苦瓜 MC-JJ6多肽及其应用与微波促进固相合成方法 技术领域

本发明涉及 MC-JJ6多肽及其应用与 MC- JJ6多肽的微波促进固相合成方法。 背景技术

糖尿病是当今危害人类健康的重要疾病， 目前全世界约有 5%- 7%的人受糖尿病困扰。 因此糖尿病被认为 是继心脑血管疾病、 恶性肿瘤之后， 导致人类伤残、 死亡的第三大杀手。

糖尿病分为 I型和 II型。 I型糖尿病是一种自身免疫疾病， 指的是因自身免疫等原因引起的胰岛素缺 乏， 易发生酮症， 必须用胰岛素治疗， 多见于青少年。 这型糖尿病较少见， 仅占 5%左右。 II型糖尿病占糖 尿病患者总数的 95%左右。 II 型糖尿病的原因是胰岛细胞代谢发生障碍， 胰岛素分泌不足， 或者产生胰岛 素抵抗， 是以胰岛素抵抗为主伴胰岛素分泌相对不足， 或者以胰岛素分泌相对不足为主伴胰岛素抵抗 导致 的代谢性疾病。 胰岛素分泌不足， 或者产生胰岛素抵抗都可造成血液中葡萄糖过 量， 当血糖含量超过肾阈 时， 葡萄糖就转移到尿中排出， 从而产生葡萄糖尿。

目前临床应用的几种药物均不能够治愈糖尿病 ， 主要是通过不同的作用机制， 降低患者的血糖水平。 糖尿病患者必须终生服药， 药物本身对人体的毒副作用同样威胁着糖尿病 人的健康。 在中国， 目前使用药 物能够控制血糖达到正常标准的， 还不到糖尿病患者总数的 20%( 2 型糖尿病的祸首一胰岛素抵抗， 大众 医学， 2002， (6) : 17， 邹大进著）， 直接导致了许多糖尿病患者的并发症发生早， 进展快。 显然， 除了筛 选更加安全有效的新型药物之外， 寻找其它的辅助治疗手段有效控制血糖水平， 对于提高糖尿病人的健康 水平同样是十分重要的。

苦瓜 (Momordica charantia)是一种人类有长期安全食用历史的蔬� �。 近二十年来， 人们在苦瓜的果实 中发现了许多具有降血糖活性的成分， 一些苦瓜果实的提取物， 或者直接用苦瓜果实干燥后制成的茶饮料， 己经推荐给糖尿病人使用， 某些苦瓜成分已经被申请作为治疗糖尿病药物 的专利。 但是， 从科技文献中介 绍以及己有的专利或产品， 主要是基于对苦瓜诸多降血糖活性成分中对某 个已知成分的认识， 并没有意识 到， 苦瓜中具有降血糖活性的成分己知的就有多种 ， 并且化学性质各不相同， 此外， 苦瓜中还有某些具有 降血糖的活性成分是未知的。 所以， 已有的文献、 专利或产品， 其局限性也是明显的。

美国专利 US 6391854B1和中国专利 CN 98805001 (苦瓜中的口服活性成分， 其活性肽， 及它们治疗糖 尿病的用途;〈申请人〉美国卡里克斯治疗公� �）提供了苦瓜的一种水溶性提取物称为 MC6， MC6的特征中它含 有三种肽， 它的制备方法的特征是：离心澄清的苦瓜汁依 次通过 30kDal, lOkDal及 3kDal的超滤膜。 MC6分 子量小于 lOkDal , 能够通过 lOkDal超滤膜， 而为 3kDal滤膜截留。 有活性的 MC6的特征是在 SDS- PAGE凝 胶电泳上以单一条带形式迁移,分子量小于 lOkDal，包含三种肽。同时提供的还有 MC6的肽成分，称为 MC6. 1， 以及 MC6. 1的衍生物和模拟物。 活性 MC6， MC6. 1, MC6. 2, MC6. 3有降血糖作用'， 尤其是糖尿病， 其中优选 口服给予这些活性药物。 在这一专利中， 所利用的苦瓜降血糖活口服给药后也有这种活 性。 同时提供的还 有利用这些活性药物治疗高血糖疾病的方法性 成分仅仅是够透过超滤膜的水溶性蛋白（多肽 ）。 专利申请者 描述， MC6没有提高模型动物血浆中胰岛素水平的活性 。

一则国际专利申请 (PCT/IN99/00052 1999. 9. 28)的发明， 提供了一种高效降血糖多肽 -k，它提取自苦 瓜。 专利申请者介绍的多肽一 k制备方法是:用非极性溶剂处理苦瓜种子 (或果实）， 去除不需要的油脂、 黄 酮类和皂苷配基， 然后用含水 80%的丙酮提取残留物中的蛋白质， 最后选择性地结晶分离出多肽- k。 申请者 描述， 多肽 -k不溶于水， 其降血糖的作用机理是激活血液中无活性的胰 岛素。

很明显， MC6与多肽 -k都是苦瓜中具有降血糖活性的蛋白质， 但是， MC6溶于水， 而多肽 -k不溶于水， 按照 MC6的制备方法， 则损失了苦瓜中的多肽- k ;而按照多肽- k的制备方法， 同样损失了苦瓜中的 MC6。

还有一些中国专利公开了从苦瓜中提取降糖物 质或制成中药的内容。

1、 〈申请号〉99115925〈发明名称〉一种苦瓜降糖� ��囊及其制备工艺， 该发明是以新鲜苦瓜为原料， 经 清洗冷冻， 低温制浆， 压滤， 将滤渣经烘干过 100目筛， 制成苦瓜渣粉；滤液澄清再过滤， 经酸性 (pH3. 0) 乙醇在 15Ό条件下搅拌 3小时， 静置沉淀 12小时， 过滤后将沉淀物经低温干燥， 过 100目筛， 制成苦瓜蛋 白；过滤液经 60Ό真空浓缩， 加 2倍水溶解， 加 2倍乙醚脱脂， 50Ό真空浓缩回收乙醚， 60Ό真空回收乙醇 制成粗苦瓜总皂苷， 再经无水丙酮在 4°C条件下沉淀洗涤数次， 30Ό以下真空浓縮制成苦瓜总皂苷， 最后将 总皂苷， 苦瓜蛋白粉和苦瓜渣按 10 : 2 : 88重量比经混匀， 装入胶囊制成苦瓜降糖胶囊。 具有原料来源广 泛， 工艺简单， 服用方便， 价格便宜， 无毒副作用的优点， 可做为治疗糖尿病的辅助制剂。

2、 〈申请号〉98110802〈授权公告日 >2001年 08月 15日〈发明名称〉天然苦瓜素降糖药及其制备� ��法， 发明公开了一种天然苦瓜素降糖药的制作方法 ， 包括下述步骤: a.将成熟苦瓜切成片， 并进行干燥处理; b. 把干燥的苦瓜片浸泡于水中， 并提取浸液; c.把苦瓜浸液浓缩成浓缩液; d.将浓縮液进行生物酶解， 得高活 性降解液； e.把降解液进行恒温干燥喷粉制粒； f .将颗粒装入胶囊成药；该方法工艺设备简单� � 符合大规模生 产要求， 产品得率高， 治疗效果好， 无毒副作用。

3、 〈申请号〉95103732〈发明名称〉治疗糖尿病的� ��药及其生产方法， 该发明是一种治疗糖尿病的中药， 该中药的主要成分是动物胰脏、 苦瓜、 南瓜、 黄芪， 山药， 生产方法是动物胰脏粉碎千燥， 与用水提法或 醇析法得到的苦瓜、 南瓜、 黄芪提取物混合再加入山药粉得到， 该药物具有益气生津， 健脾润燥， 滋阴降 火功率效， 并有提高机体免疫功能， 促进胰岛素分泌， 降低血糖作用。

4、 〈申请号〉93119351. 6〈发明名称〉植物降血糖活性蛋白新组份 PA及其制备， 该发明涉及生物制药领 域。从植物材料苦瓜中提取降血糖活性蛋白新 组分 PA， 制备工艺中材料净化处理-低温冰冻-破碎-酸醇 浸渍 -高速匀浆 -酸醇提取-抽滤-离心净化-沉淀-重新溶解 -Sephadex凝胶过柱-紫外检测分部收集-浓縮-干燥 的 苦瓜降血糖活性蛋白新组份 PA的制备方法， 其特点是采用了等电点沉淀和凝胶过柱、 紫外检测分部收集的 方法。 发明人认为该物质具有分离提取简便、 消耗有机溶剂少、 得率高等优点， 经动物试验证明降血糖效 果明显。

5、 〈申请号〉 02102754〈发明名称〉一种快速高效提取植物类� ��岛素的方法， 苦瓜种子含有较丰富的植物 类胰岛素， 是目前治疗糖尿病的一种有效成分。 发明技术特征是:苦瓜种子脱壳， 种仁粉碎过 60或 100 目 筛， 然后采用酸性乙醇进行萃取， 离心取上清液， 加入 NaCl占体积 3%〜5%， 用 l〜5Mol/L NaOH调节溶液 至 pH值 7. 0± 7. 5溶液变浑浊、 离心、 去上液， 用丙酮洗涤沉淀部分三次， 真空干燥， 得到植物类胰岛 素粗品。 用 0. lMTris. cl溶液 (pH7. 5 )溶解进行凝胶亲和层析， 收集洗脱峰溶液， 用丙酮或乙醇浓缩真 空干燥得到植物类胰岛素精品。 该方法可以提取制备高纯度的植物类胰岛素成 分， 可用于糖尿病的治疗。

6、 〈申请号〉 98102198. 0〈发明名称〉一种苦瓜含片及其制备方法， 该发明为一种苦瓜含片及其制备方 法。 本苦瓜含片主要含有苦瓜粉、 糊精、 柠檬酸和甘露醇等， 制备时， 先将鲜苦瓜经榨汁、 过滤、 冷冻干 燥制得苦瓜冻干粉， 再与其它成分进行混合， 并压制成片。 采用本发明的制备方法科学合理， 充分保留了 苦瓜中的多种营养成分， 所制含片常温下不失苦瓜的活性， 具有清热解毒、 宽胸利气、 生津止渴、 降低血 糖、 提高免疫力、 抑制癌细胞等功效， 是日常生活， 特别是在灾区救援、 军事行动、 以及旅游、 探险活动 中， 可迅速补充体力， 提高免疫力的方便必需品。 主权项 (A61K35/78)要求是：一种苦瓜含片， 其特征是含 有苦瓜粉、 糊精、 甘露醇、 香料、 色素及硬脂酸镁。

已有的研究表明， 苦瓜中除蛋白质之外， 皂苷也是一种极为有效的降血糖活性的成分。

一些科技文献报道， 苦瓜皂苷为四环三菇类化合物， 有多个不同成分， 均难溶于水， 可用乙醇从干燥 的苦瓜果实中提取出（常凤岗：苦瓜化学成分 研究， 中草药， 1995， 26 (10) 507-510) 苦瓜皂苷并不影响受 试动物模型血浆中胰岛素含量， 主要是促进增加肌糖原和肝糖原的合成 (王先远， 金宏， 许志勤等:苦瓜皂 苷降血糖作用及机制初探， 氨基酸和生物资源， 2001， 23 (3) ： 42-45) , 因而具有显著的降血糖作用（孙 淑卿， 苦瓜的药理和临床研究概况， 中药材， 1997， (8) ： 428-429) , 动物试验证明， 其血糖降低幅度 甚至优于 "优降糖" （孙宝莹等， 苦瓜皂苷的药效学实验研究， 河南中医药学刊， 1994, 9 (6) ： 19-21) 。

水溶多肽 MC6、 水不溶的多肽 -k及苦瓜皂苷， 由于它们化学性质的差异， 因而属于彼此不同的物质。 并且， 苦瓜降血糖活性成分并不仅仅是己知的皂苷和 蛋白质。

从新鲜苦瓜的水煮液中分离出了可溶于乙醚和 不溶于乙醚的两个未知的成分， 己经鉴定不为皂苷、 黄 酮和生物碱，这两种成分都表现出明显的降血 糖活性（王勇庆:苦瓜降血糖作用研究，湖南� �医药杂志， 1998, C6) : 51-52)。 由此证明， 苦瓜中降血糖成分除皂苷和植物蛋白之外， 还有其它的降糖活性化合物。

将苦瓜的几种不同方法提取物对四氧嘧啶诱导 的化学性糖尿病模型小鼠的降糖效果进行比较 ， 结果表 明， 苦瓜的未被加热的直接压榨的果汁较其它方法 提取的有效部位的降血糖效果更好， 并推断其降血糖活 性物可能为水溶性的受热易被破坏的成分 (范玉玲;崔福德， 苦瓜有效部位降糖活性的比较研究， 沈阳药科 大学学报 2001， 18 (1) : 50-52 ) 。

动物实验表明， 鲜苦瓜汁能使能使四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠己 经受损伤的胰岛 β细胞得到修复， 并再 生出新的 β细胞， 提高了血浆中的胰岛素含量（Ahmed, I.， Adeghate, E , Sharma, A. K.， Pal lot, D, J. et al. Effects of Momordica charantia fruit juice on islet morphology in the pancreas of the streptozotoc in-diabetic rat. Diabetes research and cl inical practice. 1998, 40, 145-151)。 体内 和离体的进一步研究表明， 鲜苦瓜汁的这种作用机理是减轻了糖尿病小鼠 的胰腺， RIN细胞及胰岛的脂质过 氧化， 并降低了 RIN细胞中四氧嘧啶诱导的 apoptosis, 从而对 RIN细胞， 胰岛及胰腺 β细胞的起保护作用 (Sitasawad, S. L. , Shewade. Y e, Bhonde, Ro, Role of bittergourd fruit juice in stz- induced diabetic state in vivo and in vitro. Journal of Ethno-pharmacology, 2000, 73 (1)： 71-79 )。 而在苦瓜的已 知降糖活性化合物中， 尚未能确定具有这种修复或再生胰岛细胞， 提高胰岛素水平的生物活性。

由上述事实可知， 苦瓜的降血糖功能活性物， 有已知的， 也还有属于未知的， 苦瓜的降血糖功能， 实 际是其中所含的多种具有降血糖活性的成分协 同作用的结果。 就已知的活性成分而言， 因其化学性质不同， 很难用一种溶剂将它们同时提取出来。 此外， 在苦瓜的降血糖活性物中， 包含有不耐热的成分， 其提取的 过程不应当受热。

