Procédé d'aromatisation de produits fromagers

La présente invention concerne un procédé d'aromatisation de produits fromagers ainsi que les produits fromagers obtenus par ce procédé.

Le procédé traditionnel de fabrication de fromages à partir de lait comporte no- tamment les étapes suivantes (voir par exemple Le fromage, Eck A. et Gillis J. C, 1997, 3 ^ème édition, Lavoisier TEC & DOC, Paris) :

- coagulation par modification physicochimiques des micelles de caséine du lait pour donner un réseau protéique tridimensionnel, le coagulum ;

- tranchage du coagulum et élimination du lactosérum pour donner le caillé ; - moulage du caillé, éventuellement pressage du caillé en moules ;

- acidification, éventuellement salage ou saumurage du caillé, et

- affinage du caillé.

C'est au cours de cette dernière étape d'affinage que le fromage acquiert l'essentiel de ses propriétés caractéristiques de texture et d'arôme. Les composés d'arôme obtenus lors de l'affinage proviennent, notamment, d'une dégradation des constituants lipidiques et protéiques du caillé et d'une transformation des produits de digestion sous l'action d'enzymes microbiennes exo- ou intracellulaires.

Ainsi, la dégradation des lipides se fait sous l'action de lipases et celles des pro- téines sous l'action de protéases de type endopeptidases. Les peptides libérés par les endopeptidases peuvent être davantage dégradés par des exopeptidases qui libèrent des acides aminés. Ces acides aminés sont à l'origine d'un grand nombre de composés d'arôme, tels que des acides volatils, des alcools, des aldéhydes, des composés soufrés, des composés à noyau aromatique et des pyrazines. Un des principaux points de départ de la modification des acides aminés est catalysé par les transaminases (ou aminotransférases). Ces enzymes catalysent le transfert du groupement α-aminé des acides aminés sur un composé accepteur de groupement aminé, tel que l'α- cétoglutarate (α-KG), pour donner des α-cétoacides. Les α-cétoacides obtenus se dé- carboxylent spontanément pour donner des aldéhydes qui peuvent eux-mêmes être transformés en acides ou en alcools. La teneur en cétoacides accepteurs peut être un facteur limitant pour le développement des composés d'arômes.

A ce titre, la demande de brevet français n°2 762 479 décrit l'utilisation d'un additif de préparation de fromage comprenant au moins un cétoacide pour intensifier la flaveur d'un fromage issu d'un procédé traditionnel. La demande de brevet français

n°2 777 905 concerne, quant à elle, des souches de bactéries lactiques génétiquement modifiées pour être surproductrices d'α-cétoglutarate.

L'étape d'affinage est un processus dispendieux car souvent long et nécessitant des investissements en équipements et locaux ; de plus, la maîtrise des procédés d'affinage s'avère difficile pour assurer la régularité des caractéristiques organolepti- ques des fromages finis. A titre d'exemple, pour les fromages sans flore superficielle d'affinage, comme le GOUDA, le développement des arômes peut requérir, selon les caractéristiques organoleptiques souhaitées, des durées d'affinages longues, de 3 à 6 mois. Par ailleurs, le brevet européen EP 1 079 697 décrit un procédé, dit de « retextu- ration », de transformation d'une base fromagère de départ permettant d'obtenir des fromages ayant les caractéristiques aromatiques du fromage de départ et présentant une texture souple, élastique, voire fondante en bouche. Ce procédé comprend, notamment, une première étape de déstructuration limitée du réseau protéique d'une base fromagère, par action d'un traitement mécanique et thermique modéré, suivie d'une étape de refroidissement au cours de laquelle se produit une restructuration du réseau protéique et la constitution d'une émulsion stable des matières grasses avec les autres constituants de la base fromagère. Ce procédé de retexturation est généralement appliqué à des fromages âgés d'au moins quinze jours. Toutefois, il peut s'avérer intéres- sant, dans ce procédé, d'utiliser des bases fromagères plus jeunes, non affinées, comme cela est décrit dans la demande WO 02/096209 ; le produit obtenu dans ce cas présente cependant un goût neutre et une flaveur plate, car la base fromagère n'a pas eu le temps de développer des composés d'arôme. En effet, si l'on veut conférer aux produits issus de ce procédé de transformation des caractéristiques aromatiques d'un fromage affiné, il est nécessaire d'utiliser comme base fromagère des produits déjà affinés. Cette solution est coûteuse car elle ne permet pas de s'affranchir de l'étape d'affinage des fromages.

Or il peut-être intéressant, d'un point de vue économique, de produire des fromages ayant des propriétés organoleptiques de fromages affinés, directement à partir de bases fromagères neutres, telles que celles utilisées dans le procédé décrit dans la demande WO 02/096209, ou d'autres matières premières fromagères obtenues par d'autres procédés, et ceci sans passer par une période prolongée d'affinage.

