Art antérieur L'art antérieur le plus proche est constitué par WO-A-99/41283 (date de publication : 19 août 1999) qui propose en tant que produits industriels les peptides de formule I : Xoi Xo2 Ser X04 Xos Xo6 X07 Xoe X09 Xio Xn 11 Xi3 X14 Xls G1n X'--7 X18 Ser X20 Asp Leu Gin X24 Y25 (I) dans laquelle, X01 est Pro, Gly ou Ala, les résidus aminoacides préférés étant Pro et Ala, X02 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement His ou Glx, le résidu préféré étant His, Xo4 est Pro, Gly, Thr, Ala, Ile ou Leu, les résidus aminoacides préférés étant Pro, Ala et Leu, est est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Thr, Glx, Asx ou Ala, le résidu préféré étant Thr, ) représente Ala, Val, Gln, Leu, Ile ou Thr, le résidu aminoacide préféré étant Ala, X07 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ala ou Glx, Xos est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ile, Leu ou Val, Xo9 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ile, Leu ou Val, le résidu préféré étant Ile, Xio est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ala ou Val,

Xn est un résidu Lys, Ser ou Thr, l'aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement le résidu préféré étant Thr, X12 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Leu ou Ile, le résidu préféré étant Leu, Xi3 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Lys ou Ser, X] 4 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Asx ou Glx, le résidu préféré étant Asn, Xl5 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Gly, X17 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Lys ou Gln, Xtg est Leu, Ile, Val, Ala ou Tyr, le résidu préféré étant Ile, X2o est Leu, Ile ou Val, le résidu préféré étant Leu, X24 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ala, Asx, Glx ou Ser, les résidus préférés étant Ala et Glu, Y25 est un résidu Pro, Pro-X26 ou Pro-X26-Tyr, le résidu préféré étant le résidu monoaminoacide Pro, X26 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Arg, Ile, Leu, Val, Met ou Trp, le résidu préféré étant Leu ; et, leurs sels d'addition non toxiques.

Les peptides de formule I selon WO-A-99/41283 précité peuvent présenter jusqu'à sept activités essentielles (1-7) réparties en trois classes fonctionnelles (A-C), à savoir qu'ils sont utiles -classe A (fonction hématopoïétique) (1) en tant qu'inhibiteurs de l'hématopoïèse, et plus précisément en tant qu'inhibiteurs de la prolifération hématopoïétique (effet intéressant vis-à-vis des syndromes myéloprolifératifs ; (2) en tant qu'agents cytoprotecteurs, et en particulier dans la cytoprotection anti-apoptotique de cellules souches hématopoïétiques ; (3) en tant que produits ayant un effet inhibiteur sur la différenciation des cellules hématopoïétiques ;

(4) en tant qu'agents d'expansion hématopoïétiques etlou purge médullaire ; -classe B (fonction angiogénique) (5) en tant qu'agents anti-angiogénèse ; et/ou, -classe C (fonction anti-inflammatoire) (6) en tant qu'agents virustatiques, notamment vis-à-vis des virus et rétrovirus à capside lipidique ; (7) en tant qu'agents anti-inflammatoires.

But de l'invention Les peptides de formule I présentant des activités anti- inflammatoires, on se proposait d'augmenter l'effet de ces activités anti- inflammatoires par des modifications de structure, car il existe un besoin en substances anti-inflammatoires qu'il convient de satisfaire.

En procédant ainsi, on a obtenu de façon surprenante (i) des produits (i. e. les eicosapeptides de formule II ci-après) dépourvus de la séquence DLQ (i. e. Asp-Leu-Gln) en position 21-23 de la formule I et qui agissent en tant qu'antagonistes, et (ii) des produits (i. e. les tricosapeptides de formule III et les peptides de formule IV qui comportent de 25 à 27 aminoacides) dans lesquels ladite séquence DLQ des peptides de formule 1 est remplacée par ELR (i. e. Glu-Leu-Arg) et qui présentent une nouvelle activité hématopoïétique inattendue, à savoir un effet stimulant sur la prolifération des progéniteurs hématopoïétiques après chimio-ou radiothérapies.

On se propose donc de fournir à présent de nouveaux composés peptidiques qui soient particulièrement intéressants en thérapeutique eu égard (i) aux nouvelles propriétés et/ou (ii) aux propriétés améliorées qu'ils manifestent par rapport aux peptides de formule 1 selon le document WO-A- 99/41283 précité.

