COMPOSITION COSMETIQUECOMPRENANTDE LA SÈVE DE BOULOT,DE LA SÈVE D'ÉRABLE,DE L'EXTRAITDEFEUILLES DESAULE ETDE L'EXTRAIT DE FEUILLES DEGINKGO BILOBA

DOMAINE DE 1/ INVENTION

Le secteur technique de la présente invention concerne les compositions notamment cosmétiques et dermatologiques comprenant de la sève de bouleau, de la sève d'érable, de l'extrait de feuilles de saule et de l'extrait de feuilles de ginkgo biloba.

ETAT DE LA TECHNIQUE

A l'interface avec l'air, la peau est la cible de plusieurs stress environnementaux, tels que la pollution et les rayonnements UV. Les polluants atmosphériques pénètrent dans la peau directement ou indirectement et induisent plusieurs changements biochimiques comme une augmentation de la production des formes réactives de l'oxygène, mais aussi une diminution de la prolifération cellulaire, des antioxydants et des concentrations d'ATP. Cliniquement, les effets des polluants entraînent une exacerbation des processus de vieillissement cutané, des symptômes de maladies inflammatoires et la dérégulation de l'hydratation cutanée. La combinaison des rayonnements UV et des polluants pourrait exacerber les effets biochimiques et cliniques des polluants atmosphériques .

Le bouleau est un arbre appartenant à la famille des Betulaceae poussant dans des forêts humides, marécageuses ou tourbeuses. Il est traditionnellement utilisé pour donner une couleur pâle à la peau. Le document W02021031750A1 par exemple concerne une composition cosmétique de blanchiment de la peau comprenant de la sève de bouleau.

La sève de Bouleau présente en outre des propriétés antioxydante, détoxifiante, de protection contre les effets induits par les ultraviolets, régénératrice de la peau, hydratante et apaisante.

L'érable est un arbre appartenant à la famille des Acéraceae poussant dans des zones humides, fraîches, hautes mais ensoleillées. Il est traditionnellement utilisé pour ses vertus thérapeutiques pour couvrir les plaies, les abcès et pour traiter les désordres oculaires. La sève d' érable présente en outre des propriétés antibactériennes, antidiabétiques, hydratantes, exfoliantes, antioxydantes et purifiantes.

Le saule est un arbre de la famille des Samicacées poussant dans régions tempérées. Il est connu comme étant l'arbre aspirine car il contient un grand nombre de dérivées salicyliques et est utilisé pour traiter certaines douleurs et les troubles du sommeil. Il permet également de traiter les verrues et les cors. Le document US2012082839 par exemple concerne une composition pour le traitement de la douleur comprenant en outre de l'extrait de feuilles de saule.

L'extrait de feuilles de saule présente en outre des propriétés antioxydantes et apaisantes.

Le ginkgo biloba est un arbre de la famille des Ginkgoaceae. Il est historiquement utilisé en Chine en tant que complément alimentaire pour ses bienfaits sur le cerveau, les jambes, les yeux, et le cœur. Les feuilles de gingko biloba sont généralement utilisées en infusion mais également extraites pour lutter contre le vieillissement. Le document WO9515172A1 par exemple concerne un extrait de feuilles de gingko biloba, son procédé d'obtention et son utilisation en cosmétique et dermatologie.

L'extrait de feuilles de ginkgo biloba présente en outre des propriétés antioxydantes, apaisantes, régénératrices de la peau en stimulant la synthèse du collagène et de la fibronectine (Kim and al., 1997), phytoprotectrices et amincissantes.

Il n'existe à l'heure actuelle aucune composition comprenant en combinaison de la sève de bouleau, de la sève d'érable, de l'extrait de feuilles de saule et de l'extrait de feuilles de ginkgo biloba.

EXPOSE DE L'INVENTION

L'invention concerne une composition comprenant à titre de principe actif de la sève de bouleau, de la sève d'érable, de l'extrait de feuilles de saule et de l'extrait de feuilles de ginkgo biloba.

Avantageusement, la composition comprend entre 10% et 50% en masse de sève de bouleau.

Avantageusement encore, la composition comprend entre 10% et 50% en masse de sève d'érable.

Avantageusement encore, la composition comprend entre 3% et 20% en masse d'extrait de feuilles de saule.

Avantageusement encore, la composition comprend entre 3% et 20% en masse d'extrait de feuilles de ginkgo biloba.