A cet égard, de façon surprenante, les Inventeurs ont mis en évidence que l'incorporation d'agents d'arôme spécifiques et/ou de composés accepteurs de groupe- ment aminé (notamment des cétoacides) dans des bases fromagères, avant ou pen-

dant le procédé de retextu ration, n'inhibait pas le développement de ces ferments et le rôle spécifique des composés accepteurs de groupement aminé sur le développement ultérieur des composés aromatiques.

Les Inventeurs ont mis également en évidence qu'en incorporant directement à ces bases fromagères soit des composés accepteurs de groupement aminé, soit des ferments d'arôme spécifiques, soit une combinaison des deux, on pouvait obtenir des produits proches en caractéristiques organoleptiques et texturales des produits obtenus par le procédé traditionnel de production des fromages, en évitant les pertes des composés accepteurs de groupement aminé dans le lactosérum et en permettant une meil- leure maîtrise des procédés pour obtenir des produits de qualité homogène et régulière.

A ce titre, la présente invention a pour objet un procédé d'incorporation de composés accepteurs de groupement aminé et/ou de ferments d'arôme spécifiques à des bases fromagères pour obtenir des produits présentant des caractéristiques organoleptiques semblables à celles de produits affinés obtenus par un procédé traditionnel de production des fromages et ceci dans des délais plus courts et à plus basse température d'affinage.

Le procédé d'incorporation de ces agents d'arôme utilise un procédé de retextura- tion qui consiste à mélanger et malaxer une ou plusieurs bases fromagères dans des conditions de température et d'agitation qui évitent la déstructuration complète de la (ou des) base(s) fromagère(s).

Ainsi, la présente invention concerne un procédé d'aromatisation d'un produit fromager par traitement d'au moins une base fromagère de départ, comprenant les étapes suivantes : a) traitement thermique et mécanique de type pétrissage de la base froma- gère de départ, optionnellement après fractionnement de celle-ci, à une température Ti d'au plus 80 ⁰ C, pour obtenir une déstructuration limitée du réseau protéique de la base fromagère de départ, b) refroidissement du mélange de l'étape a) à une température T ₂ située dans l'intervalle compris entre Ti - 8 ⁰ C et Ti -20 ⁰ C, avantageusement Ti -10 ⁰ C et Ti - 15 ⁰ C, les bornes étant incluses, pour obtenir une restructuration du réseau protéique et la constitution d'une émulsion stable ; c) si nécessaire, traitement mécanique de la pâte obtenue en b) dans un appareillage à vis sans fin pour compléter la restructuration du réseau protéique et la stabilisation de l'émulsion ; et,

d) éventuellement, mise en forme du produit obtenu après l'étape c) ou après l'étape b) si l'étape c) est omise ; caractérisé en ce que l'étape a) et/ou b) ci-dessus est réalisée en présence d'au moins un agent d'arôme sélectionné dans le groupe constitué de ferments d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de leur paroi cellulaire, de lysats de ferments d'arôme, et de composés accepteurs de groupement aminé.

La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de sa paroi cellulaire, dans lequel le ferment d'arôme est obtenu par culture dans des conditions sub-optimales de croissance.

La présente invention concerne également un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de sa paroi cellulaire susceptible d'être obtenu par le procédé de préparation de ferment d'arôme ci-dessus.

La présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de sa paroi cellulaire tel que défini ci-dessus pour la production de produits fromagers.

Ferments d'arôme

On désigne par « ferment d'arôme », ou « ferment d'affinage » tout microorganisme, notamment de type bactérien ou levure, permettant de développer les arômes d'un produit fromager, c'est-à-dire en particulier un microorganisme dégradant les constituants lipidiques et protéiques d'un caillé pour les transformer en molécules aromatiques. Les ferments d'arôme et d'affinage sont bien connus de l'homme du métier et sont notamment décrits dans « Le fromage », Eck A. et Gillis J. C, 1997, 3 ^ème édition, Lavoisier TEC & DOC, Paris, pages 377-423.

On utilise dans l'invention au moins un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique, notamment protéasique et/ou peptidasique, accrue et une fragilisation de sa paroi cellulaire, notamment par rapport au même ferment d'arôme cultivé dans des conditions standards, c'est-à-dire en particulier sur un milieu de culture standard.

On désigne par « conditions standards » et « milieu standard » respectivement des conditions et un milieu procurant une croissance optimale pour un ferment d'arôme. En particulier, le milieu standard n'est pas carence, notamment en azote.

Pour un ferment d'arôme donné les conditions de culture standards et les milieux de culture standards sont bien connus de l'homme du métier. De tels conditions et mi-

lieux de cultures standards se caractérisent notamment par une culture de 6 h à 12 h sur un bouillon MRS (DeMan, Rogosa et Sharpe) incubé à 40 ± 3°C.

Les conditions de culture ou un milieu de culture procurant une croissance optimale d'un ferment d'arôme sont tels qu'ils procurent au ferment d'arôme l'ensemble des ressources nécessaires à sa croissance. En particulier, le milieu de culture n'est pas carence, c'est-à-dire qu'aucun des composants de ce milieu, en particulier aucun des composants azotés de ce milieu, n'est présent en une quantité limitante, c'est-à-dire une quantité telle que la croissance du ferment d'arôme s'en trouve affectée, notamment ralentie. La détermination de la composition d'un milieu procurant une croissance optimale pour un ferment d'arôme peut être réalisée de manière routinière par un homme du métier. Par ailleurs des milieux procurant une croissance optimale d'un ferment d'arôme sont largement disponibles dans le commerce.

