COMPUESTOS ÚTILES PARA EL DIAGNÓSTICO Y SEGUIMIENTO DE ENFERMEDADES RELACIONADAS CON LA FORMACIÓN DE FIBRILAS PROTEICAS AMILOIDES Campo de la invención La presente invención se refíere a compuestos que son útiles para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades relacionadas con la formación de fibrilas proteicas amiloides, a su uso en el diagnóstico de dichas enfermedades, a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos y, finalmente, a métodos de preparación de dichos compuestos.

Antecedentes de la invención Es conocido que enfermedades como la de Alzheimer, Parkinson, Huntington y Creutzfeld-Jacob, la fibrosis cística, la diabetes de aparición tardía y la enfermedad de las neuronas motoras, entre otras, cursan con la formación de fibrilas proteicas amiloides a partir de proteínas precursoras. Estas fibrilas pueden manifestarse en forma sistémica o como depósitos insolubles localizados. Hoy por hoy, se admite que las proteínas amiloides que forman fibrilas se caracterizan por ser positivas al Rojo Congo, ser fibrilares por microscopía electrónica y tener estructura beta cruzada por difracción de Rayos X. Se conocen más de 20 proteínas precursoras de proteínas amiloides siendo algunos ejemplos, las inmunoglobulinas de cadena ligera y pesada, transtiretina, apolipoproteina Al, gelsolina, lisozima, la proteina precursora de la AR, las proteínas priónicas, el factor natriurético atrial, prolactina e insulina.

Concretamente en pacientes afectados por la enfermedad de Alzheimer, tras examen post-mortem, se observan acumulaciones anormales de dos tipos de depósitos proteicos amiloides en regiones cerebrales responsables de tareas de aprendizaje y memoria como el hipocampo. De estos dos tipos, las placas amiloides extracelulares son las más características de la enfermedad de

Alzheimer mientras que los conglomerados neurofibrilares intracelulares pueden encontrarse también en otro tipo de afecciones neurodegenerativas.

La placa amiloide está formada por neuritas distróficas y otros astrocitos alterados además de microglia que envuelve un núcleo fibrilar insoluble. Estas fibrilas están compuestas por una serie de proteínas que genéricamente se denominan proteínas ß-amiloides de las cuales dos, la AMO y la AM2 son predominantes. Se ha demostrado tambien que ciertos metales de transición son intrínsecos de la composición de los agregados ß-amiioides dado que las proteínas IS-amiloides tiene capacidad para unir metales a través de lugares específicos para Cu y Zn. Esta unión es la que media la precipitación de estas proteínas y por tanto, se observan concentraciones altas de metales como Cu y Zn en el neocortex y todavía mayores en la placas ß-amiXoides de enfermos de Alzheimer. Las proteínas ß-amiloides se generan a partir de las proteínas precursoras correspondientes que se expresan de forma ubícuota en las superficies celulares. Aunque no hay prueba irrefutable de ello, hoy por hoy, se acepta que la formación y acumulación de proteínas fl-amiloides ya sea en forma prefibrilar, difusible o como placa propiamente dicha es un factor iniciador y necesario en la patogénesis de Alzheimer la cual, a su vez, precede a la neurodegeneración. Existe tambien consenso en que el diseño de estrategias terapéuticas debe incidir en estos procesos.

En la práctica diaria de la medicina, el examen neuropsicológico y la observación clínica de síntomas como el declive cognitivo y la eliminación sistemática de otras posibles causas de dichos síntomas es el método standard y universalmente reconocido para determinar si un paciente tiene probabilidades de estar afectado por la enfermedad de Alzheimer o de estar ya en un primer estadio de la fase sintomática (síntomas mínimos de invalidez). La única forma de confirmar con total certeza estos diagnósticos es, hoy por hoy, el examen post-mortem del cerebro. En estos exámenes, el contaje sináptico es el marcador más preciso, sin embargo, la cantidad de placa amiloide depositada se correlaciona aproximadamente con la severidad de los síntomas en el momento de la muerte del paciente. Más concretamente, se ha observado que el aumento de la cantidad total

de proteina ß-amiloide 1-42 en hipocampo y en algunas regiones corticales correlaciona perfectamente con la aparición temprana de síntomas clínicos y su progresión posterior.

En este contexto, la posibilidad de obtener imágenes funcionales de la cantidad y distribución de placas amiloides podría servir como complemento importante del diagnóstico de estadios presintomáticos de la enfermedad. Además, el desarrollo de nuevas técnicas de neuroimagen in vivo de depósitos amiloides cerebrales podrían ser mucho más trascendente para la evaluación de alternativas terapéuticas. Más concretamente, ante la necesidad de ensayar agentes terapéuticos que pudieran inhibir la producción o redisolver las proteínas ß-amiloides y así aminorar o prevenir el desarrollo de la enfermedad es crucial, por ejemplo, poder tomar decisiones informadas sobre cuestiones como : qué tipo de pacientes son admitidos en ensayos clínicos, cuándo se les aplica el tratamiento y cómo se evalua el progreso de la terapia.

En una enfermedad crónica y no infecciosa como la de Alzheimer, es lógico asumir que los primeros ensayos clínicos de nuevas sustancias potencialmente capaces de modificar el curso de la enfermedad han de ser terapéuticos más que preventivos. Los resultados de estos primeros ensayos ya se han presentado en la 8a Conferencia Internacional sobre la Enfermedad de Alzheimer (Stocolmo, 20-25 julio 2002) y un resumen de los mismos ha sido recogido en la revista Science (New Alzheimer's treatments that may ease the mind, Science, 297,1260-1262).

Para que estos y otros esfuerzos no resulten baldíos es, por tanto, urgente el desarrollo de métodos sensibles y precisos que permitan valorar et progreso o la recesión de la enfermedad durante el tratamiento farmacológico de una forma objetiva y lo más cuantitativa posible.

De entre los métodos de diagnóstico por la imagen disponibles para este tipo de seguimientos las técnicas de Imagen No Invasivas con Radiotrazadores (Non-Invasive Radiotracer Imaging : NIRI) son muy adecuadas dado que permiten visualizar y cuantificar acontecimientos específicos a nivel molecular como los aquí involucrados. De estas técnicas, existen dos modalidades que proporcionan

imágenes de alta resolución, la que usa isótopos emisores de positrones como el '8F y el"C (Tomografía por Emisión de Positrones ó Positron Emission Tomography : PET) y la que usa radionúclidos emisores de fotones simples como el 99'nTc y ei'231 que permiten obtener imágenes planares o imágenes por Tomografía Computerizada de Emisión de Fotón Unico (Single Photon Emission Computerized Tomography : SPECT).

Entre otras, actualmente dos estrategias de investigación están dirigidas a conseguir un método que permita valorar el progreso de la enfermedad de Aizheimer a lo largo de un tratamiento farmacológico, pero ninguna, hasta el momento, ha corroborado su estategia en sistemas in vivo. Una de ellas consiste en la administración intravenosa de proteina ß-amiloide radioiodada (1251) la cual al atravesar la barrera hemotoencefálica (Blood Brain Barrier : BBB) puede incorporarse en la placas neuríticas del cerebro y permitir así su localización. Esta aproximación presenta varios problemas como p. e. que las proteínas son suscep- tibles de degradación, que atraviesan mal la barrera hematoencefálica, que penetran con dificultad en los tejidos y que son difíciles de producir en cantidades considerables. En este campo, los esfuerzos más importantes han ido encaminados a mejorar la permeabilidad de las proteínas íl-amiloide frente a la BBB. Una de las primeras estrategias ha consisitido en conjugar la proteina ß-amiliode a vectores proteicos para los cuales existen transportadores específicos en la BBB (Saito Y., etal ; Vector-mediated delivery of ß-amiloid peptide Ars1-40 through the blood-brain barrier and binding to Alzheimer's disease amyloid of the Atz1-40/vector complex ; Proc. Natl. Acad. Sci, U. S. A. 92 (1995) 10227- 10231). En aproximaciones más recientes estos vectores son las poliaminas naturales espermina y putrescina. Se ha observado que los conjugados del péptido radioiodado ß-amiloide (1-40) a putrescina se unen mejor que la forma no conjugada y de forma casi exclusiva a los depósitos amiloides densos de placas neuríticas en ratas. Esta unión no tiene lugar sobre los innumerables depósitos difusos de proteina H-amiioide que no están rodeados de neuritas distróficas y que tal y como sería deseable, pudieran ser indicadores de lesiones precoces (Wengenack T. M. et al ;"Targeting amyloid plaques in vivo"; Nat Biotechnol. 18 (2000) 868-872).