Selon une caractéristique de l'invention, la composition comprend également de l'extrait de fruit de petit piment.

Selon une autre caractéristique de l'invention, la composition se présente sous la forme d'un gel, d'une lotion, d'une mousse, d'un baume, d'une crème, d'un spray ou d'un sérum.

Un tout premier avantage de la composition selon la présente invention est qu'elle permet d'augmenter l'expression de l'acide hyaluronique au niveau du derme papillaire. Elle possède donc des propriétés d'hydratation et de réparation du tissu cutanée et participe à la prolifération cellulaire des cellules du tissu cutané.

Un autre avantage de la composition selon la présente invention et qu'elle permet d'augmenter l'expression de PINK1 au niveau des cellules de l'épiderme. Elle participe donc au maintien de l'homéostasie cellulaire des cellules du tissu cutané.

Un autre avantage encore de la composition selon la présente invention est qu'elle permet de diminuer l'expression de Nrf2 au niveau de l'épiderme. Elle possède donc des propriétés antioxydantes.

Un autre avantage encore de la composition selon la présente invention et qu'elle permet d'augmenter l'expression de l'ocytocine au niveau des cellules de l'épiderme. Elle permet donc de participer à la croissance et à la prolifération et également de lutter contre l'inflammation du tissu cutané.

Un autre avantage encore de la composition selon la présente invention et qu'elle permet d'augmenter la concentration en ATP au niveau des cellules de l'épiderme. Elle permet donc de de favoriser la prolifération et d'inhiber la différenciation terminale des kératinocytes. La composition selon l'invention permet en outre de participer à la réparation de la barrière cutanée.

BREVE DESCRIPTION DES DESSINS

D'autres caractéristiques, avantages et détails de l'invention seront mieux compris à la lecture du complément de description qui va suivre en rapport avec les dessins dans lesquels :

La figure 1 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de l'acide hyaluronique dans le derme papillaire et l'épiderme,

La figure 2 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de PINK1 dans l'épiderme,

La figure 3 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de Nrf2 dans l'épiderme, et

La figure 4 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de l'ocytocine dans l'épiderme.

DESCRIPTION DETAILLEE DE MODES DE REALISATION DE

L'INVENTION

Comme évoqué précédemment, l'invention concerne une composition comprenant de la sève de bouleau, de la sève d'érable, de l'extrait de feuilles de saule et de l'extrait de feuilles de ginkgo biloba.

La sève de Bouleau selon l'invention comprend en outre :

- des oligosaccharides comme le glucose, le fructose, le galactose, le saccharose et l'inositol,

- des minéraux essentiels tels que le calcium, le zinc, le magnésium, le potassium et le sodium,

- des acides organiques tel que l'acide malique,

- des acides aminés, et

- des conservateurs.

La sève d'érable selon l'invention comprend en outre :

- des oligo- et polysaccharides tels que le fructose, le glucose, l'inuline, le néokestose et le sucrose,

- des composés phénoliques tel que l'acide phénolique,

- des acides organiques comme l'acide citrique, l'acide malique, l'acide oxalique, l'acide quinique et l'acide succinique,

- des minéraux comme le calcium et le potassium,

- des acides aminés et des protéines tels que l'acide glutamique, l'histidine, l'isoleucine, la leucine, la lysine, la méthionine, la tyrosine et le tryptophane,

L'extrait de feuilles de saule selon l'invention comprend en outre :

- des composés phénoliques tels que des flavonoïdes et ses dérivés, des acides phénoliques et des procyanidines.

L'extrait de feuilles ginkgo biloba selon l'invention comprend en outre :

- des composés phénoliques tels que des flavonoïdes et ses dérivés, des proanthocyanidines et des tannins,

- des oligo- et polysaccharides tel que le mannane,

- des vitamines tel que la vitamine C,

- des minéraux tels que le calcium, le magnésium, le manganèse, le potassium, le sélénium et le sodium, et

- des acides aminés et des protéines.

Au vu des propriétés individuelles des extraits de ces arbres, les inventeurs ont imaginé une composition combinant ces extraits en vue de traiter la peau. C'est ainsi qu'ils ont constaté avec surprise que cette composition avait un effet bénéfique surprenant sur la peau.

