τ . _{t †} . Orlistat

(Tetrahydrolipstatin,THL) 奧利司他是一种特异性胃肠脂肪酶抑制剂， 由罗氏公司原研，最早于 1998年在新西兰上 市。 经放射性同位素 C14示踪法研究表明， 奥利司他通过与胃肠脂肪酶活性位点丝氨酸残 基 特异性共价结合， 使脂肪酶失活， 从而阻止食物中人体不能直接吸收利用的脂肪 （三酰基甘 油酯）水解成可吸收的单酰基甘油酯， 进而减少食物中约 30%左右的脂肪吸收， 而自身却极 少吸收入血（血药浓度极低， 峰值〈10ng/ml )， 因而疗效及安全性较以往治疗超重、肥胖症药 物有显著提高。该产品目前分别作为 0TC和 Rx药物（双跨）被广泛用于体重超重（身体质� �� 指数丽 15≥ 25. 0) 或肥胖症 （身体质量指数丽 15≥ 30. 0) 患者的治疗。 关于奥利司他的制备方法， 国内外已有较为深入的研究， 现简析如下： 奥利司他原研企业瑞士罗氏公司分别申请了以 下专利： 专利号为 US4，598，089的美国专 利， 及公开号为 CN85109209、 发明名称为 《 氧杂环丁 -2-酮类化合物的制备方法》 的中国专 利申请， 公开号为 CN85108888、 发明名称为《环氧丙垸酮类化合物的制备方法 》 的中国专利 申请， 公开号为 CN97109732. 1 、 发明名称为 《生产脂抑制素和四氢脂制素的方法》 的中国 专利申请， 催化氢化制得的奥利司他粗品均使用以硅胶为 载体的低压柱层析进行纯化。 如在 发明 US4, 598， 089中， 分别有用到以硅胶为载体、 氯仿为洗脱液进行的硅胶过滤层析， 以硅 胶为载体及以己垸、乙酸乙酯或己垸-乙酸乙� �混合溶液为洗脱液进行的低压柱层析， 以非极 性的反相硅胶为载体、 以甲醇等极性溶剂为洗脱液的低压反相柱层析 等纯化方式。 该法因需 进行多次柱层析及反复结晶， 纯化效率及收率均比较低， 且设备不适合工业放大， 每批产能 十分有限。如发明 US4, 598, 089分别优选使用默克公司的低压 Lowbar®柱 ( Lichoprep® RP-8, Size C) , 批处理量仅为毫克级； 使用默克公司 Gel60硅胶、 规格为 Φ lOcmX 100cm的层析柱 批纯化处理量亦只达到克级， 收率约为 20%〜30%。 公开号为 CN1391906、发明名称为 《一种 新型脂肪酶抑制剂》 的中国专利申请亦采用默克公司 Gel60硅胶、 规格为 Φ 10cm X lOOcm的 层析柱进行分离纯化， 层析柱载样量约为 10°/。， 经三次柱层析， 分别依次用氯仿、 己垸 -乙酸 乙酯 （9 : 1〜4 : 1 )、 甲醇溶液洗脱， 收率仅为 2%左右。 公开号为 CN1266058、 发明名称为 《一制胰脂菌素的提纯方法》 的中国专利申请通过使 用与利普司他汀双流萃取相同的溶剂溶解奥利 司他粗品进行结晶来分离提纯， 优选的溶剂为 己烷或庚垸。 该法较之前采用的低压硅胶柱层析纯化法相比 较， 虽易于放大， 批处理量也有 大幅提高， 收率可达 75%以上， 但纯度仅为 90%〜97%， 远远达不到近年不断提高的临床用药 质量标准要求（目前国内奥利司他原料药质量 标准要求经 HPLC检验纯度需达 99. 0%以上， 且 单杂〈0. 2%、 总杂质〈1. 0%、 含量 98. 0%以上， 较之前的仅要求纯度达 97%〜98%即可上市又有 了较大提高）。我们按照该发明专利技术重复 结晶纯化生产过程，发现若要制备符合当前质 量 标准要求的奥利司他产品， 其纯化效率及收率仍然很低， 纯化收率在 10°/。以下。 公开号为 CN176302U发明名称为《一种提纯奥利司他的方法 》的中国专利申请， 对于催化氢化后的奥 利司他样品仍采用以结晶为主的纯化制备方式 ， 且待纯化样品含量要求高达 85%以上， 纯化 后产品纯度为 98. 5%左右， 单个杂质高达 0. 5%， 制备效率及收率仍未有较大突破。 公开号为 CN101948450A. 发明名称为 《一种生产制备奧利司他的方法》 的中国专利申请亦仍采用普通 硅胶柱与反复结晶相结合的方式进行纯化， 操作步骤简易程度、 放大线性及收率均仍有待进

