本发明涉及药物的共晶领域， 具体地， 涉及抗菌药物哌拉西林纳与舒巴坦纳 的共晶及其制备方法，以及包含该哌拉西林纳 与舒巴坦纳共晶的药物组合物及其 在治疗产 NDM-1 "超级细菌" 等耐药菌感染中的应用。

背景技术

NDM-1是新德里金属 β-内酰胺酶 -1 ( New Delhi metallo-P-lactamase-l )的英 文缩写， 由 2010年 8月 11 曰发表在英国著名医学杂志《The Infectious Diseases)) 的一篇文章所报道。 由于携带该基因的细菌会产生一种特殊的 β-内酰胺酶，且活 性部位为金属离子，又首先在印度首都新德里 出现，所以得名： NDM-1。产 NDM-1 的细菌一般以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主 ， 这些细菌既可引起医院内感染， 也有社区感染； 包括尿路感染、 血流感染、 肺炎、 导管相关感染、 伤口感染等。 全球上巿的近 200种抗生素对这种新型超级细菌几乎束手无策 （房咪，等， 2011 )。 因此， 寻找一种能有效抑制产 NDM-1"超级细菌"等耐药菌感染的药物已经迫在 眉睫。

哌拉西林纳（Piperacillin sodium )是半合成青霉素类抗生素， 临床适用于敏 感肠杆菌科细菌、 铜绿假单胞菌、 不动杆菌属所致的败血症、 上尿路及复杂性尿 路感染、呼吸道感染、胆道感染、腹腔感染、 盆腔感染以及皮肤和软组织感染等。 舒巴坦纳 （Sulbactam sodium, SBT )是一种 β-内酰胺酶抑制剂， 对耐药的金葡 菌、 肺炎杆菌及大肠杆菌产生的青霉素酶十分有效 ， 还能穿透细菌胞壁， 抑制细 菌在胞内产生的 β-内酰胺酶； 而 SBT本身还有显著抑制脆弱拟杆菌产生的头孢 菌素酶， 能有效杀死不动杆菌 （张春辉， 等， 2004 )。 哌拉西林纳、 舒巴坦纳联 用有较好的稳定性，对临床常见产酶菌显示出 了较强的抗菌活性，扩大了抗菌谱， 在国内外巿场应用广阔 （孙明杰， 等， 2007 )。

晶型是药物的一个重要的理化性质， 在药品质量控制方面， 不同晶型可能具 有不同的稳定性进而影响药品质量。若药品晶 型固定，则质量更稳定，更易控制， 否则可能造成药品批次之间的质量差异， 使其稳定性各不相同。

专利申请 JP2007099763A公开了两种哌拉西林纳一水合物的� �结晶， 分别 命名为 I型结晶和 Π型结晶， 这两种晶型的特征在于在 PXRD中分别具有以下 特征衍射角 (2Θ): 3.9、 4.6、 5.6、 6.7、 9.8和 7.3、 7.9 °。 该专利指出这两种晶型 的哌拉西林纳在溶出、 吸湿性、 纯度、 稳定性等方面的性能均好于无定形的哌拉 西林纳。 其中， I型的制备方法是： 将一定量 （例如 60 g ) 的哌拉西林纳加入至一定 量醇的水溶液中（例如 120mL乙醇 +12mL水）， 滤出不溶物后， 先后加入一定量 的溶剂（例如 300mL四氢呋喃；)，再滴加入一定量的酸溶液（ 例如 6mL乙酸 +60mL 四氢呋喃）， 然后于 15-20°C下搅拌 24小时， 将生成的晶体滤出， 以醇溶液 （例 如乙醇 +/-其他溶剂） 洗涤得目标产物， 含水量 3.2%。

Π型的制备方法是： 将一定量 （例如 2 g ) 的哌拉西林纳加入至一定量醇的 水溶液中（例如 4mL乙醇 +lmL水），滤出不溶物后，加入一定量的碱（� �如 0.03g 乙酸纳）及一定量的乙醇 （例如 12mL ), 然后于 5°C下搅拌 24小时， 将生成的 晶体滤出， 以乙醇洗涤得目标产物， 含水量 3.2%。

专利 JP2007246514A公开了两种哌拉西林纳的结晶， 一种为哌拉西林一水 合物， 另一种为哌拉西林溶剂化物的新颖结晶， 分别命名为 ΠΙ型结晶和 IV型结 晶。这两种晶型的特征在于在 PXRD中分别具有以下特征衍射角 (2 Θ ): 6.1、 10.2、 12.4、 15.6、 15.8、 18.6和 5.3、 6.1、 8.7、 10.2、 12.4、 18.6 。 。 该专利指出与无 定形的哌拉西林纳相比，这两种结晶形式具有 优良的溶解度、低吸湿性及较小的 粉末体积， 在工业生产中易于过滤和干燥， 纯度高， 有关物质含量低。

其中， ΙΠ型的制备方法是： 将一定量（例如 2 g ) 的哌拉西林纳加入至一定 量酮、 DMF和水的混合溶液中 （例如 2mL丁酮 +DMF 3.8mL+0.6mL水）， 然后 再加入一定量的酮（例如 10mL丁酮）， 滤出不溶物， 然后于 5 °C下静置 24小时， 将生成的晶体滤出， 再先后以一定量的酮溶液 （例如 3mL 丁酮 +DMF 0.9mL+0.1mL水）、一定量的酮（例如 6mL丁酮）洗涤得目标产物，含水量 3.2%。

