TIAN YUCHEN (CN)
ZHAO MOUMING (CN)
ZHENG LIN (CN)
ZHOU FEIBAI (CN)
CN107582581A | 2018-01-16 | |||
CN109806285A | 2019-05-28 | |||
CN108486202A | 2018-09-04 |
权利要求书 [权利要求 i] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 采用 微波干燥, 碎粉过筛, 水-乙醇回流提取, 离心, 上清液减压浓缩得 醇提取物; 剩余残渣烘干后, 使用碱法热处理、 蛋白酶酶解、 高速离 心去渣、 上清液超滤去杂、 二次蛋白酶酶解、 高速离心、 上清液减压 浓缩、 醇沉去杂、 二次减压浓缩, 最后复配加入醇提取物, 喷雾干燥 , 得到一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物, 该提取物酚类物质含量 >10% , 肽类物质含量 > 40%。 [权利要求 2] 根据权利要求 1所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 包括以下步骤: ( 1) 微波干燥: 将新鲜辣木叶微波干燥, 得到干辣木叶; (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过筛, 得到辣木叶 干粉; (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 (2) 所得辣木叶干粉与乙醇水溶液 混合, 匀速搅拌, 加热回流提取, 离心, 取上清液得提取液 1, 沉淀 烘干得残渣 1 ; (4) 减压浓缩: 将提取液 1减压浓缩, 得提取液 2; (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水混合, 进行第一次搅拌, 加入 氢氧化钠调节 pH, 进行第二次加热搅拌, 得混悬液 1 ; (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解, 灭 酶, 得混悬液 2; (7) 高速离心: 混悬液 2高速离心后, 取上清液得提取液 3 ; (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 减压浓缩得提取液 5 ; (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解 , 灭酶, 得混悬液 3 ; ( 10) 高速离心: 混悬液 3高速离心后, 取上清液得提取液 6; ( 11) 减压浓缩: 将提取液 6减压浓缩, 得提取液 7 ; (12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷的无水乙醇, 匀速搅拌后, 离心, 取上清液得提取液 8 ; (13) 二次减压浓缩: 将提取液 8减压浓缩, 得提取液 9; (14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 (13) 所得提取液 9混 合, 加热搅拌, 得提取液 10; (15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物。 [权利要求 3] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (1) 中, 微波干燥时间为 l~3min, 功率为 400~60 0W; 步骤 (2) 中, 所述过筛是过 40目筛; 步骤 (3) 中, 乙醇水溶 液中乙醇浓度为 60~80 vol % , 辣木叶干粉与乙醇水溶液的料液比为 1:6~10 g/mL, 搅拌速率为 120~180 r/min, 回流温度为 80~90°C, 回流时间为 l~3h, 离心速率为 4000~600 0 离心时间为 20~30min, 烘干温度为 50~60°C; 步骤 (4) 中, 减 压浓缩温度为 50~60°C, 提取液 2中固形物含量为 30~40 wt%。 [权利要求 4] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (5) 中, 所述残渣 1与去离子水料液比为 1:8~1: 16 g/mL, 第一次搅拌时间为 15~25 min, pH值调节至 7.0~8.0, 第一次搅 拌和第二次搅拌的速率均为 120~180 r/min, 第二次搅拌时间为 20~40 min, 第二次搅拌温度为 50~60°C; 步骤 (6) 所述蛋白酶的加入量为 混悬液 1中残渣 1质量的 2~5 %, 蛋白酶为碱性蛋白酶和复合蛋白酶, 碱性蛋白酶的加入量占总酶量的 50~70%, 复合蛋白酶的加入量占总 酶量的 30~50%, 所述碱性蛋白酶为诺维信型号为 NS37071的蛋白酶 , 复合蛋白酶为诺维信公司的复合蛋白酶 Protamex, 酶解温度为 52~5 8°C, 酶解时间为 8~16h, 搅拌速率为 120~180 r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20-30 min。 [权利要求 5] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (7) 和步骤 (10) 中, 高速离心速率为 6000~8000 离心时间为 15~25 min; 步骤 (8) 中, 超滤除杂的超滤膜分子量 为 lOOOODa, 超滤次数为 4~6次, 所述提取液 4为分子量< lOOOODa的 超滤滤出液, 减压浓缩温度为 50~60°C, 提取液 5中固形物含量为 8~10 wt%。 [权利要求 6] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (9) 所述蛋白酶的加入量为提取液 5固形物含量的 3-6% , 蛋白酶为胰酶和复合蛋白酶, 胰酶的加入量占总酶量的 60~80 % , 复合蛋白酶的加入量占总酶量的 20~40%, 所述胰酶为南宁庞博 生物工程公司的胰酶, 复合蛋白酶为诺维信公司的复合蛋白酶 Protam ex, 酶解温度为 40~50°C, 酶解时间为 2~4 h, 搅拌速率为 120~180 r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20~30 min。 [权利要求 7] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (11) 和步骤 (13) 中, 减压浓缩温度为 50~60°C , 提取液 7和提取液 9中固形物含量为 30~40 wt% ; 步骤 (12) 中, 所 述预冷的无水乙醇为预冷至 4~8°C的无水乙醇, 无水乙醇的加入量为 提取液 7和无水乙醇二者质量和的 10~20 wt% , 匀速搅拌为室温下 120~180 r/min搅拌 3~5h, 所述离心的速率为 6000~8000 g , 离心时间为 20~30min。 [权利要求 8] 根据权利要求 2所述的具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方法, 其特征在于, 步骤 (14) 中, 搅拌速率为 120~180 r/min, 搅拌时间为 30~50 min, 温度为 65~85°C。 [权利要求 9] 权利要求 1至 8任一项所述的制备方法制备的辣木叶提取物。 [权利要求 10] 权利要求 9所述的辣木叶提取物在制备降尿酸保健品和药品中的应用 |
技术领域
[0001] 本发明属于辣木叶深加工、 高值化领域, 涉及一种具有降尿酸活性的辣木叶提 取物及其制备方法与应用。
背景技术
[0002] 在正常嘌呤饮食状态下, 非同日两次空腹血尿酸水平男性高于 42(Honol/L, 女 性高于 360 pmol/L即称为高尿酸血症。 痛风是在高尿酸血症的生化基础上发展而 成的一种代谢性疾病, 高尿酸血症是痛风的重要生化基础, 也是引起痛风性关 节炎、 痛风性肾病和痛风石沉积的原因。 除此之外, 高尿酸血症与高血压、 高 血脂、 肥胖病症、 冠状动脉疾病等相关, 是上述病症的关键风险因素。 随着人 民生活水平的进一步提高, 高尿酸血症和痛风的发病率逐渐上升, 发病年龄提 前。 目前, 我国成人高尿酸血症发病率为 18%, 痛风发病率约为 2%, 且正以 9.7 %的年增长率迅速增加。 因此, 开发具有降尿酸活性、 毒副作用低的保健食品与 药品具有显著的社会经济效益。
[0003] H木 ( Moringa oleifera Lam.), 是一种辣木科辣木属热带落叶木本植物, 在我国 广东、 广西、 海南、 四川和云南等地大规模种植, 已形成了规模化的原料种植 基地。 辣木叶于 2012年被批准为新资源食品, 其营养成分丰富, 蛋白质含量为 2 7%左右, 总糖含量为 15%左右, 除此之外, 还含有多酚, 类固醇, 生物碱等活 性成分, 具有较大的开发潜力。 近年的研究发现, 辣木叶具有抗炎、 抗氧化、 抑菌等作用。
[0004] 然而, 关于具有降尿酸活性的辣木叶提取物的相关报 道较少。 本发明提供了一 种辣木叶提取物的制备方法, 并通过动物模型验证其体内降尿酸活性。
发明概述
技术问题 问题的解决方案
技术解决方案
[0005] 本发明的目的在于提供一种具有降尿酸活性的 辣木叶提取物及其制备方法与应 用, 所述辣木叶提取物具有良好降尿酸活性。 该提取物通过动物实验验证具有 良好的降尿酸功效。 本发明提取工艺简单、 整个工艺流程均可达食品级要求, 可应用于药品、 保健品和食品等领域当中。
[0006] 本发明的目的至少是通过以下技术方案之一实 现的。
[0007] 本发明提供了一种具有降尿酸活性的辣木叶提 取物的制备方法, 采用微波干燥 , 碎粉过筛, 水-乙醇回流提取, 离心, 上清液减压浓缩得醇提取物; 剩余残渣 烘干后, 使用碱法热处理、 蛋白酶酶解、 高速离心去渣、 上清液超滤去杂、 二 次蛋白酶酶解、 高速离心、 上清液减压浓缩、 醇沉去杂、 二次减压浓缩, 最后 复配加入醇提取物, 喷雾干燥, 得到一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物, 该 提取物酚类物质含量 >10%, 肽类物质含量 > 40%。
[0008] 优选地, 所述方法包括以下具体步骤:
[0009] ( 1) 微波干燥: 将新鲜辣木叶微波干燥, 得到干辣木叶;
[0010] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过筛, 得到辣木叶干粉;
[0011] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 ⑵ 所得辣木叶干粉与乙醇水溶液混合, 匀 速搅拌, 加热回流提取, 离心, 取上清液得提取液 1, 沉淀烘干得残渣 1 ;
[0012] (4) 减压浓缩: 将提取液 1减压浓缩, 得提取液 2;
[0013] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水混合, 进行第一次搅拌, 加入氢氧化钠 调节 pH, 进行第二次加热搅拌, 得混悬液 1 ;
