ARTHROPODES NUISIBLES

La présente invention se situe dans le domaine de la lutte contre des arthropodes nuisibles. Particulièrement, l'invention concerne une composition, d'origine naturelle, à base de pyrèthre végétal.

On sait que la pyréthrine est une molécule insecticide naturelle extraite des plantes oléorésines, notamment du chrysanthème. Cet insecticide de contact tue les arti ropodes en provoquant un effet choc, en touchant le système nerveux, même à très faible dose. Malheureusement, d'une part, lorsque la pyréthrine est comprise dans une formulation, elle est très rapidement dégradée par les rayonnements UV et par les microorganismes à tel point que son action s'en trouve affaiblie voire anéantie ; d'autre part, elle n'est pas stable au cours du stockage. Afin de palier à ces problèmes de dégradation précoce, il existe dans le commerce, des molécules de substitution d'origine synthétique, dérivées des pyréthrines, appartenant à la famille des pyrétliroïdes (exemples : Permethrine, Fluométrhine, etc.), qui ont la capacité de résister plus longtemps aux attaques des UV ainsi qu'aux autres agressions de nature chimique et biologique. Depuis longtemps, il était nécessaire de protéger le pyrèthre végétal, dans une composition, de la dégradation aux UV pour qu'il puisse encore apporter son action insecticide lors de son utilisation. De même, il était aussi nécessaire de pouvoir stabiliser le pyrèthre végétal au cours de son stockage pendant une période pouvant aller jusqu'à trois ans.

L'huile de neem et l'extrait de margosa sont, tous deux, issus de la graine du margosier, également appelé arbre à neem. La différence entre l'huile de neem et l'extrait de margosa se situe dans leur procédé d'extraction utilisé. L'huile de neem vierge est obtenue par simple pression à froid des graines, alors que l'extrait de margosa est obtenu en laboratoire, selon différents procédés d'extraction de nature chimique. Une ou plusieurs molécules actives peuvent alors être sélectionnées à partir de l'extrait. Les principaux ingrédients actifs de l'extrait de margosa sont des acides gras sous forme de glycérides ou libres, ainsi que des limonoïdes, comme la nimbin, la salannin et l'azadirachtine. Il est connu que l'extrait de margosa peut être utilisé pour contrôler de nombreuses espèces d'insectes et d'arachnides, comme par exemple les poissons d'argent, les mouches, les moustiques, les fourmis, les acariens, etc. L'extrait de margosa possède un large spectre d'action chez les arthropodes grâce au nombre important des constituants actifs qui le composent ; il en résulte alors une réduction du risque de développement de l'accoutumance chez lesdits arthropodes. De plus, selon la dose et les ratios des constituants actifs composant l'extrait de margosa, il est possible d'observer un effet allant de la répulsion à la mortalité de ces différents arthropodes. Par ailleurs, l'extrait de margosa a un mode d'action à long terme c'est-à-dire que l'effet insecticide, sur des arthropodes ciblés, apparaît après quelques heures. Ce mode d'action à effet rémanent est très bénéfique dans la lutte contre certains arthropodes pour qui, l'effet choc les paralyse seulement, sans les tuer.

Il est connu que de nombreuses huiles essentielles ont une action répulsive, notamment envers les arthropodes comme les puces, les tiques, les moustiques, les mouches, les poux, etc.