IV型的制备方法是： 将一定量（例如 2 g ) 的哌拉西林纳加入至一定量二氧 六环、水和另一种溶剂的混合溶液中（例如 6mL二氧六环 +1.2mL水 +丙酮 13mL ), 滤出不溶物后， 于 5 °C下静置 24小时， 将生成的晶体滤出， 再以一定量的酮溶 液 （例如 10mL丙酮） 洗涤得目标产物， 含水量 3.0%, 二氧六环含量 7.3%。

专利申请 CN200880003783.1公开了两种哌拉西林纳一水合物� �新晶型， 分 别命名为 V型结晶和 VI型结晶。这两种晶型的特征在于在 PXRD中分别具有以 下特征衍射角 (2Θ): 3.7、 5.5、 7.3、 11.6、 14.5、 18.0和 5.6、 7.8、 12.3、 15.5、 17.5、 23.3、 24.8、 28.5。。 该专利指出与无定形的哌拉西林纳相比， 这两种结晶形式具 有优良的溶解度、 低吸湿性， 在工业生产中易于过滤和干燥， 纯度高， 有关物质 含量低。

其中， V型的制备方法是： 将一定量 （例如 50 g ) 的 III型哌拉西林纳结晶 加入至配备过滤器的压力容器（68mm内径， 180mm长） 中， 在一定温度（例如 40 °C )和一定压力下（例如 20MPa )以至少加入一种溶剂的二氧化碳混合物（例 如二氧化碳： 乙酸甲酯 =96:4 ) 处理后得到。 VI型的制备方法是： 将一定量 （例如 200 g ) 的 III型哌拉西林纳结晶加入 至配备过滤器的压力容器（68mm内径， 180mm长）中，在一定温度（例如 40°C ) 和一定压力下 （例如 40MPa ) 以纯二氧化碳处理一定时间 （例如 4小时）得到。

而在舒巴坦纳的晶型方面一一周福富等研究了 反应溶媒乙酸乙酯、丙酮、 乙 醇、 甲醇对舒巴坦纳晶态的影响， 通过偏光显微镜观察发现在不同溶媒中反应的 舒巴坦纳干品其晶态差异较大。 丙酮为溶媒时， 舒巴坦纳结晶类似薄形圆盘体， 干品结块严重； 乙酸乙酯为溶媒时， 舒巴坦纳结晶类似圆柱体， 晶体较大， 流动 性较好； 乙醇为溶媒时， 舒巴坦纳结晶类似不规则的圆锥或扇形类粘合 体， 流动 性好； 甲醇为溶媒时，舒巴坦纳结晶为分散的长细针 状体，松密度小，流动性差， 粉碎后流动性可适当改善（淮海医药， 2005, 9(23), 423 )。 但以上研究仅提供了简 单的形貌描述图， 无粉末 X-射线衍射、 TG/DSC等系统全面的研究， 即未对舒巴 坦纳开展晶型研究。

药品有效期是指该药品被批准的使用期限，表 示该药品在规定的贮存条件下 能够保证质量稳定的期限。在医院的釆购过程 中， 一般要求釆购至少有 1年以上 有效期的药品； 在仓储和药房配发过程中， 往往会发生药品因过期或即将过期而 不能配发的情况。 目前巿售的哌拉西林纳与舒巴坦纳各自的制剂 的有效期均为 24 个月。 由于抗生素从生产到临床有较长的过程， 包括检验运输等等， 并且临 床抗生素用量大， 因此有时会出现由于药品有效期较短， 易发生退换货、 难以销 售等问题。若能提高哌拉西林纳与舒巴坦纳相 关产品的稳定性， 延长药品的有效 期， 必然会提高其经济性和安全性。 而哌拉西林纳舒巴坦纳复方制剂在临床上有 较好的应用价值（孙明杰， 2007 ), 但并无有关其混合物结晶晶态的研究报道， 在 生产过程中更没有通过晶型控制产品的质量。

药物共晶是活性药物成分通过氢键、 π-π堆积作用、 范德华力等非共价键和 共晶形成物结合在一个晶格中形成的。 它是一种新的药物固体形态， 在药剂学中 有很大的应用价值。 与两种或几种药物简单混合相比， 药物共晶可以在不改变药 物共价结构的同时引入新的组分， 并极大地提高复方药物的稳定性。 因此， 研究 药物共晶， 有利于选择和增进药物疗效， 保证固体原料药及其制剂在制备和储存 过程中含量、 纯度的稳定性及晶型的一致性， 并可延长药品有效期。

巿售哌拉西林纳的性状为白色或类白色无定形 粉末，因而以其为原料的复方 哌拉西林纳与舒巴坦纳（无辅料）也为无定形 固体， 最终导致目前巿售的哌拉西 林纳与舒巴坦纳复方制剂的有效期仅勉强达到 24个月。 因此， 在工业上仍然期 望能够发现具有更加稳定形态的哌拉西林纳与 舒巴坦纳复方制剂，通过提高复方 药物的稳定性， 延长药品的有效期， 亦必然会提高其经济性和安全性。 发明内容

