COMPOSITION DESTINEE AU TRAITEMENT DE LA SCLEROSE LATERALE

AMYOTROPHIQUE

La présente invention concerne une composition pour maîtriser l'évolution de la Sclérose Latérale Amyotrophique, comprenant des molécules endogènes greffées à la Poly-Lysine, dites aussi conjugués de Poly-Lysine. L'invention se rapporte également à l'utilisation de cette composition. La Sclérose Latérale Amyotrophique est une maladie neurodégénérative évolutive liée à l'altération progressive des motoneurones, cellules nerveuses qui commandent les muscles volontaires. L'atteinte concerne à la fois les motoneurones périphériques, en relation directe osec les muscles, et les motoneurones centraux situés dans le cortex moteur. Cette dégénérescence systématisée des motoneurones se traduit par de nombreux troubles moteurs tels que l'existence de spasmes liés à une exagération du tonus musculaire, une augmentation des réflexes ostéo- tendineux, des fasciculations, ou encore des paralysies associées à une atrophie musculaire. Il n'y a pas d'autres signes d'atteinte neurologique, notamment pas de troubles sensitifs, oculomoteurs ou "démentiels". Des symptômes complémentaires viennent néanmoins s'ajouter aux troubles moteurs, à savoir : constipation, amaigrissement, douleurs, oedèmes et troubles vasomoteurs, troubles du sommeil et troubles respiratoires. Selon le site où débute l'atteinte des motoneurones périphériques, on distingue deux grandes formes de Sclérose Latérale Amyotrophique : la forme à début spinal et la forme à début bulbaire.

La forme à début spinal est liée à l'atteinte initiale des motoneurones de la moelle épinière, entraînant des troubles de la motricité des membres supérieurs ou inférieurs.

La forme bulbaire est liée à l'atteinte initiale de neurones moteurs du tronc cérébral et provoque des troubles de la parole et de la déglutition.

Il existe également une forme de Sclérose Latérale Amyotrophique qui débute avec l'atteinte des motoneurones du cortex moteur.

Quelque soit la forme initiale, la maladie évolue toujours vers une forme complète, avec de multiples handicaps qui influencent le pronostic vital. Dans la majorité des cas la mort est due à une déficience respiratoire aggravée par une surinfection bronchique.

Actuellement, il n'existe aucun traitement capable de stopper l'évolution de la

Sclérose Latérale Amyotrophique. La prise en charge des malades se limite à la prévention des dysf onctions motrices, à l'aide aux handicaps et au traitement des symptômes de la maladie. De plus, cette prise en charge demande l'intervention de professionnels et nécessite une hospitalisation et un suivi particulier, lourd pour les malades.

Ainsi, il subsiste un besoin pour un traitement de la Sclérose Latérale

Amyotrophique capable de maîtriser la progression de la maladie et facile d'administration.

C'est ce à quoi répond la présente invention en proposant d'utiliser une composition pour maîtriser l'évolution de la Sclérose Latérale Amyotrophique, comprenant au moins :

- un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un acide gras, et - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un anti-oxydant.

L'invention propose également une composition particulière capable de maîtriser l'évolution de la Sclérose Latérale Amyotrophique.

L'invention est maintenant décrite en détail, en regard des figures annexées sur lesquelles :

- la figure 1 représente la courbe de la moyenne des poids normalisés en grammes de rats transgéniques hSODl, obtenue pour trois traitements : Dosel, Dose2 et Placebo,

- la figure 2 représente la courbe de survie en jours, de rats transgéniques hSODl traités par Dosel, Dose2 ou placebo,

- la figure 3 représente le suivi au cours du temps du score Rotarod (temps d'exercice) en secondes, de rats transgéniques hSODl traités par Dosel, Dose2 ou placebo, et

- la figure 4 représente l'évolution de l'amplitude en mV du potentiel musculaire évoqué au cours du temps, de rats transgéniques hSODl traités par Dosel, Dose2 ou placebo.

La présente invention vise l'utilisation d'une composition pour la fabrication d'un médicament destiné à maîtriser l'évolution de la Sclérose Latérale Amyotrophique, la composition comprenant au moins :

- un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un anti-oxydant, et

- un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un acide gras.

Par anti-oxydants, on entend les anti-oxydants et les piégeurs à radicaux libres connus.