Afin de mettre en évidence cet effet, les inventeurs ont alors analysé l'activité biologique de la composition selon l'invention sur des expiants de peau humaine ex vivo par des études histologiques, biochimiques et génomiques et se sont rendu compte que la composition selon l'invention induisait au niveau de la peau humaine :

- une augmentation de la synthèse d'acide hyaluronique,

- une augmentation de l'expression de PINK1,

- une diminution de l'expression de Nrf2,

- une augmentation de la synthèse d'ATP,

- une augmentation de l'expression de l'ocytocine,

- une régénération de la barrière cutanée,

- une différenciation des kératinocytes,

- la formation de la couche cornée, - une induction des gènes codant pour des défensines, la lipocaline et la cathelicidine, et

- une répression des gènes codant pour les cytokines ou les chémokines pro-inflammatoires.

Les études histologiques et biochimiques consistent en outre à analyser l'effet de la composition selon l'invention sur l'expression de l'acide hyaluronique, de PINK1, de Nrf2 et de l'ocytocine par les cellules provenant d'explants de peau humaine ainsi que leur concentration en ATP.

Pour ce faire les inventeurs ont testé l'effet des produits suivants :

- le produit PI comprenant 40% en masse de sève d'érable, 40% en masse de sève de Bouleau, 10% en masse d'extrait de feuilles de Saule et 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba,

- le produit P2 comprenant 20% en masse de sève d'érable, 20% en masse de sève de Bouleau, 5% en masse d'extrait de feuilles de Saule, 5% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba et 50% en masse de glycérine, et

- le produit E comprenant 50% en masse de glycérine et 50% en masse d'eau distillée.

Les inventeurs ont préparé des expiants de peau humaine provenant d'une plastie abdominale et les ont répartis en quatre lots :

- le lot T0 correspondant au témoin plastie et comprenant 3 expiants,

- le lot T correspondant au témoin et comprenant 6 expiants,

- le lot E correspondant au lot traité avec le produit E et comprenant 6 expiants,

- le lot PI correspondant au lot traité avec le produit PI et comprenant 6 expiants,

- le lot P2 correspondant au lot traité avec le produit P2 et comprenant 6 expiants.

Chaque expiant de peau a été mis en survie en milieu de culture à une température de 37°C en atmosphère humide et enrichie de 5% de CO2. A T = 0 jour (JO), T = 1 jour (Jl), T = 4 jours (J4), T = 6 jours (J6) et T = 7 jours (J7), 5 pL des produits E, PI et P2 ont respectivement été appliqués en topique sur les expiants des lots E, PI et P2.

A JO, les 3 expiants du lot T0 ont été prélevés et coupés en trois parties. Une première a été fixée dans une solution de formol tamponnée, une deuxième partie a été congelée à - 80°C en vue de l'analyse histologique et une troisième partie a été congelée à -80°C en vue de l'analyse biochimique.

A T = 5 jours (J5) et T = 8 jours (J8), 3 expiants des lots T, E, PI et P2 ont été prélevés et traités de la même façon que les expiants du lot T0.

Après 24 heures dans le formol tamponné, les prélèvements ont été déshydratés et imprégnés en paraffine puis mis en bloc. Des coupes de 5 pm ont été réalisées et montées sur lame de verre histologique.

La morphologie générale des structures dermiques et épidermiques a été analysée sur coupes de paraffines après coloration au trichrome de Masson variante de Goldner et évaluée par un examen microscopique.

L'expression de l'acide hyaluronique dans le derme papillaire et l'épiderme a été observée en réalisant un immunomarquage de l'acide hyaluronique des lots TO, T à J5 (TJ5) et J8 (TJ8), E à J5 (EJ5) et J8 (EJ8), PI à J5 (P1J5) et J8 (P1J8) et P2 à J5 (P2J5) et J8 (P2J8). L'acide hyaluronique a été marqué sur coupes paraffine formol avec une HABP (Hyaluronic Acid Binding Protein) diluée au l/800 ^ème dans du PBS-BSA 0,3% pendant 1 heure à température ambiante avec un système amplificateur biotine/streptavidine et révélé en VIP. L'immunomarquage est ensuite évalué par observation microscopique .

