Domaine Technique

La présente invention a pour objet l’utilisation d’un peptide de séquence SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, éventuellement sois la forme ou en combinaison avec le peptide SEQ ID N°2 notamment scus la forme d’hydrolysat de riz enrichi en ce(s) peptide(s), et optionnellement en combinaison avec les peptides SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4 pour améliorer le confort de la peau, notamment du cuir chevelu , et/ou des muqueuses, et/ou l’apparence des phanères notamment des fibres kératiniques. La présente invention a également pour objet les applications de ce peptide dans des compositions cosmétiques et/ou dermatologiques.

Technique antérieure

La sensibilité cutanée tout particulièrement du cuir chevelu est une affection qui reste trop souvent négligée. Pourtant la sensibilité cutanée ne se limite pas au visage et on estime qu’entre un tiers et la moitié de la population présente un cuir chevelu dit sensible. Les facteurs déclenchants qui ont des impacts significatifs sur les manifestations des peaux sensibles et notamment du cuir chevelu sensible, sont les variations de température, notamment la chaleur et le froid, l’humidité, l’air sec, le soleil, la pollution et les shampooings agressifs et/ou répétés ainsi que les traitements capillaires agressifs (coloration, défrisage...).

La couche cornée, autrement dénommée stratum corneum (SC) présente classiquement un pH variant de 4 à 6. Ce caractère acide, qui lui vaut l’appellation de «manteau acide», est reconnu comme une condition essentielle pour une peau saine. Cela crée un gradient de pH de 2 à 3 unités entre le SC et les couches sous-jacentes que sont l’épiderme contenant les cellules épithéliales et le derme qui ont un pH quasi neutre. Ce gradient de pH au sein de la peau aide à orchestrer la différenciation épidermique et l'excrétion des cornéocytes grâce à l'implication de plusieurs enzymes dépendant du pH. Ainsi, les enzymes impliquées dans la synthèse des céramides, composants critiques de la barrière du stratum corneum, la oc-glucocrebrosidase et la sphingomyélinase ont un pH acide optimal.

Les élévations du pH dans la peau normale affectent ainsi l'intégrité, la cohésion et la desquamation du stratum corneum, du fait d’une activité accrue des sérines protéases, de la kallicréine 5 et 7, et de l’activité réduite des enzymes de synthèse des céramides. Le maintien ou la restauration d'un pH cutané acide est donc primordiale pour préserver et/ou restaurer une peau saine et éviter les manifestations d’inconfort qui en résulte souvent telles que démangeaisons, tiraillements et sensibilité.

Le cuir chevelu sensible se manifeste par un pH plus élevé qu’un cuir chevelu non sensible, et une tendance plus importante à s’irriter. Cette élévation de pH pourrait contribuer plus rapidement à des manifestations inconfortables et/ou désagréables du cuir chevelu, notamment de démangeaisons et contribuer à l’apparition de pellicules, en partie en affectant la sensibilité aux métabolites de Malassezia.

La présente invention vise à fournir un nouvel actif cosmétique et /ou dermatologique pour améliorer le confort de la peau, notamment du cuir chevelu ainsi que les muqueuses et/ou améliorer l’apparence des phanères notamment les fibres kératiniques, comme alternative aux ingrédients cosmétiques et dermatologiques existants. La présente invention vise également à fournir un nouvel actif cosmétique et/ou dermatologique pour les besoins spécifiques de soin et/ou de traitement des cuirs chevelus sensibles.

De manière surprenante et inattendue, les inventeurs ont découvert que le peptide de SEQ ID N°1 est capable d’améliorer le ccnfort de la peau, incluant le cuir chevelu, et/ou des muqueuses, et/ou d’améliorer l’apparence des phanères, notamment les fibres kératiniques, préférentiellement les cheveux.

Le peptide de SEQ ID N° 1 a déjà été décrit dans le domaine de la cosmétique parmi un grand nombre de peptides issus de riz et de pois dans la demande de brevet W02017009484A1 (en tant que SEQ ID N ° 423) en tant qu’anti-inflammatoire capable d’inhiber la sécrétion de TNFalpha par les macrophages en présence de lipopolysaccharides, ainsi que dans la demande de brevet WQ2017009490A1 (en tant que SEQ ID N ° 248) en tant qu’agent capable d’augmenter la prdifération de fibroblastes humains dermiques et ainsi traiter les signes visibles du vieillissement.

Ce peptide est naturellement présent dans une protéine de grain de riz Oryza sativa, à partir duquel il peut être obtenu. Toutefois il n’est pas naturellement présent en quantité suffisante pour y être détecté et produire les propriétés objets de l’invention. Dans le cadre de la présente invention, il a été obtenu par hydrolyse enzymatique.

S’il existe un grand nombre d’hydrolysats peptidique de riz sur le marché de la cosmétique, ceux-ci différent grandement quant à leur profil et à leur composition, en particulier par les différents fragments protéiques qu’ils contiennent, ce qui impacte fortement leurs propriétés biologiques. En matière d’hydrolyse des protéines, les ponts reliant les différents peptides et acides aminés sont en effet clivés par différentes méthodes classiques dans ce domaine telles que via des acides, des bases ou par catalyse. Mais ces différentes techniques conduisent à l’obtention d’hydrolysats protéiques de composition très variée pouvant conduire jusqu’à l’obtention d’acides aminés libres. L’hydrolyse chimique par utilisation d’acide ou de base, en ce qu’elle est aspécifique, conduit classiquement à l’obtention de produits dits de moindre qualité notamment en terme de couleurs, odeurs et/ou stabilité. L’hydrolyse enzymatique par sa spécificité offre l’avantage de pouvoir être effectuée dans des conditions ménagées notamment pH, température et pression. Toutefois, là encore, les enzymes sont choisies de manière à obtenir les peptides d’intérêt et conduisent à l’obtention d’hydrolysats spécifiques, très différents au regard des fragments peptidiques qu’ils contiennent, que ce soient en terme de nature de fragments, de poids moléculaire et de distribution.

Ces hydrolysats de riz de toute nature sont utilisés dans le domaine de la cosmétique pour des applications pour le soin de la peau et/ou des cheveux. Ainsi, la demande de brevet WO03039496A1 décrit un sel capryloyl-glutamate et/ou sels de capryloyl d’hydrolysat de protéine de riz comme agent autoconservateur et hydratants, ainsi que séborégulateurs, anti-pellicules et anti-odeurs. Le brevet KR20040108226B décrit un hydrolysat protéique de riz noir, obtenu par hydrolyse avec la papaïne pour hydrater augmenter la synthèse de collagène et inhiber la mélanogenèse.

Toutefois, de par leurs procédés d’obtention aspécifiques ou dirigés vers l’obtention d’autres peptides, tous ces hydrolysats différent grandement dans leurs compositions et leurs propriétés et aucun ne décrit ni ne contient le peptide selon l’invention en quantité suffisante pour permettre l’obtention des propriétés selon l’invention.

Description de l’invention

L’invention a ainsi pour objet l’utilisation du peptide de SEQ ID N° 1 et/ou de ses homologues pour ses propriétés cosmétiques choisies parmi améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou améliorer l’apparence des phanères saines, préférentiellement les cheveux. Ce peptide présente bon nombre d’avantages supplémentaires en ce qu’il n’agresse pas ni ne retire pas le sébum présent sur la peau notamment le cuir chevelu, ce qui le rend particulièrement approprié pour le soin et/ou le traitement des peaux notamment cuirs chevelus sensibles, en particulier sous la forme d’un shampoing doux. Par ailleurs, le peptide selon l’invention présente l’avantage d’inhiber la libération de TNF alpha par des macrophages. Il permet par ailleurs d’inhiber les élastases comme cela est décrit dans l’exemple 10.1 .

Le peptide selon l’invention par ses propriétés complémentaires fournit une solution parfaitement adaptée et complète aux besoins spécifiques des cheveux et cuirs chevelus sensibles.

Toutes ces propriétés complémentaires en font également un excellent agent apaisant et/ou de soin des peaux, notamment des cuirs chevelus sensibles.

Par ailleurs, par ses propriétés complémentaires sur la fermeté comme montré dans l’exemple 10.2, le peptide selon l’invention convient particulièrement pour la réalisation de composition complète pour le soin et/ou le traitement cosmétique du corps.

De manière avantageuse, le peptide de SEQ ID N° 1 est sous la forme du peptide de SEQ ID N°2 et/ou de ses homologues.

De manière préférentielle, le peptide selon l’invention est sous la forme d’un hydrolysat de protéines de riz Oryza sativa, avantageusement à une teneur d’au moins égale ou supérieure à 0,00001 % en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’hydrolysat, préférentiellement comprise entre 0,0001 % et 0,03%, plus préférentiellement entre 0,001 % et 0,01 %.

