Chacun des documents précités rapporte un procédé de synthèse de la 7a-OH-DHEA.

Le document FR-A1-2 771 105 décrit un procédé pour la préparation de la 7a-OH- DHEA en une étape à partir de la déhydroépiandrostérone (DHEA) en utilisant un champignon : Fusarium moniliforme. Ce procédé de bioconversion permet la transformation directe de la DHEA en son dérivé 7-alpha-hydroxylé avec un rendement de 79%.

Ce procédé permet la préparation en une seule étape de la 7a-hydroxy-DHEA, mais il utilise le Fusarium moniliforme qui est un champignon microscopique phytopathogène.

Ce champignon s'attaque au maïs, au sorgho (voir notamment un document publié sur Internet sur le site : http ://pested. unl. edu/catmans/fum. skp/fumchp8. htm).

En outre, Fusarium moniliforme sécrète des toxines oncogènes qui peuvent se révéler très dangereuses pour l'homme (voir notamment un document publié sur Internet sur le site : http ://www. hsafety. unc. edu/ManuaIs/LabManual/app7a. htm).

Les documents WO-A1-94/03176 et WO-A1-92/03925 décrivent un procédé par voie chimique en 4 étapes, pour la préparation de la 7a-OH-DHEA à partir de la 3-O-acétyl- DHEA.

La première étape de ce procédé permet l'obtention de la 3-O-acétyl-7-Bromo-DHEA à partir de la 3-O-acétyl-DHEA (produit de départ commercial) par traitement avec un agent bromant. Le mélange d'isomères 3-O-acétyl-7-Bromo-DHEA obtenu est instable et doit être rapidement utilisé dans la suite du procédé.

Dans une seconde étape, le mélange racémique d'isomères 7a-Bromo et 7>Bromo est équilibré de manière à obtenir l'isomère 7a-Bromo (isomère thermodynamiquement le plus stable) sous forme majoritaire.

Après équilibration, la 3-O-acétyl-7-Bromo-DHEA traitée avec un mélange d'acide acétique glacial et d'acétate d'argent permet l'obtention du 3-O-acétyl-7a-O-acétyl- DHEA.

Le 3-O-acétyl-7a-O-acétyl-DHEA traité par du carbonate de sodium (Na2CO3) dans un mélange constitué d'eau et de méthanol donne la 7a-OH-DHEA qui est alors purifiée par cristallisation.

Ce procédé de synthèse en 4 étapes présente l'inconvénient majeur de nécessiter une étape de bromation (deuxième étape) non stéréosélective, qui conduit à des intermédiaires bromés instables. En outre, le procédé nécessite une étape d'équilibration, qui permet d'obtenir l'isomère thermodynamique (7a-Bromo-3-O-acétyl- DHEA) de manière prédominante. L'étape d'équilibration telle que décrite dans les documents WO-A1-94/03176 et WO-A1-92/03925 est ambiguë car la proportion relative des isomères 7a-et 7*Bromo-3-O-acétyl-DHEA obtenue après équilibration n'est pas précisée.

II est également à noter que le procédé décrit ne rapporte pas de rendement obtenu et ne précise pas la pureté optique de la 7a-OH-DHEA qui est obtenue, ce composé étant seulement documenté par son point de fusion, après recristallisation (192-193°C).

En outre, les conditions de désacétalisation qui sont rapportées dans l'art antérieur ne permettent pas d'obtenir de manière satisfaisante la 7a-OH-DHEA à partir de la 3-O- acétyl-7a-OH-DHEA.

Ces conditions consistent : - soit en une méthode classique de saponification en utilisant de la soude en milieu aqueux, - soit en une méthode décrite dans les documents WO-A1-94/03176 et WO-A1- 92/03925 et consistant en une réaction de double désacétalisation de la 3-O-acétyl-

7-O-acétyl-DHEA par traitement avec du carbonate de sodium dans un mélange constitué d'eau et de méthanol.

Ces méthodes, appliquées à la réaction de désacétalisation de la 3-O-acétyl-7-O-acétyl- DHEA ou de la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA, conduisent à des mélanges de produits dans lesquels on retrouve majoritairement la 7a-OH-DHEA. En effet, les conditions réactionnelles utilisées ne sont pas adaptées et conduisent à la formation de produits de décomposition comprenant notamment ceux issus de la déshydratation de l'alcool en position 7 de la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA.

