技术领域

本发明涉及一系列联苯环辛烯类木脂素衍生物 ，以及这类化合物在抗病毒尤 其是病毒性肝炎治疗方面的应用。 背景技术 五味子,又叫山花椒、 面藤， 是木兰科五味子属多年生缠绕性藤本植物， 因其果实有甘、 酸、 辛、 苦、 咸 5种滋味而得名。 《神农本草经》 将五味子列 为上品， 明代李时珍在 《本草纲目》 中说： "酸咸入肝而补肾,辛苦入心而补 肺， 甘入中宫益脾胃"。 中医认为其性味酸、 甘、 性温、 无毒， 具有敛肺滋肾， 生津止汗， 涩精止泻， 宁心安神等功效， 可用于治疗肺虚喘咳、 津少口干、 自汗、 盗汗、 遗精、 劳伤赢痩、 久泻、 健忘、 失眠等症， 是中药中的佼佼者。 20 世纪 50 年代， 原苏联科学家报道五味子干果提取物对中枢神 经系统具有 刺激作用， 能增强心理和生理体质。 20世纪 70年代初， 我国在临床应用中发 现五味子能改善乙肝病人肝功能和症状， 特别是使升高的血清丙氨酸转氨酶 (ALT) 和天冬氨酸转氨酶 (AST) 明显降低。

木脂素和三萜是五味子科植物的主要活性成分 ， 研究表明大部分木脂素 具有联苯环辛烯 (dibenzocyclooctene) 基本骨架， 具有广泛的生物活性， 包括 抗肿瘤、 PAF (血小板活化因子)拮抗、 钙拮抗、 抗氧化、 抑制中枢神经和改善 记忆等作用； 三萜类成分则具有抗艾滋病毒 (HIV)和抗肿瘤活性。

乙型病毒性肝炎是一种由乙型肝炎病毒 （HBV ) 引起肝脏损伤的传染性 疾病， 严重危害健康， 影响生活质量。 HBV感染呈全球性分布， 可能半数以 上世界人口曾受感染， 每年发生五千万例新感染， 每年一百万人死亡。 约世 界人口的 5 %为慢性乙肝表面抗原 （HBsAg ) 携带者。 发展中国家发病率高。 我国是世界上乙肝感染最严重的国家， 属于高地方性流行区。 2003年， 我国 报告乙型肝炎病例 71万人， 占当年法定报告传染病总人数的 28%， 我国约有 1.2 亿人长期携带乙型肝炎病毒， 3000 万人为慢性乙肝患者， 每年死于与乙 肝相关的肝病患者达 28万例， 约占世界的 50%。

因此，抗乙型肝炎病毒治疗药物的研究和开发 引起了世界各国医药界的高度 重视。 乙肝的治疗在目前仍是世界性的医疗难题， 尽管国内外早已开发出包括千 扰素、 拉米夫定、 恩替卡韦等乙肝治疗药物， 但这些药物价格昂贵， 而且不是百 分之百有效。 故开发更安全、 有效、 价廉物美且有良好抗乙肝病毒作用的药物， 具有良好的市场前景。

中国医学科学院和北京协和医学院药物研究所 对五味子粗提物和 7种主 要的木脂素类成分的药理学活性进行了深入研 究， 根据其结构活性规律， 研 制出两个治疗慢性病毒性肝炎的新药联苯双酯 (DDB) 和双环醇（ bicycl ₀ l)。

DDB具有很好的保肝效果， 而 bicyclol对肝脏具有多方面的药理作用， 是一种 多功能和多靶点的新型药物， 具有抗肝炎病毒、 抗肝损伤及抗肝纤维化、 抗 酒精性肝损伤和抗脂肪肝等作用， 并且有肝癌化学预防的作用。 其对肝脏的 作用机制是多靶点的， 能清除自由基以维持肝细胞膜的稳定性， 保护肝细胞 线粒体免受损伤， 抑制多种信号转导通路引起的肝细胞凋亡。 基于双环醇治 疗病毒性肝炎安全、 有效、 反跳率较低， 2004年 9月国家药品监督管理局颁发 正式生产证， 由北京协和药厂独家生产， 目前正在全国范围内使用。 这是由 我国自主研发的一类新药， 并且为从中草药出发来研发新药提供了经验。 发明内容

本发明的第一个要解决的问题是提供一系列的 联苯环辛烯类木脂素衍生物 或其异构体或其药学上可接受的盐、酯或溶剂 合物。第二个要解决的问题是提供 此类化合物在抗病毒尤其是治疗病毒性肝炎方 面的应用。