~ "步提 1¾。 此外还有采用萃取、 冷却结晶， 萃取、 吸附过滤与真空干燥相结合的制备方式， 如

W02005/007639, W02005/026140, W02009/040827等专利所述， 这些专利申请一定程度上仍 是在罗氏专利技术基础上的局部改进， 纯化工艺未有显著突破。 发明内容 本发明提供一种使用基于动态轴向压縮柱 （Dynamic Axial Compression, DAC) 的半制 备或制备型高效液相系统 （Pre-HPLC)进行奥利司他纯化的新的生产制备方 法。 为了实现上述发明目的， 本发明采用了以下技术方案： 一种奥利司他的制备方法， 包括 以下步骤：

( 1 )以反相硅胶或反相聚合物树脂作为 DAC制备柱填料， 以有机溶剂与填料混合搅拌均 匀制浆；

( 2 ) 将匀好的填料浆液装入 DAC制备柱柱筒中， 开启装柱机进行轴向压縮； ( 3 ) 用制备泵将流动相泵入 MC制备柱中对柱内有机溶剂进行置换洗涤， 同时平衡制备 柱， 柱效测试理论塔板数不低于 35000N/m;

(4) 将奧利司他粗品溶液用高压制备泵注射至 DAC制备柱内上柱吸附；

( 5 ) 上柱吸附结束后用流动相进行解析， 并对解析液分段收集；

(6 ) 将纯度合格样合并、 浓缩、 结晶及干燥， 制得奥利司他成品。 其中，所述反相硅胶填料或反相聚合物树脂填 料的粒径为 5 μ m〜30 μ m，优选 10 μ m〜20 ιη _; 孔径为 50Α〜300 Α, 优选 100 A〜150 A _; 填料形状为不规则形或球形， 优选球形。 具体地来说， 所述反相硅胶填料为以 Si0 ₂ 或其衍生物为基质， 以 C4〜(： 18脂肪烃链为键 合相的硅胶，优选以辛基 C8或十八垸基 C18为键合相的硅胶； 所述反相聚合物树脂为可耐高 压聚合物树脂， 其基质为聚苯乙烯 /联乙烯苯 （苯乙烯——二乙烯苯）、 丙烯酸、 酚醛的一种 或一种以上的混合作为基质的填料， 优选以聚苯乙烯 /联乙烯苯材料为基质的填料。 根据填料类型及规格选择适当装柱参数，如硅 胶填料常用装柱压力一般为 10MPa〜45MPa、 柱床高度一般为 20 _C m〜35 _C m， 反相聚合物树脂填料装柱压力视装柱高度一般 可选择从 IMPa 到 lOMPa左右不等。 其中，所述制浆的适宜溶剂是与所用填料及流 动相溶液化学性质兼容的粘度为 2mPa · ₃ 〜 5mPa - s ( 25°C )的低分子水溶性有机溶剂， 优选配制流动相溶剂的同系物作为制浆溶剂。 如 异丙醇等低级脂肪醇等。 其中， 所述填料浆液其浓度一般为 50% 80% (体积 /体积， 即每 100ml浆液中含填料体 积为 50ml 80ml)。 其中，上柱吸附的载样量对于反相硅胶填料为 0.1% 5.0% (质量 /质量），优选 0.5% 2.0% (质量 /质量）； 对于反相聚合物树脂为 0.5% 30.0% (质量 /质量）， 优选 1.0% 10.0/。（质量