L'expression de PINK1 dans l'épiderme a été observée en réalisant un immunomarquage de PINK1 des lots TO, T à J5 (TJ5) et J8 (TJ8), E à J5 (EJ5) et J8 (EJ8), PI à J5 (P1J5) et J8 (P1J8) et P2 à J5 (P2J5) et J8 (P2J8). PINK1 a été marqué sur coupes paraffine avec un anticorps monoclonal anti-PINKl dilué au l/100 ^ème dans du PBS-BSA 0,3% pendant une nuit à une température ambiante de 4°C avec un système amplificateur biotine/streptavidine et révélé en VIP. L'immunomarquage est ensuite évalué par observation microscopique.

L'expression de Nrf2 dans l'épiderme a été observée en réalisant un immunomarquage de Nrf2 des lots TO, T à J5 (TJ5) et J8 (TJ8), E à J5 (EJ5) et J8 (EJ8), PI à J5 (P1J5) et J8 (P1J8) et P2 à J5 (P2J5) et J8 (P2J8). Nrf2 a été marqué sur coupes paraffine avec un anticorps monoclonal anti-Nrf2 dilué au l/400 ^ème dans du PBS-BSA 0,3%-Tween 20 à 0,05% pendant une heure à température ambiante avec un système amplificateur biotine/streptavidine et révélé en VIP. L'immunomarquage est ensuite évalué par observation microscopique.

L'expression de l'ocytocine dans l'épiderme a été observée en réalisant un immunomarquage de l'ocytocine des lots TO, T à J5 (TJ5) et J8 (TJ8), E à J5 (EJ5) et J8 (EJ8), PI à J5 (P1J5) et J8 (P1J8) et P2 à J5 (P2J5) et J8 (P2J8). L'ocytocine a été marquée sur coupes congelées avec un anticorps monoclonal anti-ocytocine dilué au l/200 ^ème dans du PBS-BSA 0,3%-Tween 20 à 0,05% pendant une heure à température ambiante avec un système amplificateur biotine/streptavidine et révélé en VIP. L'immunomarquage est ensuite évalué par observation microscopique .

Le dosage de l'ATP a été réalisé sur les lots TO, T à J5 (TJ5) et J8 (TJ8), E à J5 (EJ5) et J8 (EJ8), PI à J5 (P1J5) et J8 (P1J8) et P2 à J5 (P2J5) et J8 (P2J8). Des expiants de peau congelés ont été broyés puis soumis à une disruption des cellules aux ultrasons. Après centrifugation à + 4000 tr/min, à 18°C, les protéines ont été mesurées dans le surnageant par une technique de Bradford. L'ATP des expiants a été quantifié à l'aide d'un kit de dosage ATP et d'un fluorimètre.

Sur les figures 1 à 4, TF correspond à un très faible marquage, F à un faible marquage, M à un marquage modéré, AN à un marquage assez net, N à un marquage net, TH à un marquage très net et Fo à un marquage fort.

La figure 1 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de l'acide hyaluronique dans le derme papillaire et 1'épiderme.

L'acide hyaluronique est un glycosaminoglycane non sulfaté constitué par des répétitions de D-acide glucuronique et de D- N-acétylglucosamine . Il est un des composants majeurs de la peau et est notamment impliqué dans plusieurs processus cellulaires dont l'hydratation, la réparation du tissu cutané et la prolifération cellulaire. Par exemple, sous l'action chronique des UV, la synthèse d'acide hyaluronique se réduit alors que l'activité des hyaluronidases reste inchangée. Il est ainsi observé une dégradation importante d'acide hyaluronique. L'HABP (Hyaluronic Acid Binding Protein) est une protéine qui relie l'acide hyaluronique aux autres composantes de la matrice extracellulaire du derme, dont les protéoglycannes . Elle est utilisée en recherche dermatologique pour visualiser l'acide hyaluronique au sein du tissu cutané.

On constate sur la figure 1 que le marquage de l'acide hyaluronique au niveau de l'épiderme est faible sur le lot T0, faible à modéré sur les lots TJ8, EJ8, P1J8 et P2J8 et modéré sur les lots TJ5, EJ5, P1J5 et P2J5.

Ainsi, que cela soit à J5 ou J8, les produits PI et P2 n'induisent pas de modifications de l'expression de l'acide hyaluronique par rapport au témoin T et au produit E.

Le marquage de l'acide hyaluronique au niveau du derme papillaire est faible à modéré sur les lots TJ8, EJ8, P1J8 et P2J8, modéré sur les lots TJ5, EJ5, et P2J5 et assez net sur les lots T0 et P1J5.