本发明提供的联苯环辛烯类木脂素衍生物或其 异构体或其药学上可接受的 盐、 酯或溶剂合物， 具有如下的结构通式：

式 (1) 式 (2) 式 (3) 式 ⁽⁴ ) 式 (1)、 式 (2)、 式 (3)、 式 (4)表示具有轴手性的化合物，

其中 '、 R H、 Ci. _1Q 的烃基、 OH、 OBn、 OAc、 OBz、 Cl、 N0 ₂ 、 CN、 0(C _1-4 烃基)或 COCKd iS基)； R ₂ '、 R ₂ 、 R ₃ 、 ，、 R ₄ 、 ！^'为}1、 C _1-10 的烃基、 OH、 OBn、 OAc、 Cl、 N0 ₂ 、 CN、 0(C ₁₄ 烃基)或 COO(C _M 烃基）； 和 R ₂ , R 和 R ₂ ，可以是一 OCH ₂ 0—(环二氧丙基)； R. ₂ ，禾卩 R ₃ '， R ₂ 和 还可以是一 OCH20 —(环二氧丙基)、或者 -CH= H-CH=CH -、或者— CH ₂ C¾CH ₂ CH ₂ -; R ₅ ， R ₆ ， R ₅ '， R ₆ '为 OH、 0(C _1-4 烃基)、 OCO(C _1-4 烃基)、 OBn 、 OBz、 N¾、 -=N-SO(C _1-4 烃基)、 NH-SO(C _M 烃基)、 NHBoc, 或者 OR ⁷ ， 其中 R ⁷ 表示氨基酸残基或糖残基； 其中 Bn表示 -CH ₂ C ₆ H ₅ , Ac表示 -COC¾， Bz表示 -COCC ₆ , Boc表示 -COOC ₄ H ₁₃ 。 上述 '和 R! ， R ₂ '禾卩 R ₂ ， R ₃ 禾 P R ₃ '， R4和 R4' , R ₅ 和 R ₅ '， R ₆ 和 R ₆ '为相同或不 同的基团并且当 '和 ， R ₂ ，和 R ₂ ， R ₃ 和 R ₃ ，， 和 '， R ₆ 和 R ₆ ，分别为相 同的基团时， 条件是-

R ₆ 和 R ₆ '均为 OH， R4和 ' 均为 H， 和 均为甲氧基， R ₂ '和 为氢或甲氧 基时， R ₃ ，和 R..3仅为 C _1-I0 的烃基、 OH、 OBn, OAc、 OBz、 Cl、 N0 ₂ 、 CN、 0(C ₂ . ₄ 烃基)或 COO(C _M 烃基)；

当 R ₆ 和 R ₆ '均为 OH， R4和 ' 均为 H , R ₂ 和 、 R ₂ '和 '分别均为 -CH=CH-CH=CH-或者— CH ₂ C¾CH ₂ C¾-时， '和 仅为 C _1-H) 的烃基、 OH、 OBn、 OAc、 OBz、 Cl、 N0 ₂ 、 CN、 0(C _M 烃基)或 COO(C _1-4 烃基）。

在本发明的联苯环辛烯类木脂素衍生物中， 当 R ₅ ， ， R. ₅ '， '为 OR ⁷ ， 其 中 R ⁷ 表示氨基酸残基或糖残基时， R ₅ ， ， '， R ₆ '可以选自 (CH ₃ ) ₂ CHCH ₂ CH(NHBoc)COO- ， CH ₃ CH ₂ CH(CH ₃ )CH(NHBoc)COO- ， NHBocCH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH(NHBoc)COO- , (C¾) ₂ CHCH ₂ CH(NH ₂ )COO- (亮氨酸)， CH ₃ CH ₂ CH(C )CH(NH ₂ )COO-( 异 亮 氨 酸 ） ， N¾CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH(NH ₂ )COO-(赖氨酸）， (半乳糖基）， (甘露糖基） ， 1 ₇ 为 Cwo的烃基、 Ac、 Bn、 Bz。

本发明所涉及的联苯环辛烯类木脂素衍生物的 典型结构式如下:

10 11 12

本发明的化合物可通过以下步骤获得- 本发明所涉及的联苯环辛烯类衍生物其核心骨 架片段的合成主要是应用 Ullmann偶联， 及 Suzuki偶联方法 (方案 1)。 而有三个环的化合物， 则是由本发 明人的小组发展的 Sml ₂ 环合方法 (方案 2)来构建。 通过 NaBH ₄ 或者 LiAlH ₄ 还原 可以将醛还原为醇 (方案 3)。氨基酸的衍生化，釆用的是 Steglich酯化法 (方案 4)。 糖的衍生化， 首先做好糖基给体， 然后与联苯骨架的化合物反应得到 (方案 5)。

Ullmann偶联反应

Suzuki偶联反应

方案 1

R=R" or R≠ R'