本发明的目的之一在于，提供一种哌拉西林纳 与舒巴坦纳共晶。该共晶可以 有效地解决目前哌拉西林纳与舒巴坦纳复方制 剂的稳定性差、有效期短等现有技 术存在的问题。

本发明的另一目的在于，提供一种所述哌拉西 林纳与舒巴坦纳共晶的制备方 法。

本发明的又一目的在于，提供一种包含所述哌 拉西林纳与舒巴坦纳共晶的药 物组合物及其制备方法。

本发明的再一目的在于，提供所述哌拉西林纳 与舒巴坦纳共晶的药物组合物 在制备抗菌药物中的应用。

本发明提供的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶， 其包含在 X-射线粉末衍射分析 谱图中由 2Θ表示的 14.24、 16.58、 16.79、 17.77、 19.20、 20.21、 20.39、 23.06、 27.86和 32.16。的衍射角。

本发明提供的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶， 其在 X-射线粉末衍射分析谱图 中，晶面间距 人)和衍射峰高相对强度 /¾的参数（记为 7¾ )包括： 6.21/100.0, 5.34/28.5 , 5.27/10.6, 4.98/12.9 , 4.61/29.0, 4.39/22.2 , 4.35/17.4, 3.85/7.9, 3.20/18.6, 2.78/8.2。

具体地， 所述共晶在 X-射线粉末衍射分析谱图中， 晶面间距 人)、 衍射峰 高相对强度 ///。和 2Θ 的参数 （记为 / 2e ) 包括： 6.21/100.0/14.24 , 5.34/28.5/16.58 , 5.27/10.6/16.79, 4.98/12.9/17.77, 4.61/29.0/19.20 , 4.39/22.2/20.21 , 4.35/17.4/20.39, 3.85/7.9/23.06, 3.20/18.6/27.85 , 2.78/8.2/32.16。

进一步地， d/I/I ₀ /2Q 优选包括： 6.21/100.0/14.24 , 5.34/28.5/16.58 , 5.27/10.6/16.79, 5.05/4.2/17.53 , 4.98/12.9/17.76, 4.83/3.4/18.36, 4.61/29.0/19.20, 4.39/22.2/20.21 , 4.35/17.4/20.39, 3.85/7.9/23.06, 3.61/4.0/24.58 , 3.56/5.2/24.96, 3.20/18.6/27.85 , 3.09/4.5/28.78 , 2.90/3.0/30.77, 2.84/4.2/31.42, 2.78/8.2/32.16 , 2.66/3.8/33.65 , 2.57/2.9/34.85 , 2.49/5.8/35.93 , 2.34/4.6/38.31 , 2.31/3.8/38.82。

其中， 所述哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶在差示扫描量 热分析谱图中， 约在 192.2°C、 287.9°C处有放热峰。

其中，所述哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶在红外 吸收光谱中，约在 3437、 2976、 1774、 1715、 1676、 1607、 1520、 1464、 1398、 1304、 1196、 1124、 1090、 1013、 949、 897、 750、 704、 600 cm- ¹ 处有吸收峰。

进一步地， 所述红外吸收光谱由 KBr压片法测定得到。

本发明所述的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶中， 哌拉西林纳与舒巴坦纳的摩尔 比为 1 : 1。 本发明提供的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶的制 备方法， 包括： 将哌拉 西林纳和舒巴坦纳加入至酮、 二甲基甲酰胺（DMF )和水的混合溶液 1 中， 再 加入酮 1 , 滤出不溶物； 然后于 2〜10°C下静置 20〜30小时， 将生成的晶体滤出； 再依次用酮、二甲基甲酰胺和水的混合溶液 2、 酮 2洗涤滤出的晶体， 即得共晶。

其中， 所述的酮（混合溶液 1和 2中的酮以及酮 1、 酮 2 )均选自： 苯丙酮，

2-戊酮， 丁酮和丙酮中的一种或几种， 优选丁酮或 /和丙酮。

其中， 哌拉西林纳、 舒巴坦纳的摩尔比在一定的范围内波动对共晶 A 的质 量无影响， 该范围为 2:1 ~ 1 :2, 优选为 1.5:1 ~ 1 :1.5 , 更优选 1.25:1 ~ 1 :1.25 , 最 优选 1.057:1 ~ 1 :1.054。

进一步地， 滤出不溶物后， 静置的温度优选 5 °C。 静置的时间优选 24小时。 其中， 混合溶液 1 中酮、 二甲基甲酰胺和水三者的体积 比为

(40〜50):(30〜35):12。 混合溶液 2 中酮、 二甲基甲酰胺和水三者的体积比为

(720〜800):(60〜68):(20〜24)。

其中，哌拉西林纳与混合溶液 1总量的质量体积比（ g:mL )为(40〜42):(82〜97)。 其中， 哌拉西林纳与酮 1的质量体积比 （g:mL ) 为 (40〜42):(280〜300)。 本发明提供的包含所述哌拉西林纳与舒巴坦纳 共晶的药物组合物，其中含有

1%〜100%所述的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶， 优选含有 20%〜100%所述的哌拉 西林纳与舒巴坦纳共晶，更优选含有 50%〜100%所述的哌拉西林纳与舒巴坦纳共 晶。 这里的百分数指的是重量百分比。

其中， 所述药物组合物中除了共晶外， 还含有 0〜80%的哌拉西林纳或 /和舒 巴坦纳， 哌拉西林纳或 /和舒巴坦纳优选 0〜50%。 加入的量是相对于药物组合物 的总重量而言的。

本发明所述药物组合物中， 哌拉西林纳和舒巴坦纳的质量比为 2:1 (分别以 哌拉西林和舒巴坦计）。

本发明的药物组合物还可以制备成药学上可接 受的剂型， 具体可以为注射 剂。 所述注射剂优选为粉针剂。

本发明所述药物组合物的制备方法， 包括： 将共晶过 80 目筛粉碎后， 在无 菌室 100级条件下混合， 即得； 也可以将共晶粉碎后， 加入所述比例的哌拉西林 纳或 /和舒巴坦纳， 再进行混合。

