氟乙基硫胺素或其盐及其在制备抗球虫药物中 的应用 技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种氟乙 基硫胺素或其盐及其在制备 抗球虫药物中的应用。 背景技术：

由艾美耳属 Eimeria spp 的原虫所引起的球虫病是严重危害养殖业生产 的 重要动物疫病， 仅鸡球虫病一项全世界年损失就高达近 40亿美元； 我国因球虫 病造成养殖业年经济损失也高达近百亿元，除 鸡球虫病长期存在并被人们广泛认 识外， 近年来， 猪球虫病、 奶牛球虫病等发病率正逐年升高， 已成为哺乳期和断 奶期仔猪腹泻的主要病因和致死原因。 艾美耳球虫是一种直接生活史型寄生原 虫， 其生物学特点决定其难以消灭， 只要有猪、 鸡等的集约化养殖， 就不可避免 球虫的感染和球虫病的流行。 目前动物球虫病的控制主要依赖抗球虫药物， 而抗 球虫药物长期广泛的使用已导致球虫抗药性的 普遍产生，尤其是鸡球虫， 在我国 目前的养鸡生产中球虫抗药性已严重到几乎无 药可用的境地。因此， 抗球虫药物 将永远是动物球虫病控制所不可缺少的工具， 生产实际迫切需要新的抗球虫药 物。 发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种新的具有抗球 虫活性的氟乙基硫胺素或 其盐。

本发明的氟乙基硫胺素或其盐， 其结构式如式 （ I ) 所示：

式 （ I )。

所述的氟乙基硫胺素盐优选为氟乙基硫胺素盐 酸盐， 其结构式如式（Π )所

式 （π )。

本发明的第二个目的是提供如式（ I )所示的氟乙基硫胺素或其盐在制备 抗球虫药物中的应用。

所述的球虫优选为柔嫩艾美耳球虫、 堆型艾美耳球虫、 巨型艾美耳球虫或 毒害艾美耳球虫。

所述的抗球虫药物优选为抗家禽球虫药物。

所述的家禽优选为鸡。

本发明的第三个目的是提供一种抗球虫药物， 其特征在于， 其含有作为活 性成分的氟乙基硫胺素或其盐。

所述的球虫优选为柔嫩艾美耳球虫、 堆型艾美耳球虫、 巨型艾美耳球虫或 毒害艾美耳球虫。

所述的抗球虫药物优选为抗家禽球虫药物。

所述的家禽优选为鸡。

本发明的氟乙基硫胺素或其盐具有显著的抗球 虫作用，特别是对于一些已经 对其他抗球虫药物产生抗药性的球虫也具有显 著的抗球虫作用，因此可以在制备 抗球虫药物中应用， 因此本发明为开发新的抗球虫药物提供了条件 。 具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明， 而不是对本发明的限制。

一、 氟乙基硫胺素的制备

实施例 1 :

( 1 ) 2-乙基 -4-氨基 -5-嘧啶甲酸乙酯的合成：

化学合成方程式如上所示。 称取 8.1g (0.15mol) 甲醇钠， 迅速倒入 250ml干燥的单口烧瓶中， 加入搅 拌子， 并接上 100ml的恒压滴加漏斗及干燥管。 冰浴冷却 lOmin后， 迅速加入 50ml无水乙醇， 开启搅拌； 待甲醇钠全部溶解后将 10.857g (O.lmol) 盐酸丙脒 加入烧瓶， 反应溶液呈乳白色浑浊装； 16.9g (O.lmol) 乙氧甲叉氰乙酸乙酯溶于 70ml无水乙醇， 倒入恒压滴加漏斗中， 缓慢滴加； 保持整个滴加过程在冰浴下。 反应溶液由乳白浑浊状逐步变为黄色浑浊状； 滴加完毕后搅拌 l〜2h ， 往烧瓶中 加入大量冰水， 静置， 有大量固体析出， 抽滤， 固体用水洗涤两次， 烘干后得 12g 2-乙基 -4-氨基 -5-嘧啶甲酸乙酯， 收率 62%。

1H-NMR(400M, J-DMSO): 7.95(s, 1H), 6.54(s, 2H), 4.30(dd, 2H, / =7.6,14.8), 2.56(dd,2H, J =7.6,15.2), 1.29(t,3H, J =7.6), 1.16(t，3H， / =7.6)。