Objet de l'invention Selon un premier aspect de l'invention, on préconise, en tant que nouveau composé peptidique, un produit caractérisé en ce qu'il est choisi parmi l'ensemble constitué par : (a) les peptides répondant à la formule II :

Xo1 X02 Ser X04 X05 X06 X07 X08 Xog Xio Xll X12 X13 X14 X15 X16 X17 Xis Ser X20 (II) (voir aminoacides 1-20 de SEQ ID No. 1) (b) les peptides répondant à la formule III : Xoi X02 Ser X04 X05 X06 X07 X08 X09 X10 X11 X12 X13 X14 X15 X16 Xn Xie Ser X20 Glu Leu Arg (III) (voir aminoacides 1-23 de SEQ ID No. 1) (c) les peptides répondant à la formule IV : Xo1 Xo2 Ser X04 X05 X06 XO-7 XOS Xog Xio X1l X12 X13 X14 X15 Xi6 X17 X18 Ser X20 Glu Leu Arg X24 Y25 (IV) (voir SEQ ID No. 1) dans lesquelles Xol est Pro, Gly ou Ala, les résidus aminoacides préférés étant Pro et Ala, X02 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement His ou Glx, le résidu préféré étant His, Xo4 est Pro, Gly, Thr, Ala, Ile ou Leu, les résidus aminoacides préférés étant Pro, Ala et Leu, X05 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Thr, Glx, Asx ou Ala, le résidu préféré étant Thr, X06 représente Ala, Val, Gln, Leu, Ile ou Thr, le résidu aminoacide préféré étant Ala, X07 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ala ou Glx, X08 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ile, Leu ou Val, X09 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ile, Leu ou Val, le résidu préféré étant Ile, Xlo est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ala ou Val,

Xl, est un résidu Lys, Ser ou Thr, l'aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement le résidu préféré étant Thr, Xi2 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Leu ou Ile, le résidu préféré étant Leu, X13 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Lys ou Ser, Xl4 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Asx ou Glx, le résidu préféré étant Asn, X, 5 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Gly, X16 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Arg ou Glx, les résidus préférés étant Gln et Arg, X, est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Lys ou Gln, X, 8 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Leu, Ile, Val, Ala ou Tyr, le résidu préféré étant Ile, X20 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Leu, Ile ou Val, le résidu préféré étant Leu, X24 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Ala, Asx, Glx ou Ser, les résidus préférés étant Ala et Glu, Y25 est un résidu Pro, Pro-X26 ou Pro-X26-Tyr, le résidu préféré étant le résidu monoaminoacide Pro, X26 est un résidu aminoacide quelconque différent de Cys et représente avantageusement Arg, Ile, Leu, Val, Met ou Trp, le résidu préféré étant Leu ; et, (d) leurs sels d'addition d'acide non toxiques ; et en ce que le segment peptidique (S), qu'il comporte, commençant à X04 et se terminant à Xi$ forme une hélice a stable.

Selon un second aspect de l'invention, l'on préconise une utilisation des produits selon l'invention, qui est caractérisée en ce que l'on fait appel à un composé peptidique choisi parmi l'ensemble constitué parmi (a) les peptides de formule II, (b) les peptides de formule III, (c) les peptides de formule IV et (d) leurs sels d'addition d'acide non toxiques pour la préparation d'un médicament, comme indiqué plus loin.

Enfin, selon un troisième aspect de l'invention, on préconise une composition thérapeutique qui est caractérisée en ce qu'elle renferme, en association avec un excipient physiologiquement acceptable, au moins (a) un peptide de formule II, (b) un peptide de formule III, (c) un peptide de formule IV et (d) l'un de leurs sels d'addition d'acide non toxiques.

