"Verfahren zur Aufreinigunq von Betainen"

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Reinigung von synthetisch hergestellten chemischen Stoffen, die eine Betain-Struktur im Molekül enthalten.

Insbesondere ist dieses Verfahren zur Aufreinigung von Indocyaningrün (Indocyanine Green), einem in der amerikanischen Pharmacopoee beschriebenen Farbstoff, geeignet. Indocyaningrün ist 2-{7-[1 ,3-dihydro-i , 1-dimethyl-3-(4-sulfobutyl)-2W-benz[e]indol-2-yliden]-

1 ,3,5-heptatrienyl}-1 ,1-dimethyl-3-(4-sulfobutyl)-1H-benz[e]indolinium-hydroxid, Betain-Natriumsalz und wird durch folgende chemische Struktur charakterisiert:

C ₄₃ H ₄ ZN ₂ NaO ₆ S ₂ .

Indocyaningrün stellt einen grünen Farbstoff dar, der in der Medizin u. a zur Diagnostik der Herz-, Kreislauf-, Mikrozirkulations- und Leberfunktion eingesetzt wird.

Die Herstellung von Indocyaningrün erfolgt z.B. durch Kondensation von zwei Indolinium- molekülen unter Verwendung von Natriumjodid. Das Natriumiodid wird dem Syntheseansatz zugefügt, um eine Fällung des Farbstoffes herbeizuführen. Herkömmliche Maßnahmen zur Reduzierung des Natriumiodidgeh altes sind aufwändig und kostenintensiv, was zu deutlich erhöhten Herstellungskosten des Farbstoffes führt. Die diskontin uieriiche Aufarbeitung von Indocyaningrün (ICG) mit Hufe von Kristallisation bzw. Ausfällungen ist nur eingeschränkt möglich, eine großtechnische Aufreinigung des Stoffes ist nahezu unmöglich. Auch chromatographische Methoden zur Aufreinigung von ICG sind zwar im Labormaßstab denkbar, größere Mengen lassen sich jedoch nicht in einem einzigen Arbeitsgang reinigen.

Der vorliegenden Erfindung lag die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Aufretnigung von Betainen, insbesondere von Indocyaningrün, zur Verfügung zu stellen, bei welchem der aus dem Stand der Technik übliche und in großtechnischen Anlagen auch eingeführte Syntheseweg unverändert bleiben kann, so dass nur der Aufreinigungsschritt eine Veränderung erfährt.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist demgemäß ein Verfahren zur Reinigung von chemischen Stoffen sowie von chemischen Verbindungen die eine Betain-Struktur im ^' Molekül enthalten, das dadurch gekennzeichnet ist, dass Reaktionsnebenprodukte, Ausgangsverbindungen und/oder sonstige Verunreinigungen, die in dem ausgewählten organischen Lösungsmittel unlöslich sind, durch Extraktion abgetrennt werden.

Das erfindungsgemäße Verfahren macht sich die Löslichkeitsunterschiede zwischen den Verunreinigungen und Betainen zunutze. Besonders gut geeignet ist das Verfahren zur Aufreinigung von Indocyaningrün, wenn bei dessen Herstellung zur überführung der Säure in das entsprechende Na-SaIz Natriumiodid (NaI) als Fällungsreagenz eingesetzt wird.

Die Verwendung von NaI, das nach den bisherigen Aufreinigungsmethoden noch in mehreren % in handelsüblichen Produkten enthalten sein kann, könnte die Ursache sein, dass Art und Umfang des diagnostischen Einsatzes von ICG Einschränkungen erfahren.

Neben dem Indocyaningrün kommen auch Naturstoffe, die auf diese Weise von anorganischen Verunreinigungen gereinigt werden können, insbesondere Alkaloide des Indol- und Isochinolintyps, für das erfindungsgemäße Verfahren in Betracht.