L'activité enzymatique, notamment protéasique et/ou peptidasique, d'un ferment d'arôme selon l'invention peut être évaluée à l'aide de nombreuses techniques bien connues de l'homme du métier et ainsi être comparée à celle d'un ferment d'arôme standard. En particulier, il est possible de mesurer l'activité amino-peptidasique de ces ferments. Pour cela on peut mesurer l'activité enzymatique de dégradation d'un substrat enzymatique modèle, par exemple la L-leucine-p-nitroanilide, notamment à l'aide du protocole illustré dans l'Exemple 3. Il est également possible d'évaluer la protéolyse, c'est-à-dire la quantité de peptides et d'acides aminés libérés dans un produit fromager préparé à l'aide d'au moins un ferment d'arôme selon l'invention par rapport à un produit fromager témoins, c'est-à-dire un produit fromager préparé de manière semblable au produit fromager selon l'invention mais avec des ferments lactiques standards. On peut aussi évaluer la quantité de composés d'arômes libérés dans le produit fromager selon l'invention (par exemples aldéhydes branchés, alcools, cétones, esters ou composés issus du catabolisme des acides aminés soufrés) par rapport à un produit fromager témoin.

Un ferment d'arôme présentant une fragilisation de sa paroi cellulaire peut être caractérisés par la propriété d'être lysé plus rapidement, lorsqu'il est plongé dans une solution hypertonique par rapport à son cytoplasme, qu'un ferment d'arôme standard, ne présentant pas une fragilisation de sa paroi. Cette fragilisation peut aussi être évaluée par la sensibilité à la lyse d'un ferment d'arôme en présence d'agents de surface, tels que des agents osmotiques ou des détergents, d'enzymes, tel que le lysozyme ou la mutanolysine, ou de bactériocines, telle que la nisine ou la lacticine.

II va de soi que lors de la comparaison des caractéristiques d'un ferment d'arôme selon l'invention avec un ferment d'arôme standard, les mesures sont réalisées dans les mêmes conditions.

L'activité enzymatique accrue et la fragilisation de la paroi cellulaire des ferments d'arôme selon l'invention permet, en particulier, une libération plus rapide, plus complète et plus importante des enzymes intra-cellulaires, notamment de type protéase et peptidase, par rapport à des ferments d'arôme ne présentant pas de fragilisation de leur paroi cellulaire, ce qui permet de développer de manière spectaculaire la flaveur de produits obtenus à l'aide de ces ferments d'arômes à paroi fragilisée. Dans un procédé de préparation d'un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de sa paroi cellulaire selon l'invention, le ferment d'arôme est obtenu par culture dans des conditions sub-optimales de croissance.

Des « conditions sub-optimales de croissance » sont définies comme étant des conditions ne procurant pas au ferment d'arôme cultivé dans ces conditions une crois- sance optimale. Des conditions sub-optimales de croissance peuvent notamment être obtenues par culture sur un milieu carence et notamment sur un milieu carence en azote. Les conditions sub-optimales de croissances exactes dépendent en général de chaque souche et peuvent être définies de manière aisée par l'homme du métier en fonction de la (des) souche(s) considérée(s) et des caractéristiques finales souhaitées. La détermination de conditions sub-optimales de croissance pour un ferment d'arôme donné peut être réalisée de manière routinière pour l'homme du métier à partir des conditions de croissance standards définies pour ce ferment d'arôme. En particulier l'homme du métier peut diminuer la concentration d'un ou plusieurs constituants d'un milieu de culture standard de ce ferment d'arôme, notamment d'un constituant azoté, de manière à affecter la croissance de ce ferment d'arôme sur ce milieu.

De préférence, la culture est réalisée jusqu'à atteindre une phase stationnaire de croissance qui peut ensuite être maintenue pendant une durée variable. La durée du maintien en phase stationnaire peut être ajustée en fonction du degré de fragilisation de la paroi cellulaire souhaité. L'évaluation de la phase de croissance dans laquelle se trouve une culture de ferment d'arôme, notamment la phase exponentielle de croissance et la phase stationnaire de croissance, peut être réalisée par des techniques bien connues de l'homme du métier, comme la spectrophotométrie, le suivi de la consommation d'oxygène ou le suivi de la consommation d'agents neutralisants tels que la soude. Les cultures de ferments d'arôme issus de la culture ci-dessus présentent un rap- port cellules viables/cellules non viables d'environ 10% qui peut être variable selon le

ferment d'arôme considéré. Les cellules viables sont pour l'essentiel des cellules viables non cultivables qui peuvent être dénombrées par toute technique adéquate et notamment par les techniques bien connues de l'homme du métier que sont l'épifluorescence et la cytométrie de flux. Les lysats de ferments d'arôme peuvent être obtenus par des moyens bien connus de l'homme du métier permettant d'obtenir une Iyse partielle ou totale de cellules de micro-organismes, notamment :

- des moyens physiques : hautes pressions, homogénéisation, broyages mécaniques, chocs thermiques, traitements de congélation/décongélation, pres- sion osmotique,

- des moyens chimiques : traitement par des agents détergents, de l'alcool, des combinaisons sel/alcool,

- l'utilisation de bactériocines (nisine, pédiocines, entérocines...)