Il est également connu que le pyrèthre végétal est mélangé avec d'autres composés en vue d'obtenir une synergie d'action insecticide. D'un côté, l'action de la pyréthrine peut être synergisée par des composés synthétiques tels que le pipéronyl butoxide (PBO). Ainsi les brevets allemands n°3717467 et n°4421471 qui décrivent des sprays anti-insectes comprenant un mélange d'extrait de pyréthrine, de PBO, de l'huile de turpentine, de lavandin et de citronnelle, confirment ces effets synergiques. D'un autre côté, l'action de la pyréthrine peut être synergisée par des composés naturels comme décrit par le brevet américain n°5679662 à propos d'une composition insecticide comprenant du pyrèthre végétal en association avec l'azadkachtine, ou du pyrèthre avec l'huile de neem purifiée dépourvue d'azadirachtine, pour augmenter l'activité insecticide du pyrèthre. Le brevet français n°2447681 décrit une composition insecticide comprenant de la pyréthrine, de l'huile essentielle de lavande et de la citronnelle. La demande de brevet international n°8505038 décrit une composition insecticide comprenant du pyrèthre végétale, de la roténone ou les deux, et un ou plusieurs composants choisis parmi l'eucalyptus, le romarin, la menthe poivrée et l'acide borique. Le brevet français n°3031006 décrit une composition insecticide comprenant un extrait végétal de pyrèthre en forme d'huile essentielle agissant sur le système nerveux, un macérât contenant l'acide formique (extrait d'ortie), un agent asphyxiant en forme d'huile végétale associée à la saponine pour obstruer les pores de l'épidémie et de l'huile essentielle d'agrumes pour détruire la cuticule du corps de l'insecte.

Dans un autre registre, pour améliorer l'efficacité insecticide du pyrèthre végétal, le brevet européen n°l 102540 propose l'adjonction de l'alcool benzylique comme le thymol ou l'eugénol, dont la proportion en poids, (pyrèthre/alcool) est comprise entre 50/1 et 10/1. D'autres composés naturels sont également utilisés à cette fin notamment l'huile de sésame (US4983591), des sels d'acides gras spécifiques (US4983591), des triglycérides et de l'extrait de chrysanthème (EP0761097).

On connaît également des pipettes antiparasitaires renfermant un mélange d'actif répulsif constitué de margosa, de pyrèthre, de géraniol et de la lavande dont la quantité de chacun des composant est inconnue (Zoomalia : Pipette antiparasitaire volaille - Antiparasites et soins oiseaux). Le document « Vétobiol : Vétobiol Lotion antiparasitaire habitat insecticide 100 mL » divulgue une lotion anti-insectes comportant de l'extrait de margosa, du géraniol, de lavandula hybrida, de l'extrait de pyrèthre végétal en grande quantité. Le document « Les comptoirs de la Bio : Biovetol- Les comptoirs de la Bio » décrit des produits antipuces et antitiques comportant du margosa, du pyrèthre, du géraniol et de la lavande à des proportions inconnues. Le document WO2008/124882 décrit une composition comprenant de l'huile essentielle d'eucalyptus, 10 à 40% d'huile de neem, de l'huile essentielle de citronnelle, du pyrèthre, de l'huile essentielle de lavande. Le document WO96/39034 divulgue une composition pesticide comprenant 0,002 à 0,02% en poids de pyrèthre et d'huile de neem.

Force est de constater qu'il est recherché par l'art antérieur d'obtenir une composition, à action exclusivement insecticide, renfermant un pyrèthre végétal. A l'heure actuelle, l'état de la technique mentionne certains acides gras, certaines huiles essentielles voire même le PBO, pour améliorer l'efficacité de l'action insecticide du pyrèthre végétal formulé dans une composition.

Donc, un premier but de la présente invention est de fournir une composition comportant du pyrèthre végétal dont l'action répulsive contre les arthropodes est non seulement améliorée et préservée, mais également prolongée dans le temps pour assurer un effet rémanent voue insecticide. Un autre but de la présente invention est de fournir une composition au pyrèthre végétal apte à repousser efficacement les arthropodes nuisibles, particulièrement des ectoparasites, chez un sujet humain et animal.

Un autre but de la présente invention consiste à fournir une composition comportant du pyrèthre végétal apte à induire un effet pesticide curatif lorsque le sujet est déjà infecté par des nuisibles, ainsi qu'un effet répulsif préventif pour éviter une ré-infestation d'un sujet par lesdits nuisibles.

On entend par « arthropodes nuisibles », les arachnides tels que les tiques, les acariens et les insectes tels que les mouches, les moustiques, les puces, les punaises de lit, les poux et ce, quelque soit leur stade de développement.

On entend par « contrôle » des nuisibles, l'action qui consiste soit à les repousser soit à les tuer soit les deux simultanément.

