FRACCIONES HIDROSOLUBLES DE PHLEBODIUM DECUMANUM Y SU EMPLEO COMO COMPLEMENTO NUTRICIONAL EN PACIENTES DE SIDA Y CÁNCER CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a una fracción hidrosoluble obtenida a partir de los frondes de una variedad cultivada de Phlebodium decumanum, purificada y estandarizada, identificada como EXPLY-37, a formulaciones que la contienen y al empleo de las mismas como complementos nutricionales de aplicación general, y, en particular, para enfermos que presentan deterioro y debilitamiento general y síndrome caquéctico, tal como sucede en enfermos de SIDA y en pacientes oncológicos. Dichas formulaciones pueden utilizarse, además, durante la aplicación de fármacos antiretrovirales en pacientes de SIDA y de tratamientos oncológicos convencionales (cirugía y/o radio y quimioterapia) para mejorar su eficacia y disminuir los efectos secundarios de dichos tratamientos. Asimismo, tienen utilidad en la recuperación de pacientes sometidos a dichos tratamientos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La caquexia es un síndrome complejo caracterizado por pérdida de apetito y peso, debilitamiento generalizado, anemia y astenia. Este síndrome está asociado a un desequilibrio metabólico y se manifiesta en forma de pérdida de peso y deterioro generalizado : el organismo es incapaz de mantener el adecuado suministro energético y consume su propia reserva grasa y proteína muscular.

Es un hecho admitido que un porcentaje elevado (50-90%) de enfermos infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) experimenta alguna forma de malnutrición que puede atribuirse a alteraciones en la ingesta, absorción y metabolismo de los alimentos [C. Fields-Gardner, Nutr. Clin. Pract. 1995, 10 (5), 167-176]. La pérdida de peso severa está íntimamente ligada al incremento de la mortalidad en pacientes afectados por el síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Puede

estar relacionada, por otra parte, con algún tipo de patología gastrointestinal, anorexia e infecciones sistémicas y suele manifestarse, de forma general, en pacientes con la enfermedad avanzada y recuento de CD4+ inferior a 100 [D. P. Kotler, AIDS Res. Hum. Retroviruses 1994,10 (8), 931-934].

El síndrome caquéctico (wasting syndrome) que se manifiesta en la infección por VIH está caracterizado por la pérdida progresiva de peso y el aumento de la debilidad, frecuentemente asociados a fiebre y diarrea. Las causas de estas alteraciones son complejas y multifactoriales y parecen estar relacionadas con dietas inadecuadas, fenómenos de malabsorción, desequilibrios metabólicos y actividad de algunas citocinas, tales como el factor de necrosis tumoral (TNF), Il-1 (interleucina-1), Il-6 (interleucina-6) y a-IFN (alfa- interferón) [S. E. Weinroth et al., Infect. Agents Dis. 1995,4, 76-94]. P. Kelly et al. [Q. J. Med. 1996,89 (11), 831-837] han encontrado que la severidad del síndrome caquéctico en un grupo de varones africanos enfermos de SIDA está relacionada con una elevada actividad de citocinas, especialmente con altas concentraciones de sTNF55 y no con la presencia de candidiasis esofágica o alguna infección oportunista intestinal.

La relación entre el deterioro caquéctico y los bajos niveles séricos de testosterona ha sido puesta de manifiesto en varones con SIDA por A. S. Dobs et al. [J. Clin. Endocrinol.

Metab. 1996,81 (11), 108-112].

Entre los tratamientos del síndrome caquéctico en enfermos de SIDA figuran dietas especiales, testosterona, nandrolona [J.

Gold et al., 1996,10 (7), 745-752] y hormona de crecimiento [M.

Shambelan et al., Ann. Inter. Med. 1996,125 (11), 873-882].

La relación entre nutrición, infección por VIH y sistema inmune, ya resaltada por J. M. Hoyt et al. [J. Assoc. Nurses AIDS Care 1991,2 (3), 16-28], así como el papel de ciertas citocinas en el síndrome de deterioro en enfermos de SIDA evocada por C.

Grunfeld et al. [J. Nutr. 1992,122,749-753], pueden constituir la base de nuevos tratamientos basados en la utilización de

inmunomoduladores. Cabe destacar en este sentido el empleo de talidomida, fármaco con perfil inmunomodulador, en el tratamiento del síndrome caquéctico asociado a SIDA [G. Reyes- Terán et al., AIDS, 1996,10,1501-1507].

