On sait que la jonction dermo-épidermique (JDE) est une structure complexe qui assure la cohésion et les échanges entre le derme et l'épiderme, indispensables au bon fonctionnement de la peau.

Il a été découvert, et ceci constitue le fondement de la présente invention qu'il était possible de ralentir ou traiter le vieillissement cutané, en particulier de diminuer la profondeur des rides et/ou ralentir leur apparition et/ou restaurer la tonicité et l'élasticité de la peau et/ou ralentir la diminution de tonicité et d'élasticité de la peau, par un procédé de traitement cosmétique répondant à un nouveau concept consistant à favoriser au moyen d'un agent cosmétiquement acceptable, l'adhésion des kératinocytes de la couche basale épidermique à la jonction dermo-épidermique, notamment au collagène de type IV, encore désigné par collagène IV, constituant majeur de ladite jonction dermo-épidermique.

Ainsi, dans son aspect le plus général, la présente demande vise à couvrir un procédé de traitement cosmétique pour ralentir ou traiter le vieillissement cutané, en particulier pour diminuer la profondeur des rides et/ou pour ralentir leur apparition et/ou pour restaurer la tonicité et l'élasticité de la peau et/ou ralentir la diminution de tonicité et d'élasticité de la peau, caractérisé en ce que l'on applique sur la peau une quantité d'au moins un agent favorisant l'adhésion des kératinocytes de la couche basale épidermique à la jonction dermo-épidermique, notamment au collagène IV de ladite jonction.

Il a, par ailleurs, été montré que des résultats particulièrement remarquables sont obtenus dans le cadre de la présente invention, lorsque l'agent favorisant l'adhésion précité est appliqué en association avec une quantité efficace d'au moins un agent stimulant la synthèse de collagène IV et/ou avec une quantité efficace d'au moins un agent stimulant la synthèse de collagène VII.

Par l'expression"agent stimulant la synthèse de collagène IV ou de collagène VII", on entend dans le cadre de la présente description, tout agent susceptible de produire ou de maintenir une quantité élevée de collagène IV dans

la jonction dermo-épidermique, soit par une augmentation de la biosynthèse, soit par une inhibition des enzymes dégradant les protéines constituant ce produit.

Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, 1'agent favorisant l'adhésion précité est un sel ou un complexe de métal divalent, en particulier un sel ou un complexe de magnésium ou de zinc, ou un mélange de sels ou de complexes de métaux divalents.

Préférentiellement, le sel ou le complexe de métal divalent est un chlorure de métal divalent ou un sel ou un complexe de métal divalent avec un acide organique cosmétiquement acceptable tel qu'un acide aminé comme par exemple l'acide aspartique, l'asparagine, la proline, 1'acide glutamique. la méthionine, la leucine, l'histidine ou la lysine, ou un alpha-hydroxy-acide aliphatique en C2-CI2, en particulier l'acide citrique, 1'acide glycolique, 1'acide gluconique, l'acide malique, 1'acide lactique ou l'acide hydroxy-2-butyrique.

Selon un mode de réalisation actuellement préféré de l'invention, ledit sel ou complexe de métal divalent est l'aspartate de magnésium ou le chlorure de magnésium.

Selon une caractéristique particulière du procédé conforme à la présente invention, 1'agent favorisant l'adhésion précité est appliqué sous forme d'une composition le contenant en une quantité comprise entre 0,0001 et 5 °/Ó. de préférence entre 0,001 et 1 % en poids, par rapport au poids total de la composition.

Tout agent stimulant la synthèse de collagène IV peut tre utilisé dans le cadre du procédé conforme à la présente invention.

Selon un mode de réalisation actuellement préféré, 1'agent stimulant la synthèse de collagène IV est choisi parmi les soyasaponines et les soyasapogénols, de préférence de type A et de type B, et les extraits végétaux riches en de tels composés, de préférence les extraits de soja (Glycine max) ou de luzerne (Medicago sativa).

Selon un autre mode de réalisation préféré, l'agent stimulant la synthèse de collagène IV est un totum de saponines de racines de Medicago sativa.