Une telle composition permet de ralentir, voire stopper la destruction des motoneurones et en conséquence de maîtriser la progression de la maladie. Selon une variante la composition utile selon l'invention comprend au moins :

- un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un acide gras, - un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un anti-oxydant, et

- un conjugué entre la Poly-Lysine et au moins un dérivé d'acide aminé. Préf érentiellement la Poly-Lysine est la Poly-L-Lysine.

On ne connaît pas à ce jour le mécanisme à l'origine de la Sclérose Latérale

Amyotrophique. On sait uniquement que des formes sporadiques, sans aucune mutation, coexistent avec des formes familiales beaucoup plus rares, associées à des mutations au niveau du gène SODl codant pour la superoxide dismutase. Bien que l'on ne connaisse pas l'origine exacte de la pathologie, différentes hypothèses ont été émises pour expliquer l'atteinte des motoneurones. Ces hypothèses se réfèrent à plusieurs mécanismes, en particulier le stress oxydatif c'est à dire des troubles du métabolisme de l'oxygène. D'autres phénomènes sont également mis en cause tels que l'excitotoxicité, c'est à dire le maintien de la cellule dans un état anormal d'excitabilité lié à l'action prolongée du glutamate, l'induction de phénomènes de type apoptotique, l'insuffisance de certaines molécules nécessaires aux motoneurones comme les facteurs de croissance, ou encore la phosphorylation anormale des neurofilaments, constituants majeurs du cytosquelette axonal. Chez les personnes atteintes de Sclérose Latérale Amyotrophique, on constate une hyperproduction d'espèces oxygénées réactives (EOR) toxiques, notamment de monoxyde d'azote (NO) et de ses dérivés.

Le monoxyde d'azote et les EOR en général, présents en grande quantité, ont des actions délétères sur l'organisme. Ils sont responsables de modifications des éléments du soi, à savoir les acides aminés, les protéines et les acides gras. Ils provoquent notamment une oxydation de thiols, d'acides gras et d'acides nucléiques de l' ADN, impliquée dans la mort des motoneurones. La mort neuronale serait également liée au phénomène d'excitotoxicité qui repose sur la mobilisation excessive du calcium dans la cellule sous l'effet d'une activation des récepteurs au glutamate. Ces troubles du métabolisme du calcium induisent des anomalies des mitochondries qui interviennent également dans le métabolisme oxydatif.

Chez les personnes atteintes de Sclérose Latérale Amyotrophique, il existe donc une multiplicité de mécanismes radicalaires très agressifs qui conduisent à la mort des motoneurones.

Un objectif de la présente invention est donc de lutter contre la formation des multiples radicaux libres impliqués dans la maladie et de contrôler les processus oxydatifs induits de manière à limiter la destruction des motoneurones.

Pour y répondre, la composition utile selon l'invention contient une grande diversité d' anti-radicaux libres conjugués à la Poly-Lysine qui piègent les espèces oxygénées et inhibent les processus oxydatifs pathogènes. Concernant l'origine de la Sclérose Latérale Amyotrophique et l'apparition des processus oxydatifs, on suppose que la pathologie serait liée à un agent causal externe non connu. Ce stress environnemental bactérien ou viral déclencherait la production d'anticorps contre les constituants de ces bactéries ou virus. La réponse immunitaire induite serait impliquée dans la mort des motoneurones. Parmi les anticorps circulants chez les malades atteints de Sclérose Latérale

Amyotrophique on retrouve en particulier des anticorps dirigés contre des acides gras à courte chaîne.

C'est pourquoi la composition selon l'invention contient des acides gras conjugués à la Poly-Lysine, en particulier des acides gras à courte chaîne qui jouent un rôle de leurre pour les acides gras à courte chaîne portés par l'agent causal potentiel de la Sclérose Latérale Amyotrophique.

Si on ne connaît pas le facteur initial de la maladie, on sait que la Sclérose

Latérale Amyotrophique est une maladie multifactorielle liée à un certain nombre de mécanismes identifiés. Un objectif de l'invention est donc d'agir sur ces différents mécanismes et de combiner les actions.

De fait, la composition selon l'invention contient au moins deux types de molécules endogènes qui ont des actions complémentaires et combinées qui

permettent d'agir sur les différents aspects de la Sclérose Latérale

Amyotrophique.