[0014] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解, 灭酶, 得混 悬液 2;
[0015] (7) 高速离心: 混悬液 2高速离心后, 取上清液得提取液 3 ;
[0016] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 弃去大分子截留液, 取小分子 滤出液, 得提取液 4, 减压浓缩得提取液 5 ;
[0017] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 恒温搅拌进行酶解, 灭酶, 得混悬液 3 ; [0018] (10) 高速离心: 混悬液 3高速离心后, 取上清液得提取液 6;
[0019] (11) 减压浓缩: 将提取液 6减压浓缩, 得提取液 7 ;
[0020] (12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷的无水乙醇, 匀速搅拌后, 离心, 取 上清液得提取液 8 ;
[0021] (13) 二次减压浓缩: 将提取液 8减压浓缩, 得提取液 9;
[0022] (14) 复配: 将步骤 (4) 所得醇提取液 2和步骤 (13) 所得提取液 9混合, 加 热搅拌, 得提取液 10;
[0023] (15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物。
[0024] 优选地, 步骤 (1) 中, 微波干燥时间为 l~3min, 功率为 400~600W; 步骤 (2 ) 中, 所述过筛是过 40目筛; 步骤 (3) 中, 乙醇水溶液中乙醇浓度为 60~80 vol % , 辣木叶干粉与乙醇水溶液的料液比为 l:6~10 g/mL, 搅拌速率为 120~180 r/min, 回流温度为 80~90°C, 回流时间为 l~3h, 离心速率为 4000~6000 离心 时间为 20~30min, 烘干温度为 50~60°C; 步骤 (4) 中, 减压浓缩温度为 50~60°C , 提取液 2中固形物含量为 30~40 wt%。
[0025] 优选地, 步骤 (5) 中, 所述残渣 1与去离子水料液比为 l:8~l: 16 g/mL, 第一次 搅拌时间为 15~25 min, pH值调节至 7.0~8.0, 第一次搅拌和第二次搅拌的速率均 为 120~180 r/min, 第二次搅拌时间为 20~40 min, 第二次搅拌温度为 50~60°C; 步 骤 (6) 所述蛋白酶的加入量为混悬液 1中残渣 1质量的 2~5%, 蛋白酶为碱性蛋白 酶和复合蛋白酶, 碱性蛋白酶的加入量占总酶量的 50~70%, 复合蛋白酶的加入 量占总酶量的 30~50%, 所述碱性蛋白酶为诺维信型号为 NS37071的蛋白酶, 复 合蛋白酶为诺维信公司的复合蛋白酶 Protamex, 酶解温度为 52~58°C, 酶解时间 为 8~16h, 搅拌速率为 120~ 180 r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20-30 min。
[0026] 优选地, 步骤 (7) 和步骤 (10) 中, 高速离心速率为 6000~8000 离心时间 为 15~25
min; 步骤 (8) 中, 超滤除杂的超滤膜分子量为 lOOOODa, 超滤次数为 4~6次, 所述提取液 4为分子量<10000Da的超滤滤出液, 减压浓缩温度为 50~60°C, 提取 液 5中固形物含量为 8~10 wt%。
[0027] 优选地, 步骤 (9) 所述蛋白酶的加入量为提取液 5固形物含量的 3~6%, 蛋白 酶为胰酶和复合蛋白酶, 胰酶的加入量占总酶量的 60~80%, 复合蛋白酶的加入 量占总酶量的 20~40%, 所述胰酶为南宁庞博生物工程公司的胰酶, 复合蛋白酶 为诺维信公司的复合蛋白酶 Protamex, 酶解温度为 40~50°C, 酶解时间为 2~4 h, 搅拌速率为 120-180 r/min, 所述灭酶是在 90~96°C灭酶 20~30 min。
[0028] 优选地, 步骤 (11) 和步骤 (13) 中, 减压浓缩温度为 50~60°C, 提取液 7和提 取液 9中固形物含量为 30~40 wt% ; 步骤 (12) 中, 所述预冷的无水乙醇为预冷 至 4~8°C的无水乙醇, 无水乙醇的加入量为提取液 7和无水乙醇二者质量和的 10~ 20 wt% , 匀速搅拌为室温下 120~180
r/min搅拌 3~5h, 所述离心的速率为 6000~8000 离心时间为 20~30min。
[0029] 优选地, 步骤 (14) 中, 搅拌速率为 120~ 180 r/min, 搅拌时间为 30~50 min, 温度为 65~85°C。
[0030] 本发明还提供了所述制备方法制备的辣木叶提 取物。
[0031] 本发明还提供了一种所述的辣木叶提取物在制 备降尿酸保健品和药品中的应用
发明的有益效果
有益效果
[0032] 和现有技术相比, 本发明具有如下优点和效果:
[0033] (1) 本发明的制备方法制备得到一种主要含辣木叶 多酚和多肽的具有良好降 尿酸作用的辣木叶提取物, 该提取物酚类物质含量>10%, 肽类物质含量>40%
[0034] (2) 本发明的整个制备工艺流程均可达食品级要求 。
[0035] (3) 本发明所得辣木叶提取物经过高尿酸血症大鼠 动物实验模型验证具有良 好的降尿酸活性, 能够有效地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸含 量。
发明实施例
本发明的实施方式
