LEUR APPLICATIO 'EN THERAPEUTIQUE ET LEUR UTILISATION

POUR LA PREPARATION DE MOLECULES HYBRIDES

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de metalloporphyrines, leur préparation, leur application en thérapeutique, et leur utilisation pour la préparation de molécules hybrides à usage thérapeu¬ tique. L'utilisation de certains dérivés hématoporphy- riniques dans le traitement des cancers par photothéra¬ pie a été décrite par exemple par J. îtoan (Photobiol. Photόche . 4_3' ° ^" 8l (1986) . Ces molécules présentent la particularité de s'accumuler au niveau des tumeurs, ce Çui permet de les utiliser comme marqueurs biologiques ou agents thérapeutiques. Toutefois, la préparation de ces dérivés conduit souvent à un mélange de produits pas toujours bien définis et de composition variable. Cet état de fait justifie le développement de dérivés porphyriniques obtenus par synthèse totale et pouvant se substituer aux hê atoporphyrines dans le traitement de cancers par photothérapie.

Par ailleurs, des travaux récents ont montré que des dérivés étallés de porphyrines synthétiques sont capables de couper les acides nucléiques (ADN) in vitro selon un processus d'oxydation (EP-A-118 913 ; E. Fouquet, G. Pratviel, J. Bernadou et B. Meunier, J. Chem. Soc, Chem. Commun., 1169 (1987) . Cette activité nuclëase de metalloporphyrines hydrosolubles est d 'au- tant plus intéressante qu'elle est observable pour des concentrations très faibles de réactifs (de l'ordre de

10 à 10 M) , inférieures à celles de la bléomycine (un antibiotique antitumoral possédant une forte acti¬ vité nucléase en présence d'ions ferriques, d'oxygène moléculaire et de réducteurs) . Les nombreuses études

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menées ces dernières années sur la pharmacologie molécu¬ laire de ce médicament majeur de la chimiothérapie anti¬ cancéreuse indiquent que son activité cytotoxique et an- titumurale peut être due à sa capacité à dégrader l'ADN de cellules tumorales.

Selon la présente invention on a effectué la synthèse de metalloporphyrines (dont la sphère de co¬ ordination autour d'ions fer ou manganèse modélise l'arrangement des ligands peptidiques de la bléo ycine) ayant les deux propriétés suivantes :

- activité nucléase sur l'ADN in vitro, et

- activité cytotoxique sur cellules entières, qui, à la connaissance des inventeurs, n'ont pas encore été décrites pour des metalloporphyrines. L'invention concerne donc de nouveaux dérivés porphyriniques possé¬ dant cette double propriété. Par ailleurs, on montre également que cette double propriété est conservée dans des molécules hybrides lorsque le squelette porphyrinique est relié à une entité possédant une affinité pour les acides nucléiques et capable aussi de moduler l'activité biologique de ces metalloporphyrines cytotoxiques (poly- amines, pol lysine, oligonucléotides, ...) .

Les nouveaux dérivés de metalloporphyrines selon l'invention répondent à la formule générale :

dans laquelle A et B représentent chacun

Z ⁺ représente N ⁺ -R _; . ou C-N ⁺ R _{1 2} R ₃ ; R étant un groupe aliphatique droit ou ramifié en C . à C _Q , et R et étant chacun un atome d'hydrogène ou un groupe aliphatique droit ou ramifié en C à C , R représente un groupe NH , OH, COOH ou -N(R-,.3/ ^ou un atome d'halogène, n est 0 ou un entier de 1 à 10, le groupe alkylene correspondant pouvant être droit ou ramifié, M représente un métal de transition, X représente l'anion d'un acide carboxylique pharma- ceutiquement acceptable,- m étant un entier de 1 à 5, et Y représente une liaison, ou un radical -O-, -CO- ou -C0NH- .

De préférence, R représente un groupe alkyle, en particulier méthyle ou éthyle, et R_ et R_ représen¬ tent chacun un atome d'hydrogène ou méthyle, M représen¬ te notamment Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn ou Rû, de préfé¬ rence Mn ou Fe. X est choisi notamment parmi les anions des acides car- boxyliques solubles couramment utilisés en pharmacie, en particulier : acétate, propionate, butyrate, ascorbate, benzoate,- cinnamate, citrate, fumarate, glycolate, malo- nate, tartrate, malate, aléate et mandélate.

.+

De préférence encore Z représente le groupe

N ⁺ -R Les composés de formule I peuvent être préparés par :

(a) condensation d'un phényl-carboxaldéhyde de for¬ mule :

F r" « î ï " S ~__~ ^~ ~*_ ^~~ ~ ^~~ . ~~ ^~ fis - ^~ - 3 a >**-* *-- tη. J? ^~ ~ ï- - "?*

dans laquelle n et Y ont la même signification que dans la formule I et R' est le groupe R éventuellement proté ^¬ gé de la formule I, et d'un aldéhvde de formule

// , .. y. ~- ^τ

"\__ - CnC

dans laquelle Z' représente N ou ^ C-NR _p R_, R- et R ont la même signification que dans la formule I, avec le pyrrole en- milieu acide, de façon à obtenir une porphyrine (PP) tétrasubstituée en positions 5, 10, 15, 20 de formule générale

dans laquelle R ¹ , n, Y et Z ' ont les mêmes significations gue dans les formules II et III respectivement, et n et n sont des entiers de 1 à 3, avec n +n =4, b) le cas échéant le composé IV est soumis à une dé¬ protection du radical R' pour obtenir une porphydrine té¬ trasubstituée en 5, 10, 15, 20 de formule générale

dans laquelle Z' a la même signification que dans la for¬ mule III, PP.- n et sont comme dans la formule IV et n, R, et Y ont la même signification que dans la formule I, c ⁾ le composé de formule V, après protection éven- tuelle de la fonction R, est soumis à une réaction d'al-

kylation à l'aide d'un halogénure R -hal, R ayant la même signification que dans la formule I et hal désignant le brome ou d'iode, de manière à obtenir une porphyrine té ^¬ trasubstituée en 5, 10, 15, 20 de formule générale

et d) ce composé est mëtallée à l'aide d'un sel MXp, M et X ayant la même signification que dans la formule I et p correspondant à la valence du métal M.

L'étape a) est effectuée en milieu acide, notam- ment l'acide propionique au reflux, en présence d'anhy¬ dride acétique.

Selon la signification du radical R, une protec¬ tion peut être nécessaire. Si R = NH , on choisira ι ^*" 2

R = N0 et alors l'étape b) consistera à réduire N0» ^en NH_, notamment par le chlorure stanneux en milieu acide fort. Si R = C00H, on choisira pour R' un ester d'alkyle correspondant et l'étape b) consistera à hydro- lyser cet ester.

L'étape c) d'alkylation est effectuée de manière classique, dans un solvant polaire neutre tel que le di- méthylformamide (DMF) au reflux.

L'étape d) de métallation, peut aussi être effec¬ tuée dans le DMF au reflux, notamment en présence de 2,4, 6-collidine. Selon une variante, les étapes c) et d) peuvent être inversées.

L'invention concerne aussi l'utilisation des com¬ posés (I) pour la préparation de molécules hybrides à usage thérapeutique, comprenant, par exemple une mëtallo- porphyrine (I) reliée à un intercalant tel que la 9-mé-

^{~~ ~} T - ^~ ^

thoxy-ellipticine, ce qui permet de disposer de molécules ayant l'activité biologique de chacun des deux composants. Les exemples suivants illustrent l'invention. Les spectres de résonance magnétique nucléaire ont été obtenus sur un appareil Bruker 250 M FT. Les spectres de masse ont été obtenus soit sur un appareil Ribermag RIO10 pour les spectres en DCI (NH.,) , Varian Mat 31LA en désorption de champ ou ZAB pour les spectres en FAB et les spectres UV-visible sur un appareil Varian- Cary 2300. EXEMPLE 1

Pentaacêtate de 5- (4-aminophényl) -10, 15, 20-tris (N-mé- thyl-4-pyridyl) -porphyrine de manganèse (III) et dérivés apparentés. a) 5- (4-nitro-phênyl) -10, 15, 20-tris (4-pyridyl) - porphyrine

Un mélange de 3 g (0,020 mole, 1,75 eq.) de ni- tro-4-phényl carboxaldéhyde dans 158 ml d'acide propio- nique et 8 ml d'anhydride acétique est chauffé à 110°C sous agitation. A cette solution, on ajoute lentement

3,2 ml (0,034 mole, 3 eq.) de pyridine-4-carboxaldéhyde puis 3,1 ml (0,045 mole, 4 eq.) de pyrrole et on porte le mélange au reflux pendant 1 h 30. Revenu à la tempé¬ rature ambiante, le mélange est évaporé à sec neutrali- se avec une solution aqueuse d'ammoniaque. Après fil- tration, le précipité est lavé plusieurs fois avec du dichlorométhane. La phase organique est ensuite concen¬ trée puis purifiées sur une colonne de silice sèche (éluant : dichlorométhane puis dichlorométhane/ëthanol : 95/5) . Produit isolé = 0,526 g ; Rdt = 7,1 %. CCM : Rf = 0,51 (éluant : CH ₂ Cl,,/EtOH 95/5) . UV-visible (CHCl ₃ ) (£) _: 640 (1,1 x 10 ³ ) ; 586 (2,0 x 10 ³ ) ; 546 (2,8 x 10 ³ ) ; 512 (6,7 x 10 ³ ) ; 418 (1,6 x 10 ⁵ ) (bande de Soret) . RMN 1H (CDC1 ₃ ) ; ζ : 9,06 (d, 6H, J = 5,9 Hz, protons

2,6-pyridine) ; 8,87 (m, 6H,j& -pyrrole ; 8,81 (d, 2H,

J = 4,9 Hz, β -pyrrole) ; 8,66 (d, 2H, J = 8,60 Hz, protons 2, 6-nitro-4-phényl) ; 8,38 (d, 2H, J = 8,60 Hz, protons 3, 5-nitro-4-phényl) ; 8,15 (d, 6H, J ≈ 5,9 HZ, protons 3, 5-pyridine) ; 2,89 (s, 2H, NH pyrrole) .

Analyse : (dans les calculs, on a considéré qu'il y avait une molécule d'eau de solvatation) , ^C 4-ι ^H 26 ^N 8°2'

H ₂ 0.

C H N

Calculé % 72,34 4,15 16,46

Trouvé % 72,87 4,06 16,93

b) 5- (4-amino-phényl) -10, 15, 20-tris (4-pyridyl) - porphyrine A 0,252 g (0,38 mmole) de la porphyrine (a) dans 18 ml d'acide chlorhydrique 6N, on ajoute 0,672 g (3 mmoles, 8 eq.) de chlorure stanneux dihydraté et on laisse le mélange sous agitation à température ambiante pendant 15 h. Le mélange est ensuite neutralisé avec de l ^a soude 1 N puis extrait au dichlorométhane. La phase organique est lavée à l'eau puis séchêe sur sulfate de magnésium. Le solvant est évaporé à sec. Le résidu re¬ pris dans du dichlorométhane est précipité par l'addi¬ tion de l'hexane (CH«Cl_/hexane : 1/10) puis filtré et séché sous vide.