On comprend donc l'intérêt de mettre en oeuvre des procédés permettant la préparation de la 7a-OH-DHEA de manière simple, rapide avec des rendements industriellement acceptables et présentant une diastéréosélectivité ne nécessitant pas d'étape d'équilibration ou d'élimination du diastéréoisomère minoritaire (7 (3-OH), les, procédés présentant de plus l'avantage de ne pas faire intervenir de microorganisme phytopathogène et/ou oncogène.

En outre, les procédés suivant la présente invention présentent également l'avantage de comporter une réaction de désacétalisation permettant d'obtenir la 7a-OH-DHEA à partir de la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA dans des conditions satisfaisante sans formation de produits de décomposition.

C'est le but de la présente invention qui a pour objets de proposer de nouveaux procédés de synthèse de la DHEA.

L'objet de la présente invention se rapporte à un procédé de préparation de la 7a-OH- DHEA de formule (1) à partir de la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA de formule (4) suivant une étape (iii) consistant en une réaction de trans-estérification en utilisant un alkolate de métal alcalin dans l'alcool correspondant.

La réaction de trans-estérification qui est utilisée dans le procédé de l'invention consiste essentiellement à : a) dissoudre la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA dans un solvant alcoolique choisi parmi l'éthanol, le méthanol ou le tert-butanol, de préférence le méthanol ; b) ajouter entre 1 et 3 équivalents, de préférence entre 1,5 et 3 équivalents, avantageusement 1 équivalent d'un alkolate de métal alcalin, l'alkolate étant choisi

de préférence parmi l'éthanolate, le tert-butanolate ou le méthanolate, avantageusement le méthanolate, le métal alcalin étant choisi de préférence parmi le lithium, le sodium ou le potassium, avantageusement le sodium ; c) agiter le milieu réactionnel pendant une durée comprise entre 0,5 et 12h, de préférence entre 1 h et 5h, avantageusement pendant 2h ; d) évaporer le solvant réactionnel et diluer avec de l'eau, puis extraire le mélange avec un solvant choisi de préférence parmi le dichlorométhane, l'acétate d'éthyle, le chloroforme ou le diéthyléther, et avantageusement le dichlorométhane ; e) sécher la phase organique est puis l'évaporer à sec ; éventuellement purifier le résidu, par exemple par chromatographie.

Avantageusement, l'invention se rapporte à un procédé de préparation de la 7a-OH- DHEA de formule (1) à partir de la 3-O-acétyl 7-oxo DHEA de formule (3) comprenant l'étape (iii) telle que définie précédemment, caractérisé en ce que l'étape (iii) est précédée d'une étape (ii) consistant en une réduction régiosélective et diastéréosélective de la 3-O-acétyl-7-oxo-DHEA en utilisant le L-Selectride comme agent réducteur.

Selon une forme préférée d'exécution de l'invention, la réduction de l'énone de la 3-O- acétyl-7-oxo-DHEA de formule (3) peut être réalisée de manière régiosélective et diastéréosélective, sans protection préalable du carbonyle en position 17, en utilisant comme agent réducteur le L-Selectride@) ou Lithium tri-sec-butylborohydride (LiBlCH (CH3) C2H5] 3H), suivant une méthode décrite dans le document Steroids, 1998,63,454-458 qui a été modifiée.

Cette méthode consiste essentiellement à : a) préparer une solution de 3-O-acétyl 7-oxo DHEA dans un solvant polaire organique anhydre choisi parmi le tétrahydrofurane (THF), le benzène ou le diéthyléther, de préférence le THF ; b) refroidir la solution à une température comprise entre-90 et-10°C, de préférence entre-80 et-60°C, avantageusement à-78°C ; c) ajouter sous atmosphère inerte entre 0,9 et 1,1 équivalents de L-Selectride, de préférence entre 0,95 et 1,05, avantageusement 1 équivalent ;

