A-

PROCEDE DE PRODUCTION DE LA 9-DECEN-2-ONE NATURELLE

PAR BIOCONVERSION DE L'ACIDE UNDECYLENIQUE

A l'AIDE D'UNE MOISISSURE ET UTILISATION EN PARFUMERIE

ET AROMATIQUE ALIMENTAIRE

La présente invention porte sur la bioconversion, à l'aide d'une moisissure, de l'acide undécylénique en 9-décen- 2-one, cette dernière pouvant être utilisée dans des applications de parfumerie et d'aromatique alimentaire.

La société Demanderesse a mis en évidence que la 9- Décen-2-one (ou Décénone-2 ou Méthyl Octènyl Cétone, RN CAS 35194-30-0) est une méthyl-cétone présentant des propriétés olfactives et gustatives telles qu'elle peut être utilisée dans toutes les applications de l'industrie aromatique (arômes et fragrances) . En effet, elle présente une note verte et grasse ainsi que des notes fruitées, notamment de poire, pomme, ananas, fruit de la passion et fruit exotique en général .

Cette cétone, tout comme les autres méthyl-cétones, est formée par une voie métabolique qui emprunte les premières étapes de la β-oxydation après oxydation de l'acide gras. Cette voie métabolique pour la formation des méthyl- cétones est utilisée par les mycètes ^' lors de la détoxification des acides gras.

Comme il peut être observé par la représentation de la voie métabolique (Figure 1), le substrat utilisé au cours de la bioconversion est l'acide undécylénique qui est obtenu par le cracking (opération physique transformant le produit brut en composés plus fins) de l'acide ricinoléique issue de l'huile de ricin puis purifié par une distillation sèche. Enfin, à la suite d'une étape de décarboxylation, la méthyl-

cétone obtenue en bout de parcours possède un carbone de moins que l'acide gras d'origine.

A la connaissance de la Société déposante, il n'existe aucun procédé biotechnologique aujourd'hui qui décrit et/ou permet la synthèse de la 9-décen-2-one . En effet cette molécule ne peut être obtenue à ce jour que par synthèse chimique et ceci avec des rendements médiocres. Par ailleurs, les arômes de synthèse présentent l'inconvénient d'être moins appréciés par les consommateurs que les arômes naturels. Par conséquent, la présente invention a pour but de fournir un procédé alternatif d'obtention de molécules aromatiques naturelles, en particulier celles obtenues par le biais de la 9-décen-2-one, par des procédés biologiques, notamment de bioconversion, mettant en œuvre des microorganismes tels que les moisissures.

Au sens de la présente invention, on entend par « bioconversion » la transformation biologique d'un substrat, de préférence issu d'une source naturelle, pour obtenir des substances aromatisantes naturelles qui peuvent être formulées dans des arômes ou des fragrances qualifiés de naturels .

De façon surprenante et inattendue, la Société déposante a trouvé qu'il était possible de satisfaire à cet objectif grâce à un procédé de production de la 9-décen-2- one, caractérisé par la bioconversion de l'acide undécylénique à l'aide d'une moisissure, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) la culture de ladite moisissure; b) l'ajout d'acide undécylénique comme substrat de bioconversion, en présence d'huile; c) la bioconversion du substrat en 9-décen-2-one,

d) l'extraction et la purification de la 9-décen-2- one.

Au sens de la présente invention, le terme « moisissure » correspond à des champignons microscopiques filamenteux uni- ou multicellulaires. Parmi les moisissures, on distingue les Phycomycètes et les Septomycètes . Au sein des Phycomycètes, on trouve le phylum des Oomycotinées et le phylum des Zygomycotinées . Au sein des Septomycètes, on trouve le phylum des Ascomycotinées, le phylum des Basidiomycotinées . et le phylum des Deutéromycotinées .

Dans un mode de réalisation de l'invention, la moisissure selon l'invention appartient au phylum des Deutéromycotinées, Classe des Hyphomycètes, Ordre des Tuberculariales, Famille des Aspergillaceae . Plus préférablement, ladite moisissure appartient au genre Aspergillus ou Pénicillium. Dans un premier mode de réalisation préféré, ladite moisissure appartient à l'espèce Aspergillus oryzae ou à l'espèce Aspergillus niger. Dans un second mode de réalisation préféré, ladite moisissure appartient à l'espèce Pénicillium roquefortii ou à l'espèce Pénicillium camenbertii .