La otra linea de investigación principal propone el uso de colorantes con afinidad in vitro por las placa amiloides como trazadores de radiofármacos. Uno de los primeros trabajos con Chrysamina G, un colorante amiloide que penetra la BBB, ha demostrado la viabilidad de esta aproximación al teñir con tecnecio placas amiloides en distintas regiones cerebrales. Otros investigadores han intentado rediseñar colorantes como el Rojo Congo a fin de acomodar en su molécula radioisótopos como el"'Tc los cuales han demostrado ser útiles para visualizar le- siones amiloideas in vitro (Zhen W, ;"Synthesis and amyloid binding properties of rhenium complexes : preliminary progress toeard reagent for SPECT imaging of Alzheimer's disease brain"J. Med. Chem. 42 (1999) 2805-2815). Uno de los últimos intentos se ha realizado en base a un nuevo colorante fluorescente llamado BSB [trans, trans-1-bromo 2,5-bis (3-hidroxicarbonil-4-hidroxi) estiril benceno]. El BSB es capaz de unirse a placas amiloideas en ratones transgénicos pero tambien tiene afinidad por otros depósitos protéicos ricos en plegamientos H como son las neurofibrilas intraneuronales y otros cuerpos como los de Lewy que son comunes a otras enfermedades neurodegenerativas como el Parkinson (Skovronsky D. M. et al ; In vivo detection of amyloid plaques in a mouse model of Alzheimer's disease ; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 (2000) 7609-7614).

Por otra parte, la patente americana US 4 360 509 describe la utilización de quelatos radioactivos de indio y 8-hidroxiquinolina para localizar reacciones inflamatorias en animales de sangre caliente mediante tecnicas de imagen no invasivas. La solicitud internacional de patente WO 00 76966 describe derivados de rodaminas marcadas con radioisótopos que son empleados para el diagnóstico de enfermedades relacionadas con la deposición de proteína amiloide.

Existe por tanto la necesidad de la identificación y preparación de nuevos compuestos alternativos que sean útiles para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades relacionadas con la deposición de proteínas en el sistema nervioso centrai y que, además, no presenten las desventajas de los compuestos ya utilizados en el estado de la técnica.

Sumario de la invención Tras exhaustiva y laboriosa investigación, el solicitante ha preparado unos compuestos que debido a su estructura son capaces de interaccionar con las fibrilas proteicas amiloides, incluyendo aquellas que se manifiestan como placas amiloides y afectan al sistema nervioso central, y que sorprendentemente también son capaces de atravesar la barrera hematoencefálica. Dichos compuestos son, por tanto, útiles para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades relacionadas con la formación de fíbrilas proteicas amiloides y, además, no presentan los problemas de los compuestos y métodos empleados hasta ahora en el estado de la técnica como son la degradación de dichos compuestos, su baja permeabilidad ante la barrera hematoencefálica, su baja especificidad, etc. Con estos compuestos es por tanto posible efectuar un diagnóstico o seguimiento de las enfermedades referidas anteriormente en animales, animales transgénicos y, en particular, en el hombre.

Un aspecto de la presente invención consiste en el uso de los compuestos de fórmula general l fórmula I donde : X representa O, S; Y representa H o, junto con X, siendo X = O, un radical de un carbohidrato; A representa N o NR4; B representa CRs, NRs o N; D representa CR6, NR6 o N; E representa CR7, NRy o N;

con la condición de que el anillo que contiene el grupo A presente como máximo dos átomos de nitrógeno en su estructura; m, n y p representan : 0O1, dondem+n+p=2o3 ; las líneas----representan un enlace sencillo o doble ; Ri, R2, R3, R4, R5, R6 y R7 representa cada uno independientemente un isótopo radioactivo, H, halógeno o un radical que opcionalmente presenta un isótopo radioactivo estando dicho radical seleccionado de entre : Ci-Ce alquilo, OH, C,-C6 polihidroxialquil, Ci-Ce alcoxil, Ci-Ce alcoxialquil, (CH2) q- OR', donde q es 1,2 ó 3, CF3, CH2-CH2F, O-CH2-CH2F, CH2-CH2-CH2F, CN, NO2, O (CO) R', OR', SR', COOR'-SOsH, (CH2) r-COzR", (CH2) r-CO-R', donde r es 1,2 ó 3, y Rph, donde Rph representa un grupo fenol no substituido o substituido, siendo los posibles sustituyentes del grupo phenol cualquiera de los significados de R1-R7 a excepción de un grupo fenol ; R'es H o un grupo C13 alquilo ; R"es H, un grupo Ci-Ce aiquito o Ci-Ce alquiloxi ; con la condición de que uno sólo de Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X e Y sea o presente un isótopo radioactivo; en la preparación de una composición para el diagnóstico y/o seguimiento de enfermedades relacionadas con la formación de fibrilas proteicas amiloides, en particular aquellas que se manifiestan como placas amiloides y afectan al sistema nervioso central.

Un segundo aspecto de la presente invención consiste en el uso de los compuestos de fórmula general 11 fórmula II donde X representa O, S; Y representa H o, junto con X, siendo X = O, un radical de un carbohidrato;

Z representa un catión de un metal o tierra rara que puede ser o no radioactivo La línea X representa un enlace de coordinación; A representa N o NR4 ; B representa Crus, NRs o N; D representa CR6, NR6 o N; E representa CR7, NR7 o N; con la condición de que el anillo que contiene el sustituyente A presente como máximo dos átomos de nitrógeno en su estructura; m, n y p representan : 0 ó 1, donde m + n + p = 2 ó 3 ; las líneas----representan un enlace sencillo o doble ; Ri, R2, R3, R4, R5, R6 y R7 representa cada uno independientemente un isótopo radioactivo, H, halógeno o un radical que opcionalmente presenta un isótopo radioactivo estando dicho radical seleccionado de entre : C,-C6 alquilo, OH, C1-C6 polihidroxialquil, C1-C6 alcoxil, C,-C6 alcoxialquil, (CH2) q- OR', donde q es 1,2 ó 3, CF3, CH2-CH2F, O-CH2- CH2F, CH2-CH2-CH2F, CN, NO2, O (CO) R', OR', SR', COOR' -SO3H, (CH2) r-C02R", (CH2) r-CO-R', donde r es 1,2 ó 3, y Rph, donde Rph representa un grupo fenol no substituido o substituido, siendo los posibles sustituyentes del grupo phenol cualquiera de los significados de R1-R7 a excepción de un grupo fenol ; R'es H o un grupo C1-3 alquilo ; R"es H, un grupo C,-Cs alquilo o Cl-C. alquiloxi ; con la condición de que uno sólo de R,, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X, Y o Z sea o presente un isótopo radioactivo; en la preparación de una composición para el diagnóstico y/o seguimiento de enfermedades relacionadas con la formación de fibrilas proteicas amiloides, en particular aquellas que se manifiestan como placas amiloides y afectan al sistema nervioso central.