Produit isolé = 0,21 g : Rdt = 87 % .

CCM : Rf = 0,23 (éluant iCH-Cl /EtOH 95/5)

UV-visible ( ê ) : 652 (3,0 x 10 ³ ) ; 590 (3,2 x

10 ³ ) ; 554 x 10 ³ ) ; 516 (7,8 x 10 ³ ) ; 420 (8,8 x 4 10 ) (bande de Soret) .

Masse (DCI) : M ⁺ = 633 et (FD) : M ⁺ -H ≈ 632

RMN ¹ H (DMSOdβ à 303 K) <f: 9,15 (d, 6H, J = 5,50 Hz, p-2,6 pyridine) ; 8,98 (m, 8E , J- -pyrrole) ; 8,36 (d, 6H,

J = 5,50, Hz, p-3,5-pyridine) ; 7,99 (d, 2H, J = 8,20 Hz, p-2, 6-amino-4-phényl) ; 7,14 (d, 2H, J = 8, 20 Hz,

FEUILLE DE REMP. ,__. ι \__ï- .

p-3,5-amino-4-phényl) ; 5,87 (s, 2H, NH ₂ ) ; -2,80 (s, 2H, NH pyrrole) .

c) 5- (4-benzoyl-amino-phényl) -10, 15, 20-tris- (4-pyridyl) -porphyrine

0,010 ml (0,086 mmole, 1,8 eq.) de chlorure de benzoyle est ajouté goutte à goutte à une solution de 0,030 g (0,047 mmole) de la porphyrine (b) dans 3 ml de pyridine anhydre maintenue dans un bain de glace. Le mélange est agité pendant 1 h à 0 ^Q C. Au bout de ce temps, le solvant est évaporé à sec et le résidu est repris dans du dichlorométhane. Cette solution est la¬ vée à l'eau distillée, avec de la soude à 5 % puis à l'eau distillée. La phase organique est sëchée sur sulfate de magnésium puis évaporée à sec. Le résidu est séché sous vide. Produit isolé = 0,025 g ; Rdt = 71 %.

RMN ¹ H (DMSOd à 297 K) ff 10,72 (s, 1H, NH) ; 8,96 (d, 6H, J = 5,3 Hz, protons 2,6 pyridine) ; 8,93 (d, 2H, J = 4,7 Hz, β -pyrrole) ; 8,83 (s, 4H, β -pyrrole) ; 8,82 (d, 2H, J = 4,7 Hz, β -pyrrole) ; 8,22 (m, 10H, protons 3,5 pyridine et phényl) ; 8,11 (d, 2H, J = 8,0 Hz, protons 2,6 amino-4-phényl) ; 7,65 (m, 3H, protons 3,5 amino-4-phényl et phényl-para) ; -2,85 (s, 2H, NH pyrrole) .

d) Pentaacëtate de 5- (4-amino-phényl) -10, 15, 20- tris(N-mêthyl-4-pyridyl) -porphyrine de manganèse (III) .

A 0,030 g (0,05 mmole de porphyrine (c) dans 3 ml de DMF, on ajoute 0,062 ml (0,047 mmole, 10 eq. ) de 2,4,6 collidine puis 0,047 mmole (10 eq.) de sel de manganèse, de fer, de zinc ou de nickel. Le mélange est porté au reflux pendant 3 heures puis on le laisse sous agitation à température ambiante pendant 15 heures Le solvant est évaporé à sec et le résidu est lavé à

l'eau puis, purifié sur une colonne sèche d'alumine neu¬ tre (éluant : dichlorométhane puis dichlorométhane/étha- nol) . A la métalloporphyrine ainsi obtenue dans 3 ml de DMF, on ajoute l'iodure de méthyle (10 eq.) et le mélan- ge est agité à la température ambiante pendant 15 heu¬ res. Le mélange est ensuite évaporé à sec. La déprotec¬ tion du groupement aminé se fait par addition d'une so¬ lution d'ammoniaque 9 M. Le mélange est alors agité à 70°C pendant 3 h. puis 15 h. à température ambiante. Au bout de ce temps, le mélange est évaporé à sec puis traité à l'acide chlorhydrique 6M, évaporé à sec et re¬ pris dans du méthanol.

L'addition de résine essorée d'échangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous forme acétate (4 eq.) à cette solution suivie d'une agitation de 3 heures à la température ambiante permet., après filtration puis éva- poration du solvant, d'obtenir l'acétate du titre. Le produit est ensuite purifié par trituration avec de l ¹ éther. Sa formule développée (M = Mn, X = CH,C00) est représentée sur la figure annexée. On a obtenu de la même manière le dérivé de fer, de zinc et de nickel correspondant en remplaçant l'acétate de manganèse (Mn(CH,C00) , 4H 0) respectivement par FeCl-,, 4H 0 ; Zn(CH ₃ C00) ₂ ,2H ₂ 0 ou NiCl ,6H ₂ 0(10 eq. chaque fois) . Rendements de 60 à 70 % .

Dérivé du manganèse : UV-visible (H O à 7,73 x 10~ ⁶ M) λ ( £)596(3,9 x 10 ³ ) ; 554 (8,6 x 10 ³ ) ; 464

(7,5 x 10 ³ ) .

—fi Dérivé du zinc : UV-visible (H O à 23,9 x 10 M) r\ (£)606(2,5 x 10 ³ ) 562(5,0 x 10 ³ )432(5,8 x 10 ⁴ ) .

Dérivé du nickel : UV-visible (H ₂ 0 à 14,3 x 10~

M) * ( £ ) 568 ( 4 , 9 x 10 ³ ) 530 ( l , O x 10 ⁴ ) 417 ( 1 , 1 x 10 ⁵ ) .

e) Variante de préparation du triacétate de 5- 4-

a ino-phényl) -10, 15, 20-tris (N-méthyl-4-pyridyl) -porphy ^¬ rine par méthylation de la porphyrine (a) suivie d'une réduction de la fonction nitro

A 0,016 g (0,024 mmole) de porphyrine (a) dans 20 ml de DMF, on ajoute un large excès d'iodure de mé¬ thyle (1 ml) . Le mélange est agité â 40°C pendant 2 h puis le solvant est évaporé à sec. Le résidu est repris dans 3 ml d'acide chlorhydrique 6 . Après addition du chlorure stanneux dihydraté, l'agitation est maintenue à température ambiante pendant 15 h. Le solvant est en¬ suite évaporé à sec. Le résidu est repris dans du mëtha- nol.

L'addition de résine essorée d'échangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78, sous forme acétate (4 eq.) à cette solution, suivie d'une agitation de 3 h à. la tempé¬ rature ambiante, permet, après filtration puis évapora- tion du solvant, d'obtenir l'acétate correspondant. Le résidu est repris dans de l'eau et après un passage sur une colonne LH20, la porphyrine est purifiée, Rdt = 83 %.

RMN ¹ H(CD COOD) O 9,51 (m, 6H, protons 2,6 pyridi¬ ne) ; 9,04 (m large, 14H,|3 -pyrrole et protons 3,5 pyri¬ dine) ; 8,35 (m, 2H, protons 2,6 amino-4-phényl) ; 7,80 (m, 2H, protons 3,5 amino-4-phényl) ; 4,92 (m, 9H, N-mé- thyl-4-pyridyl) .

f) Iodure de 5- (4-triméthyl-amino-phényl) -10, 15, 20- tris (N-mêthyl-4-pyridyl) porphyrine

A. 0,014 g (0,02 mmole) de porphyrine (b) dans 4 ml de DMF, on ajoute goutte à goutte 0,014 ml (0,2 mmole, 10 eq.) d'iodure de méthyle et on porte le mélan¬ ge au reflux pendant 3 heures. La solution est ensuite agitée à la température ambiante pendant 15 heures, puis le solvant est évaporé à sec. Le résidu est trituré avec du dichlorométhane, du méthanol, puis de l'acétone.

îΛ PLACER • Î _-= W l

Après filtration, le produit est séché sous vide. Produit isolé = 0,019 g ; Rdt = 83 %.

UV-visible (MeOH/AcOH) :( _. 99/l) A(£ ) : 655 (1,3 x 10 ⁾ ;

590 (4 x 10 ³ ) ; 560 (4 x 10 ³ ) ; 515 (1,3 x 10 ⁴ ) ; 421 4 (7,0 x 10 ) (bande de Soret) .

Masse (FD) : m/e = 660

RMN ¹ H (DMSO-d6 à 303 K) <T": 9,60 (d, 6H, J = 5,9 Hz, p-2,6-pyridine) ; 9,27 (m, 8H, β -pyrrole) ; 9,13 (d, 6H,

J = 5,9 Hz, p-3,5-pyridine) ; 8,18 (d, 2H, J = 8,6 Hz, p-2, 6-amino-4-phényl) ; 7,34 (d, 2H, J = 8,6 Hz, p-3,5- amino-4-phényl) ; 4,86 (s large, 9H, N-mêthyl-4-pyri- dyl) , 3,46 (s large, 9H, N(CH ) ; -2,73 (s, NH pyrrole) .

g) Pentaacétate de 5- (4-trimethyl-amino-phényl) -10, 15,20-tris (N-mêthyl-4-pyridyl) -porphyrine de manganèse (III)

A 0,053 g (0,05 mmole) de iodure de porphyrine (c) dans 4 ml de DMF, on ajoute 0,062 ml (0,047 mmole, 10 eq.) de 2, 4, 6-collidine puis 0,047 mmole (10 e . ) d'acétate de manganèse, Mn (CH-.C00) „, 4H„0. Le mélange est porté au reflux pendant 3 heures, puis on le laisse sous agitation à température ambiante pendant 15 heures. Le solvant est évaporé à sec et le résidu est lavé à l'eau puis repris dans du méthanol. L'addition de résine essorée d' echangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous forme acétate (4 eq.) à cette solution suivie d'une agitation de 3 heures à la température ambiante permet, après filtration puis évaporation du solvant, d'obtenir l'acétate du titre. Le produit est ensuite purifié par précipitation dans un mélange méthanol/acëtone. Rdt ≈ 80 %. P.F. supérieure à 240°C.

La formule développée de ce composé est représen¬ tée à la dernière page de la description.

h) Variante de préparation par inversion des étapes

LE DE REMPLACEMENT

f) et g) précédentes.