用磨浆的办法将新鲜的苦瓜果肉组织细胞充分 破碎， 细胞的所有内含物， 包括溶于水与难溶于水的降 血糖活性成分， 都将被释放到果浆中。 将果浆中的粗纤维 (来自于果肉细胞壁)滤去， 然后冷冻干燥， 这种 苦瓜汁的冻干制品无疑包含了比较全面的降血 糖活性成分。 但是， 苦瓜汁中降血糖活性物的含量其实很低， 直接冻干成本昂贵， 另一方面， 苦瓜汁中存在的糖类物质极易潮解， 使这种冻干制品根本无法在正常条件 下分装、 贮藏和使用。 加入大量的干燥助剂或防潮剂虽然可以解决苦 瓜汁的冻干制品的潮解问题， 但将无 法制得高含量的苦瓜降血糖制品。

综上所述， 文献和专利公开的苦瓜有效成分的制备， 基本上是采用物理法和化学法提取某个或若干 个 明确的化学成分为主， 或者是苦瓜在加热条件下的某种溶媒 (如水， 乙醇或其混合物）的总提取物， 它们或 者未提及如何利用苦瓜中那些化学性质未知的 降血糖活性成分， 或者未明确苦瓜中某些热敏性降血糖活性 物的受热破坏问题。

99115925号中国发明专利， 一种苦瓜降糖胶囊及其制备工艺提出了苦瓜蛋 白与苦瓜皂苷的利用， 但在 制备过程使用了乙醇， 丙酮， 乙醚等有机溶剂。 98110802号专利， 天然苦瓜素降糖药及其制备方法中提到 将苦瓜浓縮液进行生物酶解，得高活性降解液 ，但未提及生物酶解中采用的是什么酶。 98102198. 0号专利， 一种苦瓜含片及其制备方法中使用的是冷冻干 燥苦瓜汁工艺， 但它没有考虑去除苦瓜中己知的不具有降血 糖活性的成分的问题。

基于上述原因， 开发一套能全面利用苦瓜中理化性质不同的各 类降血糖活性物， 并且活性成分含量高， 所以对于充分而合理地利用并开发苦瓜资源， 也是十分必要的。

多肽可以通过基因工程的方法或者化学合成的 方法得到。 基因工程的方法在获取长肽 （氨基酸残基长 度大于 50) 或蛋白质上比化学方法有优势， 但是多肽的化学合成方法尤其是在固相合成策 略出现后， 在制 备氨基酸残基长度小于 40的多肽或小肽上有基因工程方法难以比拟的� ��活性、 多样性和高效性等。 1963年 Merrifield创立并开发了固相合成多肽的方法。 固相多肽合成一般有两种策略： 即 Boc/Bzl正交保护固相合 成策略和 Fraoc/tBu正交保护固相合成策略， Merrifield创立的固相合成法即为 Boc/Bzl正交保护固相合成策 略。 但是， Boc/Bzl正交保护固相合成策略中存在一些缺点� � 如副反应多、 条件苛刻以及在延长肽链的过程 中多肽链会从固相上丢失等。 而随后出现的 Fmoc/tBu正交保护固相合成策略则反应条件温和� ��多。 当近年 来微波技术运用于多肽的固相合成中后， 使多肽的合成技术产生了一个飞跃。 微波促进化学反应是由于其 使极性分子在微波场中快速旋转， 使得一些反应速率较常规加热方法快 10到 1000倍， 而且产率大大提高。 1986年 Gedye等人首次报道了将微波应用于有机合成中� �� 微波可以促进许多化学反应， 如 Diels-Alder反应， 皂化反应等， 可以显著地加快反应速率并提高收率。 在 1992年， Hui-ming Yu等首先报道了将微波应用于多 肽固相合成领域中， 他们完成了酰基载体蛋白片断十肽 （acyl carrier protein, ACP 65〜74) 的合成。

如何高效的合成长肽 （例如大于 20肽， 或者大于 30肽） 在世界上仍然是一个挑战， 因为多肽随着肽链 的增加， 其合成难度成倍增加。 用传统的固相方法合成长肽， 其收率往往很低杂质较多纯化困难， 从而从 实用的角度上说失去了合成的意义。 其次合成周期长， 在中间不出现困难肽序的情况下 10肽一般需要近一 个星期时间才能完成合成周期， 如果出现困难肽序， 往往就无法合成得到目标多肽。 因此， 希望能够以快 速高效的方式来在苦瓜降血糖 （MC-JJ6) 多肽的合成中采用此种方法， 以快速高效地合成得到 MC- JJ6系列 多肽。

因此， 希望对从具降血糖活性的药食同源植物苦瓜中 得到多肽进行修饰得到降血糖活性更高的 MC-JJ6 系列多肽。 另外希望高效快速地合成系列 MC- JJ6多肽。 发明内容

本发明的第一目的是对从具降血糖活性的药食 同源植物苦瓜中得到多肽进行修饰以得到降血 糖活性更 高的 MC-JJ6多肽。

为此，本发明提供一种具有降血糖活性的苦瓜 MC-JJ6多肽，其特征在于，所述苦瓜 MC-JJ6多肽含有 SEQ. ID NO : 1所示的氨基酸序列，

Xaa - Xaa ₂ - Xaa ₃ - Met— Lys— Xaeu— Met— Ala—Gly— Ala— Ala (SEQ. ID NO: 1)

其中

Xaa,为 Lys, Gly, Ala, Val, Leu, lie, Phe, Pro, Met, Cys, D- Lys, D- Ala, D- Val， D-Leu, D- lie D-Phe, D-Pro, D- Met或 D- Cys,

Xaa2为 Lys， Gly, Ala, Val, Leu, lie, Phe, Pro, Met, Cys, Thr, D-Lys, D— Ala, D— Val, D-Leu, D - lie D-Phe, D- Pro, D- Met或 D-Cys，

Xaa3为 Lys， Gly, Ala, Val, Leu, lie, Phe, Pro, Met, Cys, Asn, D-Lys, D- Ala, D- Val, D-Leu, D-Ile D-Phe, D-Pro, D- Met或！) -Cys, 以及

Xaa4为 Ala或 Gly。

本发明还提供一种具有降血糖活性的苦瓜 MC-JJ6222多肽， 其特征在于， 所述苦瓜 MC- JJ6222多肽含有 SEQ. ID NO: 115所示的氨基酸序列，

Lys-Thr-Xaai-Met-Lys- Xaa2~Me t~A 1 a-G ly-Ala-Al a-G 1 y- Xa - Pro- Xaai - Xaas-Ser-I le- Xaae~ Xaa ₇ -Ser ( SEQ. ID NO : 115 )

其中，

乂33 ₁ 为 Asn，Ala, Gly或 D- Ala ; Xaa ₂ 为 Ala, Gly, His或 D- Ala ;

Xaa ₃ 为 413, 01 , 1115或0-八13； 3 为 Ala， Gly, Tyr或 D- Ala ;

Xaa ₅ 为 Ala, Gly, Tyr或 D- Ala ; Xaa ₆ 为 Ala, Gly, Lys或 D- Ala ;

Xaa ₇ 为 Ala, Gly, Lys或 D- Ala。

此外， 本申请的发明人认识到， 使用微波促进固相合成多肽， 可以克服困难肽序， 合成传统固相方法 无法得到的多肽， 而且合成时间大大缩短， 且显著提高多肽粗品纯度及收率， 使得产品的纯化大大方便， 只要经过一次制备型 HPLC就能得到纯度较高的产品； 此外还可以非常方便的用 D型氨基酸及非天然氨基酸 等对多肽进行定点修饰， 去寻找活性更高、 生物半衰期更长的多肽， 这更是基因工程技术无法做到的。

因此， 本发明的第二个目的是提供上述多肽的固相制 备方法， 采用微波促进 Fmoc/tBu正交保护固相合 成策略高效快速地合成得到上述多肽。 在所述方法中： 采用微波促进 Fmoc/tBu正交保护固相合成策略， 于 固相载体上先合成得到载有第一个 Fmoc保护氨基酸的树脂， 茚三酮法检测为阴性后脱去 Finoc保护基得到 载有第一个氨基酸残基的树脂； 再进入下一个偶联循环， 按照相应的肽序用不同的保护氨基酸重复偶联 和 脱保护的步骤， 依次延长所需的氨基酸序列， 合成得到载有相应多肽的树脂， 最后用裂解剂将多肽从树脂 上切割下来得到多肽粗品。 粗品经制备级高效液相色谱纯化， 冻干得多肽纯品。

优选地， 载有第一个 Fmoc保护氨基酸的树脂的合成是通过在微波照� �条件下 Fmoc保护氨基酸先经活化 剂活化后再与固相载体偶合得到， 反应中加入卜羟基 -苯并三氮唑 (H0BT)或其衍生物抑制消旋， 并使用有机 碱中和反应的酸性。

优选地， 在载有第一个 Fmoc保护氨基酸的树脂的合成中所使用的固相� �体是 Rink树脂、 Wang树脂或 2- 氯三苯甲基氯树脂。 活化剂是二环己基碳二亚胺（DCC)、 Ν，Ν' -二异丙基碳二亚胺（DIC)、 N，N"-羰基二咪 唑 （CDI)、 1-乙基- (3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐 (EDC. HC1)、 2- (7-偶氮苯并三氮唑) _N， N， N'， N ' -四 甲基脲六氟磷酸酯 (HATU)、 苯并三氮唑 N, N' , N' -四甲基脲六氟磷酸酯 (HBTU)或使用的 1-羟基-苯并三氮 唑 (H0BT)衍生物为 N-羟基琥珀酰亚胺 (H0SU)、 1-羟基 -7-偶氮苯并三氮唑 (H0AT)或 3-羟基 -1, 2, 3-苯并三嗪 -4 (3H) -酮 (H00BT)。 有机碱为三乙胺 (TEA)、 N-甲基吗啉 (NMM)或二异丙基乙胺 (DIEA)； 微波促进 fr件是： 微波频率 2450MHz, 反应温度： 20〜100°C， 反应时间为 5〜15min。

优选地， Fmoc保护基的脱除是通过使用含有 0. 1 mol . L— ' 的 1_羟基 -苯并三氮唑 (H0BT)的六氢吡啶溶 液在微波促进下反应， 选用二甲基甲酰胺 (DM F)、 二甲亚砜 (DMS0)、 或 N-甲基吡咯垸酮 (NMP)为反应溶剂。 微波促进条件是： 微波频率 2450MHz， 反应温度： 20〜100°C , 反应时间为 l〜10min。

本发明的优点在于：

1. 提出的 MC-JJ6多肽或 MC- JJ6222多肽可以在保留降糖活性的基础上，提髙 稳定性，延长作用时间。

2. 微波促进固相合成所述多肽大大的提高了偶合 反应速率， 常规固相合成方法充分偶合一个氨基酸 到树脂上去，往往需要 2小时到 20小时不等，甚至更长。而微波促进则平均只� ��要 10分钟左右； 常规固相合成方法脱 Fmoc保护基， 往往需要 30分钟到 1小时不等， 而微波促进则平均只需要 5 分钟左右， 这极大的提高了多肽合成的效率， 縮短了合成周期。

3. 微波促进固相合成 MC-JJ6多肽合成得到的粗品的纯度大于 60%,微波促进固相合成 MC-JJ6221合 成得到的粗品的纯度大于 80%, 较常规固相合成方法大大提高， 这方便了后续的纯化工作， 只需 要经过一次制备液相纯化， 冻干即可得到目标纯品。

4. 微波促进固相方法合成 MC-JJ6 多肽， 其成本低， 由于偶合效率较高， 所需要保护氨基酸平均只 需要 2倍过量， 较常规固相合成方法需要 4到 5倍过量大为降低。

5. 微波促进固相合成 MC-JJ6多肽方法易于实现自动化、 大规模化， 这使其更适合工业化生产。

因此用本发明提供的微波促进固相合成方法制 备上述多肽， 收率高、 合成周期短、 粗品纯化容易， 生产成本低、易于工业自动化生产。制备得到 的 MC-JJ6系列多肽， 与天然 MC-JJ6多肽相比， 更加稳定， 作用时间更长， 适合作为治疗糖尿病药物的活性成分。 具体实施方式

在本说明书全文中釆用以下縮写：

Et ₃ N: 三乙胺； NMM : N-甲基吗啉； DIEA: Ν, Ν' -二异丙基乙胺； DMF: 二甲基甲酰胺； DM SO: 二甲亚 砜； DCM: 二氯甲烷； Finoc: N-9芴甲氧羰基； DIC： Ν, Ν' -二异丙基碳二亚胺； CDI ： Ν, Ν' -羰基二咪唑； DMAP ： 4-二甲氨基吡啶 ； H0SU ： Ν-羟基琥珀酰亚胺； EDC. HC1 : 1-乙基 - (3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐 酸盐； HATU ： 2- (7-偶氮苯并三氮唑) ^ ' ' -四甲基脲六氟磷酸酯 _; HBTU: 苯并三氮唑 -N, N， N' , N' -四 甲基脲六氟磷酸酯； HCTU _: 6-氯苯并三氮唑 -1, 1, 3， 3-四甲基脲六氟磷酸酯； H0AT: 1_羟基- 7-偶氮苯并三 氮唑； H0BT: 1-羟基-苯并三氮唑； PyBOP: 六氟磷酸苯并三唑- 1-基-氧基三吡咯垸基磷； HPLC: 高效液相 色谱； ESI- MS: 电喷雾质谱； Gly: 甘氨酸； Ser: 丝氨酸； Ala: 丙氨酸； Thr: 苏氨酸； Val : 缬氨酸； lie: 异亮氨酸； Leu: 亮氨酸； Tyr: 酪氨酸； Phe: 苯丙氨酸； His: 组氨酸； Pro: 脯氨酸； Asp: 天门冬氨酸； Met: 蛋氨酸； Glu: 谷氨酸； Trp: 色氨酸； Lys: 赖氨酸； Arg: 精氨酸。 Asn: 天冬酰胺； Gin: 谷氨酰 胺。 通过下列实施列来对本发明做进一步说明， 但这些实施例不做任何限制本发明的解释。

实施例 1

Lys- Thr- Gly- Met- Lys- His- Met- Ala-Gly- Ala- Ala (SEQ. ID NO : 2)的微波促进固相合成

(1)树脂的溶胀

称取 Fmoc-Ala Resin 50 mg (取代量 0. 4mmol/g)， 经 7 mL DCM溶胀 30 min,抽滤去 DCM, 再用 10 mL N P 溶胀 30 min, 最后分别用 NMP, DCM, NMP 7 mL冲洗干净。