On entend par « agent actif » le mélange synergique des ingrédients actifs à action répulsive et/ou pesticide ; ledit agent actif peut être associé à un ou plusieurs additifs de formulation appropriés lors de la formulation de la composition.

La présente invention a, en conséquence, pour premier objet, une composition pour le contrôle des arthropodes nuisibles qui constituent des cibles susceptibles d'infester un sujet humain ou animal à traiter, composition renfermant un agent actif insecticide et/ou insectifuge dont la diffusion assure le contrôle desdits arthropodes nuisibles, ladite composition comportant, en outre, un véhicule d'application topique approprié pour permettre une distribution sur au moins une partie du corps dudit sujet à traiter, l'agent actif étant constitué par un mélange synergique de pyrèthre végétal, d'extrait naturel de margosa et d'au moins une huile essentielle, caractérisée en ce qu'elle comprend :

0,15 à 10% en poids de pyrèthre végétal,

0,15 à 5% en poids d'extrait de margosa,

0,15 à 10% en poids d'une huile essentielle,

45 à 99,55% en poids de véhicule d'application topique,

0 à 25% en poids d'additifs de formulation.

Selon un mode de réalisation, le pyrèthre végétal est choisi parmi le pyrèthre du Caucase, le pyrèthre dalmate, le chrysanthème pesticide, le pyrèthre naturel et la pyréthrine.

Selon un mode de réalisation, l'huile essentielle est choisie dans le groupe formé par l'huile essentielle de cannelle, l'huile essentielle menthe verte, l'huile essentielle de menthe pouliot, l'huile essentielle de menthe des champs, l'huile essentielle de lemon-grass, l'huile essentielle de cèdre, l'huile essentielle de citronnelle, l'huile essentielle d'eucalyptus, l'huile essentielle de lavandin, l'huile essentielle de lavande, l'huile essentielle de palmarosa ou le mélange de celles-ci.

Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, l'huile essentielle est l'huile essentielle de lavandin ou l'huile essentielle de lavande.

Selon une variante de réalisation, l'huile essentielle peut être remplacée, à proportion égale, par leurs constituants majoritaires actifs. Lesdits constituants majoritaires peuvent être les alcools terpéniques comme le géraniol, le linalol, le p-menthane-diol, le menthol, les esters terpéniques, les aldéhydes.

Avantageusement, l'extrait naturel de margosa peut être substitué, à proportion égale, par l'huile de neem ou ses constituants actifs majoritaires ; il en est de même en ce qui concerne l'huile essentielle.

De manière surprenante, les inventeurs ont constaté que l'association des trois ingrédients actifs que sont le pyrèthre végétal, l'extrait naturel de margosa et une huile essentielle constituant l'agent actif formulé dans une composition permet d'obtenir un effet synergique sur l'effet recherché envers l'espèce des artiiropodes nuisibles. En faisant varier habilement le ratio entre ces trois ingrédients, il est possible soit d'obtenir une action répulsive, soit une action pesticide. D'une manière générale, on peut considérer qu'un fort taux de pyrèthre et/ou de margosa confère un effet pesticide à la composition alors qu'un fort taux d'huile essentielle confère majoritairement un effet répulsif.

Avantageusement, l'agent actif de la composition est formulé sous forme liquide. Selon un mode de réalisation, le rapport massique pyrèdire végétal/extrait naturel de margosa/huile essentielle dans l'agent actif est compris entre 1 /1 /1 et 1 /1 /10.

Selon un mode de réalisation de l'invention, la composition comprend :

0,45 à 25% en poids d'agent actif constitué par un mélange synergique de pyrèthre végétal, d'extrait naturel de margosa et d'une huile essentielle,

45 à 99,55 % en poids de véhicule d'application topique,

0 à 25% en poids d'additifs de formulation.

Selon un mode de réalisation, la quantité des constituants de l'huile essentielle est comprise entre 0,15 et 10% en poids de la composition.

Avantageusement, la composition de la présente invention, grâce à l'agent actif, a une fonction préventive doublée d'une fonction curative pour le contrôle des arthropodes nuisibles.