Parmi les moisissures Aspergillus oryzae, on peut citer les souches de collection suivantes : Aspergillus oryzae DSMZ

1861, Aspergillus oryzae DSMZ 1864, Aspergillus oryzae DSMZ

1147, Aspergillus oryzae DSMZ 63303, Aspergillus oryzae CBS

570.65, Aspergillus oryzae CBS 819.72, Aspergillus oryzae CBS

110.27.

Parmi les moisissures Aspergillus niger, on peut citer les souches de collection suivantes : Aspergillus niger DSMZ 823,

Aspergillus niger DSMZ 2466.

Parmi les moisissures Pénicillium roquefortii, on peut citer les souches de collection suivantes : Pénicillium roquefortii

CBS 221-30, Pénicillium roquefortii PRB 18, Pénicillium roquefortii DSMZ 1079, Pénicillium roquefortii DSMZ 1080. Parmi les moisissures Pénicillium camembertii, on peut citer la souche Pénicillium camembertii DSMZ 1233.

Dans un autre mode de réalisation préféré, la moisissure selon l'invention appartient au phylum des Zygomycotinées, Classe des Zygomycètes, Ordre des Mucorales, Famille des Mortierellaceae ou Famille des Mucoraceae .

Plus préférablement, ladite moisissure appartient au genre Mortierella ou au genre Mucor ou au genre Rhizopus, et encore plus préférablement, ladite moisissure appartient à l'espèce Mortierella isabellina ou Mortierella rammniana ou à l'espèce Mucor racemosus ou Mucor miehei ou à l'espèce Rhizopus arrhizus ou Rhizopus oryzae.

Parmi les moisissures appartenant au genre Mortierella, on peut citer les souches de collection suivantes : Mortierella isabellina DSMZ 1414, Mortierella isabellina CBS 100559, Mortierella isabellina CBS 221.29, Mortierella isabellina CBS 194.28, Mortierella isabellina CBS 208.32, Mortierella isabellina CBS 224.35, , Mortierella isabellina CBS 560.63, Mortierella isabellina CBS 167.80, Mortierella isabellina CBS 493.83, Mortierella isabellina CBS 309.93, Mortierella isabellina CBS 250.95, Mortierella isabellina CBS 109075, Mortierella ramanniana CBS 112.08, Mortierella ramanniana CBS 219.47, Mortierella ramanniana CBS 243.58, Mortierella ramanniana CBS 478.63, Mortierella ramanniana CBS 852.72, Mortierella ramanniana CBS 366.95, Mortierella ramanniana CBS 101226.

Parmi les moisissures appartenant au genre Mucor, on peut citer les souches de collection suivantes : Mucor javanicus DSMZ 1222, Mucor racemosus DSMZ 62760, Mucor rouxii DSMZ 1191.

Parmi les moisissures appartenant au genre Rhizopus, on peut citer les souches de collection suivantes : Rhizopus arrhizus

oryzae DSMZ 905, Rhizopus oryzae DSMZ 2199, Rhizopus delemar DSMZ 853, Rhizopus niveus DSMZ 2194, Rhizomucor miehei DSMZ 1330.

La culture visée à l'étape a) du procédé selon l'invention, comprend la réalisation d'une culture, de préférence semi-concentrée, par exemple par amplification cellulaire, dans un milieu de culture approprié. Cette culture est précédée par une pré-culture de la souche dans un premier milieu de culture plus adapté aux premières étapes de multiplication .

Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le temps de culture de ladite moisissure varie entre 20 et 30 heures et dépend en fait de l'état de croissance du mycélium, ce dernier pouvant être observé au microscope. Il est en effet préféré que la biomasse minimale de la moisissure soit comprise entre 7 et 15 g/1 et plus préférablement entre 9 et 12 g/1, avant de procéder à la bioconversion selon 1 'invention.

L'étape b) du procédé consiste à ajouter le substrat à la culture cellulaire. Selon l'invention, la synthèse par voie biologique de la 9-décen-2-one fait intervenir le substrat le plus approprié qui est l'acide undécylénique ou l'un de ses esters, l'ester méthylique ou l'ester éthylique de l'acide undécylénique. Il va de soi que le substrat peut être un mélange de différents substrats appropriés, en particulier un mélange d'acide undécylénique et d'un ou plusieurs de ses esters.