(2) 微波促进 Fmoc保护基的脱除 将溶胀好的树脂放入反应器中， 加入 7 inL含 0.1 M H0BT的 25%哌啶 / NMP (V/V)溶液， 在微波反应器 中反应 l min， 微波功率为 15 W， 反应温度控制在 50 °C以内， 使用空气压缩机压縮空气冷却， 反应结束后 滤去溶液； 再加入 7 mL含 0.1 M H0BT的 25%哌啶 / NMP (V/V) 溶液在微波反应器中再反应 4 min, 微波功 率为 25 W, 反应温度控制在 50 。C， 使用空气压缩机压缩空气冷却。 反应结束后滤去溶液， 用 NMP洗涤干 净。 得到脱去初始连接的 Fmoc保护基的树脂。

(3) 微波促进 Fmoc- Ala- rink amide-MBHA Resin的合成

将 Fmoc- Ala- rink (0.04 ol) HBTU (0.04 ol) H0BT (0.04 ol) 和 DIPEA (0,08 mmol) 溶于 10 mL NMP中， 再将此溶液加入上面的树脂中， 在微波反应器中反应 7 min， 微波功率为 25 W， 反应温度控 制在 50 Ό， 使用空气压缩机压缩空气冷却。 反应结束后滤除反应液， 用 DCM和 ΝΜΡ各 7mL洗漆树脂 3次。

(4) 偶合效率的检测

用茚三酮法或者溴酚兰法定性检测树脂的偶合 效率， 显色反应为阴性即可进入下一个偶合循环。

茚三酮法：取少量树脂颗粒用乙醇洗涤，放入 透明小瓶中加入 5%茚三酮乙醇、 KCN吡啶溶液（2ml0.001M KCN稀释于 98ml吡啶中）、 80%苯酚乙醇溶液各 2滴， 于 100Ό加热 5分钟， 如果树脂显蓝色即为阳性。 溴酚兰法：取少量树脂颗粒用二甲酰乙酰胺洗 涤，放入透明小瓶中加入 3滴 1%的溴酚蓝二甲基乙酰胺溶液， 常温下振摇 3分钟， 如果树脂显蓝色即为阳性。

(5) 肽链的延长

按照 Ala ₃ -MC-JJ6- (1 11)-NH ₂ 的序列， 重复上述脱保护和偶合的步骤依次连接上相应 的氨基酸， 偶合 微波促进反应时间 5 20 min不等。 得到连有 Ala3- MC- JJ6- (1 11)-NH2的树脂。

(6) 树脂上多肽的裂解

将上述得到的连有 Ala ₃ -MC-JJ6-(l ll)-NH2的树脂放入反应瓶中， 各加入裂解剂 Reagent K (TFA/苯 甲硫醚 /水 /苯酚 /EDT, 82.5:5:5:5:2.5, V/V) lOmL, 先在 0 °C下振摇 30 min, 再在常温下反应 3 h。 反应 结束后抽滤， 加少量 TFA和 DCM洗涤三次， 合并滤液。 将滤液加入大量的冰乙醚中析出白色絮状沉淀 ， 冷 冻离心得到目标多肽的粗品。 最终得到Ala ₃ -MC-JJ6-(l ll)-NH2粗品63.2 mg, 收率为 94.3%

(7) Ala ₃ - MC- JJ6- (1 11)- NH2- NH2粗品的纯化

将上面得到的 Ala ₃ - MOJJ6- (1 11)-NH2粗品， 溶于少量的水中， 用岛津制备型反相 HPLC纯化粗品。 纯化 中釆用 C18反相制备柱（340 mmX28 mm, 5 Mm); 流动相 A: 0.1% TFA/水（V/V)， 流动相 B: 0.1% TFA/乙 腈（V/V); 流动相梯度： 流动相 B 13% 15%, 30 min; 流速为 6 mL/min; 检测波长为 214 nm。 收集的溶 液冻干得纯品， 最终得到纯品 29.7mg。 理论相对分子质量为 1102.3 ESI-MS m/z: found [Μ+3Η] ³⁺ 368.4, [Μ+4Η] ⁴⁺ 276.6, [M+5H] ⁵ ' 221.5;calu[M+3H] ³ *368.6, [ +4Η]' ⁺ 276.7 [Μ+5Η] ⁵⁺ 221.5 根据实施例 1所述的方法， 根据相应的序列合成得到实施例 2 113的多肽， 通过电喷雾质谱 （ESI- MS) 确证各多肽的分子量。

头 SEQ SEQ 理论相对 ESI-MS m/z: found ESI-MS m/z: calu

施 . ID 分子质量

例 NO

2 3 Gly-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Al 1008.2 [M+3H] ³ ' 337.1, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ³ '337.0, [M+4H] ⁴ '253.1 a-Gly- Ala- Ala 253.0, [M+5H] ^S * 202.6 [M+5H] ⁵ '202.5

3 4 la-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Me 1022.2 [M+3H] ³⁺ 341.7 [M+4H] ⁴ * [M+3H] ³⁺ 341.7 [Μ+4ΗΓ+2 t-Ala-Gly-Ala-Ala 256.6 [M+5H] ^5t 205.4 56.6

4 5 Val-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-M 1050.3 [M+3H] ³ *351.1 [M+4H] ⁴ * [M+3H] ³ *351.1,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 263.6, [M+5H] ^5t 211.1 [Μ+4ΗΓ263.6

[M+5H] ^5t 211.1

5 6 Leu-T r-Asn-Met-Lys-Gly-M 1064.3 [ +3H] ³ * 355.8 [M+3H] ^3t 355.8

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁴⁺ 267.1, [M+5H] ⁵ * [M+4H] ⁴⁺ 267.0,

213.9 [M+5H] ^5< 213.9

6 7 Ile-Thr- Asn-Met- Lys- 1064.3 [M+3H] ³⁴ 355.8, [M+3H] ^3t 355.8,

Gly- Met- Ala- Gly- Ala- Ala [M+4H]" ⁺ 267.1, [M+5H] ⁵ * [M+4H] ¹⁺ 276.0,

213.9 [M+5H] ⁵⁺ 213.8 8 Phe- Thr-Asn- Met- Lys-Gly-M 1098. 3 [M+3H] ^3t 367. 1, [M+3H] ^3t 367. 0, e t - A 1 a-G 1 y-Ala-A 1 a [M+4H] ^4t 275. 6， [M+5H] ^5t [M+4H] ⁴ '275. 6,

; 220. 7 [M+5H] ^5t 220. 7

9 Pro- Thr-Asn - Met- Lys-Gly-M 1048. 2 [M+3H] ³⁺ 350. 4， [M+3H] ³ '350. 4,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁺ 263. 1 , [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ^4t 263. 0,

210. 6 [M+5H] ^5t 210. 5

10 Met- Thr-Asn - Me t-Lys-G 1 y-M 1082. 3 CM+3H] ³⁴ 361. 8, [M+3H] ³ '361. 7,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁴⁺ 271. 6, [M+5H] ^5t [M+4H] ⁴ '271. 6，

217. 5 [M+5H] ^, 217. 5

11 Cy s- Thr-Asn - Met- Lys-Gly-M 1054. 3 [M+3H] ³ '352. 3,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁴⁺ 264. 5, [M+5H] ⁵⁺ 2

11. 9

12 Lys-Gly-Asn-Met-Lys-Gly-M 1035. 2 [M+3H] ⁺ 346. 1， [M+3H] ³⁺ 346. 0，

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ^4t 259. 8, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ⁴⁺ 259. 8,

208. 0 [M+5H] ^5t 208. 1

13 Lys-Ala-Asn-Met-Lys-Gly-M 1049. 3 [Μ+3Η] ³ + 350. 8, [M+3H] ³⁺ 350. 6,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁴⁺ 263. 3, [M+5H] ⁵ ' [M+4H]^263. 3,

210. 9 [M+5H] ⁵ '21. 08

14 Lys-Val-Asn-Met-Lys-Gly-M 1077. 3 [M+3H] ³ * 360. 1, [M+3H] ³ *, 360. 0, [M+4H] ⁴ * et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁴⁺ 270. 3, [M+5H] ⁵ ' 270. 2, [M+5H] ^5t 216. 4

216. 5

15 Lys-Leu-Asn-Met-Lys-Gly-M 1091. 4 [M+3H] ³ * 364. 8， [M+3H] ³ ', 364. 7,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁴⁴ 273. 8, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ⁴ '273. 8，

219. 3 [M+5H] ^5, 219. 2

16 Lys-I le-Asn-Met-Lys-Gly-M 1091. 4 [M+3H] ³⁺ 364. 8， [M+3H] ³ '368. 4，

et-Ala-Gly-Ala-Ala [ +4H] ^, 273. 8, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ^4, 273. 7，

219. 3 [M+5H] ^5f 219. 3

17 Lys-Phe-Asn-Met-Lys-Gly-M 1125. 4 [M+3H] ³ +376. 1， [M+3H] ³ '376. 1 ,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ^4t 282. 3, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ^4t 282. 3,

226. 1 [M+5H] ⁵⁺ 266. 0

18 Lys-Pro-Asn-Met-Lys-Gly-M 1075. 3 [M+3H] ³ * 359. 4, [M+3H] ³⁺ 359. 4,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ^4t 269. 8, [M+5H] ⁵ * [M+4H] ⁴⁺ 269. 6,

216. 1 [M+5H] ⁵ '216. 0

19 Lys-Met-Asn-Met-Lys-Gly-M 1109. 4 [M+3H] ^t 370. 8， [M+3H] ^3t 370. 8,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ^4t 278. 3, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ^4t 278. 3,

222. 9 [M+5H] ⁵ *222. 9

20 Lys-Cys-Asn-Met-Lys-Gly-M 1081. 3 [M+3H] ³⁺ 361. 4, [M+3H] ^3t 361. 4,

et-Ala-Gly-Ala-Ala [M+4H] ⁴⁺ 271. 3, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ^4t 271. 2,

217. 3 [M+5H] ⁵⁺ 217. 3

21 Lys-Thr-Gly-Met-Lys-Gly-M 1022. 3 [M+3H] ^t 341. 7， [Μ+4ΗΓ [M+3H] ³⁺ 341. 6, [Μ+4ΗΓ2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 256. 6, [M+5H] ^5t 205. 4 56. 6, [M+5H] ^5t 205. 3

22 Lys-Thr-Ala-Met-Ly s-G 1 y-M 1036. 3 [M+3H] ³ *346. 4, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 364. 3, [M+4H] ⁴ 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 260. 1， [M+5H] ^5f 208. 3 60. 0

[M+5H] ⁵ '208. 2

23 Lys-Thr-Val-Met-Lys-Gly-M 1064. 3 [M+3H] ³ * [M+3H] ^3t 355. 8, [M+4H] ⁴⁺ 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 355. 8， [M+4H 267. 1, [ 67. 0

M+5H] ⁵ ' 213. 9 [M+5H] ⁵ '213. 8

24 Lys-Thr-Leu-Met-Lys-Gly-M 1078. 4 [Μ+3ΗΓ360. 5, [M+4H] ^4t [M+3H] ³⁺ 360. 6， [M+4H] ^4÷ 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 6, [M+5H] ⁵⁺ 216. 7 70. 5, [M+5H] ⁵ *216. 6

25 Lys-Thr-Ile-Met-Lys-Gly-M 1078. 4 [M+3H] ³ *360. 5, [M+4H] ⁴ + [M+3H] ³ '360, 7, [M+4H] ^4t 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 6， [M+5H] ⁵⁺ 216. 7 70. 6 26 Lys-Thr-Phe-Met-Lys-Gly-M 1112. 4 [M+3H] *371. 8, [M+4H] ⁴ * [Μ+3Η] ³ '371· 7, [M+4H] ^t 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 279. 1, [M+5H] ^5t 223. 5 79. 0

[M+5H] ⁵ *223. 5

27 Lys-Thr-Pro-Met-Lys-Gly-M 1062. 3 [M+3H] ^3, 355. 1， [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 355. 0, [M+4H] ^÷ 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 266. 6， [M+5H] ⁵⁺ 213. 5 66. 5

[M+5H] ^5t 213. 4

28 Lys-Thr-Met-Met-Lys-Gly-M 1096. 4 [M+3H] ^3t 366. 5, [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 366. 5 , [M+4H] ^4÷ 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 275. 1, [M+5H] ^5t 220. 3 75. 0

[M+5H] ⁵⁴ 220. 3

29 Lys-Thr-Cys-Met-Lys-Gly-M 1068. 3 [M+3H] ³⁺ 357. 1， [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 357. 0， [M+4H] ⁴⁺ 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 268. 1, 68. 0

[M+5H] ⁵ ' 214. 7 [M+5H] ^5t 214. 9

30 Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1093. 3 [M+3H] ^3, 365. 4, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^t 365. 3, [M+4H] ⁴⁺ 2 et-Ala-Gly-Ala-Ala 274. 3, 74. 3

[M+5H] ^5t 219. 7 [M+5H] ⁵ *219. 6

31 G 1 y-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1022. 2 [M+3H] ^3, 341. 7， [M+4H] ⁴ * [M+3H] ³⁺ 341. 7，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 256. 6, [M+5H] ⁵⁺ 205. 4 [M+4H] ⁴⁺ 256. 6, [M+5H] ⁵⁺ 2

05. 4

32 Ala-Thr-Asn- et-Lys-Ala- 1036. 2 [M+3H] ³ '346. 4， [M+， 4H] ⁴ [M+3H] ³ +364. 3,

et-Ala-Gly-Ala-Ala ⁺ 260. 1， [M+5H] ⁵⁺ 208. 2 [M+4H]' ⁺ 260. 0, [M+5H] ⁵⁺ 2

08. 1

33 Val-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1064. 3 [M+3H] ^3t 355. 8, [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 355. 7,

et - Ala- Gly - Ala - Ala 267. 1， [M+5H] ^5t 213. 9 [M+4H]' ^÷ 267. 1, [M+5H] ^5t 2

13. 9

34 Leu-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1078. 3 [M+3H] ^t 360. 4， [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^t 360. 3,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 6， [M+5H] ^5t 216. 7 [M+4H] ⁴⁺ 270. 6, [M+5H] ^5t 2

16. 7

35 Ile-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1078. 3 [M+3H] ³ '360. 4, [M+4H] ^t [M+3H] ³⁺ 360. 2,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 6， [M+5H] ⁵⁺ 216. 7 [M+4H] ⁴⁺ 270. 5, [M+5H] ^5t 2

16. 7

36 Phe-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1112. 3 [M+3H] '371. 8, [M+4H]" [M+3H] ^3t 371. 7, ( et-Ala-Gly-Ala-Ala 279. 1， [M+5H] ⁵⁺ 223. 5 [M+4H] ^4t 279. 0, [M+5H] ⁵⁺ 2

23. 4

37 Pro-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1062. 3 [M+3H] ^3t 355. 1， [M+4H] ^t [ +3H] ^3t 355. 0,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 266. 6， [M+5H] ^5t 213. 5 [M+4H] ^t 266. 6, [M+5H] ^5t 2