De mme, tout agent stimulant la synthèse de collagène VII peut tre utilisé dans le cadre de la présente invention.

Selon un mode de réalisation actuellement préféré, 1'agent stimulant la synthèse de collagène VII est un extrait de Potentilla erecta.

Selon un autre mode de réalisation préféré, 1'agent stimulant la synthèse de collagène VII est un extrait de Bertholletia en particulier de Bertholletia excelsa.

Selon un second aspect, la présente demande vise à couvrir de nouvelles compositions cosmétiques particulièrement adaptées à la mise en oeuvre du procédé décrit précédemment.

Ces compositions sont essentiellement caractérisées par le fait qu'elles contiennent une quantité efficace d'au moins un agent favorisant l'adhésion des kératinocytes de la couche basale épidermique à la jonction dermo-épidermique, notamment au collagène IV de ladite jonction, ledit agent étant choisi parmi les sels ou complexes de magnésium ou de zinc en association avec une quantité efficace d'au moins un agent stimulant la synthèse de collagène IV et/ou une quantité efficace d'au moins un agent stimulant la synthèse de collagène VII.

Dans ces compositions, les différents agents favorisant l'adhésion, stimulant la synthèse de collagène IV ou la synthèse de collagène VII sont tels que décrits précédemment dans le cadre de la description générale du procédé conforme à l'invention.

Les compositions de l'invention pourront comprendre en outre avantageusement au moins une substance favorisant la synthèse des constituants de la matrice extracellulaire de la peau.

Par ailleurs, les compositions selon l'invention peuvent contenir, en outre au moins une substance choisie dans le groupe constitué par les vitamines, en particulier les vitamines du groupe A (rétinol) et C et leurs dérivés tels que les esters notamment les palmitates et propionates, les tocophérols, les xanthines, en particulier la caféine ou la théophylline, les rétinoides, en particulier la vitamine A acide, les extraits de Centella asiatica, les acides asiatiques, madécassiques et leurs dérivés glycosylés tels que l'asiaticoside ou le madécassoside. les extraits de Siegesbeckia orientalis, les extraits de Commiphora mukul et les extraits d'Eriobotrya japonica, les dérivés de silicium cosmétiquement acceptables tels que des polysiloxanes, des silanols et des silicones, les alpha-céto-acides aliphatiques en C3-C12, en particulier l'acide pyruvique, les alpha-hydroxy-acides aliphatiques en C2-Cl2, en particulier l'acide citrique, I'acide glycolique, 1'acide malique et l'acide lactique, les acides aminés, en particulier l'arginine, la citrulline et la thréonine, les céramides, les glycocéramides, les dérivés de sphingosine, en

particulier les céramides de type II et III, les phospholipides, la forskoline et ses dérivés, les extraits de Coleus, les extraits de Tephrosia, les inhibiteurs d'élastase en particulier t'acide ellagique, les peptides de soja, les inhibiteurs de collagénase en particulier les peptides et les extraits végétaux tels que les extraits de racine de Coptidis, les extraits de racine de Scutellaria baicalensis Georgi, les flavonoïdes tels que la wogonine, la baicaline et la baicaléine, les extraits hydro-éthanoliques de feuilles de Ginkgo biloba, de Mosla chinensis, de Salvia officinalis, de Cinnamomum cassia, les extraits cathéchiques de Camellia sinensis et les extraits aqueux de coques de fèves de Theobroma cacao, les anti-inflammatoires en particulier les inhibiteurs de phospholipase A2, les apaisants en particulier les extraits de réglisse, l'acide glycyrrhétinique, le glycyrrhizinate d'ammonium, les agents hydratants en particulier les polyols, le propylène glycol, le butylène glycol, le glycérol, 1'acide hyaluronique, les agents anti-vergetures, en particulier les extraits de Marron d'Inde et l'escine, les agents protégeant ou améliorant la microcirculation, en particulier les bioflavonoïdes de Ginkgo biloba, 1'isodon, les extraits d'Ami visnaga, la visnadine, la ruscogénine, les antiradicalaires en particulier les polyphénols tels que les OPC (Oligomères Procyanidoliques) et leurs dérivés, des extraits végétaux en particulier des extraits de Curcuma longa, les agents anti-séborrhéiques tels qu'un inhibiteur de 5-alpha-réductase, en particulier un extrait de Pygeum africanum, et les agents stimulant la microcirculation sanguine, tels que la cépharanthine et le nicotinate de méthyle.

