Titre de l'invention : COMPOSITION COSMÉTIQUE ET/OU DERMATOLOGIQUE COMPRENANT UN COMPLEXE ISSU

DE LA POMME

Domaine technique

La présente invention se rapporte à une composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant un extrait de marc de pomme, une huile de pomme, et de l’eau de pomme, ainsi qu’à une utilisation cosmétique non thérapeutique de la composition cosmétique, et à un procédé cosmétique non thérapeutique mettant en œuvre la composition cosmétique et un dispositif la comprenant.

La présente invention trouve une application dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie, plus particulièrement de la cosmétique cutanée.

Etat de la technique

La peau est un organe vital à part entière qui se compose de trois tissus distincts, assumant chacun différents rôles grâce à différents types cellulaires et différentes structures.

Le tissu le plus en surface, et donc le plus exposé, est l'épiderme. Cet épithélium pluristratifié (Malpighien) et kératinisé, se compose de différentes cellules associées à de nombreuses fonctions de barrière et de protection. Les cellules majoritaires sont les kératinocytes, qui se divisent dans la couche basale et entament leur différenciation jusqu’à la couche cornée (couche la plus externe), puis sont éliminés par desquamation, en 21 à 28 jours, en moyenne. Le rôle majeur de l'épiderme est d'apporter à la peau, et donc au corps humain, une première ligne de protection contre les agressions extérieures, comme les agressions physiques, chimiques, hydriques et bactériologiques. Cette protection est notamment assurée par les couches les plus différenciées et la couche cornée, connue pour ses propriétés hydrophobes, son aspect compacte et étanche. Une bonne différenciation et donc une bonne desquamation sont essentielles pour une surface lisse, homogène et régulière. L’ensemble de ces mécanismes dépend directement des capacités prolifératives des kératinocytes. Or, les stress extérieurs et l’âge altèrent les kératinocytes et ralentissent ce processus qui peut alors devenir plus long et plus irrégulier. La desquamation devenant irrégulière et/ou anarchique, des défauts de lissage et d’homogénéité de surface de la peau s’installent.

En position intermédiaire, le derme est un tissu conjonctif investi majoritairement de fibroblastes et de protéines matricielles, donnant à la peau ses qualités de compressibilité et d'élasticité connues. Les modifications de sa texture et de sa composition sont largement responsables des altérations de la peau qui surviennent au cours du vieillissement. Le relief de la couche cornée est, par ailleurs, directement conditionné par la qualité et la densité du derme qui la sous-tend. Plus que l'épiderme, dont le renouvellement est rapide et constant, le derme subit des troubles importants liés à l'âge, par le vieillissement de ses cellules et de sa matière. En vieillissant et suite aux agressions environnementales, les fibroblastes sont de moins en moins réactifs et de moins en moins prolifératifs. Les synthèses des macromolécules de la matrice ne sont plus assurées par les fibroblastes. De plus, ces macro-molécules constitutives du derme telles que les fibres de collagène, les fibres élastiques, les protéoglycanes et les glycosaminoglycanes (acide hyaluronique notamment) ont tendance à dégénérer et à se fragmenter. Ces phénomènes d'altération du tissu dermique provoquent en surface un défaut d'organisation de l'épiderme et, d'une façon plus visible et plus directe, une perte de fermeté pouvant aller jusqu'à la ptose cutanée et/ou la formation de rides.

Au sein de la trame conjonctive, s'intercalent aussi d’autres cellules et structures, tel un important réseau circulatoire et nutritif, constitué des vaisseaux sanguins et des capillaires lymphatiques, ainsi que les annexes épidermiques : cheveux, poils, ongles, glandes pilosébacées et glandes sudoripares, qui prennent naissance dans le derme profond. Comme précédemment avec l’âge et les agressions environnementales, le fonctionnement cellulaire ralentit et les cellules endothéliales constitutives des vaisseaux sont moins jointives et moins fonctionnelles, entraînant des défauts d’irrigation et de nutrition du tégument et de ses annexes (glandes ou cheveux).

L'hypoderme, situé en profondeur et constitué en majeure partie de lobules graisseux (adipocytes), assure une fonction de support primaire, de protection mécanique et thermique, et joue aussi un rôle de stockage des réserves énergétiques rapidement mobilisables pour tous les besoins biologiques, comme par exemple le renouvellement cellulaire, la défense de l’organisme ou la contraction musculaire.