方案 2

方案 5

其中， DMA表示 Ν,Ν-二甲基乙酰胺， DME表示 1,2-二甲氧基乙醚， Et ₂ 0 表示乙醚， THF表示四氢呋喃， EDCI表示 1-乙基一 3—(3—二甲基氨基丙基)碳 二亚胺盐酸盐， DCC表示二环己基碳二亚胺， DMAP表示 Ν,Ν— 4一二甲基氨基 吡啶。

本发明所涉及的联苯环辛烯类木脂素衍生物在 治疗病毒性肝炎方面的应用， 是此类化合物通过对细胞模型——乙型肝炎病 毒 （HBV ) 转染 HepG ₂ 细胞， 即 HepG ₂ 2.2.15细胞分泌的 HBVs抗原和 e抗原的抑制试验测定其用于治疗乙型肝 炎的生物活性。 在该模型中， 通过对 HepG ₂ 2.2.15细胞用不同的化合物， 不同 的浓度进行一段时间的给药，测试其 HBVs抗原和 e抗原的抑制率情况来筛选得 到不同化合物的活性。

经过复旦大学药学院周珮教授等人的筛选发现 ，本发明所提供的新型联苯环 辛烯类衍生物中的大部分化合物对 HBV s抗原 (HBsAg)和 e抗原 (HBeAg)都具有 一定的抑制作用， 其中的几个特定化合物表现出了比较好的活性 ， 抑制率可以达 到 60%， 比上市药物联苯双酯 (DDB)的毒性低、 溶解性好、 抗病毒活性高， 在多 轮实验中均能表现出稳定的抑制作用， 而且其中有一个化合物与 bicyclol表现出 同一水平的抗肝炎病毒活性。基于此， 本发明所提供的新型联苯环辛烯类木脂素 衍生物是一类具有抗乙肝病毒活性的分子， 有望成为抗乙肝病毒的新型药物。

定义

除非另有说明， 术语"烃基"本身或作为其他取代基的一部分表� ��直链 (即未 分支的)或支链的， 或环状烃基， 或其组合， 它们可以是完全饱和的、 单不饱和 的或多不饱和的，具有所指定的碳原子数 (即 C _R C _1Q 表示 1-10个碳原子)。饱和烃 基的例子包括但不限于诸如以下的基团： 甲基， 乙基， 正丙基， 异丙基， 正丁基, 叔丁基， 异丁基， 仲丁基， 环己基， （环己基)甲基， 环丙基甲基， 例如， 正戊基、 正己基、 正庚基、 正辛基的同系物和异构体等等。 更优选 C _{1 -6} 垸基， 例如 CM ώ 不饱和烃基的例子包括， 但不限于， 乙烯基， 2-丙烯基， 丁烯基， 2-异戊烯 基， 2- (丁间二烯基), 2,4-戊二烯基， 3-(1 ,4-戊二烯基)， 乙炔基， 1 -和 3-丙炔基， 3-丁炔基， 以及高级同系物和异构体。

药学上可接受的盐的例子包括本发明的联苯环 辛烯类木脂素衍生物或其异 构体与无机酸和有机酸形成的盐， 可使用的无机酸的例子包括盐酸、 氢溴酸、 硝 酸、硫酸、 磷酸， 等等； 有机酸的例子包括甲酸、 草酸、 乙酸、 酒石酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 苹果酸、 水杨酸、 对甲苯磺酸， 等等， 还包括与碱性氨基酸如精氨酸、 赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐， 以及与酸性氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸等形成 的盐； 药学上可接受的盐的例子还包括本发明的联苯 环辛烯类木脂素衍生物与无机碱 或有机碱形成的盐， 所述无机碱的例子包括碱金属氢氧化物 (例如， 氢氧化钠、 氢氧化钾等）， 碱土金属氢氧化物 (例如， 氢氧化钙、 氢氧化镁等）， 以及铝、 铵 的氢氧化物， 等等。可使用的有机碱的例子包括三甲胺、三 乙胺、吡啶、皮考啉、 乙醇胺、 二乙醇胺、 三乙醇胺、 二环己基胺、 Ν, Ν ' -二苄基乙二胺， 等等。

本发明的联苯环辛烯类木脂素衍生物， 可以包括其对映异构体， 非对映异构 体， 互变异构体和顺式 /反式构象异构体。 所有这些异构体形式包括在优选实施 方案中， 包括其混合物。 优选实施方案的化合物可以具有手性中心， 例如它们可 以包含不对称的碳原子并且可以因此以对映异 构体或非立体异构体及其混合物 例如外消旋物的形式存在。 不对称的碳原子可以以 (R) -， （S) -， 或 (R,S)-构型， 优 选地以 ((R)-或 (S)-构型或可以作为混合物存在。 根据需要， 根据获得纯异构体的 常规方法可以分离异构体混合物。 优选实施方案的化合物还可以包括互变异构 体， 其中所述互变异构体可以存在。