[0036] 为更好地理解本发明, 下面将具体阐明动物实验的具体操作和具体实 施例对本 发明作进一步说明, 但本发明的实施方式不限于此。
[0037] 实施例 1 [0038] 本实施例提供了一种具有降尿酸活性的辣木叶 提取物的制备方法, 具体包括如 下步骤:
[0039] ( 1) 微波干燥: 微波功率 400W, 将新鲜辣木叶微波干燥 1 min, 得到干辣木叶
[0040] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉
[0041] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 (2) 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 60 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1:6 g/mL混合, 120
r/min匀速搅拌条件下, 80°C下回流提取 1 h, 4000 g离心 20 min, 取上清液得提取 液 1, 50°C烘干沉淀得残渣 1。
[0042] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 50°C下减压浓缩至固形物含量为 30 wt%, 得提取 液 2。
[0043] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水按料液比 1:8 g/mL混合, 120 r/min匀速 搅拌 15 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 7.0, 50°C下 120 r/min匀速搅拌 20 min, 得 混悬液 1。
[0044] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 加入量为混悬液 1中的残渣 1质量 的 2%, 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 50%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 50%, 52°C下 120 r/min匀速搅拌, 酶解 8 h, 90 °C灭酶 20 min, 得混悬液 2。
[0045] (7) 高速离心: 混悬液 2采用 6000 g离心 15 min后, 取上清液得提取液 3。
[0046] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超滤 次数为 4次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 50°C减压浓缩, 得固形物含量为 8 wt%的提取液 5。
[0047] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 加入量为提取液 5固形物含 量的 3%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 60%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 40%, 40°C下 120r/min匀速搅拌, 酶解 2 h, 90 °C灭酶 20 min, 得混悬液 3。
[0048] ( 10) 高速离心: 混悬液 3采用 6000 g离心 15 min后, 取上清液, 得提取液 6。 [0049] ( 11) 减压浓缩: 将提取液 6在 50°C下减压浓缩至固形物含量为 30 wt%, 得提 取液 7。
[0050] ( 12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷至 4。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇含 量达到 10 wt%, 120 r/min匀速搅拌 3h后, 6000 g离心 20
min, 取上清液得提取液 8。
[0051] ( 13) 二次减压浓缩: 将提取液 8在 50°C下减压浓缩至固形物含量为 30 wt%, 得提取液 9。
[0052] ( 14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 ( 13) 所得提取液 9在 65°C下, 1
20 r/min勻速搅拌 30 min, 得提取液 10。
[0053] ( 15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 1, 酚类化合物 含量为 11.4%, 肽类物质含量为 42.9%。
[0054] 实施例 2
[0055] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:
[0056] ( 1) 微波干燥: 微波功率 500W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 2 min, 得到干辣木 叶。
[0057] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉
[0058] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 ⑵ 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 70 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1 : 8 g/mL混合, 150