Encore préférentiellement, le peptide selon l’invention est utilisé en combinaison avec au moins un peptide choisi parmi les peptides de SEQ ID N°2, et/ou SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4, avantagesement avec les peptides de SEQ ID N°2, SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, pjférentiellement sous la forme de l’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention.

Selon un mode préférentiel, le peptide selon l’invention est le peptide de SEQ ID N° 1 :

SEQ ID N° 1 : GYYGEQQQQPGMTR Ce peptide contient les 14 acides aminés : Gly-Tyr-Tyr-Gly-Glu-GIn-GIn- Gln-Gln-Pro-Gly-Met-Thr-Arg et a un poids moléculaire moyen de 1642,72 daltons.

Il est naturellement présent dans les protéines de grains de riz (Oryza sativ ) et peut être obtenu par hydrolyse enzymatique de grains de riz tel que décrit dans les demandes de brevets W02017009484A1 et W02017009490A1 , ou par synthèse chimique selon les méthodes classiques en la matière. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1 .

Selon une variante de l’invention, le peptide selon l’invention est le peptide de SEQ ID N°2 qui contient le peptide SEQ ID N° 1 , pécédé des 3 acides aminés supplémentaires Ser-Glu-Glu.

SEQ ID N°2 : SEEGYYGEQQQQPGMTR

Le peptide SEQ ID N°2 contient ainsi 17 acides aminées et a un poids moléculaire moyen de 1988,01 daltons. Il est également naturellement présent dans les protéines de grains de riz (Oryza sativa) et peut être obtenu par hydrolyse enzymatique de grains de riz tel que décrit dans les demandes de brevets WQ2017009484A1 et WQ2017009490A1 , ou par synthèse chimique selon les méthodes classiques en la matière. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1

De manière particulièrement avantageuse, le peptide selon l’invention est sous la forme SEQ ID N° 1 et/ou SEQ ID N°2, préférertiellement sous la forme d’un mélange de peptides SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, notamment contenu dans un hydrolysat enrichi selon l’invention.

Selon un mode de réalisation les peptides de SEQ ID N°1 et/ou SEQ ID N°2 peuvent être combinés avec les peptides de SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4, éventuellement sous la forme d’un hydrolyse comme ceux décrits selon l’exemple 2.

Selon un mode de réalisation le peptide de SEQ ID N°1 est utilisé en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°2 et/ou en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°3 et/ou en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°4.

Peptide SEQ ID N°3 : IYGPDTGVDYKDNQMR

Ce peptide SEQ ID N°3 a 16 acides aminés et a un pads moléculaire de 1971 ,97 daltons. Il peut être isolé à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativâ) selon la méthode décrite dans l’exemple 3 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°218 ou par syntièse chimique. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1 . Peptide SEQ ID N°4 : FYNEGDAPVVAL

Ce peptide de 12 acides aminés a un poids moléculaire de 1294,37 daltons ; Il peut être isolé à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativâ) selon la méthode décrite dans l’exemple 3 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N ° 194 ou par synthèse chimique. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1 .

Selon l’invention, on entend par « peptide », toute séquence d’acides aminés isolée, naturelle ou synthétique, le cas échéant susceptible d’être obtenue par synthèse chimique ou biotechnologique ou par extraction à partir d’un tissu biologique, par exemple un végétal, un animal ou un microorganisme notamment levure, exprimant naturellement ou après transduction la séquence d’acides aminés, éventuellement après modification post-traductionnelle de celle-ci. Le peptide peut être modifié par ajout d’un groupement fonctionnel, par exemple couplé avec un agent de pénétration hydrophile ou hydrophobe, agent de stabilité ou avec un groupement protecteur selon les méthodes classiques connues par l’homme du métier, notamment par acylation du groupement -NH ₂ terminal, ou amidation ou alkylation du groupement -COOH terminal.

Les techniques de synthèse chimique des peptides sont connues par l’homme du métier et on peut citer à titre d’exemple les techniques décrites dans les références J.M. Stewart and J.D. Yound, solid phase peptide synthesis, 2 ^nd editions, Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois (1984), ainsi que M. Bodanzsky and . Bodanzsky, The practive of peptide synthesis, Springer Verlag. New York (1984).

Selon l’invention, on entend par «homologue» d’une séquence d’acides aminés, une séquence d’acide aminés présentant une identité de séquence d’au moins 85%, encore préférentiellement 90%, en particulier d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 98%, encore préférentiellement au moins 99% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature. L’homologie de séquence peut être identifiée par toute technique classique dans le domaine comme par exemple via l’interface informatique BLAST disponible sur le site internet NCBI à l'adresse http://blast.ncbi.nlm.nih.gov configurée avec les paramètres par défaut.

Un homologue d’une séquence d’acides aminés peut différer de cette séquence, par exemple, par une ou plusieurs délétion(s) et/ou insertion(s), et/ou une ou plusieurs substitution(s) d’un acide aminé. Selon une variante de réalisation, un homologue d’une séquence d’acides aminés peut comprendre une ou plusieurs substitutions conservatrices d’acides aminés. Une substitution conservatrice est le remplacement, dans une séquence d'un acide aminé par un autre acide aminé doté de propriétés physico-chimiques sensiblement similaires, ou suffisamment proches de celles de l'acide aminé d'origine, pour que les propriétés et fonctions du peptide ne soient pas, ou sensiblement pas, affectées. Les modifications des séquences d'acides aminés présentées ci-dessus peuvent être dénommées, de manière générale, « mutation ». Ainsi, les homologues des peptides selon l'invention concernent également les mutants et les variants des séquences d'acides aminés de l'invention ayant une activité biologique de même nature. Par « activité biologique de même nature » d'une séquence d'acides aminés de l'invention, on entend en particulier sa capacité à présenter les propriétés selon l’invention. Selon l’invention on entend par « améliorer le confort de la peau et/ou des muqueuses », diminuer les manifestations désagréables et/ou inconfortables des peaux saines et/ou des muqueuses saines, notamment celles dues à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale et/ou dues aux modifications du stratum corneum, en particulier du fait d’une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filaggrine et/ou d’une élévation de pH cutané, choisies parmi la sécheresse cutanée et/ou mucosale, en particulier au niveau du cuir chevelu, les démangeaisons, les rougeurs, les tiraillements cutanés, les desquamations, en particulier les squames du cuir chevelu, les pellicules, les craquelures ainsi que la sensibilité cutanée notamment du cuir chevelu, et/ou procurer une sensation de confort cutané et/ou mucosale et/ou rendre la peau et/ou la muqueuse plus douce et/ou diminuer sa rugosité.

L’amélioration du confort de la peau peut être mesurée par les méthodes classiques connues de l’homme du métier. On pourra citer à titre d’exemple, les techniques suivantes : mesure de l’augmentation de synthèse de l’involucrine par les kératinocytes épidermiques comme présenté dans l’exemple 5, mesure de l’augmentation de la synthèse de filagrine dans un épiderme reconstruit comme présenté dans l’exemple 6, mesure des rougeurs, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7, mesure de la quantité des squames, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7, mesure de l’hydratation cutanée, notamment par un cornéomètre, telle que celle décrite dans l’exemple 8, mesure du pH cutané, notamment via un pHmètre.

Le peptide selon l’invention présente l’avantage de procurer un effet durable, rémanent sur l’hydratation même après l’arrêt de son utilisation, comme cela est démontré dans l’exemple 8. De même, l’amélioration du confort du chevelu peut être mesurée par exemple par:

Mesure des rougeurs, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7,

Mesure de la quantité des squames, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7.

On entend par « baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale », un déséquilibre de la barrière cutanée et/ou mucosale par une diminution d’homéostasie hydrique et/ou par variation du pH, notamment élévation de pH. La perte d’homéostasie cutanée d’une peau saine et/ou d’une muqueuse saine ne résulte ainsi pas selon l’invention d’une l’altération des cellules épithéliales comme cela peut être le cas par exemple lors d’une blessure, qui relève de la dermatologie.

Le peptide selon l’invention convient ainsi particulièrement pour le soin et/ou le traitement des muqueuses sèches, des peaux sèches, notamment cuir chevelu sec, des peaux sensibles, des peaux et/ou muqueuses irritées, et/ou présentant une baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale, notamment hydrique et/ou élévation de pH.

Ainsi avantageusement l’utilisation selon l’invention est destinée au soin des peaux sèches et/ou sensibles, et/ou du cuir chevelu sec et/ou sensible.

De manière préférentielle, les manifestations désagréables et inconfortables des peaux saines et/ou muqueuses saines ne sont pas liées à l’âge ni à une altération des cellules épithéliales.