13. 6

38 Met-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1096. 3 [M+3H] ^3t 366. 4， [M+4H]' ⁺ [M+3H] ³⁺ 366. 4,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 275. 1， [M+5H] ⁵ ' 220. 3 [M+4H] ⁴ *275. 0， [Μ+5Η 2

20. 2

39 Cys-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-M 1068. 3 [M+3H] ³ *357· 1, [M+4H] ^4< [M+3H] ³⁺ 357. 0，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 268. 1， [Μ+5ΗΓ 214. 7 [M+4H] ^4t 268. 0, [M+5H] ⁵ *2

14. 5

40 Lys-Ala-Asn-Met-Lys-Ala-M 1063. 3 [M+3H] ^3t 355. 4， [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 355. 4,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 266. 8， [M+5H] ⁵ * 213. 7 [M+4H] ^t 266. 8， [M+5H] ⁵ '2

13. 7

41 Lys-Val-Asn-Met-Lys-Ala-M 1091. 4 [M+3H] ^3t 364. 8, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 364. 8，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 273. 8， [M+5H] " 219. 3 [M+4H] ⁴⁴ 273. 8， [M+5H] ⁵ '2

19. 3

42 Lys-Leu-Asn-Met-Lys-Ala-M 1150. 4 [M+3H] ^3t 384. 5, [M+4H]' ⁺ [M+3H] ^t 384. 5,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 288. 6, [M+5H] ^5f 231. 1 [M+4H] ⁴⁴ 288. 6， [M+5H] ^5< 2 31. 1

43 Lys-I le-Asn-Met-Lys-Ala-M 1150. 4 [M+3H] ³ '384. 5, [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 384. 5，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 288. 6, [M+5H] ⁵ * 231. 1 [M+4H] ^t 288. 8, [M+5H] ⁵⁺ 2

31. 0

44 Lys-Phe-Asn-Met-Lys-Ala-M 1139. 4 [M+3H] ^t 380. 8, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 380. 8，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 285. 8， [Μ+5ΗΓ 228. 9 [M+4H] ^t 285. 8, [M+5H] ⁵⁺ 2

28. 8

45 Lys-Pro-Asn-Met-Lys-Ala-M 1089. 3 [M+3H] ³⁺ 364. 1， [M+4H] ^t [M+3H] ³ *364. 0，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 273. 3, [M+5H] ⁵ * 218. 9 [M+4H] ^4t 273. 3， [M+5H] ⁵⁺ 2

18. 9

46 Lys-Met— Asn- Met—Lys— Ala- M 1123. 4 [M+3H] ^3t 375. 5， [M+4H] ^4t [M+3H] *375. 5，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 281. 9， [M+5H] ^t 225. 7 [M+4H] ⁴⁺ 281. 9, [M+5H] ⁵⁺ 2

25. 7

47 Lys-Cys- Asn- Met—Lys- Ala- M 1095. 4 [M+3H] ^3t 366. 1, [M+4H] ^t [M+3H] ³⁺ 366. 1，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 274. 8, M+5H] ⁵⁺ 220. 1 [M+4H] ⁴⁺ 274. 8， [M+5H] ^5÷ 2

20. 1

48 Lys-Thr-Gly-Met-Lys-Ala-M 1036. 2 [M+3H] ^3t 346. 4, [M+4H] ^4t [M+3H] ^3, 346. 3,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 260. 1， [M+5H] ^5t 208. 3 [M+4H] ⁴ *260. 0, [M+5H] ^5t 2

08. 3

49 Lys-Thr-Ala-Met-Lys-Ala-M 1050. 3 [M+3H] ^3t 351. 1, [M+4H] ^4t [M+3H] ³ *351. 0,

et - Ala- Gly-Ala- Ala 263. 6， [M+5H] ⁵⁺ 211. 1 [M+4H] ^4t 263. 6, [M+5H] ⁵⁺ 2

11. 0

50 Lys-Thr-Val-Met-Lys-Ala-M 1078. 4 [M+3H] ^3t 360. 5， [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 360. 5,

et- Ala- Gly- Ala - Ala 270. 6， [M+5H] ^5t 216. 7 [M+4H]' ^÷ 270. 6, [M+5H] ⁵⁺ 2

16. 7

51 Lys-Thr-Leu-Met-Lys-Ala-M 1092. 4 [M+3H] ^3t 365. 1， [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 365. 0，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 274. 1， [M+5H] ⁵ * 219. 5 [M+4H] ^4t 274. 0, [M+5H] ⁵ *2

19. 6

52 Lys-Thr-Ile-Met-Lys-Ala-M 1092. 4 [M+3H] ^3t 365. 1, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 365. 0,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 274. 1， [M+5H] ^5t 219. 5 [M+4H] ^t 274. 0， [M+5H] ^5t 2

19. 5

53 Lys-Thr-Phe-Met-Lys-Ala-M 1126. 4 [M+3H] ³⁺ 376. 5， [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^t 376. 6,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 282. 6， [M+5H] ⁵ * 226. 3 [M+4H] ^4, 282. 6， [M+5H] ⁵ *2

26. 3

54 Lys-Thr-Pro-Met-Lys-Ala-M 1076. 3 [M+3H] ³ +359· 8， [M+4H] ^4t [M+3H] ³ '359. 8,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 1, [M+5H] ^5t 216. 3 [M+4H] ⁴⁺ 270. 1， [M+5H] ⁵⁴ 2

16. 4

55 Lys-Thr-Met-Met-Lys-Ala-M 1110. 4 [M+3H] ³⁺ 371. 1, [M+4H] ^4t [M+3H] ³ *271. 0,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 278. 6， [M+5H] ⁵ * 223. 1 [M+4H] ^4, 278. 6， [M+5H] ⁵⁺ 2

23. 0

56 Lys-Thr-Cys-Met-Lys-Ala-M 1082. 4 [M+3H] ^3t 361. 8, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^t 361. 9,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 271. 6, [M+5H] ⁵ ' 217. 5 [M+4H] ⁴ '271. 6， [M+5H] ^5t 2

17. 6

57 Lys-Thr-Gly-Met-Lys-Lys-M 1093. 4 [M+3H] ^3t 365. 4, [M+4H] ^4t [M+3H] ^3÷ 365. 6,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 274. 3, [M+5H]" 219. 7 [M+4H] ^4t 274. 5, [M+5H] ⁵⁺ 2

19. 7

58 Lys-Thr-Gly-Met-Lys-Arg-M 1121. 4 [M+3H] ^3, 374. 8, [M+4H] ^4t [M+3H] ^t 374. 9，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 281. 3, [M+5H] ⁵ * 225. 3 [M+4H] ⁴⁺ 281. 3, [M+5H] ⁵⁺ 2

25. 3

59 Lys-Thr-Gly-Met-Lys-Met-M 1096. 4 [M+3H] ^3t 366. 5, [ +4H] ^t [M+3H] ³ '366. 6,

et-Ala-Gly-Ala-Ala 275. 1， [M+5H] ⁵ * 220. 3 [M+4H] ^4t 275. 1, [M+5H] ^5t 2 20. 2

60 Lys-Thr-Gly-Met-Lys-Cys-M 1068. 3 [M+3H] ³ *357. 1， [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 357. 0，

et-Ala-Gly-Ala-Ala 268. 1， [M+5H] ^5t 214. 7 [M+4H] ⁴⁺ 269. 0, [M+5H] ⁵⁺ 2

14. 8

61 (D-Lys) -Thr-Asn-Met-Lys-G 1079. 3 [M+3H] ³ ' 360. 8, [M+3H] ^3t 360. 8，

1 y-Me t- A 1 a-G 1 y-A 1 a-A 1 a [M+4H] ^4t 270. 8, [M+5H] ⁵⁺ [M+4H] ⁴ *270. 7，

216. 9 [M+5H] ^5t 216. 9

62 (D-Ala) Thr- Asn 1022. 2 [M+3H] ³⁺ 341. 7, [M+3H] ³⁺ 341, 6，

-Met-Lys- Gly- Met- Ala- Gly- [M+4H] ⁴⁺ 256. 6, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ⁺ 256. 6，

Ala-Ala 205. 4 [M+5H] ^5t 205. 4

63 (D-Val) -Thr-Asn-Met-Lys-G 1050. 3 [M+3H] ^t 351. 1, [M+3H] ^3t 351. 1，

ly- Met- Ala- Gly- Ala- Ala [M+4H] ^4t 263. 6, [M+5H] ^5t [M+4H] ^4÷ 263. 6,

211. 1 [M+5H] ^5t 211. 1

64 (D-Leu) -Thr-Asn-Met-Lys-G 1064. 2 [M+3H] ^t 355. 8, [M+3H] ^3t 355. 7,

ly- Met- Ala- Gly- Ala-Ala [M+4H] ^4t 267. 1， [M+5H] ⁵⁺ [M+4H] ^t 267. 1，

213. 9 [ +5H] ^5t 213. 9

65 (D-Ile) -Thr-Asn-Met-Lys-G 1064. 3 [M+3H] ^3t 355. 8, [M+3H] ^3t 355. 8，

ly- Met- Ala- Gly- Ala- Ala [M+4H] ^4t 267. 1， [M+5H] ^5t [M+4H] ⁴⁺ 267. 0,

213. 9 [M+5H] ^5t 213. 9

66 (D-Phe) -Thr-Asn-Met-Lys-G 1098. 3 [M+3H] ^3t 367. 1， [M+3H] ^3t 367. 0,

ly- Met- Ala- Gly- Ala - Ala [M+4H]' ^÷ 275. 6, [M+5H] ⁵ * [M+4H] ^4t 275. 5，

220. 7 [M+5H] ^5t 220. 5

67 (D-Pro) Thr- Asn 1048. 2 [M+3H] ³ * 350. 4， [ +3H] ³⁺ 350. 4,

-Met-Lys-G 1 y- Me t- Ala- Gl y- [M+4H] ^4, 263. 1， [M+5H] ⁵ * [M+4H] ^4t 263. 0, Ala-Ala 210. 6 [M+5H] ^5t 210. 6

68 (D-Met) -Thr-Asn-Met-Lys-G 1082. 3 [M+3H] ³ * 361. 8， [M+3H] ^t 316. 8,

ly- Met-Ala- Gly- Ala- Ala [M+4H] ^4t 271. 6, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ^4t 271. 7，

217. 5 [M+5H] ^5t 217. 5

69 (D-Cys) -Thr-Asn-Met-Lys-G 1054. 3 [M+3H] ³ * 352. 4, [M+3H] ^3t 352. 2,

1 y-Me t-A 1 a-G 1 y-A 1 a-A 1 a [Μ+4ΗΓ264. 6， [M+5H] ⁵ * [M+4H] ^4t 264. 5,

211. 9 [M+5H] ^5t 211. 9

70 Lys- (D-Ala) -Asn-Met-Lys-G 1049. 3 [M+3H] ^t 350. 8, [M+3H] ^3t 350. 6,

ly- Met- Ala- Gly- Ala - Ala [M+4H] ⁴⁺ 263. 3, [M+5H] ⁵ ' [M+4H] ^t 263. 8,

210. 9 [M+5H] ^5t 210. 8

71 Lys- (D-Val) -Asn-Met-Lys-G 1077. 3 [M+3H] ^t 360. 1, [M+4H] ⁺ [M+3H] ^3t 360. 0，

ly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 3, [M+5H] + 216. 5 [M+4H] ^t 270. 3, [M+5H] ^5t 2

16. 5

72 Lys- (D-Leu) -Asn-Met-Lys-G 1091. 4 [M+3H] ^3t 364. 8, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 364. 8,

ly- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 273. 8, [M+5H] ⁵⁺ 219. 3 [M+4H] ⁴ '273. 7, [M+5H] ⁵ *2

19

73 Lys- (D-Ile) -Asn-Met-Lys-G 1091. 4 [M+3H] ³ ' [M+3H] ^3t 364. 7,

ly- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 364. 8, [M+4H] ⁴⁺ 273. 8, [ [M+4H] ^t 273. 6， [M+5H] ⁵ '2

M+5H] ⁵⁺ 219. 3 19. 3

74 Lys- (D-Phe) -Asn-Met-Lys-G 1125. 4 [M+3H] ^3t 367. 1, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ³ '367. 0,

ly -Met- Ala- Gly -Ala- A la 282. 3, [M+5H] ^5t 226. 1 [M+4H] ⁴ *282. 2， [M+5H] ⁵ *2

26. 0

75 Lys- (D-Pro) -Asn-Met-Lys-G 1075. 3 [M+3H] ³ '359. 4, [M+4H] ^4t [M+3H] ^3t 359. 4,

1 y-Me -A 1 a-G 1 y-A la-Ala 269. 8， [M+5H] * 216. 1 [M+4H] ⁴ '269. 8, [M+5H] ^5t 2

16. 0

76 Lys- (D-Met) -Asn-Met-Lys-G 1109. 4 [M+3H] ^3÷ 370. 8, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ³ *370. 8,

ly- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 278. 3， [M+5H] ⁵ ' 222. 9 [M+4H]' ^f 278. 2， [M+5H] ^5< 2 22. 7

76 77 Lys- (D- Cys) - Asn- Met-Lys-G 1081. 3 [M+3H] ^3t 361. 4, [M+4H] ⁴ * [M+3H] ⁺ 361. 4,

ly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 271. 3, [M+5H] ⁵⁺ 217. 3 [M+4H] ^4t 271. 3, [M+5H] ⁵⁺ 2

17. 2

77 78 Lys-Thr- (D- Ala) -Met- Lys- G 1036. 3 [M+3H] ³¹ 346. 4， [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 346. 3，

ly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 260. 1， [M+5H] ^5t 208. 3 [M+4H] ^4t 260. 0， [M+5H] ⁵⁺ 2

08. 2

78 79 Lys-Thr- (D- Val) -Met- Lys- G 1064. 3 [M+3H] ^3t 355. 8， [M+4H] ^4t [M+3H] ^3t 355. 8,

ly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 267. 1， [M+5H] ⁵⁺ 213. 9 [M+4H] ^4t 267. 0， [M+5H] ^5t 2

13. 9

79 80 Lys-Thr- (D- Leu) -Met- Lys- A 1078. 4 [M+3H] ⁺ 360. 5， [M+4H] ^4t [M+3H] ^3t 360. 4,

la- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 270. 6, [M+5H] ⁵⁺ 216. 7 [M+4H] ^t 270. 5， [M+5H] ^5t 2

16.