A 0,030 g (0,05 mmole de porphyrine (c) déprotê- gëe dans 3 ml de DMF, on ajoute 0,062 ml (0,047 mmole, 10 eq.) de 2,4,6 collidine puis 0,047 mmole (10 eq.) de sel de manganèse, (Mn CH ₃ C00) ₂ ,4H ₂ 0, de fer ou de zinc. Le mélange est porté au reflux pendant 3 heures, puis on le laisse sous agitation à température ambiante pen¬ dant 15 heures. Le solvant est évaporé à sec et le rési¬ du est lavé à l'eau puis, purifié sur une colonne sèche d'alumine neutre (éluant : dichlorométhane puis dichlo- romêthane/éthanol) . A la métalloporphyrine ainsi obte¬ nue dans 3 ml de DMF, on ajoute l'iodure de méthyle (10 eq.) et on porte le mélange au reflux pendant 4 heu¬ res puis, on le laisse agiter à la température ambiante pendant 15 heures. Le*mélange est ensuite évaporé à sec puis repris dans du mëthanol. L'addition de résine esso¬ rée d'echangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous forme acétate (4 eq.) à cette solution suivie d'une agi¬ tation de 3 heures à la température ambiante permet, après filtration puis evaporation du solvant, d'obtenir l'acétate du titre. Le produit est ensuite purifié par précipitation dans-un mélange méthanol/acétone. Rdt ≈ 82 %. Sa formule développée (M = Mn, X = CH ₃ C00) est re¬ présentée sur le dessin annexé. On a obtenu de la même manière le dérivé de fer et de zinc correspondant en remplaçant l'acétate de manganèse respectivement par ^' FeCl ₂ ,4H ₂ 0 ou Zn (CH ₃ C00) ₂ , 2H ₂ 0 (10 eq. chaque fois) .

EXEMPLE 2 Dérivés hydroxyphényliques de porphyrine. i) 5-(4-hydroxyphényl)-10,15,20-tris(4-pyridyl) - porphyrine

Un mélange de 3,19 g (0,026 mole; 1,75 eq.) de hydroxy-4-phenylcarboxaldéhyde dans 205 ml d'acide pro- pionique et 10 ml d'anhydride acétique est chauffé à

110°C sous agitation. A cette solution, on ajoute lente ^¬ ment 4,27 ml (0,045 mole ; 3 eq. ) de pyridine-4-carbσxal- déhyde, puis 4,13 ml (0,06 mole ; 4 eq.) de pyrrole et on porte le mélange au reflux pendant 1 h 30. Revenu à la température ambiante, le mélange est évaporé à sec et neutralisé avec une solution aqueuse d'ammoniaque. Après filtration, le précipité est lavé plusieurs fois avec du dichlorométhane. La phase organique est ensuite concentrée puis purifiée sur une colonne de silice sè- che (éluant : dichlorométhane/éthanol 95/5) . Produit isolé = 0 ,52 g ; Rdt = 5,5 % ; ccm : R _f = 0,14 (éluant : CH ₂ C1 /éthanol, 95/5) .

UV-visible (CHC1 à 7,2 x 10~ ⁶ M) O ( 8 )642(3,2 x 10 ³ ) ; 587(7,9 x 10 ³ ) ; 545(9,4 x 10 ³ ) ; 511(2,8 x 10 ⁴ ) ; 416(5,1 x 10 ⁵ ) (bande de Soret) .

RMN ¹ H(CDC1 à 294 K)^9,04 (d,6H,J = 5,2 Hz, protons 2, 6-pyridine) ; 8,95 (d, 2H, J = 4,8 Hz, fo - pyrrole) ; 8,86 (m, 6H,β -pyrrole) ; 8,20 (d, 2H, J = 8,3 Hz, protons 2, 6-phénoxy-4) ; 8,16 (d, 6H, J = 5,5 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 7,52 (d, 2H, J = 8,3 Hz, protons 3, 5-phënoxy-4) ; 2,80 (q, 2H, J = 7,5 Hz, CH ₂ CH ) ; 2,50 (m, 2H, OH) ; 1,42 (t, 3H, J = 7,5 Hz, ÇH.CH ) ; -2,89 (s, 2H, NH pyrrole) .

Analyse : dans les calcules, on a considéré également une molécule d'éthanol de solvatation, ^C 41 ^H 27 ^N 7°' ^EtOH -

Calculë % : C, 75,96 ; H, 4,97 ; N, 14,43 ; Trouvé % : C, 76,08 ; H, 4,77 : N, 13,09.

j) Cis-5, 10-bis (4-hydroxy-phënyl) -15, 20-bis (4-py- ridyl) -porphyrine

Lors de la purification sur colonne de silice sèche du mélange réactionnel du paragraphe précédent, nous obtenons également la cis-5, 10-bis (4-hydroxy-phé- nyl) -15, 20-bis (4-pyridyl) -porphyrine (éluant : CH ₂ C1 /

EtOH, 97,5/2,5) : produit isolé = 0,74 g ; Rdt = 7,7 % ; cc : Rf =

0,21 (éluant : CH ₂ Cl ₂ /EtOH, 95/5) . .

UV-visible (dans CHC1 à 7 , 2 x 10 M) Λ ( £ ) 642

( 2 , 1 x 10 ³ ) ; 586 (4 , 4 x 10 ³ ) ; 546 ( 5 , 8 x 10 ³ ) ; 512

(1,5 x 10 ^" ) ; 415 (3 x 10 ) (bande de Soret) . RMN ¹ H (CDC1-) 09,03 (d, 4H, J = 5,8 Hz, protons

2,6-pyridine) ; 8,94 (d, 2H, J = 4,9 Hz, /* -pyrrole) ; 8,91 (s, 2H,Û -pyrrole) ; 8,84 (s, 2H, -pyrrole) ; 8,81 (d, 2H, J = 4,9 Hz, jβ -pyrrole) ; 8,20 (d, 4H, J = 8,5 Hz, protons 2, 6-phénoxy-4| ; 8,17 (d, 4H, J = 5,8 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 7,51 (d, 4H, J = 8,5 Hz, protons 3, 5-phénoxy-4) ; 2,80 (q, 2H, J = 7,5 Hz, CH ₂ CH ₃ ) ; 1,42 (t, 3H, J = 7,5 Hz, CH ₃ CH ₂ ) ; -2,88 (s, 2H, NH pyrrole) .

Analyse : dans les calculs, on a considéré qu'il y avait 1,75 molécules d'éthanol de solvatation,

^C 42 ^H 28 ^N 6°2' ^X ' ^{75 Et0H*}

Calculé % : C, 74,95 ; H, 5,28 ; N, 11,53.

Trouvé % : C, 74,33 ; H _r 4,99 ; N, 11,23.

k) 5- (4-pyridil) -10,15, 20-tris (4-hydroxy-phényl) - porphyrine

De la même manière que précédemment, nous obte¬ nons la 5- (4-pyridyl) -10,15, 20-tris (4-hydroxy-phényl) - porphyrine (éluant : dichlorométhane) . Produit isolé = 0,62 g ; Rdt = 6, 3 % ; ccm : R _f = 0,31 (éluant : CH ₂ Cl ₂ /Et0H 95/5) .

UV-visible (dans CHC1 ₃ à 1,2 x 10~ ⁵ M) Λ ( 6.) 642 (2,6xl0 ³ ) ; 587 (4,4 x 10 ³ ) ; 548 (5,5 x 10 ³ ) ; 512 (1,3 x 10 ) ; 416 (3,3 x 10 ⁵ ) (bande de Soret) . RMN ¹ H(CDC1 ₃ ) <T9,02 (d, 2H,J = 5,9Hz, protons 2,6- pyridine) ; 8,91 (d, 2H,J=4, 9Hz,{2 -pyrrole) ; 8,89 (s, 4H, > -pyrrole) ; 8,79 (d, 2H,J=4,9Hz, §> -pyrrole) ; 8,20 (d,6H,J=8,4Hz, protons 2, 6-phénoxy-4) ; 8,16 (d,2H, J= 5,9 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 7,51 (d,6H,J=8,4 Hz, protons 3, 5-phénoxy-4) ; 2,79(q,2H,J = 7,5Hz, CH CH ) ;

1,58 (m,6H,0H) ; 1,42 (t,3H,J = 7,5 Hz, CH ₃ CH ₂ ) ; -2,86 (s, 2H, NH pyrrole) .

Analyse : dans les calcules, on a considéré qu'il y avait deux molécules d' éthanol de solvatation, C ₄₃ H ₂₉ N ₅ 0 ₃ ,2EtOH.

Calculé % : C, 74,67 ; H, 5,47 ; N, 9,27 ; Trouvé % : C, 74,49 ; H, 5,06 ; N, 8,45.

1) Acétate de 5- (4-hydroxyphényl) -10, 15, 20-tris (4-pyridyl) -porphyrine de manganèse.

La réaction de mëtallation s'effectue selon le même mode opératoire décrit pour la porphyrine (g) de l'exemple 1.

Masse (FAB ,+) : m/e687(M +) _ .

m) Triacétate de 5- (4-hydroxyphënyl) -10, 15, 20- tris (N-méthyl-4-pyridyl) -porphyrine.

La méthylation de la porphyrine de l'exemple (i) par l'iodure de méthyle dans du DMF suivie d'une réaction d'échange d'ions iodure en acétate se fait selon la méthode décrite dans l'exemple (f) . (Rdt = 88 %) .

RMN ¹ H(CD C00D) ë ^' , 46 (m, 6H,protons 2, 6-pyridi- ne) ; 9,35 (m, 2H, 6 -pyrrole) ; 9,14 (m, 4H, -pyrro- le) ; 8,99 (m, 6H,protons 3, 5-pyridine) ; 8,71 (m,2H, β> -pyrrole) ; 8,15 (d,2H,J = 7,6 Hz, protons 2,6-phé- noxy-4) ; 7,56(d,2H,J ≈ 7,6 Hz, protons 3,5-phénoxy- 4) ; 4,91 (s large, 9H, N-Me) .

n) Tétraacétate de 5- (4-hydroxyphênyl) -10, 15, 20- tris (N-méthyl-4-pyridyl) -porphyrine de manganèse (III) .

La mëtallation de la porphyrine (i) avec de l'acétate de manganèse suivie d'une réaction de méthy- lation par l'iodure de méthyle se font dans les mêmes

«" -V.EWT

conditions que pour l'exemple 1 (h) et après l'échange des contre-ions iodure en acétate sur une résine échan- geuse d'ions, on obtient le produit attendu. Produit isolé = 0,018 g ; Rdt = 7β %. UV-visible (dans H ₂ 0 à 6,1 x 10~ ⁶ M) <r\ ( 8)600

(2,9 x 10 ³ ) ; 560 (6,6 x 10 ³ ) ; 464 (7,3 x 10 ⁴ ) (bande de Soret) .

EXEMPLE 3 Dérivés amino-propyloxyphényliques de prophyrine. o) 5-/4- (3-amino-propyloxy) -phényl/-10, 15, 20-tris (4-pyridyl) -porphyrine.

