本发明属于医药技术领域， 具体涉及一种常春藤皂苷元衍生物及其制备方 法和应 用。

背景技术

常春藤皂苷元是中药材中常见的一种苷元， 主要见于续断、 预知子、 木通、 金银花 等。 常春藤皂苷元为白色粉末， 极性小， 微溶于甲醇、 乙醇， 难溶于水。 有报道常春藤 皂苷元具有蛋白酪氨酸磷酸酶 PTP1B抑制剂的作用， 可形成抗糖尿病药物及保健品， 且能为预防、 诊断、 检测、 保护、 治疗和研究抑郁症及其直接相关疾病提供了一 种新的 药物来源。

但是由于常春藤皂苷元几乎不溶水， 乙醇中溶性解度也不高， 研究资料显示本品生 物利用度也较低， 日用剂量大， 本发明通过改变结构， 改变或提高生物活性。

中国专利 CN200810032325.2公开了一种常春藤皂苷元及其衍� �物用于制备抗抑郁 产品的用途，但其所述的常春藤皂苷元衍生物 是指常春藤皂苷元盐类衍生物（指钠盐或 钾盐）， 其制备方法是将常春藤皂苷元溶解在乙醇溶液 中， 与相应的碱溶液反应， 在进 行重结晶即得其盐。 并通过体外活性试验证明在抗抑郁方面的作用 。

目前以常春藤皂苷元为原料半合成得到的衍生 物目前未见报道，及其衍生物的盐目 前也未见报道。 通过制备常春藤皂苷元新衍生物， 改变理化性质、 活性中心， 从而改变 生物活性， 改善吸收、 代谢， 从而提高药效是非常重要的。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种常春藤皂苷元 衍生物。

本发明的另一目的在于提供常春藤皂苷元衍生 物的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种常春藤皂苷元衍生物， 具有如下通式：

其中：

Ri和 R ₂ 相同或不同，彼此独立的表示为 -OR' ， R' 为 -COCH ₃ 、 -CO(CH ₂ ) _n CH ₃ 、 -S0 ₃ H、 -CO(CH ₂ ) _n COOH、 -邻磺酸苯甲酰基、 -间磺酸苯甲酰基、 -对磺酸苯甲酰基、 -对甲苯磺 酰基、 -邻羧基苯甲酰基、 -间羧基苯甲酰基、 -对羧基苯甲酰基、 -马来酰基、 -富马酰基、 -甲磺酰基或 H， 条件是两者不能同时为 H， 其中 _n =l-3 _;

为11、 Na、 K或 NH ₃ ;

当 、 R ₂ 中的 R ' 中含有羧基时， 该羧基可进一步与碱反应形成一个或多个盐。

优选地， R' 为 -COCH ₃ 或 -CO(CH ₂ ) ₂ COOH。

本发明所述的常春藤皂苷元衍生物的制备方法 是以常春藤皂苷元为原料，通过酰化 反应、 酯化反应或酯交换反应得到， 具体方法如下：

酰化反应：

称取适量常春藤皂苷元， 加入 20~50倍量溶剂， 0.05~15倍量催化剂， 搅拌下滴加 含有酰卤的甲苯溶液， 50-7CTC反应 5-10小时， 加水反应 1-3小时， 分去水层， 减压蒸 除溶剂， 加入 10-25倍量 95%乙醇， 搅拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减压回收乙 醇， 水洗， 得到常春藤皂苷元衍生物。

酯化反应：

称取适量酸酐或羧酸， 加入 20~50倍量溶剂， 0.05~15倍量催化剂， 搅拌加热， 加 入 0.1~1倍量常春藤皂苷元， 回流反应 5~10h， 减压蒸除溶剂， 加入 10-25倍量 95%乙 醇， 搅拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减压回收乙醇， 水洗， 得到常春藤皂苷元衍 生物。