80 81 Lys-Thr- (D-Ile) -Met- Lys- G 1078. 4 [M+3H] ³⁺ 360. 5, [M+4H] ^4t [M+3H] ^3t 360. 4,

ly-Met- Ala- Gly- Ala- Ala 270. 6， [M+5H] ^5t 216. 7 [M+4H] ^4t 270. 5, [M+5H] ^5t 2

16. 5

81 82 Lys-Thr- (D-Phe) -Met- Lys- G 1112. 4 [M+3H] ³⁺ 371. 8, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 371. 6,

ly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 279. 1， [M+5H] ^5t 223. 5 [M+4H] ^4t 279. 0， [M+5H] ^5t 2

23. 4

82 83 Lys-Thr- (D- Pro) -Met- Lys- G 1062. 3 [M+3H] ^3t 355. 1， [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 355. 0，

ly-Met-Al a- Gl y- A la-Ala 266. 6, [M+5H] ⁵⁺ 213. 3 [M+4H] ^t 266. 6, [M+5H] ⁵ *2

13. 3

83 84 Lys-Thr- (D- Met) -Met- Lys- G 1096. 4 [M+3H] ³⁺ 366. 5, [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 366. 5，

ly-Met-Al a- Gl y- A la-Ala 275. 1， [M+5H] ⁵ * 220. 3 [M+4H] ^t 275. 0， [M+5H] ⁵ *2

20. 2

84 85 Lys-Thr- (D-Cys) - Met- Lys- A 1068. 3 [M+3H] ^t 357. 1， [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ³⁺ 357. 0，

1 a-Me t- A 1 a-G 1 y-A 1 a-A 1 a 268. 1， [M+5H] ⁵ ' 214. 7 [M+4H] ^4t 268. 0， [M+5H] ^5t 2

14. 5

85 86 (D-Lys) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1093. 3 [M+3H] ³⁺ 365. 4, [M+4H] ⁴ * [M+3H] ³⁺ 365. 4,

la-Met-Al a- G 1 y-A la-Ala 274. 3, [M+5H] ^5t 219. 7 [M+4H] ^4t 274. 5, [M+5H] ⁵ *2

19. 5

86 87 (D-Ala) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1036. 2 [Μ+3Η] ³ '365· 4, [M+4H] ^4t [M+3H] ³ '365. 4,

la-Met-Al a- G 1 y -A 1 a-A 1 a 274. 3, [M+5H] ^5t 219. 6 [M+4H] ^4t 274. 2, [M+5H] ⁵⁺ 2

19. 7

87 88 (D-Val) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1064. 3 [M+3H] ^3t 355. 8， [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 355. 7，

la- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 267. 1, [M+5H] ⁵ * 213. 9 [M+4H] ⁴ *267. 0, [M+5H] ⁵⁺ 2

13. 9

88 89 (D-Leu) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1078. 3 [M+3H] ^3t 360. 4, [M+4H]' ⁺ [M+3H] ^3, 360. 4,

la- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 270. 6, [M+5H] ^5t 216. 7 [M+4H] ^4t 270. 6, [M+5H] ⁵ '2

16. 7

89 90 (D-Ile) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1078. 3 [M+3H] ^3t 360. 4, [M+4H] ^t [M+3H] ^3t 360. 4,

la-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 6, [M+5H] ⁵⁺ 216. 7 [M+4H] ⁴ '270. 6， [M+5H] ^5t 2

16. 8

90 91 (D-Phe) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1112. 3 [Μ+3Η] ³ '371· 8, [M+4H] ^4< [M+3H] ³ *371. 7，

la-Met-Al a-G 1 y - A 1 a - A 1 a 279. 1， [M+5H] ⁵⁺ 223. 5 [M+4H] ^4t 279. 0, [ +5H] ^5t 2

23. 5

91 92 (D-Pro) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1062. 3 [M+3H] ^t 355. 1， [M+4H] ^4t [M+3H] ^t 355. 1,

la-Met-Al a- G 1 y - A 1 a- Al a 266. 6, [M+5H] ⁵ ' 213. 5 [M+4H] ^4t 266. 6, [M+5H] ⁵ *2

13. 5

92 93 (D-Met) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1096. 3 [M+3H] ^3, 366. 5, [M+4H]' ⁺ [M+3H] ^3t 366. 5,

la-Met-Al a- G 1 y-A la-Ala 275. 1， [M+5H] ⁵ * 220. 3 [M+4H 275. 0， [M+5H] ^5t 2 20. 3

93 94 (D-Cys) -Thr-Ans-Met-Lys-A 1068. 3 [M+3H] ³ '357. 1, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 357. 0，

1 a-Me t-A 1 a-G 1 y- A 1 a-A 1 a 268. 1. [M+5H] ⁵ ' 214. 7 [M+4H] ^4t 268. 0， [M+5H] ⁵ⁱ 2

14. 5

94 95 Lys- (D-Ala) - Asn- Met- Lys- A 1063. 3 [M+3H] ³⁺ 355· 4, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 355. 4,

1 a-Me t-A 1 a-G 1 y- A 1 a-A 1 a . 266. 8, [M+5H] ⁵⁺ 213. 7 [M+4H] ^4, 266. 8, [M+5H] ⁵⁺ 2

13. 7

95 96 Lys- (D-Val) -Asn- Met- Lys- A 1091. 4 [M+3H] ⁴ 364. 8, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 364. 8，

la- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 273. 8， [M+5H] ⁵ ' 219. 3 [M+4H] ^4t 273. 8， [M+5H] ⁵ *2

19. 3

96 97 Lys- (D-Leu) - Asn- Met- Lys- A 1105. 4 [M+3H] ^3t 369. 5， [M+4H] ^4< [M+3H] ³ *369. 5,

1 a-Me t-A 1 a-G 1 y-A 1 a- A 1 a 277. 3, [M+5H] ⁵ ' 222. 1 [M+4H] ⁴ *277. 2, [M+5H] *2

22. 2

97 98 Lys- (D-Ile) -Asn-Met-Lys-A 1105. 4 [M+3H] ⁺ 369. 5， [M+4H] ^4t [M+3H] ³⁺ 369. 6，

la-Met- Ala- Gly- Ala- Ala 277. 3， [M+5H] ⁵ * 222. 1 [M+4H] ^4, 277. 3, [M+5H] ⁵⁺ 2

22. 0

98 99 Lys- (D-Phe) -Asn-Met-Lys-A 1139. 4 [M+3H] +380. 8， [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 380. 8，

1 a-Me t-A 1 a-G 1 y-A 1 a-A 1 a 285. 8, [M+5H] ^5t 228. 9 [M+4H] ⁴ *285. 8, [M+5H] ^5t 2

28. 9

99 100 Lys- (D-Pro) -Asn-Met-Lys-A 1089. 3 [M+3H] ^3, 364. 1， [M+4H] ⁴ * [M+3H] ³ '364. 0,

1 a-Me t-A 1 a-G 1 y-A 1 a- A 1 a 273. 3, [M+5H] ⁵ ' 218. 9 [M+4H] ⁴ *273. 3， [ +5H] ⁵ '2

18. 9

100 101 Lys- (D-Met) -Asn-Met-Lys-A 1123. 4 [M+3H] ⁺ 375. 5, [M+4H] ⁴ * [M+3H] ^3t 375. 7，

1 a-Met-Ala-G 1 y- A 1 a- A 1 a 281. 9, [M+5H] ⁵ * 225. 7 [M+4H] ^4t 281. 9, [M+5H] ^5t 2

25. 5

101 102 Lys- (D-Cys) -Asn-Met-Lys-A 1095. 4 [M+3H] ^3t 366. 1, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^t 366. 1,

la-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 274. 8, [M+5H] ⁵ ' 220. 1 [M+4H] ^4t 274. 8， [M+5H] ⁵⁺ 2

20. 0

102 103 Lys-Thr- (D- Ala) -Met-Lys-A 1050. 3 [M+3H] ³ *351. 1, [M+4H]'* [M+3H] ^3t 351. 1,

1 a-Me t-A 1 a- G 1 y - A 1 a- A 1 a 263. 6, [M+5H] ⁵ ' 211. 1 [M+4H] ⁴ '263. 6, [M+5H] ⁵ '2

11. 1

103 104 Lys-Thr- (D-Val) -Met-Lys-A 1078. 4 [M+3H] ^3, 360. 5, [M+4H] [M+3H] ^3÷ 360. 5,

la-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 270. 6, [M+5H] ⁵ * 216. 7 [M+4H] +270· 6, [M+5H] ⁵ '2

16. 7

104 105 Lys-Thr- (D-Leu) -Met- Lys- A 1092. 4 [M+3H] ³⁺ 365· 1, [M+4H] ^4t [M+3H] ^t 365. 1，

la-Met-Ala- Gly- Ala- Ala 274. 1, [M+5H] ⁵⁺ 219. 5 [M+4H] ^4t 274. 0, [M+5H] ⁵ '2

19. 5

105 106 Lys-Thr- (D- I le) -Met-Lys-A 1092. 4 [M+3H] ³ '365. 1, [Μ+4ΗΓ+ [M+3H] ³ *365. 1，

la-Met-Ala-Gly-Ala-Ala 274. 1， [M+5H] ⁵ ' 219. 5 ; [M+4H] ^4, 274. 0， [M+5H] ⁵ '2

19. 6

106 107 Lys-Thr- (D-Phe) -Met-Lys-A 1126. 4 [M+3H] ³ '376. 5, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 376. 6，

la-Met-Ala- Gly- Ala- Ala 282. 6, [M+5H] ^5t 226. 3 [M+4H] ⁴⁺ 282. 7, [M+5H] ⁵ '2

26. 3

107 108 Lys-Thr- (D- Pro) -Met-Lys-A 1076. 3 [M+3H] ^3t 359. 8, [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 359. 8,

la- Met- Ala- Gly- Ala- Ala 270. 1, [M+5H] ⁵⁺ 216. 3 [M+4H] ^4t 270. 0, [M+5H] ⁵ '2

16. 4

108 109 Lys-Thr- (D-Met) -Met-Lys-A 1110. 4 [M+3H] ³⁺ 371. 1, [M+4H] ^4t [M+3H] ³ '371. 0,

la-Met- Ala- Gly- Ala- Ala 278. 6， [M+5H] ⁵ ' 223. 1 [M+4H] ^4t 278. 6, [M+5H] ⁵ '2

23. 1

109 110 Lys-Thr- (D-Cys) -Met-Lys-A 1082. 4 [M+3H] ^, 361. 8, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 361. 7,

la-Met- Ala- Gly- Ala- Ala 271. 6, [ +5H] ^5< 217. 5 [ +4H] ^4t 271. 7, [M+5H] ⁵ '2 17. 6

110 111 Lys-Thr-Gly-Met-Lys- (D- Hi 1102. 3 [M+3H] ⁺ 368. 4, [M+4H] ^t [M+3H] ³⁺ 368. 4,

s) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala 276. 6, [M+5H] ⁵⁺ 221. 5 [M+4H] ⁺ 276. 6， [M+5H] ^5t 2

21. 6

111 112 Lys-Thr-Gly-Met-Lys- (D- Ly 1093. 4 [M+3H] ³ *365. 5， [M+4H] ⁴⁺ [M+3H] ^3t 365. 6,

s) - Met- Ala - Gly- Ala- Ala 274. 3, [M+5H] ^5t 219. 7 [M+4H] ⁴⁺ 274. 2， [M+5H] ^5÷ 2

19. 7

112 113 Lys-Thr-Gly-Met-Lys- (D-Ar 1121. 4 [M+3H] ^3t 374. 8, [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 347. 9,

g) -Met- Ala- Gly- Ala- Ala 281. 3, [M+5H] ^5t 225. 3 [M+4H] ^4t 281. 4, [M+5H] ⁵⁺ 2

25. 1

113 114 Lys-Thr-Gly-Met-Lys- (D- Me 1096. 4 [M+3H] ^3t 366. 5， [M+4H] ⁴ ' [M+3H] ^3t 366. 6,

t) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala 275. 1, [M+5H] ^5t 220. 3 [M+4H] ^4t 275. 0, [M+5H] ⁵⁺ 2

20. 5

MC-JJ6多肽体内降糖活性实验

取 10周龄雄性昆明小鼠 （体重 18〜22 g), 随机分组， 每组 6只。 尾静脉注射四氧嘧啶给药建模， 给 药剂量为 60mg/kg, 72小时后， 小鼠禁食 5〜6小时测血糖挑选血糖值范围在 13〜23的小鼠随机分组， 每 组 6只。 成模后的小鼠连续 10d腹腔注射 MC- JJ6多肽。 在 0分钟， 30分钟， 60分钟， 90分钟， 120分钟 用血糖仪测定血糖值。

如表 1所示， C-JJ6多肽的降血糖活性强于二甲双胍。

MC-JJ6多肽降血糖的效应

n=6, x ± s. *P<0.05, ** <0.01 , ***P < 0.001 vs saline 下面说明与 MC- JJ6222多肽相关的实施例。

实施例 114

Lys- Thr-Ala- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- (D- Ala) - Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 116)的微波促进固相合成

( 1 ) 树脂的溶胀

称取 Fmoc- rink amide— MBHA Resin 50 mg (取代量 0. 4mmol/g)， 经 7 mL DCM溶胀 30 min,抽滤去 DCM, 再用 10 mL NMP溶胀 30 min, 最后分别用 NMP, DCM, NMP 7 mL冲洗干净。

(2) 微波促进 Frnoc保护基的脱除

将溶胀好的树脂放入反应器中， 加入 7 mL含 0. 1 M H0BT的 25%哌啶 / NMP (V/V)溶液， 在微波反应器 中反应 l niin, 微波功率为 15 W， 反应温度控制在 50 °C以内， 使用空气压縮机压缩空气冷却， 反应结束后 滤去溶液； 再加入 7 mL含 0. 1 M H0BT的 25%哌啶 / NMP (V/V) 溶液在微波反应器中再反应 4 min, 微波功 率为 25 W, 反应温度控制在 50 V， 使用空气压縮机压缩空气冷却。 反应结束后滤去溶液， 用 NMP洗涤干 净。 得到脱去初始连接的 I½ _0C 保护基的树脂。

(3) 微波促进 Fmoc- Ser- rink amide- MBHA Resin的合成

将 Fmoc- Ser- OH (0. 04 mmol) , HBTU (0. 04 ol H0BT (0. 04 mmol) 和 DIPEA (0. 08 mmol ) 溶于 10 mL NMP中， 再将此溶液加入上面的树脂中， 在微波反应器中反应 7 min， 微波功率为 25 W, 反应温度控制 在 50 V， 使用空气压缩机压縮空气冷却。 反应结束后滤除反应液， 用 DCM和 NMP各 7 mL洗涤树脂 3次。