d) agiter la solution à une température comprise entre-90 et-10°C, de préférence entre-80 et-60°C, avantageusement à-78°C pendant une durée comprise entre 1 et 10h, de préférence pendant 5h ; e) porter la température du milieu réactionnel à une température comprise entre-10 et 10°C, de préférence à 0°C ; ajouter une solution aqueuse de soude (NaOH), de préférence à une concentration comprise entre 1 et 10M, avantageusement 6M, puis une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène (H202), de préférence à 30 à 50%, avantageusement à 30%, et agiter à température ambiante ; g) diluer le milieu réactionnel dans un solvant polaire organique choisi parmi le diéthyléther, l'acétate d'éthyle, le chloroforme ou le dichlorométhane, de préférence le diéthyléther ; h) laver plusieurs fois par lavage aqueux acides, de préférence avec au moins une solution aqueuse à l'acide citrique à 5%, puis lavage avec au moins une solution aqueuse basique, de préférence avec une solution de bicarbonate de potassium (KHC03) saturé puis lavage avec au moins une solution aqueuse neutre ; i) sécher la phase organique puis l'évaporer à sec ; j) éventuellement purifier le résidu, par exemple par chromatographie.

Avantageusement, l'invention se rapporte à un procédé de préparation de la 7a-OH- DHEA de formule (1) à partir de la 3-O-acétyl-DHEA de formule (2) comprenant les étapes (iii) et (ii) telle que décrite précédemment, caractérisé en ce que l'étape (ii) est précédée d'une étape (i) consistant en une réaction d'oxydation en position allylique de la 3-O-acétyl-DHEA.

La figure 1 illustre ce procédé de synthèse en 3 étapes de la 7a-OH-DHEA suivant l'invention.

Selon l'invention, une première forme préférée d'exécution de la réaction d'oxydation en position allylique de la 3-O-acétyl-DHEA de formule (2) est effectuée selon une méthode décrite dans le document Tetrahedron Letters, 1997,38,119-122, qui a été modifiée. Ce document décrit une méthode d'oxydation allylique par un peroxyde en présence de sel de cuivre comme catalyseur sur des squelettes stéroïdiens.

Cette méthode consiste essentiellement à : a) dissoudre la 3-O-acétyl-DHEA dans un solvant organique ou un mélange de solvants organiques, de préférence choisi parmi l'acétonitrile, le cyclohexane, le benzène, le méthanol, l'éthanol ou le tert-butanol, avantageusement l'acétonitrile ; b) ajouter sous atmosphère inerte entre 0,005 et 0,1 équivalents de cuivre, de préférence 0,01 équivalents, de préférence sous forme de sel de cuivre, par exemple choisi parmi le iodure de cuivre (Cul), le bromure de cuivre (CuBr), le chlorure de cuivre (CuCI), le chlorure de cuivre Il (CuCtz), avantageusement Cul c) refroidir le milieu réactionnel à une température comprise entre-10 et 10°C, avantageusement comprise entre 5 et 10°C ; d) ajouter goutte à goutte entre 5 et 10 équivalents, de préférence 6 équivalents de peroxyde organique ou minéral, de préférence organique, par exemple choisi parmi les alkyls hydroperoxyde, avantageusement le t-butyl hydroperoxyde (t-BuOOH) ; e) laisser la température du milieu réactionnel remonter à température ambiante et agiter pendant une durée comprise entre 0,5 et 4h, de préférence 2h ; chauffer à une température comprise entre 40 et 80°C, de préférence entre 50 et 70°C, avantageusement à 50°C, pendant une durée comprise entre 4 et 72h, de préférence entre 16 et 24h, avantageusement pendant 20h ; g) refroidir le milieu réactionnel et l'ajouter à une solution aqueuse alcaline, de préférence une solution de bicarbonate de sodium (NaHCO3) à 10% ; h) extraire la phase aqueuse par un solvant organique, par exemple choisi parmi le diéthyléther, l'acétate d'éthyle, le chloroforme, le dichlorométhane, de préférence le diéthyléther, puis laver les phases organiques avec une solution aqueuse alcaline, de préférence une solution aqueuse saturée en NaHCO3, et éventuellement avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium (NaCI) ; i) sécher les phases organiques et les évaporer à sec sous vide ; j) éventuellement purifier le résidu suivant des méthodes usuelles.

