本发明属于医药技术领域， 具体涉及二肽基肽酶 -IV抑制剂的盐的晶 型 I及其制备方法和应用。 背景技术

二肽基肽酶 -IV (DPP-IV)抑制剂是新一代口服 2型糖尿病治疗药物， 通过增强肠促胰岛素活性发挥作用， 属于非胰岛素治疗药物。与常规的治 疗糖尿病的药物相比， DPP-IV抑制剂没有体重增加和水肿等不良反应。

式 （1 ) 所示的化合物^ -2-[[7-(3-氨基哌啶 -1-基) -3,5-二甲基 -2-氧代 -2,3-二氢 -1/7-咪唑并 [4,5-b]吡啶 -1-基]甲基]苯甲腈 （说明书中简称化合物 A， 在专利申请 CN201010291056.9中已有描述） 为 DPP-IV抑制剂类化 合物， 对 DPP-IV有 的选择性。

式 （1 ) 在药物研发中晶型的研究非常重要， 化合物的晶型不同， 将导致其稳 定性、 溶解度等性质的不同。 因此本发明人对化合物 A或其盐的晶型进 行了大量的研究， 由此确认和发明了化合物 A的盐的晶型。 发明内容

本发明的目的是要解决上述存在的问题， 提供稳定性更好， 操作性更 好， 生物利用度和溶解度好的化合物 A或其盐的晶型及其制备方法。

本发明提供式 （1 ) 所示化合物 A的二盐酸盐的晶型 I： 使用 Cu-Ka 辐射， 以 2 角度 (° )表示的 X-射线粉末衍射在 8.7±0.2° 、 19.4±0.2° 、 23.5士 0.2。 、 27.2士 0.2。 处有特征峰。 式 （l )

所述的化合物 A的二盐酸盐的晶型 I，使用 Cu-Κα辐射，以 2 角度 (° ) 表示的 X-射线粉末衍射， 除上文所述的特征峰以外， 还在 12.5±0.2° 、 22.5士 0.2。 、 25.5±0.2。 处有特征峰。

所述的化合物 A的二盐酸盐的晶型 I，使用 Cu-Κα辐射，以 2 角度 (° ) 表示的 X-射线粉末衍射， 除上文所述的特征峰以外， 还在 11.7±0.2° 、 14.6士 0.2。 、 26.0士 0.2。 处有特征峰。

本发明还提供化合物 A的二盐酸盐的晶型 I的制备方法。

将化合物 A溶于有机溶剂中， 升温， 滴加一定化学计量比的盐酸， 滴加完毕后搅拌， 过滤， 干燥而得到化合物 A的二盐酸盐的晶型 I。

上述制备方法中所述的用来溶解化合物 A的"有机溶剂"选自含有 1-4 个碳原子的低级醇， 如甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 正丁醇、 异丁醇等； 含有 3-6个碳原子的低级酮， 如丙酮、 丁酮等； 乙腈； 丙腈或者四氢呋喃 等； 优选乙醇。