酯交换反应：

称取适量羧酸酯， 加入 0.1~1倍量常春藤皂苷元， 加入 20~50倍量溶剂， 0.05 15 倍量催化剂， 搅拌加热， 回流反应 5~10h， 加入 10%碳酸钠溶液反应， 分去水层， 有机 层减压蒸除溶剂， 加入 10-25倍量 95%乙醇， 搅拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减 压回收乙醇， 水洗， 得到常春藤皂苷元衍生物。

上述制备方法中所述溶剂为是吡啶或甲苯；所 述催化剂在酰化反应中为吡啶或三乙 胺， 在酯化或酯交换反应中为浓硫酸或对甲苯磺酸 。

本发明所述的常春藤皂苷元可从中药材中采用 公知的制备方法提取得到或直接从 市面购买得到。

本发明是以常春藤皂苷元为原料， 通过酰化反应、酯化反应或酯交换反应得到常 春 藤皂苷元衍生物， 该衍生物可与碱反应进一步得到其盐。该方法 由常春藤皂苷元半合成 得到的常春藤皂苷元衍生物的产率和纯度都高 ， 可达到 95%以上， 制备工艺简单， 原料 转化率高， 适于工业化生产， 且容易推广应用。

本发明所述的常春藤皂苷元衍生物的盐可以为 单盐、复盐或多盐。可通过以下方法 制备得到： 将常春藤皂苷元衍生物用 95%乙醇溶解， 在 -10~30°C加入 1-10%碱溶液调节 PH至 9-11， 冷却析出固体， 即得到常春藤皂苷元衍生物的盐。 所述常春藤皂苷元衍生 物的盐可以为常春藤皂苷元衍生物钠盐、常春 藤皂苷元衍生物钾盐或常春藤皂苷元衍生 物铵盐。优选常春藤皂苷元衍生物的盐为常春 藤皂苷元衍生物钠盐或常春藤皂苷元衍生 物钾盐。

本发明还提出了常春藤皂苷元衍生物或其盐在 制备抗抑郁药物中的应用。是以常春 藤皂苷元衍生物或其盐原料为主要活性成分， 加入药学可接受的载体， 通过本领域公知 的常用的生产方法制成药学可接受的剂型； 所述的药学可接受载体包括微晶纤维素、羟 丙甲基纤维素、 明胶、 淀粉、 糊精、 硬脂酸镁、 乳糖、 葡萄糖、 滑石粉、 氯化钠、 磷酸 缓冲盐水、甘油、 乙醇等； 所述的剂型可以是片剂、胶囊、颗粒剂、 口服液、注射剂等。 本发明药物的给药量可根据用药途径、 患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严 重 程度等变化， 其日剂量可以为 100-600mg较为合适。

本发明进一步对常春藤皂苷元衍生物或其盐的 药理活性进行了验证， 实验表明， 常 春藤皂苷元衍生物或其盐的活性高于苷元及苷 元的盐， 且其药理活性有了很明显的提 高， 对抑郁症具有明显的治疗作用， 其药理作用显著， 性质稳定， 可用于制备抗抑郁 的药物。

具体实施方式 下面通过具体实施方式来进一步说明本发明， 以下实施例为本发明具体的实施方 式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实 质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在 本发明的保护范围之内。

实施例 1 常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯的制备

称取琥珀酸酐 28克投入三颈瓶中， 加入甲苯 1000毫升， 三乙胺 300毫升， 搅拌加热， 待温度接近回流时， 加入常春藤皂苷元 22克， 回流反应 8小时， 减压蒸除溶剂， 加入 95%乙醇 450毫升， 搅拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减压回收乙醇， 水洗， 得到 常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯 31克。

实施例 2 常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯的制备

称取常春藤皂苷元 22克投入三颈瓶中，加入吡啶 600毫升， 搅拌下滴加含有 40克琥珀 酰氯的甲苯溶液， 60°C反应 8小时， 加水反应 2小时， 分去水层， 减压蒸除溶剂， 加入 95%乙醇 450毫升， 搅拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减压回收乙醇， 水洗， 得到 常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯 32克。

