本发明是有关于一种抑制谷胱廿妝 S-转移酶 omega 1(以下简称 GST Omega 1或 GST01.)活性的化含物、 ：其 K药组合物及.； H:制备方法。 背景披术

在癌 ¾ΐ；的治疗上， 多重药物抗药 tt ( miiltidragresistance; MD ) 是药物 研究与开发的 点项目之一， 除熟知的通道蛋白如 P- glycoprotein、 MRP1、 ABCG2...等外，参与代谢药物的蛋白酶于近来新� ��开发领域上遂渐受到 ¾视， 其中又以谷胱甘肽 S-转移酶（Glutathione s transferases; GSTs)此.家族的蛋白 最为 要。

GSTs 被！^类为 phase Π代谢酶， 处理细胞外来物质去毒化作用， 它可将 来自细胞外的有害物质催化接上谷舰 l-肽 (gtatath譲 ₆ )而降低毒性。 也因此在 多种癌症细胞中， 都可以发现此 GST家族酶大 Λ表现， 并且在许多 ¾础与临 *证据上都指出 GSTs是参与产生药物抗药性的袁要因子。

先前研究发现， GST 被认为在抗药性产生的过程中相当 «要， 许多药 物研究与开发― L:都集中设计 GST 的抑制剂。 前开发上， 以美国 Telik生物 药剂公司拥有许多 GST pi抑制剂专禾 旗下药物 TELCY1A® ( Canfosfamide HC1) H TEL1NTRA® (Ezatiostat HC1, TL 199 ) 为 GST pi的抑制剂。

然而， 近年来 GST omega 的 ¾要性亦逐渐获得证实， 包含阿 素依托泊 TT¾'l(adnamycin etoposide pktii麵)类抗癌药物都与 GST Omega 1-1有密 的关 连，对于缺乏 GST Omega 1-1的癌症无法对二氧化一.神 (arsenic trioxide.)、顺铂 (cisplatiuni), 道诺導素 (daimorabin) 与依托 l i etoposide)产生抗药性， 而冃 前尚未有针对 GST omega 1开发出的抑制剂， 以处理癌症抗药性的问题。 发明 Λ容

因此，木发明的- -个方面在于提供 · -种用于仰制谷胱甘肽 S转移酶 omega 1活性的化合物， 该化合物具有如下通式 （1) 所小的结构:

ΜΛ(ΐ)

其中 Α环为对位氢醌醇 （p- qumol) 环， R是选自于由下列通式 (ia)及通式 (lb) 所组成的群组， 通式 (la)的 n为 1或 2 , 通式 (lb) 的 m为 0或 1， R ¹ 为 H或 ArC¾—， R ² 为 Alkyl—或 Aryl—:

通式 ( la ) 通式 （lb) 本发明的另一 面在于提供一种用丁抑制谷胱廿肽 S-转移酶 omega 1活 性的医药组合物， 其包含有效量的具有如通式 （I ) 所示结构的化合物， 以及 一药学上可接受的载体。

本发明的 51— 面在于提供一种用于抑制谷胱 1 _:: 「肽 S-转移酶 omega 1活 性的化合物的制备 法，包含将 2， 6-一.甲氧基萘进行 i¾edel-Craft乙酰化反应, 并加入含卤素试剂以去除二个甲氧 ¾。 形成含第- -保护 *的中 I'nj产物， 并与 含有第 保护基的对位羟基苯¥^进行 Claisen- Schmidt缩合反应， 再以卤素 催化剂及酸溶液去除第一保护基。 加入含卤素不饱和碳链并去除第二保护基， 再加入高价碘化合物进行氧化反应，得到具冇 如通式（ia)所示结构的化合物。 依照木发明的一实施例，使用的含卤素试剂为 二溴硼 ( Boron tnbromide)o 依照本发明的另―实施例， 使用的第 -保扩基为甲氧基甲基