Selon l’invention, on entend par « améliorer le confort du cuir chevelu », diminuer les manifestations désagréables et inconfortables du cuir chevelu sain, notamment celles dues à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou dues aux modifications du stratum corneum, en particulier du fait d’une diminution de la teneur en involucrine et/ou d’une diminution de la teneur en filaggrine et/ou d’une élévation de pH cutané, choisies parmi la sécheresse du cuir chevelu, les démangeaisons du cuir chevelu, les rougeurs du cuir chevelu, les tiraillements du cuir chevelu, les desquamations du cuir chevelu, les pellicules, les craquelures ainsi que la sensibilité du cuir chevelu, et/ou procurer une sensation de confort cutané et/ou rendre le cuir chevelu plus doux et/ou diminuer sa rugosité.

L’amélioration du confort du cuir chevelu peut notamment être mesuré selon les méthodes classiques. A titre d’exemple, elle peut être mesurée selon les méthodes présentées dans l’exemple 7, par mesure des rougeurs du cuir chevelu et/ou par mesure du pH du cuir chevelu et ou par évaluation des squames du cuir chevelu.

Selon l’invention, on entend par « améliorer l’apparence des phanères », augmenter leur force et/ou leur résistance, et/ou les protéger contre les dommages des traitements oxydants cosmétiques et/ou des agents agressifs, diminuer le taux de cassure, réparer les phanères abimés, améliorer la mise en forme et/ou le volume, augmenter la croissance et/ou la brillance des fibres kératiniques et/ou diminuer leur chute. Le peptide selon l’invention en particulier l’hydrolysat selon l’invention qui le contient présente l’avantage de ne pas diminuer significativement la quantité de sébum présente sur le cuir chevelu.

L’amélioration de l’apparence des phanères, notamment des cheveux, peut être mesurée selon les techniques classiques. A titre d’exemple, on pourra citer la mesure de l’amélioration de la force et la résistance des phanères par mesure de l’amélioration de la structure des fibres kératiniques, comme décrit dans l’exemple 12.1. La croissance de fibres kératiniques pourra être mesurée selon la méthode décrite dans l’exemple 12.2.

On entend au sens la présente invention par « cosmétique » une utilisation non pharmaceutique, non thérapeutique, qui n’est pas destinée à la prévention et/ou au traitement de peaux et/ou de muqueuses et/ou phanères qualifiées de pathologiques par un spécialiste du domaine, tel qu’un dermatologue. Il s’agit donc d’une utilisation sur peaux et/ou muqueuses et/ou phanères saines. On entend par « peau saine notamment cuir chevelu sain et/ou muqueuse saine et/ou phanère saine » tout ou partie d’une zone de peau notamment le cuir chevelu et/ou muqueuse et/ou de phanère saine, notamment humaine, et sur laquelle est appliquée le peptide selon l’invention et qui est dite « non pathologique » par un dermatologue c’est-à-dire ne présentant donc pas d’infection, de cicatrice, de maladie ou d’affection cutanée telle que candidose, impétigo, psoriasis, eczéma, acné, ichtyose, gingivite ou dermatite ou de plaies ou de blessures ou aphtes ou ulcération ou de brulure et/ou autres dermatoses, ou aphtoses ou d’inflammation ou d’irritation, ou urticaire ou allergie telle que allergie de contact.

On entend au sens de la présente invention par « peau », la peau de tout ou partie du corps, notamment humain, y compris le cuir chevelu, choisi parmi le cuir chevelu, le visage, les mains, les bras, le décolleté, les jambes, le cou, le dos, les épaules, le ventre, les poignets, les avant-bras, les chevilles, les cuisses, la nuque, les plis articulaires et des aisselles. En particulier la peau est celle qui peut présenter des manifestations inconfortables et/ou désagréables, notamment les zones d’exposition, de frottements et/ou de macération. Il s’agit ainsi plus particulièrement du visage, du cuir chevelu, des mains, du cou, du décolleté, du cuir chevelu, des plis articulaires et des aisselles.

Au sens de la présente invention, on entend par « muqueuse(s) », la muqueuse oculaire, nasale, vaginale, anale et/ou la muqueuse buccale, notamment la muqueuse buccale labiale, préférentiellement, les muqueuses labiales, oculaires et/ou nasales.

On entend par « phanères », les ongles et les « fibres kératiniques ».

On entend par « fibres kératiniques », la fibre capillaire (les cheveux), les cils, les sourcils, les poils notamment de la muqueuse nasale, des oreilles, de la barbe et/ou de la moustache, en particulier la fibre capillaire (les cheveux). De manière préférentiellement, l’application est par voie topique, avantageusement sur des parties spécifiques et/ou zones du corps inconfortables, en particulier choisies parmi le cuir chevelu, le visage, les mains, les bras, le décolleté, les jambes, le cou, le dos, les épaules, le ventre, les poignets, les avant-bras, les chevilles, les cuisses, la nuque, les plis articulaires et des aisselles, les muqueuses labiales, les poils, les cils, les sourcils et/ou les cheveux, préférentiellement le cuir chevelu et/ou les cheveux.

Le peptide selon l’invention est topiquement acceptable. Au sens de la présente invention, on entend par « topiquement acceptable », un ingrédient adapté à une application par voie topique, non toxique, non irritant pour la peau et/ou les muqueuses et/ou les phanères, qui n’induit pas de réponse allergique et qui n’est pas instable sur le plan chimique.

Selon un mode préférentiel de la présente invention, le peptide seul ou en combinaison est utilisé sous la forme d’un hydrolysat de protéines de riz (Oryza sativa), en particulier enrichi en peptide selon l’invention.

Selon l’invention, on entend par Thydrolysat enrichi en peptide selon l’invention”, un hydrolysat dans lequel on détecte le peptide de SEQ ID N°1 , et/ou de SEQ ID N°2 selon l’invention à une teieur allant au-delà du seuil de la limite de détection avec les techniques sensibles en la matière, par exemple LC-MS/MS, c’est-à-dire en générale une teneur au moins égale ou supérieure à 0,00001 % en poids par rapport au poids total en matière sèche de Thydrolysat.

Selon un mode préféré de l’invention, le peptide SEQ ID N° 1 , éventuellement sous la forme de SEQ ID N°2 ou combhé avec un peptide de SEQ ID N°2 est contenu dans un hydrolysat de prdéine de riz, préférentiellement à une quantité d’au moins égale ou supérieure à 0,00001% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’hydrolysat, préférentiellement comprise entre 0,0001 % et 0,03%, plus préférentiellement entre 0,001 % et 0,01 %. Selon un mode préféré de réalisation, l’hydrolysat peptidique (ou hydrolysat de protéines) de riz est obtenu par hydrolyse enzymatique en une seule étape. Selon un mode alternatif, l’hydrolysat peut être obtenu par hydrolyse successive utilisant la même enzyme ou un mélange d’enzymes.

L’hydrolyse enzymatique est effectuée par une ou plusieurs enzymes protéolytiques, qui peuvent être des protéases d’origine végétale ou issues de microorganismes.

Selon un mode de réalisation, l'hydrolyse enzymatique a lieu jusqu'à son achèvement, qui peut être déterminée par l'homme du métier de manière connue, par exemple en déterminant le pH constant ou par photométrie à l'aide de la détection de groupements NH ₂ libres ou en déterminant la quantité constante de peptides SEQ ID N° 1 et SEQ ID N°2 par chromatographie liquide et spectroscopie de masse.

La quantité d'enzyme (s) utilisée (s) n'est pas critique en soi, mais doit être dans la gamme de 0,05 à 5, de préférence de 0,1 à 2% en poids par rapport au poids de la matière de départ contenant le peptide.

Les hydrolysats obtenus peuvent enfin être traités, par exemple par filtration des fractions non dissoutes. Pour une meilleure stabilisation, le pH est de préférence fixé à des valeurs comprises entre 3,0 et 7,5, de préférence entre 3,5 et 5,5.

Dans un mode de réalisation, les hydrolysats obtenus sont sous forme liquide, en particulier des solutions aqueuses, et peuvent être utilisés directement ou sous forme concentrée; ils ont de préférence une teneur en matières sèches dans la gamme de 1 à 50% en poids, de préférence de 5 à 30% en poids. Des adjuvants peuvent être ajoutés tels que polyols, glycols, acides (acide citrique, acide sorbique, acide sulfurique, acide benzoïque ou leurs sels....).

Les hydrolysats obtenus à ce stade peuvent être davantage concentrés et/ou purifiés pour sélectionner les fractions de poids moléculaire ciblées, par des étapes successives d'ultrafiltration ou de nanofiltration à travers des filtres à porosité variable, ou au moyen d'une méthode de type chromatographique, par exemple pour enrichir spécifiquement l’hydrolysat en ces peptides. Des hydrolysats enrichis selon l’invention sont présentés en exemple 2.

