Elle concerne égaiement une composition émulsionnable comprenant un tel extrait végétal, utile dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique.

Elle concerne également un procédé d'obtention d'un tel extrait végétal.

Le tissu cutané est un organe participant au maintien de l'homéostasie de l'individu. En effet, la peau présente des propriétés de rétention d'eau. Ces propriétés sont dues, entre autres, à la présence de lipides, organisés en réseau multilamellaire au sein de la couche cornée.

En plus de la capacité de rétention d'eau, ces lipides assurent la cohésion de !'épiderme en établissant des liens entre les cornéocytes, participant ainsi à la souplesse et à la flexibilité de la peau.

Les lipides jouant un rôle primordial au niveau de l'épiderme sont les sphingolipides et les glycosphingolipides (appelés aussi céramides et glycosylcéramides ou cérébrosides).

Au cours du vieillissement cutané (physiologique ou photoinduit) ou lors de pathologies cutanées (psoriasis, dermatites atopiques), apparat un déséquilibre lipidique aboutissant à une déshydratation cutanée et à une perte de souplesse de la peau.

Le vieillissement de la peau est également lié à des augmentations de sécrétion et d'activité de différentes enzymes notamment la collagénase.

Cette métalloprotéinase a pour substrat préférentiel les collagènes fibrillaires et les glycosaminoglycanes. L'augmentation de l'activité de la collagénase a donc pour conséquence un accroissement de la dégradation des fibres de collagènes, ce qui explique en partie la perte de résistance du tissu cutané qui apparaît avec l'âge.

De la mme façon, I'augmentation de l'activité de la collagénase conduit à une dégradation importante des glycosaminoglycanes, macromolécules largement impliquées dans le maintien de l'hydratation du derme. On peut en effet établir une corrélation entre la diminution de la quantité des glycosaminoglycanes et la diminution de la teneur en eau du tissu cutané qui apparaît avec l'âge.

Le processus inflammatoire qui se développe dans l'organisme (expositions aux UV, brûlures, pathologies cutanées inflammatoires, arthrite rhumatoïde, parodontopathies, emphysème pulmonaire) est un phénomène très complexe. C'est le résultat d'interactions étroites entre composants matriciels, cellules de l'inflammation et enzymes protéolytiques. Parmi ces enzymes, I'éiastase leucocytaire humaine est largement impliquée dans les dégradations tissulaires liées au phénomène inflammatoire. Le spectre d'action de cette serine protéase est très large (coliagènes, fibronectine, protéoglycanes, inhibiteur des métalloprotéinases matricielles, facteurs de l'hémostase, facteurs de la coagulation, immunoglobulines...). Dans le cas d'inflammation chronique, I'élastase entraîne une amplification de la réaction inflammatoire et conduit à des altérations du tissu conjonctif parfois irréversible.

Actuellement, l'industrie cosmétique et pharmaceutique est toujours en qute de nouveaux composés ou principes actifs, notamment des produits d'origine végétale pour limiter, voire empcher, ces altérations qui apparaissent au cours du vieillissement ou bien lors de phénomènes inflammatoires.

Le développement de produits d'origine végétale permettant de remplacer des composés d'origine animale est essentiel afin de pouvoir mettre sur le marché en cosmétique, diététique ou pharmacie, des produits de substitution aux produits d'origine animale évitant ainsi le risque de contamination virale par des virus de type prion. Ces virus, tels que le virus de la vache folle, se développent dans le système nerveux des ruminants et est actuellement reconnu comme transmissible à I'homme, causant la maladie de Creutzfeldt-Jakob.

Les principales applications de la composition cosmétique ou pharmaceutique selon l'invention sont : I'action anti-vieillissement au niveau cutané, I'action anti-inflammatoire, la stabilisation et la protection de principes actifs dans lesdites compositions.

Un objet de la présente invention est notamment de proposer un nouvel extrait végétal qui présente un effet bénéfique en ce qui concerne le pouvoir hydratant, le maintien de l'intégrité du ciment intercornéocytaire et la souplesse de la peau.

Un autre objet de la présente invention est de proposer un nouvel extrait végétal présentant une activité anticollagénase (TIMP-1) pour des concentrations égales ou supérieures à 5 ßg/ml.

Un autre objet de la présente invention est de proposer un neuve ! extrait végétal présentant une activité anti-élastase leucocytaire humaine (test enzymatique appliqué selon la méthode décrite par Nakajima et collaborateurs en 1979 : Nakajima K., Powers J. C., Ashe B., Zimmerman M. J., (1979). Mapping the extended substrate binding site of cathepsin G and human leukocyte elastase. J. Biol Chem 254 : p. 4027-4032).