A une solution de 0,051 g (0,8 mmole) de la porphyrine de l'exemple (i) dans 3 ml de DMF sont ajou- tés à température ambiante 0,65 g (16,4 mmole ; 20,5 eq.) de soude pilée. La couleur de la solution passe de violet au vert et le mélange est agité pendant 15 minutes. 0,017 g (0,88 mmole ; 1,1 eq.) de bromohydra- te de bromo-3-propylamine sont ajoutés à cette solu- tion et l'agitation est maintenue pendant 3 h. L'avan¬ cement de la réaction est suivie par ccm (plaque de silice ; éluant : CH ₂ C1 /EtOH, 50/50) . Au bout de ce temps, 0,017 g de bromohydrate de bromo-3-prop lamine sont rajoutés et le mélange est encore agité pendant 2 h. On ajoute alors 2 ml de mëthanol et 5 ml d'eau distillée au mélange réactionnel. La solution obtenue est extraite au dichlorométhane. La phase organique est lavée à l'eau distillée (2 fois) .. séchëe sur sul¬ fate de sodium et évaporée à sec. Le produit est puri- fié par chromatographie sur colonne sèche d'alumine basique (éluant : méthanol/acide acétique 80/20) ; produit isolé = 0,095 g ; Rdt = 85 %. ccm : R,. = 0,29 (éluant : CH Cl _o /Et0H, 80/20 avec 1 % -L 2 2 de NH.OH) . UV-visible. (dans MeOH à 1,33 x 10~ ⁵ M) /^ ( £)

642 (1,6 x 10 ³ ) ; 583 (3,1 x 10 ³ ) ; 544 (3,8 x 10 ³ ) ; 510 (9,8 x 10 ³ ) _? 412 (1,8 x 10 ⁵ ) (bande de Soret) .

RMN ¹ H(MeOHd ₄ à 294K) ^~8,98 (d,6H,J = 5,5 Hz, protons 2, 6-pyridine) ; 8,97 (m, 8H, β -pyrrole) ; 8,25 (d, 6H, J = 5,5 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 8,18 (d, 2H, J = 8,5 Hz, protons 2, 6-phenoxy-4) ; 7,47 (d, 2H, J = 8,5 Hz, protons 3, 5-phenoxy-4) ; 5,0 (m, 2H, NH ₂ ) ; 4,53 (t, 2H, J = 5,6 Hz, OCH ) ; 3,4 (m, 2H, CH N) ; 2,45 (quintuplet, 2H, J = 5,5 Hz, CH ₂ ) . : m/e = 692 (M ⁺ +H) ; fragments : 634

p) Cis-5, 10-bis/4- (3-amino-propyloxy) -phényl/- 15, 20-bis (4-pyridyl) -prophyrine. En poursuivant le même mode opératoire que ce¬ lui décrit dans l'exemple (o) mais à partir de la por¬ phyrine (j), nons obtenons la porphyrine dipyridyle porteuse de 2 bras en position cis.

Produit isolé = 0,066 g ; Rdt = 79 % ; ccm : R _f = 0 (éluant : CH Cl /EtOH, 80/20) .

UV-visible (dans MeOH/CHCl.,, 95/5 à 9,2 x lθ ^"β M) ( £) 644 (2,2 x 10 ³ ) ; 588 (3,3 x 10 ³ ) ; 548 (4,9 x 10 ³ ) ; 512 (9,2 x 10 ³ ) ; 414 (1,8 x 10 ⁷ ) (ban¬ de de Soret) . RMN ¹ H(CDC1 ₃ ) f 9,01 (d, 4H, J = 5,8 Hz, protons

2, 6-pyridine) 8,92 (d, 2H, J ≈ 4,9 Hz, fi> -pyrrole) ; 8,89 (s, 2H,β -pyrrole) ; 8,81 (s 2H, β -pyrrole) ; 8,77 (d, 2H, J = 4,9 Hz, "-pyrrole) ; 8,14 (d, 4H, J = 5,3 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 8,08 (d, 4H, J = 8,4 Hz, protons 2, 6-phenoxy-4) ; 7,27 (d, 4H, J = 8,4 Hz, protons 3, 5-phenoxy-4) ; 4,32 (t, 4H, J = 5,9 Hz, 0CH ₂ ) ; 3,08 (t, 4H, J = 6,0 Hz, CH ₂ N) ; 2,32 (m, 4H, CH ₂ ) ; -2,84 (s, 2H, NH pyrrole) .

Masse (DCI) : m/e 765 (M ⁺ +2) ; fragments à 707 et 649.

~ . "T Ef.-* _ i

Analyse : dans les calculs, on a considéré qu'il y avait 3 molécules d'éthanol de solvatation,

^C 48 ^H 42 ^N 8°2' ² ' ^5EtOH -

Calculé % : C, 72,48 ; H, 6,55 ; N, 12,76. Trouvé % : C, 72,00 ; H, 6,67 ; N, 12, 44.

-q) Tétraacétate de 5-/4- (N-triméthyl-3-aminopro- pyloxy) hényl/-10, 15, 20-tris (N-méthyl-4-pyridyl) -por¬ phyrine. La méthylation de la porphyrine (i) par la méthode déjà décrite dans l'exemple (lf) suivie d'un échange des contre-ions iodure en acétate conduit au produit cor¬ respondant ; Rdt = 85 % .

UV-visible (dans H ₂ 0 à 4,4 x 10~ ⁶ M)A ( £) 640 (1,8 x 10 ³ ) ; 580 (6,4 x 10 ³ ) ; 556 (6,6 x 10 ³ ) ; 518

(1,3 x 10 ⁴ ) ; 422 (1,9 x 10 ⁵ ) (bande de Soret) .

RMN ¹ H(CD COOD) j~9,48 (d, 6H, J ^' = 5,8 Hz, pro¬ tons 2, 6-pyridine) ; 9,17 (s large, 6H, /& -pyrrole) ; 9,08 (d, 2H, J = 4,8 Hz, β -pyrrole) ; 9,00 (d, 6H, J = 5,8 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 8,27 (d, 2H, J = 8,3 Hz, protons 2,6-phënyl) ; 7,51 (d, 2H, J = 8,3 Hz, protons 3,5-phenyl) ; 4,91 (s large, 9H, N-Me-4-pyri- dyl) ; 4,53 (m, 2H, 0CH ₂ ) ; 3,87 (m, 2H, NCH ² ) ; 3,41

(s, 9H, -NMe ₃ ) 2,63 (m, 2H, -CH ₂ -)

r) Pentaacëtate de cis-5, 10-bis/4-N-trimethyl-3- aπύnopropyloxy) phényl / - 15, 20-bis (N-methyl-4-pyridyl) -por¬ phyrine de manganèse (III) .

En suivant le même mode opératoire que pour l'exemple (Ih) , nous obtenons à partir du composé (j) la porphyrine métallée avec le manganèse et méthylée sur les noyaux pyridiniques et portant deux bras 3- triméthyl-aminopropyloxy- en para des noyaux phênyle. Produit isolé ≈ 0,015 g ; Rdt = 65 % . UV-visible (dans H ₂ 0 à 9,3 x 10~ ⁶ M) ( £) 600

(6,9 x 10°) 564 (1,1 x 10 ⁴ ) ; 467 (8,7 x 10 ) (bande de Soret) .

EXEMPLE 4

Dérivés (amino-butyryl) aminophénylique de porphyrine. s) 5-/4- (N-Boc-aminobutyryl) aminophenyl/-10, 15, 20-tris- (4-pyridyl) -porphyrine.

Afin de synthétiser ce dérivé, un a ino-acide du type N-Boc-(CH ₂ ) -C00H est à préparer selon la mé¬ thode décrite dans le paragraphe suivant, ici n = 3.

Acide N-Bo ^' c-4-aminobutyrique :

A une suspension de 0,4 g (0,004 mole) d'acide 4-amino-butyrique, de 0,155 g (0,004 mole, 1 eq.) d'oxyde de magnésium et de 4 ml de soude 1M dans un mé¬ lange dioxane/eau (6/1) , sont ajoutés lentement 0,96 g (0,0044 mole, 1,1 eq.) de dicarbonate de di-tert-buty- le. Le mélange est agité pendant 20 h à température am¬ biante. Après filtration, le résidu est lavé à l'eau. Le filtrat est concentré, puis on ajoute l'eau. Après un lavage à l'éther, la phase aqueuse est acidifiée jusqu'à pH = 2-3 avec de l'acide acétique à 10 % puis extraite à l'acétate d'êthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium et évaporée à sec. L'huile orange obtenue est triturée avec 1'hexane puis séchée sous vide à 60°C. Le produit obtenu est sous forme de solide blanc.

Produit isolé = 0,716 g ; Rdt = 90 % .

IR (pastille KBr) v(cm ^-1 ) 3343 (NH et COOH) ; 1689 (large ; COOH et COOtBu) .

Masse (DCI) : m/e = 204 (M ⁺ +l) ; 221 (M ⁺ +18) .

RMN ¹ H(CDC1 ³ ) <Tll,34 (m, IH, COOH) ; 3,14 (t dé¬ doublé, 2H, J = 6,75 Hz, CH ₂ N) ; 2,36 (t, 2H, J = 6,8 Hz, CH ₂ C0) ; 1,79 (quintuplet, 2H, J = 6,8 Hz, -CH ₂ -) ; 1,41 (s, 9H, tBu) .

— ^~ * ιπ s- ^~ -J.

A l'aide de ce dérivé, la porphyrine (s) peut se préparer de la façon suivante.

A 0,063 g (0,31 mmole, 3,1 eq.) d'acide N-Boc-4- aminobutyrique dans 6 ml de dichlorométhane anhydre, maintenue dans un bain de glace, on ajoute 0,050 ml (0,36 mmole ; 4 eq.) de triëth lamine, puis 0,029 ml (0,3 mmole ; 3,3 eq.) de chloroformiate d'êthyle et on laisse le mélange agiter à 0°C pendant 30 mn. Le mélan¬ ge est ensuite évaporé à sec, puis repris dans 6 ml de dichlorométhane sec et refroidi dans un bain de glace. On ajoute 0,050 ml (0,36 mmole) de triëthylamine, puis 0,066 g (0,1 mmole) de la porphyrine de l'exemple (1b) .

Le mélange est agité à 0°C pendant 1 h, puis 2 h à température ambiante. Le solvant est ensuite êva- pore à sec et le résidu est lavé abondamment à l'eau distillée.

Le résidu est repris dans du dichlorométhane. Cette solution est lavée avec du bicarbonate de sodium à 5 % (2 fois) , puis à l'eau distillée (3 fois) . La phase organique est séchée sur sulfate de sodium puis évaporée à sec. Le produit obtenu est presque pur, ce¬ pendant, une purification sur une colonne sèche d'alu¬ mine permet l'obtention d'un produit très pur (éluant : CH ₂ C1 /EtOH, 99,5/0,5) . Produit isolé = 0,066 g ; Rdt = 77 %.