Abréviations Dans la présente description on a utilisé, par commodité, un nombre important d'abréviations. Pour les résidus aminoacides classiques on a fait appel (i) au code à une lettre et (ii) au code à trois lettres, tels que recommandés par l'IUPAC ; dans cette optique B (Asx) représente N (Asn) ou D (Asp), d'une part, et Z (Glx) représente Q (Gln) ou E (Glu), d'autre part. Les autres abréviations et acronymes utilisés sont les suivants : 5FU 5-fluorouracile, produit cytotoxique de référence gro ensemble de protéines exprimées notamment dans les cellules tumorigènes ; on distingue plus précisément groa qui est une protéine mature de 73 aminoacides découverte dans les fibroblastes d'embryon d'hamster chinois, groß (ou MIP-2a) et groy (ou MIP- 2ß) ; par rapport à la séquence des aminoacides de groa, grop et groy présentent une homologie de 90 % et respectivement 86 % HPLC chromatographie liquide de haute performance IL8 interleukine 8 MIP protéine inflammatoire de macrophage (de l'anglais :"macrophage inflammatory protein") PBS tampon phosphate salin Description détaillée de l'invention Les composés peptidiques selon l'invention comprennent : -les eicosapeptides de formule II qui sont constitués par les aminoacides 1-20 des peptides antérieurs de formule I ; -les tricosapeptides de formule III, qui se distinguent sur le plan de la structure desdits peptides de formule 1 par (i) la présence en position 21- 23 de la séquence aminoacide ELR (i. e. Glu-Leu-Arg) au lieu de la séquence DLQ (i. e. Asp-Leu-Gln) et (ii) l'absence de la séquence Y25- X26 ; et, -les peptides de formule IV, qui comportent de 25 à 27 restes aminoacides et se différencient du point de vue de la structure desdits

peptides de formule 1 par la présence en position 21-23 de la séquence ELR au lieu de DLQ.

X16 représente, comme indiqué plus haut, Arg, Gln ou Glu. Les groupes préférés pour Xl6, eu égard aux propriétés biologiques des peptides de formules II, III et IV, sont Arg et surtout Gln.

Les peptides selon l'invention peuvent être utilisés tels quels ou sous la forme de sels d'addition avec un acide minéral ou organique, notamment l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide trifluoroacétique, l'acide méthanesulfonique ou l'acide paratoluène- sulfonique.

Les peptides de formule II et leurs sels d'addition d'acide non toxiques sont des substances antagonistes. Ils bloquent l'action des peptides de formules I, III et IV ci-dessous, d'une part, et eu égard aux résultats des essais qui ont été entrepris ils exercent une activité antagoniste vis-à-vis des chemokines de type CXC de la sous-famille ELR, telles que notamment IL8, NAP2, groa, groi et groy, d'autre part.

Les peptides de formules III et IV ainsi que leurs sels d'addition d'acide non toxiques ont les mêmes activités que les peptides antérieurs de formule I. Ils présentent toutefois un effet stimulant sur la prolifération des cellules souches hématopïétiques après chimio-ou radiothérapies qui est particulièrement intéressant selon l'invention. Ainsi, les peptides de formule III, les peptides de formule IV et leurs sels d'addition d'acide non toxiques sont utiles en thérapeutiques vis-à-vis des effets néfastes des chimio-et radiothérapies sur les lignées hématopoïétiques.

En outre, à la différence desdits peptides de formule I, les peptides de formules III et IV peuvent présenter des activités chimio- tactiques pour les leucocytes.

Les propriétés biologiques et pharmacologiques des composés selon l'invention sont en grande partie dues à leur capacité à s'organiser en une ou plusieurs structures secondaires (hélice a, feuillets P et coudes) leur permettant d'adopter des conformations particulières. Les notions d'hélice a, de feuillets ß et de coudes} 3 figurent dans la littérature et sont bien connues de l'homme de l'art. Voir notamment S. MARQUEE et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989 ; 86, pages 5286-5290, d'une part, et C. R.

MATTHEWS et al., Annu. Rev. Biochem., 1993 ; 62, pages 653-683, d'autre part.