La concentration qui inhibe 50 % de l'activité de l'élastase est égale à environ 55 Lg/ml.

La solution aux problèmes techniques précités est obtenue par un extrait végétal de céréales à base de lipides polaires caractérisé en ce qu'il comprend une association de phytosphingolipides et phytoglycoglycérolipides dans un rapport en poids compris entre 0,5 et 2.

On a en effet trouvé que l'association des deux familles de composés précités dans le rapport sus-indiqué présentait les propriétés remarquables exposées ci-dessus.

Les céréales qui peuvent tre utilisées pour obtenir l'extrait selon l'invention sont de façon générale toutes les céréales connues dont on peut citer particulièrement le blé, I'orge, le seigle, I'avoine, le maïs, le sorgho.

Les lipides polaires qui constituent l'extrait selon l'invention sont issus des lipides appelés « lipides liés » car ils sont associés à la fraction protéique des céréales ; dans le blé par exemple, la masse protéique

contient 5 à 10% de lipides liés selon les variétés de blé. La plupart des lipides liés se trouvent sous forme de vésicules lipidiques de diamètre inférieur à 300 nm, insérées dans le réseau protéique ; une faible proportion des lipides liés est"adsorbée"à la surface du réseau protéique. Ces lipides liés sont composés de 70 % de lipides polaires, d'où l'intért de travailler avec cette fraction de céréales, dans le but de purifier les phytoglycoglycérolipides et phytosphingolipides.

Les phytosphingolipides peuvent exister sous forme glycosylées ; ils sont appelées glycosylcéramides ou cérébrosides.

Les phytoglycoglycérolipides comprennent notamment les glycosyldiglycérides tels que les digalactosyldiglycérides.

Selon une variante préférée, le rapport en poids entre les phytosphingolipides et les phytoglycoglycérolipides est compris entre 1 et 1,8.

Selon une autre variante, I'extrait végétal comprend au moins 70% de phytosphingolipides (sous forme glycosylés ou non) et de phytoglycoglycérolipides.

Comme la composition exacte de l'extrait selon l'invention est fonction de la nature de la céréale et du procédé d'extraction, ledit extrait végétal pourra comprendre selon une variante des triglycérides et/ou des phospholipides.

Selon une première variante l'extrait végétal sous forme huileuse comprend en pourcentage en poids : -Phytosphingolipides et 10 à 20 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 10 à 20 % (dont digalactosyldiglycérides) -Triglycérides 50 à 65 % -Phospholipides 10 à 15 % Selon la deuxième variante l'extrait végétal sous forme d'une poudre lipidique polaire comprend en pourcentage en poids :

-Phytosphingolipideset 45 à 55 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 30 à 40 % (dont digalactosyldiglycérides) -Triglycérides 0 à 5 % -Phospholipides 10 à 20 % Selon une troisième variante, !'extrait végéta ! sous forme huileuse comprend en pourcentage en poids : -Phytosphingolipides et 4 à 9 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 5 à 10 % (dont digalactosyldiglycérides) -Triglycérides 75 à 85 % -Phospholipides 1 à 6 % Les propriétés d'hydratation cutanée par incorporation de l'huile selon la première variante dans des crèmes ou pommades sont tout particulièrement liées à la teneur en glycosphingolipides, sphingolipides et digalactosyldiglycérides qui possèdent de grandes capacités de rétention d'eau. De plus, la présence de triglycérides limite les pertes hydriques cutanées en surface de I'épiderme.

L'incorporation de l'huile selon la première ou la troisième variante dans des compléments nutritionnels donne également de très bons résultats concernant l'hydratation cutanée.

Les triglycérides sont des lipides polaires et l'extrait végétal les contenant tout particulièrement l'huile selon la troisième variante peut de ce fait servir de support pour l'incorporation de vitamines ou autres composés liposolubles tels que la vitamine A, la vitamine E, les caroténoïdes pour des applications par voie topique ou par voie orale.

Comme cela a été mentionné ci-dessus, I'association des phytosphingolipides, des glycosphingolipides et des phytoglycoglycérolipides selon la deuxième variante révèle non seulement des propriétés biochimiques et physiologiques intéressantes mais

également une très grande facilité d'utilisation en formulation pour la réalisation du produit fini (cosmétique, diététique ou pharmaceutique).

En ce qui concerne les propriétés biochimiques et physiologiques, celles-ci sont dues principalement à l'association entre les sphingolipides (glycosylés ou non) et les galactoglycérolipides qui agissent de façon combinée au sein d'une préparation cosmétique, diététique ou pharmaceutique.