L’aspect de surface de la peau est conditionné par tous ces tissus. Dans l’épiderme, les kératinocytes se divisent (via les mitoses) dans la couche basale et entament leur différenciation jusqu’à la couche cornée puis la desquamation (c’est-à-dire leur élimination par détachement), en 21 à 28 jours, en moyenne. Un bon métabolisme des kératinocytes est essentiel pour une surface lisse, homogène et régulière. Plus en profondeur dans le derme se situe le réseau endothélial qui permet d'irriguer tout l’édifice cutané grâce à la circulation sanguine, apportant eau, nutriments et oxygène. Ce mécanisme dépend directement du bon état physiologique de l’organisme, il permet aussi de donner sa couleur vitale à la peau (teint rosé). Or, les stress extérieurs, le tabac, les UV ralentissent ce processus qui peut alors devenir plus irrégulier et endommagé : tout le réseau composé de cellules endothéliales souffre et s’altère induisant une malnutrition, déshydratation et hypoxie. En complément, la desquamation devient irrégulière et/ou anarchique. Des défauts de lissage et d’homogénéité de surface de la peau, un teint plus hétérogène ou plus jaunâtre, une déshydratation ou une sécheresse s’installent.

Ces mécanismes peuvent arriver de façon consécutive à des stress exogènes ou endogènes, et peuvent être complètement déconnectés de mécanismes liés à l’âge ; en revanche, ces derniers les accentuent.

D’un point de vue général, le processus de vieillissement est un processus généralisé consécutif à l’avancement de l’âge (vieillissement intrinsèque) ou à l’accumulation des effets dus aux agressions environnementales répétées (vieillissement extrinsèque).

Pour le marché cosmétique, il convient donc de stimuler de façon biologique un ou des mécanismes impliqués dans l’aspect esthétique de la peau en lien direct ou indirect avec l’hydratation, la nutrition, l’éclat et la protection de la peau.

Le marché des produits cosmétiques est très important et les attentes des consommateurs/consommatrices sont très élevées. En termes d’anti-âge ou non, ils/elles s’orientent de plus en plus vers des produits efficaces, naturels et éco- conçus.

Il existe donc un réel besoin de trouver de nouvelles compositions et/ou composés d’origine naturelle, permettant d’améliorer l’aspect et les qualités de surface de la peau, notamment pour améliorer l’hydratation de la peau, pour protéger la peau, pour nourrir la peau, et/ou pour renforcer l’épiderme.

Description de l’invention

La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins et inconvénients de l’art antérieur.

Les inventeurs sont les tout premiers à associer un extrait de marc de pomme, une huile de pomme, et de l’eau de pomme, permettant précisément de répondre efficacement aux besoins précités.

Les inventeurs ont notamment mis en évidence un effet de l’association d’un extrait de marc de pomme, une huile de pomme, et de l’eau de pomme sur l’amélioration de l’aspect et des qualités de surface de la peau, notamment pour des effets d’hydratation, de protection de la peau, pour nourrir la peau, et/ou pour renforcer l’épiderme.

De manière surprenante, les inventeurs ont en outre mis en évidence une synergie d’un extrait de marc de pomme, d’une huile de pomme, et de l’eau de pomme pour les effets cosmétiques mentionnés. Notamment, les inventeurs ont mis en évidence un effet synergique des trois actifs de pomme pour réduire la réponse inflammatoire et ainsi protéger la peau des agressions extérieures et du stress oxydatif.

Ainsi, un premier objet de l’invention se rapporte à une association comprenant un extrait de marc de pomme, une huile de pomme, et de l’eau de pomme.

On entend par « pomme », au sens de la présente invention, le fruit issus des pommiers, notamment Malus domestica, ceux-ci étant des arbres du genre botanique Malus et de la famille des Rosacées.

L’extrait de marc de pomme peut être obtenu par tout procédé connu de l’homme du métier. Il peut s’agir notamment du coproduit de la transformation des pommes pour la fabrication du jus ou du cidre. Il est par exemple obtenu après épépinage et pressage des pommes, par récupération de la pulpe et de la peau déshydratées mais sans la tige. Le marc de pomme est ensuite extrait par macération hydroalcoolique, filtré, concentré pasteurisé et standardisé dans la glycérine.

L’huile de pomme peut être obtenue par tout procédé connu de l’homme du métier, par exemple par pression à froid des pépins de pommes.

L’eau de pomme peut être obtenue par tout procédé connu de l’homme du métier, par exemple par extraction par distillation puis condensation des vapeurs sous vide à température douce.

Avantageusement, dans l’association de l’invention, l’eau de pomme peut être à une concentration comprise entre 80 et 97,9%, l’extrait de marc de pomme peut être à une concentration comprise entre 2 et 20%, et l’huile de pomme peut être à une concentration comprise entre 0,1 et 4%, lesdites concentrations étant en poids par rapport au poids total de l’association. Par exemple, l’eau de pomme peut être à une concentration d’environ 85,5%, l’extrait de marc de pomme peut être à une concentration d’environ 14,2% et l’huile de pomme peut être à une concentration d’environ 0,3%.

Par exemple, l’association peut comprendre environ 89,5% d’eau de pomme, environ 7,5% d’extrait de marc de pomme et environ 3% d’huile de pépins de pomme.

Dans un autre exemple, l’association peut comprendre environ 97% d’eau de pomme, environ 2,5% d’extrait de pomme, et environ 0,5% d’huile de pomme.