Selon une variante la composition selon l'invention contient au moins trois types de molécules endogènes. Pour être efficaces les molécules de la composition selon l'invention ne peuvent être utilisées non liées car elles seraient rapidement métabolisées, n'atteindraient pas leur cible et n'auraient aucune activité thérapeutique. De fait, selon l'invention, ces molécules endogènes sont greffées à un vecteur particulier : la Poly-Lysine. Ce vecteur particulier, permet : - d'éviter la dégradation métabolique des molécules endogènes,

- de faire atteindre leurs cibles aux molécules endogènes, et

- de donner aux molécules endogènes une activité thérapeutique qu'elles n'ont pas sans ce greffage.

Par ailleurs, la Poly-Lysine présente également l'avantage d'être inerte, non allergisante, non immunogénique et d'avoir une demi-vie assez longue.

Avantageusement, la composition selon l'invention ne contient que des substances endogènes c'est à dire connues pour être naturellement présentes dans le vivant. Elle ne présente aucune toxicité, ni d'effets secondaires et peut être administrée à long terme. La composition selon l'invention peut être incorporée dans différents types de préparations pharmaceutiques présentées sous toutes formes galéniques. Parmi les formes galéniques des préparations pharmaceutiques susceptibles d'inclure le principe actif selon la présente invention on peut citer notamment la forme sublinguale, pratique d'utilisation et équivalente en efficacité à une administration sous cutanée.

Parmi les compositions selon l'invention, on peut citer une composition particulière contenant les conjugués de Poly-L-Lysine suivants :

- Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique

- Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique

- Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Pαlmitique

- Acide Oléique - Poly-L-Lysine- Acide Lαurique - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Linoléique

- Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Pαlmitoléique

- Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Cαprylique

- Trαns,Trαns-Fαrnesyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Pαlmitique

- Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique - L-Cystéine - Glutαrαldéhyde réduit - Poly-L-Lysine

- L-Cystéine - Anhydride Glutαrique - Poly-L-Lysine

- Taurine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine

- Taurine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine

- L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - L-Méthionine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine

- L-Glutathion -Glutaraldéhyde réduit- Poly-L-Lysine

- Alpha- Tocopherol succinate - Poly-L-Lysine

- Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine

- Acide Oléique - Poly-L-Lysine - CoEnzymeQlO - Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Rétinoïque

- Acide Pantothénique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique

- Biotine - Poly-L-Lysine

- Acide Urique-Formaldehyde-Poly-L-Lysine

- Agmatine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine - Glucosamine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine

L'efficacité sur la maîtrise de l'évolution de la Sclérose Latérale Amyotrophique de cette composition a été testée sur le seul modèle animal connu pour cette pathologie, le modèle de rats et de souris transgéniques SODl.

L'étude α été réalisée sur 29 rats transgéniques surexprimant le gène hSODl, développant des symptômes de la Sclérose Latérale Amyotrophique de la forme familiale.

Le protocole opératoire consiste à injecter quotidiennement de J65 à J185, par voie sous-cutanée, 500 μL de la composition selon l'invention, Dosel ou Dose2, ou un placebo.

Les concentrations en M (moles/litres) des éléments de la composition pour Dosel sont les suivantes :

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique 3,3.10 ^"5 Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique 3,3.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique 3,3.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine- Acide Laurique 3,3.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Linoléique 3,3.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique 3,3.10 ^"5 Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Caprylique 3,3.10 ^"5 Trans,Trans-Farnesyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique 3,3.10 ^"5

Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique 3,3.10 ^"5

L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5

L-Cystéine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5 Taurine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5

Taurine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5

L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5

L-Méthionine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5

L-Glutathion -Glutaraldéhyde réduit- Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5 Alpha- Tocopherol succinate - Poly-L-Lysine 1.10 ^"5

Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine 1.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - CoEnzymeQlO 1.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Rétinoïque 1.10 ^"5

Acide Pαntothénique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique 1.10 ^"5

Biotine - Poly-L-Lysine 1.1CT ⁵

Acide Urique-Formαldehyde-Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5

Agmαtine - Glutαrαldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5 Glucosαmine - Anhydride Glutαrique - Poly-L-Lysine 3,3.10 ^"5

Les concentrations en M (moles/litres) des éléments de la composition pour

Dose2 sont les suivantes :

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Thioctique 1.1CT ⁴ Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Myristique 1.1CT ⁴