Suivant un mode de réalisation avantageux de l'invention, le substrat est ajouté au mycélium suivant un procédé batch ou fed-batch.

Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit acide undécylénique est ajouté au milieu de fermentation avec

un débit de 0,1 à 0,9 g/L/h, de préférence de 0,2 à 0,7 g/L/h et très préférentiellement de 0,3 à 0,55 g/L/h.

L'étape c) du procédé consiste en la bioconversion de l'acide undécylénique en 9-décen-2-one .

La durée de cette phase de bioconversion est généralement de 36 à 96 heures.

En raison de la grande toxicité de l'acide undécylénique pour les mycètes, une période d'adaptation peut s'avérer nécessaire afin de préparer la moisissure à convertir le substrat. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré, l'étape de bioconversion du procédé selon l'invention comprend une première phase d'adaptation de la moisissure dans laquelle ledit acide undécylénique est ajouté à un débit de 0,1 à 0,5 g/L/h, puis une seconde phase dans laquelle l'acide undécylénique est ajouté à un débit de 0,25 à 0,9 g/l/h. De façon avantageuse, la durée de ladite phase d'adaptation est inférieure à 20 heures, de préférence inférieure à 12 heures et plus préférentiellement inférieure à 6 heures .

Selon un mode de réalisation préféré, l'acide undécylénique est ajouté en présence d'huile. Ladite huile peut être choisie dans le groupe comprenant les huiles classiques alimentaires telles que les huiles de soja, maïs, tournesol, ou autre ou des triglycérides contenant des acides gras à chaînes courtes tels que le Miglyol, ou encore des huiles blanches telles que l'huile de paraffine ou des huiles minérales composées d'hydrocarbures à longue chaine. De manière préférée, ladite huile est l'huile de tournesol partiellement hydrogénée ou riche en acide oléique De manière préférée, ladite huile est ajoutée dans les proportions suivantes par rapport au substrat : Acide undécylénique/Huile = 1/4 acide undécylénique - 3/4 huile ou

1/3 acide undécylénique - 2/3 huile ou 1/2 acide undécylénique - 1/2 huile.

De façon avantageuse, ladite huile est ajoutée au milieu de fermentation à un débit de 0,4 à 4,0 g/L/h, de préférence de 0,5 à 3 g/L/h et très préférentiellement de 0,75 à 2,5 g/L/h.

Comme tous types de microorganismes en situation de bioconversion forcée, les mycètes ont besoin d'une source de carbone permettant de couvrir leurs besoins énergétiques comme par exemple une source de glucide, de préférence de glucose ou de maltose. L'apport de glucose au cours de la bioconversion est préféré. Par conséquent, selon un autre mode de réalisation préféré de l'invention, du glucose ou du maltose est ajouté simultanément à l'acide undécylénique et à l'huile. De façon avantageuse, ledit glucose ou ledit maltose est ajouté au milieu de fermentation à un débit inférieur à 1 g/L/h, de préférence inférieur à 0,75 g/L/h et très préférentiellement inférieur à 0,5 g/L/h.

Selon un autre mode de réalisation préféré de l'invention, l'ajout dudit acide undécylénique, de ladite huile et optionnellement dudit glucose ou maltose dans le milieu de fermentation se fait en continu pendant 5 à 96 heures, de préférence pendant 24 à 72 heures, et plus préférablement pendant 24 à 48 heures

Selon un autre mode de réalisation préféré, la bioconversion selon l'invention est réalisée à une température comprise entre 25 ⁰ C et 35 ⁰ C, de préférence entre 27 à 30 ⁰ C.

Selon un autre mode de réalisation préféré, le pH du milieu de fermentation selon l'invention est de 5 à 8, de préférence de 5,5 à 7,5, et plus préférentiellement de 6 à 7. Dans le cadre de l'invention, le contrôle du pH se fait à

l'aide de soude (par exemple NaOH 5N stérile ou autre base classique en fermentation (NH40H, KOH, etc..)) .