(2) 2-乙基 -4-氨基 -5-羟甲基嘧啶的合成

化学合成方程式如上所示。

3.8g (O.lmol) LiAlH4 于 100ml单口圆底烧瓶中， 接好恒压滴加漏斗及干 燥管， 冰浴下加入搅拌子， 20mlTHF， 7.8g (0.04mol) 2-乙基 -4-氨基 -5-嘧啶甲 酸乙酯溶于 20mlTHF中， 转入恒压滴加漏斗， 缓慢滴加。 待滴加完毕后继续搅 拌 l〜2h， 冰浴下往烧瓶中缓慢滴加几毫升冰水， 使过量的 LiAlH4反应完全， 再 加入 40ml的 THF， 20ml水； 充分搅拌后静置抽滤。 滤液浓縮干后加入 20ml乙 酸乙酯， 120ml石油醚， 震荡均匀后静置有大量白色或浅黄色固体析出 ， 抽滤得 目标产物 （2-乙基 -4-氨基 -5-羟甲基嘧啶） 4.59g， 收率 75%。

1H-NMR(400M， J-DMSO): 7.94 (s， 1H)，6.54(s， lH),5.36(s, lH), 4.31(s, 2H), 3.41 (s，lH) , 2.56(dd, 2H, / =7.6,15.2), 1.16(t, 3H, J =7.6) o

(3 ) 2-乙基 -4-氨基 -5-氯亚甲基嘧啶盐酸盐的合成

化学合成方程式如上所示。 4.59g ( 0.03mol) 2-乙基 -4-氨基 -5-羟甲基嘧啶置于 100ml单口圆底烧瓶中， 加入搅拌子，加入 20ml二氯甲烷， 20ml甲苯， 0.1ml吡啶，冰浴下缓慢滴加 6.5ml 二氯亚砜 （0.28mol)， 滴加过程中， 原料会慢慢粘住， 搅在一起， 几小时之后有 白色固体分散在周围， 搅拌过夜， 旋干， 纯化得到 2-乙基 -4-氨基 -5-氯亚甲基嘧 啶盐酸盐。 未经纯化的 2-乙基 -4-氨基 -5-氯亚甲基嘧啶盐酸盐也可直接进行下步 反应。

1H-NMR(400M， J-DMSO): 8.45 ( s, 1H) ,4.80(s, 2H), 3.64(s, 2H), 2.80(dd, 2H _: J =7.6,14.8), 1.24(t, 3H， / =7.6)。

( 4 ) 5- ( 2-氟乙基） -4-甲基噻唑

化学合成方程式如上所示。

14.3g ( O. lmol) 4-甲基 -5-羟乙基噻唑于 500ml圆底烧瓶中， 加入 200ml二 氯甲烷， 28.65gTsCl ( 0.15mol)， 冰浴下滴加三乙胺 60.6g， 滴加完毕后室温搅拌 2-3h, 反应完全。 补加 300ml二氯甲烷， 经水洗几次、 碳酸氢钠洗涤后将溶剂旋 干， 再加入 30ml二氯甲烷， 200ml石油醚； 震荡均匀后固体析出， 待析出完全 后抽滤，将收集到的化合物，转入 250ml圆底烧瓶中，加入 150ml乙酸二乙二醇， 17.4gKF, 于 100°C下搅拌 lh， 点板反应完全。 冷却后加入 500ml水， 二氯甲烷 萃取三次后， 合并二氯甲烷萃取液再经水洗， 饱和食盐水洗， 减压旋转蒸发掉溶 剂后， 过柱分离出 5- ( 2-氟乙基） -4-甲基噻唑 10.1g， 收率 70%。

1H-NMR(400M， J-CDCI3): 8.68 ( s，lH)， 4.74(t, 1H, J =5.6), 4.62(t, 1Η, / =5.6),

2.75(t, 2H, J =5.6), 2.45 ( s， 3H)