Selon l'invention, une seconde forme préférée d'exécution de la réaction d'oxydation en position allylique de la 3-O-acétyl-DHEA de formule (2) est effectuée selon une méthode décrite dans les documents WO 92/03925 et WO 94/03176, qui a été modifiée. Ces documents décrivent une méthode d'oxydation allylique de la 3-O-acétyl-

DHEA par un mélange d'anhydride d'acide, d'acide acétique et d'acétate de sodium en présence de trioxyde de chrome (CrO3).

Cette méthode consiste essentiellement à : a) préparer un mélange constitué de 3-O-acétyl-DHEA ; d'anhydride d'acide, en quantité de préférence comprise entre 3 et 20 équivalents, avantageusement 11 équivalents ; d'acide acétique, en quantité de préférence comprise 20 et 120 équivalents, avantageusement 66 équivalents ; d'acétate de sodium, en quantité de préférence comprise 1 et 5 équivalents, avantageusement 3 équivalents ; b) placer sous agitation le milieu réactionnel et chauffer à une température comprise entre 40 et 60°C, de préférence entre 56 et 58°C ; c) ajouter entre 1 et 10 équivalents d'un oxyde, de préférence entre 2 et 6 équivalents, avantageusement 3,5 équivalents, l'oxyde pouvant être choisi parmi un oxyde de chrome, de manganèse, de sélénium ou de magnésium, de préférence c'est un oxyde de chrome, avantageusement le trioxyde de chrome (Cr03) ; d) maintenir le milieu réactionnel sous agitation pendant une durée comprise entre 0,5 et 4h, de préférence pendant 1 h à une température comprise entre 40 et 60°C, de préférence entre 56 et 58°C ; e) refroidir le milieu réactionnel et l'ajouter, sous agitation, à une solution constituée d'eau et de glace ; f) filtrer le précipité obtenu puis le laver plusieurs fois à l'eau ; g) sécher le résidu et éventuellement le purifier suivant des méthodes usuelles, de préférence le produit est recristallisé.

Selon l'invention, une troisième forme préférée d'exécution de la réaction d'oxydation en position allylique de la 3-O-acétyl-DHEA de formule (2) est effectuée suivant une méthode décrite dans le document WO 98/50409, qui a été modifiée. Ce document décrit une méthode d'oxydation allylique en utilisant un périodate d'un métal alcalin et un hydroperoxyde d'alkyle.

Cette méthode consiste essentiellement à : a) dissoudre la 3-O-acétyl-DHEA de formule (2) dans un solvant organique ou un mélange de solvant organique, de préférence choisi parmi l'acétone, l'heptane, l'acétonitrile, le tert-butanol, la pyridine, l'éther de pétrole, l'hexane, l'isooctane ou le

cyclohexane, avantageusement dans un mélange constitué d'acétone et d'heptane, très préférentiellement dans un rapport 1/1 ; b) ajouter entre 10 et 15 équivalents d'hydroperoxyde d'alkyle, avantageusement le t- butyl-hydroperoxyde, préférentiellement à 70 ou 80% dans l'eau c) agiter à température ambiante et ajouter entre 1 et 5 équivalents, de préférence 3 équivalents, de périodate de métaux alcalins, avantageusement le périodate de sodium (Na104) ; d) ajouter de l'eau en une quantité suffisante pour permettre une solubilisation totale du périodate dans le milieu réactionnel, avantageusement entre 10 et 50% en volume, préférentiellement entre 15 et 40% en volume, très préférentiellement entre 20 et 30% en volume ; e) ajouter entre 1 et 5 équivalents, de préférence 3 équivalents, d'une base organique, de préférence de la pyridine ou une base faible inorganique, de préférence choisie parmi les carbonates ou les bicarbonates de métaux alcalins, avantageusement le bicarbonate de sodium ; agiter la solution pendant une durée comprise entre 8 et 48 h, de préférence pendant 14h à température ambiante ; g) diluer le milieu réactionnel avec de l'acétate d'éthyle, du dichlorométhane, du chloroforme ou du diéthyléther, préférentiellement de l'acétate d'éthyle ; h) laver plusieurs fois le mélange avec une solution aqueuse de sulfate sodium, puis avec de l'eau ; i) sécher la phase organique puis l'évaporer à sec ; j) éventuellement purifier le résidu suivant des méthodes usuelles, de préférence par recristallisation.