Au cours de la bioconversion, il est important d'avoir une bonne agitation ainsi qu'une bonne aération du milieu de fermentation. Dans le fermenteur, l'agitation peut se créer grâce à plusieurs pales d'agitation. De façon avantageuse et selon la taille du fermenteur, par exemple pour un fermenteur de 6 litres, l'agitation adéquate nécessaire selon l'invention est de 200 à 1200 rpm, et de préférence de 300 à 900 rpm. L'aération, quant à elle, peut se faire par injection d'air au niveau des pales d'agitation. De façon avantageuse, l'aération adéquate du milieu de fermentation selon l'invention est inférieure ou égale à 1 vvm, de préférence comprise entre 0,2 et 0,8 vvm et plus préférentiellement comprise entre 0,3 et 0,7 vvm.

Dans un autre mode de réalisation préféré, la bioconversion selon l'invention est arrêtée par ajout dans le milieu de culture, d'un acide. Ledit acide peut être choisi dans le groupe comprenant l'acide phosphorique, l'acide sulfurique, l'acide chlorhydrique ou l'acide citrique. De préférence, ledit acide est l'acide phosphorique ou l'acide citrique .

Dans l'étape d) , l'extraction de la 9-décen-2-one peut être réalisée par hydrodistillation ou par extraction à l'aide d'un solvant choisi dans le groupe comprenant le cyclohexane, le Methyl Cyclohexane, ou l'acétate d'éthyle. De préférence, le solvant utilisé est le Cyclohexane ou un mélange Cyclohexane-Acétate d'éthyle.

La purification de la 9-décen-2-one peut ensuite être réalisée par dérésinage puis distillation fractionnée.

Ce procédé d'extraction/purification permet ainsi d'obtenir une molécule pure à plus de 98% avec un rendement d'extraction de l'ordre de 75 à 85%.

Le rendement de bioconversion en 9-décen-2-one par rapport au substrat employé, l'acide undécylènique, est d'environ 25 à

35%.

L'invention concerne également la 9-décen-2-one obtenue par le procédé tel que décrit ci-dessus.

L'invention a pour objet l'utilisation de la 9-décen-2- one (CAS 35194-30-0) dans toutes les applications de parfumerie et d'aromatique alimentaire, en particulier pour la fabrication de parfums, de matières odorantes, de compositions cosmétiques ou alimentaires, ou comme additif alimentaire.

Dans un mode de réalisation préféré, l'invention a pour objet l'utilisation de la 9-décen-2-one obtenue par le procédé tel que décrit ci-dessus dans toutes les applications de parfumerie et d'aromatique alimentaire, en particulier pour la fabrication de parfums, de matières odorantes, de compositions cosmétiques ou alimentaires, ou comme additif alimentaire .

Au sens de la présente invention, le terme parfumerie désigne non seulement la parfumerie au sens habituel du terme, mais également les autres domaines dans lesquels l'odeur des produits est importante. Il peut s'agir, sans que cela soit limitatif, de compositions de parfumerie au sens habituel du terme, telles que bases et concentrés parfumants, eaux de Cologne, eaux de toilette, parfums et produits similaires ; de compositions topiques - en particulier cosmétiques - telles que crèmes pour le visage et le corps, poudres de talc, huiles pour cheveux, shampoings, lotions capillaires, onguents, sels et huiles de bain, gels de douche et de bain, savons de toilette, anti-transpirants et

désodorisants corporels, lotions et crèmes de rasage, savons, crèmes, dentifrices, bains de bouche, pommades, et produits similaires ; et de produits d'entretien, tels qu'assouplissants, détergents, lessives, désodorisants d'ambiance, aérosols et produits similaires.

Le terme odorant est utilisé pour désigner un composé qui exhale une odeur .

Par aromatique alimentaire, on entend toute utilisation des composés de l'invention pour l 'aromatisation de toute denrée alimentaire liquide ou solide, humaine ou animale notamment des boissons, des produits laitiers, des crèmes glacées, des bonbons, des chewing-gums etc.. mais aussi pour 1 'aromatisation des tabacs.

La 9-decen-2-one est ainsi utilisable en compositions parfumantes ou en compositions aromatiques alimentaires pour contribuer à donner des notes exotiques, florales ou fruitées, en particulier ananas, poire, fruit de la passion, fruits exotiques. Selon les applications, on utilisera cette molécule de 9-décen-2-one dans des proportions déterminées par l'homme de l'art.