On soulignera notamment l'action anti-vieillissement de ce mélange lipidique au niveau cutané pour des applications par voie topique.

En effet, la présence des glycosphingolipides et sphingolipides apporte un pouvoir hydratant important et joue un rôle dans le maintien de l'intégrité du ciment intercornéocytaire. De plus, les galactoglycérolipides présents dans ce mélange lipidique, tels que les digalactosyldiglycérides, sont capables d'établir des liaisons avec les protéines cutanées apportant ainsi une amélioration de la souplesse de la peau.

Les propriétés anti-collagénases ont été mises en évidence sur culture de fibroblastes dermiques humains ; le mélange sphingolipides et galactoglycérolipides induit une augmentation significative de la sécrétion de l'inhibiteur tissulaire spécifique de la collagènase (le TIMP-1). Le mélange lipidique polaire confère donc une protection des macromolécules du tissu cutané contre des dégradations enzymatiques liées au vieillissement.

Des tests enzymatiques in vitro ont montré que le mélange lipidique polaire (glycosphingolipides, sphingolipides et digalactosyidiglycérides) présente une activité anti-élastase leucocytaire humaine alors que des céramides ou cérébrosides purifiés d'origine animale ne présentent aucune activité anti-élastase. II se produit en milieu aqueux une association particulière entre les glycosphingolipides, sphingolipides et digalactosyidiglycérides qui permet de bloquer l'activité de t'enzyme.

Cette propriété peut tre mise en pratique en cosmétique pour lutter contre les phénomènes inflamrnatoires cutanés liés à l'exposition aux UV.

Des applications pharmaceutiques peuvent également tre envisagées : -incorporation du mélange lipidique polaire dans des pommades contre les brûlures, contre des inflammations cutanées telles que dermatites.

-incorporation dans des sprays pour inhalations dans le cas d'emphysème pulmonaire -incorporation dans des gels dentaires dans le cas de gingivites et parodonthopathies.

En ce qui concerne les formulations, II est possible de réaliser une émulsion aqueuse à 5 ou 10 % qui est très stable au cours du temps. Cela permet alors l'incorporation du mélange lipidique dans les phases aqueuses des crèmes, lotions ou shampooings.

L'invention a donc également pour objet une composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant un extrait végétal selon l'invention, notamment une émulsion aqueuse.

A titre indicatif, on donne un exemple d'utilisation dans un shampooing : Le cheveu est une fibre à la fois hydrophile et hydrophobe ; en milieu aqueux, il possède une forte aptitude à !'hydratation grâce à l'ensemble des liaisons intramoléculaires polaires, dipolaires et hydrogène.

Les phytosphingolipides et les galactoglycérolipides sont des molécules amphiphiles et permettent d'augmenter l'hydratation du cheveu lors du shampooing. Au cours du séchage, de nouvelles liaisons intramoléculaires peuvent se reconstituer pour figer une nouvelle configuration.

Plus le cheveu s'hydrate au cours du lavage, plus il sera facile à mettre en forme ensuite.

Une propriété particulièrement intéressante des compositions huileuses comprenant l'extrait végétal selon l'invention réside dans le fait que l'incorporation du mélange lipidique polaire dans !'eau sous agitation forme spontanément des micelles ou des microvésicules, sans incorporation des phospholipides ou lécithines supplémentaires (émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile).

Cette propriété permet de protéger des principes actifs ou vitamines dans des préparations cosmétiques, diététiques ou pharmaceutiques contre des attaques enzymatiques, radicalaires ou contre l'agression par les UV ou de stabiliser les principes actifs.

De la mme façon, cette formation de microvésicules ou de micelles conduit à I'encapsulation de produits colorés, ou de produits odorants, permettant ainsi d'atténuer la couleur et l'odeur de certains composés utilisés en formulation cosmétique ou pharmaceutique.

L'invention a donc également pour objet une composition auto- émulsionnable lipidique comprenant l'extrait végétal selon l'invention ainsi qu'un ou plusieurs principes actifs.

Elle a également pour objet les émulsions aqueuses micellaires obtenues par mise en contact avec une phase aqueuse.

L'invention concerne également un procédé de préparation de l'extrait végétal selon l'invention.

La présente invention concerne un procédé d'extraction et de purification des lipides associés à la fraction protéique d'un composé d'origine végétal, en particulier certaines céréales telles que le blé, le maïs, I'orge, le seigle, le sorgho, I'avoine, lipides qui présentent les propriétés décrites ci-dessus.