- l'utilisation d'agents susceptibles de fragiliser les parois (protamine, chitosan, serine...).

- l'utilisation d'enzymes (lysozyme....)

Les ferments d'arôme à l'origine des lysats ou présentant une activité enzymati- que accrue et une fragilisation de la paroi et utilisés dans le procédé de l'invention sont notamment issus des bactéries lactiques telles que des souches de Lactobacilles ther- mophiles homofermentaires (Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus , Lacto- bacillus bulgaricus) ou hétérofermentaires (Lactobacillus fermentum, Lactobacillus reu- teri), des souches de Lactobacilles mésophiles homofermentaires ou hétérofermentaires facultatifs (Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum), des souches de lactocoques (Lactococcus lactis subsp. lactis, Lactococcus lactis subsp. cremoris, Lactococcus lactis subsp. lactis biovar diacetylactis), des souches de Pédiocoques (Pediococcus acidilactici), des souches de corynébactéries, des souches de bactéries propioniques (Propionibacterium freudenreichii, P. shermanii), des souches de levures et de Geotrichum candidum.

De préférence, le ferment d'arôme est obtenu à partir de la souche Lactobacillus helveticus BS121. Ce ferment provient de travaux de sélection, réalisés sur milieu modèle à partir d'une large collection de souches de Lactobacilles thermophiles, et en particulier de Lactobacillus helveticus, afin de développer différents ferments d'arôme conduisant à des notes aromatiques spécifiques. Cette souche a été déposée selon le Traité de Budapest, le 12 janvier 2006, auprès de la Collection Nationale de Culture de Microorganismes (CNCM, Paris, France) sous le numéro I - 3552.

Dans le procédé de l'invention, les taux d'inoculation de ferment d'arôme sont de

10 ⁵ à 10 ⁸ cellules de ferment/g de base fromagère, notamment de 10 ⁶ à 10 ⁷ cellules de ferment/g et les lysats inoculés de ferments d'arôme sont préparés à partir de 10 ⁵ à 10 ⁸ cellules de ferment/g de base fromagère, notamment de 10 ⁶ à 10 ⁷ cellules de fer- ment/g.

Les ferments d'arôme peuvent se présenter sous forme de culture concentrée ou non concentrée.

Composés accepteurs de groupement aminé

Les « composés accepteurs de groupement aminé » désignent tout composé organique susceptible de se lier, notamment de façon covalente, à un groupement -NH ₂ lors de réactions de transamination. Lors de ces réactions, notamment catalysées par des transaminases, un groupement -NH ₂ est transféré depuis un composé aminé pré- curseur d'arôme vers un composé accepteur de groupement aminé. Les « précurseurs d'arôme aminé » désignent tout composé organique aminé susceptible de donner un composé d'arôme. A titre d'exemple, les acides aminés sont des précurseurs d'arômes aminés.

En particulier, les composés accepteurs de groupement aminé sont des cétoaci- des, et plus particulièrement un α-cétoacide, tel que l'α-cétoglutarate, l'α- cétoisocaproate, le cétoisovalérate, un pyruvate, comme le phénylpyruvate, ou l'α- acétolactate. Un composé accepteur de groupement aminé particulièrement préféré selon l'invention est l'α-cétoglutarate.

Ces composés favorisent et accélèrent, en particulier, la dégradation des acides aminés en molécules aromatiques (tels que les aldéhydes branchés et aromatiques en particulier) et sont largement disponibles dans le commerce ou peuvent être produits selon le procédé décrit dans la demande de brevet français n°2 777 905.

De manière préférentielle, le composé accepteur de groupement aminé est ajouté dans le procédé de l'invention à la teneur de 1 à 20 g/kg de base fromagère, notam- ment à la teneur de 10 g/kg.

Base fromagère

On désigne par « base fromagère » une matière première fromagère susceptible d'être utilisée dans le procédé de l'invention pour donner un produit fromager, c'est-à- dire une matière première « retexturable », à savoir notamment :

1) un fromage, affiné ou non, obtenu par un procédé traditionnel, et en particulier avec un extrait sec supérieur à 40% en poids, tel qu'un fromage à pâte pressée, notamment non cuite, par exemple un GOUDA jeune âgé d'environ 3 semaines ou des fromages ayant un profil rhéologique similaire à celui d'une pâte pressée, c'est-à-dire en particulier un profil rhéologique similaire à celui d'une pâte pressée en terme de souplesse, cohésion et fermeté du produit, comme cela peut être mesuré à l'aide d'une machine universelle de compression / traction, notamment de type Instrom 4301 ; ce type de mesure est illustré dans l'Exemple 2 ; 2) un caillé ;