De préférence, la 9-decen-2-one sera utilisée dans des quantités comprises entre 0,00025% et 30%, préférablement entre 0,0025 et 20%, plus préférablement entre 0,025 et 10%, en poids par rapport au poids total de la composition dans laquelle elle est présente. Elle pourra entrer dans la composition de solides ou de liquides et notamment dans la composition de gels, crèmes, pommades et/ou sprays.

La 9-decen-2-one pourra également être utilisée dans une composition elle-même odorante, ou dans une composition dans laquelle l'agent odorant est utilisé pour masquer ou neutraliser certaines odeurs.

D'autres aspects, objets, avantages et caractéristiques de l'invention, seront présentés à la lecture de la description non restrictive qui suit et qui décrit des modes

de réalisation préférés et de l'invention donnés par le biais des exemples suivants.

La Figure 1 décrit la bioconversion de l'acide undécylénique en 9-décen-2-one .

EXEMPLES

Exemple 1 :

On ensemence les souches Mortierella isabellina (A) , Aspergillus oryzae (B) et Pénicillium roquefortii (C) [origine = tube congelé à - 8O ⁰ C] sur gélose au malt, et on incube à 27°C (pour A) ou 3O ⁰ C (pour B et C) pendant 72 heures .

On ensemence la préculture précédente dans 3,5 1 de milieu au malt en fermenteur de 6 1 :

Extrait de malt : 50 g/1

Extrait de levure : 7,5 g/1 pH 6,5

Mortierella isabellina (A)

On incube pendant 24 heures ladite souche à 27 ⁰ C, l'agitation est de 500 rpm et l'aération est de 0.3 vvm.

Aspergillus oryzae (B)

On incube pendant 24 heures ladite souche à 30 ⁰ C, l'agitation est de 600 rpm et l'aération de 0,5 vvm.

Pénicillium roquefortii (C)

On incube pendant 24 heures ladite souche à 30 ⁰ C, l'agitation est de 600 rpm et l'aération de 0,3vvm.

Le poids sec de mycélium à la fin de la culture pour chaque souche est d'environ 9 à 11 g/1.

L'acide undécylénique est ensuite distribué avec un débit de 0,15 g/l/h pendant 6 h puis au débit de 0,33 g/l/h pendant 72 h : soit un total de 25 g/1. Cet acide undécylénique est distribué en mélange avec de l'huile de tournesol hydrogénée (1/3 acide-2/3 huile) ; cette huile est donc distribuée aux débits de 0,6 g/l/h puis de 1 g/l/h. On distribue parallèlement du glucose en continu au débit de 0,36 g/l/h pendant 72 h. On régule le pH à 6,5 pendant toute la durée de la conversion avec NaOH 5 N. On augmente la vitesse à 900 rpm et on aère au débit de 1 vvm pour Mortierella isabellina et 0,3 vvm pour Aspergillus oryzae ou Pénicillium roquefortii. On poursuit la conversion pendant 72 heures.

En conditions non optimisées, on obtient une production comprise entre 5 et 7 g/1 de 9-décen-2-one .

Exemple 2 : Conversion avec Aspergillus oryzae (B)

On ensemence Aspergillus oryzae [origine = tube congelé à - 80°C] sur gélose au malt, et on incube à 3O ⁰ C pendant 72 heures .

On ensemence la préculture précédente dans 3,5 1 de milieu au malt (même concentration que dans l'exemple 1) .

On incube à 3O ⁰ C, 600 rpm, 0,5 vvm d'air, pH libre, pendant 24 heures. On obtient un poids sec de 11 g/1.

L'acide undécylénique est ensuite distribué à un débit de 0,5 g/l/h pendant 6 H puis au débit de 0,9 g/l/h pendant 48 h : soit un total de 46 g/1. Cet acide undécylénique est distribué en mélange avec de l'huile de tournesol hydrogénée (1/4 acide-3/4 huile) ; cette huile est donc distribuée aux

débits de 1,5 g/l/h puis de 2,7 g/l/h. On distribue parallèlement du glucose en continu au débit de 0,36 g/l/h pendant 48 h. On régule le pH à 6 pendant toute la durée de la conversion avec NaOH 5 N. On augmente la vitesse à 900 rpm et on aère au débit de 0,3 vvm. On poursuit la conversion pendant 48 heures.