r/min匀速搅拌条件下, 85°C下回流提取 2 h, 5000 g离心 25 min, 取上清液得提取 液 1, 55°C烘干沉淀得残渣 1。
[0059] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 55°C下减压浓缩至固形物含量为 35 wt%, 得提取 液 2。
[0060] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水按料液比 1: 12 g/mL混合, 150 r/min匀速 搅拌 20 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 7.5, 55°C下 150 r/min匀速搅拌 30 min, 得 混悬液 1。
[0061] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 加入量为混悬液 1中残渣 1质量的
3.5% , 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 60%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 40%, 55°C下 150 r/min匀速搅拌, 酶解 12 h, 93°C灭酶 25 min, 得混悬液 2。
[0062] (7) 高速离心: 混悬液 2采用 7000 g离心 20 min后, 取上清液得提取液 3。
[0063] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超滤 次数为 5次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 55°C减压浓缩, 得固形物含量为 9 wt%的提取液 5。
[0064] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 加入量为提取液 5固形物含 量的 4.5%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 70%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 30%, 45°C下 150 r/min匀速搅拌, 酶解 3 h, 93 °C灭酶 25 min, 得混悬液 3。
[0065] ( 10) 高速离心: 混悬液 3采用 7000 离心 20 min后, 取上清液, 得提取液 6。
[0066] ( 11) 减压浓缩: 将提取液 6在 55°C下减压浓缩至固形物含量为 35 wt%, 得提 取液 7。
[0067] ( 12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷至 6。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇含 量达到 15 wt%, 150 r/min匀速搅拌 4 h后, 7000 g离心 25
min, 取上清液得提取液 8。
[0068] ( 13) 二次减压浓缩: 将提取液 8在 55°C下减压浓缩至固形物含量为 35 wt%, 得提取液 9。
[0069] ( 14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 ( 13) 所得提取液 9在 75°C下, 1
50 r/min勻速搅拌 40 min, 得提取液 10。
[0070] ( 15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 2, 酚类化合物 含量为 10.7%, 肽类物质含量为 45.3%。
[0071] 实施例 3
[0072] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:
[0073] ( 1) 微波干燥: 微波功率 600W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 3 min, 得到干辣木 叶。
[0074] ⑵ 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉 [0075] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 ⑵ 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 80 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1: 10 g/mL混合, 180 r/min匀速搅拌条件下, 90。(:下回流提 取 3 h, 600( ^离心 30 min, 取上清液得提取液 1, 60°C烘干沉淀得残渣 1。
[0076] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提取 液 2。
[0077] (5) 碱法热处理: 将残渣 1与去离子水按料液比 1: 16 g/mL混合, 180 r/min匀速 搅拌 25 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 8.0, 60°C下 180 r/min匀速搅拌 40 min, 得 混悬液 1。
[0078] (6) 蛋白酶酶解: 在混悬液 1中加入蛋白酶, 加入量为混悬液 1中残渣 1质量的