L’association peut consister en un extrait de marc de pomme, une huile de pomme, et de l’eau de pomme, auquel cas la somme des pourcentages des trois actifs précités est égale à 100%.

L’association peut être préparée par tout procédé adapté connu de l’homme du métier, par exemple par mélange.

Avantageusement, l’extrait de marc de pomme peut comprendre de 70% à 80%, par exemple environ 74 ou 75% en poids de sucres par rapport au poids total de matière sèche dudit marc, de 4% à 6%, par exemple environ 5,0 à 5,2% en poids de polyphénols par rapport au poids total de matière sèche dudit marc, ainsi que des dérivés de quercétine. Avantageusement, l’huile de pomme peut comprendre de 50% à 70%, par exemple 60%, d’acide linoléique. Avantageusement, l’huile de pomme peut comprendre de 20% à 35%, par exemple 28%, d’acide oléique. Avantageusement, l’huile de pomme peut comprendre de 3% à 15%, par exemple 7%, d’acide palmitique.

Avantageusement, l’huile de pomme peut comprendre de 0,1 % à 1 ,0%, par exemple 0,5%, d’acide linolénique. Ces pourcentages sont donnés en poids par rapport au poids total de ladite huile.

Avantageusement, l’eau de pomme comprend des molécules volatiles odorantes, notamment choisies parmi le sulcatone, l’amandol et le capronaldéhyde, et des minéraux, notamment choisis parmi le calcium, le sodium et le magnésium.

Un autre objet de l’invention se rapporte à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant une association de l’invention.

On entend par « composition cosmétique », dans la présente invention, toute composition à visée cosmétique, c’est à dire esthétique, pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires, les organes externes, les dents et les muqueuses externes. Avantageusement, une composition cosmétique permet, exclusivement ou principalement, de les protéger, parfumer, maintenir en bon état, modifier leur aspect ou en corriger les défauts superficiels. Notamment, une composition cosmétique peut comprendre un véhicule cosmétiquement acceptable.

Dans le cadre de la présente invention, on entend par « composition dermatologique » toute composition à visée dermatologique, c’est à dire une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, pour un traitement de la peau, des muqueuses et des phanères, par exemple des ongles, des cheveux, et/ou des poils. Notamment, une composition dermatologique peut comprendre un véhicule dermatologiquement acceptable.

Par « véhicule cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable », on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines cutanées, en particulier les cellules de l’épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. Le véhicule cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable peut être choisi parmi l’eau, l’allantoïne, la glycérine, le méthylpropanediol, cette liste n’étant pas limitative.

La composition de l’invention peut comprendre de 0,001 à 99% en poids de l’association de l’invention, par rapport au poids total de la composition.

Avantageusement, la composition peut comprendre environ 5 à environ 25% de l’association de l’invention.

La composition de l’invention peut comprendre un pourcentage en poids de l’extrait de marc de pomme compris entre 0,0001 et 10%, par exemple de 0,001 à 10%, ou de 0,01 à 10%, ou de 0,1 % à 10%, ou de 0,5% à 10%, ou de 1 % à 10%, en poids par rapport au poids total de la composition, un pourcentage en poids de l’huile de pomme compris entre 0,0001 et 10%, par exemple de 0,001 à 10%, ou de 0,01 à 10%, ou de 0,1 % à 10%, ou de 0,2% à 10%, ou de 1 % à 10%, en poids par rapport au poids total de la composition, et un pourcentage en poids de l’eau de pomme est compris entre 0,0001 et 40%, par exemple de 0,001 à 40%, ou de 0,01 à 40%, ou de 0,1 % à 40%, ou de 1 % à 40%, en poids par rapport au poids total de la composition.

Notamment, la composition cosmétique selon l’invention peut comprendre un pourcentage en poids de l’extrait de marc de pomme compris entre 0,1 et 1 ,0% en poids par rapport au poids total de la composition, un pourcentage en poids de l’huile de pomme compris entre 0,05 et 0,5% en poids par rapport au poids total de la composition, et un pourcentage en poids de l’eau de pomme compris entre 3 et 30% en poids par rapport au poids total de la composition.

Par exemple, la composition cosmétique de l’invention peut comprendre environ 6% d’eau de pomme, environ 0,5% d’extrait de marc de pomme et environ 0,2% d’huile de pomme.

Selon un autre exemple, la composition cosmétique de l’invention peut comprendre environ 20% d’eau de pomme, environ 0,5% d’extrait de marc de pomme, et environ 0,1 % d’huile de pomme.

La composition cosmétique ou dermatologique de l’invention peut être obtenue par tout procédé approprié connu de l’homme du métier pour la fabrication d’une composition cosmétique ou dermatologique. Il peut s’agir, par exemple d’un simple mélange. Il peut s’agir également, par exemple, d’un procédé comprenant une étape d’incorporation d’une phase interne dans une phase externe au moyen d'un émulseur, par exemple d'une turbine de type rotor-stator. Il peut s’agir également par exemple d’un procédé utilisant la Température d'inversion de Phase (TIP), ce procédé étant classiquement utilisé par l'homme de l'art pour obtenir des émulsions huile dans eau dont les gouttelettes dispersées sont particulièrement fines, par exemple avec un diamètre de 0,1 à 1 pm.