Por otra parte, actualmente se estima que el deterioro caquéctico aparece asociado, en una proporción elevada, al fallecimiento de enfermos de cancer. Esta proporción es considerada por algunos autores como del 30-70%. Muchos pacientes de cáncer mueren con una acusada pérdida de peso y un debilitamiento generalizado. Los pacientes oncológicos con caquexia asociada presentan un pronóstico pesimista ya que las posibilidades de tratamiento efectivo con quimioterapia están seriamente reducidas. Consecuentemente, cabría esperar que un tratamiento efectivo de la caquexia redundaría en un mejor estado general del paciente, una aplicación más eficaz de la quimioterapia, una mejor calidad de vida y, en definitiva, un mejor pronóstico de la enfermedad.

Sin embargo, los intentos para frenar o revertir el deterioro caquéctíco realizados hasta el momento han estado dirigidos a mejorar el aporte nutricional de los pacientes mediante dietas y pautas dietéticas especiales que no han proporcionado resultados positivos.

Publicaciones recientes empiezan a resaltar la relación entre niveles elevados de ciertas citocinas pro-inflamatorias y caquexia en cáncer, siendo de destacar el posible papel del factor de necrosis tumoral a (TNF-a), Il-1 (interleucina-1), Il- 6 (interleucina-6) e IFN-y (y-interferón) [P. Elliot et al., Drug & Market Development, 1998,9,26-28]. Esta disfunción del sistema inmune, acompañada de una reducción de la actividad de las células NK y de los niveles plasmáticos de cistina y glutamina, y de un exceso en la producción de urea, puesto de manifiesto en diferentes patologías, es de extrema importancia en la inducción y desencadenamiento de caquexia en pacientes oncológicos. Aunque el mecanismo por el que tales citocinas inducen caquexia no es conocido, contrarrestar su efecto

mediante el empleo de inmunomoduladores constituye uno de los enfoques más actuales para revertir la caquexia.

Existe, por tanto, la necesidad de desarrollar nuevos medios adecuados para frenar o revertir el síndrome o deterioro caquéctico en enfermos y pacientes que lo presentan con el fin de que puedan mejorar su calidad de vida y la eficacia del tratamiento al que están sometidos.

El helecho conocido durante años como Polypodium leucotomos ha sido utilizado históricamente por los nativos de Honduras, en forma de infusión de fronde y rizoma, para el tratamiento de tumores malignos, artritis reumatoide y psoriasis. Horvath et al. [Nature 1967,214,1256-1258] demostraron el efecto antitumoral in vitro e in vivo de un extracto acuoso de dicho helecho. Desde esa fecha, una fracción hidrosoluble obtenida de los frondes de Polypodium leucotomos ha sido profusamente estudiada, habiéndose descrito su perfil inmunomodulador/inmunosupresor y sus propiedades antioxidantes y antirradicales libres [M. D. Fernández et al., lst World Congress on Medicinal and Aromatic Plant for Human Welfare, Maastricht, 1992; J. Rayward et al., 2nd International Congress on Biological Response Modifiers, San Diego, EEUU; S. González et al., Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 1996,12,45].

La utilización de extractos de helechos del género Polypodium y más específicamente de Polypodium leucotomos como agentes antioxidantes y fotoprotectores ha sido reivindicada en la solicitud de patente PCT/US 96/01808 por M. Pathak et al.

(1996).

La presente invención proporciona una fracción hidrosoluble de los frondes de una variedad cultivada de Phlebodium decumanum, purificada y estandarizada, identificada como EXPLY-37, su obtención y su empleo en la elaboración de formulaciones útiles como complemento nutricional.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención está dirigida, aunque no limitada, a la

obtención de una fracción hidrosoluble de los frondes de una variedad cultivada de Phlebodium decumanum, purificada y estandarizada, identificada como EXPLY-37, así como a la obtención de formulaciones a base de EXPLY-37, y a su empleo como complemento nutricional en pacientes de SIDA y cáncer. Las formulaciones de la invención pueden utilizarse, además, durante la aplicación de fármacos antiretrovirales en pacientes de SIDA, y de tratamientos oncológicos convencionales (cirugía y/o radio y quimioterapia), para mejorar su eficacia y disminuir los efectos secundarios. Asimismo, tienen utilidad en la recuperación de los pacientes sometidos a dichos tratamientos.