组合物

本发明还提供了含有本发明联苯环辛烯类木脂 素衍生物的组合物。

在本发明中，可用常规方法将本发明的联苯环 辛烯类木脂素衍生物与药学上 可接受的载体、 赋形剂或稀释剂相混合， 形成本发明组合物。 所述组合物可为药 物组合物。 所述载体包括 (但并不限于)： 盐水、 缓冲液、 葡萄糖、 水、 甘油、 乙 醇、 及其组合。

本发明的组合物可以为固态 (如颗粒剂、 片剂、 冻干粉、 栓剂、 胶囊、 舌下 含片等)或液态 (如口服液或注射剂等)或其他合适的形状。本� ��明活性成分的含量 通常为组合物重量的 0.01-99%, 较佳地为 0.1 -95%， 更佳地为 0.1 -90%， 最佳地 1-80%。

本发明的组合物， 可以为单剂或多剂形式。 按施用剂量计， 通常含有 l-1000mg/剂， 较佳地约 2-500mg/剂， 更佳地 5- lOOmg/剂。

本发明的组合物可以通过常规形式使用， 其中包括 (但并不限于)： 口服、 肌 注、 皮下注射、 静脉注射等。 优选口服。 本发明组合物的施用量， 按活性物质计 算， 通常为每天约 0.01-500mg/kg体重， 较佳地约 0. 50mg/kg体重。 药物组合物及其用途

本发明还提供了一种药物组合物，它含有：（ a)有效量的本发明的联苯环辛烯 类木脂素衍生物； 以及 (b)药学上可接受的载体、 稀释剂或赋形剂。

如本文所用， 术语 "本发明的组合物"包括药物组合物， 只要其含有本发明 的联苯环辛烯类木脂素衍生物作为活性成分。

本发明中， 术语 "含有"表示各种成分可一起应用于本发明的混� ��物或组合 物中。

本发明中， "药学上可接受的"成分是适用于人和 /或动物而无过度不良副反 应 (如毒性、 刺激和变态反应)， 即有合理的效益 /风险比的物质。

本文所用的术语"有效量 "指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况� �量， 或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对 于某一对象的精确有效量取决于该 对象的体型和健康状况、 病症的性质和程度、 以及选择给予的治疗剂和 /或治疗 剂的组合。 因此， 预先指定准确的有效量是没用的。 然而， 对于某给定的状况而 言， 可以用常规实验来确定该有效量， 临床医师是能够判断出来的。

为了本发明的目的， 有效的剂量为给予个体约 0.01 毫克 /千克至 500毫克 / 千克， 较佳地 0.05毫克 /千克至 200毫克 /千克体重的本发明活性物质。 此外， 本 发明的活性物质还可与其他治疗剂一起使用。

药物组合物还可含有药学上可接受的载体。 术语 "药学上可接受的载体"指 用于治疗剂给药的载体。它们符合如下条件： 本身不诱导产生对接受该组合物的 个体有害的抗体， 且给药后没有过分的毒性。这些载体是本领域 普通技术人员所 熟知的。在《雷明顿药物科学》（Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Pub. Co., N.J. 1991年)中可找到关于药学上可接受的载体的充� ��讨论。 这类载体包括 (但并不限于)： 盐水、 缓冲液、 葡萄糖、 水、 甘油、 乙醇、 佐剂、 及其组合。

治疗性组合物中药学上可接受的载体可含有液 体，如水、盐水、甘油和乙醇。 另外， 这些载体中还可能存在辅助性的物质， 如润湿剂或乳化剂、 pH缓冲物质 等。

所述化合物或其药学上可接受的盐及其组合物 可通过口服以及静脉内、肌内 或皮下等途径给药； 优选的是口服给药。 固态载体包括： 淀粉、乳糖、磷酸二钙、 微晶纤维素、 蔗糖和白陶土， 而液态载体包括： 无菌水、 聚乙二醇、 非离子型表 面活性剂和食用油 (如玉米油、 花生油和芝麻油)， 只要适合活性成分的特性和所 需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常 使用的佐剂也可有利地被包括， 例 如调味剂、 色素、 防腐剂和抗氧化剂如维生素 E、 维生素 C、 BHT和 BHA。

本发明的组合物及其药物组合物也可储存在适 宜于注射或滴注的消毒器具 中。 通常， 在本发明的药物组合物中， 联苯环辛烯类木脂素衍生物作为活性成分 占总重量的 0.01-99%， 较佳地为 0.1-95%， 更佳地为 0.1-90%, 最佳地 1-80%， 其余为药学上可接受的载体以及其他添加剂等 物质。 给药方式和剂型

