用 于皮 肤美 白 的组 合物 及其 用途 技术领域 涉及皮肤外用剂领域， 具体涉及一种用于皮肤美白的组合物及其用途 。 背景技术 白皙均匀的肤色在全球大多数地方都被视为美 的标志。 欧美消费者主要利用美白化妆品 来减轻老年斑、 黄褐斑等色素沉积。 东方人希望通过使用美白化妆品而得到白皙、 光洁的皮 肤。 黑色素是决定皮肤颜色的主要因素。 概括来说， 美白是通过抑制黑色素的生成， 阻断黑 色素的运输， 加快表皮细胞代谢速度， 阻断黑色素生成过程中的信号通路等途径， 从而减少 角质细胞中黑色素的含量， 达到美白肌肤的效果。 2013年发生的佳丽宝的杜鹃醇导致皮肤白 斑的事件， 使消费者意识到美白祛斑化妆品的安全性至关 重要。 天然植物来源、 或者生物发 酵来源 的美白祛斑成分， 具有安全性和温和性的天然优势 ， 日益成为人们关注的焦点。 W0200506319A1公开了制备雏菊 ^Bellis perennis L.）提取物的方法及该提取物对黑色素生成 的抑制作用。 US20060280704A1公开了用于化妆品和医药用途的对 人体皮肤具有脱色效果的 局部制剂， 含有水萃取 （包括分馅和电解液交换） 生产雏菊花提取物。 目前已经发现的天然 植物中的美白成分， 有的活性物在植物中含量低提取困难， 有的美白成分功效活性不高， 无 法满足消费者对美白功效的需求。 为 了解决以上问题， 需要提供一种天然来源为主， 能够影响黑色素生成多个靶点的美白 组合物， 成分安全温和， 又能实现协同抑制黑色素的合成和转运， 提高美白功效。 发明内容 〃 a）属于链藻属的一种棕色海藻。 它是一种源自深海， 可 发出蓝色炫光， 会变色的海藻， 被称为 “海洋蓝宝石”。 这种独特的海藻被淹没在水中或潮湿 条件下会发出明显绿色或蓝色的光彩。欧囊链 藻提取物美白作用机理包括抑制 a-MSH与细胞 受体结合， 抑制酪氨酸酶， 减少黑素细胞生成黑色素。 雏菊 （Bellis perennis L.） , 又称延命菊、 春菊， 是菊科雏菊属多年生或一年生草状草本植 物， 原产欧洲， 是意大利的国花， 现在我国各地栽培为重要观赏植物。 雏菊提取物的美白作 用机理是抑制由紫外线刺激引发的黑色素生成 ， 降低 a-MSH与细胞受体的亲和力， 下调酪氨 酸酶活性， 减少黑色素生成和向角质细胞转移， 并使色素更加均匀分布， 淡化色斑。 羟 乙基哌嗪乙烷磺酸是一种两性离子缓冲液， 能够在化学反应过程中保持 pH恒定， 广 泛应用于细胞培养基， 在化妆品中具有作为去角质， 也是促进皮肤表面新陈代谢的有效成分。 羊华乙基哌嗪乙烷磺酸美白作用机理是你毋美 白成分的渗诱作用。 基于 以上机理， 第一方面， 本发明提供一种用于皮肤美白的组合物， 其包含作为有效成 分的以下物质： 欧囊链藻提取物、 雏菊提取物、 羟乙基哌嗪乙烷磺酸。 本发 明通过将欧囊链藻提取物、 雏菊提取物、 羟乙基哌嗪乙烷磺酸按进行组合， 通过在 多个靶点进行协同作用， 达到抑制黑素细胞活性， 减少黑色素沉积， 实现肌肤的美白提亮效 果。 在 本发明一些实施 方式中， 所述的欧囊链藻提取物含有 0.05~0.30g/kg 的总多酚和 0.07~3.2mg/g 的总糖； 在本发明一些具体实施方式中， 可以直接购买获得欧囊链藻提取物； 也可以通过醇提欧囊链藻获得欧囊链藻提取物 ； 在一些具体实施例中， 取欧囊链藻嫩叶， 用 乙醇水溶液提取一段时间， 将提取物离心， 过滤， 将滤液真空干燥， 用去离子水配制成含 1% 欧囊链藻的水溶液， 即可； 在本实施例中， 采用体积分数为 70%的乙醇溶液常温提取 24h即 可。 