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Patent Searching and Data


Title:
MORINGA OLEIFERA LEAF EXTRACT HAVING URIC ACID LOWERING ACTIVITY, PREPARATION METHOD THEREFOR AND APPLICATION THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2020/181784
Kind Code:
A1
Abstract:
A moringa oleifera leaf extract having uric acid lowering activity, a preparation method therefor and an application thereof. An extraction method for the extract comprises: after performing microwave drying on fresh moringa oleifera leaves, crushing and sieving; performing reflux extraction by adopting water-ethanol; after centrifuging, performing pressure-reduction concentration on a supernatant to obtain an ethanol extract; after drying residuals, performing heat treatment by using an alkali-method, proteinase enzymolysis, high-speed centrifuging and residual removal, supernatant ultrafiltration and impurity removal, secondary proteinase enzymolysis, high-speed centrifuging, supernatant pressure-reduction concentration, ethanol precipitation and impurity removal, and secondary pressure-reduction concentration to obtain polypeptide substances; adding the ethanol extract and spraying and drying to obtain the moringa oleifera leaf extract.

Inventors:
LIN LIANZHU (CN)
TIAN YUCHEN (CN)
ZHAO MOUMING (CN)
ZHENG LIN (CN)
ZHOU FEIBAI (CN)
Application Number:
PCT/CN2019/114166
Publication Date:
September 17, 2020
Filing Date:
October 29, 2019
Export Citation:
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Assignee:
UNIV SOUTH CHINA TECH (CN)
International Classes:
A61K36/899; A23L2/02; A23L2/04; A23L33/105; A61P3/10
Foreign References:
CN107582581A2018-01-16
CN109806285A2019-05-28
CN108486202A2018-09-04
Other References:
LIANG, WENJUAN ET AL.: "Study on Extract of Moringa oleifera Leaves Reducing the Level of Uric Acid in Hyperuricemia Mice and Its Mechanism", JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES, vol. 45, no. 17, 31 December 2017 (2017-12-31), DOI: 9020304
Attorney, Agent or Firm:
YOGO PATENT & TRADEMARK AGENCY LIMITED COMPANY (CN)
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Claims:
权利要求书

[权利要求 i] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 采用 微波干燥, 碎粉过筛, 水-乙醇回流提取, 离心, 上清液减压浓缩得 醇提取物; 剩余残渣烘干后, 使用碱法热处理、 蛋白酶酶解、 高速离 心去渣、 上清液超滤去杂、 二次蛋白酶酶解、 高速离心、 上清液减压 浓缩、 醇沉去杂、 二次减压浓缩, 最后复配加入醇提取物, 喷雾干燥 , 得到一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物, 该提取物酚类物质含量 >10% , 肽类物质含量 > 40%。

[权利要求 2] 根据权利要求 1所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 包括以下步骤:

( 1) 微波干燥: 将新鲜辣木叶微波干燥, 得到干辣木叶;

(2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过筛, 得到辣木叶 干粉;

(3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 (2) 所得辣木叶干粉与乙醇水溶液 混合, 匀速搅拌, 加热回流提取, 离心, 取上清液得提取液 1, 沉淀 烘干得残渣 1 ;

(4) 减压浓缩: 将提取液 1减压浓缩, 得提取液 2;

(5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水混合, 进行第一次搅拌, 加入 氢氧化钠调节 pH, 进行第二次加热搅拌, 得混悬液 1 ;

(6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解, 灭 酶, 得混悬液 2;

(7) 高速离心: 混悬液 2高速离心后, 取上清液得提取液 3 ;

(8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 减压浓缩得提取液 5 ;

(9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解 , 灭酶, 得混悬液 3 ;

( 10) 高速离心: 混悬液 3高速离心后, 取上清液得提取液 6;

( 11) 减压浓缩: 将提取液 6减压浓缩, 得提取液 7 ; (12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷的无水乙醇, 匀速搅拌后, 离心, 取上清液得提取液 8 ;

(13) 二次减压浓缩: 将提取液 8减压浓缩, 得提取液 9;

(14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 (13) 所得提取液 9混 合, 加热搅拌, 得提取液 10;

(15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物。

[权利要求 3] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (1) 中, 微波干燥时间为 l~3min, 功率为 400~60 0W; 步骤 (2) 中, 所述过筛是过 40目筛; 步骤 (3) 中, 乙醇水溶 液中乙醇浓度为 60~80 vol