Pour les peptides de formule Il, III et IV, le segment peptidique (S) commençant à Xo4 et se terminant vers X15 possède la propriété de former une hélice a stable. L'hélicité de ce segment S et du peptide le contenant est importante voire essentielle à la manifestation des propriétés biologiques et pharmacologiques des produits de l'invention ; 1) le maintien et la stabilité de l'hélicité a dudit segment exigent, selon les expérimentations du Déposant, la présence à l'extrémité N- terminale de X04 des résidus 1 à 3 de la séquence X0l-xo2-sero3 ; la délétion partielle ou totale de ladite séquence en amont de Xo4 a pour conséquence : (i) de réduire l'hélicité a des peptides de formule II, III et IV calculée au moyen d'une banque de données (voir V. MUNOZ et al., Nature : Struct. Biol., 1994 ; 1, pages 399-409) et mesurée par dichroïsme circulaire, RMN et infra-rouge en Transformée de Fourier, (ii) d'inverser le rapport R (hélice a/structures P), et (iii) de réduire de façon importante les propriétés biologiques des peptides résultant de ladite délétion par rapport aux peptides de formules II, III et IV selon l'invention ; 2) selon le Déposant, le choix des résidus des positions 4 et 6 du peptide de formules II, III et IV, à savoir X04 et X06, est important en ce qui concerne l'hélicité a et le rapport R ; aussi pour avoir un pourcentage d'hélicité a maximal et augmenter ledit rapport R, l'on recommande selon l'invention de faire appel : (i) à un résidu X04 qui soit Pro et mieux Ala ou Leu, et (ii) à un résidu X06 qui soit avantageusement Ala, Leu ou Ile ; par exemple un résidu X06=Pro diminue considérablement le pour- centage d'hélice a du segment S et des peptides contenant ledit segment S, d'une part, et réduit d'un facteur 50 à 100 les activités biologiques et pharmacologiques desdits peptides résultant de la substitution X06=Pro, d'autre part ; et, 3) les peptides selon l'invention présentent dans leur segment S une hélicité a maximale se situant au niveau des résidus aminoacides 7 à 11 (plus principalement au niveau du résidu 9) de la séquence de formule II, III ou IV. Pour ces peptides, cette hélicité a maximale, qui est déterminée

au moyen du logiciel"AGADIR" (il s'agit d'une valeur prédictive), est supérieure ou égale à 0, 12 (i. e. supérieure ou égale à 12 %). (En pratique, cette valeur seuil de 0, 12 unité correspond à 1, 12 fois l'hélicité oc de la séquence des aminoacides 34-58 du PF4.) Le logiciel"AGADIR", qui est disponible depuis 1997 dans sa dernière version, est un algorithme permettant de calculer une valeur prédictive de l'hélicité de chacun des résidus aminoacides d'un peptide. Voir à cet effet l'article de V. MUNOZ et al., Nature : Struct. Biol., 1994 ; 1, pages 399-409 précité, d'une part, et les articles suivants : (i) V. MUNOZ et al., J. Mol. Biol., 1995 ; 245. pages 275-296 ; (ii) V. MUNOZ et al., J. Mol.

Biol., pages 297-308 ; et (iii) V. MUNOZ et al., Biopolymers, 1997 ; 41, pages 495-509, d'autre part.

Le fait que le segment peptidique S comporte une hélice of. stable a pour conséquence que chacun des résidus aminoacides X05 à X, ne doit pas être un groupe destructeur d'hélicité (en anglais :"helix breaking residue") tel que Pro et Gly. Ainsi chacun des X05 et X07 à à X) 4 sera différent de Pro et Gly.

En bref, un au moins des résidus aminoacides du segment S des peptides de formules II, III et IV présente une hélicité a supérieure ou égale à 12%.

Outre le segment S, la séquence des résidus aminoacides de la position 16 environ à la position 20-25 a une influence sur les activités des peptides de formule 1 selon l'invention. Au-delà de la position 25, l'insertion de quelques résidus aminoacides supplémentaires (notamment 1 à 5) ne modifie pratiquement pas les activités des peptides de formules III et IV. En conséquence (i) l'extrémité C-terminale des peptides selon l'invention peut être arrêtée à la position 20 (eicosapeptides de formule II actifs en tant qu'antagonistes des peptides I, III et IV), à la position 23 (tricosapeptides de formule III) ou à la position Y25 = Pro (composés pentacosapeptides), et (ii) on peut poursuivre la séquence jusqu'à la position 27 pour y introduire in fine un résidu Tyr afin de disposer de peptides convenant comme réactifs biologiques pour diagnostic notamment in vitro.