(Methoxymethyl; MOM) , 第 保护基为苯甲¾。

依照木发明的一实施例， 卤素催化剂为碘， 酸溶液为浓 _盐酸。

依照木发明的另一实施例， 含卤素不饱和碳链为香叶草溴 ( Geranyl bromide )o

依照木发明的另一实施例， 价碘化合物为双二氟乙酰氧碘化苯。

根据上述， 本发明实施例的具有如通式 ( I)所示结构的化合物可用于抑 制 GST Omega 1， 其制备方法是以化学方法全合成产生不同侧链 的衍牛物， 具有大量生产的优点， 具有通式 ( 1 ) 所示结构的化合物为一种 β-萘黄酮类 (Protoapigenone ) 衍生物， 具有由醚键 （ether linkage ) 连接的异戊垸 .体衍 牛的侧链 （Ia)， 或是含有 2-萘基侧支的双酰胺类的侧链 （Ib)。

本发明实施例的具有通式 (1)所示结构的化合物的标的 GST Omega 1为 新抗癌标的， 长期发展可做为多种抗癌药物的合并治疗试剂 ， 具有极 ¾的发 展潜力。 附 H说明

为让木发明的上述和其他 的、 特征、 优点与实施例能更明 易懂， 所 附图式的说明如下：

图 1为具有不同侧链的化合物对 GST01的酶活性的影响的分析结果。 具体实施方式

本发明实施例的具有通式 (1 ) 所示结构的衍生物， 是针对能抑制谷胱 1ί 肽 S-转移酶 omega 1活性的结构设计合成， 未来能成为具有潜力的癌细胞毒 杀剂。 试验倒 1

因此， 以下利用具有通式 ( 1) 结构的化合物及其它结构类似物对癌细胞 的生长抑制作用（In Vitro Growth liihibition(Gl ₅ o, μΜ) )来评估其毒杀癌细胞活 性。本发明实施例选用人类 I 1腔上皮癌细胞株 KB、 多重抗药性鼻咽癌细胞株 KB-Vm, 人类肺腺癌细胞株 A549及前列腺癌细胞 # DU145为受试对象， 并 以癌细胞毒杀剂太甲洋紫杉醇 （Paclita d) 的 0½)剂. 作为对照。 试验结果 显示于下表 1。

表 1 中的化合物均为具有通式 ( 1) 所小结构的衍生物， 其中 i体结构为

R为编号 1 19所示， 其中编号 1 19所示侧链的左端连接 到上述 ΐ体结构以形成通式 (1) 所示化合物。

如下表 1所示， 相较于具冇 ¾它侧链结构的化合物， 具有编号 11及编号 12侧链结构的化合物， 对于受试的 4种癌细胞株均具有毒杀作用。

其中，具有编号 11侧链结构的化合物为具有一个醚键连接的异� ��垸 体， 对于受试的 4种癌细胞株的 GI ₅₍ 分别为 0.2 μΜ、 0.269 μΜ、 0.382 μΜ、及 0.231 μΜ, 毒杀细胞的能力明显较佳。

而具有编号 12侧链结构的化合物为侧链具有两个异戊烷 体， 对于受试 的 4种癌细胞妹的 GI _a 则分别为 0.067 μΜ、 0.335 μΜ、 0.233 μΜ、及 0.065 μΜ; 其中， 对于人类 Π腔上皮癌细胞株 KB及前列腺癌细胞株 DU145更具有显著 的毒杀效果。

值得注意的是， 当侧链的异戊烷甲-体继续延长至三个时， 如编号 13的结 构， 其对于癌细胞的毒杀效果大幅下降， 可 证欲达成较佳的癌细胞毒杀效 果， 其侧链不仅需耍异戊烷中.体的特异性立体构� �， 其异戊垸 体的数 S (侧 链长度） 也,常关键。

表 1、 癌细胞的生长抑制作用

i« v¾r cytotoxicity assay: GIso(p )