1. Phlebodium decumanum Esta Polipodiácea, perteneciente al subgénero Phlebodium, dentro del género Polypodium, cultivada en la plantación del Lago Yojoa (Honduras), propiedad de HELSINT S. A. L. (España) y explotada por Helechos Internacional, Honduras, S. A. (HIH), ha sido considerada durante años como Polypodium leucotomos. Los estudios in situ del Prof. Cirile Nelson, Director del Herbario TEFH del Departamento de Biología de la Universidad Nacional Autónoma de Honduras (Tegucigalpa, Honduras), en 1992, han permitido reclasificar la planta como Phlebodium decumanum. A la misma conclusión han llegado el Prof. Finn Sandberg, de la Universidad de Uppsala (Suecia) en 1992 y el Prof. Antonio Molina, del Herbario Paul C. Standley y de la Escuela Agrícola Panamericana. La relación entre las diferentes especies de Polypodium ha sido recogida por M. Vasange en su Tesis Doctoral (Universidad de Uppsala, Suecia, 1996).

La citada plantación es la única existente en el mundo donde se cultivan los helechos Phlebodium decumanum junto con otras especies vegetales próximas como Polypodium leucotomos.

2. Fracciones hidrosolubles de Phlebodium decumanum EXPLY-37 es la marca registrada, propiedad de HELSINT S. A. L., y utilizada para designar al Extracto de Phlebodium

decumanum del Lago Yojoa. El n° 37 corresponde al procedimiento de extracción elegido entre los muchos ensayados para la obtención de dicho extracto a partir de los frondes de la planta y está basado en lo publicado previamente en GB 2.024.622-A, GB 2.075.834-A, ES P8902092 y recogido recientemente en WO 96/25139.

Los frondes esporulados de Phlebodium decumanum, secos y triturados, se deslipidan por tratamiento con éter de petróleo, cloruro de metileno o mezclas de éter de petróleo/cloruro de metileno, y se extraen, posteriormente, con una mezcla de metanol/agua. Un método alternativo consiste en la extracción previa con una mezcla de metanol/agua y deslipidación posterior con éter de petróleo, cloruro de metileno o mezclas de éter de petróleo/cloruro de metileno. La eliminación del metanol a presión reducida suministra la fracción hidrosoluble que se purifica por paso a través de una columna mixta cambiadora de iones, tratamiento con carbón activo, metabisulfito sódico y filtración. Dicha fracción hidrosoluble purificada se concentra hasta una composición constante y reproducible, lote a lote, dentro de ciertos limites. En el Ejemplo 1 se describe un procedimiento para la obtención de una fracción hidrosoluble de frondes de Phlebodium decumanum identificada como EXPLY-37 asi como una composición típica de dicha fracción [Tabla 1].

La marca EXPLY-37 ha sido solicitada por HELSINT S. A. L. para distinguir el extracto de Phlebodium decumanum cultivado en el Lago Yojoa y obtenido por este procedimiento y diferenciarlo de otros extractos que pudieran obtenerse de variedades silvestres de Phlebodium decumanum procedentes de otros orígenes.

A partir del rizoma se obtiene, igualmente, una fracción hidrosoluble (o extracto), purificada y estandarizada, por el siguiente procedimiento. El rizoma una vez desprovisto de vellosidades, lavado con una solución antiséptica y agua desionizada, se seca, tritura y extrae con una mezcla de metanol/agua. Después de la eliminación del metanol a presión

reducida, la fracción hidrosoluble turbia se trata con éter de petróleo, cloruro de metileno o mezclas de éter de petróleo/cloruro de metileno para eliminar lípidos residuales, se decolora con carbón activo, se trata con metabisulfito sódico, se filtra y se concentra hasta una composición constante y reproducible, lote a lote, dentro de ciertos limites. En el Ejemplo 2 se describe un procedimiento para obtener una fracción hidrosoluble, o extracto, de rizoma de Phlebodium decumanum así como una composición típica de dicha fracción [Tabla 2].

3. Formulaciones que contienen EXPLY-37 para uso por via oral La invención proporciona unas formulaciones que comprenden EXPLY-37, útiles como complemento nutricional. Las formulaciones pueden contener, además de EXPLY-37, rizoma y/o fracción hidrosoluble de rizoma. En una realización particular, las formulaciones son adecuadas para su administración oral, pueden ser sólidas o liquidas y pueden presentarse en forma de polvos, en forma de cápsulas de gelatina (duras o blandas) o en forma de jarabe.