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique 1.1CT ⁴

Acide Oléique - Poly-L-Lysine- Acide Laurique 1.1CT ⁴

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Linoléique 1.1CT ⁴

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Palmitoléique 1.1CT ⁴ Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Caprylique 1.1CT ⁴ Trans,Trans-Farnesyl-L-Cystéine - Poly-L-Lysine - Acide Palmitique 1.1CT ⁴

Cholestérol - Poly-L-Lysine - Acide Oléique 1.1CT ⁴

L-Cystéine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 1.1CT ⁴

L-Cystéine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine 1.10 ^"4 Taurine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 1.1CT ⁴

Taurine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine 1.10 ^"4

L-Méthionine - Glutaraldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 1.1CT ⁴

L-Méthionine - Anhydride Glutarique - Poly-L-Lysine 1.10 ^"4

L-Glutathion -Glutaraldéhyde réduit- Poly-L-Lysine 1.10 ^"4 Alpha- Tocopherol succinate - Poly-L-Lysine 3.10 ^"5

Acide Ascorbique - Poly-L-Lysine 3.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - CoEnzymeQlO 3.10 ^"5

Acide Oléique - Poly-L-Lysine - Acide Rétinoïque 3.10 ^"5

Acide Pαntothénique - Poly-L-Lysine - Acide Oléique 3.io- ⁵

Biotine - Poly-L-Lysine 3 .îcr ⁵ Acide Urique-Formαldehyde-Poly-L-Lysine 1. îO ^"4 Agmαtine - Glutαrαldéhyde réduit - Poly-L-Lysine 1. io- ⁴ Glucosαmine - Anhydride Glutαrique - Poly-L-Lysine 1. io- ⁴

A J65, les rats sont approximativement âgés de 65 jours.

Plusieurs paramètres sont évalués à intervalles réguliers.

Des prélèvements sanguins sont effectués par véniponction au niveau de la queue du rat à J60, J90, J115, J140, J225 et au moment du sacrifice en fin d'expérimentation.

Le poids des animaux est répertorié au minimum une fois par semaine. La courbe de poids permet de détecter directement si un animal développe une atrophie musculaire et donc une perte de masse. La courbe de la moyenne des poids normalisés obtenue pour chacun des trois traitements est représentée sur la figure 1. On constate que les animaux traités avec la composition selon l'invention (Dosel, Dose2) ont une courbe de poids améliorée par rapport aux animaux traités par le placebo. Par ailleurs, la survie des animaux est observée au cours du protocole. La courbe de survie selon le traitement, présentée sur la figure 2, montre que la survie des rats traités avec la composition selon l'invention (Dosel, Dose2) est augmentée de manière significative par rapport à celle des animaux traités par placebo. De plus, le temps moyen de survie des animaux traités avec le placebo est de 210 jours, alors que celui des animaux traités avec Dose 1 est de 230 et avec Dose 2 de 248.

Des tests permettant d'évaluer la capacité motrice des animaux sont également effectués sur un appareil muni d'une barre tournante (Rotarod).

Le suivi au cours du temps du score Rotarod (temps d'exercice exprimé en secondes) selon le traitement est représenté sur la figure 3. En outre, les résultats du score Rotarod obtenu au jour 210 exprimé en secondes selon le traitement, sont présentés dans le tableau ci-dessous :

Ces résultats montrent que les rats traités par la composition selon l'invention ont une meilleure fonction motrice.

Enfin, des tests électromyographiques sont effectués sur chaque animal à plusieurs périodes : avant l'inclusion dans le protocole et pendant le protocole à

J140 et J200. Plusieurs paramètres sont mesurés, notamment l'amplitude du potentiel musculaire évoqué dans les muscles de la loge jambière-antérieure.

Les résultats présentés sur la figure 4 montrent que les rats traités avec la composition selon l'invention avec la Dose2 gardent, au jour 200, une amplitude supérieure à celle des animaux traités par placebo.

D'une manière générale, cette étude montre que la composition selon l'invention a un effet bénéfique sur les rats transgéniques hSODl, modèle de la Sclérose

Latérale Amyotrophique.

Bien entendu, l'invention n'est évidemment pas limitée à l'utilisation de cet exemple de composition représenté et décrit ci-dessus, mais en couvre au contraire toutes les variantes, notamment en ce qui concerne les acides gras, les anti-oxydants et les dérivés d'acides aminés utilisés, ainsi que les préparations susceptibles d'inclure la composition.