本发明的药物组合物可以通过常规方法制成任 何常规的制剂形式。

本发明所述的药物组合物的剂型可以是多种多 样的，只要是能够使活性成分 有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。 组合物可以制成适合所需给药方式 的各种形式。 例如， 药物组合物可以制成片剂、 丸剂、 粉剂、 锭剂、 袋剂、 扁囊 齐 U、 酏剂、 悬浮剂、 乳剂、 溶液、 糖浆、 气雾剂 (作为固体或在液体基质中)、 油 膏、 软凝胶和硬凝胶胶囊、 栓剂、 无菌可注射液、 无菌包装的粉末等。 本发明的 联苯环辛烯类木脂素衍生物较佳为存在于适宜 的固体或液体的载体或稀释液中。

一旦配成本发明的组合物， 可将其直接给予对象。待预防或治疗的对象可 以 是动物； 尤其是人。含本发明活性物质的药物组合物， 可以经口服、皮下、肌内、 静脉注射等方式应用。 治疗剂量方案可以是单剂方案或多剂方案。

本发明的联苯环辛烯类木脂素衍生物及其组合 物也可经肠胃外或腹腔内给 药。 也可在适当混合有表面活性剂 (如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性物质的 溶液或悬浮液。 还可在甘油、 液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散 液。 在常规储存和使用条件下， 这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。

适应于注射的药物形式包括： 无菌水溶液或分散液和无菌粉 (用于临时制备 无菌注射溶液或分散液)。 在所有情况中， 这些形式必须是无菌的且必须是流体 以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下 必须是稳定的， 且必须能防止微生 物 (如细菌和真菌)的污染影响。 载体可以是溶剂或分散介质， 其中含有如水、 醇 (如甘油、 丙二醇和液态聚乙二醇)、 它们的适当混合物和植物油。

所用的活性成分的有效剂量可随给药的模式和 待治疗的疾病的严重程度而 变化。然而， 通常当本发明提取物每天以约 l-300mg/kg动物体重的剂量给予时， 能得到令人满意的效果， 较佳地每天以 1 -3次分开的剂量给予， 或以缓释形式给 药。 对大部分大型哺乳动物而言， 每天的总剂量约为 5-1000mg， 较佳地约为 10-500mgo适用于内服的剂量形式， 包含与固态或液态药学上可接受的载体密切 混合的约 l-200mg的活性成分。 可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。 例如， 由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分 开的剂量，或将剂量按比例地减少。

本发明的组合物或药物还可含有其它活性成分 。

当两种或两种以上的药物联合给药时，一般具 有优于两种药物分别单独给药 的效果。优选地， 联合施用的药物或其它制剂不千扰本发明联苯 环辛烯类木脂素 衍生物的治疗活性。 具体实施方法

下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。应理解， 这些实施例仅用于说明 本发明而不用于限制本发明的范围。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件， 或按照制造厂商所建议的条件。 实施例 1 联苯环辛烯类木脂素衍生物的制备- 联芳基骨架的构建方法：

1 ) Ullmann偶联： 在室温至 80°C , 底物浓度为 0.04~2.0 mol/L, 在 0.1〜1当量的 四垸基卤化铵， 极性有机溶剂中和 Zn存在下， 手性单膦配体与二价或零价的镍 配合物催化剂催化下，底物摩尔数和催化剂摩 尔数为 10~100: 1，反应 3到 6小时， 通过柱层析纯化即以一定的产率得到产物，将 产物溶解在极性溶剂中在 0 ^Q C下加 入 3当量的 LiAlH ₄ ， 缓慢升至室温， 反应 1小时到 3小时， 通过柱层析纯化得 到活性测试样品。 将偶联产物用四氢呋喃溶解， 在 -78°C下加入到 0.1〜0.3mol/L 的 Sml ₂ 溶液中， 反应 2~5小时， 通过柱层析纯化分离得到活性测试产物。

2) Suzuki偶联: 干燥的 1~1000毫升 (mL) 反应瓶中加入底物和 Pd(PPh ₃ ) ₄ ， 然 后加入溶剂 DME, 2mol/L~5mol/LNaC0 ₃ , 室温下搅拌反应 20min， 将另外一个 底物用乙醇溶解后加入到反应体系中， 加热回流反应 2小时到 5小时， 柱层析纯 化得二醛化合物。 然后也可以用 1 ) 中的方法进行进一步的转化得到其他类型的 化合物。

3) 氨基酸衍生物的合成： 在干燥的反应瓶中， 加入 Boc 保护的氨基酸， EDCI 或 DCC， DMAP， CH ₂ C1 ₂ , 室温下搅拌 1小时。 然后将反应体系置于冰盐浴中， 将底物用二氯甲烷溶解后， 滴加到反应体系中， TLC跟踪反应。 反应 6小时后， 过滤， 柱层析分离， 得到氨基酸衍生物， 氨基上有 Boc保护。将产物用乙酸乙酯 溶解， 力 [1 3M HC1, 反应 5小时。 将溶剂旋干， 柱层析分离的到氨基酸衍生物。