Un tercer aspecto de la presente invención consiste en el uso de los compuestos de fórmula general 111

fórmula III donde X representa O, S; Y representa H o, junto con X, siendo X = O, un radical de un carbohidrato; Z representa un catión de un metal o tierra rara que puede ser o no radioactivo La línea ######## representa un enlace de coordinación; A representa N o NR4; B representa CRs, NR5 o N; D representa CR6, NR6 o N; E representa CR7, NR7 o N; con la condición de que el anillo que contiene el sustituyente A presente como máximo dos átomos de nitrógeno en su estructura; m, n y p representan : 0 ó 1, donde m + n + p = 2 ó 3 ; las líneas----representan un enlace sencillo o doble, ; RI, R2, R3, R4, R5, R6 y R7 representa cada uno independientemente un isótopo radioactivo, H, halógeno o un radical que opcionalmente presenta un isótopo radioactivo estando dicho radical seleccionado de entre : Ci-Ce alquilo, OH, C,-C6 polihidroxialquil, C,-C6 alcoxil, C,-C6 alcoxialquil, (CH2) q- OR', donde q es 1,2 ó 3, CF3, CH2-CH2F, O-CH2-CH2F, CH2-CH2-CH2F, CN, NO2, O (CO) R', OR', SR', COOR'-SO3H, (CH2) r-COaR", (CH2) r-CO-R', donde r es 1,2 ó 3, y Rph, donde Rph representa un grupo fenol no

substituido o substituido, siendo los posibles sustituyentes del grupo phenol cualquiera de los significados de R,-R7 a excepción de un grupo fenol ; R'es H o un grupo C, 3 alquilo ; R"es H, un grupo Ci-Ce alquiio o C,-C6 alquiloxi ; con la condición de que uno sólo de Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X, Y o Z sea o presente un isótopo radioactivo, en la preparación de una composición para el diagnóstico y/o seguimiento de enfermedades relacionadas con la formación de fibrilas proteicas amiloides, en particular aquellas que se manifiestan como placas amiloides y afectan al sistema nervioso central.

En el contexto de la presente invención, por enfermedades relacionadas con la formación de fibrilas proteicas ami4oides, en particular aquellas que se manifiestan como placas amiloides y afectan al sistema nervioso central, se entienden enfermedades como Alzheimer, Parkinson, Huntington, Creutzfel-Jacob, fibrosis cística, diabetes de aparición tardía, enfermedad de las neuronas motoras, fiebre mediterránea, síndrome de Muckle-Wells, mieloma idiopático, polineuropatía amiloide, cardiomiopatía amiloide, amiloidosis sistémica senil, hemorragia hereditaria cerebral con amoloidosis, Síndrome de Down, enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, Kuru, síndrome de Gerstmann-Straussler-Schienker, carcinoma medular del tiroides, depósitos valvulares de amieloide, amiloidosis en pacientes en diálisis, miositis con cuerpos de inclusión, depósitos musculares de amieloide, anemia de Sickie Cell Parkinson, diabetes tipo 2, entre otras.

Un cuarto aspecto de la invención se refiere a compuestos que presentan las siguientes estructuras : a) Compuestos de fórmula general I fórmula I

donde : X representa O, S; Y representa H o, junto con X, siendo X = O, un radical de un carbohidrato; A representa N o NR4 ; B representa Crus, NR5 o N; D representa CR6, NR, o N; E representa CR7, NR7 o N; con la condición de que el anitlo que contiene el grupo A presente como máximo dos átomos de nitrógeno en su estructura; m, n y p representan : 0 ó 1, donde m + n + p = 2 ó 3 ; las líneas----representan un enlace sencillo o doble ; Ri, R2, R3, R4, R5, R6 y R7 representa cada uno independientemente un isótopo radioactivo, H, halógeno o un radical que opcionalmente presenta un isótopo radioactivo estando dicho radical seleccionado de entre : Cl-C6 alquilo, OH, C,-C6 polihidroxialquil, C,-C6 aicoxil, C,-C6 alcoxialquil, (CH2) q- OR', donde q es 1,2 ó 3, CF3, CH2-CH2F, O-CH2-CH2F, CH2-CH2-CH2F, CN, NO2, O (CO) R', OR', SR', COOR' -SO3H, (CH2)r-CO2R", (CH2) r-CO-R', donde r es 1,2 ó 3, y Rph, donde Rph representa un grupo fenol no substituido o substituido, siendo los posibles sustituyentes del grupo phenol cualquiera de los significados de R,-R7 a excepción de un grupo fenol ; R'es H o un grupo C1-3 alquilo ; R"es H, un grupo C1-C6 alquilo o Ci-Cg alquiloxi ; con la condición de que Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X e Y no sean todos simultáneamente H, y con la condición de que uno sólo de Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X e Y sea o presente un isótopo radioactivo; Dentro de los compuestos de fórmula I, son preferidos aquellos que cumplen la relación : m + n + p = 3 b) Compuestos de fórmula general 11

fórmula 11 donde X representa O, S; Y representa H o, junto con X, siendo X = O, un radical de un carbohidrato; Z representa un catión de un metal o tierra rara que puede ser o no radioactivo La línea t representa un enlace de coordinación; A representa N o NR4; B representa CRs, NRs o N; D representa CR6, NR6 o N; E representa CR7, NR7 o N; con la condición de que el anillo que contiene el grupo A presente como máximo dos átomos de nitrógeno en su estructura; m, n y p representan : Oó 1, donde m + n + p = 2 6 3 ; las líneas----representan un enlace sencillo o doble ; Ri, R2, R3, R4, R5, R6 y R7 representa cada uno independientemente un isótopo radioactivo, H, halógeno o un radical que opcionalmente presenta un isótopo radioactivo estando dicho radical seleccionado de entre : Ci-Ce alquilo, OH, Ci-Ce polihidroxialquil, Ci-C6 alcoxil, C,-C6 alcoxialquil, (CH2) q- OR', donde q es 1,2 ó 3, CF3, CH2-CH2F, O-CH2-CH2F, CH2-CH2-CH2F, CN, NC2, O (CO) R', OR', SR', COOR'-SO3H, (CH2) r-COzR", (CHz) r-CO-R', donde r es 1,2 ó 3, y Rph, donde Rph representa un grupo fenol no substituido o substituido, siendo los posibles sustituyentes del grupo phenol cualquiera de los significados de R1-R7 a excepción de un grupo fenol ; R'es H o un grupo C1-3 alquilo ; R"es H, un grupo C1-C6 alquilo o C1-C6 alquiloxi ;

con la condición de que Ri, R2, R3, R4, Rs, R6, R7, X e Y no sean todos simultáneamente H, y con la condición de que uno sólo de Ri, Rz, Rs, R4, R5, Rs, R7, X, Y o Z sea o presente un isótopo radioactivo; y, finalmente, c) Compuestos de fórmula general ill : fórmula 111 donde X representa O, S; Y representa H o, junto con X, siendo X = O, un radical de un carbohidrato; Z representa un catión de un metal o tierra rara que puede ser o no radioactivo La línea ######## representa un enlace de coordinación; A representa N o NR4; B representa CRs, NRs o N; D representa CR6, NR6 o N; E representa CR7, NR7 o N; con la condición de que el anillo que contiene el grupo A presente como máximo dos átomos de nitrógeno en su estructura; m, n y p representan : 0 ó 1, donde m + n + p = 2 ó 3 ; las líneas----representan un enlace sencillo o doble ;