上述制备方法中所述的用来溶解化合物 A 的"有机溶剂"还可以是混 合溶剂，所述混合溶剂是指两种或两种以上有 机溶剂按一定体积比例组成 的混合溶剂， 或有机溶剂与水按一定体积比例组成的混合溶 剂； 包括但不 限于以下混合溶剂体系及比例： 甲醇 /水 （40:1 )、 乙醇 /水 （40:1 )、 乙腈 / 水（25:1 )、 四氢呋喃 /水 (40:1 )、丙酮 /水 (30:1 )、 1， 4-二氧六环 /水 (25:1 ) 等； 甲醇 /乙腈、 甲醇 /四氢呋喃、 甲醇 /二氯甲垸、 甲醇 /乙酸乙酯、 甲醇 / 甲基叔丁基醚、 甲醇 /正己垸、 甲醇 /甲苯、 乙醇 /乙腈、 乙醇 /四氢呋喃、 乙 醇 /二氯甲垸、 乙醇 /乙酸乙酯、 乙醇 /甲基叔丁基醚、 乙醇 /正己垸、 乙醇 / 甲苯、 异丙醇 /乙腈、 异丙醇 /四氢呋喃、 异丙醇 /二氯甲垸、 异丙醇 /乙酸乙 酯、 异丙醇 /甲基叔丁基醚、 异丙醇 /正己垸、 异丙醇 /甲苯、 乙腈 /甲基叔丁 基醚、 乙腈 /乙酸乙酯、 乙腈 /二氯甲垸、 乙腈 /四氢呋喃、 乙腈 /正己垸、 乙 腈 /甲苯、 甲基叔丁基醚 /乙酸乙酯、 甲基叔丁基醚 /二氯甲垸、 甲基叔丁基 醚 /四氢呋喃、 甲基叔丁基醚 /正己垸、 甲基叔丁基醚 /甲苯、 乙酸乙酯 /二氯 甲垸、 乙酸乙酯 /四氢呋喃、 乙酸乙酯 /正己垸、 乙酸乙酯 /甲苯、 二氯甲垸 /四氢呋喃、 二氯甲垸 /正己垸、 二氯甲垸 /甲苯、 四氢呋喃 /正己垸、 四氢呋 喃 /甲苯、 正己垸 /甲苯 （以上混合溶剂体积比为 1 : 1 ) 等； 优选 "含有 1-4 个碳原子的低级醇， 如甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 正丁醇、 异丁醇等； 含有 3-6个碳原子的低级酮， 如丙酮、 丁酮等； 乙腈； 丙腈或者四氢呋喃 等"中的两种或两种以上有机溶剂按一定体积� �例组成的混合溶剂或这些 有机溶剂与水按一定体积比例组成的混合溶剂 ； 更优选乙醇 /水混合溶剂。

上述制备方法中所述的"一定化学计量比"，是� ��化合物 A与盐酸的摩 尔比≤1 :2， 优选 1 :4-1 :2。

本发明还提供化合物 A的二盐酸盐的晶型 I与一种或多种药用载体和 /或稀释剂的药物组合物， 可以以口服的方式施用于需要这种治疗的患者 。 制成口服制剂时， 可以加入适宜的填充剂、 粘合剂、 崩解剂、 润滑剂等。

本发明还提供化合物 A的二盐酸盐的晶型 I在制备治疗和 /或预防非 胰岛素依赖性糖尿病的药物中的应用。 附图说明

图 1是化合物 A二盐酸盐的晶型 I的 X-射线粉末衍射图谱， 纵坐标 表示衍射强度 （CPS ) , 横坐标表示衍射角度 Θ

图 2是化合物 Α二盐酸盐的晶型 I的 X-射线单晶衍射单分子结构图。 具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发 明的上述内容作进一歩 的详细说明。但不应理解为本发明上述主题的 范围仅限于以下实施例。凡 基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发 明的范围。

实施例 1 化合物 A二盐酸盐的晶型 I的制备

化合物 A 化合物 A二盐酸盐 取化合物 A 100 g (0.27 mol) 加入三口烧瓶中， 加入乙醇 500 mL， 油浴升温到 60 V， 滴加 49.5 mL浓盐酸 （12 mol/L)， 滴加完毕搅拌 1小 时， 冷却至室温后再搅拌 1 小时， 抽滤， 35°C真空干燥得化合物 A二盐 酸盐的晶型 170 g， 收率 58.6%。 对通过上述方法制得的晶型 I， 进行测定：

(1) X-射线粉末衍射测定

X-射线粉末衍射测定的条件： Cu-Κα 线、 1.54A (单色器）、 通过 D/MAX-RB型 X射线衍射仪测得。

使用 Cu-Κα辐射，以 2 角度 (° ：)表示的 X-射线粉末衍射在 8.7±0.2° 、 19.4±0.2° 、 23.5±0.2° 、 27.2±0.2° 处有特征峰； 还在 12.5±0.2° 、 22.5±0.2° 、 25.5±0.2° 处有特征峰； 还在 11.7±0.2° 、 14.6±0.2 ° 、 26.0±0.2。 处有特征峰。