实施例 3 常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯的制备

称取琥珀酸 34克、 常春藤皂苷元 22克投入三颈瓶中， 加入甲苯 1000毫升， 浓硫酸 12 毫升， 搅拌加热， 待温度接近回流时， 加入， 回流反应 8 小时， 减压蒸除溶剂， 加入 95%乙醇 450毫升， 搅拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减压回收乙醇， 水洗， 得到 常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯 32克。

实施例 4 常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯的制备

称取琥珀酸二甲酯 40克、 常春藤皂苷元 22克、对甲苯磺酸 2克投入三颈瓶中， 加入甲 苯 1000毫升， 搅拌加热， 回流反应 12小时， 加入 10%碳酸钠溶液 200毫升反应 30分 钟， 分去水层， 有机层减压蒸除溶剂， 加入 95%乙醇 450毫升， 搅拌溶解， 用活性炭脱 色， 趁热过滤， 减压回收乙醇， 水洗， 得到常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯 25克。 实施例 5 常春藤皂苷元 -3， 23-乙酸酯的制备

称取乙酸氯 25克投入三颈瓶中， 加入甲苯 1000毫升， 三乙胺 300毫升， 加入常春藤皂 苷元 22克， 搅拌加热， 回流反应 5小时， 减压蒸除溶剂， 加入 95%乙醇 450毫升， 搅 拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减压回收乙醇， 水洗， 得到常春藤皂苷元 -3， 23- 乙酸酯 28克。 实施例 6 常存藤皂苷元 -3， 23-乙酸酯的制备

称¾乙酸 ψ | 1 8克、 常春藤皂苷 22克投入三颈瓶中， 加入甲苯 1000毫升， 对甲苯 克. 搅拌加热， 回流反应 12小时， 减压蒸除溶剂， 加入 95%乙醇 450毫升， 搅 拌溶解， 用活性炭脱色， 趁热过滤， 减压回收乙醇， 水洗， 得到常春藤皂苷元 -3， 23- 乙酸酯 21克。

实施例 7 制备常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯的二钠盐

按实施例 1制得常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯， 称取 10g常春藤皂苷元 -3， 23-二琥 珀酸酯溶于 100ml无水乙醇中， 在 10°C左右加入 3%氢氧化钠溶液调节 PH约为 11， 冷 却析出固体， 过滤后用无水乙醇洗， 晾干即得常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯的二钠 j

常 藤 苷/[>3， 23-二珀酸酯二钠盐的结构确认

化学结构式如下：

ESI-MS(m/z):738[M ⁺ +Na] ⁺ ；

Ή NMR(400MH _Z ,CDC1 ₃ ) δ： 0.99 ( s,6H ) , 1.04 (s,9H) , 1.30 (s,3H) , 1.38—1.61 (m,16H,CH ₂ ,CH), 1.80 (q,J=7.1 , 2H), 2.01—2.04 (m,4H,CH ₂ ), 2.43 (t,J=6.0 H), 2.53 (U :7.1 2H), 2.73 (t,J=7.1 2H)， 2.83 (t，J=7.1 4H), 3.89 (t, J=7.0 H), 4.13 (s,2H), 5.29 (t,J=6.2 H);

¹ C NMR( 100MHz,CDCl ₃ ) δ： 33.8(C-1), 24.1(C-2), 75.3(C-3), 40.7(C-4)， 53.4(C-5), 1 8.3(C-6). 33. KC-7), 39.9(C-8). 47.7(C-9), 37.6(C-10), 23.8(C-11), 122.4(C-12), ! 43.7(C- 13 ). 41 .4(C- 14). 29.1 (C- 1 5). 46.6(C-17), 41.4(C-18), 46.6(C-19),