5% , 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 70%, 诺维信公司的 复合蛋白酶的加入量占总酶量的 30%, 58°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 16 h, 96 °C灭酶 30 min, 得混悬液 2。
[0079] (7) 高速离心: 混悬液 2采用 8000 g离心 25 min后, 取上清液得提取液 3。
[0080] (8) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 3 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超滤 次数为 6次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 4, 60°C减压浓缩, 得固形物含量为 10 wt%的提取液 5。
[0081] (9) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 5中加入蛋白酶, 加入量为提取液 5固形物含 量的 6%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 80%, 诺维信公司 的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 20%, 50°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 4 h, 96 °C灭酶 30 min, 得混悬液 3。
[0082] ( 10) 高速离心: 混悬液 3采用 8000 g离心 25 min后, 取上清液, 得提取液 6。
[0083] ( 11) 减压浓缩: 将提取液 6在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提 取液 7。
[0084] ( 12) 醇沉去杂: 向提取液 7中加入预冷至 8。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇含 量达到 20 wt%, 180 r/min匀速搅拌 5 h后, 8000 g离心 30
min, 取上清液得提取液 8。
[0085] ( 13) 二次减压浓缩: 将提取液 8在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提取液 9。 [0086] ( 14) 复配: 将步骤 (4) 所得提取液 2和步骤 ( 13) 所得提取液 9在 85°C下, 1
80 r/min勻速搅拌 50 min, 得提取液 10。
[0087] ( 15) 喷雾干燥: 将提取液 10进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 3 , 酚类化合物 含量为 10.3%, 肽类物质含量为 44.1%。
[0088] 对比例 4
[0089] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:
[0090] ( 1) 微波干燥: 微波功率 600W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 3 min, 得到干辣木 叶。
[0091] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉
[0092] (3) 水-乙醇回流提取: 将步骤 (2) 所得辣木叶干粉与乙醇浓度为 80 vol %的 乙醇水溶液按料液比 1: 10 g/mL混合, 180 r/min匀速搅拌条件下, 90。(:下回流提 取 3 h, 600( ^离心 30 min, 取上清液得提取液 1。
[0093] (4) 减压浓缩: 将提取液 1在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得提取 液 2。
[0094] (5) 喷雾干燥: 将提取液 2进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 4, 酚类化合物含 量为 23.8%。
[0095] 对比例 5
[0096] 一种具有降尿酸活性的辣木叶提取物的制备方 法, 具体包括如下步骤:
[0097] ( 1) 微波干燥: 微波功率 600W下, 将新鲜辣木叶微波干燥 3 min, 得到干辣木 叶。
[0098] (2) 粉碎过筛: 将步骤 ( 1) 所得干辣木叶粉碎后过 40目筛, 得到辣木叶干粉
[0099] (3) 碱法热处理: 将辣木叶干粉与去离子水按料液比 1: 16 g/mL混合, 180 r/min匀速搅拌 25 min, 加入氢氧化钠调节 pH值至 8.0, 60°C下 180
r/min勻速搅拌 40 min, 得混悬液 C51。
[0100] (4) 蛋白酶酶解: 在混悬液 C51中加入蛋白酶, 加入量为辣木叶干粉质量的 5
% , 诺维信公司的碱性蛋白酶 NS37071的加入量占总酶量的 70%, 诺维信公司的 复合蛋白酶的加入量占总酶量的 30%, 58°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 16 h, 96 °C灭酶 30 min, 得混悬液 C52。
[0101] (5) 高速离心: 混悬液 C52釆用 8000 g离心 25 min后, 取上清液得提取液 A53