Selon un mode de réalisation, le véhicule d'application topique peut être un liquide, particulièrement de l'eau, une huile végétale ou une matrice polymère solide ayant été mise en forme, ou sous forme de poudre particulaite ou encore sous forme de granulés, l'agent actif étant incorporé dans ladite matrice polymère.

La composition peut comporter des additifs de formulation appropriés selon l'état du véhicule d'application topique utilisé. En effet, il est possible d'incorporer l'agent actif au sein du véhicule d'application topique en l'absence d'additif de formulation.

Lorsque le véhicule d'application topique est un liquide ou un semi-liquide, l'agent actif est formulé en lotion, en spray, en émulsion, en suspension, en concentré liquide, en concentré émulsifiable, en crème, en mousse, en gel, en pommade, en pâte.

Lorsque le véhicule d'appHcation topique est une matrice polymère solide biodégradable ou non, l'agent actif y est incorporé, en association ou non avec un ou plusieurs additifs de formulation.

Dans une première variante de ce mode de réalisation, les polymères biodégradables sont choisis dans le groupe formé par des polymères d'origine végétale (agropolymères) à base de polysaccharides, d'amidon, de celluloses et ses dérivés, de protéines ; des biopolyesters de la famille des polyhydroxyalcanoates (PHA), des polylactides (PLA), des pol caprolactones (PCL), des polyesteramides (PEA), des copolyesters aliphatiques (PBSA), des copolyesters aromatiques (PTAT).

Dans une seconde variante de ce mode de réalisation, ladite matrice polymère thermoplastique synthétique est constituée d'un copolymère d'éthylène et d'acétate de vinyle (EVA), dont le taux d'acétate de vinyle est compris entre 15 et 60% en poids. Dans une troisième variante de ce mode de réalisation, la matrice polymère thermoplastique synthétique est choisie dans le groupe formé par des élastomères thermoplastiques (TPE) comme des copolyamides et les polyamides (PA) de grades absorbants, des polyéthers block amide de grades absorbants, des polyéthylènes greffés amidon, des polychlorures de vinyle ; des thermoplastiques vulcanisés ; des polyuréthanes thermoplastiques à base d'esters ou d'éthers ; des polymères styréniques tels que les SIS, les SEBS ou un mélange de tous ces polymères.

Dans une quatrième variante de ce mode de réalisation, la matrice polymère solide est une poudre particulaire d'origine minérale ou synthétique.

Dans le cas d'une matrice polymère thermoplastique, ladite matrice est mise en forme par des techniques de plasturgie bien connues de l'Homme du métier à savoir par extorsion, par injection moulage, par enduction ou encore par thermopressage.

Dans une cinquième variante de ce mode de réalisation, la matrice polymère est un thermodur qui est un polyuréthane réticulé à base d'isocyanate et de polyols ou une polyurée à base d'isocyanate et de polyamine. Le polyuréthane réticulé est obtenu à partir d'une résine polyol liquide ou rendue liquide et un isocyanate liquide ou rendu liquide et une puis mis en forme par coulée. La polyurée réticulée est obtenue à partir d'une résine polyamine liquide ou rendue liquide et un isocyanate liquide ou rendu liquide puis mis en forme par coulée. L'isocyanate est choisi parmi le groupe formé par les isocyanates avec au minimum 2 fonctionnalités, de structure aromatique ou aliphatique. On peut citer les TDI (diisocyanate de toluène), HDI (diisocyanate d'hexaméthylène), MDI (diisocyanate de diphénylméthylène), H12MDI (dicyclohéxylméthane diisocyanate), IPDI (isophorone diisocyanate), NDI (naphtalène diisocyanate), TODI (O-tolidine diisocyanate), PPDI (para-phénylène diisocyanate) et leurs prépolymères.

La résine polyol est choisie parmi celle ayant au minimum 2 fonctionnalités hydroxyle, à chaîne longue ou à chaîne courte, à base de polyesters, de polyéthers, de polythioéthers, de polyacétals, de polycarbonates, de polyestéramides, d'huiles végétales naturellement hydroxylées ou modifiées ou le mélange de ceux-ci. Les polyamines sont celles ayant au moins 2 fonctionnalités aminé, choisies parmi les polyétheramines, aliphatiques ou aromatiques.