(4) 偶合效率的检测

用茚三酮法或者溴酚兰法定性检测树脂的偶合 效率， 显色反应为阴性即可进入下一个偶合循环。

茚三酮法：取少量树脂颗粒用乙醇洗涤，放入 透明小瓶中加入 5%茚三酮乙醇、 KCN吡啶溶液（2ml 0. 001M KCN稀释于 98ml吡啶中）、 80%苯酚乙醇溶液各 2滴， 于 100'C加热 5分钟， 如果树脂显蓝色即为阳性。 溴酚兰法：取少量树脂颗粒用二甲酰乙酰胺洗 涤，放入透明小瓶中加入 3滴 1 %的溴酚蓝二甲基乙酰胺溶液， 常温下振摇 3分钟， 如果树脂显蓝色即为阳性。

(5) 肽链的延长

按照 Al _ai -MC-JJ6222- (广 21) -NH ₂ 的序列， 重复上述脱保护和偶合的步骤依次连接上相应 的氨基酸， 偶 合微波促进反应时间 5〜20 min不等。 得到连有 Ala,-MC-JJ6222- (广 21) _NH ₂ 的树脂。

(6) 树脂上多肽的裂解

将上述得到的连有 Al _ai -MC- JJ6222- (广 21) - NH ₂ 的树脂放入反应瓶中， 各加入裂解剂 Reagent K (TFA/ 苯甲硫醚 /水 /苯酚 /EDT 82. 5 : 5 :5 : 5 :2. 5, V/V) lOmL, 先在 0 °C下振摇 30 min, 再在常温下反应 3 h。 反 应结束后抽滤， 加少量 TFA和 DCM洗涤三次， 合并滤液。 将滤液加入大量的冰乙醚中析出白色絮状沉淀 ， 冷冻离心得到目标多肽的粗品。 最终得到Ala ₁ -MC-JJ6222- (广21) -NH ₂ 粗品63. 2 mg， 收率为 94. 3%。

(7) Ala,- MC- JJ6222- (广 21) - NH ₂ 粗品的纯化

将上面得到的 Alal-MC-JJ6222- (1~21) -NH ₂ 粗品， 溶于少量的水中， 用岛津制备型反相 HPLC纯化粗品。 纯化中采用 C18反相制备柱（340 X 28 5 Mm)； 流动相 A: 0. 1% TFA/水（V/V)， 流动相 B: 0. 1% TFA/ 乙腈（V/V) ; 流动相梯度： 流动相 B 20%〜65% 40 min; 流速为 6 mL/min; 检测波长为 214 nm。 收集的 溶液冻干得纯品， 最终得到纯品 29. 7呵。 理论相对分子质量 2211. 636. ESI-MSm/z : found [M+3H] ³ * 738. 2, [M+4H] ^4t 553. 9, [M+5H] ⁵⁺ 443. 3 calu [M+3H] ^3t 738. 0, [M+4H] ⁴⁺ 553. 8, [M+5H] ⁵ ' 443. 3。 根据实施例 114 所述的方法， 根据相应的序列合成得到实施例 115〜213 的多肽， 通过电喷雾质谱 (ESI-MS) 确证各自的分子量。 实施例 115

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro- (D-Ala) -Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 117)； 理论相对分子质量 2185. 6. ESI-MSm/z : found [M+3H] ³ * 729. 5, [M+4H] ^4t 547. 4, [M+5H] ^5t 438. 1； calu [M+3H] ^3t 729. 4, [M+4H] ⁴ ' 547. 4, [M+5H] ⁵⁺ 438. 0。

实施例 116

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- (D-Ala) - Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 118)； 理论相对分子质量 2185. 6。 ESI- MSm/z : found [M+3H;T 729. 5， [M+4H] ⁴⁺ 547. 4, [M+5H] ⁵ ' 438. 1； calu [M+3H] ³ ' 729. 5, [M+4H] ^t 547. 3, [M+5H] ^5t 438. 0»

实施例 117

Lys- Thr- Ala- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- (D- lie)- Ala- Lys- Ser (SEQ. ID NO: 119) ； 理论相对分子质量 2220.603. ESI-MStn/z:found[M+3H] ^3t 741.2, [M+4H] ^4t 556.2, [M+5H] ⁵⁺ 445.1； calu[M+3H] ^3t 741.0, [M+4H] ⁴⁺ 556.0, [M+5H] ⁵⁺ 455.0。

实施例 118

Lys- Thr- Ala- Met- Lys- His- Met-Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- (D- Ala)- Ser (SEQ. ID NO: 120) ； 理论相对分子质量 2220.603。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 741.2， [M+4H] ⁴ * 556.2, [M+5H] ^5t 445.1； calu[M+3H] ^t 741.0, [M+4H] ⁴ * 556.0， [M+5H] ⁵⁺ 445.0。

实施例 119

Lys-Thr- (D-Ala)- Met-Lys- His- Met- Ala-Gly-Ala-Ala_Gly-Ala-Pro- Tyr-Tyr- Ser- Ile-lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 121) ； 理论相对分子质量 2211.636» ESI-MSm/z: found [Μ+3Η] ^ί 738.2， [M+4H] ⁴⁺ 553.9, [M+5H] ^5t 443.3； calu[M+3H] ³ * 738.0, [M+4H] ⁴⁴ 553.8， [M+5H] ⁵⁺ 443.1。

实施例 120

Lys-Thr- (D-Ala) - Met-lys_His- Met_Ala- Gly-Ala-Ala-Gly- His-Pro-Tyr- Ala-Ser- lie ys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 122)； 理论相对分子质量 2185.6。 ESI- MSm/z:found[M+3Hr 729.5， [Μ+4Η] ⁴ *547.4, [M+5H] ⁵ ' 438.1； calu[M+3H] ³⁺ 729.4, [M+4H] ^t 547.5, [M+5H] ⁵⁺ 438.0»

实施例 121

Lys- Thr-(D- Ala)- Met- Lys- His- Met-Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser-Ile-Ala-Lys-Ser (SEQ. ID NO :123) ； 理论相对分子质量 2220.603。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³ ' 741.2, [M+4H] ⁴ * 556.2, [M+5H] ⁵⁺ 445.1； calu[M+3H] ³⁺ 741.0, [M+4H] ^4t 556.4， [M+5H] ⁵ + 445.0。

实施例 122

Lys-Thr- (D- Ala) -Met- Lys- His-Met- Ala- Gly- Ala- Ala-Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- Ala- Ser (SEQ. ID NO: 124) ； 理论相对分子质量 2220.603。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 741.2， [M+4H] ⁴ * 556.2, [M+5H] ^5t 445.1； calu[M+3H] ^3t 741.0, [M+4H] ^4t 556.0, [Μ+5ΗΓ 445· 0。

实施例 123

Lys-Thr- (D- Ala) -Met— Lys— His— Met— Ala— Gly— Ala— Ala— Gly— (D— Ala) -Pro— Tyr— Tyr— Ser— lie— Lys— Lys— Ser (SEQ. ID NO: 125) ； 理论相对分子质量 2211.636。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³ ' 738.2, [M+4H] ⁴⁺ 553.9, [M+5H] ^5t 443.3； calu[M+3H] ^3t 738.0, [M+4H] ⁴ * 553.8, [M+5H] ^5t 443.2„

实施例 124

Lys- Thr- (D- Ala)- Met- Lys- His- Met- Ala-Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- (D- Ala)- Tyr- Ser- lie- Lys- Lys- Ser (SEQ. ID NO: 126) ； 理论相对分子质量 2185.6。 ESI- MSm/z： found [M+3H] ³ ' 729.5， [M+4H] ^4t 547.4, [M+5H] ^5t 438.1； calu[M+3H] ^3t 729.4, [M+4H] ⁴ ' 547.4, [M+5H] ^5t 438.0 _o

实施例 125

Lys-Thr- (D-Ala) -Met- Lys- His-Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- (D- Ala)- Ser-Ile- Lys- Lys- Ser

(SEQ. ID NO: 127); 理论相对分子质量 2185.6。 ESI- MSm/z:found[M+3H] ³⁺ 729.5， [M+4H] ⁴ '547.4， [M+5H]" 438.1； calu[M+3H] ^3t 729.5, [M+4H] ⁴ * 547.3, [M+5H] ⁵ + 438.0。

实施例 126

Lys- Thr- (D- Ala)- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly-His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- (D- Ala)- Lys- Ser (SEQ. ID NO: 128) ； 理论相对分子质量 2220.603。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 741.2, [M+4H] ^4f 556.2, [M+5H] ^5t 445.1； calu[M+3H] ⁺ 741.0, [M+4H] ⁴¹ 741.0， [M+5H] ⁵ ' 445.0。

实施例 127

Lys- Thr-(D- Ala)- Met-Lys- His- Met- Ala- Gly-Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- Ile-Lys-(D- Ala) -Ser ( SEQ. ID NO: 129) ； 理论相对分子质量 2220.603。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³ ' 741.2, [M+4H] ^4÷ 556.2, [M+5H] ⁵ ' 445.1； calu[M+3H] ^3t 741.0, [M+4H] ⁴⁺ 556.0, [M+5H] ^5t 445.0 =

实施例 128

Lys-Thr- (D-Ala) -Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala_Gly- Gly- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- Lys- Ser (SEQ. ID NO :130) ； . 理论相对分子质量 2197.609。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³ ' 733.5, [M+4H] ⁴⁺ 550.4, [M+5H] ⁵ ' 440.5； calu[M+3H] ^t 733.5, [M+4H]' 550.4, [M+5H] ^5t 440.5» 实施例 129

Lys- Thr- (D-Ala)-Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala-Ala- Gly- His- Pro~Gly- Tyr- Ser -Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 131) ； 理论相对分子质量 2171.573。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 724.9, [M+4H] ^4t 543.9, [M+5H] ^5t 435.3； calu[M+3H] ^3t 724.8, [M+4H] ⁴ * 543.8, [M+5H] ⁵⁺ 435.2„

实施例 130

Lys- Thr- (D- Ala)- Met-Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr~Gly- Ser Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 132) ； 理论相对分子质量 2171.573。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 724.9, [M+4H]'* 543.9, [Μ+5Η] ^δ+ 435.3； calu[M+3H] ³⁺ 724.8, [M+4H] ^4t 543.8， [M+5H] ⁵ ' 435.2。

实施例 131

Lys- Thr- (D- Ala)- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser -Ile-Gly-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 133) ； 理论相对分子质量 2206.576。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 736.5， [M+4H] ⁴ * 552.6, [M+5H] ⁵ ' 442.3； calu[M+3H] ³⁺ 736.6, [M+4H] ⁴ * 552.7， [M+5H] ^5t 442,5。

实施例 132

Lys- Thr- (D- Ala)- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- Gly-Ser (SEQ. ID NO: 134) ； 理论相对分子质量 2206.576„ ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 736.5, [M+4H] ⁴⁴ 552.6 [Μ+5ΗΓ 442.3； calu[M+3H] ^3t 736.6, [M+4H] ⁴ * 552.5, [M+5H] ⁵ * 442.5。

实施例 133

Lys- Thr- Asn- Met- Lys- Ala- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- (D- Ala)- Pro- Tyr- Tyr- Ser Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 135) ； 理论相对分子质量 2188.599。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 730.5， [M+4H] ⁴ * 548.1, [M+5H] ^5f 438.7； calu[M+3H] ³ * 730.6, [M+4H] ⁴ * 548.0, [M+5H] ⁵ ' 438,8。

实施例 134

Lys- Thr- Asn- Met- Lys- Ala- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- (D-Ala)- Tyr- Ser Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 136) ； 理论相对分子质量 2162.563。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 721.9, [M+4H] ⁴⁺ 541.6, [M+5H] ⁵ ' 433.5； calu[M+3H] ^3< 721.8, [M+4H] ⁴⁺ 541.7, [M+5H] ⁵ * 433.6。

实施例 135

Lys- Thr- Asn- Met- Lys- Ala- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- (D- Ala)- Ser- lie- Lys- Lys- Ser (SEQ. ID NO: 137) ； 理论相对分子质量 2162.563。 ESI-MSm/z:found[M+3H] ³⁺ 721.9, [M+4H] ⁴ * 546.6, [M+5H] ⁵ ' 433.5； calu[M+3H] ^St 721.8, [M+4H] ^t 546.7, [M+5H] ⁵ * 533.6。

实施例 136

Lys - Thr- Asn- Met- Lys- Ala- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- (D- Ala)- Lys- Ser (SEQ. ID NO :138) ； 理论相对分子质量 2197.566。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 733.5, [M+4H] ⁴ ' 550· 4， [M+5H] ^5t 440.5； calu[M+3H] ^3t 733.5, [M+4H] ⁴ * 550.4, [M+5H] ^5t 440.5 ₀

实施例 137

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile -Lys- (D-Al ) -Ser (SEQ. ID NO: 139) ； 理论相对分子质量 2197.566。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 733, 5, [M+4H] ⁴ * 550.4, [M+5H] ⁵ * 440.5； calu[M+3H] ^3t 733.6, [M+4H]'* 550.4, [M+5H] ⁵ * 440.5 ₀

实施例 138

Lys- Thr- Asn- Met- Lys- (D- Ala) -Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- Ala- Pro- Tyr- Tyr- Ser -Ile- Lys - Lys- Ser (SEQ. ID NO: 140) ； 理论相对分子质量 2188.599„ ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 730. 5, [M+4H] ⁴ * 548.1, [M+5H] ^5t 438.7； calu[M+3H] ^3t 730.6, [M+4H] ⁴ ' 548,0， [M+5H] ^5t 438.8。

实施例 139

Lys- Thr-Asn-Met- Lys- (D - Ala) -Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Ala- Tyr- Ser -lie- Lys- lys - Ser (SEQ. ID NO: 141) ； 理论相对分子质量 2162.563。 ESI-MSm/z: found [Μ+3Η] ³⁺ 721. 9， [M+4H] ⁴ ' 541.6: [M+5H] ^5t 433.5； calu[M+3H] ³ * 721.8, [M+4H] ' 541.6, [M+5H] ⁵ ' 433.5。

实施例 140

Lys-Thr-Asn-Met-Ly s- (D~Ala) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr-Ala-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser ( SEQ. ID NO: 142 ) ； 理论相对分子质量 2162.563„ ESI-MSm/z： found [M+3H] ^3t 721.9, [M+4H] ⁴ 541.6, [M+5H] ⁵⁺ 433.5； calu[M+3H] ³ + 721.9 ， [M+4H] ⁴ ' 541.6 ' [M+5H] ⁵ ' 433.5。

实施例 141

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) - Met - Ala-Gly_Ala- Ala- Gly-His-Pro-Tr-Tyr- Ser-Ile-Ala_Iys- Ser (SEQ. ID NO: 143) ； 理论相对分子质量 2197.566。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 733.5, [M+4H] ⁴ * 550.4, [M+5H] ^5t 440.5； calu[M+3H] ^3t 733.5, [M+4H] ^4t 550.4, [M+5H] ^5t 440.5„