La composition cosmétique ou dermatologique de la présente invention peut se trouver sous toute forme appropriée pour une application cosmétique ou dermatologique. Avantageusement, la composition est une composition à usage topique.

Selon l’invention, la composition peut notamment être sous une forme choisie parmi une crème, un onguent, une huile, un lait, une pommade, une solution, une poudre, un gel, un sérum, un baume, un beurre, une lotion, une suspension, un shampooing, un savon ou une émulsion qui peut être rincée ou non rincée. Dans le cas des émulsions, il peut s’agir par exemple d’une composition sous une forme choisie dans le groupe comprenant une émulsion huile dans eau, ou eau dans huile, ou un mélange de ces émulsions. Dans le cas d’une poudre, elle peut être une poudre libre ou une poudre compressée, par exemple sous forme de granulés, de pastilles, éventuellement à diluer, ou encore sous la forme d’une poudre compacte. La composition cosmétique ou dermatologique peut par exemple se trouver sous une forme choisie dans le groupe comprenant un gel aqueux ou hydroalcoolique, une crème aqueuse ou hydroalcoolique et une lotion aqueuse ou hydroalcoolique. Ces formulations utilisables pour la mise en œuvre de la présente invention sont connues dans l’état de la technique par les formulateurs. Dans ces exemples de composition, il suffit d’ajouter l’association des actifs de pomme de la présente invention pour obtenir une composition conforme à la présente invention.

L’association de l’invention, également appelé indifféremment « complexe de pomme » dans la présente, peut être utilisée dans une composition cosmétique ou dermatologique seule ou en combinaison avec une ou plusieurs autres substances ou ingrédients actifs ou inactifs cosmétiquement ou dermatologiquement. Les substances ou ingrédients inactifs sont ceux qui n’agissent pas cosmétiquement ou dermatologiquement. Il s’agit des éléments de la composition permettant notamment d’accompagner l’extrait, de constituer une formulation particulière, de conserver l’extrait actif dans le temps, etc. Il peut s’agir en outre de tout produit de base pouvant se trouver dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques classiques. Par opposition, les substances ou ingrédients actifs sont ceux qui dans l’application cosmétique ou dermatologique visée ont une action esthétique et/ou médicale. Il peut s’agir par exemple d’au moins un autre extrait de plantes.

Un autre objet de l’invention se rapporte à une utilisation cosmétique non thérapeutique d’une composition cosmétique de l’invention ou d’une association de l’invention.

Avantageusement, l’utilisation cosmétique non thérapeutique peut avoir pour effet une amélioration de l’hydratation de la peau, du cuir chevelu et/ou des muqueuses, et/ou une action de protection de la peau, du cuir chevelu et/ou des muqueuse, et/ou de nourrir la peau, et/ou de renforcer l’épiderme.

Sans vouloir être lié par un mécanisme particulier, la protection de la peau semble liée à une réduction des réactions inflammatoires induites par les agressions extérieures, la protection de la peau semble liée à une réduction de la formation des radicaux superoxyde, le renforcement de l’épiderme semble lié à une stimulation du métabolisme des kératinocytes.

Avantageusement, le complexe de pomme peut :

- réduire la réponse inflammatoire pour protéger la peau des agressions extérieures et du stress oxydatif,

- stimuler la synthèse des molécules qui captent l’eau pour une meilleure hydratation cellulaire,

- stimuler la synthèse du glucose dans le tissu cutané, molécule à l’origine de la production d’énergie cellulaire,

- stimuler la synthèse d'ATP qui fournit l’énergie à la cellule, pour un fonctionnement optimum des cellules et une activation des mécanismes biologiques dans la peau.

On entend par « muqueuse », au sens de la présente invention, notamment les muqueuses externes comme les lèvres.

L’action cosmétique vise notamment à améliorer l’esthétisme de la peau. Il s’agit donc d’une action purement esthétique, à l’exclusion de toute action thérapeutique, permettant d’améliorer l’aspect de surface de la peau, et/ou de ses annexes et/ou des muqueuses, notamment pour présenter, à terme, un aspect plus esthétique, régulier et/ou homogène.

Comme indiqué précédemment, l’utilisation de la composition cosmétique peut se faire sous une forme choisie parmi une crème, un onguent, une huile, un lait, une pommade, une solution, une poudre, un gel, un sérum, un baume, un beurre, une lotion, une suspension, un shampooing, un savon ou une émulsion qui peut être rincée ou non rincée.