在本发 明一些实施方式中， 所述的雏菊提取物含有 0.1〜 2.8wt%的总黄酮； 在本发明一些 具体实施方式中， 可以直接购买获得雏菊提取物； 在本发明另一些具体实施方式中， 所述的 雏菊提取物从花、 叶、 根茎植物部位中的至少一种中提取获得； 更优选地， 所述的雏菊提取 物为雏菊花提取物； 而提取方法则现有技术中公开的即可， 例如 W0200506319A公开的雏菊 提取物提取方法； 在本发明一些具体实施例中， 提供如下提取方法： 将雏菊花干花用乙醇水 溶液提取一段时间， 得到粗提物， 再用乙酸乙酯和水萃取， 水相离心过滤后， 将滤液真空干 燥， 用去离子水配制成含 50%雏菊花的水溶液， 即可； 在本实施例中， 将雏菊花干花用 70% 乙醇醇提取， 得到粗提物， 再用乙酸乙酯和水萃取， 水相离心过滤后， 将滤液真空干燥， 用 去离子水配制成含 50%雏菊花的水溶液， 即可。 在本发 明一些具体实施例中，所述的组合物， 按照重量百分比计， 其含有 20〜 40%欧囊链 藻提取物、 20〜 40%雏菊提取物、 20〜 40%羟乙基哌嗪乙烷磺酸。 第二方面 ， 本发明提供前述所述的组合物的制备方法， 该方法包括如下步骤： 将欧囊链 藻提取物、 雏菊提取物、 羟乙基哌嗪乙烷磺酸依次加入搅拌釜中， 低速搅拌至混合均匀， 降 温至室温， 即可。 第三方面 ， 本发明将前述所述的组合物用于制备具有美白 功效的皮肤外用剂。 在本发 明一些实施方式中，所述组合物具有拮抗 a-MSH和抑制酪氨酸酶活性的作用，能 够减少黑色素产生， 降低黑色素在皮肤沉着。 在本发 明一些实施方式中， 所述皮肤外用剂包含 0.01〜 50wt%, 优选为 0.1〜 25wt%的前述 所述的组合物， 如此， 该组合物可以起到美白的功效。 在本发 明一些具体实施例中， 所述皮肤外用剂包括化妆品、 药品； 在本实施例中， 将该 组合物用于制造美白、 祛斑和亮肤的化妆品。 第 四方面， 本发明提供一种具有美白功效的皮肤外用剂， 该外用剂包含前述所述的组合 物； 在一些具体实施例中， 所述皮肤外用剂为精华液， 包含如下组分： 与现有技术相 比， 本发明通过将欧囊链藻提取物、 雏菊提取物、 羟乙基哌嗪乙烷磺酸按 照特定配比进行组合， 欧囊链藻提取物美白作用机理是抑制 a-MSH与细胞受体结合，抑制酪 氨酸酶， 减少黑素细胞生成黑色素。 雏菊提取物的美白作用机理是抑制由紫外线刺 激引发的 黑色素生成， 降低 a-MSH与细胞受体的亲和力， 下调酪氨酸酶活性， 减少黑色素生成和向角 质细胞转移， 并使色素更加均匀分布， 淡化色斑。 羟乙基哌嗪乙烷磺酸美白作用机理是促进 美白成分的渗透作用， 并保持组合物体系 pH恒定； 通过以上多个靶点进行协同作用， 达到 抑制黑素细胞活性， 减少黑色素沉积， 实现肌肤的美白提亮效果。 进一步地 ， 通过欧囊链藻提取物、 雏菊提取物、 羟乙基哌嗪乙烷磺酸按特定配比进行组 合复配， 可以协同提高酪氨酸酶抑制率和减少黑色素生 成， 在保持相同的美白活性下， 可以 降低美白组合物的用量和成本。 此外本发 明制备工艺简单， 操作方便。 具体实施方式 以下实施例 1~3使用的欧囊链藻提取物与雏菊提取物通过如 下方法制备获得： 欧囊链藻提取物提取工艺：取欧囊链藻嫩叶， 在室温（20°C）下用 70%乙醇提取 24小时, 将提取物离心， 过滤， 真空干燥， 用去离子水配制成含 1%欧囊链藻的水溶液， 即可。 雏菊提取物提取工艺 ： 将雏菊花干花用 70%乙醇醇提取， 得到粗提物， 再用乙酸乙酯和 水萃取， 水相离心过滤后， 真空干燥， 用去离子水配制成含 50%雏菊花的水溶液， 即可。 实施例 1 按 以下各组分和配比制备美白组合物。