L'utilisation de solvants polaires à froid permet d'extraire facilement la fraction des lipides, adsorbés à la surface du réseau protéique. Néanmoins, les lipides liés sont beaucoup plus difficiles à extraire ; en effet, ils sont entrappés dans le réseau protéique.

Le choix des solvants et le mode d'extraction sont donc déterminants afin d'obtenir un rendement d'extraction optimal.

L'objectif est de casser la structure protéique pour rendre accessible les vésicules lipidiques par les différents solvants d'extraction.

Le choix des solvants de la présente invention a été basé sur leurs propriétés à solubiliser les lipides liés : ce sont des alcools liquides tels que le méthanol, I'isopropanol, le butanol saturé en eau, I'éthanol.

La détermination des proportions matières premières végétales/ solvant est essentielle pour la qualité du produit fini et le rendement d'extraction. Les proportions retenues dans la présente invention sont les suivantes : -Matières premières végétales : 1 (poids), -Solvant : supérieur à 6 (volume).

Le matériau de départ est préparé à partir d'un composé végétal, en particulier à partir de céréales, par un procédé connu en lui-mme, pour obtenir une masse viscoélastique riche en protéines.

Cette fraction protéique est ajoutée sous vive agitation dans le solvant choisi. <BR> <BR> <BR> <BR> <P> Les proportions sont de préférence fraction protéique-- 1 (poids) et<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> solvant X supérieur ou égale à 6 (volumes).

L'agitation est maintenue pendant 2 heures.

Afin d'obtenir une huile limpide dépourvue d'eau et ne contenant pas de protéines résiduelles, il faut ajouter avant la filtration, un adjuvant qui sera capable de fixer 1'eau et de retenir les protéines. II est conseillé d'ajouter au mélange, 15 % (poids/volume) de Celite (terre diatomée) sous agitation et de filtrer ensuite sur des éléments filtrants de porosité appropriée selon la matière première utilisée ; dans le cas du blé, il faut réaliser la filtration sur des filtres de porosité 2 um au maximum.

Cette séparation conduit à l'obtention d'un filtrat et d'un gâteau délipidé.

La concentration du filtrat est obtenue par distillation selon un procédé connu en lui-mme.

Le produit fini est alors une huile composée de : -Phytosphingolipides et 10 à 20 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 10 à 20 % (dont digalactosyldiglycérides) -Triglycérides 50 à 65 % -Phospholipides 10 à 15 %

Cette huile est limpide, de couleur marron claire ayant une odeur caractéristique de céréales ; elle est fluide et homogène ; I'ensembie de ces caractéristiques permet l'incorporation de cette huile dans des produits cosmétiques et diététiques, sans altérer ni la couleur, ni l'odeur du produit fini.

La teneur en triglycérides étant non négligeable, l'utilisation de cette huile peut servir de support pour l'incorporation de vitamines ou autres composés liposolubles tels que la vitamine A, la vitamine E, les caroténoïdes pour des applications par voie topique ou par voie orale.

Purification de la fraction lipidique polaire à partir de l'huile végétale.

La fraction lipidique polaire contenue dans l'huile végétale faisant l'objet de la présente invention est obtenue grâce à la différence de solubilité des différents composés lipidiques dans t'acétone.

Les lipides polaires, en particulier les phytosphingolipides (glycosylés ou non) et les phytoglycoglycérolipides, précipitent dans l'acétone alors que les triglycérides y sont solubles.

L'huile est traitée par un certain volume d'acétone afin de solubiliser les triglycérides et de faire précipiter les lipides polaires sous forme d'une poudre fine couleur beige à jaune clair.

Le volume d'acétone utilisé doit tre suffisamment important pour que la concentration en lipides polaires dans le produit fini n'excède pas 5%.

La poudre lipidique est séparée de l'acétone par filtration : -on obtient donc une poudre compacte riche en phytosphingolipides, glycosphingolipides et digalactosyldiglycérides, contenant 40 % (en poids) d'acétone résiduel.

-un filtrat d'acétone, riche en triglycérides.

Après élimination de l'acétone résiduel par séchage, par un procédé connu en lui-mme, la poudre lipidique obtenue est broyée, tamisée et conditionnée.

-Phytosphingolipideset 45 à 55 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 30 à 40 % (dont digalactosyidiglycérides) -Triglycérides 0 à 5 % -Phospholipides 10 à 20 % L'acétone utilisé au cours du traitement de I'huile végétale s'est enrichie en lipides polaires (notamment en triglycérides) et contient également une faible fraction de lipides polaires qui reste soluble dans t'acétone.