Selon l'invention, par atmosphère inerte, on entend l'argon ou l'azote et par température ambiante, on entend une température comprise entre 15 et 25 °C.

Les méthodes de purification pouvant éventuellement être mises en oeuvre à la fin de chacune des étapes des procédés suivant l'invention sont réalisées selon des méthodes classiques utilisées en synthèse organique.

Comme mentionné précédemment, la réaction de réduction de la 3-O-acétyl-DHEA par le L-Selectride est diastéréosélective : le diastéréoisomère obtenu sélectivement est la

3-O-acétyl-7a-OH-DHEA. En revanche, la réaction de réduction de la 3-O-acétyl-DHEA par le L-Selectride peut générer une quantité non négligeable de produit réduit en position 7 et 17. Ce produit secondaire peut être facilement éliminé, par exemple par chromatographie, à ce stade ou après la réaction transestérification selon l'étape (iii).

Cependant, afin d'éviter la formation du produit réduit en position 7 et 17 lors de l'étape (ii), un procédé de préparation de la 7a-OH-DHEA suivant la présente invention peut en outre comprendre des étapes supplémentaires de protection puis de déprotection du carbonyle en position 17 de l'espèce réagissant.

Ainsi, l'invention se rapporte avantageusement à un procédé de préparation de la 7alpha-hydroxy-déhydroépiandrostérone de formule (1), à partir de la 3-O-acétyl- déhydroépiandrostérone comprenant les étapes (i), (ii) et (iii) telles que décrites précédemment, caractérisé en ce qu'il comprend en outre les étapes supplémentaires suivantes : (iv) une réaction de protection du carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-DHEA avant l'étape (i) ; (v) une réaction de déprotection du carbonyle en position 17 du dérivé obtenu après l'étape (ii), la dite réaction de déprotection ayant lieu avant l'étape (iii).

La protection du carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-DHEA peut être réalisée suivant des méthodes classiquement utilisées en synthèse organique et bien connues de l'homme du métier comme par exemple celles décrites dans le document Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene, P. G. M. Wuts (Wiley Interscience).

Selon l'invention, le carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-DHEA peut être protégé sous forme d'acétal cyclique ou non cyclique, de dithio acétal cyclique ou non cyclique, de monothio acétal, de cyanohydrine 0-substituée, d'hydrazone substituée, d'imine, d'énamine, d'imidazolidine ou de benzothiazole.

Avantageusement, le carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-DHEA peut être protégé sous forme d'acétal cyclique ou non cyclique, de dithio acétal cyclique ou non cyclique d'imine, d'énamine ou d'imidazolidine.

Selon l'invention, une première forme préférée d'exécution de la protection du carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-DHEA selon l'étape (iv), peut être réalisée en protégeant le carbonyle en position 17 sous forme d'acétal cyclique suivant une méthode décrite dans le document Synth. Comm. 1995,25,395-404, qui a été modifiée.

Cette méthode consiste essentiellement à : a) préparer une solution constituée de 3-O-acétyl-DHEA de formule (2), un diol, de préférence d'éthylène glycol et un excès de desséchant, de préférence choisi parmi le tamis moléculaire ou l'orthoformiate d'éthyle, de préférence l'orthoformiate d'éthyle, avantageusement dans un rapport respectif de 1 mmol/3 ml/2 ml ; b) ajouter une quantité catalytique de proton ayant avantageusement comme source l'acide paratoluènesulfonique ou des résines échangeuses d'ions ; c) agiter le mélange à une température comprise entre 30 et 60 °C,-de préférence à 40°C pendant une durée comprise entre 1 et 8h, de préférence à 3h ; d) amener la température du milieu réactionnel à température ambiante ; e) ajouter une solution aqueuse de NaHCO3 ; extraire le mélange avec un solvant choisi parmi le dichlorométhane, le chloroforme, l'acétate d'éthyle ou le diéthyléther, de préférence avec du dichlorométhane ; g) laver la phase organique, la sécher puis l'évaporer à sec ; h) éventuellement purifier le résidu suivant des méthodes usuelles, de préférence par chromatographie sur gel de silice.