4) 糖的衍生物的合成：在氩气保护下，将底物和 4A分子筛加入到糖基给体的反 应瓶中， 加入干燥的二氯甲烷， 室温搅拌 30分钟。 逐滴加入 TMSOTf。 继续反 应 4小时， 三乙胺淬灭反应。 过滤， 滤液旋干， 柱层析得到目标分子。

其中 、 Ri\ R ₂ 、 R ₂ ，、 R ₃ 、 R ₃ ，、 、 '、 R、 R'、 R ₇ 的定义如前。 化合物实施例数据如下表 (表 1):

表 1

编号 化合物数据

[a] _D ²⁰ : 53.7 (c 0.96, EtOAc); Ή NMR (.300 MHz, CD ₃ OD): δ (ppm)7.09(s, 2H), 4.24(s, 2H), 3.90(s, 6H), 3.84 (s, 6H), 3.66(s, 6H).3..34(s, 2H); ¹³ C NMR (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 156.59, 154.84, 145.23, 1.38.70, 120.24, 107, 14,

(S)-l

77.21, 63.96, 6.3.92, 59.08; MALDI: 392([M] ⁺ ), 415([M+Na] ⁺ ); HRMS for [M++H](C ₂₀ H ₂₄ O ₈ ): calcd. 392.1477, found: 392.1466

Ή NMR (300 MHz, CD ₃ OD): δ (ppm)7.09(s, 2H), 4.24(s, 2H), 3.90(s, 6H), 3.84 (s, 6H), 3.66(s, 6H)3.34(s, 2H);

(R)-l

1 ³ C NMR (75MHz CDC1 ₃ ) δ (ppm) 156.59, 154.84, 145.2.3, 138.70, 120.24, 107.14, 77.21 , 63.96, 63.92, 59.08;

'H NMR (300 MHz, CD ₃ OD): δ (ppm)7.09(s _; 2H), 4.24(s， 2H), 3.90(s, 6H), 3.84 (s, 6H), 3.66(s, 6H)3..34(s, 2H); rac-1

"C NMR (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 156.59, 154.84， 145.23, 138.70, 120.24, 107.14, 77.21 , 63.96, 63,92, 59,08;

¾ NMR (300 MHz， CDC1 ₃ ): δ (ppm) 6.89(s， 2H), 4.18-4.17(d 4H), 3.93(s, 6H), 3.8 (s, 6H), 3.67(s, 6H), 3.14(s,

(S)-2

2H); ESI-MS (ITI/Z, %): 417.5 ([M+Na] ⁺ )

'H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 6,89(s, 2H)， 4.18-4.17(d, 4H), 3.93(s, 6H)， .3.8 (s, 6H), 3.67(s， 6H), 3.14(s，

(R)-2

2H); ESI-MS (m/z，％): 417.5 ([M+Na] ⁺ )

Ή NMR (300 MHz, CDCI ₃ ): δ (ppm) 6.89(s， 2H), 4, 18-4.17(d, 4H), 3.93(s, 6H), 3.8 (s, 6H), 3.67(s, 6H), 3, 14(s, rac-2

2H); ESI-MS (m/z _s %): 417.5 ([M+Na] ⁺ ) Ή NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 6.58(s. I H). 6,07(s, .2H), 5.26(s. I H), 3.82(s, 3H)， 2,21(s, I H); ¹³ C NMR ( l OOMHz, CDC1-,) δ (ppm) 145.59， 142.90, 140.86， 129.53, 107.33， 105.85, 103.88, 74.43， 56.79: EI— MS(m/z, %): 342( 100), 360(M ^T , 71.54), 343(23.10), 13(19.35), 361 ( 15.97).

Ή NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 7.98(m, 2H)， 7.6 l (m, IH), 7.5 l(m, 2H), 7.07(s, IH), 6.79(s, IH), 3 92(s, 3H), 3.83(s, 3H), 3.80(s, 3H); ESI-MS (m/z, %): 623.4 ([M+Na]""); HRMS for [M ⁺ +Na](C ₃₄ H ₃₂ O ₁₀ ): calcd.623.1895， found: 623.1887

'H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 6.79(s, 2H). 4.79-4.70(q, 4H), 3.92(s, 3H), 3.89(s, H), 3.70(s， 3H)， 2.01 (s， 6H); ESI-MS (m/z, %): 501 ,4 ([M+Na] ⁺ )

'H NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 6 98(s, IH), 6.79(s, IH), 3.89(s, 3H), 3.81(s, 6H), 2.11(s, 3H); ESI-MS (m/z, %): 499.5 ([M+Na]"")

Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm)7.97-7.95(m, 4H), 7.51-7.47(m _; 2H), 7.37-7.3.3(m, 4H), 3.90(s, 6H)， 3.87(s, 6H), 3.72(s, 6H), 2.01(s, 6H); ESI-MS (m/z) 625.6 ([M+Na] ⁺ )