Il peut être recommandé, d'un point de vue analytique (notam- ment dans le domaine du diagnostic et celui de l'expérimentation pharmaco- logique), d'avoir au moins un résidu Tyr dans la séquence des aminoacides

des peptides de formule II, III ou IV. Le résidu Tyr, qui est notamment plus facilement détectable ou marquable (au moyen d'un radio-isotope) que les autres résidus aminoacides naturels, peut être situé sur l'une des positions 2, 5, 7 à 15, 17, 24 ou 27 dans le peptide de formule II, III ou IV.

Expérimentalement on a trouvé qu'il est plus pratique du point de vue analytique que Tyr soit le dernier résidu aminoacide de l'extrémité C-terminale. En d'autres termes, le résidu Tyr, s'il est présent, sera de préférence localisé en position 27 dans la formule IV.

Les eicosapeptides de formule II sont intéressants eu égard à leur action en tant qu'antagonistes des peptides de formules I, III et IV, c'est-à- dire (i) qu'ils comportent dans leur structure le ou les récepteurs des peptides de formules I, III et IV, ou (ii) qu'ils se fixent préférentiellement sur lesdits récepteurs en inhibant ainsi l'action desdits peptides de formules I, III et IV. Les eicosapeptides présentent un intérêt sur le plan analytique en ce qui concerne l'étude desdits récepteurs et celle des substances qui s'y fixent.

Les tricosapeptides de formule III et les peptides de formule IV se distinguent des peptides antérieurs de formule 1 par le fait qu'il n'ont aucune action sur la phase S de la mitose, alors que les peptides de formule 1 présentaient, selon WO-A-99/41283 précité, un effet bénéfique sur le cycle cellulaire en prolongeant la phase S intervenant lors de la mitose.

Lesdits peptides de formules III et IV peuvent présenter jusqu'à huit activités essentielles (1-8) réparties en trois classes fonctionnelles (A-C), à savoir qu'ils sont utiles -classe A (fonction hématopoiétique) (1) en tant qu'inhibiteurs de l'hématopoïèse, et plus précisément en tant qu'inhibiteurs de la prolifération hématopoïétique (effet intéressant vis-à-vis des syndromes myéloprolifératifs) ; (2) en tant qu'agents stimulants sur la prolifération des cellules souches hématopoïétiques après chimio-ou radiothérapies ; (3) en tant qu'agents cytoprotecteurs, et en particulier dans la cytoprotection anti-apoptotique de cellules souches hématopoïétiques ; (4) en tant que produits ayant un effet inhibiteur sur la différenciation des cellules hématopoïétiques ; (5) en tant qu'agents d'expansion hématopoïétique et/ou purge médullaire ;

-classe B (fonction angiogénique) (6) en tant qu'agents anti-angiogénèse ; et/ou, -classe C (fonction anti-inflammatoire) (7) en tant qu'agents virustatiques, notamment vis-à-vis des virus et rétrovirus à capside lipidique ; (8) en tant qu'agents anti-inflammatoires.

Comme indiqué dans WO-A-99/41283, il est rappelé ce qui suit.

Les syndromes myéloprolifératifs mentionnés ci-dessus comprennent en particulier : (1°) la thrombocytémie essentielle, (2°) la polyglobulie de VAQUEZ, (3°) la myélofibrose et (4°) la leucémie myéloïde chronique.

Par l'expression"agent d'expansion hématopoïétique", on entend ici un produit qui agit au niveau des cellules hématopoïétiques en favorisant ou stimulant la croissance des cellules souches telles que celles qui sont à l'origine des granulocytes, des plaquettes et des érythrocytes.

La purge médullaire intervient souvent après l'expansion médullaire. Elle est nécessaire en cas de greffe de moelle osseuse.

On a également constaté que les substances hépariniques (notamment l'héparine usuelle utilisée en tant que produit anticoagulant et les héparines de faible poids moléculaire) n'inhibent pas l'activité des peptides de formules II, III et IV selon l'invention.

Les peptides de formules II, III et IV peuvent être préparés suivant une méthode connue en soi par application de mécanismes réactionnels chimiques ou biologiques classiques, à savoir par synthèse peptidique ou par génie génétique.

En bref, chaque composé de formules II, III ou IV selon l'invention présente, au niveau de ses résidus aminoacides 7 à 11, (i) une hélicité a maximale qui est supérieure ou égale à 0, 12 (i. e. 12 %, qui est déterminée au moyen du logiciel"AGADIR") et (ii) un rapport R supérieur ou égal à 1, 5.