% , 辣木叶干粉与乙醇水溶液的料液比为 1:6~10 g/mL, 搅拌速率为 120~180

r/min, 回流温度为 80~90°C, 回流时间为 l~3h, 离心速率为 4000~600 0 离心时间为 20~30min, 烘干温度为 50~60°C; 步骤 (4) 中, 减 压浓缩温度为 50~60°C, 提取液 2中固形物含量为 30~40 wt%。

[权利要求 4] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (5) 中, 所述残渣 1与去离子水料液比为 1:8~1: 16 g/mL, 第一次搅拌时间为 15~25 min, pH值调节至 7.0~8.0, 第一次搅 拌和第二次搅拌的速率均为 120~180 r/min, 第二次搅拌时间为 20~40 min, 第二次搅拌温度为 50~60°C; 步骤 (6) 所述蛋白酶的加入量为 混悬液 1中残渣 1质量的 2~5 %, 蛋白酶为碱性蛋白酶和复合蛋白酶, 碱性蛋白酶的加入量占总酶量的 50~70%, 复合蛋白酶的加入量占总 酶量的 30~50%, 所述碱性蛋白酶为诺维信型号为 NS37071的蛋白酶 , 复合蛋白酶为诺维信公司的复合蛋白酶 Protamex, 酶解温度为 52~5 8°C, 酶解时间为 8~16h, 搅拌速率为 120~180

r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20-30 min。

[权利要求 5] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (7) 和步骤 (10) 中, 高速离心速率为 6000~8000 离心时间为 15~25 min; 步骤 (8) 中, 超滤除杂的超滤膜分子量 为 lOOOODa, 超滤次数为 4~6次, 所述提取液 4为分子量< lOOOODa的 超滤滤出液, 减压浓缩温度为 50~60°C, 提取液 5中固形物含量为 8~10 wt%。

[权利要求 6] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (9) 所述蛋白酶的加入量为提取液 5固形物含量的 3-6% , 蛋白酶为胰酶和复合蛋白酶, 胰酶的加入量占总酶量的 60~80 % , 复合蛋白酶的加入量占总酶量的 20~40%, 所述胰酶为南宁庞博 生物工程公司的胰酶, 复合蛋白酶为诺维信公司的复合蛋白酶 Protam ex, 酶解温度为 40~50°C, 酶解时间为 2~4 h, 搅拌速率为 120~180 r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20~30 min。

[权利要求 7] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (11) 和步骤 (13) 中, 减压浓缩温度为 50~60°C , 提取液 7和提取液 9中固形物含量为 30~40 wt% ; 步骤 (12) 中, 所 述预冷的无水乙醇为预冷至 4~8°C的无水乙醇, 无水乙醇的加入量为 提取液 7和无水乙醇二者质量和的 10~20

wt% , 匀速搅拌为室温下 120~180

r/min搅拌 3~5h, 所述离心的速率为 6000~8000 g

, 离心时间为 20~30min。

[权利要求 8] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (14) 中, 搅拌速率为 120~180 r/min, 搅拌时间为 30~50 min, 温度为 65~85°C。

[权利要求 9] 权利要求 1至 8任一项所述的制备方法制备的辣木叶提取物。

[权利要求 10] 权利要求 9所述的辣木叶提取物在制备降尿酸保健品和药品中的应用

Description:
一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物及其制备 方法与应用

技术领域

[0001] 本发明属于辣木叶深加工、 高值化领域, 涉及一种具有降尿酸活性的辣木叶提 取物及其制备方法与应用。

背景技术

[0002] 在正常嘌呤饮食状态下, 非同日两次空腹血尿酸水平男性高于 42(Honol/L, 女 性高于 360 pmol/L即称为高尿酸血症。 痛风是在高尿酸血症的生化基础上发展而 成的一种代谢性疾病, 高尿酸血症是痛风的重要生化基础, 也是引起痛风性关 节炎、 痛风性肾病和痛风石沉积的原因。 除此之外, 高尿酸血症与高血压、 高 血脂、 肥胖病症、 冠状动脉疾病等相关, 是上述病症的关键风险因素。 随着人 民生活水平的进一步提高, 高尿酸血症和痛风的发病率逐渐上升, 发病年龄提 前。 目前, 我国成人高尿酸血症发病率为 18%, 痛风发病率约为 2%, 且正以 9.7 %的年增长率迅速增加。 因此, 开发具有降尿酸活性、 毒副作用低的保健食品与 药品具有显著的社会经济效益。