Les compositions selon l'invention peuvent avantageusement contenir des substances protégeant la peau des effets nocifs du soleil telles que les filtres solaires seuls ou en combinaison, notamment les filtres UV A et les filtres UV B, en particulier les oxydes de titane et les oxydes de zinc, 1'oxybenzone, le Parsol MCX, le Parsol 1789 et les filtres d'origine végétale, les substances limitant les dommages causés à l'ADN, en particulier celles limitant la formation de dimères de thymine tel que l'acide ascorbique et ses dérivés et/ou le Photonyl@, et les substances contribuant à l'élimination des taches de vieillissement tels que les inhibiteurs de la synthèse de mélanine ou de tyrosinase.

D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art à la lumière de la description explicative qui va suivre faite en référence à plusieurs exemples rapportant des essais effectués, ainsi que des exemples de formulations cosmétiques donnés simplement à titre

d'illustration et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention.

Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids sauf indication contraire.

EXEMPLE 1 Essai d'adhérence de kératinocvtes humains normaux sur collagène de type IV à 1'aide d'un agent selon l'invention favorisant l'adhésion des kératinocvtes à la jonction dermo-épidermique. constitué dans cet essai par un chlorure ou un aspartate de magnésium.

Le présent essai a pour but de démontrer l'efficacité d'un agent favorisant l'adhésion des kératinocytes à la jonction dermo-épidermique selon l'invention, de préférence constitué par un chlorure ou un aspartate de magnésium.

Dans ce cadre, on réalise cet essai de la manière suivante : 1. Tapissasse des surfaces d'adhésion avec du collagène de type IV Des puits de micro-plaques (Falcon) sont recouverts avec 6 ig/CM2 de collagène humain de type IV, (de chez Sigma) stérile.

Chaque puits est ensuite incubé pendant une nuit à + 4°C avec une solution d'albumine bovine, BSA de chez Sigma à 4 mg/ml.

Les puits sont ensuite rincés deux fois avec un tampon phosphate, PBS (Phosphate Buffered Saline) de chez Gibco.

2. Préparation des cultures de kératinocytes humains normaux Les cellules épidermiques sont obtenues à partir de peau chirurgicale saine provenant de la zone mammaire d'un donneur caucasien de sexe féminin âgé de 53 ans.

Les fragments de peau sont incubés dans de la trypsine 0,25 % p/v pendant 18 heures à + 4°C permettant la séparation derme/épiderme et l'obtention par agitation, d'une suspension de cellules épidermiques. La neutralisation de la trypsine s'effectue avec du sérum de veau foetal, SVF de chez Gibco.

Les cellules sont ensemencées dans des flacons définissant une surface de 75 cm2 et cultivées dans du milieu de prolifération pour kératinocytes K-SFM de chez Gibco, jusqu'à confluence où elles seront sous-cultivées.

Les cellules utilisées pour les expériences d'adhérence sur le substrat collagénique n'ont pas été sous-cultivées au-delà de la première sous-culture (dénommées PO ou PI).

3. Traitement des kératinocvtes avec le produit de l'invention constitué soit par du chlorure soit par de l'aspartate de magnésium.

De la trypsine (trypsine-EDTA 0,1 %-0,02 % p/v de chez Gibco) est ajoutée aux cultures de kératinocytes, et la suspension cellulaire est placée dans du milieu E 199 de chez Gibco complémentée de 2 mM de L-glutamine, 4 mg/ml de BSA et contenant 0,25-0,5-1 mM,, de chlorure de magnésium ou 0,25 mM d'aspartate de magnésium, selon l'invention.

Les kératinocytes sont alors incubés pendant 30 minutes à + 4 °C avant de procéder à l'étape d'adhérence au substrat tapissé de collagène IV.