Selon l'invention, une seconde forme préférée d'exécution de'la protection du carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-DHEA selon l'étape (iv), peut être réalisée en protégeant le carbonyle en position 17 sous forme d'acétal cyclique suivant une méthode de distillation azéotropique décrite dans le document Synth. Comm. 1995,25,395-404, qui a été modifiée.

Cette méthode consiste essentiellement à : a) porter à reflux un mélange constitué de 3-O-acétyl DHEA de formule (2), d'éthylène glycol et d'acide paratoluènesulfonique (pTsOH) en solution dans du benzène, de préférence dans un rapport respectif de 1 mmol/5 ml/0, 1 mmol/20 ml, dans un montage permettant de réaliser une distillation azéotropique, de préférence équipé d'un Dean-Stark ; b) chauffer à une température comprise entre 80 et 100°C, de préférence à reflux du benzène, pendant une durée comprise entre 4 et 48h, de préférence pendant 24h ;

c) laisser revenir la température du milieu réactionnel à température ambiante d) sécher la phase organique puis l'évaporer à sec ; e) éventuellement purifier le résidu suivant des méthodes usuelles, de préférence par recristallisation.

Les méthodes de déprotection du carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-7a-hydroxy- DHEA protégée en position 17 peuvent être réalisées suivant des méthodes classiquement utilisées en synthèse organique et bien connues de l'homme du métier comme par exemple celles décrites dans le document Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene, P. G. M. Wuts (wiles Interscience).

Ainsi, selon l'invention, une première forme préférée d'exécution de la déprotection du carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-7a-hydroxy-DHEA protégée en position 17 sous forme d'acétal, de préférence cyclique, selon l'étape (v) peut être réalisée suivant une méthode décrite dans le document Steroids 1996,61,453-460, qui a été modifiée.

Cette méthode consiste essentiellement à : a) dissoudre la 3-O-acétyl-7a-hydroxy-DHEA protégée en position 17 sous forme d'acétal, dans un mélange comprenant de l'eau et un solvant miscible à l'eau, de préférence de l'acétone, de préférence dans un rapport 1/1 en volume ; b) ajouter de l'acide paratoluènesulfonique (p-TsOH), de préférence 1 équivalent ; c) agiter la solution pendant une durée comprise entre 4 et 48h, préférentiellement 24h à température ambiante ; d) évaporer sous vide le solvant miscible à l'eau ; e) diluer le milieu réactionnel avec un solvant organique, de préférence choisi parmi l'acétate d'éthyle, le dichlorométhane, le chloroforme ou du diéthyléther, avantageusement l'acétate d'éthyle, puis laver plusieurs fois avec de l'eau sécher la phase organique puis l'évaporer à sec ; g) éventuellement purifier le résidu suivant des méthodes usuelles, de préférence par recristallisation.

Selon l'invention, une seconde forme préférée d'exécution de la déprotection du carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-7a-hydroxy-DHEA protégée en position 17 sous forme d'acétal, de préférence cyclique, selon l'étape (v) peut être réalisée suivant une méthode décrite dans le document Steroids 1996,61,453-460, qui a été modifiée.

Ainsi, selon cette autre forme préférée de l'invention, le carbonyle en position 17 de la 3-O-acétyl-7a-hydroxy-DHEA protégée en position 17 sous forme d'acétal, de préférence cyclique, est déprotégé suivant une méthode décrite dans le document Synth. Comm. 1995,25,395-404, qui a été modifiée.

Cette méthode consiste essentiellement à : a) préparer une solution constituée de 3-O-acétyl-7a-hydroxy-DHEA protégée en position 17 sous forme d'acétal, de préférence cyclique, correspondant avantageusement à la 1,3-dioxolane ou à la 1,3-dioxane, dans un solvant organique choisi parmi le benzène, le chloroforme ou le dichlorométhane, préférentiellement du chloroforme ; b) ajouter du sulfate de cuivre adsorbé sur de la silice en une quantité comprise entre 2 et 4g, de préférence 2,5g par mmol de 3-O-acétyl-7a-hydroxy-DHEA protégée en position 17 sous forme d'acétal ; c) agiter le milieu réactionnel pendant une durée comprise entre 1 à 48h, de préférence entre 2 et 20h, avantageusement 6h à une température comprise entre 20 et 80°C, de préférence entre 50 et 70°C, avantageusement à 60°C ; d) filtrer la silice et concentrer à sec ; e) éventuellement purifier le résidu suivant des méthodes usuelles, de préférence par recristallisation.

