NOVEL MACROLIDE COMPOUND - UNIV HOKKAIDO NAT UNIV CORP

Title:

NOVEL MACROLIDE COMPOUND

Document Type and Number:

WIPO Patent Application WO/2008/081568

Kind Code:

A1

Abstract:

Disclosed are: a novel dinoflagellate alga; and a macrolide compound which can be used as a novel anti-cancer agent. Specifically disclosed is a macrolide compound produced by a dinoflagellate Amphidinium sp. strain HYA002 or HYA0024. The macrolide compound has excellent proliferation-inhibiting effect against a human tumor cell and therefore can be used as a novel anti-cancer agent.

Inventors:

TSUDA MASASHI
OGUCHI KEIKO
IWAMOTO RIE
OKAMOTO YUMIKO

Application Number:

PCT/JP2007/001425

Publication Date:

July 10, 2008

Filing Date:

December 19, 2007

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Assignee:

UNIV HOKKAIDO NAT UNIV CORP (JP)
TSUDA MASASHI
OGUCHI KEIKO
IWAMOTO RIE
OKAMOTO YUMIKO

International Classes:

C12P17/18; A61K31/335; A61K31/336; A61K31/34; A61K31/35; A61P35/00; C07D315/00; C07D493/08; C07D493/18; C12N1/12; C12P17/08

Other References:

TSUDA M. ET AL: "Amphidinolide U, novel 20-membered macrolide from marine dinoflagellate Amphidinium sp", TETRAHEDRON, vol. 55, no. 51, 1999, pages 14565 - 14570, XP004185326
TSUDA M. ET AL.: "Iriomoteolides-1b and -1c, 20-membered macrolides from a marine dinoflagellate AMphidinium species", JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS, vol. 70, no. 10, 2007, pages 1661 - 1663, XP008109992
See also references of EP 2119792A4
J.KOBAYASHI, TETERAHEDRON LETT., vol. 27, 1986, pages 5755

Attorney, Agent or Firm:

SAEKI, Norio et al. (Aminosan Kaikan Building15-8, Nihonbashi 3-chome,Chuo-ku, Tokyo 27, JP)

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Claims:

下記一般式1、式2、式3、式4若しくは式5で表される化合物又はそれらの塩。
(式1~5において、R ₁ 、R ₂ 、R ₃ 及びR ₄ はそれぞれ独立に水素または酸素保護基であり、結合Z-Yは炭素単結合または二重結合であり、結合Z-Yが単結合の場合、Xは水酸基であり、結合Z-Yが二重結合の場合、Xは水素である)

請求項1に記載のいずれか1種以上の化合物を有効成分とする抗ガン剤。

渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidinium sp.) HYA002株を培養する工程、及び培養物から請求項1に記載の化合物の少なくとも一つを回収する工程を含む、請求項1に記載のいずれかの化合物を製造する方法。

渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidinium sp.) HYA024株を培養する工程、及び培養物から請求項1に記載の化合物の少なくとも一つを回収する工程を含む、請求項1に記載のいずれかの化合物を製造する方法。

渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidinium sp.)HYA002株。

渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidinium sp.)HYA024株。

Description:

新規マクロライド化合物

本発明は、新規マクロライド化合物、当� ��マクロライド化合物を有効成分とする抗ガ� ��剤及び当該マクロライド化合物の製造方法� ��関する。なお、本発明は、国等の委託研究� ��成果に係る特許出願(平成18年度文部科学省� ��科学技術振興調整費、産学官共同研究の効� ��的な推進「未利用微細藻からの有用化学素� ��の探索と開発」、産業活力再生特別措置法� ��30条の適用を受けるもの) に該当するもの� �ある。

抗ガン剤と称される化合物は、その由来� ��化学構造を含め、極めて多岐にわたる化合� ��が多数開発されてきている。これは、抗ガ� ��剤が発揮し得る副作用の存在、抗ガン剤の� ��期使用による薬剤耐性ガン細胞の発生、ま� ��ガンの種類による薬効の相違などの理由か� ��、常に新たな抗ガン剤の開発が現実に望ま� ��ているからである。

抗ガン剤あるいはその候補化合物を提供し� ��る天然資源の一つに、海藻や単細胞藻類が� ��られている。その中でも、渦鞭毛藻が産生� ��るアンフィジノライドと総称されるマクロ� ��イド化合物は、強力な抗腫瘍活性を有する� ��合物として期待されている(非特許文献1)。� �しかしながら、先の理由から、依然として� �ガン剤、特に海産生物由来の抗腫瘍物質の� �索ならびに開発は、常に解決すべき課題と� �て存在している。
J.Kobayashi、et.al.、Teterahedron Lett.、1986年� �第27巻、第5755頁