/质量）。 其中，所述 DAC制备柱在平衡、上样及解析的溶液流速为 0.02B. V. /min 0.50B. V. /min, 优选 0.10B. V. /min 0.20B. V. /mine 所述的奥利司他粗品溶液是将奥利司他中间体 利普司他汀经水溶性低粘度低分子有机溶 剂或将其配制成的流动相溶解稀释后再催化氢 化而制得， 或直接采购市售奥利司他粗品经流 动相溶解稀释后制得， 奥利司他样品上样浓度为 0.5% 10% (质量 /体积， 表示每 100ml溶液 中含样品 0.5g 10g)， 优选 2% 5% (质量 /体积， 表示每 100ml溶液中含样品 2g 5g)。 具体地来说，所述流动相采用的水溶性低粘度 低分子有机溶剂为含 1 3个碳原子的低级 脂肪烃的一 0H CN、 卤素原子、 氧代、 羰基、 羧基等基团的低取代物、 衍生物或其混合物， 且其粘度 5mPa*S (25°C)， 如低级脂肪醇、 低级酯、 醚、 酮、 腈等， 优选水溶性强的溶剂， 如甲醇、 乙醇。 具体地来说，所述分段收集是根据 UV检测仪监控峰形曲线分段收集解析液， 收集分三大 段完成， 分别为紫外曲线开始显著上升至 75°/ 80%峰高处左右为第一大段， 曲线上升阶段的 75% 80%峰高处至曲线下降阶段的 80% 70%峰高处为第二大段， 曲线下降阶段的 80°/ 70% 峰高处至曲线基本回落至基线处为第三大段， 每一大段进一步细分小段收集， 收集时长一般 5秒 /样〜 60秒 /样， 优选 15秒 /样〜 40秒 /样。 作为另一种实施方式， 所述奥利司他粗品溶液采用分批连续方式上柱 、 解析的连续进样 纯化方式， 且对每批解析液进行分段收集。 本发明研究开发的奧利司他纯化制备方法， 其批纯化制备量高达千克级甚至万克级， 纯 化制备批量放大倍数达以往工艺的近四个数量 级， 纯化生产周期亦由以往的长达数十小时缩 短至约 1 2小时， 若进行连续进样生产周期甚至可进一歩降低至 20 40分钟。 催化氢化后 纯度为 85% 95%左右、 含量约为 50% 70% (重量 /重量） 左右的奥利司他粗品， 直接经一次 DAC制备柱纯化后其纯度即可满足当前临床用药 质量标准要求， 纯化合格样品仅需结晶一次 制得药用 B晶型后即可用于奥利司他制剂生产。 该法易于生产操控， 可实现不同生产规模的 线性放大， 同时采用连续进样方式更可有效降低单位产量 产品的溶媒消耗， 相比低压柱层析 与简单的反复结晶纯化， 可大幅缩短生产周期至原周期的 5%左右。 纯化收率可达 90%〜95%， 纯化与结晶总收率达 85%〜93%， 收率最高可达当前其它生产技术的近十倍甚至 数十倍。 附图说明 图 la和图 lb为 MC制备柱纯化解析过程 UV检测仪监控曲线及分段收集示意图； 其中 图 la为 DAC制备柱单针进样纯化解析紫外监测图谱及分 段收集示意图； 图 lb为 DAC制备柱多针连续进样纯化解析紫外监测图谱 及分段收集示意图； 图 2a和图 2b为 DAC制备柱纯化前奥利司他粗品的 HPLC检测结果； 其中 图 2a为实施例一、 二、 四纯化前奥利司他粗品的 HPLC检验结果； 图 2b为实施例三纯化前奥利司他粗品 HPLC的检验结果； 图 3a、 3b、 3c和 3d为纯化后奥利司他成品的 HPLC检测结果， 其中 图 3a为实施例一纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果； 图 3b为实施例二纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果； 图 3c为实施例三纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果； 图 3d为实施例四纯化后奥利司他成品 HPLC检验结果。 具体实施方式 以下实施例为对本发明的详细说明， 而非限制本发明。 实施例一 将约 80Kg调和粒径为 10 μ m、 孔径为 300 A的反相 C18球形硅胶填料倒入约 150L异丙 醇中， 搅拌均匀制成填料浆液， 去除填料碎片及细粉后， 快速倾倒至内径为 Φ 800mm 的 DAC 制备柱柱筒中， 设定装柱压力 20MPa, 开启装柱机气动活塞杆进行轴向压缩， 同时打开 DAC 制备柱下端阀门将异丙醇排出、 回收。 活塞压缩至设定压力 20MPa时， 完成装柱， 柱床高度 250mm, 柱床规格 > 800mmX 250ram。 装好的 DAC制备柱经柱效测试， 理论塔板数达 46812N/m。 将利普司他汀 （纯度 87. 46%, 含量 66. 20%)用 86%甲醇溶液溶解， 溶解稀释后利普司他