Il est également possible de produire les hydrolysats peptidiques selon l’invention sous forme de poudre par séchage, (atomiseur, lyophilisé,....) avec ou sans support tel que le mannitol, la maltodextrine, la cyclodextrine, selon les techniques classiques de formulation connues de l’homme du métier.

Selon un mode de réalisation, l’hydrolysat préféré selon l'invention contient le peptide de SEQ ID N° 1 et/ou le peptide de SEQ ID N°2, préférentiellement les deux peptides, à une teneur totale au moins égale ou supérieure à 0,00001 % en poids par rapport au poids total en matière sèche de l’hydrolysat, préférentiellement comprise entre 0,0001 % et 0,03%, plus préférentiellement entre 0,001 % et 0,01 %.

Selon un mode de réalisation préféré, cet hydrolysat a en outre au moins une, et de préférence au moins deux, et encore préférentiellement toutes les caractéristiques suivantes :

- Est sous forme liquide ;

- A une teneur en matière sèche comprise entre 15 et 25% en poids,

- A une teneur en azote de 1 ,5 à 3% en poids, préférentiellement 1 , 9 à 2,8% en poids ;

- A un poids moléculaire moyen allant de 1000 à 2500 Daltons, préférentiellement 1250 à 2000 daltons, encore préférentiellement 1500 daltons ;

- Contient au moins 50%, encore préférentiellement 60% de peptides ayant un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons ;

- Contient au moins 70%, encore préférentiellement 80% de peptides ayant un poids moléculaire inférieur à 2500 daltons.

De manière préférentielle, l’hydrolysat protéique préférentiel selon l’invention est caractérisé par la présence de toutes ces caractéristiques. Le poids moléculaire moyen exprimé en dalton (ou g/mol) est déterminé par chromatographie d’exclusion stérique connue de l’homme du métier.

La distribution du poids moléculaire est mesurée selon l’invention comme décrite dans l’exemple 3.

L’hydrolysat peptidique de riz selon l’invention peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes :

- solubilisation de la protéine de riz, ou d'un isolat de protéine de riz contenant au moins 70%, de préférence au moins 80% de protéines, dans l'eau à une température supérieure à 70 °C pour la pasteurisation;

- l'hydrolyse des protéines ; de préférence l'hydrolyse est réalisée enzymatiquement au moyen d'enzymes protéolytiques, de préférence d'origine végétale ou dérivées de microorganismes, en sélectionnant l'enzyme et en ajustant les conditions de température et de pH pour obtenir le bon degré d'hydrolyse et le profil de poids moléculaire ;

- inactivation de la ou des enzyme (s), préférentiellement par traitement thermique: cette inactivation est réalisée selon la recommandation technique du (des) fournisseur (s) de la ou des enzyme (s);

- séparation des phases solubles et insolubles, par centrifugation et / ou filtration, et récupération de la phase soluble contenant les peptides;

- éventuellement une étape de concentration pour augmenter le taux de matière sèche, suivie d'une étape de filtration pour récupérer la phase soluble contenant les peptides;

- l'obtention d'un filtrat, l’hydrolysat de protéines de riz enrichi en peptide selon l’invention qui se présente sous forme liquide et qui constitue également un mode de réalisation de l'invention.

Les étapes des procédés décrits ci-dessus, prises individuellement, sont courantes dans le domaine des hydrolysats de protéines et l'homme du métier est à même d'ajuster les paramètres de réaction en fonction de ses connaissances générales pour obtenir l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention. Si les hydrolysats de protéines de riz existent déjà sur le marché de la cosmétique, ils ne contiennent pas le peptide selon l’invention et sont ainsi dépourvus des propriétés objet de la présente invention. Un produit commercialement disponible a ainsi été décrit dans l’exemple 4 et testé pour ses propriétés par comparaison au peptide selon l’invention dans les exemples 5, 6, 10 et 12.2.

De manière particulièrement intéressante, l’hydrolysat contient également les peptides SEQ ID N°1 , SEQ ID N°2, SEQ ID N°3 etSEQ ID N°4, chacun à une teneur individuelle au moins égale ou supérieure à 0,00001% en poids par rapport au poids total en matière sèche de l’hydrolysat, la somme totale de ces 4 peptides étant au moins égale à 0,00004% en poids par rapport au poids total en matière sèche de l’hydrolysat, préférentiellement supérieure à 0,0001 %. Des exemples d’un tel hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention sont présentés dans les exemples 2a) 2b) et 2c) et constituent les modes préférentiels de la présente invention.

Le peptide selon l’invention, préférentiellement sous la forme d’hydrolysat enrichi en peptide est utilisé par voie topique.

Selon un mode de réalisation, il peut être utilisé :

- sous la forme d’un ingrédient cosmétique ou pharmaceutique destiné à être incorporé dans une composition cosmétique ou pharmaceutique, et comprenant en outre un véhicule cosmétique ou pharmaceutique approprié, ou

- sous la forme d’une composition cosmétique ou pharmaceutique le comprenant et comprenant en outre avantageusement un véhicule ou pharmaceutique approprié.

Au sens de la présente invention, on entend par « voie topique », l’application du peptide selon l’invention, préférentiellement sous la forme d’hydrolysat enrichi en peptide et/ou de la composition et/ou de l’ingrédient selon l’invention sur la surface de la peau notamment le cuir chevelu et/ou des muqueuses, et/ou des phanères, préférentiellement cheveux, notamment par application directe ou par vaporisation.

Au sens de la présente invention, on entend par « ingrédient(s) cosmétique(s) et/ou pharmaceutique(s) » un ou des extraits végétaux et/ou une ou des molécules naturelles ou synthétiques et/ou leurs mélanges destiné à une application cosmétique et/ou pharmaceutique. Les ingrédients cosmétiques sont notamment définis par la nomenclature internationale des ingrédients cosmétiques (INCI).

Au sens de la présente invention, le terme « véhicule cosmétique ou pharmaceutique approprié », signifie que la composition ou les composants de celle-ci sont adaptés à l'utilisation en contact avec la peau et/ou les muqueuses humaines sans toxicité, incompatibilité, instabilité, réponse allergique, ou leurs équivalents, indue.

L’ingrédient cosmétique ou pharmaceutique, en particulier dermatologique sous forme liquide contenant le peptide selon l’invention, notamment sous la forme d’un hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention et notamment celui de l’exemple 9, peut être utilisé dans une composition cosmétique ou pharmaceutique, en particulier dermatologique, préférentiellement à une teneur en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition comprise entre 0,01 et 10%, avantageusement entre 0,1 et 5%, en particulier entre 0,2 et 3%.

Dans un mode de réalisation de l’invention, le peptide, préférentiellement sous la forme de l’hydrolysat enrichi en peptide sera compris dans la composition cosmétique ou pharmaceutique en une teneur comprise entre 1x10' ⁵ % à 20% en poids, préférentiellement de 1x10' ⁴ % à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10' ³ % à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.

Les compositions selon l’invention peuvent contenir tout solvant approprié et/ou tout véhicule approprié et/ou tout excipient approprié, éventuellement en combinaison avec d’autres composés d’intérêts. Elles peuvent notamment contenir un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable et/ou un véhicule cosmétique ou pharmaceutique approprié choisis parmi des agents tensioactifs, des conservateurs, des agents tampon, des agents gonflants, des agents chélatants, des agents biocides, des dénaturants, des agents opacifiants, des ajusteurs de pH, des agents réducteurs, des agents stabilisants, des émulsifiants, des épaississants, des gélifiants, des polymères filmogènes, des solvants, des charges, des bactéricides, des absorbeurs d'odeurs, des agents matifiants, des agents conditionneurs, des agents de texture, des agents de brillance, des pigments, des colorants, des parfums et des filtres solaires chimiques ou minéraux, des oligo-éléments, des huiles essentielles, des édulcorants, des agents modificateurs du goût. Ces combinaisons sont également couvertes par la présente invention. Le CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) décrit différents ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques utilisés couramment dans l'industrie cosmétique et pharmaceutique, qui sont en particulier adaptés à une administration par voie orale et/ou à une utilisation topique.