On obtient une production de 16,5 g/1 de 9-décen-2-one, soit un rendement de bioconversion de 35%.

Exemple 3 : Conversion avec Mortierella isabellina (A)

On ensemence Mortierella isabellina [origine = tube congelé à - 80°C] sur gélose au malt, et on incube à 27°C pendant 72 heures.

On ensemence la préculture précédente dans 3,5 1 de milieu au malt (même concentration que dans l'exemple 1).

On incube pendant 24 heures à 27 ⁰ C, l'agitation est de 600 rpm et l'aération est de 0,5 vvm. On obtient un poids sec de 11,3 g/1.

L'acide undécylénique est ensuite distribué à un débit de 0,27 g/l/h pendant 6 H puis au débit de 0,477 g/l/h pendant 48 h : soit un total de 46 g/1. Cet acide undécylénique est distribué en mélange avec de l'huile de tournesol hydrogénée (1/4 acide-3/4 huile) ; cette huile est donc distribuée aux débits de 0,8 g/l/h puis de 1,43 g/l/h. On distribue parallèlement du glucose en continu au débit de 0,32 g/l/h pendant 48 h. On régule le pH à 7,5 pendant toute la durée de la conversion avec NaOH 5 N. On augmente la vitesse à 900 rpm et on aère au débit de 1 vvm. On poursuit la conversion pendant 48 heures.

On obtient une production de 8 g/1 de 9-décen-2-one, soit un rendement de bioconversion de 33%.

Exemple 4 : Conversion avec Pénicillium roquefortii (C)

On ensemence Pénicillium roquefortii [origine = tube congelé à - 80°C] sur gélose au malt, et on incube à 3O ⁰ C pendant 72 heures.

On ensemence la préculture précédente dans 3,5 1 de milieu au malt (même concentration que dans l'exemple 1) .

On incube pendant 22 heures à 3O ⁰ C, l'agitation est de 600 rpm et l'aération est de 0,3 vvm. On obtient un poids sec de 10 g/1.

L'acide undécylénique est ensuite redistribué à un débit de 0,25 g/l/h pendant 6 H puis au débit de 0,45 g/l/h pendant 48 h puis au débit de 0,25 g/l/h pendant 24 H : soit un total d'environ 30 g/1. Cet acide undécylénique est distribué en mélange avec de l'huile de tournesol hydrogénée (1/3 acide-2/3 huile) ; cette huile est donc distribuée aux débits de 0,5 g/l/h puis de 0,9 g/l/h puis 0,5 g/l/h. On distribue parallèlement du glucose en continu au débit de 0,36 g/l/h pendant 72 h. On régule le pH à 6,5 pendant toute la durée de la conversion avec NaOH 5 N. On augmente la vitesse à 900 rpm et on aère au débit de 0,6 vvm. On poursuit la conversion pendant 48 heures. ^'

On obtient une production de 10,5 g/1 de 9-décen-2-one, soit un rendement de bioconversion de 35%.

Exemple 5 : extraction - purification

On acidifie à pH 1,5 à 2 avec de l'acide phosphorique à 85 %. On ajoute le solvant d'extraction cyclohexane et on agite 1 heure à température ambiante. On centrifuge et on

récupère la phase organique. On dose la raéthyl cétone. On concentre le solvant et on obtient ainsi un "brut" huileux. On distille sous vide. On obtient la lactone "dérésinée" et une huile épuisée. On purifie ensuite en fractionnant la molécule sous vide. On obtient un produit pur à plus de 99 %

Exemple 6 : Evaluation de la 9-décen-2-one en parfumerie

La 9-décen-2-one pure à 99 % a été testée sur mouillette et en solution (à 5 % dans l'éthanol) : la tête est puissante, homogène, présentant des notes rosées, aldéhydées, d'acétate de citronellyle, de feuille de coriandre et des notes marines. Le fond présente des notes de poire .

Exemple 7 : Evaluation en aromatique alimentaire

La 9-décen-2-one pure à 99 % a été testée à 8 ppm dans l'eau minérale : elle présente des notes fruitées : poire, pomme et ananas et des notes vertes et grasses.