本発明の目的は、渦鞭毛藻由来の優れた� ��腫瘍物質を探索し、新規な抗ガン剤とそれ� ��産生する新規渦鞭毛藻株を提供するもので� ��る。

本発明者らは、天然界から新規な渦鞭毛� ��株を単離し、この渦鞭毛が産生する新規マ� ��ロライド化合物が腫瘍細胞増殖抑制効果を� ��し、抗ガン剤として利用可能であることを� ��出し、下記の各発明を完成した。

1)下記一般式1、式2、式3、式4若しくは式5で� �される化合物又はそれらの塩。

(式1~5において、R ₁ 、R ₂ 、R ₃ 及びR ₄ はそれぞれ独立に水素または酸素保護基であり、結合Z-Yは炭素単結合または二重結合であり、結合Z-Yが単結合の場合、Xは水酸基であ� �、結合Z-Yが二重結合の場合、Xは水素である)
2)1)に記載のいずれか1種以上の化合物を有効� ��分とする抗ガン剤。

3)渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidini um sp.)HYA002株を培養する工程、及び培養物か� ��請求項1に記載の化合物の少なくとも一つを回収する工程を含む、請求項1に記載の化合� �を製造する方法。

4)渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidini um sp.)HYA024株を培養する工程、及び培養物か� ��請求項1に記載の化合物の少なくとも一つを回収する工程を含む、請求項1に記載の化合� �を製造する方法。

5)渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidini um sp.)HYA002株。

6)渦鞭毛藻であるアンフィジニウム(Amphidini um sp.)HYA024株。

本発明のマクロライド化合物はヒトの腫� ��細胞に対して優れた増殖抑制効果を有して� ��り、新規な抗ガン剤として利用可能である� ��

本発明のマクロライド化合物は、渦鞭毛藻� ��あるアンフィジニウム(Amphidinium sp.)の新規� ��が産生する、抗腫瘍活性を有する化合物で� ��り、下記式1~式5で表される化学構造を有す� ��。

(式1~5において、R ₁ 、R ₂ 、R ₃ 及びR ₄ はそれぞれ独立に水素または酸素保護基であり、結合Z-Yは炭素単結合または二重結合であり、結合Z-Yが単結合の場合、Xは水酸基であ� �、結合Z-Yが二重結合の場合、Xは水素である)
式1~5の各化合物のうち、特に好ましい化合� ��は下記式6~11で表される。

a)式6の化合物(式1においてR ₁ 、R ₂ 、R ₃ は水素であり、結合Z-Yは単結合であり、Xは� �酸基である化合物)

形状:無色油状、溶解性:アルコール、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンに可溶でヘキサン、水に不溶、分子量測定: m/z 567 (M+H) ⁺ 、 ¹ H-NMRスペクトル(600MHz、重クロロホルム中)δ 0 .86 (3H, d, 6.5Hz, H ₃ -28), 1.06 (3H, d, 6.8Hz, H ₃ -31), 1.06 (3H , d, 6.8Hz, H ₃ -32), 1.11 (1H, m, H-10), 1.12 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -27), 1.13 (1H, m, H-7), 1.20 (1H, m, H-24), 1.22 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -26), 1.32 (1H, m, H-6), 1.34 (1H, m, H-4), 1.40 ( 1H, ddd, 4.3, 9.7, 14.0Hz, H-17), 1.48 (1H, m, H-10 ), 1.50 (1H, m, H-5), 1.51 (1H, m, H-4), 1.54 (1H, m, H-6), 1.61 (1H, m, H-5), 1.63 (1H, m, H-11), 1.74 (3H, brs, H ₃ -30), 1.79 (1H, m, H-12), 1. 79 (1H, m, H-24), 1.8 3 (1H, m, H-17), 1.88 (1H, m, H-7), 1.90 (1H, m, H-23), 2.13 (1H, dd, 4.2, 13.3Hz, H-12), 2.18 (1H, ddq, 4.3, 11.4, 6.6Hz, H-16), 2.45 (1H, dq, 7.2, 7. 0 Hz, H-2), 2.54 (1H, dd, 1.8, 15.7Hz, H-19), 2.71� �(1H, dt, 9.1, 2.4 Hz H-8), 2.73 (1H, dd, 9.7, 15. 7Hz, H-19), 2.87 (1H, dt, 9.3, 2.4Hz, H-9), 3.69 (1 H, brd, 9.4Hz, H-22), 3.76 (1H, dt, 1,5, 7.2Hz, H-3 ), 4.01 (1H, ddt, 1.8, 4.0, 9.7Hz, H-18), 4.46 (1H, brs, H-21), 4.82 (1H, brs, H-29), 5.00 (1H, brs, H-29), 5.18 (1H, ddq, 1.3, 12.2, 7.4Hz, H-25), 5.48� �(1H, s, H-14)、 ¹³ C-NMRスペクトル(150MHz、重クロロホルム中)δ 1 2.7 (CH ₃ , C-30),14.2 (CH ₃ , C-27), 16.2 (CH ₃ , C-32), 17.9 (CH ₃ , C-28), 20.5 (CH ₃ , C-31), 21.2 CH ₃ , C-26), 24.9 (CH ₂ , C-5), 25.1 (CH ₂ , C-6), 29.3 (CH, C-11), 32.2 (CH ₂ , C-7), 32.4 (CH, C-23), 33.5 (CH ₂ , C-4), 40.2 (CH ₂ , C-24), 40.6 (CH ₂ , C-10), 40.7 (CH ₂ , C-17), 41.2 (CH, C-16), 44.6 (CH ₂ , C-19), 47.0 (CH ₂ , C-12), 48.2 (CH, C-2), 58.6 (CH, C-9), 60.0 (CH,� �C-8), 67.2 (CH, C-18), 67.7 (CH, C-25), 71.2 (CH, C-3), 74.7 (CH, C-22), 77.9 (CH, C-21), 114.9 (CH ₂ , C-29), 126.3 (CH, C-14), 141.5 (C, C-15), 144.1 ( C, C-13), 177.4 (C, C-1), 209.9 (C, C-20)