¾ NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 7.26-7.23(d, IH), 7.19-7.17(m, 2H), 7.00-6.97(d, IH), 6.92-6.88(m, 3H), 4.94-4,90(4 I H), 4.71-4.67(d, IH), 4.22(s, 2H), 4.12(s, 2H), 3.93(s, 3H), 3.91(s, 3H), .3.81(s, 3H), 3.63(s, 3H); ESI-MS (m/z, %): 545.2 ([M+Na] ⁺ )

Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 7.35-7.30(m, 4H), 7.03(d, 2H, J=8.4Hz), 4.29(s, 2H), 3.87(s, 6H),; ¹³ C NMR. (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 156.18, 140.08, 127.95, 119.21, 115.44, 110.88, 73.39, 54.94; ESI-MS (m/z _; %): 295([M+Na] ⁺ )

Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 8.93(s, IH), 7.16(s, IH), 7.15-7.13(d, IH), 6.88-6.86(d, IH), 4.45-4.43(d, IH), 4.35-4.33(d, IH), 3.92(s， 3H) _S 3.90(s, 6H), 3.77(s, 2H), 3.60(s, IH), 2.11(s, IH); ¹³ C NMR (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 153.06, 150.03, 148.28, 142.81, 141.52, 134.28, 129.78, 118.10, 116.72, 115.37, 110.50, 105.77, 73.50, 62.67， 61.35, 60.42, 56.03, 55.78;ESI-MS (m/z, %): 347.1([M-H] ⁺ ), 393.2([M-H+2Na] ⁺ )

Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 7.41-7.37(1, 2H), 7.17-7.15(d, 2H),6.97-6.95(d， 2H), 4.27-4.19(q, 4H), 3.70(s, 6H), 2.54(s,2H);

'H NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 7.10(d, IH, J=8.0Hz), 6.9 l (d, IH, J=8.0Hz), 5.62(s: IH), 3.91(s, 3H), 3.88(s, 3H), 2.23(s, IH);

Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 6.88 (s, IH), 6.85(s, IH), 6.13(s, IH), 4.19-4.11(m, 4H), 3.9 l(s, 6H)， 3.88(s, 6H), 3.68(s, 3H), 3.58(s, 3H);

Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm)7.29-7.27(d, 2H), 7, 17-7.14(m, 6H), 7.05-7.03(d, 2H), 6,87-6.85(m, 4H), 4.93-4.91(d, 2H), 4.61-4.59(d, 2H), 4.26-4.16(q, 4H), 3.91(s, 6H), 3.00(s, 2H);

Ή NMR (.300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 6.93(s, 2H), 6.27(br, 2H), 4.50(d, 2H, J=14.1Hz), 3.91(s, 6H), 3.88(s, 6H), 3.74(s, 6H), 3.74(s, 6H), 1.41(s, 18H); ¹³ C NMR (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 152.17, 151.69' 141.48, 129.86， 117.62, 104.50, 61.06, 60.98, 58.46, 57.16, 56.07, 23.02; ESI-MS (m/z, %): 599 ([M+H] ⁺ ) 621 ([ +Na] ⁺ ); HRMS for [M+Na] ⁺ (C _2S H ₄₂ N ₂ 0 ₈ S ₂ Na): calcd. 621.2270, found: 621.2275

'H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 7.70(d, 2H, J=1.8Hz), 7.50(d, 2H, J=8.1Hz), 7.32(dd, 2H, J=1.8Hz, 8.1Hz), 5.58(s, 2H), 4.77(s, 2H), 1.34(s, 18H); ^, C NMR (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 1.34.61, 134.42, 1.33.27, 128.5.3, 128.36, 124.50' 59.46, 57.00, 22,78; MALDI-TOF: 487 ([M+H] ⁺ ) 509([M+Na] ^÷ ); HRMS for [M+Na] ⁺ (C ₂₂ H ₂₈ N ₂ 0 ₂ S ₂ Cl ₂ Na): calcd. 509.0858, found: 509.0861