Ainsi, le produit PI induit une augmentation modérée de l'expression de l'acide hyaluronique par rapport au témoin T et au produit E au niveau du derme papillaire.

La composition selon l'invention permet bien d'augmenter l'expression de l'acide hyaluronique au niveau du derme papillaire. Elle possède donc des propriétés d'hydratation et de réparation du tissu cutané et participe à la prolifération cellulaire des cellules du tissu cutané.

La figure 2 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de PINK1 dans l'épiderme.

PINK1 (P-TEN Induced Putative Kinase 1) est une protéine impliquée dans le mécanisme de mitophagie qui est un processus d'autophagie sélective des mitochondries endommagées et non- fonctionnelles . Elle s'accumule spécifiquement à la surface de la membrane externe des mitochondries endommagées dont le potentiel électrochimique est perturbé. Au sein du tissu cutané, le processus de mitophagie est stimulé par un stress oxydatif, lié à l'accumulation de formes réactives de l'oxygène contribuant à l'élimination des mitochondries endommagées et au maintien de l'homéostasie cellulaire. PINK1 est également liée aux mécanismes cellulaires antiâges et particulièrement au niveau cutané.

Le marquage de PINK1 au niveau de l'épiderme est faible sur le lot T0, faible à modéré sur les lots TJ8 et EJ8, modéré sur les lots TJ5 et EJ5 et modéré à assez net sur les lots P1J5, P2J5, P1J8 et P2J8.

Ainsi, que cela soit à J5 ou J8, les produits PI et P2 induisent une augmentation de l'expression de PINK1 par rapport au témoin T et au produit E.

La composition selon l'invention permet d'augmenter l'expression de PINK1 au niveau des cellules de l'épiderme. Elle participe donc au maintien de l'homéostasie cellulaire des cellules du tissu cutané et possède des propriétés antiâges.

La figure 3 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de Nrf2 dans l'épiderme.

Nrf2 est un facteur de transcription avec un rôle clé dans la réponse aux stress oxydatifs et est exprimé de manière constitutive dans un large groupe de cellules et tissus. Sous l'action d'un stress oxydatif, y compris une exposition aux UVs, Nrf2 est phosphorylé en favorisant sa translocation successive du cytoplasme au noyau. Une fois transloqué dans le noyau, Nrf-2 est capable de se lier à l'ADN au niveau d'une région spécifique, connue également sous le nom d'HARE (Human Antioxidant Response Element). Nrf2 joue notamment un rôle clé dans la protection des kératinocytes contre les altérations induites par les UVs.

Le marquage de Nrf2 au niveau de l'épiderme est faible à modéré sur les lots TJ8, EJ8, P1J8 et P2J8, modéré sur le lot sur le lot P1J5, modéré à assez net sur les lots TJ5, EJ5, P2J5 et assez net à net sur le lot T0.

Ainsi, le produit PI induit une diminution de l'expression de Nrf2 par rapport au témoin T et au produit E. La composition selon l'invention permet de diminuer l'expression de Nrf2 au niveau de l'épiderme. Ainsi, la diminution de l'expression de Nrf2 traduit sa translocation du cytoplasme vers le noyau où il active des gènes responsables de la protection cellulaire et en particulier la synthèse d'enzymes antioxydantes. La composition selon l'invention possède donc des propriétés antioxydantes.

La figure 4 illustre les résultats du marquage et donc de l'expression de l'ocytocine dans l'épiderme.

L'ocytocine est une hormone synthétisée principalement dans les neurones des noyaux paraventriculaire hypothalamique et supraoptique et relarguée dans la circulation systémique par l'hypophyse postérieure. Elle est impliquée dans un large spectre d'activité tissu-spécifiques, incluant la croissance et la différenciation cellulaire, la réponse neuroendocrine à des stress ou encore les processus d'inflammation. Au sein de la peau, l'ocytocine est relarguée suite à des stimulations bien précises. Elle peut moduler ses fonctions biologiques via l'interaction avec le récepteur à l'ocytocine (OTR/OXTR). Ce récepteur est exprimé au niveau des kératinocytes et des fibroblastes et il a été montré que des niveaux élevés d'ocytocine sont à corréler avec une peau d'apparence plus jeune.