Un autre objet de l’invention se rapporte à un procédé de soin cosmétique non thérapeutique pour améliorer l’aspect de la peau, comprenant une application sur la peau, le cuir chevelu et/ou les muqueuses d’une composition cosmétique ou d’une association telles que décrites précédemment. Le procédé cosmétique non thérapeutique de l’invention est donc un procédé de soin esthétique de la surface de la peau.

Avantageusement, le procédé cosmétique non thérapeutique peut permettre d’améliorer l’aspect de la peau, et/ou d’améliorer l’hydratation de la peau, du cuir chevelu et/ou des muqueuses, et/ou peut protéger la peau, le cuir chevelu et/ou les muqueuse, nourrir la peau, le cuir chevelu et/ou les muqueuses et/ou renforcer l’épiderme.

Dans le cadre des procédés cosmétiques selon l’invention, l’utilisation s’entend d’une utilisation non-thérapeutique, par exemple pour le traitement des peaux normales. Dans la présente, on entend par « peaux normales », des peaux ne présentant pas un état pathologique.

D’une manière générale, toute utilisation cosmétique et tout procédé cosmétique selon l’invention sont respectivement des utilisations cosmétiques non- thérapeutiques et procédés cosmétiques non-thérapeutiques.

Un autre objet de l’invention se rapporte à un dispositif se présentant sous une forme choisie parmi un pot, un flacon-pompe, une lingette, un masque, un dispositif transdermique, un patch, un spray, le dispositif comprenant une composition ou une association telles que définies ci-avant. D’autres avantages pourront encore apparaître à l’homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, donnés à titre illustratif.

EXEMPLES

Exemple 1 : Préparation de l’extrait de marc de pomme

Un extrait de marc de pomme est préparé selon le protocole suivant :

Du marc de pomme bio, séché et broyé, est mélangé à un mélange d'eau déminéralisée et d’éthanol 96% BIO (70/30-p/p), en proportion 1/10.

Une extraction est réalisée à 50°C, pendant 2 heures sous agitation. La phase solide est ensuite séparée de la phase liquide au moyen d’un décanteur centrifuge. Les drèches sont séparés. Un extrait brut est ainsi obtenu (turbidité environ 1200 NTU).

Une série de filtrations sur plaques de cellulose jusqu’à 0,2 pm sont ensuite réalisées, ce qui permet l’obtention d’un filtrat stérile, suspendu dans de l’éthanol à 30% (taux de matière sèche environ 1 ,2%).

Le filtrat stérile est ensuite concentré sous vide (<50 mbar) à une température maximale de 50°C). Le distillât est séparé.

Un extrait concentré aqueux est ainsi obtenu, contenant environ 6,5% (p/p) de matière sèche cible, pour environ 7,5% (p/p) au maximum de matière sèche.

Puis, une étape de pasteurisation est réalisée à 120°C pour un chambrage d’environ 30s. A ce stade, la matière sèche cible est d’environ 6,5% (p/p) pour environ 7,5% (p/p) au maximum de matière sèche.

Une standardisation est ensuite réalisée, dans de la glycérine à 60% (2% MS) avec ajout d’eau si nécessaire, sous agitation et à une température d’environ 50°C.

Le mélange est ensuite filtré sur plaques de cellulose jusqu’à 0,45 pm à une température d’environ 50°C, et l’extrait final est obtenu.

Exemple 2 : Préparation de l’huile de pomme

Une huile de pomme est préparée selon le protocole suivant : Des pépins de pomme sont conditionnés à 60°C, puis pressés. L'huile de pression est ensuite filtrée puis stockée en chambre froide.

L’huile est ensuite séchée, décolorée, décirée, désodorisée puis conditionnée sous azote.

Exemple 3 : Préparation de l’eau de pomme

Une eau de pomme est préparée selon le protocole suivant :

Du marc de pomme séché est distillé à la vapeur d’eau au moyen d’un générateur de vapeur, à un débit de 500KG/h sur grande cuve (2500L). La vapeur traverse la masse de plante sèche contenue dans le panier positionné dans la cuve. Puis, une condensation des vapeurs de sortie est réalisée. Le résidu solide est séparé.

Le distillât (hydrolat brut) est traité à une température de 35-40°C.

Un essai préalable en laboratoire est réalisé par addition de stabilisants, pour obtenir un pH final compris entre 4,0 et 4,6.

Des conservateurs sont ensuite incorporés : 0,1% (p/p) sorbate K (1 kg) + 0,4% (p/p) benzoate Na (4kg) sous agitation moyenne, à une température d’environ 25°C pendant 30 minutes. 0,22% (p/p) d’acide citrique (2,2 kg) est ajouté sous agitation moyenne à une température d’environ 25°C pendant 1h. Le pH est ajusté si nécessaire entre 4,0 et 4,6 à l’aide d’une solution (10% p/p) d’acide citrique. Une étape de contrôle du pH peut ensuite être réalisée pour vérifier que le pH se situe entre 4,0 et 4,6.

Une étape de pré-filtration et de filtration stérilisante sur plaque 0,2 μm ou équivalent, puis une étape de pasteurisation complémentaire sont réalisées.