b)式7の化合物(式1においてR ₁ 、R ₂ 、R ₃ は水素であり、結合Z-Yは二重結合であり、X� �水素である化合物)

溶解性:アルコール、クロロホルム、酢酸� ��チル、アセトンに可溶でヘキサン、水に不� ��、分子量測定: m/z 549 (M+H) ⁺ 、 ¹ H-NMRスペクトル(600MHz、重クロロホルム中)δ 0 .86 (3H, d, 6.5Hz, H ₃ -28), 1.01 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -32), 1.05 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -31), 1.13 (1H, m, H-10), 1.15 (1H, m, H-7), 1.24 (1H, m, H-24), 1.26 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -26), 1.42 (1H, m, H-6), 1.42 (1H, m, H-17), 1.43 (1H, m, H-5), 1.50 (1H, m, H-10), 1.56 (1H, m, H-5 ), 1.60 (1H, m, H-6), 1.61 (1H, m, H-11), 1.73 (3H , brs, H ₃ -30), 1.78 (1H, m, H-12), 1.80 (3H, brs, H ₃ -27), 1.80 (1H, m, H-17), 1.83 (1H, m, H-7), 1.90 (1H, m, H-24), 1.93 (1H, m, H-23), 2.13 (1H, dd, 4 .0, 13,5Hz, H-12), 2.16 (1H, m, H-4), 2.20 (1H, m,� �H-16), 2.28 (1H, m, H-4), 2.54 (1H, brd, 15.6Hz, H -19),2.73 (1H, dd, 9.0, 15.6Hz, H-19), 2.74 (1H, dt, 9.0, 2.4Hz, H-8), 2.91 (1H, dt, 9.5, 2.4Hz, H-9),� �3.69 (1H, brd, 9.0Hz, H-22), 3.97 (1H, brt, 8.5Hz,� �H-18), 4.43 (1H, brs, H-21), 4.81 (1H, brs, H-29),� �5.00 (1H, brs, H-29), 5.06 (1H, m, H-25), 5.50 (1H , s, H-14), 6.88 (1H, brt, 7.0Hz, H-3)、 ¹³ C-NMRスペクトル(150MHz、重クロロホルム中)δ 1 2.3 (CH ₃ , C-27), 12.6 (CH ₃ , C-30), 15.7 (CH ₃ , C-32), 17.6 (CH ₃ , C-28), 20.3 (CH ₃ , C-31),21.2 (CH ₃ , C-26), 25.3 (CH ₂ , C-5), 27.9 (CH ₂ , C-4), 28.0 (CH ₂ , C-6), 29.0 (CH, C-11), 32.1 (CH ₂ , C-7), 32.5 (CH, C-23), 40.0 (CH ₂ , C-24), 40.3 (CH ₂ , C-17), 40.5 (CH ₂ , C-10), 41.1 (CH, C-16),44.7 (CH ₂ , C-19), 47.1 (CH ₂ , C-12), 58.3 (CH, C-9), 60.0 (CH, C-8), 67.0 (CH,� �C-18), 68.0 (CH, C-25), 75.1 (CH, C-22), 77.4 (CH,� �C-21), 114.9 (CH ₂ , C-29), 126.2 (CH, C-14), 127.8 (C, C-2), 141.5 (C , C-15), 141.8 (CH, C-3), 144.0 (C, C-13), 167.8 (C , C-1), 210.8 (C, C-20)

c)式8(式2においてR ₁ 、R ₂ 、R ₃ 及びR ₄ が水素である化合物)