本发明的药物组合物使得哌拉西林纳和舒巴坦 纳的装量差异降至最低，有效 降低两者标示比例范围的波动。

本发明提供所述哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶的 药物组合物在制备抗菌药物 中的应用。

进一步地，本发明提供所述哌拉西林纳与舒巴 坦纳共晶的药物组合物在制备 治疗产耐药菌感染的药物中的应用， 即上述抗菌药物指治疗产耐药菌感染的药 物。

更进一步地， 耐药菌指： NDM-1"超级细菌"等耐药菌。

本发明将哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶命名为： 哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A (在本申请文本中简称 "共晶 A" )。

为了提高复方哌拉西林纳舒巴坦纳的稳定性， 本申请的发明人在研究哌拉西 林纳与舒巴坦纳复方制剂的过程中， 深入考察了哌拉西林纳的现有晶型研究， 经 过重复研究表明： 由于哌拉西林纳一水合物晶型 I和 Π制备过程中需要额外加入 有机酸或有机碱， 而哌拉西林纳本身为有机弱碱， 结果导致产物中混入相当量的 哌拉西林一水合物， 虽然产品物理的稳定性提高， 但产品的含量不稳定， 不利于 临床用药。 而在晶型 IV的制备中用到有机溶剂二氧六环， 其明显对患者健康不 利。 此外， 哌拉西林纳一水合物晶型 V和 VI釆用超临界流体处理， 明显增加产 品生产的难度、 安全性和成本。 因而， 综合比较， 本申请的发明人认为晶型 III 具有药用潜力， 其制备条件也较合理。 然而， 本申请的发明人经过大量的实验研 究却意外地发现： 以哌拉西林纳 III晶型的制备条件处理复方哌拉西林纳舒巴坦 纳时， 得到的晶体产物居然不含 ΠΙ晶型哌拉西林纳及现有的其他晶型的哌拉� � 林纳， 得到的是一种新的哌拉西林纳与舒巴坦纳的共 晶， 其在工业生产中易于过 滤和干燥， 具有优良的溶解度 （>2% )和低吸湿性 （<1% ), 含量高 （室温放置 28个月其中的哌拉西林纳和舒巴坦纳的含量均� ��于 96.5% ),有关物质含量低（室 温放置 28个月总的有关物质不超过 2% )。 由该共晶 （命名为： 共晶 A ) 制备的 复方组合物 /制剂稳定性明显改善， 不但延长了产品货架寿命， 而且进一步提高 了产品的安全性， 降低了药品的潜在的不良风险， 进一步保护了患者健康。

通常地， 在药物组合物 /制剂的生产过程中， 由于称量、 混合、 装样等操作 的影响， 导致单位制剂的含量不可能与标示量一致。 因而， 按照相关的制剂指导 原则，单位制剂中活性物质的含量范围在标示 量的 90%〜110%之间时通常可以视 为各单位制剂间的含量一致， 为合格产品。 相应地， 复方制剂虽然活性物质超过 一个， 但是对各活性物质的含量要求相同。 然而， 对于复方制剂， 虽然单位制剂 中的每个活性物质的含量范围在标示量的 90 %〜 110 %之间时可以视为各单位制 剂间的含量一致，但是各活性物质含量的相对 比例范围将扩大。 对于含有两个活 性物质的复方制剂而言， 例如标示比例为 1 :1的两个活性物质的复方制剂， 根据 上述原则， 当其中的两个活性物质的实际比例范围在 81.8%〜122.2%时， 通常仍 然视为合格。 然而， 如此宽的波动范围极易使临床上对药物敏感的 患者受到潜在 的损害， 并且可能影响药效， 因而， 一直期望发现能够有效降低复方制剂中活性 物质比例的波动范围的方法。

而本发明中，在哌拉西林纳与舒巴坦纳的药物 组合物或复方制剂中使用本发 明的共晶， 能够克服装量偏差。 由于共晶中哌拉西林纳和舒巴坦纳的比例固定 ， 基本恒定地保持在质量比 2:1左右， 因而在制备该复方时就避免了常规生产中分 别投料造成的舒巴坦纳和哌拉西林纳的比例批 次间变异大， 特别是潜在的、 影响 临床效果的严重比例失调问题， 提高了给药的准确性。

因此， 本发明提供的共晶用于治疗产 NDM-1 "超级细菌" 等耐药菌的感染， 抗菌活性不变， 疗效稳定； 具有优良的溶解度、 低吸湿性及较小的粉末体积， 由 其制备的复方组合物 /制剂稳定性明显改善， 延长了产品货架寿命和有效期， 提 高了产品的经济性； 使用本发明的共晶制备复方制剂能够克服装量 偏差， 避免了 常规生产中分别投料舒巴坦纳和哌拉西林纳造 成两者比例批次间变异大的问题， 质量更易控制； 并且在工业生产中易于过滤和干燥、 纯度高， 有关物质含量低； 这些都进一步提高了产品的安全性， 降低了药品的潜在的不良风险， 进一步保护 了患者健康。

附图说明

图 1-a显示按实施例 1制备得到的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A的 X射线 粉末衍射谱图 （全部部分）， 纵坐标表示强度， 横坐标表示 2Θ衍射角。