Un hydrolat stérile est obtenu, qui est conditionné et soumis à des contrôle physicochimiques et microbiologiques.

Exemple 4 : Effet du complexe de marc de pomme, huile de pomme et eau de pomme sur la synthèse des GAGs acides

Des expiants de 12±1 mm de diamètre sont préparés à partir d’une plastie prélevée sur une femme de type caucasien, phototype-IL Ils sont maintenus en survie en milieu BEM (BIO-EC’s Expiants Medium) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO ₂ . Un complexe de pomme, incorporé dans un châssis formule et comprenant 6% d’eau de pomme, 0,5% d’extrait de marc de pomme et 0,2% d’huile de pomme est appliqué sur les expiants de peau, en comparaison avec le châssis formule seul (placebo), à raison de 2 pl par expiant (2 mg/cm2) et étalés à l’aide d’une spatule (JO). Le renouvellement du traitement est réalisé à J1 , J4, J6, J8. Les expiants de peau sont récupérés à J8, fixés dans le formol, inclus en paraffine puis coupés pour colorations histologiques. La viabilité cellulaire des structures épidermiques et dermiques est observée d’une part après coloration au trichrome de Masson variante de Goldner. En parallèle, les glycosaminoglycanes (GAGs) acides sont visualisés par du bleu alcian P.A.S (Periodic Acid Schiff), et les GAGs neutres par le réactif de Schiff. Une analyse semi-quantitative de la surface des marquages est ensuite effectuée par une analyse d’images. Une augmentation de 302% de la synthèse des GAGs acides est mesurée sur l’expiant traité par le complexe de pomme, par rapport au placebo.

Le complexe de pomme stimule la synthèse de molécules qui captent et retiennent l’eau, notamment les GAGs acides, pour une meilleure hydratation cellulaire.

Exemple 5 : Effet du complexe de marc de pomme, huile de pomme et eau de pomme sur la synthèse du glucose

Des expiants de 12±1 mm de diamètre sont préparés à partir d’une plastie prélevée sur une femme de type caucasien, phototype-IL Ils sont maintenus en survie en milieu BEM (BIO-EC’s Expiants Medium) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO ₂ .

Un complexe de pomme, incorporé dans un châssis formule et comprenant 20% d’eau de pomme, 0,5% d’extrait de marc de pomme et 0,1 % d’huile de pomme, est appliqué sur les expiants de peau, en comparaison avec le châssis formule seul (placebo), à raison de 2 pl par expiant (2 mg/cm2) et étalés à l’aide d’une spatule (J0). Le renouvellement du traitement est réalisé à J1 , J4, J6, J8. Le dosage du glucose est effectué sur les expiants de peau, après broyage et extraction, et sur les surnageants de culture à J8, 3h après le dernier re-traitement. Il est réalisé à l’aide du Kit GLUG HK Gen.3 (Roche, ref 08057800190) par une méthode enzymatique colorimétrique à l'hexokinase. Une augmentation de 32% de la synthèse du glucose est mesurée sur l’expiant traité par le complexe de pomme, par rapport au placebo.

Le complexe d’actifs de pomme stimule la synthèse du glucose dans le tissu cutané, molécule à l’origine de la production d’énergie cellulaire (Tableau 1 ci-dessous).

[Tableau 1]

Exemple 6 : Effet du complexe de marc de pomme, huile de pomme et eau de pomme sur la synthèse d’ATP

Des expiants de 12±1 mm de diamètre sont préparés à partir d’une plastie prélevée sur une femme de type caucasien âgée, phototype-ll. Ils sont maintenus en survie en milieu BEM (BIO-EC’s Expiants Medium) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO2. Un complexe de pomme, incorporé dans un châssis formule et comprenant 20% d’eau de pomme, 0,5% d’extrait de marc de pomme et 0,1 % d’huile de pomme, est appliqué sur les expiants de peau, en comparaison avec le châssis formule seul (placebo), à raison de 2 pl par expiant (2 mg/cm2) et étalés à l’aide d’une spatule (J0). Le renouvellement du traitement est réalisé à J1 , J4, J6, J8. Le dosage de l’ATP est effectué sur les expiants de peau à J8, après broyage et extraction, 3h après le dernier re-traitement.

Le dosage est réalisé à l’aide du kit ATP Assay kit (Abeam ref. ab83355, sensibilité 1 pM), basé sur la réaction de phosphorylation du glycérol pour générer un produit facilement détectable par colorimétrie (ODmax = 570 nm) ou fluorimétrie (Ex/Em = 535/587 nm).

Une augmentation de 45% de la synthèse d’ATP est mesurée sur l’expiant traité par le complexe de pomme, par rapport au placebo.

Le complexe d’actifs de pomme stimule la synthèse d’ATP qui fournit l’énergie aux cellules (Tableau 2 ci-dessous).