( 5 ) 氯化 3-[ ( 4-氨基 -2-乙基 -5-嘧啶基)-亚甲基 ]-5- ( 2-氟乙基） -4-甲基噻 唑盐酸盐 （氟乙基硫胺素盐酸盐） 的合成

往 25mL单口瓶中， 加入 1.7g ( 8.2mmol) 2-乙基 -4-氨基 -5-氯亚甲基嘧啶 盐酸盐（可以是步骤（3 )的未经纯化的 2-乙基 -4-氨基 -5-氯亚甲基嘧啶盐酸盐）， 1.3g (9.0mmol) 5- (2-氟乙基） -4-甲基噻唑， lmL DMSO, 100摄氏度下搅 拌反应 20min， 冷至室温， 加入 10mL异丙醇， 搅拌 5min， 静置 2h， 抽滤， 得 白色固体 {氯化 3-[ (4-氨基 -2-乙基 -5-嘧啶基)-亚甲基 ]-5- (2-氟乙基） -4-甲基 噻唑盐酸盐， 即为： 氟乙基硫胺素盐酸盐 } 2g， 收率 70%。

1H-NMR(400M， J-DMSO): 10.05 (s, 1H) , 9.25(s, 1Η), 8.38(s, 1H), 5.65(s, 2H), 4.74(t, 1H, J =5.6), 4.62(t, 1H, J =5.6), 3.38(t, 2H, / =5.6), 2.80(t, 2H, / =7.6), 2.55(s, 3H), 1.29(t, 3H， / =7.6)。

(6)氯化 3-[ (4-氨基 -2-乙基 -5-嘧啶基)-亚甲基 ]-5- (2-氟乙基） -4-甲基噻 唑 （氟乙基硫胺素） 的合成

将 lg氯化 3-[ (4-氨基 -2-乙基 -5-嘧啶基)-亚甲基 ]-5- (2-氟乙基） -4-甲基噻 唑盐酸盐 （氟乙基硫胺素盐酸盐） 用 50mL 无水乙醇溶解后， 滴加等当量的 0.5mol/L氢氧化钠溶液，室温搅拌 5min，减压蒸除溶剂，加入 10mL无水乙醇， 加热回流， 趁热过滤， 往滤液中加入 20mL 乙醚， 静止结晶， 得氯化 3-[ (4- 氨基 -2-乙基 -5-嘧啶基)-亚甲基 ]-5- (2-氟乙基） -4-甲基噻唑 （氟乙基硫胺素） 约 0.85g。

1H-NMR(400M， J-DMSO): 10.00 (s, 1H)， 9.21(s, 1H), 8.35(s, 1H), 5.61(s, 2H), 4.73(t, 1H, J =5.6), 4.60(t， 1H, J =5.6), 3.34(t, 2H, / =5.6), 2.76(t, 2H, / =7.6), 2.50(s, 3H), 1.29(t, 3H, J =7.6)。

二、 氟乙基硫胺素的功效实验：

实施例 2: 氟乙基硫胺素盐酸盐抗球虫的剂量研究实验

1. 试验材料

1.1试验动物及饲料

1日龄岭南黄肉鸡， 购自广东省农业科学院畜牧所家禽研究室， 伺养于无球 虫环境中， 14日龄时镜检粪便中无球虫卵囊后分组进行试� ��。

肉鸡全价配合伺料： 惠州元太伺料有限公司配制， 不含任何抗菌及抗球虫添 加剂。 1.2试验药物

氟乙基硫胺素盐酸盐， 按照实施例 1的方法进行合成。

1.3供试卵囊：

柔嫩艾美耳球虫 GD株， 对各种抗球虫药均无抗药性。 试验前用鸡繁殖扩增， 收集新鲜卵囊孢子化后 4°C保存备用。

2. 试验设计

2.1试验分组

将 14 日龄试验雏鸡逐只称重后， 剔除瘦弱鸡或体重过大雏鸡， 选择个体体 重差异在 20g以内的健康鸡， 分成 9组， 每组试验鸡 20只。 第 1、 2组分别为不 给药不攻虫对照组和感染球虫不给药对照组， 第 3〜9组为给不同剂量氟乙基硫胺 素盐酸盐的试验组。试验分组当天按表 1分别经伺料添加不同剂量的药物， 混合 均匀后， 自由采食并伺喂到试验结束。

表 1 : 试验动物分组及药物用法、 用量

组别 试验动物数 (只） 药物 齐 LI量 (ppm)