Le marquage de l'ocytocine au niveau de l'épiderme est faible sur les lots TJ5, EJ5, P1J5 et P2J5, faible à modéré sur les lots TJ8, EJ8, P1J8 et modéré sur les lots T0 et P2J8.

Ainsi, le produit P2 induit une augmentation de l'expression de l'ocytocine par rapport au témoin T et au produit E.

La composition selon l'invention permet d'augmenter l'expression de l'ocytocine au niveau des cellules de l'épiderme. Elle permet donc de participer à la croissance et la prolifération du tissu cutanée, de lutter contre l'inflammation du tissu cutané et possède des propriétés antiâges.

Le tableau ci-dessous illustre les résultats du dosage de l'ATP des lots TO, TJ5, EJ5, P1J5, P2J5, TJ8, EJ8, P1J8 et P2J8. Tableau 1

L'ATP (adénosine triphosphate) est un nucléotide connu pour stimuler et participer à d'innombrables processus intracellulaires. L'ATP extracellulaire et son métabolite 1'adénosine peuvent exercer une variété d'effets sur presque chaque type cellulaire de la peau humaine et les potentielles sources cutanées d'ATP abondent. Celles de la peau comprennent par exemple l'ATP relâché par l'hypoxie des tissus et la lyse cellulaire lors de blessures mécaniques, la libération d'ATP par les kératinocytes sous l'effet de nucléotides ou de cytokines. L'ATP favorise la prolifération des kératinocytes et inhibe la différenciation terminale des kératinocytes grâce aux récepteurs P2Y2 localisés au niveau de la couche basale de l'épiderme. L'ATP joue également un rôle important dans l'organisation des réponses cutanées aux blessures mécaniques, aussi bien en modulant les processus inflammatoires des cellules de Langherans, qu'en stimulant directement les processus de régénération et cicatrisation de la peau. Par ailleurs, l'ATP est une molécule énergétique importante pour les processus intracellulaires et joue un rôle majeur dans le rajeunissement cutané. Avec le vieillissement, les niveaux d'ATP dans le derme déclinent, ce qui crée une déficience en énergie, affectant donc l'apparence de la peau. Ainsi, l'ATP est efficace pour fournir une protection antiâge et a également des propriétés hydratante et apaisante.

Ainsi, on constate que les produit PI et P2 induisent une augmentation de la concentration en ATP par rapport au témoin T et au produit E.

La composition selon l'invention permet d'augmenter la concentration en ATP au niveau des cellules de l'épiderme. Une augmentation de la production d'ATP au niveau cutané permet d'améliorer les fonctions métaboliques de la peau. La composition selon l'invention permet donc de de favoriser la prolifération et d'inhiber la différenciation terminale des kératinocytes. La composition selon l'invention permet en outre de participer à la réparation de la barrière cutanée.

Les inventeurs ont également testé l'effet de produits tels que SI, S2, S3, S3, S4, S5, S6, S7, S8, S9, S10, PI et P2 sur le relargage de l'ocytocine par des kératinocytes primaires en culture issus d'épiderme humain.

Le produit SI correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève de Bouleau, 40% en masse de sève d'Erable et 20% en masse d'eau distillée.

Le produit S2 correspond à un mélange 40% en masse de sève de Bouleau, 10% en masse d'extrait de feuille de Saule et 50% en masse d'eau distillée.

Le produit S3 correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève de Bouleau, 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba et 50% en masse d'eau distillée.

Le produit S4 correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève d'Erable, 10% en masse d'extrait de feuille de Saule et 50% en masse d'eau distillée.

Le produit S5 correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève d'Erable, 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba et 50% en masse d'eau distillée.

Le produit S6 correspond à un mélange comprenant 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba, 10% en masse d'extrait de feuille de Saule et 80% en masse d'eau distillée.

Le produit S7 correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève de Bouleau, 40% en masse de sève d'Erable, 10% en masse d'extrait de feuille de Saule et 10% en masse d'eau distillée.

Le produit S8 correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève de Bouleau, 40% en masse de sève d'Erable, 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba et 10% en masse d'eau distillée.

Le produit S9 correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève de Bouleau, 10% en masse d'extrait de feuille de Saule, 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba et 40% en masse d'eau distillée.

Le produit S10 correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève d'Erable, 10% en masse d'extrait de feuille de Saule, 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba et 40% en masse d'eau distillée.