¾ NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 7.40(s, IH), 6.96(s, IH), 6.82(s, IH), 6.19-6.15(m, 4H), 5.75-5.71(dd, 1H， J=8.4Hz, 10.4Hz), 5.55(d, IH, J=3.2Hz), 5,29-5.27(4 IH, J=8.4Hz), 5.23-5.19(dd, IH, .1=10.4Hz, 3.2Hz), 4.38-4.34(m， I H), 4.24-4.20(m, 2H)， 4.06(s， H), 4.02(s, 3H), 2.22(s, 3H), 2.11(s, 3H), 2.05(s， 3H), 2.02(s, 3H): "C NMR ( l OOMHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 170.28， 170.20, 170.03, 169.85, 169.77, 149.56, 144.12, 144.00， 143.78， 14.3.72, 135,86， 134.24, 128.42. 】21.96, 108.87, 105.62， 105,26, 10.3.76, 101.36, 101.13, 99.59, 98.78， 77.21, 76.69, 71.14, 70.58, 68.63, 66.82, 61.51， 56.19, 20.91, 20.67, 20.63, 20.55 Ή NMR (400 MHz, CDCi ₃ ): δ (ppm) 6.77(s, 1H), 6, 11 (4 1 H), 5-99(d 1 H), 5,83(s, 1 H)， 4.95(d 1H), 4.12(m, 1 H)， 3.93(s _: 3H)， L41 (s 9H), 0.83-0.83(m, 4H)， 0.64-0.6 l (m, 5H); ESI-MS (m/z, %): 809.5 ([M+Na]")

'H NMR (400 MHz, CDCIj): δ (ppm) 6.68(s, 1H), 6.1 l(d, lH), 6.03(d， l H), 5.83(s, 1H), 4.82(d, 1H), 4.15(m, 1 H), 3.92(s, 3H), 1.51 -1.24(m, 12H), 0.81-0.77(q, 6H); ESI-MS (m/z, %): 809.5 ([M+Na] ⁺ )

[a] _D ²⁰ =10,4 (CHClj, c 0.62); Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 1.20(s， 18H), 3.99(s, 6H), 6.00(m, 4H), 7.45(s， 2H), 8,35(s， 2H); ¹³ C NMR (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 22.48， 56.66, 57.66, 102.33, 108.96, 109.91, 127.00, 138.59, 144.19, 147.68, 160.52; ESI-MS (m/z, %): 565 [M+H] ⁺ , 587 [M+Na] ⁺ .

[a] _D ²⁰ =366.5 (CHC1 ₃ , c 0.12); Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ (ppm) 1.15(s, 18H), 3.98(s, 6H), 6— 01 (m, 4H), 7.40(s， 2H)， 8.3 l (s, 2H); ¹³ C NMR (75MHz, CDC1 ₃ ) δ (ppm) 22.52， 56,6.3, 57.66, 102.52, 109.19, 109,93, 127.36, 138.67, 144.06, 147.56， 160.42; ESI-MS (m/z, %); 565 [M+H] ⁺ , 587 [M+Na] ⁺ . 实施例 2 生物实验：

试验材料和方法

1、 样品溶于 DMSO制备成 20mg/mL， 然后用 DMEM培养液稀释成不同的浓度。

2、 细胞模型： 乙型肝炎病毒 （HBV) 转染 HepG ₂ 细胞， 即 HepG ₂ 2.2.15细胞。

3、 药物毒性试验： MTT法 MTT CAldrich)

4、 HBV抗原检测： ELISA法上海实业科华生物技术有限公司试剂盒

5、 药物毒性试验：

96孔培养板每孔加入 120 μΐ (4x l0 ⁵ cells/mL) Hep G ₂ . 2.2.15细胞， 37°C, 5% C0 ₂ 单层培养 72小时， 弃去上清液， 加入按要求配制成 5个浓度的药液， 同时 设细胞对照组。每 3天更换样品液一次，共培养 9天，弃去上清液，加入 90 μ oΐ DMEM and ΙΟμί of the 5 mg/ml MTT在培养箱内保持 3 hours. 弃去上清液， 加 入 100 μΐ of DMSO ， 培养板在 50 rpm振荡 5 min， 在 490 nm 处读 O.D， 测 定无毒浓度 (TCD0)

6、 样品对 Hep G2. 2.215细胞分泌的 HBVs抗原和 e抗原抑制试验：

96孔培养板每孔加入 120 μΐ ( 4x l0 ⁵ cells/mL) Hep G ₂ . 2.215细胞， 37。C， 5% C0 ₂ 单层培养 72小时， 弃去上清液， 加入按要求配制成 5个浓度的药液， 同时 设细胞对照组和阳性药物 （商购的拉米夫定） 对照组。 每 3天， 更换样品液一 次， 共培养 9天， 分别取上清液用 ELISA方法测定 HBsAg、 HBeAg, 与细胞对 照组比较， 计算抗原抑制率 （％)。

初步筛选得到的结果如下 (表 2) : 表 2

12.5 85% - -

ZQ-09- 10-22 O e 200 沉淀 - -

100 沉淀 - -

⁰ COOMe

50 沉淀 - -

<XJ 25 沉淀 - -

OMe 12.5 60%

6.25 81% 15% 17%

3,125 86% 18% 10% 拉米夫定 0.5 100% 26% 17%

0.1 100% 14% 17%

0.01 100% 本发明优选化合物的筛选结果如下 (表 3): 表 3

+: 显示细胞毒性 -: 无明显细胞毒性 /: 未做