图 1-b显示按实施例 1制备得到的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A的 X射线 粉末衍射谱图 （2Θ衍射角低于 40的部分）。

图 2显示按实施例 4测得的巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂 （质量比 2: 1 , 无定形） 的 X射线粉末衍射谱图， 纵坐标表示强度， 横坐标表示 2Θ衍射角。

图 3显示按实施例 1制备得到的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A的 DSC谱图。 图 4显示按实施例 1制备得到的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A的 IR谱图， 纵坐标表示透射率， 横坐标表示波数。

图 5显示按实施例 4测得的巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂 （质量比 2:1 , 无定形） 的 IR谱图， 纵坐标表示透射率， 横坐标表示波数。

图 6显示按实施例 1制备得到的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A的 HPLC图。 图 7显示按实施例 2制备得到的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A的 HPLC图。 图 8显示按实施例 3制备得到的哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A的 HPLC图。 图 9显示按实施例 5测得的以中检所提供的哌拉西林纳、舒巴坦� �对照品按 摩尔比为 1 :1 (分别以哌拉西林和舒巴坦计） 混合后的 HPLC图。

具体实施方式

以下通过各实施例对本发明作进一步描述，但 是这些实施例不限制本发明的 保护范围。

本发明未具体描述的实验操作方法和条件均为 本领域的常规选择。

本发明釆用的是 BRUKER D8 ADVANCE X射线粉末衍射仪， 测定条件： C K„辐射， 管压 40 kV, 2Θ扫描范围 5〜60 °, 扫描速度 17.7 s/步， 步长 0.02 °。 X射线粉末衍射实验数据以晶面间距 人)和衍射峰相对强度 ^>表示 (如实施例 1表 1中的 1% ), 记为 M/l ₀ 。 X射线粉末衍射图谱的理论探讨可见于" X射线衍 射过程 (X-ray diffraction procedures)", H. P. Klug禾口 L. E. Alexander, J. Wiley, New York (1974)。釆用德国 NETZSCH公司 STA409综合热分析仪进行 DSC测定。测 定条件： 升温速度 10 K/min; 保护气 N ₂ 流量 30 mL/min; 吹扫气 N ₂ 流量 20 mL/min; 温度范围 35-300 °C。 釆用德国 Bruker公司的 Tensor 27红外光谱仪， KBr压片法测定红外光谱。

本发明中所有的含量及纯度测定均釆用高效液 相 （HPLC ) 的方法， 色谱条 件： 用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂， 以 0.005mol/L 四丁基氢氧化铵 -乙腈 ( 70:30 )；用醋酸调 pH至 5.0为流动相，流速为每分钟 1.5mL;检测波长为 230nm。 理论塔板数按舒巴坦峰计算应不得低于于 3500, 哌拉西林峰与舒巴坦峰的分离 度应符合规定， 使用 HPLC正式测定前， 还需对各具体待定量物质的精密度、 准 确度、 线性和范围做方法学验证。

巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂均为质量比 2:1。 本发明中的 "中检所" 就 是指中国药品生物制品检定所。 本发明所给出的温度为摄氏度， 此外， 除具体说 明外， 哌拉西林纳和舒巴坦纳的量均以相应的哌拉西 林和舒巴坦计。所用的高纯 度酮指的是： 酮的质量含量不低于 99%。

实施例 1

将哌拉西林纳（以盐计）40 g( 0.074mol )和舒巴坦纳（以盐计）2 0g( 0.078mol ), 加入至 40mL丙酮 +32mL DMF +12mL水的混合溶液 （混合溶液 1 ) 中， 然后再 加入 280mL丙酮（高纯度酮 1 ), 过滤出不溶物后， 于 5°C下静置 24小时， 将生 成的晶体滤出， 再先后以 72mL丙酮 +6.8mL DMF +2.4mL水的混合溶液 （混合 溶液 2 )、 以及 120mL丙酮 （高纯度酮 2 ) 洗涤上述静置后滤出的晶体， 得到白 色晶体， 即哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A,其 X-射线粉末衍射谱图如图 1-a所示 (对应的数据见表 1 , 2Θ衍射角低于 40的部分见附图 1-b ), 其 DSC谱图如图 3 所示， 其 IR谱图与如图 4所示。

表 1： 共晶 A的 X-射线粉末衍射数据

扫描: 5.0/59.8995/0.0205/l(sec),Cu,I(max)=9877

峰: 13-pts/抛物线型过滤器， 阈值 =3.0,有效数字截止点 （Cutoff) =0.1%,BG=3/1.0 强度 =计数,2丁(0)=0.0 (° )波长司距 =1.54056A(Cu/K-aIphal)

# 2-Theta d(A) BG Height 1% Area % FWHM

1 14.241 6.2140 504 9373 100.0 50823 100.0 0.089

2 16.582 5.3418 592 2672 28.5 14637 28.8 0.090

3 16.790 5.2761 602 995 10.6 5477 10.8 0.090

4 17.536 5.0532 590 397 4.2 2074 4.1 0.086

5 17.768 4.9876 581 1210 12.9 6927 13.6 0.094 6 18.368 4.8263 567 322 3.4 1615 3.2 0.082