1 20 - -

2 20 - -

3 20 氟乙基硫胺素盐酸盐 10

4 20 氟乙基硫胺素盐酸盐 25

5 20 氟乙基硫胺素盐酸盐 50

6 20 氟乙基硫胺素盐酸盐 75

7 20 氟乙基硫胺素盐酸盐 100

8 20 氟乙基硫胺素盐酸盐 150

9 20 氟乙基硫胺素盐酸盐 200

2.2试验方法

除不感染球虫不给药对照组 （第 1组） 夕卜， 各试验组每只试验鸡在分组次日 经嗉囊灌服柔嫩艾美球虫孢子化卵囊 2.5X 10 ⁵ 个。 试验期间， 每天观察记录鸡的 精神、 饮食欲、 血便情况和死亡数等。 感染后第 5天对各组鸡只进行血粪记分。 第 7天各组分别称重后剖杀全部鸡只， 观察盲肠病变， 并进行盲肠内卵囊计数。

2.3抗球虫效果评价标准

2.3.1 血粪记分： 参照文献记载的方法进行： 0分， 无血便； 1分， 少于 25% 的粪便带血； 2分， 25-50%的粪便带血； 3分， 50-75%的粪便带血； 4分， 多于 75% 的粪便带血。

2.3.2增重情况： 试验开始及结束时分别称鸡只体重， 计算平均增重和相对 增重率。相对增重率 = (试验组平均增重 /不感染不用药对照组平均增重） χ ΐοο%。

2.3.3死亡情况： 记录各组死亡鸡数， 剖检确定死因， 算出存活率。 存活率 = (试验组鸡只总数一试验期间因球虫感染死亡� �数量） /试验组鸡只总数 χ ΐοο%。

2.3.4病变标准： 感染后第 7天宰杀鸡， 参照 Johnson和 Reid (1970) 的病变记 分进行盲肠病变记分， 并将病变记分换成病变值。

病变记分： （两侧盲肠病变不一致时， 以严重的一侧为准）： 0分， 无肉眼病 变； 1分， 盲肠壁有很少量散在的瘀点， 肠壁不增厚， 内容物正常； 2分， 病变数 量较多， 盲肠内容物明显带血， 盲肠壁稍增厚， 内容物正常； 3分， 盲肠内有多 量血液或有肠芯 （血凝块或灰白色干酪样的香蕉型块状物）， 盲肠壁肥厚明显， 盲肠中粪便量少； 4分， 因充满大量血液或肠芯而盲肠肿大， 肠芯中有或无粪渣。 死亡鸡只病变也记为 4分。

病变值 （0〜40) =各试验组的平均病变记分 （0〜4) xlO

2.3.5 卵囊计数和卵囊值： 刮取盲肠内容物用 10%次氯酸钠消化 15min后， 用血球计数板计算并换算出每对盲肠中的卵囊 数量。每对盲肠中卵囊数量与卵囊 值之间的换算关系见表 2。

表 2: 卵囊数与卵囊值的换算关系 <

N>11.0 卵囊值 0 1 5 10 15 20 30 40

2.3.6抗球虫指数 (ACI)

按照下述公式计算， 艮

ACI = (相对增重率 +存活率 )x 100— (病变值 +卵

药效判定标准： ACI≥180属高效抗球虫药； 160≤ACI<180属中效抗球虫药；

120≤ACI<160属低效抗球虫药； ACK120对球虫无效。

3.试验结果

各试验组的相对增重率、 存活率、 病变值、 卵囊值和 ACI, 结果详见表 3。 从抗球虫指数结果判断， 在伺料中添加至 50或 75ppm浓度的氟乙基硫胺素盐酸 盐时， 抗球虫指数分别为 165.5和 176.4， 可达到中效性抗球虫药的效果。 而添 加至 100、 150或 200ppm时抗球虫指数分别为 195.9、 201.4和 200.8， 可达到高 效抗球虫药物的效果。 表 3 : 试验结果