人类口腔多重抗药人类肺腺前列腺癌 试验組 上皮癌 tt鼻咽癌 癌细胞 细垂 细胞 细胞 A549 DU145 KB KB-Vm 主体

74 0.763 0.799 结构 Γ 1 i »·· 0.865 0.6

' Y

C)

1 、 I 0.718 0.66 0.895 0.688

、（r' ■、

u

2 · ·ζ 0.694 0.668 0.811 0.694

3 0.669 0.664 0.731 0.695

(1

Ί

4 、 ,'·-、ζ、ζ 0.629 0.663 0.738 0.656

5 、义人 0.644 0.651 0.656 0.795

6 0.607 0.64 0.603 0.617

o

7 ·… 、 _{ir t J} 、

0.615 0.619 0.536 0—522

8 — OMe 0.871 0.692 0.811 0—707

9 0.68 0.704 0.693 0.682 10 》 -、 ζ ^Λ 、.、. 0.786 0.766 0.819 0,865

11 、八人 0.2 0.269 0,382 0.231

12 、 ₀ ζ、人〜 ·、· 0.067 0.335 0.233 0.065

13 -·、》··-、·'·人 、· 、·Ζ、··Ζ、 1.1 15 1.883 4.27 1.262

14 \ ₀ 八 、 0.683 0.841 0.754 0.808

15 0.644 1 .325 0.551 0.685

、·· ·· 、,

16 、,' 、；丫 0.55 0.682 0.584 0.62

,·'、....

17 \ 0.499 0.675 0,483 0.541

(r -、 ^v

18 、 8 0,628 0.693

、 \、■' 、. ) 0.552 1 , 10

·'

19 —OH 0.944 0.738 0.806 0,709 对照组 >1画

4.64 nM 3.56 nM 3.00 nM 太平洋紫杉醇 （Paciitaxel) nM 试验例 2

以下再以具有编号 1 1及 12的侧链结构的化合物为例， 进行酶活性分析， 以验证具有本发明实施例的通式 ( I) 的化合物对于毒杀癌细胞的效应是否与 抑制谷胱甘肽 S-转移酶 omega〗活性有关。

GST01的酶活性分析 （GSTO〗 substrate assay) 是以 Baehovchin等人于 200 年发表的方法》 利用 GST01 受质 S (4 硝基苯乙酮）谷胱卄肽 ( S-(4-nitropheiiacyl)gltitatliione； 以下简称为 4NPG )进行。 分析方法为于 UV 可穿透式％孔盘中加入 100 μΐ混合于缓冲液 ( 100 mM' Tns (pH8.0),1 .5 mM 'EDTA,】0 mM 2巯基乙 i©(2- mercaptoetlmnol) ) 的 GSTOl (2 nM) , 另以 100 μ!缓冲液作为空白对照组。

受试的具有编号 11及 12的侧链结构的化合物， 以下简称为化合物 （I) 及化合物（U) _; 另外化合物 A及化合物 B为对照组， 其中化合物 A不具有本 发 1 实施例主体结构， 化合物 B为本发明的主体结构加上甲基侧链。 化合物 A、 化合物 B、 化合物 （I) 及化合物（U) 的结构如下所示：

化合物 （I) 化合物（ΙΓ)

化合物 A 化合物 B 将化合物 （1)、 化合物（11 )、 化合物 A及化合物 B及药物溶剂一.甲亚俱 (Dimethyl sulfoxide)加入孔盘中 '于 25°C反应 30分钟。 之后将受质 4NPG加入 使终浓度为 0.5 mM。

受质 4NPG会与 GST01进行专一性结合，而本发明实施例的化合� ��（1 )、 化合物（11) 的结构则被设计为可与 4NPG竞争酶结合位， 此可 « r†i于波长 305 nm下， 每间隔 1分钟记录一次侦测到的吸光值， 侦测孔盘中样品的吸光 值， 以控制组为准得到吸光值的下降速率， 了解化合物 （1)、 化合物 （II) 对 于干扰酶与受质结合的效应。

