 раза до 70 дней и представляло собой триметилпроизводное бензимидазолил акридонуксусной кислоты.