血

平均增 相对增 盲肠卵囊 卵 抗球虫 组 药物剂 便 存活率 病变

重 （g/ 数量 (x lO ⁶ / 囊 指数 别 量（ppm) 记 ( %) ί直

只） ( % ) 鸡） ί直 (ACI) 分

1 0 0 100 167.2 100 0 0 0 200

2 0 4 60 102.9 61.5 33.5 2.025 10 78.0

3 10 2 90 135.7 81.2 24.5 2.965 10 136.7

4 25 2 90 139.5 83.4 18.8 2.325 10 144.6

5 50 1 100 144.9 86.7 11.2 3.65 10 165.5

6 75 0 100 158.7 94.9 8.5 2.15 10 176.4

7 100 0 100 162.0 96.9 0 0.47 1 195.9

8 150 0 100 171.2 102.4 0 0.16 1 201.4

9 200 0 100 168.5 100.8 0 0 0 200.8 实施例 3: 氟乙基硫胺素盐酸盐与其它抗球虫药物的效果 比效

1. 试验材料

1.1试验动物及饲料

1日龄岭南黄肉鸡， 购自广东省农业科学院畜牧所家禽研究室， 伺养于无球 虫环境中， 14日龄时镜检粪便中无球虫卵囊后分组进行试� ��。

肉鸡全价配合伺料： 惠州元太伺料有限公司配制， 不含任何抗菌及抗球虫添 加剂。

1.2试验药物

氟乙基硫胺素盐酸盐， 按照实施例 1的方法进行合成。

氨丙啉、 尼卡巴嗪、 马杜拉霉素， 购自 SIGMA公司。

1.3供试卵囊

柔嫩艾美耳球虫 GD株，对各种抗球虫药均无抗药性。试验前用 1鸡繁殖扩增， 收集新鲜卵囊孢子化后 4°C保存备用。

2. 试验设计

2.1试验分组

将 14 日龄试验雏鸡逐只称重后， 剔除瘦弱鸡或体重过大雏鸡， 选择个体体 重差异在 20g以内的健康鸡， 分成 6组， 每组试验鸡 30只。 第 1、 2组分别为不 给药不攻球虫对照组和感染球虫不给药对照组 ，第 3〜6组分别按表 4添加不同的 抗球虫药物。试验分组当天按表 4分别伺喂含不同药物的伺料， 自由采食并伺喂 到试验结束。

表 4: 试验动物分组及药物用法、 用量

组别 试验动物数 (只） 药物 齐 LI量 (ppm)

1 30 - -

2 30 - -

3 30 氟乙基硫胺素盐酸盐 125

4 30 氨丙啉 125

5 30 尼卡巴嗪 125

6 30 马杜拉霉素 5

2.2试验方法

除不感染球虫不给药对照组外，各试验组每只 试验鸡在分组次日经嗉囊灌服 柔嫩艾美球虫孢子化卵囊 2.5X 10 ⁵ 个。 试验期间， 每天观察记录鸡的精神、 饮食 欲、血便情况和死亡数等。 感染后第 5天对各组鸡只进行血粪记分。第 7天各组分 别称重后剖杀全部鸡只， 观察盲肠病变， 并进行盲肠内卵囊计数。

2.3抗球虫效果评价标准

评价标准同实施例 2。

3. 试验结果

各试验组的相对增重率、 存活率、 病变值、 卵囊值和 ACI, 结果详见表 5。 从血便记分及抗球虫指数结果判断， 氟乙基硫胺素盐酸盐、氨丙啉和尼卡巴嗪均 属于高效抗球虫药物， 在伺料中添加至 125ppm时， 四种药物的抗球虫指数分别 为 201.6、 191.2、 192.9和 186.7， 但氟乙基硫胺素盐酸盐在病变和卵囊值方面优 于氨丙啉和马杜拉霉素， 而在增重方面优于尼卡巴嗪。

表 5 : 试验结果

血

药物及 平均增 相对增 盲肠卵囊 卵 抗球虫 组 便 存活率 病变

剂量 重 （g/ 数量 (x lO ⁶ / 囊 指数 别 记 ( %)