[0003] H木 ( Moringa oleifera Lam.), 是一种辣木科辣木属热带落叶木本植物, 在我国 广东、 广西、 海南、 四川和云南等地大规模种植, 已形成了规模化的原料种植 基地。 辣木叶于 2012年被批准为新资源食品, 其营养成分丰富, 蛋白质含量为 2 7%左右, 总糖含量为 15%左右, 除此之外, 还含有多酚, 类固醇, 生物碱等活 性成分, 具有较大的开发潜力。 近年的研究发现, 辣木叶具有抗炎、 抗氧化、 抑菌等作用。

[0004] 然而, 关于具有降尿酸活性的辣木叶提取物的相关报 道较少。 本发明提供了一 种辣木叶提取物的制备方法, 并通过动物模型验证其体内降尿酸活性。

发明概述

技术问题 问题的解决方案

技术解决方案

[0005] 本发明的目的在于提供一种具有降尿酸活性的 辣木叶提取物及其制备方法与应 用, 所述辣木叶提取物具有良好降尿酸活性。 该提取物通过动物实验验证具有 良好的降尿酸功效。 本发明提取工艺简单、 整个工艺流程均可达食品级要求, 可应用于药品、 保健品和食品等领域当中。

[0006] 本发明的目的至少是通过以下技术方案之一实 现的。

[0007] 本发明提供了一种具有降尿酸活性的辣木叶提 取物的制备方法, 采用微波干燥 , 碎粉过筛, 水-乙醇回流提取, 离心, 上清液减压浓缩得醇提取物; 剩余残渣 烘干后, 使用碱法热处理、 蛋白酶酶解、 高速离心去渣、 上清液超滤去杂、 二 次蛋白酶酶解、 高速离心、 上清液减压浓缩、 醇沉去杂、 二次减压浓缩, 最后 复配加入醇提取物, 喷雾干燥, 得到一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物, 该 提取物酚类物质含量 >10%, 肽类物质含量 > 40%。

[0008] 优选地, 所述方法包括以下具体步骤:

[0009] ( 1) 微波干燥: 将新鲜辣木叶微波干燥, 得到干辣木叶;

[0010] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过筛, 得到辣木叶干粉;

[0011] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 ⑵ 所得辣木叶干粉与乙醇水溶液混合, 匀 速搅拌, 加热回流提取, 离心, 取上清液得提取液 1, 沉淀烘干得残渣 1 ;

[0012] (4) 减压浓缩: 将提取液 1减压浓缩, 得提取液 2;

[0013] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水混合, 进行第一次搅拌, 加入氢氧化钠 调节 pH, 进行第二次加热搅拌, 得混悬液 1 ;

[0014] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解, 灭酶, 得混 悬液 2;

[0015] (7) 高速离心: 混悬液 2高速离心后, 取上清液得提取液 3 ;

[0016] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 弃去大分子截留液, 取小分子 滤出液, 得提取液 4, 减压浓缩得提取液 5 ;

[0017] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解, 灭酶, 得混悬液 3 ; [0018] (10) 高速离心: 混悬液 3高速离心后, 取上清液得提取液 6;

[0019] (11) 减压浓缩: 将提取液 6减压浓缩, 得提取液 7 ;

[0020] (12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷的无水乙醇, 匀速搅拌后, 离心, 取 上清液得提取液 8 ;

[0021] (13) 二次减压浓缩: 将提取液 8减压浓缩, 得提取液 9;

[0022] (14) 复配: 将步骤 (4) 所得醇提取液 2和步骤 (13) 所得提取液 9混合, 加 热搅拌, 得提取液 10;

[0023] (15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物。

[0024] 优选地, 步骤 (1) 中, 微波干燥时间为 l~3min, 功率为 400~600W; 步骤 (2 ) 中, 所述过筛是过 40目筛; 步骤 (3) 中, 乙醇水溶液中乙醇浓度为 60~80 vol % , 辣木叶干粉与乙醇水溶液的料液比为 l:6~10 g/mL, 搅拌速率为 120~180 r/min, 回流温度为 80~90°C, 回流时间为 l~3h, 离心速率为 4000~6000 离心 时间为 20~30min, 烘干温度为 50~60°C; 步骤 (4) 中, 减压浓缩温度为 50~60°C , 提取液 2中固形物含量为 30~40 wt%。