La nature desdits additifs de formulation de la composition est choisie en fonction de la forme galénique finale (ex : crème, lotion, gel, etc.) ou en matrice polymère solide (ex : collier, bracelet, patch, médaillon, etc.).

Les additifs de formulation pouvant être choisis parmi l'eau, des huiles végétales, un tensioactif, un émulsifiant, un antioxydant, un stabilisant, un épaississant, un agent moussant, un agent filmogène, un conservateur, un anti-UV, des charges inertes d'origine minérale sous forme de poudre, un gélifiant, un colorant, un parfum de synthèse ou d'origine naturelle ou un mélange de ceux-ci.

La présente invention a, un second objet, un procédé pour le contrôle des arthropodes nuisibles qui constituent des cibles susceptibles d'infester un sujet humain ou animal à traiter, procédé selon lequel on applique une composition sur au moins une partie du corps dudit sujet, ladite composition qui renferme un agent actif insecticide et/ ou insectifuge, comporte, en outre, un véhicule d'application topique approprié, l'agent actif étant constitué par un mélange synergique de pyrèthre végétal, d'extrait naturel de margosa et d'au moins une huile essentielle, caractérisé en ce que ladite composition comprend :

0,15 à 10% en poids de pyrèthre végétal,

0,15 à 5% en poids d'extrait de margosa,

0,15 à 10% en poids d'une huile essentielle,

45 à 99,55% en poids de véhicule d'application topique,

0 à 25% en poids d'additifs de formulation.

Selon une mise en œuvre, le pyrèthre végétal peut être choisi parmi le pyrèthre du Caucase, le pyrèthre dalmate, le chrysanthème pesticide, le pyrèthre naturel et la pyréthrine.

Selon une mise en œuvre, l'huile essentielle peut être choisie dans le groupe formé par l'huile essentielle de cannelle, l'huile essentielle menthe verte, l'huile essentielle de menthe pouliot, l'hiule essentielle de menthe des champs, l'huile essentielle de lemon-grass, l'huile essentielle de cèdre, l'huile essentielle de citronnelle, l'huile essentielle d'eucalyptus, l'huile essentielle de lavandin, l'huile essentielle de lavande, l'huile essentielle de palmarosa ou le mélange de celles-ci.

Selon une mise en œuvre, le rapport massique pyrèthre végétal/ extrait naturel de margosa/huile essentielle dans l'agent actif est compris entre 1/1 /1 et 1 /1 / 0.

Selon une mise en œuvre, le véhicule d'application topique peut être un liquide ou un semi-liquide dans lequel l'agent actif est formulé en lotion, en spray, en émulsion, en suspension, en concentré liquide, en concentré émulsifiable, en crème, en mousse, en gel, en pommade, en pâte.

Selon une mise en œuvre, le véhicule d'application topique peut être une matrice solide choisie parmi des polymères biodégradables, des polymères thermoplastiques synthétiques, des thermodurs en polyurédiane coulé, de la poudre particulaire d'origine minérale ou synthétique.

Les exemples ci-après sont fournis pour illustrer la composition selon la présente invention, sans en restreindre sa portée.

Exemple 1 : Composition renfermant un agent actif conforme à l'invention pour le contrôle des puces et des tiques chez un animal de compagnie. Ingrédients Fonction Ratio ingrédient actif Quantité (%)

Pyrèthre végétal actif 1 0,4

Huile essentielle de lavande actif 3,75 1,5

Extrait naturel de margosa actif 3,75 1,5

Parfum additif 1 ,1

Huile de coprah véhicule 95,5

Tableau 1 : formulation d'une composition en lotion répulsive antipuces et anti-tiques

Tableau 2 : formulation d'une composition répulsive antipuces et anti-tiques dont le véhicule est une matrice EVA

Les tests ont été réalisés en adéquation avec les recommandations de l'Union Européenne sur les produits biocides (EC 2012).