(ppm) 只） ( % ) 鸡） ί直 (ACI) 分

1 0 0 100 172.8 100 0 0 0 200

2 0 4 66.7 113.6 65.7 32.6 4.854 10 89.8 氟乙基

硫胺素

3 0 100 175.6 101.6 0 0 0 201.6 盐酸盐

125

4 氨丙啉 0 100 166.3 96.2 4 0.566 1 191.2 尼卡巴

5 0 100 160.5 92.9 0 0 0 192.9 嗪 125

马杜拉

6 0 100 168.4 97.7 6 1.265 5 186.7 霉素 5 实施例 4: 氟乙基硫胺素盐酸盐对球虫耐药株的效果

1. 试验材料

1.1试验动物及饲料

1日龄岭南黄肉鸡， 购自广东省农业科学院畜牧所家禽研究室， 伺养于无球 虫环境中， 14日龄时镜检粪便中无球虫卵囊后分组进行试� ��。

肉鸡全价配合伺料： 惠州元太伺料有限公司配制， 不含任何抗菌及抗球虫添 加剂。

1.2试验药物

氟乙基硫胺素盐酸盐， 按照实施例 1的制备方法合成

氨丙啉， 购自 SIGMA公司。

1.3供试卵囊

柔嫩艾美耳球虫 JM株， 自广东江门地区鸡场分离并纯化， 经测试鉴定属于 耐氨丙啉的虫株。试验前用鸡繁殖扩增， 收集并新鲜虫卵孢子化后 4°C保存备用。

2. 试验设计

2.1试验分组

将 14 日龄试验雏鸡逐只称重后， 剔除瘦弱鸡或体重过大雏鸡， 选择个体体 重差异在 20g以内的健康鸡， 分成 5组， 每组试验鸡 30只。 第 1、 2组分别为不 给药不攻球虫对照组和感染球虫不给药对照组 ，第 3和 4组分别添加氟乙基硫胺 素盐酸盐和氨丙啉。试验分组当天按表 6伺喂含不同药物的伺料， 自由采食并伺 喂到试验结束。

表 6: 试验动物分组及药物用法、 用量

组别 试验动物数 (只） 药物 齐 LI量 (ppm)

1 30 - -

2 30 - -

3 30 氟乙基硫胺素盐酸盐 125

4 30 氨丙啉 125 2.2试验方法

除不感染球虫不给药对照组外，各试验组每只 试验鸡在分组次日经嗉囊灌服 柔嫩艾美球虫孢子化卵囊 ι.οχΐο ⁵ 个。 试验期间， 每天观察记录鸡的精神、 饮食 欲、血便情况和死亡数等。 感染后第 5天对各组鸡只进行血粪记分。第 7天各组分 别称重后剖杀全部鸡只， 观察盲肠病变， 并进行盲肠内卵囊计数。

2.3抗球虫效果评价标准

与实施例 2的评价标准相同。

3. 试验结果

各试验组的相对增重率、 存活率、 病变值、 卵囊值和 ACI, 结果详见表 7。 从血便记分及抗球虫指数结果判断， 柔嫩艾美耳球虫 JM株已对氨丙啉产生抗药 性，但氟乙基硫胺素盐酸盐仍然能很好的抑制 该虫株对试验鸡的攻击感染， 结果 提示氟乙基硫胺素盐酸盐可以克服球虫对相似 结构药物——氨丙啉的抗药性。

表 7: 试验结果

血

平均增 相对增 盲肠卵囊 卵 抗球虫 组 药物剂 便 存活率 病变

重 （g/ 数量 (x lO ⁶ / 囊 指数 别 量（ppm) 记 ( %) ί直

只） (% ) 鸡） ί直 (ACI) 分

1 0 0 100 188.6 100 0 0 0 200

2 0 4 46.7 114.9 60.9 35.4 5.654 20 52.2 氨丙啉

3 4 60 135.6 71.9 28.4 2.878 10 93.5

125

氟乙基

硫胺素

4 0 100 182.7 96.8 0 0 0 196.8 盐酸盐

125 实施例 5: 氟乙基硫胺素抗堆型艾美耳球虫的效果

1. 试验材料

1.1试验动物及饲料

1日龄岭南黄肉鸡， 购自广东省农业科学院畜牧所家禽研究室， 伺养于无球 虫环境中， 14日龄时镜检粪便中无球虫卵囊后分组进行试� ��。

肉鸡全价配合伺料： 惠州元太伺料有限公司配制， 不含任何抗菌及抗球虫添 加剂。 1.2试验药物

氟乙基硫胺素盐酸盐， 按照实施例 1的方法进行合成。

氨丙啉， 购自 SIGMA公司。

1.3供试卵囊

堆型艾美耳球虫 HT， 对各种抗球虫药均无抗药性。试验前用鸡繁殖 扩增， 收 集新鲜虫卵， 孢子化后 4°C保存备用。

2. 试验设计

2.1试验分组

将 14 日龄试验雏鸡逐只称重后， 剔除瘦弱鸡或体重过大雏鸡， 选择个体体 重差异在 20g以内的健康鸡， 分成 4组， 每组试验鸡 30只。 第 1、 2组分别为不 给药不攻球虫对照组和感染球虫不给药对照组 ， 第 3、 4组按表 8分别添加氟乙 基硫胺素或氨丙啉。试验分组当天按表 8分别伺喂含不同药物的伺料， 自由采食 并伺喂到试验结束。