RI, R2, R3, R4, R5, R6 y R7 representa cada uno independientemente un isótopo radioactivo, H, halógeno o un radical que opcionalmente presenta un isótopo radioactivo estando dicho radical seleccionado de entre : C1-C6 alquilo, OH, Ci-Ce polihidroxialquil, Cl-C6 alcoxil, C1-C6 alcoxialquil, (CH2) q- OR', donde q es 1,2 ó 3, CF3, CH2-CH2F, O-CH2-CH2F, CH2-CH2-CH2F, CN, NO2, O (CO) R', OR', SR', COOR' -SO3H, (CH2)r-CO2R'', (CH2)r-CO-R', donde r es 1,2 ó 3, y Rph, donde Rph representa un grupo fenol no substituido o substituido, siendo los posibles sustituyentes del grupo phenol cualquiera de los significados de R1-R7 a excepción de un grupo fenol ; R'es H o un grupo C1-3 alquilo ; R"es H, un grupo C1-C6 alquilo o Cl-C, alquiloxi ; con la condición de que Rl, R2, R3, R4, Rss R6, R7, X e Y no sean todos simultáneamente H, y con la condición de que uno sólo de R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X, Y o Z sea o presente un isótopo radioactivo; y con la condición de que cuando A es N, B, D y E son todos CH, X es O, y m, n y p son todos 1, entonces R1, R2 y R3 no son todos H.

Compuestos preferidos para ser empleados en el diagnóstico y seguimiento de enfermedades relacionadas con la formación de fibrilas proteicas amiloides se seieccionan de entre los siguientes : a) Compuestos según la fórmula general 1 : Análogos con yodo radioactivo.

5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina 5-[123I]yodo-7-yodo-8-hidroxiquinolina 5-yodo-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina

5-[124I]yodo-7-yodo-8-hidroxiquinolina 5-yodo-7- ['241] yodo-8-hidroxiquinolina Análogos con fluor radioactivo.

5-cloro-7-[18F]fluor-8-hidroxiquinolina 5-[18F]fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Análogos con carbono radioactivo.

5-cloro-7-yodo-8- [" C] metoxiquinolina Glucurónidos.

Glucurónido de 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina Glucurónido de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Glucurónido de 5-cloro-7-[18F]fluor-8-hidroxiquinolina Glucurónido de 5- [8F] fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Glucurónido de 5-cloro-7-yodo-8- ["C] metoxiquinolina Análoqos con un solo átomo de halógeno.

5-[123I]-8-hidroxiquinolina 5-[124I]-8-hidroxiquinolina 7-[123I]-8-hidroxiquinolina 7-[124I]-8-hidroxiquinolina 5- [$F]-8-hidroxiquinolina 5-[18F]-8-hidroxiquinolina b) Compuestos según la fórmula general li : Comotejos metálicos con 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Fe (II) de 5-cloro-7- ['231] yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Cu (ll) de 5-cloro-7-['231] yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Zn (II) de 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Mn (II) de 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina

Compleios metálicos con 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Fe (II) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Cu (II) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Zn (11) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Mn (tt) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Compleios metálicos con 5-cloro-7-[18F]fluor-8-hidroxiquinolina Complejo de Fe (II) de 5-cloro-7- ['8F] fluor-8-hidroxiquinolína Complejo de Cu (II) de 5-cloro-7-[18F]fluor-8-hidroxiquinolina Complejo de Zn (ll) de 5-cioro-7- [8F] fluor-8-hidroxiquinolina Complejo de Mn (II) de 5-cloro-7- [8F] fluor-8-hidroxiquinolina Complejos metálicos con 5-[18F]fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Fe (II) de 5-[18F]fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Cu (II) de 5- [$F] fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Zn (II) de 5-[18F]fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de Mn (tf) de 5- [$F] fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Compleios metálicos con 5-cloro-7-yodo-8-[11C]metoxiquinolina Complejo de Fe (II) de 5-cloro-7-yodo-8-[11C]metoxiquinolina Complejo de Cu (II) de 5-cloro-7-yodo-8- ["C] metoxiquinolina Complejo de Zn ( de 5-cloro-7-yodo-8- ["C] metoxiquinolina Complejo de Mn (II) de 5-cloro-7-yodo-8- ["C] metoxiquinolina Compleios metálicos con 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de"mTc de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de 111In de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de 21'Tl de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de"Ga de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de 68Ga de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de 67Cu de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo de 64Cu de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina

c) Compuestos según la fórmula general III : Complejos metálicos bisquelatos con 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Fe (11) de 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Cu (II) de 5-cloro-7- yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Zn (II) de 5-cloro-7- [123I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Mn (II) de 5-cloro-7-[123I]yodo-8-hidroxiquinolina Compleios metálicos bisquelatos con 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Fe (II) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Cu (11) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Zn (II) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Mn (II) de 5-cloro-7-[124I]yodo-8-hidroxiquinolina Complejos metálicos bisquelatos con 5-cloro-7-[18F]fluor-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Fe (II) de 5-cloro-7- fluor-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Cu (II) de 5-cloro-7- fluor-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Zn (II) de 5-cloro-7-[18F]fluor-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Mn (II) de 5-cloro-7- ['FF fluor-8-hidroxiquinolina Compleios metálicos bisquelatos con 5-[18F]fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Fe (II) de 5- fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Cu (11) de 5-[18F]fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Zn (11) de 5- fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de Mn (II) de 5-[18F]fluor-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejos metálicos bisquelatos con 5-cloro-7-yodo-8-[11C]metoxiquinolina Complejo bisquelato de Fe (II) de 5-cloro-7-yodo-8- ["C] metoxiquinolina Complejo bisquelato de Cu (II) de 5-cloro-7-yodo-8- metoxiquinolina Complejo bisquelato de Zn (II) de 5-cloro-7-yodo-8- ["C] metoxiquinolina Complejo bisquelato de Mn (11) de 5-cloro-7-yodo-8- ["C] metoxiquinolina Compleios metálicos bisquelatos con 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina

Complejo bisquelato de 99mTc de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de"'In de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de 23'TI de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de 67Ga de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de 68Ga de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de 67Cu de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Complejo bisquelato de 64Cu de 5-cloro-7-yodo-8-hidroxiquinolina Los compuestos de la presente invención se preparan según métodos conocidos en el estado de la técnica. Así : Los compuestos de fórmula I se prepararan según un método que comprende hacer reaccionar un derivado de quinolina : a) con un reactivio de halogenación electrofílica aromática que incorpore un átomo de halógeno radiactivo, o bien; b) con un derivado halogenado radioactivo para efectuar una reacción de sustitución nucleofílica aromática.

Los compuestos de fórmula 11 se preparan según un método que comprende hacer reaccionar un derivado de quinolina : a) con un catión de metal o tierra rara, o bien, b) con un isótopo radioactivo de estos elementos. de tal forma que el catión de metal o tierra rara o el isótopo radioactivo de estos elementos se encuentre en su estado de oxidación adecuado para dar lugar al correspondiente producto de quelación de la fórmula II.

Los compuestos de fórmula 111 se preparan según métodos convencionales conocidos en el estado de la técnica. Los métodos preferidos comprenden hacer reaccionar un derivado de quinolina con : a) un catión de metal o tierra rara, o bien, b) un isótopo radioactivo de estos elementos en su estado de oxidación adecuado para dar lugar al correspondiente producto de quelación definido en la fórmula 111.

Ejemplos preparativos EJEMPLO 1 : Preparación de 5-cloro-8-hidroxi-7-f'2slvodoquinolina por intercambio isotópico.