Elle a été jugée intéressante pour sophistiquer les formulations de fruits exotiques naturelles d'autant plus qu'il n'existe pas beaucoup de molécules naturelles disponibles pour atteindre ce but. En particulier la tonalité « Ananas » de la 9-décen-2-one constitue une alternative très attractive pour remplacer le caproate d'allyle, qui est la molécule la plus utilisée actuellement en formulation pour obtenir une tonalité de type ananas.

Exemple 8 : Utilisation en formulation en aromatique alimentaire et en parfumerie.

Dans un arôme de fruits exotiques, l'ajout de 9-décen- 2-one permet d'obtenir une tonalité typiquement « ananas ». Dans la formule suivante le remplacement poids par poids du caproate d'allyle, habituellement utilisé en formulation, par la 9-décen-2-one permet de compenser de manière très avantageuse la tonalité « ananas » conférée par le caproate d'allyle.

Ethyle caproate naturel 50g,

Maltol naturel 20 g,

Isoamyle acétate naturel 35 g,

Ethyle isovalérate naturel 37 g, menthol codex naturel 8 g,

Ethyle méthyl-2-butyrate naturel 75 g,

Ethyle acétate naturel 50g,

Isoamyle butyrate naturel 12 g,

Ethyle butyrate naturel 35 g,

Camphre raffiné 2 g,

9-décen-2-one naturelle 200 g,

Alcool éthylique naturel qsp 1000 g

L'emploi à 50ppm de ce mélange dans une boisson plate avec jus lui confère des notes "ananas" très caractéristiques ; idem lorsqu'on utilise ce mélange à 200 ppm pour typer « ananas » un sorbet .

Toujours en formulation d'arôme alimentaire naturel, la 9- décen-2-one permet d'obtenir des notes « poire »

intéressantes, par exemple dans la formule suivante :

Acide caproique naturel 1 à 10 g,

Isoamylique alcool naturel 20 à 60 g,

Hexylique alcool naturel 10 à 50 g,

Ethyle caprate naturel 20 à 80 g,

Ethyle caprylate naturel 50 à 150 g,

Isoamyle acétate naturel 50 à 150 g,

Propyle acétate naturel 50 à 150 g,

Hexyle acétate naturel 50 à 150 g,

Butyle acétate naturel 50 à 150 g,

Ethyle acétate naturel 50 à 150g,

9-décen-2-one naturelle 20 à 50 g,

Propylène Glycol qsp 1000 g

L'emploi à 100 ppm de ce mélange dans une boisson faiblement sucrée à 5% et légèrement acidulée (0,1% acide citrique) , lui confère des notes "poire" très caractéristiques même si la dose de 9-décen-2-one est très faible (2 à 5 ppm) .

En formulation en parfumerie, la 9-décen-2-one permet de pousser le côté « fleuri, vert, violette » ainsi que la note « aldéhydée fruitée » d'un shampoing, par exemple dans la formule suivante dans laquelle la 9-décen-2-one est utilisée à 1%, ce qui rend la note parfumée du shampoing plus complexe et plus ronde :

Benzyle Acétate 70g,

Alcool Phényléthylique 100g,

Gamma undécalactone 4g,

Ambrettolide cis-iso 10g,

Aldéhyde Anisique 25g,

Bacdanol 80g,

Citronellol 85g,

Ethyl Vanilline 2g,

Geraniol 40g,

Methyl Dihydro Jasmonate 120g,

Oxacyclohexadecen-2-one 100g,

Heliotropine 20g,

2-acetyl-l, 2,3,4,5,6,7, 8-octahydro-2, 3, 8, 8-tetramethyl naphtalene HOg,

Isoeugenol 2g,

4- (1, 1-dimethylethyl) -<a>-methyl-benzenepropanal HOg,

Linalool 60g,

Methyl ionone 30g,

Vanilline 10g,

2-octynoic acid, methyl ester 12g,

9-décen-2-one 10g,

Total 1000 g.