表 8 : 试验动物分组及药物用法、 用量

组别 试验动物数 (只） 药物 齐 LI量 (ppm)

1 30 - -

2 30 - -

3 30 氟乙基硫胺素盐酸盐 125

4 30 氨丙啉 125 2.2试验方法

除不感染球虫不给药对照组外，各试验组每只 试验鸡在分组次日经嗉囊灌服 堆型艾美球虫孢子化卵囊 5xl0 ⁵ 个。 试验期间， 每天观察记录鸡的精神、 饮食欲 和死亡数等。 感染后第 7天各组分别称重， 统计相对增重率， 同时采集粪便样品， 计数每克粪便的卵囊数。

2.3抗球虫效果评价标准

2.3.1 增重情况： 试验开始及结束时分别称鸡只体重.。 计算平均增重和相对 增重率。相对增重率 = (试验组平均增重 /不感染不用药对照组平均增重） χ ΐοο%。

2.3.2死亡情况： 记录各组死亡鸡数， 剖检确定死因， 算出存活率。 存活率 = (试验组鸡只总数一试验期间因球虫感染死亡� �数量） /试验组鸡只总数 χ ΐοο%。

2.3.3卵囊计数和卵囊相对减少率： 攻虫感染后第 7天， 采集新鲜粪便用 10% 次氯酸钠消化 15min后，用血球计数板计算每克粪便中的球虫� ��囊数量并计算各 试验组粪便中卵囊的相对减少率。卵囊相对减 少率= (攻虫不给药对照组克粪便 卵囊数-试验组克粪便卵囊数 /攻虫不给药对照组克粪便卵囊数） χ ΐοο%。

3. 试验结果

各试验组的相对增重率、 存活率及粪便卵囊减少的结果详见表 9。 从增重及 卵囊减少结果判断， 氟乙基硫胺素盐酸对堆型艾美耳球虫有良好的 抑制作用。在 伺料中添加 125ppm时， 其抗堆型艾美耳球虫的效果优于氨丙啉。

表 9 : 试验结果

组别 药物 剂量 存活率 平均增 相对增 粪便卵囊数 卵囊相对减 (ppm) ( % ) 重 （g ) 量 (x lO ⁴ /克） 少率 （％) ( % )

1 - - 100 192.8 100 0 100

2 - - 100 92.5 48.0 26.7 -

3 氟乙基 125 100 186.5 96.7 0.65 97.6 硫胺素

4 氨丙啉 125 100 166.6 86.4 2.98 88.8 实施例 6: 氟乙基硫胺素抗巨型艾美耳球虫的效果

1. 试验材料

1.1试验动物及饲料

1日龄岭南黄肉鸡， 购自广东省农业科学院畜牧所家禽研究室， 伺养于无球 虫环境中， 14日龄时镜检粪便中无球虫卵囊后分组进行试� ��。

肉鸡全价配合伺料： 惠州元太伺料有限公司配制， 不含任何抗菌及抗球虫添 加剂。

1.2试验药物

氟乙基硫胺素盐酸盐， 按照实施例 1的方法进行合成。

氨丙啉， 购自 SIGMA公司。

1.3供试卵囊

巨型艾美耳球虫 PY株， 对各种抗球虫药均无抗药性。 试验前用鸡繁殖扩增， 收集新鲜卵囊孢子化后 4°C保存备用。

2. 试验设计

2.1试验分组

将 14 日龄试验雏鸡逐只称重后， 剔除瘦弱鸡或体重过大雏鸡， 选择个体体 重差异在 20g以内的健康鸡， 分成 4组， 每组试验鸡 30只。 第 1、 2组分别为不 给药不攻球虫对照组和感染球虫不给药对照组 ，第 3、 4组按表 10分别添加氟乙 基硫胺素或氨丙啉。 试验分组当天按表 10分别伺喂含不同药物的伺料， 自由采 食并伺喂到试验结束。

表 10: 试验动物分组及药物用法、 用 J

组别 试验动物数 (只） 药物 齐糧 (ppm)

1 30 - -

2 30 - -

3 30 氟乙基硫胺素盐酸盐 125

4 30 氨丙啉 125

2.2试验方法

除不感染球虫不给药对照组外，各试验组每只 试验鸡在分组次日经嗉囊灌服 巨型艾美球虫孢子化卵囊 3x l0 ⁵ 个。 试验期间， 每天观察记录鸡的精神、 饮食欲 和死亡数等。 感染后第 7天各组分别称重， 统计相对增重率， 同时采集粪便样品， 计数每克粪便的卵囊数。