3) un produit fromager ayant un extrait sec total compris entre 40 et 60%, un taux de minéralisation Ca/ESD (Extrait Sec Dégraissé) inférieur à 2% et en particulier une pâte souple élastique, non friable présentant un profil rhéologique qui est sensiblement similaire à celui des fromages à pâte pres- sée, notamment obtenu par coagulation du lait après acidification par fermentation et/ou ajout de composés acidifiants, pour obtenir un pH compris entre 5,2 et 5,8, avantageusement entre 5,2 et 5,5, puis ajout d'une préparation en- zymatique coagulante ;

4) des concentrés de protéines laitières, tels que par exemple des ré- tentats d'ultrafiltration, liquides ou déshydratés, dans la mesure où ils sont re- textu râbles ;

5) éventuellement des chutes de découpe de fromages ;

6) le mélange de deux ou plus des matières premières fromagères ci- dessus, dans la mesure où le mélange est retexturable. En particulier, le caillé peut être : un caillé jeune, non affiné, obtenu par un procédé traditionnel de fabrication du caillé (voir par exemple Le fromage, Eck A. et Gillis J. C, 1997, 3 ^eme édition, Lavoisier TEC & DOC, Paris, pages 165-374), notamment par coagulation enzymatique et/ou fermentaire du lait, ou par ultrafiltration de lait suivi d'une acidification de l'ultrafiltrat par fermentation ;

un caillé jeune, non affiné, obtenu par coagulation du lait après acidification par fermentation et/ou ajout de composés acidifiants, tels que l'acide lactique, l'acide citrique, la glucono-delta-lactone, pour obtenir un pH compris entre 5,2 et 5,8, avantageusement entre 5,2 et 5,5, puis ajout d'une préparation enzymatique coagulante selon Ie procédé décrit dans la demande

WO 02/096209 ; un caillé de type « pâte filée », notamment non affiné (par exemple la Mozzarella),

Les bases fromagères peuvent être divisées ou broyées sous forme de morceaux, de râpé ou de semoule. Avantageusement, le fromage de départ est râpé en brins de diamètre compris entre 1 ,5 et 3 mm, par exemple à l'aide d'une râpe habituelle du commerce.

D'une manière générale, l'étape a) est réalisée avantageusement en soumettant la base fromagère de départ à un traitement thermique doux, consistant à chauffer à une température comprise entre 30 et 8O ⁰ C, de préférence entre 30 et 65°C, de préférence encore entre 30 et 60°C, pendant une durée comprise entre 20 s et 3 min, de préférence de 45 s au plus, tout en brassant la pâte fromagère afin de réaliser un mélange homogène, sous cisaillement modéré, en particulier à une vitesse de brasage inférieure à 1000 tours/min, de préférence inférieure à 500 tours/min. Des températures inférieures à 60 ⁰ C permettent avantageusement de limiter la dégradation thermique des composés accepteurs de groupement aminé lorsque ceux-ci sont présents.

Les traitements de l'étape a) sont effectués dans tout appareil approprié. On peut citer les systèmes à injection de vapeur, tels les "cutters" employés en charcuterie ou en technologie de fromage fondu et les pétrins utilisés en boulangerie.

La vitesse de brassage est avantageusement comprise entre 100 et 600 tours/min, de préférence 100 et 300 tours/min, pour des appareillages utilisés traditionnellement dans l'industrie fromagère. Ainsi, la vitesse de brassage est de préférence comprise entre 100 et 150 tours/min pour l'hélice d'un appareillage de type "pétrin" et 250 et 300 tours/min pour le couteau d'un appareillage de type "cutter".

L'étape b) est avantageusement conduite en refroidissant la pâte obtenue à une température comprise entre 25 et 50 ⁰ C pendant une durée de 1 à 5 min. La température de refroidissement est dépendante de la température de chauffage mais n'est pas supérieure à 5O ⁰ C.

Le traitement mécanique de l'étape b) est du même type que celui de l'étape a) bien que les conditions puissent varier dans la gamme spécifiée ci-dessus, les étapes a) et b) ont lieu avantageusement dans le même appareillage.

En particulier, les étapes a) et b) sont avantageusement menées sous vide partiel de façon à éviter les pertes aromatiques et réduire l'oxydation du produit ; le vide est avantageusement compris entre 0,4 et 0,7 bar (0,4.10 ⁵ Pa et 0,7.10 ⁵ Pa).

La pâte obtenue peut, à l'issue de l'étape b), être transférée dans un dispositif à vis sans fin où elle subit un traitement mécanique simple destinée à compléter la restructuration du réseau protéique et stabiliser l'émulsion. Le temps de séjour dans le dis- positif à vis sans fin est avantageusement compris entre 30 secondes et 5 minutes. Par traitement mécanique simple, on entend un traitement de poussée sans autre effet supplémentaire, tel que thermique ou de pression, comme c'est le cas pour l'extrusion. A l'extrémité de sortie de la vis sans fin est éventuellement positionnée une formatrice.