5

替换页 （细则第 26条） 30.7(C-20), 34.2(C-21), 32.5(C-22), 66.0(C-23), 21.9(C-24), 15.9(C-25), 17.1(C-26), 25.9(C-27), 184.4(C-28), 26.9(C-29,C-30), 171.8(C-31,C-35), 31.0(C-32,C-36), 34.4(C-33,C-37), 178.0(C-34,C-38)。

实施例 8

按 1000个制剂单位投料计， 取常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯 60g， 微晶纤维素 80g， 淀粉 40 g， 羧甲基淀粉钠 15g， 微粉硅胶 5g， 共制成 1000粒胶囊， 规格： 每粒含主药 60mg， 理论重量 200mg。

上述原辅料分别先过 80 目筛， 按处方量称取常春藤皂苷元衍生物、 微晶纤维素淀粉， 羧甲基淀粉钠， 混合均匀， 用 80%药用乙醇制软材， 过 24目筛制粒， 60°C条件下干燥 1 小时， 20 目筛整粒， 加入微粉硅胶， 填充胶囊， 得常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯 胶囊 950粒。

实施例 9

按 1000个制剂单位投料计， 取常春藤皂苷元 -3， 23-二琥珀酸酯 180g， 羟丙甲基纤维素 120g， 微晶纤维素 50g， 聚乙二醇 6000 6g， 硬脂酸镁 4g， 共制成 1000片， 规格： 每 片含主药 300mg， 理论重量 360mg。

上述原辅料分别先过 100目筛， 按处方量称取主药、 羟丙甲基纤维素、 微晶纤维素、 聚 乙二醇， 混合均匀， 用 95%药用乙醇制软材， 过 24目筛制粒， 60°C条件下干燥 4小时， 20目筛整粒，加入硬脂酸镁，压片，得常春藤� ��苷元 -3， 23-二琥珀酸酯缓释片 912片。 实施例 10 常春藤皂苷元衍生物对两种抑郁模型小鼠治疗 作用的实验

1、 试验材料

1.1 实验动物

昆明种小鼠 (6周龄， 体重 20士 2g)， 雄性， 由广东省医学实验动物中心提供 (许可证号： SCXK (粤) 2003-2002， 粤监证字 2008A006)。 动物饲养条件： 温度 （23°C士 2°C )。 购回 后适应性饲养 3d后进行实验。

1.2 药品与试剂

受试药物： 常春藤皂苷元衍生物 (HEDS), 由广州博济医药生物股份技术有限公司制作 提供， 批号： 20100413; 常春藤皂苷元 (HED)， 由广州博济医药生物股份技术有限公司 制作提供， 批号： 20101031 ; 常春藤皂苷元钠 (HEDN) ， 由广州博济医药生物股份技术 有限公司制作提供， 批号： 20100901。 西药对照药： 盐酸阿米替林 （来源： 常州四药制药有限公司， 规格： 25mg/片， 批号：

201004083)。

中药对照药： 舒肝解郁胶囊 （来源： 成都康弘药业集团股份有限公司； 批号： 100602; 规格： 0.36g/粒 )

造模药物： 利血平注射液 （来源:广东邦民制药厂有限公司， 规格 lmg * lml-l， 批号 090717

1.3 实验仪器

电子体温计（批号： 00196505 厂家： 北京市婴之侣科技发展中心）； 多功能小鼠自主活 动仪、 小鼠游泳装置 （自制）； 秒表、 天平、 灌胃针、 不透明水缸。

利血平化小鼠模型

2.1 实验分组及给药

小鼠按体重随机分为 8组， 每组 10只， 按下列方法给药， 给药体积均为 0.2ml/10g， 在 最后一次给药 1 h后， 每小鼠腹腔注射利血平 2.5mg/kg。