Se introduce una disolución de 1-3 mCi de Na1251 en una balón de 10 mL y se evapora sequedad a 100°C bajo corriente de nitrógeno. Se añade la correspondiente 7-yodoquinolina (100 mg) disuelta en 2 mL de un disolvente apropriado. El balón se une a un condensador de reflujo y se aumenta la temperatura del baño. La mezcla de reacción se agita bajo atmósfera de nitrógeno durante un tiempo determinado y se deja enfriar. Se añade agua y el producto que se recoge por filtración se lava bien con agua. Se recristaliza y la pureza se establece mediante radiocromatografía en capa fina.

EJEMPLO 2 : Preparación de 5-cloro-8-hidroxi-7-trimetilestannilquinolina.

A una mezcla de 0.88 mmol de yododerivado (5-cloro-8-hidroxi-7-yodoquinolina) y tetrakis-trifenilfosfina paladio (0) (0.05g) en 12 mL de 1,4-dioxano se le añade hexametildiestaño (1.31 mmol) y la mezcla se calienta a reflujo bajo atmósfera de nitrógeno durant 6.5 h. Tras enfriar, el crudo de reacción se filtra y el material insoluble se lava con acetato de etilo. Se elimina el disolvente a presión reducida obteniéndose un aceite amarillento que se somete a cromatografía en columna de silica gel para dar un sólido con un 65% de rendimiento.

EJEMPLO 3 : Síntesis de 5-cloro-8-hidroxi-7-'2311vodoquinolina a partir de derivado orqanoestánnico empleando cloramina T.

A una disolución del derivado trimetilestánnico descrito en el ejemplo 2 (200-300 ug) en 300 uL de etanol se le añade [1231] yoduro sódico (2-20 mCi) seguido de cloramina T (100 ug) en 1N HCI (100 uL). Después de 5 min de agitación la reacción se para con una disolución acuosa de metabisulfito (50 mg/mL, 100 uL) y se inyecta en la RP-HPLC. Se recoge la fracción del derivado radioyodado que se obtiene con un 98% de pureza radioquímica.

EJEMPLO 4 : Síntesis de 5-cloro-8-hidroxi-7-j'3'llyodoquinolina a partir del derivado organoestánnico empleando agua oxigenada.

El derivado radioyodado se obtiene a partir del derivado tributilestánnico preparado de forma análoga al organoestánnico descrito en el ejemplo 2 por suspensión en metanol y tratamiento con Nai y peróxido de hidrógeno a temperatura ambiente, tal y como se describe a continuación. La reacción tiene lugar por adición de 50 uL de H202 (3% p/v) a una mezcla formada por 50 uL del derivado de tributilestaño (100 ug/50 uL EtOH), 1.5 mCi de [1251] yoduro sódico (actividad específica 2.200 Ci/mmol) y 100 uL de 1 N HCI en un vial sellado. Se agita la reacción a temperatura ambiente durante 10 min y se finaliza tras añadir 100 uL de una disolución saturada de NaHSO3. Se neutraliza con bicarbonato sódico y se extrae con acetato de etilo.

Se seca el extracto pasando la disolución por una columna de Na2SO4 anhidro y se evapora el disolvente mediante una corriente de nitrógeno. El crudo se purifica mediante HPLC obteniéndose una pureza radioquímica superior al 85%. Las fracciones se lleva a sequedad y el residuo se vuelve a extraer con EtOAc. Los diferentes extractos de EtOAc se concentran bajo atmósfera de nitrógeno hasta sequedad. El residuo se disuelve en EtOH. La pureza radioquímica de ! producto final es superior al 98% (por HPLC) EJEMPLO 5 : Síntesis de 5-cloro-8-hidroxi-7- ('3'llyodoquinolina empleando cloramina T.

A un vial que contiene 5-cloro-8-hidroxiquinolina se añade 1.0 mL de una disolución tampón de 0.02M KH2PO4 (pH 4.8). La mezcla se calienta a 40°C y se agita para

obtener una disolución transparente que se enfría a temperatura ambiente. Se le añade 10 mL de una disolución 0.1N NaOH que contiene 10.0 mCi de [t311] ioduro sódico y el vial se cierra con un tapón de teflón. Se añade una disolución de 7.5 ug de cloramina T (Sal sódica de N-cloro-p-toluensulfonamida) en 30 uL de la disolución tampón de 0.02M KH2PO4. Se agita mecánicamente a temperatura ambiente durante 5 min y luego manualmente durante unos segundos. Tras continuar la agitación durante cinco minutos más se añade una disolución acuosa de NaHSO3 (1.4 mg/mL) y se analiza la mezcla de reacción por cromatografía en capa fina. La disolución se hace pasar por una columna de intercambio aniónico para eliminar el radioyoduro libre.

EJEMPLO 6 : Síntesis de 5-cloro-8-hidroxi-7-f'z511yodoquinolina empleando cloramina T.

Una disolución de 30 nmol de 5-cioro-8-hidroxiquinolina en 30 uL de etanol se añade a 10 mCi de [1251] yoduro sódico (4.5 ug, 330 Ci/mmol, 30 nmol) en 0. 001 N NaOH (30 uL). Se añade una disolución de cloramina T (13 ug, 50 nmol) en agua (10 uL). La mezcla se calienta a 60°C durante 45 min. Se añaden 100 uL de 0. 1N NH4CI y se extrae con éter. El resultado de la reacción se analiza por cromatografia en capa fina (Gel de sílice, Merck F254) en el eluente apropiado y se procede como en el ejemplo anterior.

EJEMPLO 7 : Síntesis de 5-cloro-8-hidroxi-7-[131I]yodoquinolina empleando YodogenTM.

A un vial de 5 mL se añaden 100 uL de una disolución de Yodogen (1,3, 4,6- tetracloro-3-alfa, 6-alfa-difenilglicolurilo) (1.0 mg/mL en CH2CI2). El diclorometano se evapora del vial gracias a una corriente de nitrógeno. Se añade al vial una disolución de 5-cloro-8-hidroxiquinolina (0.5 mg/0.5 mL) en 0. 02M KH2PO4, pH 4.8, se cierra el vial con un tapón de teflón y se introduce mediante jeringa una disolución que contiene aproximadamente 10 mCi de ['3'I]-yoduro sódico. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 30 min. Por cromatografía en

capa fina en gel de sílice utilizando unos eluyentes apropiados se observa una pureza radioquímica superior al 99%.

EJEMPLO 8 : Preparación de 5-cloro-8-hidroxi-7-f'2511yodoquinolina empleando Yodo-beads.

Se lavan previamente los Yodo-beads con una disolución tampón 0. 1 M de fosfato sódico pH=6.5. Se añade la cantidad necesaria de Yodo-beads a una disolución de Na125l en solución tampón a una concentración de 1mCi por cada 100 ug de producto a yodar. A continuación se adiciona a ésta entre 5 y 500 ug del derivado fenólico disuelto en la misma disolución tampón. Se deja reaccionar entre 2 y 15 min a temperatura ambiente. Se para la reacción separando los Yodo-beads de la disolución por decantación. Se lavan los Yodo-beads con la disolución tampón con el fin de recuperar todo el derivado radioyodado.

EJEMPLO 9 : Síntesis de 5-cloro-8-hidroxi-7-[12311yodoquinolina empleando ácido peracético.

En un vial se mezclan 0.19 umol del precursor 5-cloro-8-hidroxiquinolina disueltos en 50 uL de etanol, con un volumen conocido de una disolución tamponada a pH 2 que sea dos veces igual al volumen de la disolución básica de ['231] yoduro comercial. Esta disolución se introduce en el vial que contiene el yoduro radioactivo, seguido de 50 uL de una disolución al 3.2% de ácido peracético (obtenida a partir de una disolución stock al 32% p/v). El vial sellado se calienta a 65°C durante 12 min. Se deja enfriar y se añade una disolución acuosa de NaHSO3. Se procede a purificar y determinar el rendimiento radioquímico por métodos cromatográficos como los descritos en anteriores ejemplos.