2.3抗球虫效果评价标准

抗球虫效果评价标准同实施例 5。

3. 试验结果

各试验组的相对增重率、 存活率及粪便卵囊减少的结果详见表 11。 从增重 及卵囊减少结果判断，氟乙基硫胺素盐酸盐对 巨型艾美耳球虫的感染有明显的控 制作用， 在伺料中添加 125ppm时， 其抗巨型艾美耳球虫的效果优于氨丙啉。

表 11 : 试验结果

组别 药物 剂量 存活率 平均增 相对增 粪便卵囊数 卵囊相对减

(ppm) (% ) 重 （g) 量 (x lO ⁴ /克） 少率 （％)

( %)

1 - - 100 179.9 100 0 100

2 - - 100 123.2 68.5 4.20 -

3 氟乙基 125 100 176.3 98.0 0.37 91.2 硫胺素

4 氨丙啉 125 100 167.4 93.1 0.86 79.5 实施例 7: 氟乙基硫胺素抗毒害艾美耳球虫的效果

1. 试验材料

1.1试验动物及饲料 1日龄岭南黄肉鸡， 购自广东省农业科学院畜牧所家禽研究室， 伺养于无球 虫环境中， 14日龄时镜检粪便中无球虫卵囊后分组进行试� ��。

肉鸡全价配合伺料： 惠州元太伺料有限公司配制， 不含任何抗菌及抗球虫添 加剂。

1.2试验药物

氟乙基硫胺素盐酸盐， 按照实施例 1的方法进行合成。

氨丙啉， 购自 SIGMA公司。

1.3供试卵囊

毒害艾美耳球虫 GD株， 对各种抗球虫药均无抗药性。 试验前用鸡繁殖扩增， 收集新鲜卵囊孢子化后 4°C保存备用。

2. 试验设计

2.1试验分组

将 14 日龄试验雏鸡逐只称重后， 剔除瘦弱鸡或体重过大雏鸡， 选择个体体 重差异在 20g以内的健康鸡， 分成 4组， 每组试验鸡 30只。 第 1、 2组分别为不 给药不攻球虫对照组和感染球虫不给药对照组 ，第 3、 4组按表 12分别添加氟乙 基硫胺素或氨丙啉。 试验分组当天按表 12分别伺喂含不同药物的伺料， 自由采 食并伺喂到试验结束。

表 12: 试验动物分组及药物用法、 用量

组别 试验动物数 (只） 药物 齐糧 (ppm)

1 30 - -

2 30 - -

3 30 氟乙基硫胺素盐酸盐 125

4 30 氨丙啉 125

2.2试验方法

除不感染球虫不给药对照组外，各试验组每只 试验鸡在分组次日经嗉囊灌服 毒害艾美球虫孢子化卵囊 lxlO ⁵ 个。 试验期间， 每天观察记录鸡的精神、 饮食欲 和死亡数等。 感染后第 7天各组分别称重， 统计相对增重率， 同时采集粪便样品， 计数每克粪便的卵囊数。

2.3抗球虫效果评定标准

抗球虫效果评价标准同实施例 5。

3. 试验结果 各试验组的相对增重率、 存活率及粪便卵囊减少的结果详见表 13。 从增重 及卵囊减少结果判断， 氟乙基硫胺素盐酸盐可以有效防治毒害艾美耳 球虫的感 染， 在伺料中添加 125ppm时， 其抗毒害艾美耳球虫的效果优于氨丙啉。

表 13 : 试验结果

组别 药物 剂量 存活率 平均增 相对增重 粪便卵囊 卵囊相对减 (ppm) ( % ) 重 （g ) 率 （％) 数量 (x lO ⁴ / 少率 （％) 克）

1 - - 100 185.6 100 0 100

2 - - 63.3 88.4 47.6 1.35 -

3 氟乙基 125 100 172.5 92.9 0.19 85.9 硫胺素

4 氨丙啉 125 100 159.9 86.2 0.36 73.3 由此可见，本发明的氟乙基硫胺素及其盐具有 显著的抗球虫作用， 特别是对 于一些已经对其他抗球虫药物产生抗药性的球 虫也具有显著的抗球虫作用，因此 本发明的氟乙基硫胺素及其盐能够在制备抗球 虫药物中应用。