Masse(FAB ) : m/e = 8,19 (M ⁺ +l) ; fragments ; 763 (M-tBu) ; 719 (M-COOtBu) ; 633 (M-C (CH ₂ ) NHCOOtBu) .

UV-visible (dans CHC1 à 2,04 x 10 ^" ~6M) ( £) 642 (2,9 x 10 ⁴ ) ; 586 (5,2 x 10 ⁴ ) ; 548 (6,8 x 10 ⁴ ) ; 512 (1,6 x 10 ⁵ ) ; 418 (1,6 x 10 ^δ ) (bande de Soret) .

IR (pastille Br) v (cm ^"1 ) : 3319 (NH) ; 1689 (C=0) ; 1593 (Ar) .

RMN ¹ H(CDC1 ) 6 9,04 (m, 6H, protons 2, 6-pyridine) 8,97 (d, 2H, J = 4,9 Hz, -pyrrole) ; 8,84 (s, 4H, - pyrrole) ; 8,81 (d, 2H, J = 4,9 Hz, β -pyrrole) ; 8,16

^{~ ~ ~ ~~ ~ ~} - - ^t

(d, 6H, J = 5,9 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 8,08 (m, 4H, protons phenoxy)4) ; 4,27 (m, 2H, CH ₂ N) ; 2,57 (t, 2H,

J = 6,5 Hz, CH ₂ C=0) ; 2,02 (m, 2H, -CH ₂ ~) ; 1,53 (s, 9H, tBu) ; -2,90 (s, 2H, NH pyrrole) .

t) Acétate de 5-/4- ( N-Boc-aπ _nobutyri ) ami_nophenyl/-10 , 15 0-tris-( 4 -pyridyl ) -porphyrine de manganèse ( III) .

La mëtallation de la porphyrine de l ' exemple (s ) avec de l ' acétate de manganèse dans du DMF selon la méthode déj à décrite dans l ' exemple ( lg) permet d ' obtenir la porphyrine de manganèse attendue .

Produit isolé : m = 0 , 024 g ; Rdt = 70 % . UV-visible (dans CHC1 à 2 , 15 x 10 ^{~ 6} ) ( £ ) 613

(.6,7 x 1.00 ⁴ ) ; 578 (7,4 x 10 ⁴ ) ; 475 (8,9 x 10 ⁵ ) (bande de Soret)

u) 5-/4-(aπii-noburytyryl) aminophenyl/-10, 15, 20-tris (4-pyridyl) -porphyrine

Une solution de 0,027 g (0,03 mmole) de la por- phyrine (s) dans 14 ml d'une solution à 25 % d'acide trifluoroacêtique dans le dichlorométhane est agitée pendant 1 h à température ambiante. Le solvant est en¬ suite évaporé à sec. Au résidu obtenu est ajouté un lar¬ ge excès d'éther anhydre et une forte agitation est main- tenue jusqu'à formation d'un précipité abondant. Après filtration, le précipité est dissous dans l'eau, puis neutralisé avec du bicarbonate de sodium à 5 % . La phase aqueuse ainsi obtenue est extraite au dichlorométhane (3 fois) . Les phaes organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, puis évaporées à sec. Le pro¬ duit est -purifié par une précipitation à l'aide d'un mé¬ lange dichlorométhane/hexane.

Produit isolé = 0,020 g ; Rdt = 84 % ; UV-visible (dans CHC1 ₃ à 3,62 x 10~ ^β M) A (£) 645 (1,1 x 10 ⁴ ) ; 588 (1,7 x 10 ⁴ ) ; 548 (2,2 x 10 ⁴ ) ; 513

(3,3 x 10 ⁴ ) ; 419 (6,5 x 10 ⁵ ) (bande de Soret) .

IR (lames CaF.,) _n (cm ^-1 ) 3200 (NH large) ; 1629 (C=0 large) .

Masse(FAB ⁺ ) : m/e 719 (M+l) ⁺ . RMN ¹ H(CDC1 ₃ ) O 9,3(d Hz, protons

2, 6-pyridine) ; 8,83 (m, 8H, /^-pyrrole) ; 8,15 (d, 6H, J=5,l Hz protons3,5-pyridine) ; 7,97 (d, 2H, J=8,l Hz, protons 2,6-amino-4-phényl) ; 7,08 (d, 2H, J=8,l Hz, protons 3, 5-amino-4-phenyl) ; 3,24 (m, 2H, CH ₂ N) ; 2,03 (m, 4H, CH ₂ C=0 et -CH ₂ ) ; -2,90 (m, 2H, NH pyr¬ role) .

v) Pentaacëtate de 5-/4- (triméthylaminobutyryl) aminophényl/-10, 15,20-tris (N-mêthyl-4-pyridyl) -por- phyrine de manganèse (III) .

La mëtallation de la porphyrine (u) avec de l'acétate de manganèse dans le DMF suivie d'une méthy- lation avec de l'iodure de méthyle dans le DMF (selon la méthode déjà décrite pour l'exemple (lh) conduit après l'échange de contre-ions iodure en acétate à la métalloporphyrine correspondante.

Produit isolé : 0,021 g ; Rdt = 87 % ; UV visible (dans H O à 3,76 x 10~ ⁵ M)À (£ ) 596 (1,3 x 10 ³ ) ; 560 (2,8 x 10 ³ ) ; 462 (2,8 x 10 ⁴ ) (bande de Soret) .

Masse- (FAB ) : m/e 844.

EXEMPLE 5

Préparation d'une molécule hybride métalloporphyrine- intercalant.

2 aa)) BBrroomure de N - (4-ethoxycarbonyi-butyl) -9-mé- thoxy-ellipticinium U Unn mmééllaannggee de 9-mêthoxy-ellipticine" (0 , 102 g 0,37 mmole) et de 5-bromo-valërate d'éthyle (0,058 ml

tϋi ____- :

0,37 mmole ; 1 eq.) dans 2 ml de DMF anhydre est chauffé à 120°C sous agitation pendant 4 heures. L'agitation est maintenue pendant la nuit à température ambiante puis ^, on ajoute de 1 ' éther au mélange. Après filtration, la poudre organge obtenue est lavée à 1 ' éther puis séchée sous vide. Produit isolé = 0,156 g ;R t = 87 % .

UV-visible (CHC1 ₃ ) λ ( £) : 406 (3,9 x 10 ³ ) ; 390 (4,15 x 10 ³ ) ; 348 (3,4 x 10 ³ ) ; 332 (6,5 x 10 ³ ) . RMN ¹ H (DMS0-d6 à 303 K) S ^" : 10,11 (s, IH, K ) ; 8,57 (d, IH, J = 7,1 Hz, H ₃ ) ; 8,43 (d, IH, J = 7,1 Hz, H ₄ ) ; 7,82 (d, IH, J = 1,9 Hz, H _Q ) ; 7,62 (d, IH, J = 8,8 Hz, H_) ; 7,33 (dd, IH, J = 2,2 Hz, 8,7 Hz, H _g ) ; 4,83 (t, 2H, J = 7,1 Hz, (CH ₂ ) ₂ ) ; 4,16 (q, 2H, J = 7,1 Hz, (CH ₂ ) _? ) ; 4,02 (s, 6H, CH ₃ 0) ; 3,44 (s, 3H, (CH ₃ ) ₁₁ ) ; 2,84 (s, 3H, (CH ₃ ) ₅ ) ; 2,53 (t, 2H, J = 7,3 Hz, (CH ₂ ) ₁₅ ) ; 2,16 (m, 2H, (CH ₂ ) ₁₃ ) ; 1,73 (m,2H, (CH ₂ ) ₁₄ ) ; 1,28 (t, 3H, J = 7,1 Hz, (CH ₃ ) _l8 ) . Les atomes de carbone du bras ont été numérotés de 12 à 18 en par¬ tant de l'azote 2 de la 9-mêthoxy-ellipticine (le mé- thyle de la partie ester ayant le numéro 18) .

_i Ce composé et son activité ont été notamment décrits dans J. Le Men et Coll., Rev. Europ. Etud. Clin, et Biol. 1970, XV, 534-538.

2 b) chlorure de N - (4-carboxybutyl) -9-méthoxy-ellip- ticinium

0,148 g (0,3 mmole) d'ester (a) dans 14 ml d'acide chlorhydrique IN sont chauffés au reflux sous agitation pendant 3 heures . L 'agitation est maintenue pentant tou- te la nuit à la température ambiante. Le mélange est en¬ suite évaporé à sec ; le résidu est repris dans du métha- nol et on fait précipiter le produit par 1 ' éther sous forme d'une poudre erange. Après filtration, le produit est séché sous vide. Produit isolé = 0,125 g ; Rdt = 99 %. La présence d'ions chlorure a été vérifiée par un

____ _.-___.»» _" ¥

_.____. __** _T*° _H_rT- H ^~ _9r *"*-Î... V**-*• V*I î'--- '• ^' - *

test avec le nitrate d'argent.

UV-visible (CHCL ₃ /MeOH) A ( £) : ⁵² U/ ^{29 x x} ° ³ ) 386 (2,5 x 10 ³ ) T 321 (1,8 x 10 ⁴ ) .

Masse (DCI) = M ⁺ ≈ 377 Dec. 210°C. RMN ¹ H (DMSO-d.. à 303 K) S ^" : 12,19 (IH, s, COOH) ;

D

10,22 (IH, s, H ) ; 8,65 (d, IH, J = 7,2 Hz, H ₃ ) ; 8,59 (d, IH, J = 7,2, Hz,H ₄ ) ; 8,05 (d, IH, J = 2,3 Hz, H _Q ) 7,73 (d, IH, J = 8,7 Hz,H ₇ ) ; 7,44 (dd, IH, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz, Hg) ; 4,84 (t, 2H, J = 7,0 Hz, (CH ₂ ) _{± 2} ) 7 4,06 (s, 3H, CH ₃ 0) _. ; 3,46 (s, 3H, (CH ₃ ) ) ; 3,43

(s, IH, NH) ; 2,97 (s, 3H, (CH ₃ ) g) ; 2,45 (t, 2H, J = 7,4 Hz, (CH ₂ ) ₅ ) ; 2,16 (m, 2H, (CH ₂ ) _l3 ) ; 1,70 (m, 2H, (CH ₂ )14) .

Le chlorure obtenu est dissous dans du mëthanol. L'addition de résine essorée d' echangeurs d'ions de ty¬ pe Amberlite IRN 78 sous forme acétate (4 eq.) à cette solution suivie d'une agitation de 3 heures à la tempé¬ rature ambiante permet, après filtration puis evapora¬ tion du solvant, d'obtenir l'acétate correspodant. Le produit est ensuite purifié par précipitation dans un mélange mëthanol/éther.