Avantageusement, le ou les excipients et/ou le ou les véhicules sont choisis dans le groupe comprenant les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de lanoline, les phospholipides, les lactoferrines, les lactoperoxidases, les stabilisants à base de sucrose, la vitamine E et ses dérivés, les gommes de xanthane, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les phytostérols, les silicones, les hydrolysats de protéines, les betaines, les aminoxides, les extraits de plantes, les esters de saccharose, les dioxydes de titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi le groupe consistant en le stéareth-2, le stéareth-21 , le glycol-15 stéaryle éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol, le méthylparabène, l'éthylparabène, le propylparabène, le butylparabène, le butylène glycol, le caprylyl glycol, les tocophérols naturels, la glycérine, le dihydroxycétyl sodium phosphate, l'isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate, la triisononanoine, l'octyl cocoate, le polyacrylamide, l'isoparaffine, le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, l'hexylène glycol, le glycérol, le bisabolol, une diméthicone, l'hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate, les triglycérides caprique/caprylique, le cétéaryl octanoate, le dibutyl adipate, l'huile de pépins de raisin, l'huile de jojoba, le sulfate de magnésium, l'EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane, l'acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles minérales, l'isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène glycol, l'isostéarate de propylène glycol, le PEG 8, la cire d'abeille, les glycérides d'huile de cœur de palme hydrogénée, l'huile de lanoline, l'huile de sésame, le cétyl lactate, le lanoline alcool, l'huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose, le saccharose, le polyéthylène basse densité, une solution isotonique salée, et leurs mélanges.

La composition cosmétique ou pharmaceutique ou le peptide, préférentiellement l’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention éventuellement sous forme d’ingrédient cosmétique ou pharmaceutique, peut se présenter sous toutes les formes galéniques classiquement utilisées pour une application topique telles que les formes liquides ou solides ou même sous la forme de liquide sous pression. Elles peuvent notamment être formulées sous la forme d’une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing, un lait, une émulsion, un hydrogel, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée, un sérum, une lotion, notamment en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en aérosol, une ampoule, un savon liquide, une pâte, un pain dermatologique, une pommade, une mousse, un aérosol, un masque, un patch, un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de bâtonnet notamment en stick ou en poudres, notamment de maquillage. En particulier la composition se présente sous la forme d’un sérum, d’une lotion, d’une crème, d'un lait, d'une pommade, d'une pâte, d'une mousse, d'une émulsion, d’un hydrogel, d’un gel douche, d’un masque, d’un stick d’un patch, ou de poudres de maquillage, avantageusement d’une crème ou d’une lotion. De manière préférentielle, la composition se présente sous la forme d’une crème, lotion pour la peau et/ou les cheveux ou d’un shampoing, après-shampoing, rinçable ou non (type leave-on).

Le peptide selon la présente invention, préférentiellement l’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention, présente l’avantage de ne pas agresser et/ou décaper le cuir chevelu permettant le maintien du taux de sébum et convient tout particulièrement pour le soin et/ou le traitement du cuir chevelu sensible et/ou ayant tendance à s’irriter.

Dans le cas d’une administration par voie mucosale, la composition cosmétique ou pharmaceutique ou le peptide selon l’invention éventuellement sous forme d’ingrédient cosmétique ou pharmaceutique, peut se présenter sous la forme d’un collyre, d’une lotion, d’un aérosol, d’un gel, ou d’une composition mucoadhésive.

La composition cosmétique ou pharmaceutique pourra en outre comprendre d’autres ingrédients cosmétiques ou pharmaceutiques, actifs sur le traitement de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères induisant un effet complémentaire ou de synergie avec le peptide selon l’invention, choisi par exemple parmi les ingrédients actifs pour les peaux et/ou muqueuses sensibles, les ingrédients actifs sur le cuir chevelu, antipelliculaires et/ou les ingrédients actifs dit anti-chute.

Parmi les ingrédients actifs pour les peaux sensibles, on citera , l’extrait protéique de graine non germée déshuilée de Moringa oleifera commercialisé sous la dénomination commerciale Purisoft®, un extrait végétal de Cestrum latifolium commercialisé sous le nom de Symbiocell ™, un beurre extrait du fruit de l’arbre Irvingia gabonensis commercialisé sous le nom Irwinol™ , un extrait de racine d’Eperua falcata commercialisé sous le nom de Eperuline™ , un peptide N-acetyl-L-Tyrosyl-L-Prolyl-L- Phenylalanyl-L- Phenylalaninamide (INCI :Acetyl Tetrapeptide 15) commercialisé sous le nom de Skinasensyl™, un extrait de Inonotus obliquus commercialisé sous le nom d’Inolixir™ par la Demanderesse.

Parmi les ingrédients anti-chute des cheveux, on citera l’association de sulfopeptides, acides aminés, aminosaccharides, vitamine du groupe B, zinc et / ou extrait de Panax ginseng et Artium majus commercialisé sous le nom Trichogen™ LS 8960 par la Demanderesse et / ou un agent protecteur capillaire tel qu’un extrait de péricarpe de Litchi chinensis commercialisé sous le nom Litchiderm™ par la Demanderesse, et / ou un actif apaisant et anti-démangeaisons tels que les phytostérols de colza commercialisé sous le nom de Phytosoothe™ LS9766 par la Demanderesse et / ou un actif pour renforcer le follicule pileux tel qu’un extrait de Nephelium lappaceum et / ou de minodoxil, d’acide valproique tel que commercialisé par Amorepacific et / ou de stemoxidine et / ou d’aminoxil et / ou d’Hairgenyl tel que commercialisé par Silab et / ou de Rednensyl (tel que commercialisé par Givaudan-lnduchem et / ou d’Anagain tel que commercialisé par Mibelle et / ou de Baïcapil tel que commercialisé par Provital, des actifs anti pelliculaires tel que le zinc pyrithione et / ou l’octopirox et / ou le kétoconazole glycolipides extraits de levure commercialisés par BASF sous le nom de BioToLife et/ou l’hexamidine diisethionate commercialisé sous le nom d’Elestab™ HP 100 et/ou le complexe contenant un extrait de baies de Piper nigrum, un extrait d’écorce d’Inga alba et du lactylate lauroyl de sodium commercialisé sous le nom de Sanicapyl par la Demanderesse, et/ou les actifs antipelliculaires tels que le piroctone olamine notamment combiné avec l’acide salicylique.

Parmi les ingrédients actifs sur le cuir chevelu, on pourra citer un extrait de feuilles de Cassia alata commercialisé sous le nom de DN-Age™ en tant qu’actif anti-oxydant pour le soin des cheveux notamment, d’une combinaison d’un extrait de Salvia miltiorhizza et de niacinamide commercialisé sous le nom de ColIRepair™ en tant qu’agent déglyquant, un extrait d’Orthosiphon stamineus commercialisé sous le nom de MAT- XS™ Bright, la sarcosine commercialisé sous le nom Scalposine™ par la Demanderesse. Ces associations d’actifs sont susceptibles de renforcer le follicule pileux et ainsi contribuer à diminuer la chute des fibres kératiniques, préférentiellement des cheveux.

On pourra également citer dans le cadre de composition pour le soin du corps, la combinaison avec des ingrédients cosmétiques actifs favorisant la fermeté de la peau tels qu’un tétrapeptide synthétique commercialisé sous le nom de Dermican™, un extrait d’Hibiscus abelmoschus commercialisé sous le nom de Linefactor™, un extrait purifié de pois commercialisé sous le nom de Proteasyl™, un extrait de Manilkara multinervis commercialisé sous le nom d’Elestan™, un extrait de Khaya senegalensis commercialisé sous le nom de Collalift™18, un extrait de pulpe d’Argan commercialisé sous le nom d’Argassential™, un extrait de Schizandra chinensis commercialisé sous le nom de Sqisandryl™ par la Demanderesse.

On pourra également utiliser le peptide selon la présente invention en combinaison avec des ingrédients actifs sur la flore microbienne cutanée et/ou mucosale et/ou actifs sur la fonction barrière de la peau notamment actifs hydratants et/ou apaisants, parmi lesquels un oligosaccharide obtenu par synthèse enzymatique commercialisé par la société Solabia sous le nom de BioEcolia™ ou un complexe d’alpha- glucooligosaccharides commercialisé par la même société sous le nom de Ecoskin™, un extrait d’Alisma plantago-aquatica, un extrait d’Argania spinosa (Lipofructyl™ Argan), un mélange de céramides (Sphingoceryl™ VEG) , des extraits purifiants de Boldo (Betapur™), des produits à base d’inuline ou de fructooligosaccharides, des extraits de bifidobactéries ou encore un extrait d’Orthosiphon stamineus pour lutter contre la peau grasse (MAT-XS™ Bright), un extrait naturel de miel commercialisé par la Demanderesse sous le nom de Melhydran™ pour son propriété hydratante, un extrait de lin commercialisé sous le nom Oligolin™ par la Demanderesse, un extrait de levure modifié par biotechnologique et commercialisé par la Demanderesse sous le nom Relipidium™ , un extrait de racine de Pueraria lobata commercialisé sous le nom Inhipase™ par la Demanderesse, un dérivé de beta-glucan issu de levure de boulanger commercialisé par Mibelle sous le nom CM-Glucan Forte ™ et/ou un extrait de Mirabilis jalapa commercialisé sous le nom de Pacifeel™ par Sederma.