[0025] 优选地, 步骤 (5) 中, 所述残渣 1与去离子水料液比为 l:8~l: 16 g/mL, 第一次 搅拌时间为 15~25 min, pH值调节至 7.0~8.0, 第一次搅拌和第二次搅拌的速率均 为 120~180 r/min, 第二次搅拌时间为 20~40 min, 第二次搅拌温度为 50~60°C; 步 骤 (6) 所述蛋白酶的加入量为混悬液 1中残渣 1质量的 2~5%, 蛋白酶为碱性蛋白 酶和复合蛋白酶, 碱性蛋白酶的加入量占总酶量的 50~70%, 复合蛋白酶的加入 量占总酶量的 30~50%, 所述碱性蛋白酶为诺维信型号为 NS37071的蛋白酶, 复 合蛋白酶为诺维信公司的复合蛋白酶 Protamex, 酶解温度为 52~58°C, 酶解时间 为 8~16h, 搅拌速率为 120~ 180 r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20-30 min。

[0026] 优选地, 步骤 (7) 和步骤 (10) 中, 高速离心速率为 6000~8000 离心时间 为 15~25

min; 步骤 (8) 中, 超滤除杂的超滤膜分子量为 lOOOODa, 超滤次数为 4~6次, 所述提取液 4为分子量<10000Da的超滤滤出液, 减压浓缩温度为 50~60°C, 提取 液 5中固形物含量为 8~10 wt%。

[0027] 优选地, 步骤 (9) 所述蛋白酶的加入量为提取液 5固形物含量的 3~6%, 蛋白 酶为胰酶和复合蛋白酶, 胰酶的加入量占总酶量的 60~80%, 复合蛋白酶的加入 量占总酶量的 20~40%, 所述胰酶为南宁庞博生物工程公司的胰酶, 复合蛋白酶 为诺维信公司的复合蛋白酶 Protamex, 酶解温度为 40~50°C, 酶解时间为 2~4 h, 搅拌速率为 120-180 r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20~30 min。

[0028] 优选地, 步骤 (11) 和步骤 (13) 中, 减压浓缩温度为 50~60°C, 提取液 7和提 取液 9中固形物含量为 30~40 wt% ; 步骤 (12) 中, 所述预冷的无水乙醇为预冷 至 4~8°C的无水乙醇, 无水乙醇的加入量为提取液 7和无水乙醇二者质量和的 10~ 20 wt% , 匀速搅拌为室温下 120~180

r/min搅拌 3~5h, 所述离心的速率为 6000~8000 离心时间为 20~30min。

[0029] 优选地, 步骤 (14) 中, 搅拌速率为 120~ 180 r/min, 搅拌时间为 30~50 min, 温度为 65~85°C。

[0030] 本发明还提供了所述制备方法制备的辣木叶提 取物。

[0031] 本发明还提供了一种所述的辣木叶提取物在制 备降尿酸保健品和药品中的应用

发明的有益效果

有益效果

[0032] 和现有技术相比, 本发明具有如下优点和效果:

[0033] (1) 本发明的制备方法制备得到一种主要含辣木叶 多酚和多肽的具有良好降 尿酸作用的辣木叶提取物, 该提取物酚类物质含量>10%, 肽类物质含量>40%

[0034] (2) 本发明的整个制备工艺流程均可达食品级要求 。

[0035] (3) 本发明所得辣木叶提取物经过高尿酸血症大鼠 动物实验模型验证具有良 好的降尿酸活性, 能够有效地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸含 量。

发明实施例

本发明的实施方式

[0036] 为更好地理解本发明, 下面将具体阐明动物实验的具体操作和具体实 施例对本 发明作进一步说明, 但本发明的实施方式不限于此。

[0037] 实施例 1 [0038] 本实施例提供了一种具有降尿酸活性的辣木叶 提取物的制备方法, 具体包括如 下步骤:

[0039] ( 1) 微波干燥: 微波功率 400W, 将新鲜辣木叶微波干燥 1 min, 得到干辣木叶

[0040] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉

[0041] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 (2) 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 60 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1:6 g/mL混合, 120

r/min匀速搅拌条件下, 80°C下回流提取 1 h, 4000 g离心 20 min, 取上清液得提取 液 1, 50°C烘干沉淀得残渣 1。

[0042] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 50°C下减压浓缩至固形物含量为 30 wt%, 得提取 液 2。