3.1 Formulaciones sólidas a base de EXPLY-37 3.1. a) Mezcla de polvo de rizoma de Phlebodium decumanum y EXPLY-37 Puede obtenerse una mezcla de polvo de rizoma de Phlebodium decumanum y EXPLY-37 mediante un procedimiento que comprende las etapas de : -lavado del rizoma de Phlebodium decumanum sucesivamente con agua conteniendo cloro activo, agua desionizada, alcohol etílico y agua desionizada; -secado del rizoma; -trituración del rizoma y homogeneización hasta un tamaño de partícula adecuado; -incorporación de EXPLY-37; y -secado.

Si se desea, esta mezcla de EXPLY-37 y rizoma de

Phlebodium decumanum triturado y homogeneizado, en forma de polvo seco, se puede utilizar para rellenar cápsulas de gelatina dura que pueden contener cantidades de dicha mezcla sólida comprendidas entre 100 y 500 mg. La relación ponderal [rizoma triturado y homogeneizado] : EXPLY-37 presente en la mezcla, está comprendida entre 4 : 1 y 1 : 1.

3.1. b) Mezcla de polvo de rizoma de Phlebodium decumanum, EXPLY-37 y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum Esta mezcla puede obtenerse mediante un procedimiento análogo al resumido en 3.1. a) excepto que en la penúltima etapa se incorpora una mezcla con proporciones variables de EXPLY-37 y extracto de rizoma en proporciones variables (50 : 50 a 95 : 5).

Si se desea, esta mezcla de EXPLY-37, polvo de rizoma y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum, en forma de polvo seco, se puede utilizar para rellenar cápsulas de gelatina dura que pueden contener cantidades de dicha mezcla sólida comprendidas entre 100 y 500 mg. La relación ponderal [EXPLY-37 + extracto de rizoma] : [rizoma triturado y homogeneizado] presente en la mezcla está comprendida entre 4 : 1 y 1 : 1.

3.2 Formulaciones liquidas a base de EXPLY-37 Estas formulaciones pueden presentarse en forma de cápsulas de gelatina blanda y de jarabes.

3.2. a) Cápsulas de gelatina blanda que contienen EXPLY-37 La dilución de EXPLY-37 hasta una viscosidad adecuada permite el llenado de cápsulas de gelatina blanda por inyección y la obtención de cápsulas que pueden contener de 50 a 750 mg de EXPLY-37.

3.2. b) Cápsulas de gelatina blanda que contienen EXPLY-37 y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum Estas cápsulas pueden obtenerse mediante un procedimiento que comprende las siguientes etapas :

-preparación de una mezcla homogénea de EXPLY-37 y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum en proporciones variables dentro de un amplio intervalo (50 : 50 hasta 95 : 5); y -dilución adecuada de la mezcla para inyección en cápsulas de gelatina blanda con un contenido de extracto total [EXPLY-37 + extracto de rizoma] de 50 a 750 mg por cápsula.

3.2. c) Jarabe que contiene EXPLY-37 Se puede obtener un jarabe homogeneizando EXPLY-37 con los siguientes componentes : -extracto fluido de Sacharum officinarum, -extracto fluido de Glycyrrhiza glabra, y -ácido cítrico.

Las formulaciones preferidas pueden contener entre 50 y 500 mg de EXPLY-37 por gramo.

3.2. d) Jarabe que contiene EXPLY-37 y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum Se puede obtener un jarabe homogeneizando EXPLY-37 y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum en proporciones variables (50 : 50 hasta 95 : 5) con los siguientes componentes : -extracto fluido de Sacharum officinarum, -extracto fluido de Glycyrrhiza glabra, y ácido cítrico.

Las formulaciones preferidas son aquéllas que contienen entre 50 y 500 mg de extracto total [EXPLY-37 + extracto de rizoma] por gramo.

3.2. e) Jarabe que contiene EXPLY-37 Se puede obtener un jarabe mediante la incorporación de EXPLY-37 a una disolución acuosa que contiene como excipientes : -azúcar invertido, -sorbitol, y -propilenglicol.

Las formulaciones preferidas son aquéllas que contienen

entre 20 y 500 mg de EXPLY-37 por mililitro.