La présente invention a également pour objet un procédé de soin et/ou traitement cosmétique comprenant l’application par voie topique, en particulier quotidienne sur au moins une zone de peau saine, avantageusement du cuir chevelu sain, et/ou de muqueuse saine et/ou de phanère saine, du peptide selon l’invention, préférentiellement sous la forme d’un hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention ou d’une composition cosmétique selon l’invention pour améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou l’apparence des phanères notamment des fibres kératiniques.

De manière avantageuse, l’invention a également pour objet une méthode de traitement cosmétique pour améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou l’apparence des phanères saines notamment des fibres kératiniques saines d’un individu qui en a besoin/qui le souhaite comprenant les étapes

- L’identification sur l’individu d’une zone de peau saine notamment du cuir chevelu sain, et/ou de muqueuses saines, dont on souhaite améliorer le confort et/ou de phanères saines dont on souhaite améliorer apparence, et

- L’application topique sur cette zone de peau saine notamment du cuir chevelu sain, et/ou de muqueuses saines et/ou de phanères saines notamment de fibres kératiniques saines, d’une composition cosmétique contenant le peptide selon l’invention en une quantité efficace pour améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou l’apparence des phanères saines notamment des fibres kératiniques saines, en particulier en une teneur de peptide comprise entre 1x10' ⁵ % à 20% en poids, préférentiellement de 1x10' ⁴ % à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10' ³ % à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids, par rapport au poids total de la composition.

La présente invention a également pour objet le peptide de SEQ ID 1 et/ou ses homologues selon la présente invention, préférentiellement sous forme sous la forme d’un hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention, pour son utilisation seul ou dans une composition pharmaceutique, notamment dermatologique dans le traitement et/ou la prévention d’au moins une pathologie associée à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou à une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filagrine et/ou à une élévation de pH cutané et/ou l'une quelconque de leurs combinaisons, notamment l’ichtyose et l’alopécie ainsi que les desquamations associées à certaines pathologies telles que irradiations aigues, coup de soleil, brulure. La composition pharmaceutique, notamment dermatologique contient préférentiellement le peptide selon l’invention a une teneur de peptide comprise entre 1x10' ⁵ % à 20% en poids, préférentiellement de 1x10' ⁴ % à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10' ³ % à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids, par rapport au poids total de la composition. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description explicative qui fait référence à des exemples et aux figures qui sont donnés seulement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention.

Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité.

Ainsi, chaque exemple a une portée générale.

D'autre part, dans les exemples, et sauf indication contraire, la température est exprimée en degré Celsius et la pression est la pression atmosphérique.

Brève description des dessins

La figure 1A représente une photographie d’une surface de cuir chevelu avant application d’une composition selon l’invention et la figure 1 B montre une photographie d’une surface du cuir chevelu humain après une semaine d’application d’une composition selon l’invention dans les conditions de l’exemple 1 .

La figure 2A représente une photographie d’une surface de cuir chevelu avant application d’une composition selon l’invention, et la figure 2B montre une photographie d’une surface du cuir chevelu humain après trois semaines d’application d’une composition selon l’invention dans les conditions de l’exemple 1 .

La figure 3A représente une photographie d’une surface de cuir chevelu avant application d’une composition selon l’invention, et la figure 3B montre une photographie d’une surface du cuir chevelu humain après trois semaines d’application d’une composition selon l’invention et une semaine après l’arrêt de l’application dans les conditions de l’exemple 1 .

La figure 4 représente une photographie par microscopie confocal d’une coupe histologique d’un épiderme reconstruit après immunomarquage de la filaggrine (en vert) : 4A-témoin non traité ; 4B-après traitement par 0,01 % (p/v) d’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention ; 4C-après traitement par 0,01 % (p/v) du peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b, dans les conditions de l’exemple 6. Tl

Exemples

Exemple 1 : Réalisation des peptides de SEQ ID N°1, SEQ IP N°2, SEQ IP N°3 ou SEQ IP N°4

Peptide SEQ ID N°1 : GYYGEQQQQPGMTR

Ce peptide de 14 acides aminés peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativ ) comme décrit dans l’exemple 2 ou comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484A1 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°423 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1642,72 daltons.

Peptide SEQ ID N°2 : SEEGYYGEQQQQPGMTR

Ce peptide de 17 acides aminés peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativa) comme décrit dans l’exemple 2 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°424 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1988,01 Daltons.

Les peptides de SEQ ID N° 1 et/ou SEQ ID N°2 peuventêtre combinés avec les peptides de SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4, éventuellement sous la forme d’un hydrolysat selon l’exemple 2.

Peptide SEQ ID N°3 : IYGPDTGVDYKDNQMR

Ce peptide de 16 acides aminés_peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativa) comme décrit dans l’exemple 2 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°218 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1971 ,97 daltons.

Peptide SEQ ID N°4 : FYNEGDAPVVAL

Ce peptide de 12 acides aminés_peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativa) comme décrit dans l’exemple 2 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°194 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1294,37 daltons. Exemple 2 : Réalisation d’hydrolysats enrichis en peptide SEQ IP N°1 et/ou SEQ IP N°2 selon l’invention

2a) Hydrolysat de riz enrichi en peptide SEQ IP N°1 et SEQ IP N°2

Cet hydrolysat de riz a été obtenu par hydrolyse enzymatique avec une seule protéinase et présente les caractéristiques suivantes :

- Hydrolysat liquide ayant une teneur en matière sèches de 20,4 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;

- Contenu en azote de 2,5% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;

- Poids moléculaire moyen: 1540g/mol;

- Pistribution : 64,2% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 84,5% des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kPa ;

- Cet hydrolysat a un pH de 4,2 ;

- Cet hydrolysat contient, en poids par rapport au poids sec de l’hydrolysat : le peptide SEQ IP N°1 à la teneur de 0,0031 % et le peptide SEQ IP N°2 à la teneur de 0,0028%.

2b) Hydrolysat de riz enrichi en peptide SEQ IP N°1 et SEQ IP N°2

Cet hydrolysat de riz a été obtenu par hydrolyse enzymatique avec une seule protéinase et présente les caractéristiques suivantes :

- Hydrolysat liquide ayant une teneur en matière sèches de 20,0% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;

- Contenu en azote de 2,6% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;

- Poids moléculaire moyen: 1500g/mol;

- Pistribution : 62,4% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 85,5% des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kPa.

- Cet hydrolysat a un pH de 4,1 ; - Cet hydrolysat contient, en poids par rapport au poids sec de l’hydrolysat : le peptide SEQ ID N° 1 à la teneur de 0,0033% et le peptide SEQ ID N ° 2 à la teneur de 0,0111 %.

2c) Hydrolysat de riz enrichi en peptide SEQ ID N° 1 et SEQ ID N°2

Cet hydrolysat de riz a été obtenu par hydrolyse enzymatique avec une seule protéinase et présente les caractéristiques suivantes :

- Hydrolysat liquide ayant une teneur en matière sèches de 15,5% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;

- Contenu en azote de 2,0% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;

- Poids moléculaire moyen: 1440g/mol;

- Distribution : 61 ,5% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 87,1 % des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kDa.

- Cet hydrolysat a un pH de 4,2 ;

- Cet hydrolysat contient, en poids par rapport au poids sec de l’hydrolysat : le peptide SEQ ID N°1 à la teneur de 0,0016% et le peptide SEQ ID N ° 2 à la teneur de 0,0012%.

Exemple 3 : Mesure du poids moléculaire moyen et des peptides.

Le poids moléculaire moyen défini en Daltons (Da) et la distribution des poids moléculaires sont déterminée par chromatographie d’exclusion stérique.

Afin de déterminer le poids moléculaire moyen et la distribution des poids moléculaires, l'appareil de chromatographie liquide Agilent 1260 Infinity avec pompe binaire et dégazeur a été utilisé en combinaison avec PSS WinGPC UniCh-rom. P55 WinGPC UniChrom est un système de données de chromatographie macromoléculaire avec acquisition de données en temps réel indépendante du fabricant pour une analyse complète des macromolécules, et convient à l'analyse des hydrolysats de protéines. La colonne chromatographique utilisée est une colonne chromatographique spécifique (Superdex Peptide 10/300 GL de GE Healthcare Life Science, largeur de pore 100 A, taille de particule 5 tm) pour la séparation haute résolution des protéines et des peptides. Cette colonne a été choisie car elle est particulièrement bien adaptée pour déterminer des biomolécules de poids moléculaire compris entre 100 et 7 000 daltons. De l'acide chlorhydrique dilué (0,05 M) avec un débit de 0,5 ml / min a été utilisé comme éluant. La détection a été réalisée avec un détecteur d'indice de réfraction (RID).