EJEMPLO 10 : Preparación de 5-cloro-7-f'BFlfluoro-8-hidroxiauinolina por radiofluoración directa.

La radiofluoración directa de 100 umol dei derivado fenólico 5-cloro-8- hidroxiquinolina se realiza disolviendo el compuesto en una mezcla de ácido

trifluoroacético y acido acético glacial (1 : 1) a través de la cual se burburjea hipofluorito de acetilo ( ['8F] CH3-COOF) recién preparado. Se evapora el disolvente y el residuo se purifica mediante HPLC.

EJEMPLO 11 : Síntesis de 5-'gFlfluoro-8-hidroxi-guinolina a partir de 5-fluoro-8-hidroxiquinolina por intercambio isotópico El fluoruro radioactivo ['8F] se transfiere a un vial de reacción de borosilicato de 5mL y se seca azeotrópicamente con acetonitrilo en presencia de 4.0 mg of K2CO3 y 14.6 mg of Kryptofix 2.2. 2 @. Al vial que contiene el fluoruro radiactivo seco, K2CO3 y Kryptofix 2.2. 2#, se añade el derivado fluorado precursor disuelto en 0.5 mL de DMSO y se procede a la reacción de intercambio isotópico calentando a 110,130 y 160°C durante 0-30 min para optimizar la reacción. La purificación del derivado radiofluorado se realiza mediante HPLC en fase reversa. Se recogen las fracciones correspondientes y se concentran a presión reducida.

EJEMPLO 12 : Preparación de 5-cloro-8-hidroxi-7-U'2311vodoquinolina a partir de 5-cloro-7-fluoro-8- hidroxiguinolina.

El producto de partida disuelto en 600 uL de etanol se añade a 100 uL de una disolución A (que contiene 200 umol de SnSO4, 2 mmol de ácido gentisico, 2 mmol de ácido cítrico monohidrato 10 uL de acido acético glacial disueltos en ácido acético al 10%), 25 uL de una disolución B (que contiene 400 umol de CuS04. 5H20 disueltos en 10 mL de agua) y 65 uL de ácido acético glacial. El vial se coloca en un baño de ultrasonidos durante 15 min, y se añade 10 uL de Na'231 (aprox. 1mCi ).

Se hace pasar N2 por la mezcla y se calienta a 60°C durant 1 h. Se deja enfriar a temperatura ambiente y el crudo de reacción se purifica mediante HPLC.

EJEMPLO 13 : Preparación de 5-LgFlfluoro-8-hidroxiquinolina por sustitución nucleofílica aromática.

Se hace reaccionar el halo-o nitroderivado correspondiente con ion fluor-18 por sustitución nucleofílica aromática empleando el complejo [18F] FK-K222 en DMSO y calentando de la manera convencional a 150-180°C durante 10 min o bien activando la mezcla de reacción con microondas de 100 Watt durante 1-2.5 min. La caracterización y aislamiento del producto radiomarcado se efectua como en el ejemplo 11.

EJEMPLO 14 : Síntesis de 5-cloro-7-[18F]fluoro-8-hidroxiquinolina a partir del precursor desproteaido.

El agente de radiofiuoración electrofílica ["'FICH3COOF, preparado a partir de 100 umol [18F]F2, o [18F]OF2 (100 umol), se hace burbujear en una disolución (101 umol) en 10 mL de Freon-11 (CFCl3) del derivado trimetil estánnico 5-cloro-8-hidroxi-7- trimetilestannil-quinolina o 5-cloro-8-hidroxi-7-tributilestannilquinolina a temperatura ambiente durante 10 min. Se evapora el disolvente a 50°C con una corriente de nitrógeno y el residuo se disuelve en 10 mL de cloruro de metileno y se transfiere a una columna cromatográfica empaquetada con Na2S203 (2.5 cm) y gel de sílice (9.5 cm) que ha sido previamente equilibrada con éter. Se eluye con éter. Se evapora el disolvente y se purifica mediante HPLC semi-preparatíva.

EJEMPLO 15 : Síntesis de 5-cloro-7-[18F]fluoro-8-hidroxiquinolina a partir del precursor protegido.

El agente de radiofluoración electrofílica [18F] CH3COOF, preparado a partir de 100 umol [18F] F2, o [18F] OF2 (100 umol), se hace burbujear en una disolución (101 umol) en 10 mL de Freon-11 (CFCI3) del derivado trimetil estánnico 5-cloro-8-t-

butoxicarboniloxi-7-trimetilestannilquinolina o 5-cloro-8-t-butoxicarboniloxi-7- tributilestannilquinolina a temperatura ambiente durante 10 min. Se evapora el disolvente a 50°C con una corriente de nitrógeno y el residuo se disuelve en 10 mL de cloruro de metileno y se transfiere a una columna cromatográfica empaquetada con Na2S203 (2.5 cm) y gel de sílice (9.5 cm) que ha sido previamente equilibrada con éter. Se eluye con éter. Se evapora el disolvente y el derivado se hidroliza en presencia de una disolución al 48% de ácido bromhídrico a 130°C durante 10 min.

Tras enfriar, la mezcla de reacción se neutraliza parcialmente con una disolución 3N de NaOH y se purifica mediante HPLC.

EJEMPLO 16 : Preparación de 5-cloro-7-f'aF1fluoro-8-hidroxiquinolina por sustitución de trimetilamonio por fluor.

A una disolución de 2.1 mmol del fluoroderivado precursor en una mezcla de 30 mL de DMSO y 10 mL de agua a 10°C se añade 260 mg (1.5 equiv) de HNMe2. HCI y 430 mg (1.5 equiv) de K2CO3. Después de agitar a 10°C durante 10 min, se calienta a reflujo durante 24h y se deja enfriar, se diluye con agua (50 mL) y el producto se extrae con éter. Tras el procesado de la reacción, el residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice. En un segundo paso de reacción se procede del siguiente modo : A una disolución de 0.65 mmol del dimetil amino derivado en 2 mL de tolueno se le añade 1.45 equiv. de trifluorometanosulfonato de metilo. La disolución se agita durante 1h a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno y después se diluye con 100 mL de agua. El producto se extrae con diclorometano, se evapora el disolvente y se tritura con éter dietílico. En una última etapa, unos 2.0-3. 5 mg (6.5-11. 3 umol) del trifluorometanosulfonato de metilo derivado se disuelven en 600 uL de DMSO recién destilado y se añaden directamente al tubo que contiene el complejo anhidro de K ['8F] F-K222. El tubo se calienta en un bloque calefactor a 145-150°C sin agitación durante dos minutos o se coloca en un horno microondas de 100 W durante 1 min. La mezcla de reacción se deja enfriar y se diluye con 3 mL de agua y se filtra a través de un cartucho C18 Sep Pack. El cartucho se lava con 3.0 mL de agua y se seca parcialmente durante

0.5 min aplicando una corriente de nitrógeno. Ei derivado radiofluorado se eluye del cartucho con DCM (3 mL) seguido de dos lavados más de 1 mL cada uno.

EJEMPLO 17 : Sintesis de glicoconiugado de clioquinol, sal sódica de 5-cloro-8-il-7-yodo-quinolin- beta-D-ácido glucurónico.