On a fourni ci-après un certain nombre d'exemples selon l'invention et de résultats d'essais pharmacologiques. L'ensemble de ces éléments n'est nullement limitatif mais est donné à titre d'illustration.

On préconise une utilisation des produits de formules III et IV selon l'invention, qui est caractérisée en ce que l'on fait appel à un composé

peptidique choisi parmi l'ensemble constitué par (a) les peptides de formules III et IV et (b) leurs sels d'addition d'acide non toxiques, pour la préparation d'un médicament : (1) inhibiteur de l'hématopoïèse, destiné à un usage en thérapeutique vis- à-vis des syndromes myéloprolifératifs, (2) stimulant la prolifération des cellules souches hématopoïétiques, destiné à un usage en thérapeutique vis-à-vis des effets néfastes sur les cellules hématopoïétiques suivant les chimie-et radiothérapies ; (3) cytoprotecteur, destiné à un usage en thérapeutique vis-à-vis des agressions cytotoxiques ; (4) stimulant l'expansion des cellules hématopoïétiques et/ou la purge médullaire, destiné à un usage en thérapeutique vis-à-vis d'une insuf- fisance médullaire ou en cas de greffe médullaire ; (5) ayant un effet inhibiteur sur la différenciation des cellules hémato- poïétiques permettant l'expansion des cellules hématopoïétiques les moins différenciées au cours des protocoles d'expansion ex vivo des cellules hématopoïétiques ; (6) anti-angiogénèse, destiné à un usage en thérapeutique vis-à-vis d'une angiogénèse pathologique ; et/ou, (7) anti-inflammatoire, destiné à un usage en thérapeutique vis-à-vis des inflammations.

Les effets bénéfiques indiqués aux points 1 et 3-4 ci-dessus se manifestent spécifiquement sur les cellules normales (i. e. saines) mais ne sont pas observés sur les cellules anormales en particulier les cellules leucémiques et cancéreuses. Les peptides de formules III et IV sont donc utiles pour différencier les cellules saines des cellules anormales.

Dans la liste de séquence fournie ci-après, on a donné à titre d'illustration la structure d'un fragment d'ADN codant pour le produit de l'exemple 1.

L'invention concerne en outre les anticorps polyclonaux et mieux monoclonaux levés contre les peptides de formules II, III et IV ; les anticorps monoclonaux sont particulièrement utiles dans le domaine analytique pour apprécier la structure des analogues des composés de formules II, III et IV, d'une part, et dans le domaine de la purification quand

formules II, III et IV, d'une part, et dans le domaine de la purification quand il s'agit d'isoler des peptides comprenant la séquence des composés de formule II, III ou IV, d'autre part.

L'invention concerne de plus, en tant que produits industriels nouveaux, les fragments d'ADN qui codent pour les peptides de formules II, III ou IV.

Exemples 1-90 Des exemples représentatifs de l'invention ont été consignés dans les tableaux I, II et III ci-après. Ils ont été préparés par synthèse peptidique selon la technique classique en phase solide puis purifiés par HPLC sur colonne. Si nécessaire, ces peptides peuvent être préparés par génie génétique à partir des fragments d'ADN qui les codent. La structure des exemples comparatifs (CP1-CP4) est donné dans le tableau III, CP4 étant le produit de l'exemple 1 de WO-A-99/41283 précité.