[Tableau 2]

Exemple 7 : Effet du marc de pomme et de l’huile de pomme sur le métabolisme des kératinocytes

Des kératinocytes épidermiques humains normaux sont ensemencés en monocouche et en milieu Keratinocyte-SFM. Ils sont cultivés à une température de 37°C, sous atmosphère à 5% de CO ₂ et saturée en humidité. Après 24h d’incubation, les cellules sont traitées ou non (témoin) avec l’extrait de marc de pomme ou l’huile de pépins de pomme. Le métabolisme cellulaire est évalué par quantification de l’activité mitochondriale (par mesure d'hydrolyse du MTT) à 24h, 72h et 144h. La référence positive correspond à un mélange à 0.25 ng/ml d’EGF (Epidermal Growth Factor) et 25 pg/ml de PE (Pituitary Extract).

Une augmentation de 19% du métabolisme des kératinocytes (représentatif de leur activité prolifératrice) est mesurée en présence de l’huile de pépins de pomme après 144h de traitement et de 35% avec l’extrait de marc de pomme après 24h en comparaison du témoin non traité.

Il est à noter que, s’agissant des concentrations de mélange utilisées, un facteur de transposition existe entre les modèles in vivo et les modèles in vitro dû à la biodisponibilité des actifs en formulation lorsque appliqués in vivo. En tout état de cause, la concentration utilisée respecte les usages habituels en vigueur dans l’industrie cosmétique pour la validation des effets in vitro versus in vivo.

L’extrait de marc et l’huile de pomme renforcent l’épiderme en stimulant le renouvellement des kératinocytes au cours du temps (Tableau 3 ci-dessous).

[Tableau 3] Exemple 8 : Effet du marc de pomme sur la formation des radicaux superoxyde

L’effet anti-radicalaire de l’extrait de marc de pomme vis-à-vis du radical superoxyde O ₂ °’ est mesuré par méthode acellulaire. L’extrait de marc de pomme est mis en contact avec des réactifs générateurs de radicaux libres selon les réactions suivantes :

NADH + H ⁺ + PMS →► NAD ⁺ + PMSH ₂

PMSH2 + 2O ₂ →► 2O ₂ °- + 2 H ⁺ + PMS

Un anion superoxide O ₂ °' est formé à partir du système chimique: PMS ou Phénazine MethoSulfate / NADH ₂ . Celui ci provoque la réduction du NitroBleu de Tétrazolium (NBT) en bleu de formazan, qui absorbe à 570 nm.

NBT + 4 O ₂ °' + 4 H ⁺ diformazan + 4 O ₂ + 2 HCl

Cette réaction se déroule à 28°C, elle est suivie sur une cinétique de 5 minutes avec une mesure de la Densité Optique toutes les 20 secondes. Elle est linéaire pendant une période donnée, la pente de cette droite exprime alors l'activité réductrice de l'anion superoxyde. L'efficacité antiradicalaire d'un composé est établie en comparant la pente de la droite en présence de l'actif à celle d'un témoin sans piégeurde radicaux. Cette efficacité est exprimée en équivalent rutine après comparaison avec celle d'une solution de rutine de titre connu.

Une diminution de 25% minimum de la formation de radicaux superoxydes est mesurée en présence de l’extrait de marc de pomme.

Il est à noter que, s’agissant des concentrations de mélange utilisées, un facteur de transposition existe entre les modèles in vivo et les modèles in vitro dû à la biodisponibilité des actifs en formulation lorsque appliqués in vivo. En tout état de cause, la concentration utilisée respecte les usages habituels en vigueur dans l’industrie cosmétique pour la validation des effets in vitro versus in vivo.

L’extrait de marc de pomme protège la peau en réduisant la formation des radicaux superoxyde (Tableau 4). Il peut donc permettre de réduire les effets délétères des attaques oxydantes causées par différents types de stress.

[Tableau 4]

Exemple 9 : Effet du marc de pomme, de l’huile de pomme et de l’eau de pomme sur la réponse inflammatoire induite par un stress physique (UV)

Des kératinocytes épidermiques humains normaux sont ensemencés en monocouche et en miiieu Keratinocyte-SFM complet. Ils sont cultivés à une température de 37°C, sous atmosphère à 5% de CO ₂ et saturée en humidité. Les cellules sont traitées ou non (témoin) durant 48h avec l'eau de pomme, l’extrait de marc de pomme ou l’huile de pépins de pomme. 24h après le début du traitement, les cellules sont irradiées aux UV à 593 kJ/m ² pour induire un processus inflammatoire. La viabilité cellulaire après irradiation et traitement est déterminée par l’activité des mitochondries (mesure d’hydrolyse du MTT). Les cytokines pro- inflammatoires IL6 et TNFα sont dosées dans les surnageants des cultures cellulaires et quantifiées par méthode ELISA. Les valeurs obtenues sont ainsi rapportées à la viabilité.

Une diminution de 95% de la synthèse de TNFa est mesurée en présence de l’eau de pomme, par rapport au témoin non traité.