Se agita una mezcla de 5-cloro-8-hidroxi-7-yodoquinolina (50 mg, 0.164 mmol), 1- bromo-1-desoxi-2, 3, 4-tri-O-acetil-D-glucopiranosido uronato de metilo (65 mg, 0.164 mmol), CaSO4. H2O (35 mg) en piridina (1.5 mL) a temperatura ambiente durante unos minutos. Se añade Ag2CO3 (35 mg) a la reacción y la suspensión se agita a temperatura ambiente durante 20 h tapado de la luz. Una vez finalizada la reacción y tras aislar el producto se procede a la desprotección de los grupos protectores de los hidroxilos utilizando una disolución 1N de NaOH. La reacción se diluye con diclorometano, se filtra y el disolvente se elimina a presión reducida. El glicoconjugado se purifica mediante cromatografia en columna de tipo flash. (TLC : CH2CI2/MeOH 99/1, eluent : CH2CI2/MeOH 99.5/0. 5). NMR (400 MHz, CDCI3) 2.04 (s, 3H, Ac), 2.09 (s, 3H, Ac), 2.13 (s, 3H, Ac), 3.68 (s, 3H, Me), 3.99 (d, 1H, 5'H), 5.40-5. 52 (m, 3H, 2',-3',-4'-H), 6.29 (d, 1H, 1'-H), 7.56 (m, 1H, 3H), 7.99 (s, 1H, 6- H), 8.52 (d, 1H, 4-H), 8.93 (s, 1 H, 2-H).

EJEMPLO 18 : Radioyodación de glucurónido de clioquinol con YodogenTM : Síntesis del ofucurónido de 5-cloro-8-hidroxi-7-[131I]yodoquinolina.

Se disuelven 10 mg de YodogenTM en 2 mL de diclorometano en un tubo que contiene pequeños cristales para aumentar el contacto de la disolución con el Yodogen (1,3, 4, 6,-tetracloro-3a, 6α-difenilglicolurilo). Se evapora el disolvente y se observa un film blanco en el interior del tubo y en los pequeños cristales. Se añade 1mL de una disolución acuosa de correspondiente glucurónido (4 mg/mL) y después 7. 4xi0' Bq (2mCi) de Na131I. La disolución se mantiene a temperatura ambiente en agitación durante 10 min. La reacción se sigue por TLC y se determina

el Rf del producto marcado por radiocromatografía. Se observa que se ha obtenido un producto único radioyodado con un rendimiento radiactivo entre el 90 y 95 %.

EJEMPLO 19 : Radioyodación de qlucurónido de clioquinol con cloramina T : Síntesis del qlucurónido de 5-cloro-8-hidroxi-7-[125I]yodoquinolina.

Se prepara una disolución de 4 mg/mL de cloramina T en 50 mM de fosfato disódico, a pH 7. A 2 uL de una disolución 0.5 mCi/uL de Na1251 se le añade 25 uL de una disolución standard de glicoconjugado en 50 uM de fosfato sódico a pH 7.

Se cierra el vial y se le añade 25 uL de la disolución de cloramina T y se agita durante 30 seg. Una vez terminada la reacción se añade 100 uL de 12.6 mM de metabisulfito sódico. Se agita durante 10 seg. Se purifica el producto de reacción por filtración sobre gel utilizando una columna de Sephadex G-25 o G-50.

EJEMPLO 20 : Radioyodación del glucurónido de clioquinol con Yodo-beads : Síntesis del qlucurónido de 5-cioro-8-hidroxi-7-fl2l llyodoquinolína.

A 2 uL de una disolución 0.5 mCi/uL de Na 125I se le añade 25 uL de una disolución de glicoconjugado en 50 uM de fosfato sódico a pH 7. Se cierra el vial y se le añade unas bolitas de Yodo-beads y se agita durante 30 seg. Una vez terminada la reacción se separa el polímero de sobrenadante. A esta disolución se le añade 100 uL de 12.6 mM de metabisulfito sódico. Se agita durante 10 seg. Se purifica el producto de reacción por filtración sobre gel utilizando una columna de Sephadex G-25 o G-50.

EJEMPLO 21 : Síntesis del complejo de [111In] indio de 5,7-dicloro-8-hidroxiquinolina.

El cloruro de ["'In] indio trihidrato (111InCl3. 3H20, 1.37 g, 5.0 mmol) y la 5, 7-dicloro- 8-hidroxi-quinolina (2.14 g, 10 mmol) se disuelven en etanol (200 mL), la disolución se concentra a sequedad a presión reducida. El crudo amarillo obtenido se

recristaliza de etanol tras la adición de agua para dar el complejo de [111In] indio de la 5, 7-dicloro-8-hidroxi-quinolina.

EJEMPLO 22 : Síntesis de) quelato de (6'Gal qalio de la 8-hidroxiauinolina.

El quelato de [57Ga] galio se prepara añadiendo el tricloruro de [67Ga] galio (67GaCl3) disuelto en una disolución 0.05M de HCI a una disolución acuosa 7 mM de 8- hidroxiquinolina a pH 3.5. Tras unos 25 min en agitación el pH se sube hasta 6. La extracción del producto con cloroformo conduce al quelato que se obtiene con un 90% de rendimiento.

EJEMPLO 23 : Preparación del quelato de [99mTc] tecnecio de la 8-hidroxiquinolina.

Se disuelve la 8-hidroxiquinolína (0.51 mmoles) en 3 mL de una disolución 0. 1N de NaOH y se ajusta el pH de la disolución a pH=3.5 con 1 N HCI. Se añade 0.3 mL de una disolución (20 mg, 0.11 mmol en 10 mL de 1 N HCI) de SnCI2 y se ajusta de nuevo el pH con 0.1 N NaOH. Se agita durante 5 min y se añaden 80 uCi de tecnecio-99m en forma de pertecnetato sódico. El quelato se obtiene por extracción con cloroformo con un rendimiento superior al 90%.

EJEMPLO 24 : Síntesis del quelato de _@14CU, cobre de la 8-hidroxiauinolina.

Una disolución de cloruro de [64Cu] cobre (II) (64CuC12) se diluye 10 veces con una disolución tampón de acetato amónico 0.1 M de pH 5.5. El acetato de [64Cu] cobre se añade a 8-hidroxi-quinolina y se ajusta el volumen final a 1. 0-1. 5 mL con la disolución tampón. Tras incubar a temperatura ambiente durante 45 min. La

extracción con cloroformo del producto derivado de 64Cu conduce al quelato que se obtiene con un 90% de rendimiento.

EJEMPLO 25 : Preparación del queato de [67Cu] cobre de la 8-hidroxiquinolina.

Una alíquota de la solución de partida (67Cu2+ / HCl) se evapora a sequedad bajo corriente de nitrógeno y se reconstituye con disolución tamponada 0.25 N de acetato (pH=5.5). El ligando (0.2 mg) se disuelve en DMSO (1mg/10 uL) y se añade a 50 uL de la disolución de acetato de [57Cul cobre (50 uL). Tras adicionar 50uL de etanol, el derivado de [67Cu] cobre se filtra a través de una membrana de politetrafluoroetileno (PFTE). La pureza radioquímica se determina por cromatografía en capa fina en placas de gel de sílice eluyendo con etanol.

EJEMPLO 26 : Síntesis de quelatos de cobre de 5-cloro-8-hidroxi-7-[125I]yodoquinolina.

METODO A : Quelación de 5-cloro-8-hidroxi-7-[125I]yodoquinolina.

Una disolución de cloruro de cobre (li) se diluye 10 veces con acetato amónico 0.1 M de pH 5.5. Esta se añade a 5-cloro-8-hidroxi-7- ['z51] yodoquinolina y se ajusta el volumen final a 1.0-1. 5 mL con disolución tampón de acetato amónico 0. 1M a pH=5.5. Tras incubar a temperatura ambiente durante 45 min, la extracción con cloroformo de la disolución conduce al quelato que se obtiene con un 90% de rendimiento.