Test sur les puces :

Pour cette expérience, des puces adultes des deux sexes mélangés Ctenocephalides fe/is (Bouché, 1835) (Siphonaptera : Pulicidae) sont utilisées. L'étude a été menée dans un olfactomètre à quatre entrées décrit par Vet et al. (1983). Ce type de dispositif permet d'évaluer strictement l'effet répulsif de l'odeur d'un produit (PT1 de la réglementation biocide), sans contact direct avec celui-ci pour éviter les biais liés à une éventuelle toxicité (PT18 de la réglementation biocide). Ce test in vitro est une méthode viable permettant de limiter les tests de produits sur animaux comme recommandé par la directive européenne 2010/63/UE.

Pour ce faire, dans chaque bras, l'air bulle à travers le pot rempli d'eau distillée pour être humidifié, puis transite via le pot contenant la composition à tester ou le contrôle avant d'entrer dans l'olfactomètre au centre duquel il est aspiré. Il se crée ainsi à l'intérieur de l'olfactomètre quatre zones odorantes distinctes, correspondant aux quatre bras de l'olfactomètre. Environ 20 puces sont introduites au centre de l'olfactomètre, puis toutes les 30 secondes pendant 20 minutes, le nombre de puces présentes dans chaque bras est comptabilisé. Le nombre total cumulé de puces pour chacune des deux odeurs (lotion du tableau 1 et contrôle) permet de calculer un indice comportemental selon la formule I— (T-C)/ (T+C) avec T le nombre total cumulé de puces dans les deux bras contenant l'odeur test et C le nombre total cumulé de puces dans les deux bras contenant l'odeur contrôle. Cet indice varie de -1 (répulsif) à + / (attractif). La validité de l'effet comportemental est statistiquement vérifiée par un test de Mann-Whitney grâce au logiciel R. La manipulation est répétée six fois en alternant les positions des pots tests et contrôles afin de couvrir toutes les six différentes combinaisons possibles.

Résultat sur les puces : (n—6 réplicas)

Tableau 3 : résultat sur la répulsivité de la lotion du tableau 1 vis-à-vis des puces

A chaque réplica, l'indice comportemental mesuré était inférieur à 0, donnant un indice moyen nettement inférieur à cette valeur seuil. Les puces évitent ainsi significativement les bras de l'olfactomètre contenant la lotion (Tableau 3 ; test de Wilcoxon, W=0, ^<0,01).

On peut considérer que l'association synergique des ingrédients de l'agent actif constitué par le pyrèthre végétal, l'extrait de margosa et l'huile essentielle de lavandin de la composition de la présente invention formulée en lotion repousse significativement les puces.

Test sur les tiques :

Pour cette expérience, des nymphes de stade IV Ixodes nâmis (Linnaeus, 1758) (Acari: Ixodidae) sont utilisées. L'étude a été menée selon le protocole inspiré de la publication de Dautel et al. ( 999). Pour ce faire, un papier filtre comportant ou non la lotion à tester (tableau 1 : environ 0,1 mL) est fixé sur un ballon rempli d'eau chaude. Une tige est placée horizontalement à environ 1 à 2 mm devant le papier filtre et une tique est déposée à environ 2 cm de son extrémité. Trois étapes comportementales sont alors notées : la tique marche jusqu'au bout de la tige (walfi), s'accroche sur le papier filtre (clin^j et se déplace sur le papier filtre sans s'en laisser tomber (stay). Douze réplicas sont réalisés pour lé contrôle et la lotion consignée au tableau 1. Pour chaque réponse comportementale, le test statistique du Chi carré est appliqué via le logiciel R, afin de comparer la significativité des réponses entre le test et le contrôle et ainsi évaluer statistiquement l'efficacité répulsive de la composition selon l'invention.

Résultat sur les tiques : (n— 12 réplicas)

Tableau 4 : résultat sur la répulsivité de la composition en lotion vis-à-vis des tiques

La composition selon la présente invention formulée en lotion a démontré une bonne activité répulsive contre les tiques, l'accroche (clin ) et le séjour (stay) sur le stimulus en présence de la lotion en pipette étant significativement réduite comparée au contrôle (Tableau 4 ; test du Chi carré, ρ<0,0ί).