用 X-射线粉末衍射测定本发明的晶型时， 有时由于测定的仪器或测 定的条件， 对于测得的峰而言会稍有测定误差， 因此在确定结晶结构时， 应该将此误差考虑在内， 因此本申请人在确定 2 角度时考虑了误差范围 (±0.2° )。 X-射线粉末衍射： X-射线粉末衍射图谱示于图 1 中， 该晶型 I在以下衍射角度 2Θ(° )处有峰： 8.70。 、 11.66。 、 12.46° 、 14.62° 、 19.38。 、 22.50° 、 23.52° 、 25.42° 、 26.00° 、 27.14° 。

(2) X-射线单晶衍射测定

单晶衍射的测定条件：

仪器型号： Oxford Xcalibur, Eos, Gemini: versatile dual-source system

(通用双源系统）

衍射光源： 'Cu-Ka'

单晶解析方法： 直接法

结构精修方法： 全矩阵最小二乘法 (SHELX-97)

根据单晶衍射得到晶型 I的分子结构图在图 2中显示， 其晶胞参数如 下： 参数 值

a玄

曰日乐 正交

空间群 2ι2ι2ι

a (A) 10.2064(4)

b (A) 11.0404(4)

晶胞 c (A) 19.9620(7)

参数 (°) 90 β (。） 90 γ (。） 90

晶胞体积 v (A ³ ) 2249.38(14)

Z (单胞内分子个数） 4

计算密度 （g/cm ³ ) 1.327

Λ

注： 图 2中的 C11和 C12表示两个 HC1。 实施例 2 化合物 A的二盐酸盐的晶型 I的水溶性考察 表 1 溶解度

供试品 水溶性

化合物 A <0.1 mg/ml

化合物 A二盐酸盐的晶型 I

可见， 化合物 Α的水溶性极差， 在水中几乎不溶或不溶。而化合物 A 二盐酸盐的晶型 I在水中极易溶解， 口服用药生物利用度高。 实施例 3 化合物 A的二盐酸盐的晶型 I的稳定性考察

供试品：

化合物 A二盐酸盐的晶型 I： 通过实施例 1制得；

影响因素试验考察条件 分别在高温 60°C (内层用药品包装用塑料袋 外套铝箔密封包装）、 高湿 RH75%±5% (平铺于干燥洁净表面皿中）、 光 照 4500Lx±500Lx (平铺于干燥洁净表面皿中） 条件下放置， 分别于第 5、 10天取样， 测定有关物质及化合物 A的含量， 与 0天的样品进行比较。 长期稳定性试验考察条件 在温度 25 °C ±2°C、 RH60%± 10%条件下 放置， 分别于第 3、 6、 9、 12、 18个月末取样， 测定有关物质及化合物 A 的含量， 与 0天的样品进行比较。在考察期间， 样品内层用药品包装用塑 料袋外套铝箔密封包装。

含量测定 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色谱法， 采用外 标法进行测定。

有关物质测定 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色谱法， 采 用面积归一化法进行测定。

实验结果： 见下表。

表 2 影响因素试验考察结果

试验条件 天 性状 有关物质 （％) 化合物 A的含量(％)

0 白色结晶性粉末 0.151 99.16

5 白色结晶性粉末 0.156 98.80

60 °C

10 白色结晶性粉末 0.142 99.42

5 白色结晶性粉末 0.200 99.30

RH75%±5%

10 白色结晶性粉末 0.171 99.55

5 白色结晶性粉末 0.194 98.09

4500Lx±500Lx

10 白色结晶性粉末 0.159 99.17

表 3 长期稳定性试验考察结果

供试品 月 性状 有关物质（％) 化合物 A的含量（％)