METODO B : Radioyodación del quelato de cobre de 5-cloro-8-hidroxiguinolina.

Una disolución de 30 nmol de quelato de cobre de 5-cloro-8-hidroxiquinolina en 30 uL de etanol se añade a 10 mCi de [12511 yoduro sódico (4.5 ug, 330 Ci/mmol, 30 nmol) en 0. 001 N NaOH (30 uL). Se añade una disolución de cloramina T (13 ug, 50 nmol). en agua (10 uL). La mezcla se calienta a 60°C durante 45 min. Se añaden

100 uL de 0. 1 N NH4CI y se extrae con éter. El producto se analiza por cromatografia en capa fina (Gel de sílice, Merck F254) en el eluente apropiado.

EJEMPLO 27 : Síntesis de quelatos de zinc de 5-cloro-8-hidroxi-7-[125I]yodoquinolina.

METODO A : Quelación de 5-cloro-8-hidroxi-7-[125I]yodoquinolina.

Una suspensión del derivado 5-cloro-8-hidroxi-7-[125I]yodoquinolina (60 mmol) en metanol se le añade Zn (OAc) 2. 2H20 (60 mmol) y la mezcla se agita durante 19 h a temperatura ambiente. El producto se filtra y se lava con metanol seguido de éter de petróleo y se deja secar en desecador METODO B Radioyodación del quelato de zinc de 5-cloro-8-hidroxiquinolina.

Una disolución de quelato de zinc de 5-cloro-8-hidroxiquinolina en 30 uL de etanol se añade a 10 mCi de [1251] yoduro sódico (4.5 ug, 330 Cilmmol, 30 nmol) en 0. 001N NaOH (30 uL). Se añade una disolución de cloramina T (13 ug, 50 nmol) en agua (10 uL). La mezcla se calienta a 60°C durante 45 min. Se añaden 100 uL de 0. 1 N NH4CI y se extrae con éter. El producto de la reacción se analiza por cromatografia en capa fina (Gel de sílice, Merck F254) en el eluente apropiado.

EJEMPLO 28 : Radiovodación de quelato de manganeso (II) de 5-cloro-8-hidroxiquinolina.

Una disolución de quelato de manganeso (II) de 5-cloro-8-hidroxiquinolina en 30 uL de etanol se añade a 10 mCi de [1251] yoduro sódico (4.5 ug, 330 Ci/mmol, 30 nmol) en 0. 001N NaOH (30 uL). Se añade a continuación una disolución de cloramina-T (13 ug, 50 nmol) en agua (10 uL). La mezcla se calienta a 60°C durante 45 min.

Tras adición de 100 uL de 0. 1N NH4Cl se extrae con éter. El producto obtenido se analiza por cromatografia en capa fina (Gel de sílice, Merck F254) en el eluente apropiado.

EJEMPLO 29 : Radioyodación del quelato de hierro (II) de 5-cloro-8-hidroxiquinolina.

Una disolución de quelato de hierro (II) de 5-cloro-8-hidroxiquinolina en 30 uL de etanol se añade a 10 mCi de [1251] yoduro sódico (4. 5 ug, 330 Cilmmol, 30 nmol) en 0. 001 N NaOH (30 uL). Tras adicionar a la mezcla una disolución de cloramina T (13 ug, 50 nmol) en agua (10 uL), se calienta a 60°C durante 45 min. La reacción se procesa añadiendo 100 uL de 0. 1N NH4Cl y extrayendo con éter. El seguimiento de la reacción se realiza por cromatografia en capa fina (Gel de sílice, Merck F254) en el eluente apropiado.

Ejemplos de actividad como marcador biológico EJEMPLO 30 : Autoradiografía quantitativa en ratones transqénicos v en ratones control.

Se inyecta el derivado radioactivo 5-cloro-8-hidroxi-7- ['231] yodoquinolina a ratones transgénicos (Tg2576) y ratones control vía la vena yugular bajo anestesia utilizando una jeringa de 30 g. Se examina una serie de controles y de ratones transgénicos. Después de 2,4, 6 h de la inyección intravenosa, se extraen los cerebros de cada ratón, se enfrían rápidamente con nieve carbónica y se seccionan utilizando un aparato Mokron HM 505E cryostat colocandolos en láminas de vidrio y se secan a temperatura ambiente. Para la autoradiografía en film las láminas se colocan en un densitómetro óptico MICROM obteniéndose imágenes en escala de grises de la distribución de radiofármaco en los cortes histológicos. La densidad óptica medida se expresa como porcentaje (%) de máximo. Se obtuvieron imágenes con una optima detección de placas amiloides del cerebro de los ratones.

EJEMPLO 31 : tmáoenes de microPET de los ratones transaénicos.

Todos los experimentos animales se hicieron de acuerdo al protocolo de animales establecido. Se anestesiaron los ratones transgénicos (Tg2576) via inyección intravenosa con una solución de 40 uL de quetamina y xilazina (4 : 1) antes de la inyección del trazador radiomarcado con 18F : 5- [F] f ! uoro- 8-hidroxi- 7-yodoquinolina. Los ratones se colocaron en posición supina y fueron escaneados utilizando el microPET. Un estudio dinámico de microPET se realizó utilizando 15 planos y 15 a 16 marcos (secuencia dinámica : 6x 30 s, 4x 1 min, 2x5 min, 2x 10 min, y 1-2 x 20 min) para un tiempo de adquisición total de 55-77 min. Las imágenes se reconstruyeron utilizando los algoritmos apropiados (Filter-back projection algorithm) y una frecuencia de corte de 0.5. Las imágenes se reconstruyeron mediante iteración filtrada resultando en una resolución de imagen de 1.8 mm y una resolución volumétrica de aproximadamente 6 mm3.

Los planos transversales fueron reorientados para obtener las secciones coronales y axiales del cerebro de los ratones. La captación regional se expresa en actividad por gramo de tejido. Las imágenes mostraron una detección adecuada de las placas amiloides del cerebro de los ratones.

EJEMPLO 32 : Imágenes SPECT de ratones transqénicos.

El estudio se realizó utilizando ratones transgénicos (Tg2576) en grupos de 5 animales para cada valor de tiempo. Los trazadores (con radionúclidos detectables via SPECT) (1-5 uCi) disueltos 100 ul de PBS o en el disolvente apropiado fueron inyectados via la vena de la cola.

Se obtuvieron imágenes SPECT tras 4.5 h de la administración de trazador 5-cloro-8-hidroxi-7- ['231] yodoquinolina mediante una cámara de doble cabezal (MULT) SPECT H, Siemens Medical Systems) equipada con colimadores paralelos de alta resolución para bajas energías, utilizando una ventana de energía centrada en la energía del fotopico del radionúclido correspondiente (159KeV para 1231).

Se utilizaron fuentes de 57Co colocadas en la cabeza del animal para facilitar la reconstrucción mediante referencias anatómicas. Se obtuvieron 120 proyecciones

en un giro de 360 grados adquiridas en una matriz 64x64. Se realizan dos adquisiciones simultáneas, una utilizando una ventana del 20% de la energía centrada a 159 KeV para el 1231 y otra de un 4% de la energía centrada a 122 KeV para los marcadores de 57Co. El tiempo total de exploración fue de alrededor de 40 minutos. Las imágenes de SPECT se reconstruyeron utilizando un algoritmo de retroproyección filtrada. La correción de atenuación se realizó utilizando el algoritmo de Chang.

El análisis semicuantitativo de la captación se realizó comparando las cuentas promediolpixel en la región de interés con las cuentas promediolpixel de regiones control. Los resultados se compararon con los obtenidos en las macroautoradiografías. Las imágenes pusieron en evidencia la distribución de las placas amiloides en el cerebro de los ratones.