Les échantillons ont été préparés par filtration sur un filtre de 0,2 pm avant injection.

Analyse des peptides SEQ IP N°1 et SEQ IP N°2 dansl'hydrolysat de protéines de riz.

Entre 5 et 15 mg de l'hydrolysat de protéines de riz ont d'abord été mis en suspension dans de l'acétonitrile / eau (1/ 1 , v / v), puis dilués avec 0,1 % d'acide formique aqueux à une concentration finale de 2 mg mL-1 en protéine de riz et 5% en acétonitrile. Après centrifugation, 100 pL du surnageant ont été mélangés avec une quantité égale de solution standard interne. 20 pl de ce mélange ont été analysés par chromatographie liquide spectrométrie de masse en tandem (LC-MS / MS), avec une limite de détection de 0,00001 % en poids de matières sèches.

La chromatographie liquide a été réalisée en utilisant un gradient de 13 minutes de 0 à 95% d'acétonitrile sur une colonne à phase inverse Aeris 1 ,7 pm Peptide XB-C18 150 x 2,1 mm (Phenomenex) couplée à un spectromètre de masse QTRAP 5500 (AB Sciex). Les pics chromatographiques correspondant aux peptides prédits ont été intégrés en utilisant Skyline version 3.5 (Université de Washington). Des peptides marqués par un isotope avec un résidu d'arginine C-terminal marqué 13C, 15N ont été synthétisés et utilisés comme standards internes et d'étalonnage. La limite de détection (LOD) pour chaque peptide a été estimée en utilisant une approche signal-bruit.

Exemple 4 -Hydrolysat selon l’art antérieur

Un hydrolysat de protéine de riz commercialisé par BASF sous le nom Gluadin R Benz a été étudié quant à sa composition et ses effets sur la peau et les cheveux dans les exemples suivants.

Ce produit hydrolysat de l’art antérieur présent le profil de poids moléculaire suivant :

- Un poids moléculaire moyen de 1430g/mol

- Distribution : 59,6% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 79,6% des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kDa

- Les peptides de SEQ ID N° 1 et SEQ ID N°2 ne sontpas présents dans l’hydrolysat (non détecté au seuil de détection de 0,00001 %)

- Le pH est de 4,3

Ce produit de comparaison a été choisi en raison de sa nature proche en terme de distribution de peptides.

Exemple 5 : Effet d’un produit selon l’invention sur la synthèse d’involucrine

L'involucrine est une protéine synthétisée par les kératinocytes des premières couches épineuses jusqu'à la couche granulaire de l'épiderme humain. Lors de la différenciation des kératinocytes en cornéocytes, l'involucrine est polymérisée avec d'autres protéines pour former l'enveloppe cornifiée déposée sur la face interne de la membrane cellulaire. L'expression de l'involucrine est perturbée dans plusieurs affections cutanées pro-inflammatoires; Plusieurs agents irritants chimiques tels que le SDS (sulfate de dodécyle de sodium) et le DNCB (dinitrochlorobenzène) modifient l'expression de l'involucrine par induction du TNF alpha.

Culture cellulaire et traitement: Des kératinocytes épidermiques humains normaux obtenus à partir de biopsies abdominales de femmes de 26 et 30 ans ont été ensemencés dans un milieu de croissance DMEM (Invitrogen, France) contenant du sérum de veau foetal (Dutscher, France) sur des microplaques revêtues de collagène puis incubés pendant 3 jours à 37° C et5% de CO ₂ .

Puis les cellules ont été à nouveau incubées pendant 3 jours dans du milieu standard contenant du calcium à 1 mM, du TNFoc (Gibco Invitrogen France) à 10 ng/mL et l’hydrolysat selon l'invention de l'exemple 2b, comparativement à l’hydrolysat de protéines de riz de l'exemple 4, ou sans aucun produit (témoin non traité dit Ctrl). La teneur testée est exprimée en poids de matières sèches de l’hydrolysat sur le volume total du milieu comprenant l’hydrolysat.

Quantification d’involucrine

Les couches cellulaires ont été rincées avec une solution saline (dite HBSS pour Hanks balance salts solution) et le taux d’involucrine a été mesuré sur homogénat cellulaire par ELISA (Kit ELISA Human involucrine BT601 , Clinisciences France) selon le protocole du fabricant. Des dosages de MTT cellulaire ont également été effectués en parallèle, pour valider l’absence de cytotoxicité des produits aux doses testées (taux de MTT> 75% versus contrôle).

Tests statistiques :

Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin non traité Ctrl.

Résultats:

Tableau 1 L’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention a stimulé la synthèse d’involucrine par les kératinocytes. A isodose, l’hydrolysat selon l’invention contenant le peptide selon l’invention a été 1 ,3 fois plus efficace que l’hydrolysat de comparaison de l’exemple 4. La présence des peptides SEQ ID n°1 et SEQ ID n°2 expliquent cette différene.

Exemple 6. Effet d’un produit selon l’invention sur la synthèse de filaqqrine

L’effet d’un produit selon l’invention sur la synthèse de filaggrine, marqueur tardif de la différentiation, a été évalué sur un épiderme reconstruit à partir de kératinocytes humains primaires. Après 7 jours de prolifération et différentiation des kératinocytes, l’épiderme reconstruit a été traité ou non (témoin non traité) avec le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b ou le l’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention, puis après 2 jours d’incubation 10 ng/ml de TNFalpha ont été ajouté et l’incubation poursuivie pendant 2 jours. Les épidermes reconstruits ont ensuite été inclus en paraffine et coupés pour immunomarquage de la filaggrine et analyse d’image par microscopie confocale.

Les résultats sont présentés dans la figure 4.

Le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b a stimulé la synthèse de filaggrine par rapport au témoin non traité, et par rapport à l’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention.

Exemple 7 : Test Clinique sur les cheveux et le cuir chevelu

Les effets d’un traitement contenant un hydrolysat enrichi selon l’invention à 2%(p/p) dans la composition shampooing ci-dessous ont été évalués et comparés avec les effets d’un traitement avec un shampoing ne contenant pas l’hydrolysat selon l’invention (dit placebo) dans le cadre d’un test clinique sur volontaires humains. Les compositions testées dans cette étude Clinique sont les suivantes (les pourcentages étant exprimés en poids)

Tableau 2 L’étude a été réalisée sur 44 femmes et hommes volontaires, âgés de 18 à 55 ans, présentant un cuir chevelu sensible et présentant des squames secs parsemés et diffus. Les volontaires ont été répartis en 2 groupes : un groupe a testé la composition selon l’invention sous la forme d’un shampoing contenant l’hydrolysat de riz à 2% (p/p), et le deuxième groupe a testé la composition ne contenant pas l’hydrolysat selon l’invention dit placebo. Le shampooing a été utilisé 3 fois par semaine pendant 21 jours. La capacité à améliorer le confort du cuir chevelu a été évalué par mesure de la rougeur du cuir chevelu (DermoGenius Ultra), du pH du cuir chevelu (pHmètre), du sébum du cuir chevelu (Sébumètre) et par évaluation des squames du cuir chevelu (par un score attribué par un expert). Toutes les mesures et le score clinique ont également été effectués immédiatement après la première application, 1 et 3 semaines après l'utilisation des produits et ensuite 1 semaine après l'arrêt du traitement également (période post-traitement)

L'analyse statistique de l'évolution des paramètres instrumentaux en fonction du temps a été faite après la vérification de la normalité de distribution à l'aide du test de Shapiro-Wilk: versus valeur initiale par test t de Student apparié ou test de Wilcoxon, et pour comparaison entre produits par test t de Student non apparié ou test de Mann-Whitney. Pour la grille des scores, l'évolution du paramètre en fonction du temps a été faite avec le test non paramétrique de Wilcoxon ou test de Mann-Whitney. Le seuil de signification a été fixé à 5% (p <0,05).

Les résultats sont présentés dans les figures 1 à 3.

La première utilisation de shampooing contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% a conduit à une amélioration significative immédiate de la rougeur du cuir chevelu, du pH du cuir chevelu et du score des squames. Le shampooing contenant l'hydrolysat de peptide de riz selon l'invention à 2% a également fourni un effet lavant plus doux sur le cuir chevelu, avec une diminution significative moins importante du taux de sébum du cuir chevelu que le shampoing placebo.