4. Mesure de l'adhérence des kératinocvtes au collagène de type IV Dans chaque puits, les kératinocytes sont ensemencés à la densité de 93000 cellules/cm2 dans du milieu E 199 de chez Gibco contenant 2 mM de L- glutamine de chez Gibco et 4 mg/ml de BSA (Bovine Serum Albumin). Après une heure d'incubation à + 4 °C, les puits sont rincés avec du PBS, les cellules adhérentes sont ensuite lysées par de la soude 0,1 N et les protéines cellulaires sont alors quantifiées par la méthode colorimétrique et l'acide bicinchoninique (BCA de chez Sigma).

Parallèlement, un étalonnage est réalisé à l'aide de la BSA solubilisée dans de la soude 0,1 N permettant de convertir les valeurs de densité optique (DO) en microgrammes (ug) de protéines par puits.

5. Analyse statistique L'adhérence A est exprimée en microgrammes de protéines cellulaires par puits de culture et les valeurs présentées au tableau I correspondent à une valeur moyenne obtenue à partir de 6 puits par concentration de produits, à savoir d'une part, des cellules non traitées, des cellules traitées avec une concentration de 0,25 mM de chlorure ou d'aspartate de magnésium, des cellules traitées avec une concentration de 0,5 mM de chlorure de magnésium et des cellules traitées avec une concentration de 1 mM de chlorure de magnésium.

Ces valeurs d'adhérence entre cellules traitées et non traitées ont été comparées par le test t de Student au seuil p = 0,05 pour juger de leur niveau de significativité.

Les résultats obtenus par l'expérience sur les kératinocvtes d'un donneur de 53 ans sont répertoriés au tableau I ci-après : TABLEAU I A Ecart type Test t de Student Témoin 3, 52 0ß9 Chlorure de magnésium 4,32 0,7 Non significatif (p=0,12) (0,25 mM) Chlorure de magnésium 4,54 1, 1 Non significatif (p=0,1) (0,5 mM) Chlorure de magnésium 4,57 0,75 Significatif (p=0,05) (1 mM) Aspartate de magnésium 5, 39 0, 8 Significatif (p=0, 004) (0.25 mM) I il Où A = Adhérence en ug de protéine par puits (moyenne) A partir des résultats répertoriés au tableau I ci-dessus, on observe par rapport aux cultures témoins une augmentation de l'adhérence des kératinocytes au collagène de type IV en présence de chlorure de magnésium dès la concentration de 0,25 mM mais celle-ci n'est statistiquement significative qu'à partir de 1 mM.

Le taux d'augmentation de l'adhérence obtenu avec le chlorure de magnésium à la concentration de 1 mM est de +31 %.

En ce qui concerne l'aspartate de magnésium, celui-ci favorise également l'adhérence des kératinocytes mais plus fortement que ne le fait le chlorure de magnésium. En effet dès la concentration de 0,25 mM, 1'augmentation de l'adhérence est hautement significative.

Le taux d'augmentation de l'adhérence obtenu avec l'aspartate de magnésium à la concentration de 0,25 mM est de +54 %.

Dans ces conditions, on constate ainsi que ces sels de magnésium, et plus particulièrement l'aspartate de magnésium, sont particulièrement intéressants car ils produisent des résultats hautement significatifs à de faibles doses, ce qui permet d'envisager un emploi à des concentrations faibles, présentant une bonne sécurité d'utilisation.

Exemple 2 de l'invention 1. Composition de crème anti-rides.

L-aspartate de magnésium................. 0.,. 3. g Extrait sec de Potentilla erecta........ 0, 01 g Acide hyaluronique (sel de sodium) 0 06 g Glycérol 5., 1 $ g Extrait sec total de Centella asiatica 0, 1. g Solution de palmitate de vitamine A (à 1 Million UI/g) 0, 1 g <BR> <BR> <BR> Acétate de vitamine E .............................. 0,5 g<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> Extrait sec de Perilla ..............................0,5 g<BR> Acétate de vitamine E 0,5 g<BR> Extrait sec de Perilla............................... 0,5 g Excipient émulsionné H/E plus parfum et conservateurs qsp 1 00g 2. Essai de cette composition cosmétique pour évaluer son efficacité anti- rides.