Die Extraktion wird in einem organischen, vorzugsweise wasserfreien Lösungsmittel, insbesondere in aprotischen Lösungsmitteln (z.B. CH ₂ CI ₂ bzw. Essigester) durchgeführt. Die Möglichkeit, NaI aus Indocyaningrün zu entfernen bzw. davon durch Extraktion abzutrennen, ist insoweit überraschend, da das Indocyaningrün in dem bevorzugt eingesetzten wasserfreien Lösungsmittel CH ₂ CI ₂ nur mäßig löslich, wohingegen NaI unlöslich ist.

Da einige der zu entfernenden Verunreinigungen, wie z. B. anorganische Salze, so auch NaI, in Wasser löslich sind, wird als Lösemittel vorzugsweise wasserfreies Lösemittel eingesetzt. Die Trocknung der wasserfreien Lösemittel kann in an sich bekannter Weise über Molekularsiebe, P ₂ O ₅ etc. erfolgen.

Die erfindungsgemäße Extraktion kann durch Ausschütteln (sequentielle Extraktion) oder kontinuierlich durchgeführt werden. Die sequentielle Extraktion erfolgt üblicherweise in einem Schütteltrichter. Das Ausschütteln der Substanzen ist jedoch relativ umständlich, zeitaufwendig und daher weniger bevorzugt. Vorzugsweise wird daher die Extraktion kontinuierlich durchgeführt. Besonders geeignet ist hierfür die so genannte Soxhlet- Extraktion.

Für die kontinuierliche Extraktion wird das aufzureinigende Gut vorzugsweise in eine für das Lösungsmittel durchlässige Hülse oder ähnliche Aufnahmevorrichtung gegeben und kontinuierlich von Lösemittel knapp unterhalb dessen Siedepunktes durchspült. Dabei werden die löslichen Bestandteile aufgelöst, während unlösliche Bestandteile in der Aufnahmevorrichtung zurückbleiben d.h. bei der Aufreinigung von Indocyaningrün wird diese Verbindung von dem Extraktionslösungsmittel gelöst und aus der Vorlage entfernt, während im verwendeten Lösungsmittel unlösliche Substanzen, z. B. NaI, zurückbleiben.

Beispiel

Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wurde ein aus einer üblichen Industrieproduktion erhältliches Indocyaningrün, das 4,6 % NaI enthielt, in einer Soxhlet- Apparatur der kontinuierlichen Extraktion unterworfen.

Zur Herstellung von wasserfreiem Methylenchloήd wurden 500 ml Methylenchlorid über Molekularsieb (4 ä von der Fa. Roth, 0,4 nm, Perlform) getrocknet und anschließend destilliert. 100 ml des Vorlaufs wurden verworfen, so dass für die nachfolgende kontinuierliche Extraktion ca. 400 ml gereinigtes und getrocknetes Methylenchlorid zur Verfügung standen.

266 mg Indocyaningrün wurden in eine für die Soxhlet-Apparatur geeignete Papierhülse eingewogen. Als Vorlage wurden 250 ml des gereinigten und getrockneten Methylenchlorids in einen 500 ml-Kolben gegeben. Die Apparatur enthielt weiter einen Rückflusskühler und ein darauf gesetztes, mit CaCI ₂ gefülltes Trockenrohr. Die Extraktion wurde über einen Zeitraum von 30 Stunden bei einer Wasserbadtemperatur von 48 ⁰ C durchgeführt. Anschließend wurde die erhaltene tiefgrüne Lösung am Rotationsverdampfer eingeengt und lyophilisiert.

Das erhaltene Indocyaningrün enthielt < 0,4 % NaI. Diese Menge liegt um mehr als das 10- fache unterhalb des von der USP festgelegten Toleranzbereiches für die parenterale Anwendung von Indocyaningrün (Indocyanine Green for Injection).

Extraktionen mit Lösungsmitteln wie Aceton führten dazu, dass NaI, welches in diesen in gewissem Umfang löslich ist, mit extrahiert wurde.

Die Extraktion mit Lösungen kleiner wie z.B. die Extraktion mit Aceton, Chloroform, Cyclohexan und Heptan führte zu keiner Trennung der Stoffe Indocyaningrün und NaI.