L'invention est illustrée plus en détail dans les exemples suivants qui décrivent les différentes étapes du procédé suivant l'invention.

Exempte 1 : Synthèse de la 3-O-acétyl-7-oxo-DHEA de formule (3)

Méthode 1 : On prépare une solution de 10g de 3-O-acétyl-DHEA dans 200ml d'acétonitrile. On ajoute sous atmosphère inerte 60 mg de Cul. On refroidit la solution entre 5 et 10°C et on ajoute goutte à goutte 19,6 ml de t-BuOOH à 80%. A la fin de l'addition, on laisse la température du milieu réactionnel remonter à température ambiante et on agite pendant 2h, puis on chauffe à 50°C pendant 20h. On refroidit ensuite le milieu réactionnel et on le verse sur 300g de solution de bicarbonate de sodium (NaHCO3) à 10%. On extrait 3 fois avec de le diéthyléther puis on lave la solution organique avec une solution de NaHCO3 saturée, puis une solution de chlorure de sodium (NaCI) saturée. Après séchage et évaporation à sec, on obtient le produit brut sous forme de solide. Le résidu est recristallisé dans un mélange acétone/hexane.

Point de fusion : 190°-192°C ; - Rendement : 91% ; - [a] d =-76° (méthanol) ; -'H RMN et spectrométrie de masse conforme.

Méthode 2 : On prépare une solution constituée par un mélange de 6,5 ml d'anhydride acétique (AczO), 23 ml d'acide acétique (AcOH), 1,7g d'acétate de sodium (AcONa) et 2g de 3- O-acétyl-DHEA. On agite et on chauffe le milieu réactionnel entre 56 et 58°C. On ajoute ensuite 2g de trioxyde de chrome (Cr03) pendant 30 minutes en maintenant la température constante entre 56°-58°C. La solution est agitée à cette température pendant 1 h après la fin de l'addition, puis refroidie et lentement ajoutée (tout en agitant) à une solution de 600 ml d'eau glacée. On filtre le précipité, que l'on lave avec de l'eau jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de couleur verte. On sèche sous vide avec du dipentaoxyde de phosphore (P205), et on recristallisé dans le méthanol pour obtenir le produit de formule (3) sous forme de solide.

- Point de fusion : 191-192°C ; - Rendement : 50-70% Exemple 2 : Synthèse de la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA de formule (4)

On prépare une solution de 300mg de 3-O-acétyl-7-oxo-DHEA dans 20ml THF anhydre que l'on refroidit à-78°C. On ajoute goutte à goutte et sous atmosphère inerte 0,78 mi de L-Selectride commercialisé par la Société Aldrich (1M dans le THF). La solution est agitée à-78°C pendant 5h. Le milieu réactionnel est amené à 0°C et on ajoute 0,9 ml d'une solution de NaOH (6M), puis 0,9 ml de H202 (30%) et on agite 30 minutes à température ambiante. On dilue dans 120 ml de diéthyléther. Après plusieurs lavages aqueux acides (acide citrique 5%), basiques (KHCO3 saturé) et neutres, la solution organique est séchée puis évaporée à sec.

Le résidu comprend la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA (diastéréoisomère obtenu sélectivement) et environ 10% du produit réduit en position 7 et 17. Le diastéréoisomère 7ß-OH n'a pas été identifié dans le mélange.

Le résidu est purifié par chromatographie pour conduire à la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA sous forme solide.

- Rendement = 70 % ; -'H RMN et spectrométrie de masse conforme.

Exemple 3 : Synthèse de la 7a-OH-DHEA de formule (1)

On prépare une solution de 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA dans du méthanol. On ajoute 1 équivalent molaire de méthanolate de sodium (MeONa) et on agite pendant une durée comprise entre 3 à 12h. On évapore le méthanol, on dilue avec de l'eau et on extrait avec du dichlorométhane. La solution organique est séchée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie pour conduire à la 7a-OH-DHEA sous forme solide.