0 白色结晶性粉末 0.211 99.53

3 白色结晶性粉末 0.251 99.32

化合物 A二盐 6 白色结晶性粉末 0.246 99.19

酸盐的晶型 I 9 白色结晶性粉末 0.248 98.99

12 白色结晶性粉末 0.221 99.17

18 白色结晶性粉末 0.221 99.37 本发明人对所得化合物 A二盐酸盐的晶型 I 的稳定性进行了考察， 由其结果可知，化合物 A二盐酸盐的晶型 I在高温、高湿和光照的条件下， 及在长期稳定性考察实验中， 有关物质和化合物 A 的含量都基本没有变 化，表明化合物 A二盐酸盐的晶型 I具有较高的稳定性，便于药品的制备、 储存和运输， 有效期长， 更利于保证药物使用的有效性和安全性。 实施例 4 化合物 A二盐酸盐的晶型 I的药理实验

供试品： 实施例 1制备得到的化合物 A二盐酸盐的晶型 I

实验动物： C57BL/6小鼠 40只

方法： 试验前一天下午 5点将小鼠的食物移走， 空腹过夜， 第二天上 午九点测定空腹血糖， 为 -30分钟血糖， 称量记录体重， 均衡血糖和体重 随机分成 4组， 分别为背景对照组、 溶媒对照组、 给药组 1和给药组 2， 按体重给药， 分别给予溶媒 （0.9%氯化钠注射液）、 供试品 1 mg/kg和供 试品 3 mg/kg， 给药容积 10 mL/kg。 灌胃给药后 30分钟， 测定血糖， 为 0 分钟血糖， 溶媒对照组、 给药组 1和给药组 2再灌胃给予葡萄糖， 剂量为 3 g/kg, 背景对照组灌胃给予 0.9%氯化钠注射液， 灌胃容积为 10 mL/kg。 然后测定给予葡萄糖后 20、 40、 60和 120分钟的血糖值。

数据分析和处理： 计算 OGTT (口服葡萄糖耐量试验）时间 -血糖曲线下 面积（AUC),溶媒对照组和各给药组 AUC减去背景对照组的 AUC得净变量 AUC ( AAUC), 抑制率 （％) =100x(AAUC 溶媒对照组一△AUC)/AAUC 溶媒对照组？ 其中 XAUC为各给药组的净变量 AUC， AAUC 溶媒对舰为溶媒对照组的净 变量 AUC。 给药组与溶媒对照组比较， 采用 t-test值分析， 均以 p<0.05 为有显著性差异。

结果： 给药供试品 1 mg/kg或 3 mg/kg时， 对血糖 AUC的抑制率分 别为 57%和 65%。

结论： 化合物 A二盐酸盐的晶型 I具有显著的降糖作用， 可治疗和 / 或预防非胰岛素依赖性糖尿病。 实施例 5 化合物 A的二盐酸盐的晶型 I在 SD大鼠体内的药代动力 学研究

供试品： 实施例 1制备得到的化合物 A的二盐酸盐的晶型 I 实验动物： SD ( Sprague Dwaley) 大鼠， 12只

方法： SD大鼠， 分为静脉注射给药组和灌胃给药组， 每组 6只， 雌 雄各半， 给药剂量均为 10 mg/kg (以化合物 A计）。 静脉注射给药途径给 药容积为 5 mL/kg， 灌胃给药途径给药容积为 10 mL/kg。 采血时间点依次 为： 给药前 （O min) 和给药后 5 min、 15 min、 30 min、 1 h、 2 h、 4 h、 6 h、 8 h、 12 h、 24 ho 给药后经尾静脉或眼内眦采血约 150 至肝素钠抗 凝管中， 全血置于高速冷冻离心机中 （8000转 /分， 0-4°C ) 离心 6 min， 分离上层血浆清液保存于冰箱中待测， 所有血样在采血后 30 mm内离心 完成。 采用 LC-MS/MS法测定 SD大鼠血浆中化合物 A的药物浓度。

数据分析和处理：绘制血药浓度 -时间曲线，采用 Pharsight Phoenix 6.1 中的非房室模型计算药代动力学参数。

结果： SD大鼠静脉注射给药后血浆清除率 （CL) 为 2.40 L/h/kg， 表 观分布容积 （Vd) 为 6.17 L/k _g; 生物利用度 （F%) 为 96.56%。

结论： 化合物 A二盐酸盐的晶型 I在 SD大鼠体内的生物利用度高，