TABLEA U I Eicosapeptides de formule II Produit Structure Ex 1 PHSPTAQLIA TLKNGQKISL Ex 2 PHSPTVQLIA TLKNGQKISL Ex 3 PYSPTAQLIA TLKNGQKISL Ex 4 PHSPQTELIV KLKNGQKISL Ex 5 PHSPTAQLIA TLKNGQKISV Ex 6 AHSPTAQLIA TLKNGQKISL Ex 7 AHSPTVQLIA TLKNGQQISL Ex 8AYSPTAQLIA TLKNGQKISL Ex 9 AHSPQTELIV KLKNGQKISL Ex 10 AHSPTAQLIA TLKNGQKISV Ex 11 PHSATAQLIA TLKNGQKISL Ex 12 PHSATVQLIA TLKNGQKISL Ex 13 PYSATAQLIA TLKNGQKISL Ex 14 PHSAQTELIV KLKNGQKISL Ex 15 PHSATAQLIA TLKNGQKISV Ex 16 AHSATAQLIA TLKNGQKISL Ex 17 AHSATVQLIA TLKNGQQISL Ex 18 AYSATAQLIA TLKNGQKISL Ex 19 AHSAQTELIV KLKNGQKISL Ex 20 AHSATAQLIA TLKNGQKISV Ex 21 PHSPTAQLIA TLKNGRKISL Ex 22 PHSPTVQLIA TLKNGRKISL Ex 23 PYSPTAQLIA TLKNGRKISL Ex 24 PHSPQTELIV KLKNGRKISL Ex 25 PHSPTAQLIA TLKNGRKISV Ex 26 AHSPTAQLIA TLKNGRKISL Ex 27 AHSPTVQLIA TLKNGRQISL Ex 28 AYSPTAQLIA TLKNGRKISL Ex 29 AHSPQTELIV KLKNGRKISL Ex 30 AHSPTAQLIA TLKNGRKISV Ex 31 PHSATAQLIA TLKNGRKISL Ex 32 PHSATVQLIA TLKNGRKISL Ex 33 PYSATAQLIA TLKNGRKISL Ex 34 PHSAQTELIV KLKNGRKISL Ex 35 PHSATAQLIA TLKNGRKISV Ex 36 AHSATAQLIA TLKNGRKISL Ex 37 AHSATVQLIA TLKNGRQISL Ex 38 AYSATAQLIA TLKNGRKISL Ex 39 AHSAQTELIV KLKNGRKISL Ex 40 AHSATAQLIA TLKNGRKISV TABLEAU II Tricosapeptides de formule III Produit Structure Ex 41 PHSPTAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 42 PHSPTVQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 43 PYSPTAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 44 PHSPQTELIV KLKNGQKISL ELR Ex 45 PHSPTAQLIA TLKNGQKISV ELR Ex 46 AHSPTAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 47 AHSPTVQLIA TLKNGQQISL ELR Ex 48 AYSPTAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 49 AHSPQTELIV KLKNGQKISL ELR Ex 50 AHSPTAQLIA TLKNGQKISV ELR Ex 51 PHSATAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 52 PHSATVQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 53 PYSATAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 54 PHSAQTELIV KLKNGQKISL ELR Ex 55 PHSATAQLIA TLKNGQKISV ELR Ex 56 AHSATAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 57 AHSATVQLIA TLKNGQQISL ELR Ex 58 AYSATAQLIA TLKNGQKISL ELR Ex 59 AHSAQTELIV KLKNGQKISL ELR Ex 60 AHSATAQLIA TLKNGQKISV ELR Ex 61 PHSPTAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 62 PHSPTVQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 63 DYSPTAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 64 PHSPQTELIV KLKNGRKISL ELR Ex 65PHSPTAQLIA TLKNGRKISV ELR Ex 66 AHSPTAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 67 AHSPTVQLIA TLKNGRQISL ELR Ex 68 AYSPTAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 69 AHSPQTELIV KLKNGRKISL ELR Ex 70 AHSPTAQLIA TLKNGRKISV ELR Ex 71 PHSATAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 72 PHSATVQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 73 PYSATAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 74 PHSAQTELIV KLKNGRKISL ELR Ex 75 PHSATAQLIA TLKNGRKISV ELR Ex 76 AHSATAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 77 AHSATVQLIA TLKNGRQISL ELR Ex 78 AYSATAQLIA TLKNGRKISL ELR Ex 79 AHSAQTELIV KLKNGRKISL ELR Ex 80 AHSATAQLIA TLKNGRKISV ELR TABLEA U III Peptides de formule IV Produit Structure Ex 81 PHSPTAQLIA TLKNGQKISL ELRAPLY Ex 82 PHSPTVQLIA TLKNGQKISL ELRAPLY Ex 83 AHSATAQLIA TLKNGQKISL ELRAPLY Ex 84 PHSPQTELIV KLKNGQKISL ELRAPRY Ex 85 PHSPTAQLIA TLKNGQKISL ELRAPRY Ex 86 PHSATAQLIA TLKNGQKISL ELRAPLY Ex 87 PHSPTAQLIA TLKNGRKISL ELRAPLY Ex 88 PHSPTVQLIA TLKNGRKISL ELRAPLY Ex 89 AHSATAQLIA TLKNGRKISL ELRAPLY Ex 90 PHSPQTELIV KLKNGRKISL ELRAPRY CP 1 PHCPTAQLIA TLKNGRKICL DLQAP CP 2 PHSPTPQLIA TLKNGQKISL DLQAP CP 3 PHSTAPQLIA TLKNGQKISL ELRAPLY CP 4 PHSPTAQLIA TLKNGQKISL DLQAP