实施例 142

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) - Met - Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- Hi s- Pro - Tyr- Tyr- Ser- lie - lys- ALa- Ser (SEQ. ID NO: 144) ； 理论相对分子质量 2197.566。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 733.5， [M+4H] ⁴ * 550.4, [M+5H] ^5t 440.5； calu[M+3H] ³⁺ 733.7, [M+4H] ⁴⁺ 550.4, [M+5H] ⁵ ' 440.5。

实施例 143

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 145) ； 理论相对分子质量 2174.572。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 725.9, [M+4H] ⁴ * 544.6, [M+5H] ^5t 435.9； calu[M+3H] ^3t 725.9, [M+4H] ⁴ ' 544.5, [M+5H] ⁵ * 435.8 - 实施例 144

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Gly-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 146) ； 理论相对分子质量 2148.536。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 717.1， [M+4H] ^4t 538.1, [M+5H] ⁵ * 430.7； calu[M+3H] ^3t 717.0, [M+4H] ⁴ⁱ 538,0， [M+5H] ⁵⁺ 430.8。

实施例 145

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr-Gly-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 147) ； 理论相对分子质量 2148.536。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^t 717.1, [M+4H] ⁴⁺ 538.1, [M+5H] ^5t 430.7； calu[M+3H] ^3t 717.0, [M+4H] ^t 538.0, [M+5H] ^5t 430.8o

实施例 146

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Gly-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 148) ； 理论相对分子质量 2183.539。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 728.8， [M+4H] ⁴ ' 546.9, [M+5H] ⁵ ' 437.7； calu[M+3H] ³ + 728.9, [M+4H] ⁴ * 549.8, [M+5H] ⁵ * 437,8。

实施例 147

Lys- Thr-Asn- Met- Lys- (D- Ala)- Met- Ala- Gly-Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- Gly- Ser (SEQ. ID NO: 149) ； 理论相对分子质量 2183.539。 ESI-MSm/z: found [Μ+3Η] ³⁺ 728.8， [M+4H] ^4t 546.9, [M+5H] ⁵ * 437.7； calu[M+3H] ^3t 728.6, [M+4H] ⁴ * 546.9, [Μ+5Η] ^5÷ 437.8 ₀

实施例 148

Lys- Thr-Asn- Met- Lys- (D- Ala)- Met- Ala- Gly- Ala-Ala- Gly- (D- Ala) -Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- Lys- Ser (SEQ. ID NO: 150) ； 理论相对分子质量 2188.599。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 730.5, [M+4H] ⁴ ' 548.1， [M+5H] ^5t 438.7； calu[M+3H] ^3t 730.5, [M+4H] ⁴ * 548.0， [M+5H] ^5t 438.7„

实施例 149

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) -Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro- (D-Ala) -Tyr-Ser Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 151) ； 理论相对分子质量 2162.563。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^t 721 9, [M+4H] ^4t 541.6, [M+5H] ⁵ ' 433.5； calu[M+3H] ^3÷ 721.9, [M+4H] ⁴ * 541.6, [M+5H] ^5t 433,5。

实施例 150

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) -Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- (D- Ala)- Ser -Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 152) ； 理论相对分子质量 2162.563。 ESI-MSm/z: found [ +3H] ^3t 721 9, [M+4H] ⁴ ' 541.6， [Μ+5ΗΓ 433.5； calu[M+3H] ^t 721.9， [M+4H] ⁴ * 541.6， [Μ+5ΗΓ 433.5。

实施例 151

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) - Met- Ala- Gly-Ala-Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie' - (D-Ala) -Lys-Ser (SEQ. ID NO: 153) ； 理论相对分子质量 2197.566。 ESI-MSm/z： found [M+3H] ³ ' 733 5， [M+4H] ^4t 550.4, [M+5H] ⁵ ' 440.5； calu[M+3H] ³ * 733.5, [ +4H]' 550.5, [M+5H] ⁵ ' 440.6。 实施例 152

Lys-Thr-Asn-Met-Lys- (D-Ala) -Met-Ala-Gly- Ala-Ala- Gly- His- Pro- Tyr-Tyr-Ser- lie- Lys-(D- Ala)- Ser (SEQ. ID NO: 154) ； 理论相对分子质量 2197.566。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ⁺ 733.5 , [M+4H] ^4t 550.4, [M+5H] ⁵ * 440.5； calu[M+3H] ^3t 733.5, [M+4H] ⁴ * 550.4, [M+5H] ⁵ ' 440.5。

实施例 153

Lys-Thr-Gly-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly- (D-Ala) -Pro-Tyr-Tyr-Ser-I le~Ly s~Ly s-Ser (SEQ. ID NO :155) ； 理论相对分子质量 2197.609。 ESI-MSm/z： found [M+3H] ³ * 733.5, [M+4H] ^4t 550.4, [M+5H] ⁵ * 440.5； calu[M+3H] ³ * 733.6, [M+4H] ⁴ * 550.6, [M+5H] ^5t 440.6。

实施例 154

Lys- Thr- Gly- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- (D- Ala) - Tyr-Ser- lie- Lys- Lys- Ser (SEQ. ID NO: 156) ； 理论相对分子质量 2197.609。 ESI-MSm/z: found [Μ+3Η] ³⁺ 733.5, [M+4H] ⁴ * 550.4, [M+5H] ⁵ ' 440.5 ;calu[M+3H] ³ ' 733.6, [M+4H] ^t 550.6， [M+5H] ^5t 440.6

实施例 155

Lys-Thr-Gly-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- (D-Ala) -Ser-I le-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 157) ； 理论相对分子质量 2171.573。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 724.9, [M+4H]' ⁺ 543.9, [M+5H] ⁵ * 435.2； calu[M+3H] ³ * 724.8, [M+4H] ^4t 543.8, [M+5H] ^5t 435.0 _o

实施例 156

Lys-Thr-Gly-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile- (D-Ala) -Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 158);理论相对分子质量 2206.576o ESI-MSm/z : found [M+3H] ^3t 736.5, [Μ+4Η] ^4÷ 552.6, [M+5H] ⁵ 442.3； calu[M+3H] ^t 736.6, [M+4H]'* 552.6， [M+5H] ⁵ ' 442.4。

实施例 157

Lys- Thr- Gly- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr-Tyr-Ser- lie- Lys- (D- Ala)- Ser

(SEQ. ID NO: 159);理论相对分子质量 2206.576。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³ ' 736.5， [M+4H] ⁴⁴ 552.6, [M+5H] ⁵ 442.3； calu[M+3H] ^3t 736.6, [M+4H] ⁴ * 552.7, [M+5H] ⁵ ' 442.4。

实施例 158

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys- (D-Ala) - Ser (SEQ. ID NO: 160) ； 理论相对分子质量 2183.539。 ESI-MSm/z： found [M+3H] ³⁴ 728.8, [M+4H] ⁴⁺ 546.9, [M+5H] ⁵ ' 437.7； calu[M+3H] ^3t 728.9, [M+4H] ⁴ * 546.8， [M+5H] ⁵ ' 437.8。

实施例 159

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly- (D-Ala) -Pro-Tyr-Tyr-Ser-I le-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 161);理论相对分子质量 2174.572„ ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ ' 725.9, [M+4H] ⁴ⁱ 544.6, [M+5H] ⁵ 435.9； calu[M+3H] ³ ' 725.9, [M+4H] ⁴⁺ 544.5， [M+5H] ⁵ ' 435.8。

实施例 160

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro- (D-Ala) -Tyr-Ser-I le-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 162)； 理论相对分子质量 2148.536。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ ' 717.1, [M+4H] ⁴ ' 538.1，

[M+5H] ⁵ⁱ 430.7； calu[M+3H] ³⁺ 717.0, [M+4H] ⁴ ' 538.0, [M+5H] ⁵⁺ 430.8。

实施例 161 '

Lys-T r-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- (D-Ala) -Ser-I le-Lys-Lys-Ser ( SEQ. ID NO: 163)； 理论相对分子质量 2148.536。 ESI-MSm/z : found [M+3H] ³ ' 717.1， [M+4H] ⁴ * 538.1,

[M+5H] ⁵ * 430,7； calu[M+3H] ³ * 717,1， [M+4H]" 538.0, [M+5H] ⁵ ' 430.8。

'' 实施例 162

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile- (D-Ala) -Lys-Ser (SEQ. ID NO: 164)； 理论相对分子质量 2183.539。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 728.8, [Μ+4ΗΓ 546.9，

[M+5H] ⁵ ' 437.7； calu[ +3H] ³ * 728.9, [M+4H] ⁴ * 546.9, [M+5H] ^5t 437.8。 实施例 163 Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 165)； 理论相对分子质量 2174.572。 ESI-MSm/z:found[M+3H] ^t 725.9, [M+4H] ^4t

544.6, [M+5H] ⁵⁺ 435.9； calu[M+3H] ^t 725.8 ， [M+4H] ⁴⁺ 544.6 ， [M+5H] ⁵⁺ 435.8。

实施例 164

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser ( SEQ. ID NO: 166) ； 理论相对分子质量 2320,725。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 774.6, [M+4H] ⁴ * 581.2, [M+5H] ^5t 465.1； calu[M+3H] ^3t 774.5, [M+4H] ^t 581.3, [M+5H] ⁵ + 465.0。

实施例 165

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 167) ； 理论相对分子质量 2211.636。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 738.2, [M+4H] ^t 553.9, [M+5H] ^5t 443.3； calu[M+3H] ^3t 738.4， [M+4H] ⁴ * 553.9, [M+5H] ⁵ ' 443.4。

实施例 166

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Ala- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 168)； 理论相对分子质量 2185.6。 ESI- MSm/z:found[M+3Hr 729.5， [M+4H] ^t 547.4, [M+5H] ⁵⁺ 438.1； calu[M+3H] ^3t 729.6, [M+4H] ⁴ * 547.5， [M+5H] ^5t 438.0„

实施例 167

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Ala-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 169) ； 理论相对分子质量 2185.6。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 729.5, [M+4H] ⁴ * 547.4, [M+5H] ^5t 438.1； calu[M+3H] ^t 729.3, [M+4H] ⁴⁺ 547.4, [M+5H] ⁵⁺ 438, 0。

实施例 168

Lys-T r-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr-Tyr-Se r-Ile-Ala Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 170) ； 理论相对分子质量 2220.603。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 741 2, [M+4H] ⁴ * 556.2, [M+5H] ^5t 445.1； calu[M+3H] ⁺ 741.3, [M+4H] ⁴⁺ 556.3， [M+5H] ⁵ ' 445.0。

实施例 169

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

(SEQ. ID NO: 171) ； 理论相对分子质量 2220.603。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 741.2, [M+4H] ^4÷ 556.2, [M+5H] ⁵ * 445.1； calu[M+3H] ^t 741.0, [M+4H] ⁴⁺ 445.0， [M+5H] ⁵ ' 556.0。

实施例 170

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-Gly-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

( SEQ. ID NO: 172)； 理论相对分子质量 2197.609。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 733.5, [M+4H] ^4t 550.4, [M+5H] ⁵⁺ 440.5； calu[M+3H] ³⁴ 733.6, [M+4H] ⁴ * 550.5, [M+5H] ⁵⁺ 440.6,

实施例 171

Lys- Thr- Ala- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro~Gly- Tyr- Ser- lie- Lys- Lys- Ser ( SEQ. ID NO:173 )； 理论相对分子质量 2171.573。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 724.9， [M+4H] ⁴ ' 543.9, [M+5H] ^5t 435.3； calu[M+3H] ^3t 724.8, [M+4H] ⁴ * 543.8, [M+5H] ⁵ + 435.2。

实施例 172

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Gly-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 174)； 理论相对分子质量 2171.573. ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 724.9, [M+4H] ⁴ * 543.9, [M+5H] ⁵ ' 435.3； calu[M+3H] ^3t 724.8, [M+4H] ⁴ ' 543.8, [M+5H] ⁵ ' 435.5。

实施例 173

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Gly-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 175);理论相对分子质量 2206.576。 ESI- MSm/z: found [Μ+3ΗΓ 736.5， [Μ+4Η] ⁴ '552· 6， [M+5H] ^5t 442.3； calu[M+3H] ³ ' 736.6, [M+4H] ⁴ ' 552.6, [M+5H] ⁵ ' 442.3。

实施例 174

Lys-Thr-Ala-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser

(SEQ. ID NO: 176)； 理论相对分子质量 2206.576。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ ' 736.5， [M+4H] ⁴ ' 552.6, [M+5H] ^5t 442.3； calu[M+3H] ^3t 736.5, [M+4H] ⁴ * 552.5, [M+5H] ⁵ ' 442.3。

实施例 175

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 177)；理论相对分子质量 2188.599o ESI-MSm/z : found [M+3H] ³⁺ 730.5, [ +4Η] ^4÷ 548.1 [M+5H] 438.7； calu[M+3H] ^3t 730.6, [Μ+4Η] ^4÷ 548.0， [Μ+5Η] ⁵ * 438.8ο

实施例 176

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Ala- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 178)；理论相对分子质量 2162.563» ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 721.9, [M+4H] ⁴⁺ 541.6 _; [M+5H] 433.5； calu[M+3H] ³⁺ 721.8, [M+4H] ^4t 541,6， [M+5H] ^5t 433.5。

实施例 177

Lys - Thr- Asn- Met- Lys- Ala- Met - Ala- Gly - Ala_Ala- Gly - His - Pro - Tyr- Ala- Ser- lie- Lys- Lys- Ser

(SEQ. ID NO: 179)；理论相对分子质量 2162.563o ESI -MSm/z: found [M+3H] ⁺ 721.9, [M+4H] *541.6 [M+5H] 433.5； calu[M+3H] ^3t 721.7, [M+4H] ⁺ 541.6， [M+5H] ⁵ * 433.5 ₀

实施例 178

Lys- Thr- Asn-Met- Lys- Ala- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr-Tyr- Ser- lie- Ala-Lys- Ser

(SEQ. ID NO: 180)；理论相对分子质量 2197.566o ESI-MSm/z:found[M+3H] ^3t 733.5, [Μ+4Η] ⁴⁴ 550.4 _; [M+5H] 440.5； calu[M+3H] ³⁺ 733.5, [M+4H] ⁴ ' 550.4, [Μ+5Η] ⁵ * 440.5„

实施例 179

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile- -lys— Ala— Ser (SEQ. ID NO: 181)；理论相对分子质量 2197.566o ESI-MSm/z： found [M+3H] ^3t 733.5， [M+4H] ^4÷ 550.4, [M+5H] 440.5； calu[M+3H] ³⁺ 733.6, [M+4H] ^4t 550.5, [M+5H] ⁵ * 440.6 »