[0043] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水按料液比 1:8 g/mL混合, 120 r/min匀速 搅拌 15 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 7.0, 50°C下 120 r/min匀速搅拌 20 min, 得 混悬液 1。

[0044] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 加入量为混悬液 1中的残渣 1质量 的 2%, 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 50%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 50%, 52°C下 120 r/min匀速搅拌, 酶解 8 h, 90 °C灭酶 20 min, 得混悬液 2。

[0045] (7) 高速离心: 混悬液 2采用 6000 g离心 15 min后, 取上清液得提取液 3。

[0046] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超滤 次数为 4次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 50°C减压浓缩, 得固形物含量为 8 wt%的提取液 5。

[0047] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 加入量为提取液 5固形物含 量的 3%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 60%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 40%, 40°C下 120r/min匀速搅拌, 酶解 2 h, 90 °C灭酶 20 min, 得混悬液 3。

[0048] ( 10) 高速离心: 混悬液 3采用 6000 g离心 15 min后, 取上清液, 得提取液 6。 [0049] ( 11) 减压浓缩: 将提取液 6在 50°C下减压浓缩至固形物含量为 30 wt%, 得提 取液 7。

[0050] ( 12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷至 4。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇含 量达到 10 wt%, 120 r/min匀速搅拌 3h后, 6000 g离心 20

min, 取上清液得提取液 8。

[0051] ( 13) 二次减压浓缩: 将提取液 8在 50°C下减压浓缩至固形物含量为 30 wt%, 得提取液 9。

[0052] ( 14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 ( 13) 所得提取液 9在 65°C下, 1

20 r/min勻速搅拌 30 min, 得提取液 10。

[0053] ( 15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 1, 酚类化合物 含量为 11.4%, 肽类物质含量为 42.9%。

[0054] 实施例 2

[0055] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:

[0056] ( 1) 微波干燥: 微波功率 500W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 2 min, 得到干辣木 叶。

[0057] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉

[0058] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 ⑵ 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 70 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1 : 8 g/mL混合, 150

r/min匀速搅拌条件下, 85°C下回流提取 2 h, 5000 g离心 25 min, 取上清液得提取 液 1, 55°C烘干沉淀得残渣 1。

[0059] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 55°C下减压浓缩至固形物含量为 35 wt%, 得提取 液 2。

[0060] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水按料液比 1: 12 g/mL混合, 150 r/min匀速 搅拌 20 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 7.5, 55°C下 150 r/min匀速搅拌 30 min, 得 混悬液 1。

[0061] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 加入量为混悬液 1中残渣 1质量的

3.5% , 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 60%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 40%, 55°C下 150 r/min匀速搅拌, 酶解 12 h, 93°C灭酶 25 min, 得混悬液 2。

[0062] (7) 高速离心: 混悬液 2采用 7000 g离心 20 min后, 取上清液得提取液 3。

[0063] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超滤 次数为 5次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 55°C减压浓缩, 得固形物含量为 9 wt%的提取液 5。

[0064] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 加入量为提取液 5固形物含 量的 4.5%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 70%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 30%, 45°C下 150 r/min匀速搅拌, 酶解 3 h, 93 °C灭酶 25 min, 得混悬液 3。

[0065] ( 10) 高速离心: 混悬液 3采用 7000 离心 20 min后, 取上清液, 得提取液 6。

[0066] ( 11) 减压浓缩: 将提取液 6在 55°C下减压浓缩至固形物含量为 35 wt%, 得提 取液 7。

[0067] ( 12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷至 6。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇含 量达到 15 wt%, 150 r/min匀速搅拌 4 h后, 7000 g离心 25

min, 取上清液得提取液 8。

[0068] ( 13) 二次减压浓缩: 将提取液 8在 55°C下减压浓缩至固形物含量为 35 wt%, 得提取液 9。

[0069] ( 14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 ( 13) 所得提取液 9在 75°C下, 1

50 r/min勻速搅拌 40 min, 得提取液 10。

[0070] ( 15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 2, 酚类化合物 含量为 10.7%, 肽类物质含量为 45.3%。

[0071] 实施例 3

[0072] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:

[0073] ( 1) 微波干燥: 微波功率 600W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 3 min, 得到干辣木 叶。