Essais pharmacologiques On a résumé ci-après une partie des essais pharmacologiques qui ont été entrepris avec les peptides selon l'invention. Les essais qui suivent concernent plus précisément l'évaluation de l'effet radioprotecteur des peptides de formules III et IV selon l'invention.

Deux protocoles ont été utilisés.

Selon le premier protocole, on a procédé comme suit : 1. incubation pendant 48h de cellules de moelle de souris avec PBS (lot contrôle) ou PB S + 1 µg/ml de peptide à tester ; 2. irradiation à 750 cGy ; 3. mesure de la viabilité (en %) par coloration (MTT) 24h après irradiation.

Les résultats obtenus sont consignés dans le tableau IV.

TABLEAUIV Produit Viabilité - (contrôle) 23% Ex41 50% Ex 4248% Ex 46 50% Ex 50 51% Ex 61 50% Ex 81 49% Ex 87 49% CP134% CP232% CP3 22 % CP438% Selon le second protocole, on a procédé comme suit : 1. incubation pendant 48h de cellules de moelle de souris avec PBS (lot contrôle) ou PBS + 50 ng/ml de peptide à tester ; 2. irradiation à 750 cOy ; 3. culture des cellules sur une couche de cellules stromales irradiées ;

4. évaluation clonogénique à partir des cellules non adhérentes après 7, 21 ou 35 jours de culture.

Les résultats obtenus (nombre de colonies) sont consignés dans le tableau V.

TABLEA U V Produit 7'ours 21 jours 35jours - (contrôle) 10 # 3 44 20 331 88 Ex 41 37 # 5 263 # 90 1301 # 89 Ex 42 35 5 264 85 1290 86 Ex 46 37 5 260 # 88 1290 # 90 Ex 50 38 # 5 265 # 90 1310 # 88 Ex 61 36 # 5 268 # 85 1330 # 90 Ex 81 37 # 5 264 # 90 1295 # 90 Ex 87 38 5 26590 132088 CP1 20 # 5 160 # 80 450 # 80 CP2 19 5 150 80 430 80 CP3 10 # 5 45 # 20 340 # 80 CP4 25 5 17085 81085 Il résulte des valeurs consignées dans les tableaux IV et V que les peptides de formules III et IV selon l'invention protègent les cellules souches hématopoïétiques des effets de l'irradiation.

Essais cytoprotecteurs Les essais entrepris avec les peptides de l'invention montrent qu'ils inhibent les effets"cytotoxiques"de 5FU.

Essais RMN Des essais RMN ont été réalisés en vue de corréler les résultats prédictifs du logiciel"AGADIR". Ces essais RMN ont été entrepris selon la méthode décrite par K. WUTRICH dans"NMR of proteins and nucleic acids" (Wiley-Interscience 1986) et adaptée au PF4 par E. Ilyina et al., Biochemistry, 1994 ; 34, pages 13436-13444 et par V. A. DARAGAN et al., Protein Science 1997 ; 6, pages 355-363. Cette méthode comprend la

détermination de la variation des déplacements chimiques secondaires au niveau de chaque résidu dudit peptide.

Les résultats obtenus pour les peptides selon l'invention Ex 21, Ex 41 et Ex 76, d'une part, et les peptides de comparaison CP 2 (4-25) [i. e. dépourvu des aminoacides 1-3] et CP 2 (4-23) [i. e. dépourvu des aminoacides 1-3 et 24-25], d'autre part, sont consignés dans les figures 1 à 5 ci-après. Ils confirment la stabilité de l'hélice a du segment S.

Pour Ex 21, Ex 41, Ex 76, CP 2 (4-25) et respectivement CP 2 (4-23), les Ab sont de-0, 50,-0, 49,-0, 50,-0, 29 et respectivement-0, 20 pour le résidu aminoacide en position 9 (ici Ile).