IR (lames NaCl) : V ^" _c0 = 1656 cm ^-1 . UV-visible (CH 0H)A ( £) : 385 (5,7 x 10 ³ ) ; 318 (5,7 x 10 ⁴ ) . En suivant les mêmes procédés de synthèse,

2 nous avons préparé les bromures de N - (2-ëthoxycarbo-

2 nyl-êthyl) -9-méthoxy-ellipticinium et de N -(5-étho- xycarbonyl-pentyl) -9-méthoxy-ellipticinium ainsi que leurs homologues porteurs d'une fonction acide :

2 c) Chlorure de N - (2-carboxyëthyl) -9-mëthoxy-ellip- ticinium

Produit isolé : 0,096 g ; Rdt = 98 %.

UV-visible (dans MeOH à 2,2 x 10~ ⁵ )A (£) 410 (5,3 x 10 ³ ) ; 380 (8,0 x 10 ³ ) ; 305 (6,2 x 10 ⁴ ) ; 295

(6,5 x 10 ⁴ ) ; 274 (5,9 x 10 ⁴ ) .

RMN ² H (MeOH-d ₄ ) 0 ^{^} 9,76 (s, IH, E_ ) ; 8,38 (d, IH, J = 7,0 Hz, H ₃ ) ; 8,31 (d, IH, J = 7,0 Hz, H ₄ ) ? 7,78 (d, IH, J = 2,0 Hz, H ) ; 7,54 (d, IH, J = 8,8 Hz, H _y ) ; 7,28 (d, IH, J = 8,8 Hz, J = 2,0 Hz, H _g ) ; 4,98 (m, IH, (CH ₂ ) ₂ ) ; 4,02 (s, 3H, MeO) ; 3,25 (s, 3H, Me ₁₁ ) ; 2,84 (m, 2H, (CH ₂ ) ₁₃ ) ; 2,79 (s, 3H, Me..) .

2 d) Chlorure de N - (5-carboxypentyl) -9-méthoxy-ellip- ticinium.

Produit isolé = 0,170 g ; Rdt = 99 %. UV-visible (dans MeOH à 3,3 x lθ ^"5 M) A ( ) 440 (2,4 x 10 ³ ) ; 382 (6,1 x 10 ³ ) ; 3,13 (5,5 x 10 ⁴ ) . Masse (DCI) : M ⁺ = 391. RMN ¹ H(DMS0-d ₆ à 294K) <P 2,24 (s, IH, COOH) ;

10,20 (s, IH, n ) ; 8,62 ^' (d, IH, J ≈ 7,0 Hz, H ₃ ) ; 8,56 (d, IH, J = 7,0 Hz, H ₄ ) ; 8,02 (d, IH, J = 2,2 Hz, H _Q ) ; 7,72 (d, IH, J ≈ 8,8 Hz, H _? ) ; 7,42 (dd, IH, J = 8,8 Hz, J = 2,2 Hz, H-) ; 4,8l(t, 2H, J = 7,2 Hz, (CH ₂ ) ₂ ; 4,05 (s, 3H, MeO) ; 3,44 (s, 3H, Me ) ; 2,95 (s, 3H,

Me ₅ ) ; 2,36 (t, 2H, J = 7,0 Hz, (CH ₂ ) _g ) ; 2,13 (m, 2H, (CH ₂ ) ₁₃ ) ; 1,70 (m, 2H, (CH ₂ ) _l5 ) ; 1,47 (m, 2H, (CH ₂ ) _l4 ) .

2 e) Chlorure de 5-/4-/5- (9-mëthoxy N -elliptici- nium) -butyryl amino/-phênyl/-10, 15, 20-tris- (4-pyridyl) porphyrine

A 0,054 g (0,13 mmole ; 5,4 eq.) de (b) dans 2 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute 0,023 ml (0,16 mmole ; 6,7 eq.) de la triéthylamine puis 0,021 ml (0,22 mmole ; 9,1 eq.) de chloroformiate d'éthyle et on laisse le mélange sous agitation à température ambiante pendant 30 mn. Le mélange est ensuite évaporé à sec puis repris dans 2 ml de dichlorométhane anhydre. On ajoute 0,023 ml (0,16 mmole) de la triéthylamine puis 0,015 g (0,024 mmole) de la porphyrine de 1 ' exem-

n i *- ^« _ _.__, Ui t.rΞ"FSiV ^, '_rϋ"*iLA _ - _~' ~t' ~iV.ri~-.f'- ^• V*

pie 1 b) et on porte le mélange au reflux pendant 4 heu ^¬ res. L'avancement de la réaction est suivi par CCM. On laisse ensuite le mélange revenir à la température am¬ biante puis, le solvant est évaporé à sec. Le résidu re- pris par le dichlorométhane est purifié sur plaque de silice (éluant : EtOH/CH Cl 20/80) à l'abri de la lu¬ mière. Le produit est repris par du méthanol et de l'acide acétique. Le filtrat est évaporé à sec, lavé à l'eau distillée puis séché sous vide. Produit isolé = 0,011 g ; Rdt = 45 %.

Masse (FD) : M ⁺ -H = 991.

UV-visible (CH ₃ OH/AcOH : 99/1) A ( £) : 318 (7,6 x 10 ⁴ ) ; 414 (5,2 x 10 ⁴ ) ; 508 (3,7 x 10 ³ ) .

RMN ¹ H (DMS0-d6 à 303 K) S~ '• 10,32 (s, IH, E _± ) ; 9,16 (d, 6H, J = 5,3 Hz, p-2, 6-pyridine) ; 9,01 (m, 8H, ^-pyrrole) ; 8,73 (m, IH, H ) ; 8,67 (m, IH, H ₄ ) ; 8,38 (d, 6H, J = 5,3 Hz, p-3,5-pyridine) ; 8,21 (m, 4H _r amino-4-phényl) ; 8,09 (s élargi, IH, H _) ; 7,76 (d, IH, J = 8,7 Hz, H ₇ ) ; 7,44 (d élargi, IH, J = 8,7 Hz, Hg) ; 4,96 (m, 2H(CH ₂ ) ₂ ; 4,10 (m, IH, NH) ; 4,02

(s, 3H, CH ₃ 0) ; 3,53 (s, 3H, Me _ιχ ) ; 3,01 (s, 3H, Me ₅ ) ; 2,34 (m, 2H, (CH ₂ ) ; 2,10 (m, 4H, (CH ₂ ) _χ3 et _χ4 ) ; -2,90 (s, 2H, NH pyrrole) .

f) têtraacétate de 5- $ 4.-/5-(9-méthoxy-N -ellipti- cinium) -butyrylamino/phényl 1 -10, 15, 20-tris (N-méthyl- 4-pyridyl) orphyrine

Le résidu de l'étape (e) précédente est repris dans 3 ml de DMF sec, 0,021 ml (0,34 mmole, 10- eq.) d'iodure de méthyle est ajouté puis, on porte le mé¬ lange au reflux pendant 3 heures. On laisse le mélange sous agitation à la température ambiante pendant 15 heures. Le solvant est ensuite évaporé à sec et ^' le ré¬ sidu est lavé à l'eau plusieurs fois. Après filtration, le précipité est trituré avec l'acétone puis filtré et

_t - ~- _T ^f. v _-. E>= ïy5 ^| 3L - .=.Λ ^' -;

séché sous vide. Produit isolé ≈ 0,041 g ; Rdt = 76 %. UV-visible (MeOH) λ (£ ) : 655 (2,19 x 10 ³ ) ;

592 (3,4 x 10 ³ ) ; 555 (5,0 x 10 ³ ) ; 519 (8,4 x 10 ³ ) ;

5 i 4

425 (1,00 x 10 ) ,(_bande de Soret) ; 318 (5,9 x 10 ) . L'échange d'ions iodure en acétate s'effectue avec de bons rendements à partir d'une solution mëtha- nolique de ce produit ajoutée à la résine essorée d' echangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous for¬ me acétate. Après 2-3 heures d'agitation à la tempéra- ture ambiante, le mélange est filtré et le solvant évaporé à sec. Le résidu est trituré avec de l'acétone, filtré et séché sous vide (Rdt ≈ 80 %) .

UV-visible (MeOH) A ( £ ) : 652 (1,7 x 10 ³ ) ; 590 (1,5 x 10 ³ ) ; 545 (2,3 X 10 ³ ) ; 512 (5,3 x 10 ³ ) ; 415 (7, 8 (2,7 x 10 ⁴ ) .

RMN ¹ H (DMSO-d6 à 296 K) <T : 10,32 (s, 1H,H ) ; 9,16 (d, 6H, J = 5,1 Hz, p-2, 6-pyridine) ; 9,00 (m, 8H, P -pyrrole) ; 8,73 (m, IH, H ₃ ) ; 8,61 (m, IH, H ₄ ) ; 8,37 (d, 6H, J = 5,1 Hz, p-3, 5-pyridine) ; 8,24 (s, 4H, amino-4-phênyl) ; 8,03 (s, IH, H ) ; 7,73 (d, IH, J = 8,70 Hz, H _? ) ; 7,42 (dd, IH, J = 8,70 Hz, J ≈ 2,4 Hz, Hg) ; 4,98 (m, 2H, (CH ₂ ) _12. ; 4,01 (s, 3H, 0CH ₃ ) ; 3,70 (s, 3H, Me ) ; 3,48 (s, 9H, CH ₃ ) ; 2,98 (s, 3H, Me ₅ ) ; 2,33 (m, 2H, (CH ₂ ) ^ ; 2,13 (m, 4H, (CH ₂ ) et 14) ; 2,03 (s, 3H, CH ₃ COθ ^" ) ; -2,91 (s, 2H, NH pyrrole) .

Cette molécule peut être métallée de la même manière que la prophyrine correspondante selon l'exem- pie lg) . On préfère toutefois utiliser la méthode sui¬ vante combinant les étapes e) et f) du présent exemple.

g) méthode générale de synthèse de metalloporphy¬ rines hydrosolubles liées à une molécule d'intercalant consistant en la 9-mëthoxy-ellipticine.

F ~~- !.. . ^~ " V-

A 0,070 g (0,17 mmole, 4,8 eq.) de (b) dans 3 ml de dichlorométhane anhydre (ceci est également applica ^¬ ble à (c) et (d)), on ajoute 0,037 ml (0,26 mmole ; 7,6 eq.) de triéthylamine, puis 0,035 ml (0,37 mmole ; 10,6 eq.) de chloroformiate d'éthyle et on laisse le mélange agiter à la température ambiante pendant 30 mn. Le mé¬ lange est ensuite évaporé à sec, puis repris dans 3 ml de dichlorométhane sec. On ajoute 0,037 ml (0,26 mmole) de triéthylamine, puis 0,022 g (0,35 mmole) de la pro- phyrine de l'exemple 1 b) et on porte le mélange au re¬ flux pendant 4 h. Le mélange est ensuite évaporé à sec, puis repris dans 3 ml de DMF anhydre, 0,050 ml (0,38 mmole, 11 eq.) de 2, 4, 6-collidine, puis 0,39 mmole (11 eq.) de sel de manganèse, de fer ou de zinc (Mn(CH-COO) , 4H ₂ 0 ^' ; FeCl ,4H ₂ 0 ; Zn(CH.-C00) , 2H 0) sont ajoutés à la solution. Le mélange est chauffé à 140°C pendant 3 h, puis on le laisse agiter à la température ambiante pen¬ dant 15 h. Le solvant est ensuite évaporé à sec. Le ré¬ sidu est lavé à l'eau distillée, puis purifié sur une colonne sèche d'alumine neutre (éluant : CH Cl puis CH ₂ Cl ₂ /Me0H) .