3.2. f) Jarabe que contiene EXPLY-37 y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum Se puede obtener un jarabe incorporando una mezcla que contiene proporciones variables de EXPLY-37 y extracto de rizoma de Phlebodium decumanum (50 : 50 a 95 : 5), a una disolución acuosa de los siguientes excipientes : -azúcar invertido, -sorbitol, y -propilenglicol.

Las formulaciones preferidas son aquéllas que contienen entre 20 y 500 mg de [EXPLY-37 + extracto de rizoma] por mililitro.

Las formulaciones a base de EXPLY-37 proporcionadas por esta invención son útiles como complemento nutricional de aplicación general. En particular, estas formulaciones son adecuadas en el tratamiento de la malnutrición, pérdida de peso, deterioro general y síndrome caquéctico en enfermos de SIDA [véanse los resultados obtenidos en enfermos de SIDA (Resultados Clínicos : I. Pacientes con infección avanzada por VIH)], así como durante la aplicación de fármacos antiretrovirales en pacientes de SIDA, y en el tratamiento de pacientes oncológicos que presentan debilitamiento general y deterioro caquéctico, tal como los pacientes oncológicos avanzados, ya que estas formulaciones frenan y revierten la caquexia ocasionando una mejoría general de los pacientes que permite la aplicación eficaz de los tratamientos apropiados. Las formulaciones a base de EXPLY-37 de esta invención también pueden utilizarse como adyuvante en tratamientos oncológicos convencionales (cirugía y/o radio-y quimioterapia) y en la recuperación de pacientes oncológicos que han estado sometidos a dichos tratamientos [véanse los resultados obtenidos en pacientes oncológicos (Resultados Clínicos : II. Tratamiento de pacientes oncológicos)].

Para el tratamiento del síndrome caquéctico en pacientes con enfermedad avanzada por VIH es recomendable la administración de las formulaciones proporcionadas por esta invención a dosis diarias comprendidas entre 1 y 5 gramos (g) expresadas como EXPLY-37. Dosis similares son adecuadas para el tratamiento del síndrome caquéctico en pacientes oncológicos y como adyuvante en tratamientos oncológicos convencionales y en la recuperación de pacientes oncológicos después de haber estado sometidos a dichos tratamientos.

Los siguientes ejemplos son ilustrativos de la invención y no deben ser considerados como limitativos de su alcance.

EJEMPLO 1 Obtención de EXPLY-37 a partir de frondes de Phlebodium decumanum Los frondes esporulados de Phlebodium decumanum se secan durante 1 semana en cámaras en las que se insufla aire a 40- 50°C. Una vez secas, las hojas se trituran hasta obtener una mezcla de pequeñas articulas y polvo fino. 100 kilogramos (kg) de hoja triturada y seca se extraen 3 veces con 400 litros (L) de una mezcla metanol/agua desionizada (7 : 3) a la temperatura de 40°C durante 12 horas. Los extractos hidrometanólicos se reúnen y concentran a presión reducida a 40°C hasta eliminación completa de metanol. Se obtiene una suspensión acuosa fina que se trata 3 veces con un volumen igual de un disolvente apolar, preferentemente éter de petróleo o mezclas de éter de petróleo y diclorometano, para eliminar lípidos residuales. La fracción hidrosoluble se purifica mediante paso por una resina cambiadora de iones, posterior tratamiento con metabisulfito sódico y filtración. La concentración final a presión reducida hasta un contenido en agua del 20% suministra entre un 5 y un 10% de EXPLY-37, caracterizado por una composición constante y reproducible, lote a lote, dentro de ciertos limites (Tabla 1).

Tabla 1 Composición de la fracción hidrosoluble de fronde de Phlebodium decumanum purificada y estandarizada (EXPLY-37) % Contenido total de sólidos 79,5-81,5 Cenizas 10-12 N total 0,7-0,9 Proteínas totales 4,9-5,9 Lípidos < 0,2 Hidratos de carbono 60,5-64,5 pH 5-5,1 Indice de refracción 1,4-1,5 Máximos de absorción a 235-237 y 274-284 nm Absorbancia a 290 nm 2,5-5 EJEMPLO 2 Obtención de extracto de rizoma de Phlebodium decumanum 100 kg de rizoma húmedo de Phlebodium decumanum, recién recolectado de la plantación, se tratan a 40°C durante 10 horas con : a) 400 L de metanol puro b) 400 L de metanol/agua (8 : 2) c) 400 L de metanol/agua (7 : 3) Se combinan los extractos y se evapora la mezcla a 40°C y 25 mm hasta eliminación completa del metanol. La solución acuosa turbia se extrae con un volumen igual de cloruro de metileno o mezclas de cloruro de metileno y éter de petróleo (dos veces).