Le produit PI correspond à un mélange comprenant 40% en masse de sève d'érable, 40% en masse de sève de Bouleau, 10% en masse d'extrait de feuilles de Saule et 10% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba.

Le produit P2 correspond à un mélange comprenant 20% en masse de sève d'érable, 20% en masse de sève de Bouleau, 5% en masse d'extrait de feuilles de Saule, 5% en masse d'extrait de feuilles de gingko biloba et 50% en masse de glycérine.

Les kératinocytes primaires sont issus d'un épiderme d'un donneur de 39 ans (référence : KER110, lot KER110049, Biopredic).

Les kératinocytes sont ensemencés (20000 cellules/cm ² ) en plaque de 96 puits à 37°C, en atmosphère enrichie à 5% de CO2 et dans un milieu de culture KSEM (référence Gibco 10144892) comprenant 1% de pénicilline/streptomycine.

24 heures après l'ensemencement des lots Slk, S2k, S3k, S4k, S5k, S6k, S7k, S8k, S9k, SlOk, Plk et P2k sont respectivement mis à incuber avec les produits SI, S2, S3, S3, S4, S5, S6, S7, S8, S9, S10, PI et P2. Un lot témoin Tk ne subit quant à lui aucun ajout de produit, seul son milieu de culture est renouvelé.

24 heures après l'incubation les milieux de culture ainsi que les culots cellulaires de chaque lot sont prélevés et il est effectué un dosage de l'ocytocine à partir des milieux de culture ainsi qu'un dosage des protéines totales à partir des culots cellulaires.

Le dosage de l'ocytocine est réalisé au moyen d'un test ELISA (abeam 133050 Oxytocin ELISA Kit).

Le dosage des protéines totales est réalisé au moyen de la technique de Bradford.

Les inventeurs constatent que le relargage de l'ocytocine par les kératinocytes du lot Plk ou du lot P2k est nettement supérieur au relargage de l'ocytocine de lots traités avec les produits SI à S10 testés.

Ces résultats montrent que la composition selon l'invention présente un effet supplémentaire inattendu sur le relargage de l'ocytocine par des kératinocytes du fait de l'effet combiné de la sève de bouleau, de la sève d'érable, de l'extrait de feuille de saule et de l'extrait de feuilles de gingko biloba.

Des résultats similaires sont observés pour des compositions selon l'invention dans lesquelles le pourcentage massique de la sève de bouleau est compris entre 10% et 50%.

Des résultats similaires sont observés pour des compositions selon l'invention dans lesquelles le pourcentage massique de la sève d'érable est compris entre 10% et 50%.

Des résultats similaires sont observés pour des compositions selon l'invention dans lesquelles le pourcentage massique de l'extrait de feuille de saule est compris entre 3% et 20%.

Des résultats similaires sont observés pour des compositions selon l'invention dans lesquelles le pourcentage massique de l'extrait de feuille de gingko biloba est compris entre 3% et 20%.

Les inventeurs ont également mené une étude génomique pour caractériser la composition selon l'invention. Pour se faire, ils ont préparé des expiants de peau humaine provenant d'une plastie abdominale et les ont répartis en quatre lots :

- le lot TOg correspondant au témoin plastie et comprenant 3 expiants,

- le lot Tg correspondant au témoin et comprenant 6 expiants,

- le lot Eg correspondant au lot traité avec le produit E et comprenant 6 expiants,

- le lot Plg correspondant au lot traité avec le produit PI et comprenant 6 expiants,

- le lot P2g correspondant au lot traité avec le produit P2 et comprenant 6 expiants,

Chaque expiant de peau a été mis en survie en milieu de culture à une température de 37°C en atmosphère humide et enrichie de 5% de CO2.

A T = 0 jour (J0), T = 1 jour (Jl), T = 5 jours (J5), 5 pL des produits E, PI et P2 ont respectivement été appliqués en topique sur les expiants des lots E, PI et P2.

A J0, les 3 expiants du lot TOg ont été prélevés et coupés en trois parties. Une première et une deuxième partie ont été congelées à -80°C et une troisième partie a été stockée dans une solution permettant de stabiliser l'ARN (RNAlater) en vue de l'analyse génomique.

A T = 2 jours (J2) et T = 6 jours (J6), 3 expiants des lots Tg, Eg, Plg et P2g ont été prélevés et traités de la même façon que les expiants du lot TOg.