形状:無色固体、溶解性:クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、エタノール、メタノールに可溶で水、ヘキサンに不溶、分子量測定 : m/z 529.2 (M+Na) ⁺ 、 ¹ H-NMRスペクトル(600MHz、重クロロホルム中)δ 0 .91 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -29), 0.99 (3H, d, 6.8Hz, H ₃ -28), 1.11 (3H, d, 6.3Hz, H ₃ -23), 1.24 (3H, d, 7.3Hz, H ₃ -25), 1.25 (1H, ddd, 4.4, 8.8, 13.8Hz, H-20), 1.25 (3H, s, H ₃ -27), 1.40 (1H, m, H-21), 1.80 (1H,ddd, 4.4, 8.7, 1 3,8Hz, H-20), 1.82 (1H, m, H-18), 1.90 (1H, brt, 12 .3Hz, H-10), 1.96 (1H, dt, 14,1, 11.6Hz, H-17), 2.15 (1H, m, H-17), 2.12 (3H, s, H ₃ -24), 2.18 (2H, m, H ₂ -8), 2.21 (1H, brd, 12.7Hz, H-10), 2.26 (1H, brd, 1 3.6Hz, H-12), 2.40 (1H, d, 13.6Hz, H-12), 2.46 (1H,� �dq, 2.9, 7.3Hz, H-4), 3.52 (1H, brd, 1.9Hz, 13-OH,� �H-13) 3.58 (1H, quint, 6.3Hz, H-22), 3.81 (1H, brt, 11.5Hz, H-9), 4.28 (1H, brs, H-5), 4.82 (2H, brs,� �H ₂ -26), 5.11 (1H, m, H-19), 5.57 (1H, dd, 4.1, 15.7Hz , H-6), 5.68 (1H, m, H-7), 5.72 (1H, brs, H-2), 5. 68 (1H, brd, 15,5Hz, H-15), 5.76 (1H, ddd, 3.1, 10. 8, 15,5Hz, H-16)、 ¹³ C-NMRスペクトル(150MHz、重クロロホルム中)δ 1 4.2 (CH ₃ , C-28), 15.5 (CH ₃ , C-29), 15.6 (CH ₃ , C-25), 19.8 (CH ₃ , C-23), 23.1 (CH ₃ , C-27), 23.8 (CH ₃ , C-24), 36.5 (CH ₂ , C-20), 36.5 (CH, C-21), 36.88 (CH ₂ , C-12), 36.94 (CH, C-18), 38.2 (CH ₂ , C-17), 39.5 (CH ₂ , C-8), 40.7 (CH ₂ , C-10), 47.9 (CH, C-4), 70.8 (CH, C-19), 71.8 (CH, C-9), 72.2 (CH, C-22), 72.3 (CH, C-5), 77.2 (C,C-1 4), 99.7 (C, C-13), 110.6 (CH ₂ , C-26), 115.8 (CH, C-2), 126.8 (CH, C-7), 128.8 (C H, C-16), 132.0 (CH, C-6), 134.9 (CH, C-15), 141.7 (C, C-11), 162.0 (C, C-3), 167.4 (C, C-1)

d)式9(式3においてR ₁ 、R ₂ 、R ₃ 及びR ₄ が水素である化合物)