La fase acuosa se trata, posteriormente, con carbón activo hasta una absorbancia de 0,5 a 1,5 a 290 nanometros (nm) y se concentra a 40°C y 25 mm de presión hasta una concentración final de sólidos del 80%. Se obtienen entre 1 y 3 kg de extracto de rizoma purificado y estandarizado, de composición constante y reproducible, lote a lote, dentro de unos limites (Tabla 2).

Tabla 2 Composición de la fracción hidrosoluble de rizoma de Phlebodium decumanum purificada y estandarizada % Contenido total de sólidos 80-81 Cenizas 10-12 N total 0,6-0,7 Proteínas totales 4-4,5 Lípidos 0,5 Hidratos de carbono 65-66 pH 5-5,1 Indice de refracción 1,4-1,5 Análisis UV, máximos de absorción a 237 y 272 nm.

Absorbancia a 290 nm 0,5-1,5 EJEMPLO 3 Cápsulas de EXPLY-37 y rizoma 50 kg de rizomas frescos de Phlebodium decumanum desprovistos de vellosidades se sumergen, sucesivamente, en disolución acuosa diluida de cloro activo, agua desionizada, etanol absoluto y agua desionizada estéril. Se secan a continuación en un secador de lecho fluido a 40-50°C durante 2 horas. Se muelen y tamizan hasta obtener un polvo fino.

A 22,5 kg de rizoma triturado y tamizado se incorporan, paulatinamente, en una amasadora de acero inoxidable de 100 L de capacidad, 7,5 kg de EXPLY-37, y se mezcla hasta obtención de una masa homogénea que se seca en estufa de bandejas a una temperatura de 40-50°C durante 24 horas. El polvo se tamiza por una malla de 18 mesh. Con este polvo se preparan cápsulas que contienen 300 mg.

EJEMPLO 4 Cápsulas enriquecidas de EXPLY-37 y rizoma Siguiendo un procedimiento análogo al descrito en el

Ejemplo 3, se prepara la mezcla final con 25,5 kg de rizoma triturado, tamizado y seco, y 18,5 kg de EXPLY-37. Una vez seco, se preparan cápsulas de gelatina dura conteniendo 440 mg de polvo.

EJEMPLO 5 Cápsulas de EXPLY-37, rizoma y extracto de rizoma Mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3, se prepara una mezcla final que contiene 26,8 kg de rizoma triturado, tamizado y seco, 10 kg de EXPLY-37 y 3,2 kg de extracto de rizoma. Se preparan cápsulas con 400 mg de polvo seco. Las proporciones relativas de EXPLY-37 y extracto de rizoma pueden variar entre amplios limites (50 : 50 a 95 : 5).

EJEMPLO 6 Jarabe de EXPLY-37 En un reactor/mezclador de acero inoxidable provisto de un agitador de paletas a velocidad de agitación de 20 revoluciones por minuto (rpm) se prepara una mezcla homogénea de 7,8 kg de extracto fluido de Sacharum officinarum y 190 g de extracto fluido de Glycyrrhiza glabra (regaliz). A la masa homogénea se incorporan 10 g de ácido cítrico. Se añaden, finalmente, con agitación y a 37°C, 2 kg de EXPLY-37 hasta homogeneización. Se obtiene un jarabe que contiene 200 mg de EXPLY-37 por gramo.

Utilizando distintas cantidades de EXPLY-37 y haciendo las correcciones ponderales correspondientes de excipientes, se obtienen jarabes de concentraciones en EXPLY-37 de 50 a 500 mg por gramo.

EJEMPLO 7 Jarabe de EXPLY-37 y extracto de rizoma Se siguen los pasos descritos en el Ejemplo 6. Se agregan al final 1 kg de EXPLY-37 y 1 kg de extracto de rizoma, obteniéndose un jarabe con una concentración total de extracto de 200 mg/g.