7 19.207 4.6172 559 2717 29.0 14793 29.1 0.089

8 20.211 4.3901 539 2084 22.2 16556 32.6 0.130

9 20.395 4.3509 534 1634 17.4 11078 21.8 0.111

10 23.063 3.8532 501 736 7.9 3128 6.2 0.070

11 24.581 3.6185 451 376 4.0 3432 6.8 0.150

12 24.969 3.5632 442 485 5.2 2878 5.7 0.097

13 27.857 3.2000 419 1740 18.6 10591 20.8 0.100

14 28.783 3.0991 414 418 4.5 3454 6.8 0.136

15 30.772 2.9032 394 282 3.0 1897 3.7 0.110

16 31.426 2.8443 385 393 4.2 1996 3.9 0.083

17 32.161 2.7809 356 772 8.2 5395 10.6 0.115

18 33.656 2.6607 322 356 3.8 3777 7.4 0.174

19 34.850 2.5723 309 273 2.9 1764 3.5 0.106

20 35.936 2.4970 287 539 5.8 4102 8.1 0.125

21 38.313 2.3473 260 427 4.6 3390 6.7 0.130

22 38.828 2.3174 252 355 3.8 2928 5.8 0.135 实施例 2

将哌拉西林纳（以盐计）400 g( 0.74mol )和舒巴坦纳（以盐计）179g( 0.70mol ), 加入至 400mL丙酮 +300mL DMF +120mL水的混合溶液（混合溶液 1 )中， 然后 再加入 2800mL丙酮 （高纯度酮 1 ), 过滤出不溶物后， 于 5 °C下静置 24小时， 将生成的晶体滤出，再先后以 700mL丙酮 +60mL DMF +20mL水的混合溶液（混 合溶液 2 )、 以及 1200mL丙酮（高纯度酮 2 )洗涤上述静置后滤出的晶体， 得到 白色晶体， 即哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A, 其 X-射线粉末衍射谱图， DSC谱 图和 IR谱图分别和图 1、 3和 4相近， 能够表示出制备得到的是共晶八。

实施例 3

将哌拉西林纳（以盐计）420 g( 0.78mol )和舒巴坦纳（以盐计）200g( 0.78mol ), 加入至 500mL丙酮 +350mL DMF +120mL水的混合溶液（混合溶液 1 )中， 然后 再加入 3000mL丙酮 （高纯度酮 1 ), 过滤出不溶物后， 于 5 °C下静置 24小时， 将生成的晶体滤出，再先后以 800mL丙酮 +60mL DMF +20mL水的混合溶液（高 纯度酮 2 )、 以及 1400mL丙酮（高纯度酮 2 )洗涤上述静置后滤出的晶体， 得到 白色晶体， 即哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A, 其 X-射线粉末衍射谱图， DSC谱 图和 IR谱图分别和图 1、 3和 4相近， 能够表示出制备得到的是共晶八。

实施例 4

对巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂 （2: 1 )进行晶型测定， 其 X-射线粉末衍 射谱图为附图 2;对巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂进行 KBr压片法测定红外光 谱， 其 IR为附图 5。

实施例 5

以中检所提供的哌拉西林纳、 舒巴坦纳对照品按摩尔比为 1 : 1混合后 （以 盐计， 分别精确称取 53.9 mg和 25.5mg )作为外标（混合样品）， 釆用高效液相 色谱法测定哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A中的哌拉西林纳和舒巴坦纳的含量。

测定方法：分别精密称取实施例 1、实施例 2、实施例 3及外标的样品 lOOmg (以实际重量计）， 加流动相溶解并稀释成 lmL含待测样品 lmg的溶液， 精密 量取 ΙΟμΙ, 注入色谱仪， 按外标法以峰面积计算出各供试品中 C ₂₃ H ₂₇ N ₅ 0 ₇ S 和 C ₈ H _n N0 ₅ S的含量。 实施例 1〜3的样品中每毫克含哌拉西林纳和舒巴坦纳� ��以盐 计）分别为 679ug/321ug, 675ug/325ug和 680ug/320ug, 哌拉西林纳和舒巴坦纳 的摩尔比分别是 0.999、 1.020和 0.994 (以盐计 )。 HPLC图谱分别见附图 6〜9。 相应峰结果也请见表 2〜5。

表 2: 按实施例 1制备得到的共晶 A的 HPLC峰结果

上述测定结果表明， 本发明实施例 1〜3的共晶 A中包含了确定摩尔比例的 哌拉西林纳和舒巴坦纳， 两者的摩尔比为 1 (非常接近）。

本发明的共晶是个独立的产物， 它单独可以用于制备复方制剂， 它也可以与 共晶中的某个成分混合后制备复方制剂， 均可以达到国家药品标准的规定， 如以 下实施例 6〜9。

实施例 6: 哌拉西林纳： 舒巴坦纳质量比为 2: 1的粉针剂的制备

处方一： 哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A 3000g, 共制备 1000支。

制备方法： 将哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A过 80目筛粉碎， 在无菌室 100 级条件下， 釆用多向运动混合机混合均匀后， 用分装机进行分装， 每瓶装 3.0g, 轧盖、 贴签、 包装， 得到符合国家药品标准的质量比为 2: 1的注射用哌拉西林纳 舒巴坦纳 （分别以哌拉西林和舒巴坦计） 无菌粉针剂。

实施例 7: 哌拉西林纳： 舒巴坦纳质量比为 2: 1的粉针剂的制备

处方二： 哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A 727.5g, 舒巴坦纳 22.5g, 共制备 1000 支。