正常组： 正常喂养， 不给任何药物。

模型组： 灌胃给予蒸馏水， 每日 1次， 连续给予 7d。

西药对照组： 灌胃给予预先配制的盐酸阿米替林溶液， 按 10mg/kg 剂量给药， 每日 1 次， 连续给药 7d。

中成药对照组： 灌胃给予预先配制好的中药溶液， 按 296mg/kg剂量给药， 每日 1次， 连续给药 7d。

HEDS高剂量组： 灌胃给予 HEDS药液， 剂量为 60mg/kg， 每日 1次， 连续给药 7d。 HEDS低剂量组： 灌胃给予 HEDS药液， 剂量为 30mg/kg， 每日 1次， 连续给药 7d。 HEDN组： 灌胃给予 HEDN药液， 剂量为 60mg/kg， 每日 1次， 连续给药 7d。

HED组： 灌胃给予 HED药液， 剂量为 60mg/kg， 每日 1次， 连续给药 7d。

2.2 指标测定及检测方法

2.2.1 肛温的检测 腹腔注射利血平立即及 4h后， 将电子体温计探头插入小鼠肛门内， 深度以温度计探头完全进入肛门为准， 维持至少 10s， 记录各组小鼠肛温， 比较给药组 及对照组肛温变化的差异， 结果见表 1。

2.2.2运动不能的观测 腹腔注射利血平 lh后， 将小鼠放入直径为 7.5cm的圆圈内观察 15s, 计算各组小鼠出圈率， 结果见表 1。 2.2.3 眼睑下垂的观测 腹腔注射利血平 lh后， 观察每组小鼠眼睑闭合一半以上的动物 个数， 结果见表 1。

2.2.4 小鼠肛温下降值以均数士标准差^ ± s))表示， 计量资料进行完全随机设计的单因 素方差分析， 采用统计软件 SPSS13.0进行统计学分析。 P<0.05为有统计学意义。

2.3 结果

由表 1可以看出， 各给药组小鼠的肛温下降值与模型组的差异均 有统计学意义， 其中西 药对照组和 HEDS高剂量组差别有非常显著意义。

表 1 各组小鼠指标的观测 （ ± s， n=10)

注： 与模型组比较， * Ρ<0.05， ** Ρ<0.01。

3 、 强迫游泳应激抑郁模型

3.1 实验分组及给药

小鼠按体重随机分为 8组， 每组 10只， 按下列方法给药， 给药体积均为 0.4ml/10g， 正常组： 正常喂养， 不给任何药物。

模型组： 灌胃给予蒸馏水， 每日 1次， 连续给予 14d。

西药对照组： 灌胃给予预先配制的盐酸阿米替林溶液， 按 10mg/kg 剂量给药， 每日 1 次， 连续给药 14d。

中成药对照组： 灌胃给予预先配制好的中药溶液， 按 296mg/kg剂量给药， 每日 1次， 连续给药 14d。

HEDS高剂量组： 灌胃给予 HEDS药液， 剂量为 60mg/kg， 每日 1次， 连续给药 14d。

HEDS低剂量组： 灌胃给予 HEDS药液， 剂量为 30mg/kg， 每日 1次， 连续给药 14d。

HEDN组： 灌胃给予 HEDN药液， 剂量为 60mg/kg， 每日 1次， 连续给药 14d。 Hi-D fR: 灌胃给予 HED药液， 剂量为 60mg/kg， 每日 1次， 连续给药 14d。

3.2 指标测定及检测方法

3.2.1 Θ 活动测试 各组在最后一次给药 lh 后， 将小鼠放人自主活动仪， 立即测定 lOmin内小鼠的自主活动情况。 结果见表 2 _;

3.2.2 小 强迫游泳 除正常组外， 各组在最后一次给药 lh后， 将小鼠放入高 20cm、 h Vv. 10cm, 水深 10cm, 水温 20°C左右的不透明玻璃缸内， 每天 8： 00-10： 00时间 段强边游泳 5mm， 强迫游泳持续 14d。 正常组小鼠除了必要的鼠笼清洁外，不做任何 处 理。 在第 ld、 7d、 14d观测各组游泳不动时间 （小鼠游泳 6 min， 累计后 4min内的不 动时间）。 测试结果见表 3。