形状:無色固体、溶解性:クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、エタノールに可溶で水、ヘキサンに不溶、分子量測定: m/z 529.2 (M+Na) ⁺ 、 ¹ H-NMRスペクトル(600MHz、重クロロホルム中)δ 0 .87 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -29), 0.90 ( 3H, d, 6.8Hz, H ₃ -28), 1.13 (1H, m, H-20), 1.13 (3H, d, 6.3Hz, H ₃ -23), 1.18 (3H, d, 7.3Hz, H ₃ -25) 1.44 (3H, s, H ₃ -27), 1.45 (1H, m, H-21), 1.72 (1H, m, H-18), 1.75� �(1H, m, H-17), 1.76 (1H, m, H-20), 2.08 (1H, m, H -8), 2.17 (3H, s, H ₃ -26), 2.20 (3H, s, H ₃ -24), 2.23 (1H, brt, 12.3Hz, H-10), 2.24 (1H, m, H- 17), 2.28 (1H, brd, 12.7Hz, H-10), 2.30 (1H, m, H-8 ), 2.62 (1H, dq, 2.9, 7.3Hz, H-4), 3.61 (1H, m, H- 22), 3.72 (1H, m, H-9), 4.33 (1H, brs, 14-OH, H-14) 4.46 (1H, dd, H-5), 4.92 (1H,dt, H-19), 5.56 (1H,� �m, H-6), 5.56 (1H, m, H-7), 5.58 (1H, d, 15.6Hz, H-15), 5.63 (1H, brs, H-2), 5.74 (1H, dt, 15,5Hz, H -16), 6.18 (1H, s, H-12)、 ¹³ C-NMRスペクトル(150MHz、重クロロホルム中)δ 1 1.2 (CH ₃ , C-25), 14.6 (CH ₃ , C-28), 14.8 (CH ₃ , C-29), 19.7 (CH ₃ , C-23), 20.0 (CH ₃ , C-26), 20.4 (CH ₃ , C-24), 25.2 (CH ₃ , C-27), 32.4 (CH ₂ , C-20), 34.7 (CH ₂ , C-17), 36.5 (CH, C-21), 37.2 (CH, C-18), 40.8 (CH ₂ ,C-8), 48.6 (CH ₂ , C-10), 48.7 (CH, C-4), 68.3 (CH, C-9), 72.8 (CH,� �C-5), 72.2 (CH, C-22), 74.7 (CH, C-19), 77.9 (C, C -14), 116.2 (CH, C-2), 121.8 (CH, C-12), 129.6 (CH,� �C-6), 130.4 (CH, C-16), 132.4 (CH, C-7), 133.2 (CH, C-15), 157.5 (C, C-11), 160.8 (C, C-3), 166.7 (C,� �C-1), 200.8 (C, C-13)

e)式10(式4においてR ₁ 、R ₂ 、及びR ₃ が水素である化合物)

形状:無色固体、溶解性:クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、エタノールに可溶で水、ヘキサンに不溶、分子量測定: m/z 585.4 (M+Na) ⁺ 、 ¹ H-NMRスペクトル(600MHz、重クロロホルム中)δ 0 .86 (3H, t, 7.0Hz, H ₃ -28), 0.98 (3H, d, 6.7Hz, H ₃ -30), 1.08 (3H, d, 7.0Hz, H ₃ -32), 1.12 (3H, d, 7.2Hz, H ₃ -29), 1.34 (1H, m, H-20), 1.41 (1H, m, H-3), 1.42 (1H, m, H-27), 1.43 (1H, m, H-20), 1.45 (1H, m, H- 21), 1.57 (1H, m, H-8), 1.63 (1H, m, H-27), 1.67 ( 3H, s, H ₃ -31), 1.70 (1H, m, H-14), 1.71 (1H, m, H-10), 1.76� �(1H, m, H-3), 1.82 (1H, m, H-21), 1.83 (1H, m, H- 8), 1.90 (1H, m, H-4), 1.95 (2H, m, H ₂ -19), 2.04 (1H, m, H-7), 2.04 (1H, m, H-4), 2.06 ( 1H, m, H-15), 2.15 (1H, m, H-14), 2.19 (1H, m, H-7 ), 2.20 (1H, m, H-10), 2.43 (1H, m, H-24), 2.44 (1 H, m, H-2), 3.60 (1H, dd, 2.0, 9.4Hz, H-23), 3.71 (1H, m, H-12), 3.94 (1H, m, H-9), 3.98 (1H, t, 7.6 Hz, H-26), 4.07 (1H, t, 3.4Hz, H-16), 4.41 (1H, m,� �H-11), 4.42 (1H, m, H-13), 5.00 (1H, s, H-33), 5.0 3 (1H, brd, 8.2Hz, H-22), 5.07 (1H, s, H-33), 5.09� �(1H, d, 3.4Hz, H-17), 5.34 (1H, m, H-5), 5.46 (1H, dt, 15.0Hz, H6)、 ¹³ C-NMRスペクトル(150MHz、重クロロホルム中)δ 1 0.2 (CH ₃ , C-28), 16.0 (CH ₃ , C-29), 16.7 (CH ₃ , C-30), 17.2 (CH ₃ , C-31), 17.8 (CH ₃ , C-32), 24.7 (CH ₂ , C-20), 26.5 (CH ₂ , C-21), 28.7 (CH ₂ , C-7), 29.1 (CH ₂ , C-27), 29.5 (CH ₂ , C-4), 33.2 (CH ₂ , C-3), 35.6 (CH, C-24), 36.3 (CH ₂ , C-14), 36.5 (CH ₂ , C-8), 37.6 (CH, C-2), 39.7 (CH ₂ , C-19), 39.8 (CH, C-15), 41.4 (CH ₂ , C-10), 72.8 (CH, C-11), 75.1 (CH, C-22), 78.4 (CH , C-23), 77.2 (CH, C-26), 77.5 (CH-C-13), 77.6 (CH,� �C-9), 82.8 (CH, C-16), 83.1 (CH, C-12), 112.4 (CH ₂ , C-33), 124.1 (CH, C-17), 129.1 (CH, C-5), 131.2, (CH, C-6), 141.5 (C, C-18), 153.9 (C, C-25), 176.6 (C, C-1)