- Rendement : 70% ; - [a] d =-66° (méthanol) ; - Point de fusion : 172-173°C ; -'H RMN et spectrométrie de masse conforme.

Exemple 4 : Synthèse de la 3-O-acétyl-17, 17-éthylènedioxy-DHEA On prépare une solution de 1mmol de 3-O-acétyl DHEA dans 3ml d'éthylène glycol et 2ml d'orthoformiate d'éthyle. On ajoute une quantité catalytique de p-TsOH et on agite à 40°C pendant 3h. On refroidit à température ambiante et on ajoute une solution de NaHCO3 à 10%. On extrait 3 fois avec du dichlorométhane puis on lave la solution organique avec une solution de NaCI saturée. Après séchage et évaporation à sec on obtient le produit brut sous forme de solide. Le résidu est purifié sur gel de silice (EtOAC/Hexane, 17/83).

- Rendement : 77% ; - Point de fusion = 135-137°C (MeOH).

Exemple 5 : Synthèse de la 3-O-acétyl-7-oxo-17, 17-éthylènedioxy-DHEA

On prépare une solution de 374mg de 3-O-acétyl-17, 17-éthylènedioxy-DHEA dans 3,5 ml d'acétone et 3,5 ml d'heptane. On ajoute 2ml de t-butyl hydroperoxyde (70% dans l'eau) et on agite à température ambiante pendant 15 minutes, après lesquelles on ajoute du Na104 (650 mg), de l'eau (0,9 mi) et du bicarbonate de sodium (55 mg). Cette solution est ensuite agitée pendant 14h à température ambiante. Le milieu réactionnel est dilué avec de l'acétate d'éthyle (10ml), et lavée avec de l'eau, puis 2 fois avec une solution aqueuse de sulfate de sodium à 15%, puis de l'eau. Après évaporation du solvant, on obtient le produit brut sous forme solide, qui est recristallisé dans du méthanol.

- Rendement : 67% ; - Point de fusion : 182-183°C (MeOH) Exemple 6 : Synthèse de la 3-O-acétyl-7a-hydroxy-17, 17-éthylènedioxy-DHEA On prépare une solution de 800mg de 3-O-acétyl-7-oxo-17, 17-éthylènedioxy-DHEA dans 20ml de THF anhydre que l'on refroidit à-78°C. On ajoute goutte à goutte et sous atmosphère inerte 2 ml de L-Selectride (1M dans le THF). La solution est agitée à- 78°C pendant 5h. Le milieu réactionnel est porté à 0°C et on ajoute 0,9 ml d'une

solution de NaOH (6M), puis 2,25 ml de H202 (30%) et on agite 30 minutes à température ambiante. On dilue dans 120 ml de diéthyléther. Après plusieurs lavages acides (acide citrique 5%), basiques (KHCO3 saturé) et neutres, la solution organique est séchée puis évaporée à sec.

Le résidu obtenu, dans lequel le diastéréoisomère 7-hydroxy n'a pas été identifié, est purifié par chromatographie pour conduire à la 3-O-acétyl-7a-hydroxy-17, 17- éthylènedioxy-DHEA sous forme solide, que l'on purifie sur gel de silice (EtOAc/ Hexane : 35/65).

- Rendement = 75 %.

- Point de fusion : 170-171 °C Exemple 7 : Synthèse dé la 3-O-acétyl-7a-OH-DHEA de formule (4) (4) On prépare une solution de 1 mmol de 3-O-acétyl-7a-hydroxy-17, 17-éthylènedioxy- DHEA dans un mélange acétone/eau (dans un rapport 1/1 en volume) et on ajoute le p-TsOH (1 équivalent). La solution est agitée pendant 24h à température ambiante.

Puis l'acétone est évaporé sous vide. Le milieu réactionnel est dilué avec de l'acétate d'éthyle puis lavé plusieurs fois avec de l'eau. La phase organique est séchée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie et recristallisé.

- Rendement : 95% ; - Point de fusion : 168-169°C (acétone/hexane)