更正页 （细则第 91条) 汀浓度约为 2. 5%， 然后进行催化氢化。 催化氢化的方法可采用美国专利 US4 598 089中的方 法， 在此不作赘述。 完成氢化经过滤除去 Pd/C催化剂， 制得纯度为 88. 81% (如图 2a所示） 的待纯化奥利司他粗品的甲醇溶液。 开启 UV检测仪，设定检测波长为 195nm，预热半小时。依次分别用 2B. V.无水甲醇及 80% 甲醇溶液对 DAC制备柱内异丙醇进行置换、洗涤、平衡， 至 UV检测仪监控曲线水平稳定后基 线调零。 本发明中的 B. V.指 Bed Volume , 即柱床体积。 取含有 2Kg奥利司他粗品的上述溶液， 用高压制备泵以 0. 2B. V. /min的流速上样吸附。 上样结束后立即用 80% 83%甲醇溶液线性梯度洗涤，洗至 UV监测曲线水平后换用 85%甲醇溶 液解析， 出峰后根据峰形曲线按每 15 秒 /样〜 30 秒 /样立即进行分段收集， 流速均为 0. 2B. V. /min, 各收集液分别取样进行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度〉 99. 0%、单杂〈0. 2%且总杂〈1. 0%的符合用药质量标准要 求的收集液合并、 浓缩、 结晶及干燥， 结晶及干燥采用现有技术， 例如可采用美国专利 US6 734 314所记载的方法。 制得符合当前药用标准的奥利司他 1. 84Kg。 经检验， 成品纯度 为 99. 82% (如图 3a所示）， 最大单杂 0. 10%, 总杂 0. 18%, 含量 99. 62%, 纯化收率 92. 13°/ 本发明所述纯度、 含量均为 HPLC法检测值， 其具体含义及计算方法在 《中国药典》 附录