A-Principe Afin d'évaluer l'efficacité anti-rides de ce produit cosmétique au niveau de"la patte d'oie"des répliques négatives de peau sont effectuées au temps 0, puis après 28 jours d'application bi-quotidienne de la composition ci-dessus, sous forme d'une crème.

Ces répliques, éclairées par une lumière rasante générant des ombres portées derrière chaque ride, sont analysées à l'aide d'un logiciel d'analyse d'images dénommé"Quantirides"disponible dans le commerce et mis au point par la société MONADERM (Monaco).

B-Appareillaze B. 1-Pour la prise d'empreintes On utilise des couronnes adhésives de chez 3M, diamètre interne : 24 mm, diamètre externe : 40 mm.

On utilise pour la prise d'empreintes du produit Silflo de chez FLEXICO UK à base d'un polymère de silicone combiné à un catalyseur.

B. 2-Pour l'analyse des empreintes On utilise une caméra type COHU 4910-RS 170 et CCIR Monochrome CCD caméra haute définition et à très faibles bruits munie d'un objectif à focal fixe et d'un zoom manuel Lens 18 X 108 mm F 2,5 ; -une carte d'acquisition image haute résolution en temps réel, -une lampe éclairage rasant Monaspot à 35'd'incidence,, -un statif Kaiser RS 1, un plateau noir mate anti-reflet 450 X 500 mm et colonne de 1.000 mm graduée en centimètres réglable en hauteur munie d'un bras de reproduction RAI, -un support spécifique pour poser et orienter les répliques, -le logiciel Quantirides précité, -un micro-ordinateur et une imprimante.

C-Protocole 1. Suiets volontaires 30 sujets âgés de 34 à 59 ans ont été sélectionnés et répartis de la façon suivante : 29 femmes et 1 homme.

2. Produit testé Le produit testé est la composition sous forme de crème décrite ci-dessus au paragraphe 1.

3. Application La composition cosmétique est appliquée deux fois par jour, matin et soir, sur toute une zone temporale du visage (patte d'oie) pendant 28 jours. La quantité appliquée correspond aux habitudes d'utilisation et peut tre estimée à environ 1,5 à 2 mg par cm2. L'autre zone temporale"non traitée"sert de témoin.

Durant les trois jours précédant le début du test et pendant toute sa durée, aucun autre produit cosmétique n'est utilisé sur la zone traitée et la zone témoin.

4. Conditions expérimentales Température : de 20 à 22°C Hygrométrie : de 40 à 50 % HR Une empreinte des zones témoins est traitée et réalisée au temps 0 et après 28 jours de traitement. On positionne sur la zone d'étude une couronne adhésive. Une fine couche de Silflo° mélangée extemporanément à quelques gouttes de catalyseur (3 gouttes pour 3 g de Silflo@) est appliquée à l'intérieur de la zone délimitée par la rondelle. La pâte doit tre soigneusement étalée afin d'éviter le formation de bulles d'air. Après polymérisation de la pâte, 4 minutes 30 de séchage, la rondelle est décollée de la peau, entraînant avec elle la réplique. A la fin de l'étude, ces empreintes sont analysées à l'aide du logiciel Quantirides.

D. Paramètres étudiés Pour chaque sujet et pour chaque côté du visage, à JO (la veille de la première application et J28 (28C"'e jour d'application), le traitement des empreintes par l'analyseur d'images a permis de calculer les paramètres suivants, représentatifs de l'état de ridulation de la peau : a) la surface totale des rides en mm2, b) le nombre de rides, c) la longueur totale de rides en mm, d) la longueur moyenne en mm, e) la profondeur moyenne en pm, E. Exploitation des résultats : évolution du côté traité et du côté témoin 1. Calcul Variation moyenne des paramètres On calcule pour chaque site et chaque paramètres : Vai-iatioii. (%) Avec : m (t) = valeur moyenne du paramètre étudié au temps t m (0) = valeur moyenne du paramètre étudié au temps 0

2. Sisnificativité statistique Test de Wilcoxon On utilise le test non paramétrique de Wilcoxon permettant de tenir compte du petit nombre de sujets et applicable à l'étude des paramètres biologiques in-vivo sur l'homme.