En conclusion, dans les conditions de cette expérience, avec les échantillons testés et les méthodologies employées, la composition selon la présente invention a démontré une bonne action répulsive contre les puces et les tiques.

Exemple 2 : Essai de répulsion envers les puces et les tiques de chacun des ingrédients de l'agent actif dissouts dans une huile végétale.

Test sur les puces :

Le protocole décrit dans l'exemple 1 a aussi été utilisé dans le présent exemple pour tester l'effet de chacun des ingrédients actifs sur les puces.

Test sur les tiques :

Le test d'évaluation a été effectué conformément au protocole décrit par Krober et al, (2013). Pour résumer la méthode, environ 0,1 mL de solution (ingrédient actif dissout dans huile végétale) à tester est appliquée sur un cercle (diamètre 13 cm) dessiné sur une plaque de verre inclinée et chauffée. Après 5 minutes, deux tiques testées simultanément sont placées sur un disque en alui iinium (diamètre 3 cm) positionné au centre de la zone traitée. Le comportement de chaque tique est alors observé: si elle monte la plaque de verre, la solution est considérée comme ineffective alors que si elle se laisse tomber ou redescend la plaque de verre, la solution est considérée comme répulsive. Douze réplicas pour chaque solution et le contrôle sont réalisés et le pourcentage moyen de répulsion efficace est ensuite calculé.

Résultat sur les tiques : (n= 12 réplicas)

Le tableau 5 ci-dessous montre les résultats résumant l'activité répulsive, envers les tiques, de chacun des ingrédients de l'agent actif de la composition de la présente invention en solution.

Tableau 5 : Pourcentage de tiques affectées par différentes concentrations des ingrédients de l'agent actif

Résultat sur les puces : (η=6 réplicas)

Le tableau 6 ci-dessous récapitule le taux de l'effet répulsif, envers les puces, de chacun des ingrédients de l'agent actif dilué à 5% dans la même huile végétale mentionnée dans le tableau 5. a,v »« y y y y,

Tableau 6 : Indice comportemental (I) mesuré sur des puces face à la diffusion atmosphérique des différents ingrédients de l'agent actif, dilués à 5% dans de l'huile végétale.

En conclusion, dans les conditions de cette expérience, avec les échantillons testés et les méthodologies employées, on observe que le pyrèthre végétal à 0,1 % induit 100% d'effet répulsif envers les tiques (Tableau 5); alors qu'à une quantité bien plus élevée de 5%, il ne provoque aucun effet répulsif envers les puces (Tableau 6). En revanche, l'huile essentielle de lavandin qui donne de faibles résultats répulsifs sur les tiques à 1 % (Tableau 5) donne de très bons résultats de répulsivité sur les puces à 5% (Tableau 6 ; test de Wilcoxon, W ^: =0, i<0,01).

Exemple 3 : Effet insecticide de chacun des ingrédients de l'agent actif de la composition sur les puces.

L'étude de l'évaluation de l'effet insecticide est menée selon un protocole basé sur les recommandations de la réglementation biocide PT18 (EC 2012) et de l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS, 1981). Trois groupes de puces mâles et trois groupes de puces femelles ont été testés pour chaque produit et la mortalité a été vérifiée à 24 heures, comme réclamé par la réglementation biocide (EC 2012).

Les ingrédients de l'agent actif testés, pour un volume de 500 uL chacun, sont le pyrèthre végétal, l'huile essentielle de lavandin, l'extrait de margosa et une lotion contenant un mélange de 2,1 μΧ, de pyrèthre végétal, 7,7 uL d'huile essentielle de lavandin, 7,7 μΕ d'extrait de margosa et 482,5 d'huile végétale, soit un volume total de 500 jxL.

Tableau 7 : Pourcentage de puces survivantes après 24 heures et 96 heures d'exposition.

L'effet insecticide de chacun des ingrédients de l'agent actif ne semble pas être lié au sexe des puces. Alors que 92%± 1,2% des puces survivent après 24 heures (contrôle), on observe que moins de 20% survivent en présence d'un des trois ingrédients de l'agent actif ou de la lotion laquelle étant 25 fois moins concentrée en agent actif.