《高效液相色谱法》相关章节均有说明。 本发明所述纯度具体是按照药典附录《高效液 相色 谱法》项下的 "面积归一化法"检测计算得到， 含量是按照外标法检测计算得到。 实施例二 将约 75K _g 调和粒径为 10 μ m、 孔径为 100 A的反相 C8球形硅胶填料倒入约 150L异丙醇 中， 搅拌均匀制成填料浆液， 去除填料碎片及细粉后， 快速倾倒至内径为 Φ 800mm的 DAC制 备柱柱筒中， 设定装柱压力 24MPa， 开启装柱机气动活塞杆进行轴向压縮， 同时打开 DAC制 备柱下端阔门将异丙醇排出、回收。活塞压缩 至设定压力 24MPa时，完成装柱,柱床高度 250 柱床规格 Φ 800mmX 250mm。 装好的 DAC制备柱经柱效测试， 理论塔板数达 42663N/m 将利普司他汀（纯度 87. 46%， 含量 66. 20 用 85%甲醇溶液溶解， 溶解稀释后利普司他 汀浓度约为 3%，然后进行催化氢化。催化氢化的方法可采� ��美国专利 US4, 598, 089中的方法， 在此不再赘述。 完成氢化经过滤除去 Pd/C催化剂， 制得纯度为 88. 81% (如图 2a所示） 的待 纯化奥利司他粗品的甲醇溶液。 开启 UV检测仪， 设定检测波长为 195nm， 预热半小时。 依次分别用 2B. V.无水甲醇及适 量 85%甲醇溶液对 DAC制备柱内异丙醇进行置换、 洗涤、 平衡， 至 UV检测仪监控曲线水平稳 定后调零。 取含有 2Kg奥利司他粗品的上述溶液， 用高压泵以 0. 2B. V. /min的流速上样吸附。 上样 结束后立即用 85%甲醇溶液洗涤并解析， 出峰后按每 15秒 /样〜 30秒 /样立即进行分段收集， 流速为 0. 15B. V. /min, 各收集液分别取样进行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度〉 99. 0%、单杂〈0. 2%且总杂 <1. 0%的符合当前临床用药质 量标准要求的收集液合并、 浓缩， 按美国专利 US6, 734， 314所述方法进行结晶、 干燥， 制得 符合当前药用质量标准的奥利司他 1. 83Kg。 经检验， 成品纯度为 99. 80% (如图 3b所示）， 最 大单杂 0. 10%， 总杂 0. 20%' 含量 99. 48%， 纯化收率 91. 53%。 实施例三 将约 10Kg调和粒径为 15 m、 孔径为 100 A的以聚苯乙烯 /联乙烯苯为基质的耐高压反 相聚合物树脂填料倒入约 20L异丙醇中， 搅拌均匀制成填料浆液， 去除填料碎片及细粉后， 快速倾倒至内径为 Φ 300mm的 DAC制备柱柱筒中， 设定压力 10MPa， 开启装柱机气动活塞杆进 行轴向压缩， 同时打开 DAC制备柱下端阔门将异丙醇排出、回收。活塞 压縮至设定压力 lOMPa 时， 完成装柱， 柱床高度 300mm， 柱床规格 Φ 300mm X 300mm。 装好的 MC制备柱经柱效测试， 理论塔板数达 38764N/m。 将利普司他汀（纯度 89. 17%， 含量 64. 56°/。）用用 84%乙醇溶液溶解， 溶解后利普司他汀 浓度约为 3%, 催化氢化可依照美国专利 US4, 598， 089中所记载的方法进行。 完成氢化并经过 滤除去 Pd/C催化剂后， 制得纯度为 90. 15% (如图 2b所示） 的奥利司他粗品的乙醇溶液。 开启 UV检测仪， 设定检测波长为 195nm， 预热半小时。 依次分别用 2B. V.无水乙醇及适 量 82. 5%乙醇溶液对 DAC制备柱内异丙醇进行置换、 洗涤、 平衡， 至 UV检测仪监控曲线水平 稳定后调零。 取含有 1. 5Kg奥利司他粗品的上述溶液，用高压制备泵以 0. 15B. V. /min的流速上样吸附。 上样结束后立即用 75%〜82%乙醇溶液线性梯度洗涤至 UV检测曲线水平后改用 83. 0%乙醇溶液 解析， 流速均为 0. IB. V. /min， 出峰后按每 20秒 /样〜 40秒 /样立即进行分段收集， 各收集液 分别取样进行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度〉 99. 0%、单杂〈0. 2%且总杂〉1. 0%的符合临床用药质量标 准要求的收集液合并、 浓縮， 按美国专利 US6， 734， 314所述方法进行结晶、 干燥， 制得药用 标准的奥利司他 1. 40Kg。 经检验， 成品纯度为 99. 66% (如图 3c所示）， 最大单杂 0. 17%, 总 杂 0. 34%， 含量 98. 87%， 纯化收率 93. 46%。 实施例四 本实施例基于前述实施例。 在完成装柱、 利普司他汀催化氢化、 紫外检测仪预热平衡稳 定及调零等准备工作后， 每次取含有相当于 DAC制备柱内硅胶填料重量 1. 5%〜2. 5% (或聚合 物树脂重量 10%〜15%) 的奥利司他粗品的溶液， 用高压泵以 0. 2B. V. /min的流速上样吸附， 上样结束后立即用 85%的甲醇溶液以同样流速洗涤、 解析。 在解析至奥利司他峰即将流出前 适当时间进行第二针纯化样上柱吸附， 上柱结束立即平衡、 解析。 如此进行多批的样品 "上 柱吸附一 85%甲醇溶液洗漆、 解析" 循环连续纯化制备 （如图 lb所示）。 连续循环进样纯化 过程中， 进样密度以前后相邻两次进样的解析流出峰完 全分开且相邻样品间杂质峰与主峰不 重叠为宜， 解析样出峰后按每 15秒 /样〜 40秒 /样立即进行分段收集， 各收集液分别取样进 行 HPLC检测。 将经 HPLC检测奥利司他主峰纯度>99. 0%、 单杂 <0. 2%且总杂〈1. 0%的符合临床 用药质量标准要求的收集液合并、浓缩， 按美国专利 US6, 734, 314所述方法进行结晶、干燥， 制得药用标准的奥利司他。 本例是基于实施例一（采用与实施例 1相同的试验条件）， 连续进样三针， 每针进样量均 含奧利司他约 1. 8Kg， 合并三针纯化解析合格样， 浓缩并结晶， 得奥利司他成品 4. 98Kg。 经 检验， 成品纯度为 99. 64°/。（如图 3d所示）， 最大单杂 0. 13%， 总杂 0. 36%， 含量 99. 12%， 纯 化收率 92. 30%。 本例采用连续进样纯化制备奥利司他， 在保证纯化收率处于较高水平的情况下， 生产周 期縮短至平均每批 30分钟左右， 且溶媒消耗量降低， 具有可观的应用前景。