f)式11(式5においてR ₁ 、R ₂ 、及びR ₃ が水素である化合物)

形状:無色固体、溶解性::クロロホルム、� �セトン、酢酸エチル、エタノールに可溶で� �、ヘキサンに不溶、分子量測定: m/z 457.2 (M+Na) ⁺ 、 ¹ H-NMRスペクトル(600MHz、重クロロホルム中)δ 1 .01 (3H, d, 7.3Hz, H ₃ -24), 1.01 (3H, d, 7.3Hz, H ₃ -25), 1.27 (1H, m, H-16), 1.39 (1H, ddd, 2.0, 9.3,� �15.5Hz, H-16), 1.48 (1H, dt, 14.3, 9.8Hz, H-13), 1. 64 (3H, d, 4.2Hz, H ₃ -23), 1.82 (1H, m, H-4), 1.98 (1H, dd, 6.8, 14.0Hz, H-2), 2.10 (1H, m, H-3), 2.26 (1H, brd, 14.3Hz, H -13), 2.32 (1H, m, H-4), 2.35 (1H, m, H-17), 2.38 (1H, dd, 2.4, 14.0Hz, H-2), 2.40 (1H, brd, 8.7Hz, H -12), 2.66 (2H, ddd, 4.4, 8.7, 13.8Hz, H ₂ -20), 3.00 (1H, brd, 9.8Hz, H-11), 3.60 (1H, m, H-1 5), 3.96 (1H, m, H-7), 3.96 (1H, m, H-8), 5.11 (1H , brd, 9.8Hz, H-14), 5.20 (1H, dd, 8.0, 15.2Hz, H-1 8), 5.24 (1H, dd, 9.8, 15.4Hz, H-10), 5.38 (1H, m,� �H-21), 5.40 (1H, m, H-6), 5.40 (1H, m, H-22), 5.45 (1H, m, H-19), 5.77 (1H, m, H-5), 5.79 (1H, m, H -9)、 ¹³ C-NMRスペクトル(150MHz、重クロロホルム中)δ 1 7.8 (CH ₃ , C-23), 20.7 (CH ₃ , C-24), 21.6 (CH ₃ , C-25), 29.8 (CH, C-3), 33.3 (CH, C-17), 34.3 (CH ₂ , C-13), 35.4 (CH ₂ , C-20), 36.0 (CH ₂ , C-4), 37.7 (CH ₂ -C-2), 40.6 (CH ₂ , C-16), 57.7 (CH, C-12), 59.0 (CH, C-11), 70.8 (CH , C-15), 72.7 (CH, C-14), 76.6 (CH, C-8), 76.7 (CH, .C-7), 125.6 (CH, C-22), 128.6 (CH, C-19), 129.5 (CH , C-21), 131.3 (CH, C-6), 132.5 (CH, C-10), 133.2 ( CH, C-5), 135.3 (CH, C-18), 135.8 (CH, C-9), 172.6 (C, C-1)

本発明のマクロライド化合物を産生する2 種類の渦鞭毛藻は、沖縄県北谷町で採取した扁形動物Amphiscolops sp.の体内、及び沖縄県西� ��島の海水からそれぞれ単離された、アンフ� ��ジニウム(Amphidinium sp.)HYA002株又はアンフィ� ��ニウム(Amphidinium sp.HYA024株と同定される、� �規の渦鞭毛藻であることが明らかとなった� �本発明の渦鞭毛藻HYA002株及びHYA024株は、北� �道大学天然物化学研究室及び高知大学海洋� �ア総合研究センターにて保管されている。