图 1为具有不同侧链的化合物对 GST01的酶活性影响分析结果， 从图 1 中可知， 对照组的两个化合物， 即不具有主体结构的化合物 A、 以及虽具有 i体结构但不具冇异戊烷 体的化合物 B , 对于干扰酶与受质结合的能力较 低， 而木发明实施例的化合物（1)及化合物（II) , 其干扰酶与受质结合的能 力明显较佳， i呈现随着侧链延长则效果提升的趋势， 此一结果与癌细胞毒 杀试验的结果吻合。 根据上述， 本发明实施例的化合物 （I) 及化合物 （II) 对于癌细胞毒杀 试验的效果显著优于其他结构者， H.其结构证实可与 C3ST01的受质 4NPG竞 争酶结含位， 从而达成抑制 GSTO1酶活性的效果。 故， 包含有效量的本发明用于抑制谷胱 It肽 S-转移酶 omega 〗 ¾tt化合 物以及药学上可接受载体的医药组合物， 确为新抗癌标的， 长期发展可做为 多种抗癌药物的合并治疗试剂， 具有极「 的发展潜力。 合成倒

本发明的用于抑制谷胱 1」—肽 S-转移酶 omega 1活性的化合物可经由常规 方法制得。 例如， 可将包含将 2, 6- -；甲氧基萘进行 Fnedel- Cra 乙酰化反应， 并加入含卤素试剂去除'：个甲氧 ft。 形成含第一保护 ft的中间产物， 并与含 有第 _：保护 ¾的对位羟 «苯甲醛迸行 Claisen- Sehimdt缩合反应， 再以卤素催 化剂及酸溶液去除第一保护《。 加入含卤素不饱和碳链并去除第—：保护《， 再加入高价碘化合物进行氧化反应， 得到具冇如通式（I)所示结构的化合物。 以下将以本发明的化合物（U) 为例， 描述本案化合物的制备方法。 化合物 （II) 的合成方法流程图如下。

首先， 在氮气下将含有2, 6-二甲氧¾蔡（2，6-dlmethoxyna{)hthalene )的无 水苯溶液中， 缓慢加入 1.6当量的四氯化锡， 并加以搅拌。 再将 1.5 S乙 ft 氯逐滴加入反应溶液中。 于室温下隔夜搅拌后将苯在减压浓缩下去除， 以二 氯甲; K/水进行萃取。将二氯甲烷以减压浓缩去除后� �� .iH己垸 /乙酸乙酯进行管 杵]3析， 即可得到 1-乙酰- 2, 6-二甲氧基萘 （ 1- acetyl- 2,6- dimetlioxy naphthalene) , 产率为 86.5%>。

着， 将此化合物溶于无水二氯甲烷中， 并在氮气及零下 78Γ加入 6当 量二渙硼以去除萘环上的二个甲氧基， 持续搅拌 2 小时后， 加入水以去除剩 余的二溴硼。 以一.氯甲垸 /水萃取后在减压浓缩下去除有机溶剂， 并以 己烧 / 乙酸乙酯进行管 tt S析， 即可得到 1-乙酰 -2, 6-二氢氧基萘 ( l-acetyl-2,6-dihydroxy naphthalene )， 产冲《为 93%。 将得到的化合物再次溶于无水二氣甲垸中， 在冰浴下加入 2 当 a的 异 丙某乙基胺 CN,N- Diisopropylethykmme ), 直到反应溶液变澄洁。接着将经巾 二氯甲烷稀释过的氯甲 ¾甲¾醚溶液（稀释约四十侪） 逐滴加入反应溶液中， 持续搅拌约 2小时。 于减压浓缩下将所 iffi机溶剂移除， 以正己;) ¾/乙酸乙酯 ¾tf了管柱层析， 即可得到化合物 1 (包含第一保护基 甲氧基甲基）， 产率 为 47.3%。