[0102] (6) 超滤去杂: 采用超滤膜超滤分离提取液 A53 , 超滤膜分子量为 lOOOODa,超 滤次数为 6次, 弃去大分子截留液, 取小分子滤出液, 得提取液 A54, 60°C减压 浓缩, 得固形物含量为 10 wt%的提取液 A55。
[0103] (7) 二次蛋白酶酶解: 在提取液 A55中加入蛋白酶, 加入量为提取液 A55固形 物含量的 6%, 南宁庞博生物工程公司的胰酶的加入量占总酶 量的 80%, 诺维信 公司的复合蛋白酶的加入量占总酶量的 20%, 50°C下 180 r/min匀速搅拌, 酶解 4 h , 96°C灭酶 30 min, 得混悬液 C53。
[0104] (8) 高速离心: 混悬液 C53采用 8000 g离心 2 5
min后, 取上清液, 得提取液 A56。
[0105] (9) 减压浓缩: 将提取液 A56在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%, 得 提取液 A57。
[0106] ( 10) 醇沉去杂: 向提取液 A57中加入预冷至 8。(:的无水乙醇, 使体系中的乙醇 含量达到 20 wt%, 180 r/min匀速搅拌 5 h后, 8000 g离心 30 min, 取上清液得提取 液 A58。
[0107] ( 11) 二次减压浓缩: 将提取液 A58在 60°C下减压浓缩至固形物含量为 40 wt%
, 得酶解提取液 A59。
[0108] ( 12) 喷雾干燥: 将混合提取液 A59进行喷雾干燥, 得辣木叶提取物 5 , 酚类化 合物含量为 2.9%, 肽类物质含量为 37.4%。
[0109] 高尿酸血症大鼠模型的实验研究:
[0110] ( 1) 实验动物: 雄性 SD大鼠, 21 d龄, 100-110 g , 购于广东省医学实验动物 中心。
[0111] (2) 动物饲养环境: 室温 22±2°C, 相对湿度 50%~70%, 每日光照黑暗各 12小 时, 饮用水采用反渗透紫外灭菌水。
[0112] (3) 动物实验: 适应性饲养 7天结束后, 随机分为实验组、 正常组 ( 12只) 。 实验组大鼠每天灌胃氧嗪酸钾 (2g/kg) , 7天后, 腹腔注射 3%戊巴比妥钠 (30 mg/kg体重) 麻醉, 眼眶后静脉丛采血, 4°C、 3000 g离心 15 min取上层血清测定 尿酸含量, 正常组大鼠灌胃等容积的溶媒。 将尿酸含量 的大鼠确定为 造模成功。 将造模成功的大鼠随机分为模型对照组, 别嘌呤醇组 (25 mg/kg) , 辣木叶提取物 1组 (500 mg/kg) 、 辣木叶提取物 2组 (500 mg/kg) 、 辣木叶提取 物 3组 (500 mg/kg) , 辣木叶提取物 4组 (500 mg/kg) 和辣木叶提取物 5组 (500 mg/kg) , 每组 12只, 灌胃给药 (给药容积 10mL/kg) , 模型大鼠给予等容积的 蒸馏水。 连续处理 30天。 药物处理第 15、 30天, 腹腔注射 3%戊巴比妥钠 (30 mg/kg) 麻醉, 眼眶后静脉丛采血, 4°C、 3000 g离心 15 min取上层血清测定尿酸 含量。 血清尿酸严格按照尿酸检测试剂盒 (南京建成生物工程研究所) 说明进 行操作和测定。
[0113] 动物实验结果分析
[0114] 表 1辣木叶提取物对高尿酸血症大鼠血清尿酸水 的影响
[0115]
尿酸® (umol/L)
❹ 15 3()天
: £常组 0.23 b S75S±13.22ii 模型组 2{6.33 . "a 27531土 24:S5a 252 ' 3M3 m 别嚷吟醇组 2iOJ7A2633a 49.H8±10.04e 52Jfc:i2 i0e 練木叶擬取物 I 2I069.t3()I0a I7L69^20,S2c !59.95^iS.41c 辣木叶提取 _ 2 219.43土 3!編 I6758±i9.66c
猶本叶機取 ft 3 222J:fe27.06a I75J3;fc2S94c i5S,5?&2l.31c 諫木時擬觀物 4 2IIJ(&2938JS 225, ( >7^30311> 215.73±24J2i> 嫁:相 !機取物 5 2I9.t(B:3I;03a 239.17*3099b 231.79±27.22{>
[0116] 不同字母表示同一时期组间具有显著性差异 /? <0.05, 相同字母表示组间没有 显著性差异 0.05 [0117] 由表 1可知, 在造模后, 模型组、 别嘌呤醇组和 5个辣木叶提取物组的大鼠血清 尿酸水平要显著高于正常组 (n=12, ^ < 0.05) , 且四组的血清尿酸水平无显著 性差异 (n=12, ^ > 0.05) 。 在给药 15天和 30天时, 别嘌呤醇组和 5个辣木叶提 取物组的尿酸水平均显著低于模型组 (n=12, ^ < 0.05) , 说明辣木叶提取物能 显著降低高尿酸血症大鼠血清尿酸水平, 其中, 辣木叶提取物 1,2, 3在体内的降 尿酸作用最好。 然而, 辣木叶提取物 4的制备流程中缺少了辣木叶肽的提取及复 合; 辣木叶提取物 5的制备流程中缺少了辣木叶多酚的提取及复 ; 辣木叶提取 物 4, 5组的大鼠血清尿酸水平显著高于辣木叶提取 1, 2, 3组 (n=12,
< 0.05) 。
[0118] 本发明实施例可见, 整个制备工艺流程简单、 各环节均可达食品级要求, 制备 成本低。
[0119] 以上实施例仅为本发明较优的实施方式, 仅用于解释本发明, 而非限制本发明 , 本领域技术人员在未脱离本发明精神实质下所 作的改变、 替换、 修饰等均应 属于本发明的保护范围。
Next Patent: HEAT PUMP DRYING SYSTEM AND CONTROL METHOD