本発明のマクロライド化合物は、渦鞭毛藻H YA002株又はHYA024株を適当な条件下で培養する� ��とで製造することができる。培養条件の例� ��しては、120℃、20分間オートクレーブ滅菌� �た海水に下記表1に示す組成を有する海水補� ��栄養剤を1%の濃度で添加し、さらに3mM NaHCO ₃ をpH7.3~8.5になるように添加し、孔径0.22μmの� �ィルターを用いてろ過滅菌を行って調製さ� �る培養液に渦鞭毛藻HYA002株及び/又はHYA024株� ��接種し、25℃、培養期間中、明期時間16時間、暗期時間8時間の周期で3000ルクスの光を当� ��ながら、14日間程度静置培養すればよい。

ただし、これらの培地組成や培養温度等� ��培養条件は限定的なものではなく、適宜調� ��ないし選択することができることはいうま� ��もない。

培養物中に生産蓄積されたマクロライド� ��合物を回収するには、あらかじめ遠心分離� ��るいは濾過などで分離して得られた培養藻� ��に対して、当該マクロライド化合物の理化� ��的性質を考慮して、代謝産物を採取するの� ��通常用いられる分離、精製の手段を適宜利� ��すればよい。例えば、培養藻体に対してメ� ��ノール等の溶剤、好ましくはメタノール/トルエン(3:1)で抽出操作を行い、得られる抽出� ��(トルエン画分)からマクロライド化合物を� �らにジクロロメタン等の有機溶剤で抽出し� �り、カラムクロマトグラフィーによってマ� �ロライド化合物を吸着、溶出させたりすれ� �よい。必要に応じてさらに精製操作を行っ� �、所望の純度を有するマクロライド化合物� �して回収し、製造することが出来る。クロ� �トグラフィーで用いられる担体としては慣� �の無機及び有機の担体、例えばシリカゲル� �ポリビニル樹脂、ポリスチレン樹脂などが� �用される。

本発明のマクロライド化合物は、例えば� ��薬品分野等の抗ガン剤として有用である。� ��発明の化合物は、単独で用いてもよいし、� ��は一般に製剤上許容される無機または有機� ��一種、あるいは数種のベヒクル、坦体、賦� ��剤、崩壊剤、結合剤、光沢剤、防腐剤、安� ��剤、湿潤剤、懸濁補助剤、甘味剤、芳香剤� ��着色剤等と共に混和、製剤化してもよい。

製剤の剤型は投与経路あるいは投与計画� ��によって適宜決定すればよい。投与形態は� ��経口投与、経腸投与、非経口投与もしくは� ��所投与等が挙げられ、非経口投与としては� ��例えば、注射剤として静脈内投与、筋肉内� ��与、皮下投与とすることができる。また従� ��公知の技術を用いて顆粒剤、細粒剤、散剤� ��錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロ� ��プ剤、乳剤、懸濁剤、液剤等の剤型に製剤� ��することができる。散剤、錠剤、顆粒剤、� ��プセル剤等の固形製剤を製造する際には、� ��ーンスターチ、ゼラチン、デキストリン等� ��結合剤、カオリン、炭酸カルシウム、微晶� ��セルロース等の賦形剤、デンプン、カルボ� ��シメチルセルロースナトリウム等の崩壊剤� ��タルク等の光沢剤、乳糖、ショ糖等の甘味� ��等を、本発明のマクロライド化合物と共に� ��合することができる。また、乳剤、シロッ� ��剤、懸濁剤、液剤等の液体製剤を製造する� ��には、水や植物油等の一般的に用いられる� ��活性な希釈剤の他、湿潤剤、懸濁補助剤、� ��味剤、着色剤、防腐剤、安定剤等を本発明� ��マクロライド化合物と共に配合することが� ��きる。

注射剤等の非経口投与製剤の製造に用い� ��れる溶剤または懸濁化剤としては、例えば� ��、プロピレングリコール、ポリエチレング� ��コール、ベンジルアルコール、オレイン酸� ��チル、レシチン等が挙げられる。

本発明のマクロライド化合物の臨床投与� ��は、経口投与により用いる場合には、成人� ��人に対し概ね0.1~100mg、好ましくは1~10mgであ� ��が、年齢、病状、症状、他の薬物等の同時� ��与の有無により、適宜増減することがさら� ��好ましい。

実施例1
120℃、20分間オートクレーブ滅菌した海水� �前記表1に示す組成を有する海水補強栄養剤� ��1%の濃度で添加し、さらに3mM NaHCO ₃ をpH7.3~8.5になるように添加し、孔径0.22μmの� �ィルターを用いてろ過滅菌を行って調製さ� �る培養液に、渦鞭毛藻HYA002株又は渦鞭毛藻HY A024株を接種し、25℃、培養期間中、明期時間 16時間、暗期時間8時間の周期で3000ルクスの� �を当てながら、14日間静置培養した。