制备方法： 将哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A和过 80目筛粉碎后， 在无菌室 100级条件下， 加入舒巴坦纳， 釆用多向运动混合机混合均匀后， 用分装机进行 分装， 每瓶装 0.75g, 轧盖、 贴签、 包装， 得符合国家药品标准的质量比为 2: 1 的注射用哌拉西林纳舒巴坦纳 （分别以哌拉西林和舒巴坦计） 无菌粉针剂。 实施例 8: 哌拉西林纳： 舒巴坦纳质量比为 2: 1的粉针剂的制备

处方三： 哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A 750g , 舒巴坦纳 265g , 哌拉西林纳 485g, 共制备 1000支。

制备方法： 将哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A和过 80目筛粉碎后， 在无菌室 100级条件下， 加入舒巴坦纳和哌拉西林纳， 釆用多向运动混合机混合均匀后， 用分装机进行分装， 每瓶装 1.5g, 轧盖、 贴签、 包装， 得符合国家药品标准的质 量比为 2: 1的注射用哌拉西林纳舒巴坦纳（分别以哌拉� �林和舒巴坦计）无菌粉 针剂。

实施例 9: 哌拉西林钠： 舒巴坦钠质量比为 2: 1的粉针剂的制备

处方四： 哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A 450g, 舒巴坦纳 600g, 哌拉西林纳 1200g, 共制备 1000支。

制备方法： 将哌拉西林纳与舒巴坦纳共晶 A和过 80目筛粉碎后， 在无菌室 100级条件下， 加入舒巴坦纳和哌拉西林纳， 釆用多向运动混合机混合均匀后， 用分装机进行分装， 每瓶装 2.25g, 轧盖、 贴签、 包装， 得符合国家药品标准的 质量比为 2: 1的注射用哌拉西林纳舒巴坦纳（分别以哌拉� �林和舒巴坦计）无菌 粉针剂。

实施例 10

以实施例 6〜9制剂处方中能够波动的哌拉西林纳和舒巴� ��纳的最大量（即除 共晶外的部分）， 分别除以制剂中相应的总的哌拉西林纳和舒巴 坦纳的量， 得到 各自的含量波动范围， 然后取极值之差即为两者含量比例的上下限波 动范围。 实 施例 6完全使用共晶， 两者的比例固定， 无法变化， 故为 0; 巿售品两者的变化 范围均为 -10% ~ 10%, 则极值之差为 20%, 结果见表 6。 表 6: 各制剂中哌拉西林钠：舒巴坦钠的含量比例范 围

由表 6的结果可以看出， 包含一定比例的（20%〜100% )本发明的共晶 A的 制剂均可以有效地降低制剂产品中哌拉西林纳 ： 舒巴坦纳的含量比例的波动范 围，极大地保证了给药量的准确性， 对保证药品的有效性和安全性提供了进一步 的保证。

实施例 11

对实施例 6、 7、 8和 9的粉针剂样品， 以及巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂 (质量比均为 2: 1 )进行质量检测和稳定性考察，稳定性试验包� �： 在 40°C±2°C、 RH 75%±5%条件下加速试验 6个月， 和 25 °C±2°C、 RH 60%±10%下放置 28个月 的长期稳定性试验。 得到试验数据结果如表 7和 8所示。

表 7: 加速试验结果

时 澄明度 有关物质 舒巴坦钠含 哌拉西林钠含 样品 性状 H

间 (溶解性） (% ) 量 （％) 量 （％) 实施例 6样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.58 99.4 99.6 实施例 7样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.60 99.4 99.6 实施例 8样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.61 99.3 99.4 月 实施例 9样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.64 99.1 99.3 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.9 符合规定 0.65 99.0 99.5 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.61 99.2 99.4 实施例 7样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.63 99.1 99.2 实施例 8样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.69 99.0 99.0 月

实施例 9样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.81 98.7 98.9 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.6 符合规定 0.83 98.6 99.0 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 6.0 符合规定 0.66 99.0 99.1 实施例 7样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.69 98.8 98.9 月

实施例 8样品 白色粉末 6.0 符合规定 0.77 98.6 98.7 实施例 9样品 白色粉末 5.5 符合规定 0.99 98.5 98.4 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.4 符合规定 1.14 98.3 98.1 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.81 98.8 98.9 实施例 7样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.85 98.6 98.6 实施例 8样品 白色粉末 5.6 符合规定 1.08 98.4 98.6 月

实施例 9样品 白色粉末 5.5 符合规定 1.34 98.0 98.4 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.3 符合规定 1.44 97.8 98.4 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.8 符合规定 1.09 98.1 98.7 实施例 7样品 白色粉末 5.8 符合规定 1.20 97.9 98.4 实施例 8样品 白色粉末 5.7 符合规定 1.47 97.4 98.0 月

实施例 9样品 白色粉末 5.3 符合规定 2.26 97.1 97.4 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.1 符合规定 2.75 96.9 97.2 巴坦钠粉针剂

表 8 : 长期试验结果

澄明度 有关物质 舒巴坦钠含 哌拉西林钠 时间 样品 性状 H

(溶解性） ( % ) 量 （％ ) 含量 （％) 实施例 6样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.58 99.4 99.6 实施例 7样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.60 99.4 99.6 实施例 8样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.61 99.3 99.4

0月

实施例 9样品 白色粉末 5.7 符合规定 0.64 99.1 99.3 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.9 符合规定 0.65 99.0 99.5 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.60 99.3 99.3 实施例 7样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.61 99.2 99.2 实施例 8样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.66 99.0 99.1