On effectue une comparaison des séries appariées de la façon suivante : on forme pour chaque paire la différence puis on classe les différences par valeur absolue croissante en mentionnant par ailleurs pour chacune si elle positive ou négative, les différences nulles sont éliminées.

Les quantités à considérer sont : M = somme des rangs de différence de signe moins P = somme des rangs de différence de signe plus T = le plus petit des deux totaux M ou P La limite de significativité admise pour n < à 10 personnes est inférieure à 10%.

La limite de significativité admise pour n > à 10 personnes est inférieure à 5%.

Le test de Wilcoxon a été effectué sur la différence (nz (t)-nl (0)) aux différents temps sur les deux sites pour comparer l'évolution du site traité par rapport au site témoin.

Un test de Wilcoxon a été effectué sur les valeurs brutes au temps 0 (ni (0)) pour comparer l'évolution de chaque site dans le temps.

3. Résultats Les résultats obtenus par l'expérience sont répertoriés dans le tableau II ci-après.

Les sites témoins et traités sont comparables au temps 0.

Les valeurs portées en colonne 4 sous le titre"variation totale" correspondent à la différence entre la variation chez les sujets traités et la variation chez les sujets témoins.

TABLEAU II Variation Variation Variation Statistiques témoin traité totale (Wilcoxon) % % % Surface totale 6,6-19,7-26,3 Significatif (p = 0,015) des rides (mm) Nombre de rides 8 Significatif (p = 0,004) Longueur totale Significatif (p = 0,0014) (mm) Longueur-2,6-1,7 0,9 Non significatif moyenne (mm) Profondeur 0,3-2,0-2, 3 Non significatif moyenne (m)

E. Conclusion Après application bi-quotidienne pendant 28 jours de la composition selon l'invention en comparant l'évolution de la patte d'oie traitée par rapport à la patte d'oie témoin, on constate une diminution significative des rides et des ridules et le ralentissement de leur formation : la surface totale des rides diminue de 26 %, leur nombre de 31 % et la longueur totale de 30 %.

Exemple 3 de l'invention : crème anti-rides de nuit E/H.

Aspartate de magnésium...................... 0,3 g Extrait sec de Potentilla erecta...................... 1 g Glycérol...................... 5 g Propylèneglycol...................... 2 g CéramideIII...................... 0,04 g Filtres UV...................... 9 g Méthyl silanol mannuronate...................... 0,05 g Extrait sec de Perilla frutescens...................... 1 g Extrait sec de Centella asiatica...................... 0,5 g Peptide de soja...................... 1 g Palmitate de rétinol...................... 0, 2 g Excipient émulsionné E/H.............. qsp. 100 g

Exemple 4 de t'invention : crème anti-relachement, ralentit et combat l'apparition des rides.

Aspartate de magnésium..................... 0,2 g Glycérol...................... 5 g Propylèneglycol...................... 2 g CéramideII...................... 0,04 g Parsol MCX...................... 5 g Oxybenzone...................... 3 g Méthyl silanol mannuronate...................... 0,05 g Madécassoside...................... 0,5 g Rétinol............................ 4000 Ul Saponines de Medicago sativa 0, 02 g Palmitate de rétinol 0,04 g Excipient émulsion H/E qsp. 100 g Exemple 5 de l'invention : gel tenseur anti-rides.

Gluconate de zinc...................... 0, 3 g Extrait sec de Bertholletia...................... 0,3 g excelsa Soyasaponine de soja...................... 0,05 g Palmitate de rétinol...................... 0,06 g Acétate d'alpha-tocophérol...................... 0,1 g Acide lactique...................... 1,5 g Acide glycolique...................... 0,2 g Ethanol...................... 5 g Excipient gel................ qsp 100 g