遠心分離操作で回収した渦鞭毛藻60.5gに200mL のメタノール/トルエン(3:1)を加えて撹拌(3回) 後、100mLの1M NaClを加え、さらに100mLのトルエンで3回抽出した。全トルエン画分(730mg)をシ� ��カゲルカラム(溶出液:CHCl ₃ /MeOH)にかけ、さらにSep-Pak C18カラム(溶出液Me OH:水=8:2)、次いでYMC-Pack Pro C18カラム(YMC社製、溶出液:アセトニトリル/水=75:25、流速:3mL/� �、検出:UV210nm)で精製し、6種類のマクロライ� ��化合物と想定される化合物を分離、回収し� ��。

得られた6種の化合物について、高分解能エレクトロスプレー質量分析(HRESIMS)により分子量を確認し、さらにNMR(核磁気共鳴)を中心� ��したスペクトルデータ測定を行って、6種の化合物の化学構造式を式6、式7、式8、式9、� �10及び式11と決定した。

高分解能エレクトロスプレー質量分析(HRESIMS) (m/z 589.3718 ([M+Na] ⁺ ))
分子量(C32H54O8Na、計算値589.3716)

高分解能エレクトロスプレー質量分析(HRESIMS) (m/z 571.3621 ([M+Na] ⁺ ))
分子量(C32H52O7Na、計算値571.3611)

高分解能エレクトロスプレー質量分析(HRESIMS) (m/z 529.3148 ([M+Na] ⁺ ))
分子量(C29H46O7Na、計算値529.3141)

高分解能エレクトロスプレー質量分析(HRESIMS) (m/z 529.3145 ([M+Na] ⁺ ))
分子量(C29H46O7Na、計算値529.3141)

高分解能エレクトロスプレー質量分析(HRESIMS) (m/z 585.3749 ([M+Na] ⁺ ))
分子量(C33H54O7Na、計算値585.3767)

高分解能エレクトロスプレー質量分析(HRESIMS) (m/z 457.2566 ([M+Na] ⁺ ))
分子量(C25H38O6Na、計算値457.2566)

実施例2
10%仔牛血清(Moregate社)及び10%牛胎児血清(Hyclo ne社)を含むRPMI-1640培地(SIGMA社)(以下、培養液� ��する)に、ヒトBurkitt’sリンパ腫細胞株(DG-75� ��ATCC No.CRL-2675)、又はヒトBurkitt’sリンパ腫� �胞株(Raji、ATCC No.CRL-86)を1×10 ⁵ /mLとなるように懸濁した。この細胞懸濁液50� �Lを96ウエルマイクロプレートに添加した後� �上記培養液を49μL加え、全量を99μLとした。D MSOに溶解した式(6)~式(11)で表される化合物、5 -FU(Wako社)又はドキソルビシン(Wako社)(いずれ� �0.0001~10μg/mL)をウェルに1μLずつ添加し、37℃� �� CO ₂ 濃度5%、72時間培養した。培養後、各ウェル� �Wako cell counting Kit-8(Wako社)を10μL添加し、CO ₂ インキュベーター内で3時間呈色反応を行い� �マイクロプレートリーダーで450nm(参照波長62 0nm)にて測定した吸光度から増殖阻害率を次� �より算出し、増殖阻害率が50%を示す培養液� �の化合物濃度をIC ₅₀ 値として算出した。

阻害率(%)=(1-(サンプル/ブランク))×100
表2に各新規マクロライド化合物及び既存抗� �ン剤のIC ₅₀ 値を示す。

これらの結果から、新規マクロライド化� ��物が高い抗腫瘍活性を有する優れた抗ガン� ��となることが示された。

実施例3
Meth A繊維肉腫細胞(北里研究所)約1×10 ⁵ 個を腹腔内に移植した8週のメスBalb/cマウス(� ��本SLC社)に、エタノールに溶解した式(8)で表される化合物(50~500μg/kg)又は5-FU(10mg/kg)を、7� �9、11日目に1/3量ずつ静脈(5-FUは腹腔内)投与� �、21日目に腫瘍重量を測定した。試験化合物に代えて生理食塩水を投与したマウスをコントロールとし、阻害率(%) =(1-(サンプル/ブラ� ��ク))×100の式にしたがって、各化合物に関する抗ガン作用を数値化した。その結果を表3� �示す。

上記試験の結果、式(8)の化合物は、5-FUよりも低濃度においても、5-FUとほぼ同程度の� �害率(抗ガン作用)を示すことが確認された。

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