On peut ajouter à la base fromagère de départ une quantité d'eau calculée selon l'extrait sec de la base fromagère de départ, qui n'excède pas 20 % en poids, notamment 15 % en poids, et est avantageusement supérieure à 7% en poids. Cet ajout est avantageux pour obtenir un produit fromager présentant une texture souple, élastique, voire fondante en bouche.

Les produits sortant de ce dispositif sont sous des formes variables (billes, formes cylindriques, ovoïdes, etc..) selon le profil de la formatrice placée à l'extrémité de sortie de la vis sans fin ; ils sont ensuite refroidis et emballés.

Les produits sortant du dispositif à vis sans fin peuvent également, à la sortie de la formatrice, être mis en moules pour conférer au produit final la forme définitive souhaitée. De façon avantageuse, on peut faire subir au produit placé dans le moule une lé- gère opération de pressage pour améliorer le formage.

Le produit final est alors conditionné dans tout emballage approprié, enrobé avec des cires de fromagerie ou des substituts de celles-ci tels que des acétoglycérides ou des enrobages comestibles ; il peut être poussé également à la sortie de l'extrudeuse dans des coques plastiques par passage dans une conditionneuse bi-coque. Par ailleurs, les agents d'arôme définis ci-dessus peuvent être incorporés avant ou au cours du procédé de retexturation (étape a et/ou b). En effet, du fait de l'absence d'élimination de substances solubles dans le procédé de l'invention ces agents restent dans la pâte évitant toute perte. Ainsi, de façon préférentielle les agents d'arôme sont ajoutés directement dans un cutter, ou un équipement équivalent, servant à traiter la base fromagère.

Dans un mode de réalisation particulier du procédé ci-dessus, l'agent d'arôme est constitué d'un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de la paroi cellulaire.

Dans un autre mode de réalisation particulier du procédé ci-dessus, l'étape a) et/ou b) définie ci-dessus est réalisée en présence d'au moins un composé accepteur de groupement aminé et d'au moins un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de la paroi cellulaire et/ou lysat de ferment d'arôme, notamment en présence d'au moins un composé accepteur de groupement aminé et d'au moins un lysat de ferment d'arôme, et plus particulièrement en présence d'au moins un composé accepteur de groupement aminé et d'au moins un ferment d'arôme présentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de la paroi cellulaire. En effet, des essais réalisés par les Inventeurs ont montré que ce mode de réalisation était favorable à l'obtention d'arômes légèrement plus typés comparativement à l'incorporation de composés accepteurs d'arôme seuls, ou de ferments d'arôme, lysés ou non, seuls. Par ailleurs, les Inventeurs ont montré que les composés accepteurs de groupement aminé accéléraient la vitesse de dégradation des acides aminés en molécules aromatiques et la cinétique de développement des ferments d'arôme.

Dans un mode de réalisation préféré du procédé ci-dessus, l'agent d'arôme est ajouté à la base fromagère au cours de l'étape a), après broyage de celle-ci. Dans un autre mode de réalisation préféré du procédé ci-dessus, l'agent d'arôme est ajouté au cours de l'étape b) au mélange de l'étape a).

Dans un autre mode de réalisation préféré du procédé ci-dessus, on ajoute à l'agent d'arôme au moins une souche de bactérie lactique, en particulier une souche de bactérie lactique utilisée traditionnellement en fromagerie, c'est-à-dire une souche de bactérie lactique qui ne présente pas une activité enzymatique accrue et une fragilisation de sa paroi cellulaire, et/ou au moins une source de peptides ou d'acides aminés en tant que précurseurs d'arôme. L'ajout de bactéries lactiques, qui apportent notamment des enzymes telles que les transaminases, est particulièrement avantageux dans le cas de l'emploi de bases fromagères dont la coagulation du caillé est obtenue par une acidification non biologique du lait, c'est-à-dire notamment par ajout de composés acidifiants tels que l'acide lactique, l'acide citrique, la glucono-delta-lactone, etc.. La source de peptides et d'acides aminés est avantageuse lorsque ces composés, précurseurs d'arôme, sont présents en quantités insuffisantes, notamment lors de l'emploi de bases fromagères non affinées ; ces composés peuvent être ajoutés, par exemple, sous forme de broyats de fromages plus ou moins affinés.

Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel :

- la base fromagère est constituée par un GOUDA jeune âgé d'environ 3 semaines ou un produit fromager ayant un extrait-sec total compris entre 40 et 60%, un taux de minéralisation Ca/ESD inférieur à 2% et en particulier une pâte souple élastique, non friable présentant un profil rhéologique qui est sensiblement similaire à celui des fromages à pâte pressée, ladite base fromagère étant notamment obtenue selon le procédé décrit dans la demande internationale WO 02/096209, c'est-à-dire en particulier par coagulation de lait après acidification par fermentation et/ou ajout de composés acidi- fiants, tels que l'acide lactique, l'acide citrique, la glucono-delta-lactone, pour obtenir un pH compris entre 5,2 et 5,8, avantageusement entre 5,2 et 5,5, puis ajout d'une préparation enzymatique coagulante, telle que la présure ;