La métalloporphyrine ainsi obtenue est reprise dans 3 ml de DMF anhydre. L'iodure de méthyle (10 eq.) est ajouté à la solution. On porte le mélange au reflux pendant 3 h, puis on le laisse agiter pendant 15 h à la température ambiante. Le solvant est évaporé à sec et le résidu repris dans du méthanol. L'addition de résine essorée d' echangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78, sous forme acétate (4 eq.) à cette solution, suivie d'une agitation de 3 h à la température ambiante, per¬ met, après filtration puis evaporation du solvant, d'ob¬ tenir l'acétate correspondant. Le résidu est ensuite la¬ vé au dichlorométhane, puis recristallisé dans un mélan¬ ge méthanol/acétone. Les rendements et les données phy- sico-chimiques des différentes molécules hybrides sont

-_-, a -"* " »-•-«-» «\_ i ^~

décrits ci-après .

Molécules hybrides "intercalant-mëtalloporphy- rine "résultant du couplage entre la porphyrine de l'exemple (1b) et 1 ' ellipticinium de l'exemple (5b) (longueur du bras reliant les deux entités est de 7 chaînons jRdt = 60-80 % . UV-visible (H O) r { £ ) pour les trois composés hybrides métallés, respectivement les dérivés :

(Mn) : 565 (4,8 x 10 ³ ) ; 465 (3,7 x 10 ⁴ ) , (bande de

Soret) ; 316 (4,7 x 10 ⁴ )

(Fe) : 430 (2,7 x 10 ) , bande de Soret ; 315 (2,4 10 ⁴ )

3

Zn) 615 (5,01 x 10 ^J ) 570 (9,9 x 10 ³ ) 442 (9,5 x 0 ⁴ ) , bande de Soret ; 3,15 (6,1 x 10 ⁴ ) .

Masse (FAB ) : pour (Mn) : 1182 et pour (Fe)

1183. Les metalloporphyrines Mn et Fe étant paramagné- tiques, nous ne pouvons décrire que le spectre RMN H du composé (Zn) :

RMN ¹ H (DMSO d6 à 303 K) <f : 10,24 (s, IH, H ) ;

9,54 (d, 6H, J = 5,2 Hz, p-2, 5-pyridine) ; 9,10 (s, 4H, amino-4-phényl) ; 9,00 (m, 8H, β -pyrrole) ; 8,62 (m,

2H, H ₃ et H ₄ ) ; 8,20 (m, 6H, p-3, 5-pyridine) ; 8,09

(s élargi, IH, H ) ; 7,77 (d, IH, J ≈ 8,7 Hz, H _? ) ;

7,45 (d, IH, J = 8,7 Hz, H _Q ) ; 5,02 (m, 2H, (CH ) ^ ;

4,83 (s large, 9H, N-Me) ; 4,04 (s, 3H, OCH ) ; 3,55 (s, 3H, Me ) ; 3,03 (s, 3H, Me ) ; 2,34 (m, 2H,

(CH ₂ ) ₁₅ ) ; 2,12 (m, 4H, (CH ₂ ) _l3+14 ) ; .02 (s, 3H,

CH ₃ C00~) .

Molécules hybrides "intercalant-métalloporphyrine" résultant du couplage entre la porphyrine de l'exemple

' ~ î" . -t » ^"

(lb) et l'eilipticinium de l'exemple (bd) . (longueur du bras reliant les deux entités est de 8 chaînons) .

Pentaacêtate de 5- f4-/6- (9-méthoxy-N -elliptici- nium) -pentanoyl/amino-phényl l -10, 15,20-tris- (N-méthyl- 4-pyridyl) -porphyrine de manganèse (III) . Rdt = 79 %.

UV-visible (H O à 1,86 x 10~ ⁵ M) H (£) 600 (4,3 x 10 ³ ) ; 564 (7,4 x 10 ³ ) ; 464 (1,6 x 10 ⁴ ) (ban- de de Soret) ; 314 (5,6 x 10 ⁴ ) .

Tétraacêtate de 5- f 4-/6- (9-méthoxy-N -elliptici- nium) -pentanoyl/a ino-phénylxamino-phényl) -10, 15, 20-^ tris- (4-pyridyl) -porphyrine de zinc (II) . Rdt = 79 %.

UV-visible (dans MeOH à 3,0 x ^" 10~ ⁶ M) ( £ ) 594

(5,3 x 10 ³ ) ; 554 (1,6 x 10 ⁴ ) ; 420 (4 ^" ,22 x 10 ⁵ ) (bande de Soret) ; 314 (6,3 x 10 ⁴ ) .

La résolution en RMN étant meilleure, le dérivé non quaternarisë sur les pyridiniu est décrit :

RMN ¹ H (DMSO-db, à 330 K)<TlO,30 (s, IH, HJ,.) ;

9,12 (d, 6H, J = 5,00 Hz, protons 2, 6-pyridine) ; 8,94 (m, 8H,p -pyrrole) ; 8,72 (d, IH, J = 7,10 Hz, H--) ; 8,62 (d, IH, J = 6,85 Hz, H^) ; 8,32 (d, 6H, J = 5,0 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 8,17 (m, 4H, protons amino- 4-phenyl) ; 8,07 (d, IH, J = 2,10 Hz, H ) ; 7,70 (d, IH, J = 8,70 Hz, H..) ; 7,39 (d, IH, J = 8, 70 Hz ; J = 2,20 Hz, Hg) ; 4,93 (m, 2H, (CH-,) _χ2 ) ; 3,98 (s, 3H,MeO) 3,52 (s, 3H, Me ) ; 2,97 (s, 3H, Me ) ; 2,29 (m, 2H, ^(CH 2 ⁾ 16 ^{) X} ' ^{95 (} ' ^4H ' ^(CH 2 ⁾ 13 et 15 ^{J ; 1,β5 m} ' ^H '

(CH ₂ ) ₁₄ 1-

3?

Molécules hybrides "intercalant-métalloporphyrine" résultant du couplage entre la porphyrine de l'exemple 3 (o) et l'eilipticinium de l'exemple (5b) (longueur du

i » .-.-l Imi iV-ii.---"-' ^»

bras reliant les deux entités est de il chaînons) .

- La métalloporphyrine de manganèse (III) (N-méthyl- 4-pyridyl) correspondante :

Rdt ≈ 65 % . UV-visible (H ₂ 0 à 1,1 x 10~ ⁵ M) ( £ ) 596 (1,9 x

10 ³ ) ; 564 (3,6 x 10 ³ ) ; 464 (3,5 x 10 ⁴ ) (bande de Soret) 314 (2,3 x 10 ⁴ ) .

- La métalloporphyrine de zinc (4-pyridyl) corres- pondante (la résolution en RMN étant meilleure, le dérivé non quaternarisé sur les pyridinium est décrit) : ⁴ -

Rdt = 60 % . UV-visible (dans MeOH à 1,6 x 10~ ⁶ M) ^ ( £) 596

(6,3 x 10 ³ ) ; 554 (2,2 x 10 ⁴ ) ; 420 (5 x 10 ⁵ ) (bande de

Soret) ; 314 (7,5 x 10 ⁴ ) .

Masse(FAB ⁺ ) : m/e 1114(M ⁺ ) .

RM ¹ H (DMSO-d,. à 303 K)<_T:LO,26 (S, IH, H- ) ; 9,11 b 1 ( ~~ r 6H, J = 4,b5 Hz, protons 2, 6-pyridine) ; 8,93 (m, 8H, β -pyrrole) ; 8,66 (d, IH, J = 6,75 Hz, H ₃ ) ; 8,58 (d, IH, J - 5,75 Hz, E . ) ; 8,32 (d, 6H, J = 4,65 Hz, protons 3,5- pyridine) ; 8,15 (d, 2H, J = 8,45 Hz, protons 2,6-phénoxy- 4) ; 8,01 (s élargi, IH, H } ; 7,65 (d, IH, J = 8,60 Hz, H ₇ ) ; 7,43 (d, 2H, J = 8,45 Hz, protons 3, 5-phénoxy-4) ; 7,35 (d, IH, J = 8,8 Hz, H _g ) ; 4,88 (m, 2H, (CH ₂ ) ₂ ); 4,39 (m, 2H, (CH ) _χ9 ) ; 4,00 (s, 3H, MeO) ; 3,45 (s, 3H, Me _1]L ) ; 2,91 (s, 3H, Me..) ; 2,39 (m, 2H, (CH ₂ ) _g ) ; 2,17 (m, 4H, (CH ₂ ) _{13 et 18} ) ; 1,76 (m, 4H, (CH ₂ ) _{χ4 efc 1?} J.

__Molécules hybrides résultant du couplage entre la porphyrine de l'exemple 4 (u) et l'eilipticinium (5b)

(longueur du bras reliant les deux entités est de 12 chaî- nons) :

__- ^~ . 1.-W -

- La métalloporphyrine de manganèse (III) (N-méthyl-

4-pyridyl) correspondante :

Rdt = 47 %.