Se pueden obtener, igualmente, jarabes con una composición de 50 a 500 mg de extracto total por gramo, siendo el extracto total la mezcla en proporciones variables (50 : 50 a 95 : 5) de EXPLY-37 y extracto de rizoma.

EJEMPLO 8 Jarabe de EXPLY-37 y extracto de rizoma En un reactor de vidrio provisto de agitador de ancla y velocidad variable, se agregan sucesivamente sobre 2.450 mL de agua desionizada, 5.000 g de azúcar invertido, 2.500 g de sorbitol y 50 g de propilenglicol. Cuando la mezcla se ha hecho homogénea, se agregan, con agitación suave y a temperatura de 30 a 40°C, 2,5 kg de EXPLY-37, ó 2 kg de EXPLY-37 y 0,5 kg de extracto de rizoma.

Concentración del jarabe : 200 mg/mL, expresado en EXPLY-37 o en EXPLY-37 + extracto de rizoma.

Siguiendo la misma técnica, se han preparado jarabes que contienen un amplio intervalo de concentraciones (20 a 500 mg/ml).

RESULTADOS CLÍNICOS I. Pacientes con infección avanzada por VIH El número de enfermos infectados con VIH está alcanzando niveles alarmantes en países de Centroamérica y el Caribe. El caso de Honduras es conocido por el número de pacientes que se estima en fases avanzadas de la infección, la baja edad de muchos de estos enfermos y la falta de recursos para el diagnóstico, prevención y tratamiento de la enfermedad con agentes anti-retrovirales.

Pacientes hondurenos, conocedores de la existencia de la plantación del Lago Yojoa han venido solicitando algún remedio compasivo para mejorar su estado. HIH decidió preparar diversas formulaciones, ejemplos de las cuales se incluyen en esta solicitud de patente, y administrarlas como complemento nutricional, dietético y energizante a aquellos enfermos que lo

solicitaban.

1. Exploración de dosis en pacientes aislados Los primeros resultados se obtuvieron con cinco pacientes que se encontraban en estado de deterioro muy avanzado, y a los que no se aplicó ningún criterio de inclusión. Estos pacientes recibieron, como suplemento a su dieta normal, jarabe de EXPLY- 37 preparado por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 8 y conteniendo únicamente EXPLY-37, a dosis variables comprendidas entre 1 y 3 g/día, repartidas en 3 tomas. Al cabo de un mes se unificaron todas las dosis a 3 g/día. Los resultados se resumen en la Tabla 3.

Tabla 3 Resultados en pacientes aislados Paciente Edad/Sexo Apetito Meses de Peso corporal. tratamiento Calidad de vida 1 52/V 5+ 9 Recuperación de su peso normal. Reanudación de su actividad profesional al 2° mes 2 21/M 4+ 5 Recuperación de su peso normal y de la calidad de vida 3 22/V 4+ 5 Recuperación de su peso normal y de la calidad de vida 4 27/V 3+ 4 Recuperación del 60% de la pérdida de peso. Reanudación de su actividad profesional al primer mes 5* 20/V * Fallecido por neumonía el dia de inicio del tratamiento.

Escala arbitraria de apetito : 1+ a 5+.

2. Grupos de pacientes controlados A un primer grupo de 6 pacientes se aplicó un protocolo de estudio simple de acuerdo con los siguientes criterios : Edad : 18-35 años Número de pacientes : 10, ambos sexos Criterios de inclusión : Infección avanzada por VIH Ausencia de infección oportunista Sin tratamiento con fármacos anti-retrovirales Recuento de CD4+ no inferior a 400 Pérdida de peso corporal en los 6 meses previos, no inferior al 10%.

Parámetros a evaluar : Recuperación del apetito Evolución del peso corporal Calidad de vida Este grupo de pacientes se encuentra en su segundo mes de observación y está recibiendo como aporte dietético 3 dosis/día de 1 gramo de EXPLY-37 en forma de jarabe preparado por el procedimiento descrito en el Ejemplo 8. Los resultados se resumen en la Tabla 4.

Tabla 4 Resultados en grupos de pacientes controlados

Paciente Edad/Sexo Apetito Meses de Peso corporal. tratamiento Calidad de vida 1 32/V 3+ 2 Recuperación progresiva de peso. Mejora de la calidad de vida. 2 33/M 3+ 2 Recuperación progresiva de peso y de la calidad de vida. 3 26/M 3+ 2 Recuperación progresiva de peso y de la calidad de vida. 4 27/V 4+ 2 Recuperación progresiva de peso. Mejora de la calidad de vida. 5* 33/M 3+ 2 Recuperación progresiva de peso. Mejora de la calidad de vida.