- on divise la base fromagère sous forme de brins, de râpé ou de semoule ;

- on ajoute éventuellement de l'eau dans une quantité qui n'excède pas 20% en poids de l'extrait sec de la base fromagère de départ,

- on traite thermiquement et mécaniquement, par un traitement de type pétrissage, le mélange ci-dessus à une température d'au plus 60 ⁰ C, de préférence de 30 à 60°C pendant une durée de 20 s à 3 mn, tout en assurant un brassage de la pâte à une vitesse comprise entre 200 et 2000 tours/mn, avec une vitesse de cisaillement comprise entre 10 et 200 s ^"1 ;

- on refroidit le mélange traité à une température comprise entre 8 et 20 ⁰ C ;

- éventuellement on met en forme le produit obtenu et on le conditionne ; et dans lequel on ajoute et on mélange à la base fromagère divisée et/ou au mélange traité : un ferment d'arôme obtenu à partir de la souche L helveticus BS121 pré- sentant une activité enzymatique accrue et une fragilisation de sa paroi cellulaire, à un taux d'inoculation de 0,5 à 3% par rapport à la masse de base fromagère de départ, ce qui correspond à environ 10 ⁷ -10 ⁸ cellules par gramme de base fromagère de départ, de l'α-cétogluturate à la teneur de 10 g/kg de base fromagère, et une source de peptides et d'acides aminés constituée d'un broyât de Gouda âgé d'environ 2 à 6 mois à une teneur de 0,5 à 10%, de préférence de 1 à 5% par rapport à la masse de base fromagère de départ.

Le produit fromager obtenu par ce mode de réalisation particulier a une texture souple, élastique et présente les caractéristiques analytiques et organoleptiques de fromages affinés de type GOUDA.

Le taux d'inoculation du ferment d'arôme obtenu à partir de la souche L helveticus BS121 selon l'invention correspond à une dose équivalente à celle qui est utilisée en technologie fromagère traditionnelle.

L'étape de traitement thermique et mécanique est réalisée dans tout appareil ap- proprié tels que des systèmes à injection de vapeur employés en charcuterie ou en technologie de fromage fondu, ou des pétrins de boulangerie.

Après 8 à 15 jours à température d'affinage de 12- 14°C le produit obtenu est plus typé et se rapproche d'une pâte pressée type GOUDA affiné 2 à 3 mois.

Le produit a été jugé par analyse sensorielle comparativement à un témoin GOU- DA issu d'une technologie traditionnelle avec incorporation d'un ferment d'arôme traditionnel (soit environ 0,10 % sous forme concentrée par un moyen adéquat, notamment centrifugation - équivalent à environ 2 à 2,5% sans concentration). L'ajout de ferment d'arôme seul selon l'invention conduit à un développement d'arôme avec des caractéristiques différentes de celles du témoin; en outre, l'ajout d'α-cétoglutarate entraîne une note « diacétyle » plus marquée et une cinétique de production de composés aromatiques plus rapide (voir l'Exemple 1).

Ce produit présente des caractéristiques organoleptiques intéressantes et est fabriqué par un procédé simple, économique, plus facilement reproductible et permettant d'utiliser des précurseurs d'arôme solubles sans perte dans le lactosérum au cours du procédé contrairement à leur utilisation en fromagerie traditionnelle.

De préférence, le produit fromager obtenu selon le procédé de l'invention est affiné de 1 à 4 semaines à une température de 8°C à 16°C.

La présente invention concerne également un produit fromager susceptible d'être obtenu par un procédé tel que défini ci-dessus. La présente invention concerne également l'utilisation d'un produit fromager tel que défini ci-dessus, préparé à partir d'un fromage affiné ou non, pour renforcer l'arôme de préparations culinaires ou de fromages fondus.

En particulier, afin de produire en un temps rapide un produit fromager pour renforcer l'arôme de préparations culinaires ou de fromages fondus, on pourra le laisser s'affiner à des températures accélérant le développement d'arômes (de 16 à 30 ⁰ C).

L'invention sera davantage définie à l'aide des exemples ci-dessous donnés à titre illustratif et non limitatif.

EXEMPLES

Exemple 1

Préparation d'un produit fromager

L'objectif de cet exemple est d'étudier l'impact de l'addition de ferments d'arôme de type Lactobacillus helveticus (source de protéases, peptidases et transaminases) présentant une activité enzymatique peptidasique accrue et une fragilisation de la paroi cellulaire et/ou d'α-cétoglutarate (α-KG) sur le développement d'arôme et le catabo- lisme des acides aminés, en présence d'une source de peptides et acides aminés (broyât de Cheddar).

1. Préparation de la solution d'α-KG

L'α-KG (Biosaveurs, Montpellier, France) est dilué dans l'eau à la concentration de 40 mg pour 100 ml d'eau. Le pH de la solution est ensuite ajusté au pH de la matière première mise en oeuvre, soit ici pH = 5,5 avec de la soude 10N (400 g/l).