3.3 数据统计和处理

各组数据均以均数土标准差 (土 s))表示，计量资料进行完全随机设计的单因素 方差分析， 采用统计软件 SPSS13.0进行统计学分析。 P<0.05为有统计学意义。

3.4 实验结果

山 2和表 3所示， 各组统计指标与正常组相比， 差异均无统计学意义。

小 ί Π 活动情况 （ 土 s， η=10)

Res.T Mov.S Mov.F. 总路程

组别 平均速度

(s). (s). (s) (mm) 正常组 432.00士 67.24 133.22±42.50 34.68±26.26 12957.15±4720.42 21.60±7.87 模型组 392.30±48.61 160.54±30.87 47.14±20.57 15700.4±3499.26 26.17±5.83

429.08±71.47 135.28±49.52 35.58±22.76 13385.54±5039.27 22.31±8.40 中药组 441.74±64.62 122.36±44.78 35.86±21.04 12612.81±4222.15 21.02±7.04

HEDS高 453.42土 44.53 116.80±32.19 29.72±13.61 11709.89±3112.78 19.52±5.19

IIHDS低 438.32±47.37 126.6士 35.98 35±13.46 12765.97±2936.36 21.28±4.90 iii:i) ι 439.5士 62.77 122.90±42.75 37.56±23.80 12917.77±4314.98 21.53±7.19

\\i ^: .D 'ί\\. 446.64士 57.32 123.56±48.87 36.56±22.33 12637.81±4253.27 21.48±8.02 注： 与正常组相比， 各组差异均无统计学意义， 提示 HEDS对中枢无兴奋作用。

表 3 强迫游泳小鼠不动时间 （S ±s， n=10) 单位 （秒）

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替换页 （细则第 26条) 组别 IS: 游泳不动时间

^、 第 1天 第 7天 第 14天 止常组 150.3±37.42 143.7±38.21* 113.5±2.69*

组 】24.7土 27.24 178.7±26.24 173.3 ±23.85

中 131.8±25.25 169.6±30.63 144.4±41.73

123.9±29.14 154.4±37.95 135.6±28.68*

i38.4±22.20 160.4±21.61 135.3±35.67*

.os！: Lf'jiii ll. Π4.8±35.69 154.5 ±32.26 138.7±25,43*

HEDN组 134.4土 32.79 158.4±37.67 141.4±34.42*

HED组 128.3±26.55 161.3±32.45 148.6±46.75

注： 与模型组比较， *P<0.05c

实验结果分析：

利血平是一种囊泡再摄取抑制剂， 它使递质留在囊泡外， 易被单胺氧化酶降解， 从 而使儿茶酚胺 (去甲肾上腺素、 肾上腺素、 多巴胺和 5-HT)耗竭， 引起行为和生理上的变 化。 在本实验中， 高、 低剂量 HEDS 能显著降低模型小鼠上睑下垂的闭眼程度， 提示 t作 )1]机制可能与激动 α -肾上腺素能作用相关。 HEDS 高、 低剂量均可减小利血平引 的体 卜降幅度， 提示该药也可通过激动 β -肾上腺素能祌经发挥作用。

绝 游泳实验是根据环境因素致病学说，利用绝望 行为建立的经典小鼠抑郁模型 ， 用于抗抑郁药物药效的初步评价。 我们的实验结果表明： 高、 低剂量 HEDS 能够明显 降低强迫游泳模型小鼠在水中绝望不动的持续 时间， 提示 HEDS具有较好的治疗作用。

对两种小鼠抑郁模型的治疗结果显示，同等剂 量下 HEDS比 HEDN和 HED显示出 史强的抗抑郁作用， 特别是相对于 HED有更为明显的优势。

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替换页 （细则第 26条)