Dans le cas d'une application différente en parfumerie, celle d'un assouplissant, la présence de 9-décen- 2-one dosée à 0,5% donne de la puissance et pousse le côté, fruité « pomme » et « poire » du parfum de l'assouplissant, comme indiqué dans la formule suivante :

Benzyle Acétate 70g,

Phenoxyallyle Acétate 30g,

Alcool Phényléthylique 80g,

Hexylcinnamique Aldéhyde 40g,

Aldéhyde C12 2g,

Ambrettolide cis-iso 60g,

Aldéhyde Anisique 30g,

2-cyclohexylidene-2-phenylacetonitrile 20g,

Bacdanol 50g,

Citronellol 50g,

Coumarine 80g,

Dihydromyrcenol 100g,

Acetic acid, 3a, 4, 5, 6, 7, 7a-hexahydro-4, 7-methano-lH-indenyl ester 65g,

2-acetyl-l, 2,3,4,5,6,7, 8-octahydro- 2, 3, 8, 8-tetramethyl naphtalene 106g,

Methylionantheme 40g,

Essence de Patchouly 30g,

Cyclohexyle Salicylate 100g, Dimethyl 3-cyclohexene-l-carboxaldehyde 8g,

Ambroxan 5% DPG 6g,

Essence de Galbanum 10% DPG 10g,

Indole 10% DPG 8g,

9-decen-l-ol 10% DPG 10g,

9-décen-2-one 5g,

Total 1000 g.

Enfin, dans le cas d'une crème, la 9-décen-2-one confère à celle-ci des notes fleuries accentuées, par exemple dans l'application suivante :

Benzyle acétate 49 g

Hexenyle cis-3-acétate 2 g,

Linalyle acétate 85 g,

Phenyléthylique alcool 65 g,

Gamma undécalactone 6 g,

Allyl amyl glycolate 20 g,

Methyle anthranylate 5 g,

Anisique aldéhyde 10 g,

Methyle benzoate 8 g,

Citronellol 45 g,

Ethyl vanilline 11 g,

Géraniol 35 g,

Methyl hydrojasmonate 130 g,

Heliotropine 5 g,

Hexenol cis 3 2 g,

Ionone alpha 23 g,

Ionone beta 4 g,

2-acetyl-l , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8-octahydro-2 , 3 , 8 , 8-tetramethyl naphtalene 75 g,

4- ( 1 , 1-dimethylethyl ) -<a>-methyl-benzenepropanal 70g,

Linalol 100 g,

Patchouly essence 11 g,

Gamma nonalactone 27 g,

Hexenyle cis-3-salicylate 35 g, Hexyle salicylate 75 g,

Terpinéol 48 g,

Dimethyl 3-cyclohexene-l-carboxaldehyde 4 g, Vanilline 2 g,

Acétyl cédrène 12 g,

Sandalore 12 g,

Butyrate de dimethyl benzyl carbinol 1 g, Methyl 2, 4-dihydroxy-3, 6-dimethylbenzoate 13 g, 9-décen-2-one 10 g.

En présence de 9-décen-2-one, la crème présente plus de tête, avec des notes vertes et fraîches beaucoup plus intenses.

Exemple 9 : Tests de toxicité

La molécule a été testée sur 3 lapins selon le protocole expérimental établi par « the OECD guideline N°404 dated April 24th 2002 » et le test « method B.4 of the Directive N°2004/73/EC) : Acute dermal irritation II en ressort que la 9-décen-2-one n'est pas irritante et qu'aucun symbole ou phrases de risques ne sont requis pour son utilisation (selon the « EEC Directives 67/548/59 and 99/45) .

De la même façon, la molécule a été testée sur 3 lapins selon le protocole expérimental établi par « the OECD guideline N°405 dated April 24th 2002 » et le test « method B.5 of the Directive N°2004/73/EC) : Acute eye irritation II en ressort également que la 9-décen-2-one n'est pas irritante et qu'aucun symbole ou phrases de risques ne sont requis pour son utilisation (selon the « EEC Directives 67/548/59 and 99/45) .

Enfin, la valeur obtenue lors du test LD50 (acute oral toxicity (cf. : la même Directive), soit 2500 mg/kg a permis de classer la molécule comme non dangereuse.

Du fait de son innocuité, il apparaît donc que cette molécule peut être utilisable en formulation et, du fait de sa présence attestée dans la mangue et l'ananas, peut être employée dans des applications en aromatique alimentaire et en Parfumerie pouvant revendiquer un label « naturel».

Bien que la présente invention ait été décrite ci- dessus par le biais d'exemples de ses modes de réalisation préférés, il est entendu qu'elle peut être modifiée sans se détourner de l'esprit et de la nature de l'invention telle que définie dans les revendications annexées .