34wt%欧囊链藻提取物、 33wt%雏菊花提取物、 33wt%羟乙基哌嗪乙烷磺酸， 在室温 下搅拌混合均匀， 即得美白组合物。 其中， 欧囊链藻提取物的总多酚含量为 0.25g/kg， 总 糖含量为 3.2mg/g， 雏菊花提取物含有 2.8wt%的总黄酮。 实施例 2 按 以下各组分和配比制备美白组合物。

40wt%欧囊链藻提取物、 30wt%雏菊叶提取物、 30wt%羟乙基哌嗪乙烷磺酸， 在室温 下搅拌混合均匀， 即得美白组合物。 其中， 欧囊链藻提取物的总多酚含量为 0.13g/kg， 总 糖含量为 2.0mg/g， 雏菊叶提取物含有 1.9wt%的总黄酮。 实施例 3 按 以下各组分和配比制备美白组合物。

40wt%欧囊链藻提取物、 40wt%雏菊根茎提取物、 20wt%羟乙基哌嗪乙烷磺酸， 在室 温下搅拌混合均匀， 即得美白组合物。 其中， 欧囊链藻提取物的总多酚含量为 0.07g/kg, 总糖含量为 1.2mg/g， 雏菊根茎提取物含有 1.3wt%的总黄酮。 实施例 4 黑素细胞测试

（1） B16细胞中酪氨酸酶活性抑制实验 将处于对数生长期 的 B16细胞接种于 96孔板， 置 37 °C . 5%CO ₂ 培养箱孵育。 待细胞密 度约 90%时， 用含不同浓度活性物的完全培养基处理细胞， 以 50|ig/mLVc做阳性对照。 24h 后， 加入 TritonX-100. L-DOPA. MBTH的混合工作液， 放培养箱继续孵育。 3h后， 用酶标 仪检测 OD490nm， 并进行统计学分析。

（2） 人原代黑素细胞中酪氨酸酶活性抑制实验 将处于对数生长期 的人原代黑素细胞接种于 24孔板， 置 37°C、 5%CC）2培养箱孵育， 培 养过程中始终添加 a-MSHo待细胞密度约 90%时， 用含不同浓度活性物的完全培养基处理细 胞， 以 0.5mM的 a-熊果甘为阳性对照。 24h后， 加入 TritonX-100、 L-DOPA、 MBTH的混合 工作液， 放培养箱继续孵育。 3h后， 用酶标仪检测 OD490nm， 并进行统计学分析。 实验结果如表 1所示。 表 1 黑素细胞酪氨酸酶抑制率测试 结果显示 ， 欧囊链藻提取物和羟乙基哌嗪乙烷磺酸按 O. lwt%, Iwt%浓度作用于 B16和 人原代黑素细胞后，有拮抗 a-MSH和抑制酪氨酸酶活性的美白作用，相同浓� ��的雏菊花提取 物作用于人原代黑素细胞后， 没有抑制酪氨酸酶活性作用。 欧囊链藻提取物、 羟乙基哌嗪乙 烷磺酸、雏菊花提取物的美白组合物按相同浓 度 O.lwt%, Iwt%作用于细胞后，有拮抗 a-MSH 和抑制酪氨酸酶活性的美白作用。 欧囊链藻提取物、 羟乙基哌嗪乙烷磺酸、 雏菊花提取物的 美白组合物在相同浓度下， 抑制酪氨酸酶活性作用数值均高于单独欧囊链 藻提取物、 羟乙基 哌嗪乙烷磺酸和雏菊花提取物， 而且对人原代黑素细胞酪氨酸酶抑制率高于阳 性对照 0.5mM a-熊果昔， 说明欧囊链藻提取物、 羟乙基哌嗪乙烷磺酸、 雏菊花提取物的复配物具有美白作 用， 且优于三者单独作用于细胞时。 实施例 5美白化妆品制备之精华液 A 按照实施例 1制备的美白组合物， 加入到精华液 A中， 精华液 A由以下质量百分比的组 分制成： 表 2 精华液 A组成成分表 制备方法如下:

( 1 ) 将 A组分混合加热到 75 °C至溶解完全；

(2) 将 B组分混合， 加热至 75°C , 搅拌至溶解完全；

(3 ) 在搅拌下， 将 A组分缓缓加到 B中， 均质均匀后降温， 温度降至 40°C后加入 C、 D 组分， 搅拌均匀即可。 实施例 6稳定性测试 将实施例 5制备的美白精华液 A, 进行耐热、 耐寒、 交变、 光照等稳定性测试。 其 中， 耐热测试条件为： 45±1 °C , 恒温避光， 3个月。 耐寒测试条件为： -20±l °C , 恒温 避光， 3个月。 交变测试条件为： -20°C恒温 3.5 天转至 45°C恒温 3.5 天， 避光， 3个月。 光照测试条件为：光照恒温恒湿试验箱 ( 1.47x lO ⁶ Lux hr, 7d)。低温性能测试条件为： 4±1 °C , 恒温避光， 3个月。 由本申请提供的美白美容组合物所制成的美白 精华液， 在测试前后未出现变色、 分层、 异味等外观性状改变， 具有优良的稳定性。 实施例 7 人体美白功效评价 按照实施例 5制备的精华液样品， 进行产品使用前后的美白功效评价。 志愿者 ： 67名 25-55岁女性健康受试者，入选标准包括脸部肌� ��暗沉伴有色斑、色素沉着、 瑕疵斑点、 细纹等症状， 脸部至少有一个色素沉着区， 色素沉着区不能是雀斑、 严重黄褐斑 等临床认为很难去除的色斑， 测试部位色素沉着区皮肤和周围邻近皮肤的 ITA。差值大于 10。 其中组 A使用实施例 5制备的精华液样品有 33名女性完成测试， 组 NT为对照组使用对比例 1制 备的精华液样品有 34名女性完成测试; 测试 区域： 面部； 使用方法 ： 志愿者每天早晚各使用一次， 取 2滴管精华液（每次滴管吸到底为 1滴管）， 约 0.8〜 lg, 均匀涂抹于全脸至吸收， 注意眼周部位也要涂抹； 使用周期 ： 28天； 使用频率 ： 早晚各使用一次； 测试周期 ： 在产品使用前 （0周） 以及连续使用后的 2周、 4周、 8周及 12周， 使用无创性 皮肤测试仪器对脸部肌肤的参数进行采集并全 脸拍照； 测试参数 ： 皮肤水分含量（ Comeometer CM825） , 经皮水分流失（Vapometer）, 血红素、 黑色素含量 （MX18）, 皮肤纹理（VC20_SEw）, 图像分析（VISIA-CR）； 专家评估； 消费者 问卷评估； 使用前 ： 志愿者清洁面部， 在温度 （21±1 °C）、 相对湿度 （50%±10%） 的实验室中等候 30min,进行面部图像采集，测试皮肤角质层水分 含量、经皮水分流失、血红素、黑色素含量、 皱纹等， 根据使用说明自行使用测试样品； 数据统计 ： 数据使用 SPSS19.0进行统计， 应用配对 T检验进行比较， 其显著性差异水平均 为 P<0.05。 实验结果显示 ：

1） 与基础值相比， 连续使用实施例 1美白精华液 A后 2周、 4周、 8周和 12周， 皮肤 水分含量、 经表皮水分流失均显著好于基础值， 水分含量分别提升 26.12%, 29.02%, 34.80% 和 42.65%, 经表皮水分流失分别改善 18.46%, 19.84%, 31.12%和 35.53%。

2） 与基础值相比， 连续使用实施例 1美白精华液 A后 8周， 眼角皱纹和眼下皱纹显著 好于基础值， 使用后 8周眼角皱纹改善 9.35%， 眼下皱纹改善 10.45%。

3） 与基础值相比， 连续使用实施例 1美白精华液 A后 8周和 12周， 黑色素含量显著好 于基础值， 分别减少 18.11%和 24.90%。使用后 2周、 4周、 8周和 12周， 红色素含量显著好 于基础值， 分别减少 8.49%, 15.18%, 19.29%和 28.45%。

4） 与基础值相比， 连续使用实施例 1美白精华液 A后 8周和 12周， 肤色明度、 红度显 著好于基础值， 明度分别提升 3.70%和 5.02%； 肤色红度分别降低 14.77%和 23.47%。 连续使 用实施例 1美白精华液 A后 12周， 肤色黄度显著差于基础值， 增加 7.96%o连续使用实施例 1美 白精华液 A后 4周、 8周和 12周，肤色白皙度显著好于基础值，分别提升 4.45%, 15.46% 和 16.13%o

5） 与基础值相比， 连续使用实施例 1美白精华液 A后 2周、 4周和 12周， 色斑面积和 色斑面积占比显著好于基础值， 色斑面积分别减少 4.06%, 3.04%和 5.76%, 色斑面积占比分 别减少 4.06%, 3.04%和 5.66%o

6）受试者连续使用实施例 1美白精华液 A后 8周和 12周， 对如下指标给予好评（T0P2 BOX>80% ）： 认为肤色变白皙了 （使用后 8周、 12周）、 认为肤色变均匀了 （使用后 8周、 12周）、 认为皮肤变透亮了 （使用后 12周）、 认为皮肤暗沉有所改善 （使用后 8周、 12周）、 认为皮肤泛黄有所改善 （使用后 12周）、 认为皮肤变得水润了 （使用后 12周）、 认为皮肤变 得更有弹性了 （使用后 12周）、 认为皮肤变得细腻 /平滑了 （使用后 8周、 12周） 由上述结果可知， 本发明的美白组合物应用于美白化妆品的制备 ， 可以增加皮肤角质层 含水量， 减少皮肤水分流失， 减轻皱纹， 减少皮肤色素沉积， 改善肤色黄度， 提升肤色白皙 度， 改善皮肤色斑， 消费者对产品美白效果满意度高， 产品安全好， 使用过程中未发生任何 不良反应。