UV-visible (MeOH à 1,1 x 10~ ⁵ M) * ( € ) 598 (3,6 x 10 ³ ) ; 556 (1,3 x 10 ⁴ ) ; 421 (2,8 x 10 ⁵ ) ; 315 (5,7 x 10 ⁴ )

La résolution en RMN étant meilleure, le dérivé zinc non quaternarisë sur les pyridinium est décrit :

Zn(PP) (py) ₃ :

-0-NH(CO)-CH ¹⁹ -CH ₂ ^l8 -CH ₂ ¹⁷ -NH(CO)-CH ₂ ^l5 -CH ₂ ^l -CH ₂ ¹³ - CH ₂ ¹² _N -Ellip

RMN ^X H (DMSO-d,b. à 303 K)<TlO,21 (s, IH, H1.) ;

9,10 (d, 6H, J = 5,60 Hz, protons 2, 6-pyridine) ; 8,98

(d, 2H, J = 4,7 Hz, f>-pyrrole) ; 8,93 (s, 4H, -pyrrole) ;

8,89 (d, 2H, J = 4,7 Hz, -pyrrole) ; 8,63 (d, IH, J = 7,10 Hz, H ₃ ) _* ; 8,52 (d, IH, J = 7,10 Hz, H ; 8,31 (d, 6H, J ≈ 5,60 Hz, protons 3,5-pyridine) ; 8,19 (s élargi, 4H, protons amino-4-phényl) ; 7,96 (d, IH, J = 2,10 Hz, H _1Q ) ; 7,68 (d, IH, J = 8,78 Hz, H _? ) ; 8,38 (d, IH, J = 8,78 Hz, J = 2,2 Hz, H _g ) ; 4,87 (t, 2H, J = 6,80 Hz, (CH ₂ ) ₁₂ ) ; 3,99 (s, 3H, MeO) ; 3,39 (s, 3H, e^) ; 2,yθ (s, 3H, Me ₅ ) ; 2,39 (t, 2H, J = 6,90 Hz, (CH ₂ ) _ιg ) ; 2,18 (m, 4H, (CH ₂ ) _{13 et 1Q} ) 1,99 (t, 2H, J = 6,90 Hz, (CH ₂ ) ₁₅ ) ; 1,76 (m, 4H, (CH.,) _{χ4 et 1?#}

Molécules hybrides résultant du couplage entre la métalloporphyrine de l'exemple 3 (o) et de l'eilipticinium de l'exemple (5d) (longueur du bras reliant les deux en¬ tités est de 12 chaînons) :

- La métalloporphyrine de manganèse (III) (N-méthyl- 4-pyridyl) ;

Rdt = 44 %.

UV-visible (H ₂ 0 à 5,3 x lθ ^"6 M)A ( _ ) 620 (5,2 x ÎO ³ ) ; 674 (8,5 x 10 ³ ) ; 466 (7,4 x 10 ⁴ ) (bande de Soret)

315 (7,5 x 10 ⁴ )

- La métalloporphyrine de zinc (4-pyridyl) : Rdt = 41 %.

UV-visible (MeOH à 8,7 x 10~ ⁶ M) ( £) 600 (3,7 X 10 ³ ) ; 558 (1,2 X 10 ⁴ ) ; 422 (2,4 x 10 ⁵ ) ; 316 (7,6 x 10 ⁴ ) .

La résolution en RMN étant meilleure, le dérivé zinc non quaternarisé sur les pyridinium est décrit :

9,10 (d, 6H, J = 4,30 Hz, protons 2, 6-pyridine) ; 8,97 (d, 2H, J = 4,70 Hz, f>-pyrrole) ; 8,91 (s, ^' 4H, β -pyrrole) ; 8,89 (d, 2H, J = 4,70 Hz, β-pyrrole) ; 8,56 (d, IH, J = 6,10 Hz, H ₃ ) ; 8,43 (d, IH, J = 6,10 Hz, H ₄ ) ; 8,31 (d,

6H, J = 4,30 Hz, protons 3, 5-pyridine) ; 8,19 (d, 2H, J = 8,40 Hz, protons 2, 6-phénoxy-4) ; 7,89 (s élargi, IH, H ) ; 7,67 (d, IH, J = 8,50 Hz, H _? ) ; 7,42 (d, 2H, J = 8,40 Hz, protons 3, 5-phénoxy-4) ; 7,37 (d, IH, J ≈ 8,50 Hz, Hg) ; 4,79 (m, 2H, (CH ₂ ) ₂ ) ; 4,34 (m, 2H, (CH ₂ ) _2Q ) . 3,98 (s, 3H, MeO) ; 3,27 (s, 3H, Me ) ; 3,01 (s, 3H, Me..) 2,31 (t, 2H, J = 6,60 Hz, (CH_,) _lg ) ; 2 _t 13 (m, 4H, (CH ₂ ) _{3 et} 19) ; 1,78 (m,4H, (CH ₂ ) _{15 et χ8} ) ; 1,50 (m,2H, (CH ₂ ) ₁₄ . Pour chacun de ces composés, on n'observe aucun point de fusion en-dessous de 240°C.

Activités biologiques des metalloporphyrines hydro¬ solubles selon l'invention.

L'activité cytotoxique a été déterminée sur des cellules leucémiques murines de type L1210 selon une é- thode déjà décrite (par C. Paoletti, S. Cros et Coll.,

Chem. Bio. Interact., 2_5, 45 (1979)). L'effet sur la crois¬ sance cellulaire est exprimé en termes de dose inhibant 50 % de la croissance cellulaire (DI,-) . Seules les va¬ leurs des DI_ _n inférieures à 2 juM peuvent être considê- rées comme significatives sur le plan biologique.

r, r- .~7-"~ ^{~ ~} 77~ ^~ E C\

Les résultats de cytotoxicitë sont rassemblés dans le tableau 1. Seuls les composés porphyriniques ayant un métal central susceptible d'atteindre de hauts degrés d'oxydation ou capables de conduire à des espè- ces métal-oxo en présence d'oxygène ou de dérivés ré¬ duits de l'oxygène présentent une cytotoxicitë appré¬ ciable : c'est le cas des complexes du manganèse. Les composés métallës avec le zinc n'ont pas de toxicité significatives (tableau 1) . Le composé métallé avec le fer, possède une toxicité plus faible que le composé analogue avec le manganèse.

Les produits les plus intéressants de cette sé¬ rie sont les dérivés hydrosolubles du manganèse décrits dans les exemples, avec un, deux ou trois groupes pyri- dinium et un, deux ou trois groupes phênyle portant une fonction aminé ou alcool, permettant ainsi d'accrocher par l'intermédiaire d'un bras cette molécule à une au¬ tre entité ("vecteur") présentant une affinité pour les acides nucléiques. Ces dérivés mêtalloporphyriniques peuvent conduire à la synthèse de molécules hybrides cytotoxiques avec un vecteur (intercalant, oligonucléσ- tides, oligopeptides, protéines ou fragments de proté¬ ines) adapté à la cible biologique (cellules tumorales, virus, ...) . Nous avons décrit de tels exemples (inter- calants) dans l'exemple 5.

Par ailleurs, ces molécules cytotoxiques présen¬ tent une activité nuclease sur de l'ADN in vitro. Cette activité a été mise en évidence en étudiant les coupures sur la forme superenroulêe (forme I)- de l'ADN de bactë- riophage φx 174 (voir tableau 2) .

L'efficacité de coupure avec le composé (Ih) , possédant trois groupes pyridiniu est très nette. En ef¬ fet. ^, il ne reste que 13 % de la forme I au bout de 2 mn en présence de 250 nM de métalloporphyrine et 5 μM. d'hy- drogénopersulfate de potassium,KHS0-.. Il s'agit là de

coupures simples brins, puisque la forme II (ADN duplex circulaire avec une coupure) s'accumule avant de condui ^¬ re à la forme III (ADN duplex linéaire) . Les conditions expérimentales et les détails de la méthode d'analyse sont indiqués dans la référence Fouquet et Coll. (cf. page 1) .

Activités biologiques des molécules hybrides

Nous avons choisi comme molécule hybride une mê- talloporphyrine (I) reliée à un intercalant de la série pyrido-carbazole comme vecteur, à savoir la 9-méthoxy- ellipticine.

La molécule hybride la plus cytotoxique est celle où le métal central est le manganèse (D . du composé (5f) = 0,58 11M, .voir tableau 1) . Le composé analogue avec le fer reste toujours cytotoxique (DI^ = 3,2 M) , par contre la toxicité devient beaucoup plus faible lorsque le métal est le zinc. Ceci confirme que le métal de la., partie porphyrinique joue un rôle essentiel dans l'expres- sion de la toxicité de ces molécules hybrides. Ce même ef¬ fet du métal central a été observé pour les metalloporphy¬ rines sans vecteur.

Il faut noter que la molécule de l'exemple 5 pré¬ sente toujours une activité nuclease importante, bien que plus faible que l'exemple 1 (h) . La quasi-complète trans¬ formation de la forme I en forme II est obtenue à une con¬ centration de 4 uM en composé (5f) .

Les molécules hybrides selon l'invention peuvent être considérées comme les premiers modèles biologique- ment actifs de la bléomycine, médicament antitumoral agis¬ sant par dégradation oxydante de l'ADN en présence de sels métalliques (Sausville et Coll., 3iochemistry, 11_, 2740 (1978)).

En conclusion, les metalloporphyrines hydrosolu- blés et portant une fonction pour l'accrochage de vecteurs

selon l'invention présentent à la fois une activité cyto¬ toxique sur des cellules tumorales et une capacité à cou¬ per les acides nucléiques in vitro .

Ces deux activités biologiques sont conservées lorsque ces mêmes metalloporphyrines sont reliées par l'intermédiaire d'un bras à un vecteur capable de moduler l'affinité ou l'interaction de ces molécules cytotoxiques vis-à-vis des acides nucléiques (les vecteurs peuvent être des intercalants, cas décrits ci-dessus, des oligo- nucléotides, oligo- ou polypeptides, ou des polyamines,

Il s'agit là d'une nouvelle série originale de mo¬ lécules cytotoxiques ayant pour cible les acides nucléiques La large gamme des vecteurs qui leur sont associables pér¬ met d'envisager une activité cytotoxiques sur des cellules de type très différent : cellules tumorales, virus, ...

Les composés de l'invention sont donc utilisables en thérapeutique, notamment comme antitumoraux, antileucé¬ miques et antiviraux. L'invention a aussi pour objet les compositions pharmaceutiques contenant ces composés ainsi qu'un véhicule ou excipient pharmaceutiquement acceptable.

TABLEAU 1 EFFETS IN VITRO SUR DES CELLULES L1210 DE QUELQUES COMPOSES SELON L'INVENTION

Composé de l'exemple (μM)

^{D I} 5 D0-> -

1 h) (Mn) o, • 54

1 h) (Fe) 2 , 1

1 h) ( Zn) 10 , 9

2 n) (Mn) 0 , 68

5 b) > 23

5 f) (Mn) 0 , , 58

5 g) ( Mn) 0 , , 84

5 f ) (Fe ) 3 , . 2

5 f ) ( Zn) . 5 ⁷ ' ERfiFL uVlE-re I

TABLEAU 2 OBSERVATION PAR ELECTROPHORESE SUR GEL D'AGAROSE DES EFFETS ENDONUCLEASES

Composé Conditions 1 M en métalloprophyrine 5 îA en KHS0 ₅ temps de pré-incubation (ADN + métalloporphyrine) :a) 20 mn, b) 1 mn temps d'incubation (avec oxydant) : 2 mn

Produit Formes II III

(ADN témoin) 85 % 15 h) (Mn) ( 250 nM) 13 % 78 h) (Mn) ( 250 nM) 63 % 37 h) (Fe) ( 250 nM) 75 % 25 h) (Zn) ( 250 nM) 85 % 15 h) (Mn) (1 /uM ,). a 59 4 1 f) (Mn) (1 μM) 32 % 65 3 f) (Mn) (4 uM) 71 10 f) (Fe) (4 uM) 58 31

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