实施例 180

Lys- Thr- Asn- Met- Lys- Ala- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- Gly- Pro- Tyr-Tyr- Ser- lie. -Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 182)；理论相对分子质量 2174.572 ES I-MSm/z： found [M+3H] ^3t 725.9, [M+4H] ^4t 544.6: [M+5H] 435.9； calu[M+3H] ³⁺ 725.8, [M+4H] ^4f 544.6, [M+5H] ⁵⁺ 435.8。

实施例 181

Lys- Thr-Asn- Met- Lys- Ala- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Gly- Tyr- Ser- lie' -Lys-Lys-Ser

( SEQ. ID NO :183)；理论相对分子质量 2148.536。 ESI-MSm/z： found [M+3H] ³ * 717.1, [M+4H] ⁴⁺ 538.1， [M+5H] 430.7； calu[M+3H] ^3t 717.0, [M+4H] ⁴ ' 538.8， [M+5H] ⁵⁺ 430.8。

实施例 182

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Ala-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Gly-Ser-Ile -Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 184)；理论相对分子质量 2148.536 o ES I-MSm/z： found [M+3H] ³⁺ 717.1, [M+4H] ⁴ '538.1, [M+5H] 430.7； calu[M+3H] ³ ' 717.0, [M+4H 538.0, [M+5H] ⁵ ' 430.7。

实施例 183

lys - Thr- Asn-Met - Lys - Ala - Met - Ala - Gly - Ala- Ala - Gly - His - Pro- Tyr - Tyr_Ser - lie - Gly - Lys - Ser

(SEQ. ID NO: 185)；理论相对分子质量 2183.539, ESI-MSm/z: found [Μ+3Η] ⁺ 728.8, [Μ+4Η] ⁴ *546.9 [M+5H] 437.7； calu[M+3H] ^3t 728.9, [M+4H] ⁴ ' 546,8， [M+5H] ⁵ * 437.8»

实施例 184

Lys- Thr - Asn - Met- Lys - Ala - Met_Ala - Gly- Ala- Ala- Gly - His_Pro - Tyr-Tyr - Ser- lie. -Lys-Gly-Ser

(SEQ. ID NO: 186)； 理论相对分子质量 2183.539。 S I-MSm/z: found [M+3H] ³ * 728.8, [Μ+4ΗΓ+546.9, [M+5H] 437.7； calu[M+3H] ^t 782.9, [M+4H] ^4t 546.8， [Μ+5Η] ⁵⁺ 437.8。

实施例 185

Lys— Thr—Gly— Met— Lys— His— Met— Ala— Gly— Ala— Ala— Gly— Ala— Pro— Tyr—Tyr— Ser— lie' Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 187)；理论相对分子质量 2197.609» ESI-MSm/z： found [M+3H] ³⁴ 733.5， [ +4Η]'*550.4, [M+5H] 440.5； calu[M+3H] ³ ' 733.5, [M+4H]'* 550.4, [Μ+5ΗΓ 440.5。

实施例 186 Lys-Thr-Gly-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Ala- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser (SEQ. ID NO: 188) ； 理论相对分子质量 2171.573。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³ ' 724.9, [M+4H] ^4t 543.9 [M+5H] ^5t 435.3； calu[M+3H] ³ ' 724.8, [M+4H] ^4t 543.8, [M+5H] ⁵⁺ 435.3。

实施例 187

Lys- Thr- Gly- Met-Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Ala-Ser-Ile-Lys- Lys- Ser

(SEQ. ID NO: 189);理论相对分子质量 2171.573。 ESI- MSm/z : found [M+3H] ^3t 724.9, [M+4H] ⁴ *543.9, [M+5H] 435.3； calu[M+3H] ³⁺ 724.8, [M+4H] ⁴ * 543.9, [M+5H] ⁵⁺ 435.3„

实施例 188

Lys- Thr- Gly- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Ala- Lys- Ser

(SEQ. ID NO: 190);理论相对分子质量 2206.576o ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 736.5, [M+4H] ⁴ '552.6, [M+5H] 442.3； calu[M+3H] ^3t 736.5, [M+4H] ^4t 552.6, [M+5H] ^5t 442.3o

实施例 189

Lys- Thr- Gly- Met- Lys- His- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr-Tyr- Ser- lie- Lys- Ala- Ser

(SEQ. ID NO: 191);理论相对分子质量 2206.576。 ESI- MSm/z : found [M+3H] ³⁺ 736.5， [M+4H] ⁴ *552.6, [M+5H] 442.3； calu[M+3H] ^3t 736.5, [M+4H] ^4< 552.6, [M+5H] ⁵ ' 442.3。

实施例 190

Lys-Thr-Gly-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-Gly-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 192);理论相对分子质量 2183.582。 ESI- MSm/z : found [M+3H] ³ ' 728.9， [M+4H] ⁴ *546.9, [M+5H] 437.7； calu[M+3H] ^3t 728.8, [M+4H] ⁴ * 546.8, [M+5H] ⁵ ' 437.8。

实施例 191

Lys-Thr-Gly-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Gly- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 193);理论相对分子质量 2157.546 ₀ ESI-MSm/z: found [M+3H] ^3t 720.2, [M+4H] ⁴ *540.4, [M+5H] 432.5； calu[M+3H] ^3t 720.0, [M+4H] ^4t 540.4, [M+5H] ⁵⁺ 432.6„

实施例 192

Lys - Thr- Gly- Met-Lys-His- Met - Ala - Gly - Ala - Ala - Gly- His - Pro - Tyr~Gly - Ser- lie- Lys - lys - Ser

(SEQ. ID NO: 194);理论相对分子质量 2157.546 ₀ ESI-MSm/z: found [ +3H] ³ * 720.2, [M+4H] ⁴⁺ 540.4, [M+5H] 432.5； calu[M+3H] ^t 720.4, [M+4H]" 540.6, [M+5H] ⁵ ' 432.6。

实施例 193

Lys-Thr-Gly-Met-Lys-His-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Gly-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 195);理论相对分子质量 2192.549» ESI-MSm/z: found [M+3H] ^t 731.8, [M+4H] ^4÷ 549.1, [M+5H] 439.5； calu[M+3H] ³⁺ 731.9, [M+4H] ⁴ ' 549.0, [M+5H] ^5t 439.6»

实施例 194

lys- Thr - Gly ^_ Met_Lys - His - Met- Ala- Gly- Ala - Ala - Gly - His - Pro - Tyr - Tyr - Ser- lie- Lys_Gly- Ser

(SEQ. ID NO: 196)； 理论相对分子质量 2192.549。 ESI -MSm/z: found [M+3H] ³ * 731.8, [M+4H] ⁴ * 549.1 [M+5H] ⁵ * 439.5； calu[M+3H] ³ ' 731.8， [M+4H] ⁴ ' 549.0, [M+5H] ⁵ ' 439.6。

实施例 195

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Ala- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 197)；理论相对分子质量 2148.536。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³ ' 717.1， [M+4H] ^4÷ 538.1， [M+5H] 430.7； calu[M+3H] ^3t 717.1, [M+4H]" 538.0, [M+5H] ⁵ * 430.8。

实施例 196

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Ala-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 198);理论相对分子质量 2148.536。 ESI- MSm/z:found[M+3H] ³ ' 717.1, [M+4H] ⁴⁺ 538.1, [M+5H] 430.7； calu[M+3H] ^3> 717.0, [MHH]"' 538.0, [M+5H] ⁵ * 430.8.

实施例 197

Lys-Thr~Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Ala-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 199);理论相对分子质量 2183.539。 ESI- MSm/z : found [Μ+3ΗΓ 728.8, [M+4H]"* 546.9, [M+5H] 437.7； calu[M+3H] ³⁺ 728.9, [M+4H] ^t 546.8， [M+5H] ⁵⁺ 437.8。

实施例 198

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser

(SEQ. IDNO:200);理论相对分子质量 2183.539。 ESI- MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 728.8， [M+4H] ⁴ *546.9， [M+5H] ⁵⁺ 437.7； calu[M+3H] ^t 728.9, [M+4H] ^4t 546.9, [M+5H] ⁵ ' 437.8。

实施例 199

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-Gly-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. ID NO: 201) ； 理论相对分子质量 2160.545。 ESI -MSm/z: found [M+3H] ^3t 721.2, [M+4H] ^t 541.1, [M+5H] ^5t 433.1； calu[M+3H] ³ 721.0, [M+4H] ⁴ * 541.0, [M+5H] ⁵⁺ 433.0。

实施例 200

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Gly- Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. IDN0:202);理论相对分子质量 2134.509。 ESI- MSm/z : found [M+3H] ³⁺ 712.5， [M+4H] ⁴ *534.6, [M+5H] ⁵⁺ 427.9； calu[M+3H] ^3t 712.6, [M+4H] ^4t 534.7, [M+5H] ^5t 427.8 ₀

实施例 201

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Gly-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser

(SEQ. IDN0:203);理论相对分子质量 2134.509» ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 712.5, [M+4H] ^4÷ 534.6, [M+5H] ⁵ ' 427.9； calu[M+3H] ^3t 712.6, [M+4H] ⁺ 534.7， [M+5H] ⁵ * 427.8»

实施例 202

Lys-Thr-Asn-Met-Lys-Gly-Met-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly-His-Pro-Tyr- Tyr-Ser-Ile-Gly-Lys-Ser

(SEQ. IDN0:204);理论相对分子质量 2169.512» ESI-MSm/z: found [M+3H] ³⁺ 724.2, [M+4H] ⁴ ' 534, 4, [M+5H] ^5t 434.9； calu[M+3H] ³⁺ 724.0, [M+4H] ⁴ * 534.4, [M+5H] ⁵ ' 434.9。

实施例 203

Lys-Thr- Asn- Met- Lys-Gly- Met- Ala- Gly- Ala- Ala- Gly- His- Pro- Tyr- Tyr- Ser- lie- Lys- Gly- Ser

(SEQ. ID NO :205)； 理论相对分子质量 2169.512。 ESI-MSm/z: found [M+3H] ³ * 724.2, [M+4H] ⁴ ' 543.4, [M+5H] ^5t 434.9； calu[M+3H] ^3t 724.0, [M+4H]' ⁺ 534.4, [M+5H] ^5t 434.9»

MC-JJ6222体内降糖活性实验

取 10周龄雄性昆明小鼠 （体重 18〜22 g)， 随机分组， 每组 6只。 尾静脉注射四氧嘧啶给药建模， 给 药剂量为 60mg/kg， 72小时后， 小鼠禁食 5〜6小时测血糖挑选血糖值范围在 13〜23的小鼠随机分组， 每 组 6只。 成模后的小鼠连续 10天腹腔注射 MC-JJ6222多肽。 在 0分钟， 30分钟， 60分钟， 90分钟， 120 分钟用血糖仪测定血糖值。

如表 2所示， 苦瓜 MC-JJ6222多肽的降血糖活性强于二甲双胍。

MC-JJ6222多肽的降血糖的效应

0分钟 30分钟 60分钟 90分钟 120分钟 阴性空白 4.60+2.38 4.68+2.36 4.62 ±1.94 4.46 ±2.02 4.12 ±1.64 阳性空白 25.32 ±1.77 22.78 ±2.26 21.68±2.82 19.16±1.00 17.58±2.08 二甲双胍 23.15±11.48 20.45 ±5.97 18.03 ±6.24* 16.01 ±3· 84* 14.23 ±5.77*

11· 26士

SEQ. ID NO:117 16.56±7.65" 14.64±3.33*** 13.42士 6.79*** 9·21±4· 55**

3.77***

SEQ. ID NO:119 17.15±3.22** 16.34 ±6.05" 15.34±5.60** 14.52±8.75" 12.48±4.20*

13.11土

SEQ. ID NO:121 19.67±11.57* 17.77±7.73 15.27±6.00** 12.81±7.51**

4.26***

13.80 +

SEQ. ID NO:122 21.35±5.09* 19.42±4.27* 16.20±5.30" 12.38 + 7.88**

6.83***

SEQ. ID NO:123 20.88 ±5.93* 18.25 ±1· 97* 17.68±4.54* 16.18 ±7.55* 12.71 ±4.54**

SEQ. ID NO:128 18.47 ±4· 02" 16.65 ±4.05** 16·'55±7· 65* 14·9±3.72** 11.67±8.21**

SEQ. ID NO:133 17.36 ±7· 16** 15.81±4.18** 14.93 ±3.38*** 13.91±2.36" 10.98±6.11*** SEQ. ID NO:139 20· 44 ±3.04* 18.78 ±1.34* 16.84 ±3.02* 14.54 ±3.24** 14.66 ±3.05*

11.43士

SEQ. ID NO:145 22.28 ±1.60* 16.51 ±2.23** 13.65 ±4.32*" 8.23 ±2.45***

2.41***

SEQ.10 NO:156 17.18±0· 92" 16.10±L64** 15.88 ±2.95* 14.67 ±4.36** 13.82±3· 11*

11.47土

SEQ. ID NO:165 16.45 ±3.53 14.58 ±2.36*** 13.36±5.65*** 9.44 ±5.69**

3.46***

SEQ. ID NO:167 17.55 ±3.57 16.36±6.13** 15.36±5.79" 14.64 ±8· 58" 13.36±4.53*

13.34士

SEQ. ID NO:170 19.44±11.53 17.53 ±7.46 15.47 ±6.53" 12.43 ±2.49

4.52***

13.59士

SEQ. ID N0:171 21.53±0.45 19.37±4.55* 16.58 ±5.42** 12.51±7.08

6.83***

SEQ. ID NO:172 20.55 ±5.46 18.46±1.84* 17.35±4.17* 16.18 ±7.45* 12.51±5.06

SEQ. ID NO:174 18.81 ±4.43 16.28 ±4.42** 16·44±0· 67* 14.42 ±0.94** 11.67 ±4.89**

SEQ.10 NO:176 17.45 ±7.37 15.58 ±4.43" 14.55士 3.67*" 13.82±2.56" 10.72±2· 79*"

SEQ. ID NO:185 20.93 ±3.78 18.55 ±1.64* 16.62 ±3.29* 14.44 ±2.57** 14.28士 1.65*

11.83士

SEQ. ID NO:189 22.48±1.66 16.47 ±2.75** 13.44±4.68*** 8.23 ±0.67***

0.41***

SEQ. ID NO:194 17.69 ±0.48 16.38 ±1· 57** 15.49 ±2.66* 14.58 ±4.57 13.66 ±3.74 n=6, ±s. *尸 <0.05, **尸<0.01, *** < 0.001 vs saline