Des échantillons d'ARN ont ensuite été extraits des expiants des lots TOg, Tg à J2 (TgJ2) et J6 (TgJ6), Eg à J2 (EgJ2) et J6 (EgJ6), Plg à J2 (PlgJ2) et J6 (PlgJ6) et P2g à J2 (P2gJ2) et J6 (P2gJ6).

Chaque extrait d'ARN a ensuite été rétro transcrit, amplifié, marqué par la Cyanine-3 et hybridé sur puces contenant le génome humain en entier de façon à réaliser l'analyse transcriptomique.

Les gènes modulés en réponse aux produits PI et P2 ont été soumis au logiciel PredictSearch pour la réalisation de l'enrichissement et l'identification des activités biologiques associées aux gènes induits ou réprimés.

Il ressort de cette étude génomique que les produits PI et P2 permettent de moduler de nombreux gènes impliqués dans des processus biologiques tels que la barrière cutanée, la migration des kératinocytes, la réponse antimicrobienne, les lésions psoriasiques, l'inflammation de la peau, la différenciation de l'épiderme, la cicatrisation, le métabolisme lipidique, la prolifération cellulaire, la réparation de l'ADN et la médiation lipidique.

Les produits PI et P2 permettent de réprimer un certain nombre de gènes impliqués dans des processus biologique tels que le mitophagie, la peroxydation lipidique, l'inflammation chronique et la différenciation terminale.

Cette étude génomique vient confirmer les propriétés de la composition selon l'invention que les études histologiques et biochimiques ont révélées.

Les inventeurs ont également mené des tests et se sont rendu compte que des compositions comprenant entre 10% et 50% en masse de sève de bouleau, entre 10% et 50% en masse de sève d'érable, entre 3% et 20% en masse d'extrait de feuilles de saule et entre 3% et 20% en masse d'extrait de feuilles de ginkgo biloba possédaient les mêmes propriétés que les produits PI et P2.

Selon un mode de réalisation de l'invention, la composition comprend entre 10% et 50% en masse de sève d'érable (dénomination INCI : Acer Saccharum (Sugar Maple) Sap Extract), par exemple 12%, 17%, 22%, 27%, 32%, 37%, 42% ou 45% en masse.

Selon un mode de réalisation de l'invention, la composition comprend entre 10% et 50% en masse de sève de bouleau (dénomination INCI : Betula Alba Juice), par exemple 12%, 17%, 22%, 27%, 32%, 37%, 42% ou 45% en masse.

Selon un mode de réalisation de l'invention, la composition comprend entre 3% et 20% en masse d'extrait de feuille de saule (dénomination INCI : Salix Alba (Willow) Leaf Extract), par exemple 5%, 7%, 9%, 11%, 13%, 15%, 17% ou 19% en masse.

Selon un mode de réalisation de l'invention, la composition comprend entre 3% et 20% en masse d'extrait de feuille de ginkgo biloba (dénomination INCI : Ginkgo Biloba Leaf Extract), par exemple 5%, 7%, 9%, 11%, 13%, 15%, 17% ou 19% en masse.

Lorsque la composition selon l'invention est combinée dans une composition finale comprenant d'autres ingrédients, par exemple cosmétique ou dermatologique, il n'est pas nécessaire d'ajouter de l'eau distillée ni des conservateurs à la composition finale.

La composition selon l'invention peut également comprendre de l'extrait de fruit de petit piment (dénomination INCI : Capsicum Annuum Fruit Extract). Ce produit présente en outre des propriétés antipelliculaire, antimicrobienne, antioxydante, astringente et de protection de la peau. La composition selon l'invention peut comprendre entre 1% et 5% en masse d'extrait de fruit de petit piment, par exemple 2%, 3% ou 4% en masse. La description qui suit concerne des exemples de compositions selon l'invention.

Exemple 1 : Sérum visage

Tableau 2

Exemple 3 : Spray pour le corps

Tableau 4

Exemple 4 : Lotion pour le corps

Tableau 5 Exemple 5 : Lotion pour le corps

Tableau 6 Exemple 6 : Sérum pour le corps

Tableau 7

La composition selon l'invention peut être une composition cosmétique ou dermatologique. Elle peut se présenter sous la forme d'un gel, d'une lotion, d'une mousse, d'un baume, d'une crème, d'un spray ou d'un sérum.