[0074] ⑵ 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉 [0075] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 ⑵ 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 80 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1: 10 g/mL混合, 180 r/min匀速搅拌条件下, 90。(:下回流提 取 3 h, 600( ^离心 30 min, 取上清液得提取液 1, 60°C烘干沉淀得残渣 1。

[0076] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提取 液 2。

[0077] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水按料液比 1: 16 g/mL混合, 180 r/min匀速 搅拌 25 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 8.0, 60°C下 180 r/min匀速搅拌 40 min, 得 混悬液 1。

[0078] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 加入量为混悬液 1中残渣 1质量的

5% , 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 70%, 诺维信公司的 复合蛋白酶的加入量占总酶量的 30%, 58°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 16 h, 96 °C灭酶 30 min, 得混悬液 2。

[0079] (7) 高速离心: 混悬液 2采用 8000 g离心 25 min后, 取上清液得提取液 3。

[0080] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超滤 次数为 6次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 60°C减压浓缩, 得固形物含量为 10 wt%的提取液 5。

[0081] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 加入量为提取液 5固形物含 量的 6%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 80%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 20%, 50°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 4 h, 96 °C灭酶 30 min, 得混悬液 3。

[0082] ( 10) 高速离心: 混悬液 3采用 8000 g离心 25 min后, 取上清液, 得提取液 6。

[0083] ( 11) 减压浓缩: 将提取液 6在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提 取液 7。

[0084] ( 12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷至 8。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇含 量达到 20 wt%, 180 r/min匀速搅拌 5 h后, 8000 g离心 30

min, 取上清液得提取液 8。

[0085] ( 13) 二次减压浓缩: 将提取液 8在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提取液 9。 [0086] ( 14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 ( 13) 所得提取液 9在 85°C下, 1

80 r/min勻速搅拌 50 min, 得提取液 10。

[0087] ( 15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 3 , 酚类化合物 含量为 10.3%, 肽类物质含量为 44.1%。

[0088] 对比例 4

[0089] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:

[0090] ( 1) 微波干燥: 微波功率 600W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 3 min, 得到干辣木 叶。

[0091] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉

[0092] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 (2) 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 80 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1: 10 g/mL混合, 180 r/min匀速搅拌条件下, 90。(:下回流提 取 3 h, 600( ^离心 30 min, 取上清液得提取液 1。

[0093] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提取 液 2。

[0094] (5) 喷雾干燥: 将提取液 2进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 4, 酚类化合物含 量为 23.8%。

[0095] 对比例 5

[0096] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:

[0097] ( 1) 微波干燥: 微波功率 600W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 3 min, 得到干辣木 叶。

[0098] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉

[0099] (3) 碱法热处理: 将辣木叶干粉与去离子水按料液比 1: 16 g/mL混合, 180 r/min匀速搅拌 25 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 8.0, 60°C下 180

r/min勻速搅拌 40 min, 得混悬液 C51。

[0100] (4) 蛋白酶酶解: 在混悬液 C51中加入蛋白酶, 加入量为辣木叶干粉质量的 5

% , 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 70%, 诺维信公司的 复合蛋白酶的加入量占总酶量的 30%, 58°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 16 h, 96 °C灭酶 30 min, 得混悬液 C52。

[0101] (5) 高速离心: 混悬液 C52釆用 8000 g离心 25 min后, 取上清液得提取液 A53

[0102] (6) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 A53 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超 滤次数为 6次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 A54, 60°C减压 浓缩, 得固形物含量为 10 wt%的提取液 A55。

[0103] (7) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 A55中加入蛋白酶, 加入量为提取液 A55固形 物含量的 6%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 80%, 诺维信 公司的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 20%, 50°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 4 h , 96°C灭酶 30 min, 得混悬液 C53。

[0104] (8) 高速离心: 混悬液 C53采用 8000 g离心 2 5

min后, 取上清液, 得提取液 A56。

[0105] (9) 减压浓缩: 将提取液 A56在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得 提取液 A57。

[0106] ( 10) 醇沉去杂: 向提取液 A57中加入预冷至 8。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇 含量达到 20 wt%, 180 r/min匀速搅拌 5 h后, 8000 g离心 30 min, 取上清液得提取 液 A58。

[0107] ( 11) 二次减压浓缩: 将提取液 A58在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%

, 得酶解提取液 A59。

[0108] ( 12) 喷雾干燥: 将混合提取液 A59进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 5 , 酚类化 合物含量为 2.9%, 肽类物质含量为 37.4%。