将化合物 1与 4-1?氧基苯甲醛 (4-benzyloxy- benzaldehyde)进行 Ciaisen -Schmidt缩合反应（Ciaisen- Schmidt Condensation) ,在含有化合物 1的乙醉溶 液中加入 3当量的 4- 氧 ¾苯甲醛， S拌后加入与乙醇溶液等 的 50%氢氧 化钾水溶液， 于 55tTF搅拌 1.5 小时后， 进行减压浓缩以去除溶剂， 再以 J 己垸 /乙酸乙酯进行管杵 析， 即可得到 Chalcone 化合物 2 (包含第一.保护 基 苯甲基）， 产率为 92.6%。

将化合物 2溶解于适量 ft啶， 并加入 2 当量的碘。 隔夜加热回流后， 加 入硫代硫酸钠并以乙酸以酯 Z水萃取 有机 S经减压浓缩后以管柱层析分离可 得到 β-萘黄酮化合物 3， 产卓为 65%。

在溶有化合物 3的适量二氯甲烷溶液中， 加入浓盐酸 /异丙醇溶液， 比例 约为 1 : 10。经¾温下隔夜搅拌后将沉淀物过滤即得到� �除第 -保护基的化合 物 4。于氮气及冰浴下， 在含有 2 ¾ ¾氢化钠的无水'：甲基甲酰胺溶液中¾滴 加入含有化合物 4 的'：甲 «甲酰胺溶液， 直到反应溶液变成红 再加入 2 ¾ ¾的香叶草溴（Geranyi bromide)溶液。将冰浴移除于 ¾温下搅拌 2小时候 加水并以乙酸乙酯萃取。 经减压浓缩移除有机溶剂后以_：氣甲 甲醇进行管 杵层析分離可得到化合物 5， 产率为 94%。

将化合物 5溶于乙酸乙酯屮并加入 ]0%碳钯， 比例为 240毫克 Ζ每 1毫摩 尔原料。 在氢气的催化下隔夜反应， 过滤除去碳钯之后， 将溶液进行减压浓 缩， 即可得到脱除第二保护基 （即节基） 的化合物 6, 产率为 40%。

最后将化合物 6溶于比例约 15: 1的乙腈 Ζ水溶液中， 加入 2当量的双三 氟乙酰氧蘭化苯 ( [bis(trifluoroacetoxy)iodoj benzene) 进行氧化反应， 即可得 到如化合物 （II) 所示具有异戊烷二聚体侧链的最终产物， 产率为 49%。

化合物（ID 以核磁: 振光潜仪进行核磁共振光¾分析数据为： NM (400 MHz, CDC13) 5 = 9.78 (d, J = 9.2 Hz, 1H),7.90 (d,J= 9.2 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, IH), 7.18 (d, J = 2.4Hz,lH),7.03- 7.00(m，3H),6.41(d,J=10.0Hz,2H),5.47(bs，lH), 4.16-4.07 (m,2H), 1.94- 1.86(m,lH),1.73- 1.61(m,2H),1.59- 1.49(m，lH)，1.40- 1.14 (m, 6H), 0.98 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 6H) ppm; ¹ C NMR (100 MHz, CDC13) δ = 185.4 180.9, 164.0, 158.0, 156.5, 146.7, 135.2, 132.7, 130.0, 128.6, 124.7, 121.2, 117.8, 117.4, 111 .6, 108.6, 69.9, 66.7, 39.5, 37.5, 36.3, 30.1 , 28.2, 24.9, 22.9, 22.8, 19.9 ppm; IR ( Br) (cm— 1 ): 3294, 2954, 2927, 2869, 1644, 1599, 1514, 1465, 1427, 1410,〗385, 1367, 1245, 1176, 1129, 1058, 1009; HRESI- MS: C29H3305, calcd. 461.2323, found 461.2328.

虽然木发明已以实施方式揭露如上， 然其并非用以限定本发明， 在木发 明所属技术领域中任何具有通常知识 ， 在不脱离本发明的精神和范 Μ Λ , 当可作各种的更动与润饰， 因此本发明的保护范围当视后附的权利要求书 所 界定的范围为准。

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