2. Préparation de la souche de Lactobacillus helveticus

La souche de Lactobacillus utilisée a été préparée par culture d'une souche de Lactobacillus helveticus BS121 (Numéro de dépôt CNCM, I-3552) sur un milieu à base de poudre de lait, carence en azote (par rapport à la teneur en azote d'un milieu standard de composition identique), en présence d'un activateur de croissance (extrait de viande).

En fin de culture, l'activité aminopeptidasique totale est multipliée par 2 par rap- port à une culture classique et on atteint un pourcentage de cellules dont la paroi cellulaire est fragilisée d'environ 90% par rapport à environ 10% en culture classique.

3. Formulation

La base fromagère choisie est du Gouda jeune non affiné âgé d'environ 3 semai- nés (fromage de type pâte pressée non cuite).

On divise 100% de cette base fromagère qui représente 90% de la formule et on la mélange à :

• 5% d'eau

• 5% de Cheddar âgé d'environ 5 - 6 mois (source de peptides et d'acides aminés) ;

• éventuellement une souche de L. helveticus BS121 à environ 10 ⁷ CFU/g préparée comme indiqué ci-dessus et/ou éventuellement 10 g/kg d'α-KG.

4. Préparation (cutterage/cuisson)

Le produit fromager est ensuite préparé comme indiqué précédemment à partir du mélange ci-dessus à une température de 55°C, sous une pression de 1 Bar, avec un brassage à 500 tours/mn pendant 40 secondes. Après traitement le produit obtenu est refroidi à 14°C puis laissé s'affiner à cette température.

5. Jury d'Analyse Sensorielle

Le produit fromager obtenu au dessus est soumis à un jury d'analyse sensorielle comprenant 10 experts qui en caractérise le goût. Brièvement les produits fromagers sont préparés comme indiqués ci-dessus en absence de ferment d'arôme et d'α-KG (E1), en présence de ferment d'arôme uniquement (E2), ou en présence de ferment d'arôme et d'α-KG (E3) après un affinage de 2, 4 ou 8 semaine (respectivement S+2, S+4 ou S+8). Les résultats de cette analyse sont présentés dans le tableau ci-dessous.

En conclusion, le ferment d'arôme utilisé seul ou associé à l'α-KG conduit à un développement d'arôme nettement supérieur à celui du témoin, avec des arômes de type « fruité », de type pâte pressée non cuite, et de type « fumé », et ceci dès la qua- trième semaine.

Parallèlement, il a été vérifié que la protéolyse secondaire (libération de petits peptides et d'acides aminés) était fortement accélérée en présence de ce ferment d'arôme et que les composés aromatiques à l'origine du développement d'arôme provenaient bien de la dégradation des acides aminés, essentiellement par transamination.

Exemple 2

Mesure des caractéristiques rhéologiques d'un fromage à pâte pressée

Des échantillons de fromages sont prélevés à l'emporte-pièce en vue de l'analyse rhéologique (cylindre de 17 mm de diamètre et 20 mm de hauteur). Les analyses sont réalisées sur une machine universelle de compression/traction Instron 4301. Les mesures sont effectuées entre une plaque inférieure fixe et une sonde mobile, toutes deux de géométrie plane et recouvertes d'un papier lubrifiant de type Parafilm. La sonde axiale cylindrique d'axe vertical possède un diamètre de 59 mm. Le test appliqué est un test "TPA" (Texture Profil Analysis). Il est caractérisé par deux cycles identiques de compression uni-axiale avec un temps de repos entre les deux. Le taux de compression appliqué sur l'échantillon de fromage est de 75 % à une vitesse de 50 mm/min. On mesure la force (contrainte) en fonction du déplacement de la sonde. Différents points caractéristiques sont extraits des courbes obtenues : la force à 50 % de déformation, la force à la rupture et la force à 75 % de compression, la déformation à la rupture, la pente initiale et enfin, les différents paramètres issus d'une analyse informatisée obtenue au moyen d'un logiciel ; il s'agit de la cohésion (rapport des deux aires positives) et de l'élasticité (rapport des hauteurs des deux pics). Pour chaque fromage analysé, trois mesures sont réalisées à partir de trois échantillons différents. Les paramètres analysés sont donc la moyenne de trois essais.

Caractéristiques biochimiques d'un fromage à pâte pressé âgé de trois semaines :

Caractéristiques rhéologiques du même fromage

Exemple 3

Protocole de dosage d'une activité aminopeptidasique

1. Préparation des solutions de dosage

On prépare une solution de tampon phosphate en mélangeant : un volume de solution de phosphate monopotassique KH ₂ PO ₄ 0,1 M (13,6 g/1) ; deux volumes de solution de phosphate disodique Na ₂ HPO ₄ ^H ₂ O 0,1 M (17,8 g/l) ;

On prépare également une solution de substrat en mélangeant 6,03 mg de L- leucine-p-nitroanilide (L9125 Sigma) dans 1 ml de méthanol pour obtenir une solution à 24 mM.

2. Dosage

Les mélanges de dosages suivants sont réalisés :

On laisse incuber les mélanges à 3O ⁰ C pendant 1 heure puis on lit l'absorbance à 410 nm.