L'acétone est éliminé par distillation, jusqu'à l'obtention d'une huile fluide, limpide, de couleur marron foncé.

Cette huile contient encore des quantités non négligeables de phytosphingolipides et digalactosyldiglycérides. La composition de cette huile est la suivante : -Phytosphingolipides et 4 à 9 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 5 à 10 % (dont digalactosyldiglycérides) -Triglycérides 75 à 85 % -Phospholipides 1 à 6 % Cette huile possède donc des propriétés d'hydratation de la peau et agit contre le vieillissement cutané.

Dans des préparations cosmétiques ou diététiques, cette huile riche en triglycérides permet de limiter les pertes hydriques, elle permet également de véhiculer des vitamines liposolubles telles que la vitamine E, la vitamine K, la vitamine A et les carotéinoïdes.

L'invention concerne également les extraits végétaux susceptibles d'tre obtenus par le procédé décrit ci-dessous.

L'invention concerne également l'utilisation d'un extrait végétal pour la fabrication d'une composition dermatologique ou dermatocosmétique topique aux fins de traitement anti-vieillissement ou pour l'hydratation de la peau.

Par le procédé décrit ci-dessus on a obtenu les compositions suivantes : Poudre lipidique -Phytosphingolipides et 47,6 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 40,4 % (dont digalactosyidiglycérides) -Triglycérides 1, 0 % -Phospholipides 11, 0 % <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> Huile n'1<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> -Phytosphingolipides et 16, 1 % Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 16,8 % (dont digalactosyldiglycérides) -Triglycérides 54,9 % -Phospholipides 12,8 % Huilen°2 -Phytosphingolipides et 4, 8% Glycosphingolipides -Phytoglycoglycérolipides 8,2 % (dont digalactosyldiglycérides) -Triglycérides 83,8 % -Phospholipides 2,7 % On a réalisé le dosage d'azote total des extraits sachant qu'il y a une molécule d'azote par molécule de céramides (glycosylés ou non glycosylés). Sachant qui ! y a deux tiers de phytosphingolipides glycosylés pour un tiers de phytosphingolipides non glycosylés, et connaissant la masse molaire de chacun des produits (spectre de masse), on a pu déterminer le pourcentage de phytosphingolipides et g ! ycosphingo) ipides dans les différents extraits.

On a, en outre, vérifié par électophorèse, que les extraits ne contenaient pas de protéines résiduelles.

Emulsion huile dans eau L'émulsion est préparée en mélangeant les ingrédients suivants : -Ester d'acide stéarique et de polyoxyéthylène 3,85 g avec 8 moles d'éthylène oxyde -mono et distéarate de glycérol 0, 7 g -alcool cétylique.................................................. .... 2, 45 g -dimethylpolysiloxane cyclique volatil........................... 5 g -mélange d'alcool cétostéarylique............................... 5 g et alkylsulfate de sodium -huiles n'1 ou 2............................................. 2,5 a 5 g -carboxyvinylpolymer « Carbopol 941 »....................... 0,2 g -Conservateur............................................... .......... 0,3 g -Parfum 0,4 g -eau............. q. s. p..................... 100 g Gel -alcool éthylique à 96 %............................................ 15 g <BR> <BR> <BR> -carboxyvinylpolymer « Carbopol 941 »....................... 30 g<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> -poudre lipidique polaire 0,1 à 1 g -triéthanolamine à 20 % dans l'eau 3 g -conservateur............................................... .......... 0,2 g <BR> <BR> <BR> -parfum..................................................... ............ 0,4 g<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> -eau............. q. s. p.................... 100 g Crème <BR> <BR> <BR> <BR> -glycérolmonostéarate associé à un 6 g<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> émulsifiantpotyoxyéthy ! ène -sorbitan monostéarate polyoxyéthylène 2 g (20 moles d'oxyde d'éthylène) -acide stéarique 2 g

-alcool cétylique.................................................. ... 1, 2 g<BR> <BR> <BR> <BR> -lanoline liquide..................................................... . 6 g<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> -perhydrosqualène.......................................... ......... 30 g -méthylphénylpolysiloxane................................. ........ 1 g -triéthanolamine........................................... ............ 0,1 g <BR> <BR> <BR> - huile n° 1 ou 2......................................................2 à 4 g<BR> - huile n° 1 ou 2......................................................... 2 à 4 g -ou poudre lipidique polaire.......................................... 0,5 à 2 g -conservateur 0,3 g -parfum 0,4 g -eau q. s. p.................... 100 g