A partir del paciente n° 6 se han flexibilizado los criterios de inclusión al encontrarse dificultades en la selección de pacientes con un recuento de CD4+ no inferior a 400 : la mayoría de los enfermos examinados tenía dicha cifra entre 100 y 200 padeciendo además infecciones respiratorias asociadas.

Un segundo grupo de pacientes, sometido a los nuevos criterios de inclusión más flexibles está siendo tratado con cápsulas de EXPLY-37 y rizoma, análogas a las descritas en el Ejemplo 4, a dosis de 6-12 cápsulas/dia. Los primeros 4 pacientes que se encuentran en su tercera semana de tratamiento, han experimentado de forma general una mejoría similar a la ya

observada en los grupos previos : recuperación inmediata del apetito, recuperación regular y progresiva del peso corporal, mejora de la calidad de vida y reanudación de las actividades personales y profesionales en aquellos casos en los que se había producido un abandono de las mismas.

II. Tratamiento de pacientes oncológicos El uso continuado de EXPLY-37, en distintas formulaciones, en pacientes oncológicos con diferentes tipos de tumores y en diferentes estadios, ya sea en el curso de tratamientos oncológicos convencionales o posteriormente a la aplicación de dichos tratamientos, ha permitido demostrar la eficacia de tales formulaciones en : -la reversión de la caquexia y recuperación de la calidad de vida en enfermos muy deteriorados; -la aplicación de nuevas pautas de quimioterapia en los pacientes recuperados ; -el mantenimiento del buen estado general y la calidad de vida de dichos enfermos; -la disminución de los efectos secundarios en pacientes sometidos a quimioterapia; y -la recuperación del estado general y la calidad de vida tras la aplicación de tratamientos oncológicos convencionales.

Existe ya una experiencia acumulada de varios años desde los sorprendentes resultados obtenidos con el primer paciente.

La Tabla 5 resume algunos casos representativos en los que la evolución positiva del estado del paciente va asociada al uso continuado de EXPLY-37.

Tabla 5<BR> Resultados en pacientes oncológicos Pacient Sexo/Eda Patología/Fecha Tratamiento EXPLY-37 Resultados e d 1 V/60 Neo de Cirugía 1-3 g/día desde . Prfecta colon/01.94 Quimioterapia 01.94 10s c@ (QT) en 1994 Alternativamente .Recuper formulaciones c@ Ejemplos 5, 6, 7 y 8 .Excelen 2 V/58 Neo de Cirugía 2 g/día desde 02.97 . Recupera colon/02.97 QT Formulación Ejemplo de la ca 6 . Re-inici deportiva 3 H/49 . Carcinoma de . Mastectomía 2 g/día desde 09.97 . Buena mama II/10.93 radical Formulaciones . Buena c . Metástasis . Cirugía Ejemplos 4 y 5 . Evoluci@ hepática/10.95 . QT (en las I . Metástasis curso) ásea/09.97 4 H/51 . Carcinoma de . Mastectomía 1-2 g/día desde . Recup mama y radical 01.97 c@ Formulación Ejemplo . Metástasis . Ciclos de . Excelent hepática/07.95 QT en 1996 la cal: . No s mel Pacient Sexo/Eda Patología/Fecha Tratamiento EXPLY-37 Resultados e d 5 V/52 Neo vejiga . Resección 1-2 g/día desde . E@ III/10.95 transuretral 10.96 sorprend Formulaciones favora .Instilacione Ejemplos 4, 6 y 7 . s mitomicina . Mapeo C, negativos radioterapia, 12.9 BCG (1996- . Excelen 1997) 6 V/72 Carcinoma QT iniciada y 1-2 g/día desde . Mejoría renal/10.97 suspendida 12.97 del est por anuria Formulación Ejemplo . Posible @ 6 7 H/38 Carcinoma renal Cirugía 2 g/día desde 04.97 . Recupera@ y metästasis QT Formulaciones . Buena @ ósea/02.98 Ejemplos 3 y 4 . Buena c@ 8 V/62 Leucemia QT 3 g/día desde 04.98 . Recupera mieloblástica Forumlación Ejemplo aguda/01.98 6 . Revers . Mejoría del est