3月 实施例 9样品 白色粉末 5.7 符合规定 0.73 98.9 99.0 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.6 符合规定 0.80 98.7 99.1 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.7 符合规定 0.70 99.1 99.0 实施例 7样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.73 98.9 98.9 实施例 8样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.80 98.7 98.6

6月

实施例 9样品 白色粉末 5.8 符合规定 1.09 98.5 98.4 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.6 符合规定 1.18 98.1 98.4 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.81 98.8 98.8

9月

实施例 7样品 白色粉末 5.8 符合规定 0.83 98.6 98.7 实施例 8样品 白色粉末 5.9 符合规定 0.97 98.3 98.4 实施例 9样品 白色粉末 5.7 符合规定 1.28 98.0 98.1 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.6 符合规定 1.40 97.8 98.0 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 6.0 符合规定 0.89 98.6 98.6 实施例 7样品 白色粉末 5.7 符合规定 0.90 98.4 98.4 实施例 8样品 白色粉末 5.9 符合规定 1.15 98.0 98.1 月

实施例 9样品 白色粉末 5.6 符合规定 1.56 97.7 97.8 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.5 符合规定 1.71 97.6 97.7 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.9 符合规定 1.02 98.3 98.3 实施例 7样品 白色粉末 5.8 符合规定 1.06 98.1 98.2 实施例 8样品 白色粉末 5.7 符合规定 1.57 97.6 97.7 月

实施例 9样品 白色粉末 5.5 符合规定 2.05 97.2 97.4 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.4 符合规定 2.32 97.1 97.3 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 6.0 符合规定 1.17 98.0 98.1 实施例 7样品 白色粉末 5.8 符合规定 1.20 97.9 98.0 实施例 8样品 白色粉末 5.7 符合规定 1.86 97.3 97.4 月

实施例 9样品 白色粉末 5.3 符合规定 2.49 97.0 96.9 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 5.2 符合规定 2.78 96.9 96.8 巴坦钠粉针剂

实施例 6样品 白色粉末 5.7 符合规定 1.30 97.6 97.9 实施例 7样品 白色粉末 5.7 符合规定 1.38 97.3 97.7 实施例 8样品 白色粉末 5.5 符合规定 2.05 96.8 97.1 月

实施例 9样品 白色粉末 5.2 符合规定 2.99 96.5 96.6 巿售哌拉西林钠舒

白色粉末 4.9 符合规定 3.26 96.3 96.4 巴坦钠粉针剂 由以上表 7〜8的数据结果可以看出： 本发明实施例 6、 7和 8制剂的稳定性 优于巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂 （2: 1 ), 而实施例 9的制剂虽然略优于巿售 品， 但无显著性差别。 本发明实施例 6、 7和 8的样品在加速 6个月和长期 28个 月后各项质量指标均无明显变化， 均符合质量标准要求， 而在同样的条件下实施 例 9的样品的指标变化明显， 处于不合格的边缘。 类似地， 巿售哌拉西林纳舒巴 坦纳粉针剂 （2: 1 ) 在加速与长期试验条件下出现杂质增加与含量 下降等明显变 化， 在第 28个月时巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针剂 （2: 1 ) 由于有关物质超标已 经为不合格样品。

上述加速和长期稳定性试验充分说明： 釆用在本发明的共晶 A为原料生产 的注射用哌拉西林纳舒巴坦纳的产品质量更加 稳定， 也更适用于药品工业化生 产。

实施例 12: 抗菌活性测定

釆用实施例 6和 8制剂的样品进行抗菌活性测定。

方法： 将实施例 6、 8制剂的样品和巿售哌拉西林纳舒巴坦纳粉针� � （2:1 ) 用蒸馏水稀释至 512mg/L。 每测定一种样品时均取 15支试管， 另取 2支分别做 阳性对照和阴性对照。 各试管均加 lmL MH 肉汤。 将 lmL 用蒸馏水稀释至 512mg/L的样品加入第一支试管， 混匀后吸出 lmL至第 2支试管， 依次 2倍稀 释至第 10支试管， 吸出 lmL弃去。 此时， 各管样品浓度分别为 256、 128、 64、 32、 16、 8、 4、 2、 1、 0.5mg/L。

产 NDM-1的 NS-91 (肺炎克雷伯菌）、 NS-96 (大肠埃希菌）来自于临床分 离， ATCC25922 (大肠埃希菌）购自 ATCC。 菌株先用生理盐水校正至 0.5麦氏 比浊浓度， 再用 MH肉汤 1 : 10稀释（含菌量约为 107CFU/mL ), 将 50ul稀释 后的菌液分别从加至各管和阳性对照管， 每管 50ul, 最终菌液浓度为 5xl0 ⁵ CFU/mL。 接种后盖上试管塞， 放入 37°C恒温培养箱过夜后测定最低抑菌浓度 ( MIC ), 结果如表 9所示：

表 9: 各样品对三株临床分离的菌株的抑菌作用 （MIC,mg/L)

从上表可见： 实施例 6和 8的制剂能有效抑制产 NDM-1 "超级细菌"， 可用 于治疗产 NDM-1 "超级细菌" 等耐药菌的感染。 对实施例 7和 9做同样的实验, 效果类似。

表明釆用在本发明的共晶 A为原料生产的注射用哌拉西林纳舒巴坦纳的� � 品疗效稳定， 能够替代巿售品， 且优于巿售品。 工业实用性

本发明包含所述哌拉西林纳和舒巴坦纳共晶的 药物组合物具有抗菌作用，尤 其对于 NDM-1耐药菌感染有明显的治疗作用。