Une diminution de 43% de la synthèse d’IL6 est mesurée en présence de l’extrait de marc de pomme, par rapport au témoin non traité.

Une diminution de 69% de la synthèse d’IL6 est mesurée en présence de l’huile de pomme, par rapport au témoin non traité.

Il est à noter que, s’agissant des concentrations de mélange utilisées, un facteur de transposition existe entre les modèles in vivo et les modèles in vitro dû à la biodisponibilité des actifs en formulation lorsque appliqués in vivo. En tout état de cause, la concentration utilisée respecte les usages habituels en vigueur dans l’industrie cosmétique pour la validation des effets in vitro versus in vivo. Les 3 actifs de pomme protègent la peau en réduisant la réponse inflammatoire (Tableau 5). Ils peuvent donc permettre de réduire la sensibilité/fragilité de la peau face aux agressions extérieures et apaiser les peaux fragiles.

[Tableau 5]

Exemple 10 : Effet du marc de pomme, de l’huile de pomme et de l’eau de pomme sur la réponse inflammatoire induite par un stress chimique (PMA)

Des kératinocytes épidermiques humains normaux sont ensemencés en monocouche et en milieu KGM Gold. Ils sont cultivés à une température de 37°C, sous atmosphère à 5% de CO ₂ et saturée en humidité. Les cellules sont pré-traitées ou non (témoin) avec l’eau de pomme, l’extrait de marc de pomme, l’huile de pépins de pomme et le complexe des 3 actifs dans les mêmes proportions. Après 24h de traitement, les cellules sont stressées avec 0.1 μg/ml de PMA et incubées overnight pour induire un processus inflammatoire. La cytokine pro-inflammatoire TNFa est dosées dans les surnageants des cultures cellulaires et quantifiées par méthode ELISA. En parallèle, la viabilité cellulaire est mesurée pour chaque condition. La technique utilise le pouvoir réducteur des cellules viables pour convertir la résazurine en résorufine fluorescente (PrestoBlue™ Assay). Les valeurs obtenues pour le TNFα sont ainsi rapportées à la viabilité. Un test de Student a été réalisé pour vérifier la significativité des résultats par rapport au contrôle PMA.

Une synergie entre les actifs du complexe de pomme est observée par rapport aux effets des actifs pris séparément (Tableau 6). Une diminution de 5% de la synthèse de TNFa est mesurée en présence de l’eau de pomme, par rapport au témoin non traité et stressé au PMA.

Une augmentation de 15% de la synthèse de TNFa est mesurée en présence de l’extrait de marc de pomme, par rapport au témoin non traité et stressé au PMA. Une diminution de 2% de la synthèse de TNFa est mesurée en présence de l’huile de pomme, par rapport au témoin non traité et stressé au PMA.

Une diminution de 20% de la synthèse de TNFa est mesurée en présence du complexe des 3 actifs de pomme, par rapport au témoin non traité et stressé au PMA.

[Tableau 6]

Exemple 11 : Effet de l’eau de pomme sur la différenciation des kératinocytes et la fonction barrière

Des kératinocytes épidermiques humains normaux sont ensemencés en monocouche et en milieu Keratinocyte-SFM complet. Ils sont cultivés à une température de 37°C, sous atmosphère à 5% de CO ₂ et saturée en humidité. Après 8 jours de culture, les cellules sont traitées ou non (témoin) avec l’eau de pomme, ou le chlorure de calcium à 1 .5 mM (référence). Les cellules sont incubées pendant 3 jours supplémentaires. Après rinçage au tampon PBS, fixation et perméabilisation, la filaggrine est révélée par immunomarquage et les noyaux sont colorés au Hoechst 33258. La différenciation kératinocytaire est évaluée par quantification de l’intensité de marquage de la filaggrine. Une augmentation de +114% du marquage de la filaggrine, marqueur de différenciation épidermique, est mesurée en présence de l’eau de pomme, par rapport au témoin non traité.

Il est à noter que, s’agissant des concentrations de mélange utilisées, un facteur de transposition existe entre les modèles in vivo et les modèles in vitro dû à la biodisponibilité des actifs en formulation lorsque appliqués in vivo. En tout état de cause, la concentration utilisée respecte les usages habituels en vigueur dans l’industrie cosmétique pour la validation des effets in vitro versus in vivo.

L’eau de pomme nourrit et hydrate la peau en stimulant la différenciation des kératinocytes et la fonction barrière (Tableau 7). Elle peut donc contribuer à maintenir une hydratation optimum au sein du tissu cutané.

[Tableau 7]

Exemple 12 : exemple de composition de soin du visage de type Crème

Les pourcentages sont donnés en masse par rapport à la masse totale de la composition.

[Tableau 8]

Exemple 13 : exemple de composition de soin du visage de type sérum

Les pourcentages sont donnés en masse par rapport à la masse totale de la composition.

[Tableau 9]