[0109] 高尿酸血症大鼠模型的实验研究:

[0110] ( 1) 实验动物: 雄性 SD大鼠, 21 d龄, 100-110 g , 购于广东省医学实验动物 中心。

[0111] (2) 动物饲养环境: 室温 22±2°C, 相对湿度 50%~70%, 每日光照黑暗各 12小 时, 饮用水采用反渗透紫外灭菌水。

[0112] (3) 动物实验: 适应性饲养 7天结束后, 随机分为实验组、 正常组 ( 12只) 。 实验组大鼠每天灌胃氧嗪酸钾 (2g/kg) , 7天后, 腹腔注射 3%戊巴比妥钠 (30 mg/kg体重) 麻醉, 眼眶后静脉丛采血, 4°C、 3000 g离心 15 min取上层血清测定 尿酸含量, 正常组大鼠灌胃等容积的溶媒。 将尿酸含量 的大鼠确定为 造模成功。 将造模成功的大鼠随机分为模型对照组, 别嘌呤醇组 (25 mg/kg) , 辣木叶提取物 1组 (500 mg/kg) 、 辣木叶提取物 2组 (500 mg/kg) 、 辣木叶提取 物 3组 (500 mg/kg) , 辣木叶提取物 4组 (500 mg/kg) 和辣木叶提取物 5组 (500 mg/kg) , 每组 12只, 灌胃给药 (给药容积 10mL/kg) , 模型大鼠给予等容积的 蒸馏水。 连续处理 30天。 药物处理第 15、 30天, 腹腔注射 3%戊巴比妥钠 (30 mg/kg) 麻醉, 眼眶后静脉丛采血, 4°C、 3000 g离心 15 min取上层血清测定尿酸 含量。 血清尿酸严格按照尿酸检测试剂盒 (南京建成生物工程研究所) 说明进 行操作和测定。

[0113] 动物实验结果分析

[0114] 表 1辣木叶提取物对高尿酸血症大鼠血清尿酸水 的影响

[0115]

尿酸® (umol/L)

❹ 15 3()天

: £常组 0.23 b S75S±13.22ii 模型组 2{6.33 . "a 27531土 24:S5a 252 ' 3M3 m 别嚷吟醇组 2iOJ7A2633a 49.H8±10.04e 52Jfc:i2 i0e 練木叶擬取物 I 2I069.t3()I0a I7L69^20,S2c !59.95^iS.41c 辣木叶提取 _ 2 219.43土 3!編 I6758±i9.66c

猶本叶機取 ft 3 222J:fe27.06a I75J3;fc2S94c i5S,5?&2l.31c 諫木時擬觀物 4 2IIJ(&2938JS 225, ( >7^30311> 215.73±24J2i> 嫁:相 !機取物 5 2I9.t(B:3I;03a 239.17*3099b 231.79±27.22{>

[0116] 不同字母表示同一时期组间具有显著性差异 /? <0.05, 相同字母表示组间没有 显著性差异 0.05 [0117] 由表 1可知, 在造模后, 模型组、 别嘌呤醇组和 5个辣木叶提取物组的大鼠血清 尿酸水平要显著高于正常组 (n=12, ^ < 0.05) , 且四组的血清尿酸水平无显著 性差异 (n=12, ^ > 0.05) 。 在给药 15天和 30天时, 别嘌呤醇组和 5个辣木叶提 取物组的尿酸水平均显著低于模型组 (n=12, ^ < 0.05) , 说明辣木叶提取物能 显著降低高尿酸血症大鼠血清尿酸水平, 其中, 辣木叶提取物 1,2, 3在体内的降 尿酸作用最好。 然而, 辣木叶提取物 4的制备流程中缺少了辣木叶肽的提取及复 合; 辣木叶提取物 5的制备流程中缺少了辣木叶多酚的提取及复 ; 辣木叶提取 物 4, 5组的大鼠血清尿酸水平显著高于辣木叶提取 1, 2, 3组 (n=12,

< 0.05) 。

[0118] 本发明实施例可见, 整个制备工艺流程简单、 各环节均可达食品级要求, 制备 成本低。

[0119] 以上实施例仅为本发明较优的实施方式, 仅用于解释本发明, 而非限制本发明 , 本领域技术人员在未脱离本发明精神实质下所 作的改变、 替换、 修饰等均应 属于本发明的保护范围。