Après une et trois semaines d'utilisation, le shampooing contenant l'hydrolysat de peptide de riz selon l'invention à 2% a significativement diminué la rougeur du cuir chevelu, diminué le pH du cuir chevelu et diminué le score des squames. Le shampooing contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% a également fourni un effet lavant doux sur le cuir chevelu sans modification significative du taux normal de sébum du cuir chevelu après une semaine et 3 semaines d'utilisation, alors que le shampooing placebo a diminué ce taux de sébum du cuir chevelu en même temps.

De manière remarquable, même une semaine après l'arrêt de l'utilisation des shampoings testés, la rougeur du cuir chevelu dans le groupe de volontaires qui a utilisé le shampooing contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% était encore significativement meilleure que celle du groupe placebo, et le pH de leur cuir chevelu était significativement inférieur à celui du groupe de volontaires ayant utilisé le shampoing placebo.

Exemple 8. Etude clinique sur l’hydratation de la peau.

L'effet sur l'hydratation cutanée du traitement avec un hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% (p/p) dans une lotion corporelle a été testé versus un traitement placebo dans une étude clinique sur des volontaires humains. Les compositions des lotions corporelles utilisées étaient les suivantes (pourcentage en poids)

Tableau 3

L'étude a été réalisée sur 24 femmes volontaires, âgées de 40 à 65 ans, ayant la peau sèche sur les jambes. Les volontaires ont appliqué une composition de lotion pour le corps par jambe. Les lotions pour le corps ont été utilisées deux fois par jour pendant 28 jours.

L'efficacité d'hydratation a été évaluée à l'aide du cornéomètre. Les mesures ont été prises à des moments correspondant à la valeur initiale, ainsi qu'à 7, 14 et 28 jours de traitement, et après 7 jours après l’arrêt de l'utilisation du produit (35 jours après la valeur initiale). Un questionnaire d'auto-perception du consommateur a également été rempli par les volontaires à 28 jours.

L'analyse statistique de l'évolution des paramètres instrumentaux en fonction du temps a été faite après la vérification de la normalité de la distribution à l'aide du test de Shapiro-Wilk par test t de Student apparié ou test de rang signé de Wilcoxon. Le seuil de signification a été fixé à 5% (p <0,05). Pour le questionnaire d'auto-perception du consommateur, la différence statistique de fréquences (%) entre les opinions favorables (accord) et défavorables (désaccord) a été évaluée à l'aide du test binomial bilatéral à 5%.

Après une, deux, et quatre semaines d'utilisation, la lotion corporelle contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% a augmenté l'hydratation cutanée significativement par rapport à la lotion corporelle placebo après 2 et 4 semaines d'utilisation.

De manière remarquable, même une semaine après l'arrêt de l'utilisation des compositions, l'hydratation de la peau était encore significativement plus élevée pour la jambe traitée par la lotion corporelle contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, par rapport à la valeur initiale et au placebo.

Après avoir utilisé pendant quatre semaines la lotion corporelle contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, une majorité significative des volontaires ont convenu que leur peau était profondément hydratée, la peau avait l'air nourrie et qu’ils la sentaient nourrie, qu’ils ressentaient que la barrière cutanée sur leur jambe était renforcée, que la peau était visiblement plus lisse et douce, moins rugueuse, apaisée et plus confortable.

Exemple 9 : Formulation d’un ingrédient cosmétique selon l’invention

Un ingrédient cosmétique selon l’invention contient en pourcentage en poids (p/p) :

Acide benzoïque 0,4% en conservateur hydrolysat de riz selon l’exemple 2 20%, eau qsp 100%

Un tel ingrédient selon l’invention est liquide et peut être formulé selon les techniques habituelles connues par l’homme du métier pour la réalisation d’une composition cosmétique.

Exemple 10 : autres avantaqes/propriétés du peptide selon l’invention

10.1 activité anti-élastase : test d’inhibition ELH (Elastase Leucocytaire Humaine)

Le vieillissement des cellules souches des follicules pileux (HFSC) entraîne un vieillissement et une miniaturisation progressive des follicules pileux. Ce vieillissement des follicules pileux est induit par l'élimination trans-épidermique des cellules souches par protéolyse de la protéine hémidesmosomale COL17A1 (collagène BP180 / type XVII). Cette protéolyse des hémidesmosomes, qui ancrent les cellules souches des follicules pileux à la membrane basale, provoque des divisions cellulaires asymétriques de type sénescente et le vieillissement des follicules pileux. Cette protéolyse est déclenchée par l'élastase neutrophile, qui est induite dans les HFSC âgés mais est indétectable chez les jeunes HFSC, entraînant une déplétion de COL17A1 , une miniaturisation ou une perte des follicules pileux et une perte de cheveux liée à l'âge.

Le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b a montré une inhibition significative de l’activité élastase par rapport à un témoin non traité à la dose de 0,1% (p/p), soit 2,2 fois plus efficace que l’hydrolysat de référence de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention.

10.2 activité sur la synthèse de collagène

La synthèse de collagène I déposée a été évaluée selon la méthode décrite dans la demande de brevet WO2012/175454A2.

Le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b a stimulé la synthèse du collagène I de manière significative par rapport à un témoin non traité à la dose de 0,05% (p/p), soit 2,4 fois plus efficace que l’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention.

Exemple 11 : Etude clinique sur la souplesse et la fermeté de la peau

L'étude a été réalisée sur 34 femmes volontaires, âgées de 40 à 65 ans. Les volontaires ont appliqué une composition de type lotion corporelle similaire à celle de l’exemple 7 par côté de l'abdomen. Les lotions corporelles ont été utilisées deux fois par jour pendant 28 jours.

L'effet sur la fermeté a été évaluée à l'aide d’un cutomètre et de l’appareil SkinFibrometer. Après 2 et 4 semaines d'utilisation, la lotion corporelle contenant l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% (p/p) a augmenté la fermeté de la peau, significativement par rapport à la lotion corporelle placebo. L'extensibilité de la peau était également significativement augmentée par rapport au placebo après 28 jours d'utilisation du produit.

De manière remarquable, même une semaine après l'arrêt de l'utilisation des lotions, la fermeté de la peau était encore significativement plus élevée pour le côté de l'abdomen traité par la lotion corporelle contenant l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, par rapport au départ et au placebo.

Après avoir utilisé pendant 4 semaines la lotion corporelle contenant l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, une majorité significative des volontaires ont convenu que leur peau de l'abdomen paraissait plus jeune et était plus confortable. Exemple 12 : Effets du peptide selon l’invention sur l’apparence des cheveux

12.1 ) Sur la structure des fibres kératiniques:

Un hydrolysat selon l’invention a été évalué pour ses propriétés à réparer les cheveux par la méthode DSC (Differential Scanning calorimetry) selon les protocoles classiques.

Le procédé DSC est un procédé d'analyse thermique courant pour mesurer les quantités de chaleur absorbée / émise d'un échantillon lors du chauffage. En raison des différents flux de chaleur entre l'échantillon et la référence pendant le programme de changement de température (vitesse de chauffage), des conclusions peuvent être tirées sur les températures de dénaturation des cheveux traités (échantillon) par rapport aux cheveux non traités (référence). L'appareil DSC TA Instruments Q 100 avec échantillonner automatique a été utilisé. La mesure a été réalisée selon la méthode de F. J. Wortmann et al., De: J. Cosmet. Sei., 2002, 53, 219- 228) avec une vitesse de chauffage de 2 ° C / min. Comme échantillon, des cheveux caucasiens ont été ultra-blanchis, puis traités trois fois, par une solution aqueuse contenant 1 % (exprimée en matière sèche, p/v) de l'hydrolysat de protéines de riz selon l'exemple 2 de l'invention. Un traitement à l’eau seul a été effectué comme témoin négatif.

Les cheveux abîmés qui ont été traités avec l'hydrolysat de protéines de l'invention selon l'exemple 2 démontrent une température de décomposition plus élevée, c'est-à-dire une amélioration de la température de dénaturation des cheveux, qui est attribuée à une amélioration de la structure capillaire.

Tableau 4

12.2) sur la prolifération des fibroblastes de la papille dermique La méthode utilisée est basée sur un modèle 3D de pseudo-papilles de follicule pileux à partir de fibroblastes papillaires dermiques cultivés en agrégats pour évaluer un effet revitalisant sur les follicules pileux et un effet sur l’augmentation de la croissance des cheveux.

Culture et traitement cellulaire:

Le procédé est basé sur l'agrégation de fibroblastes de papilles de cheveux humains par une centrifugation douce d'une suspension de fibroblastes de papilles de cheveux humains. Des fibroblastes dermiques humains ont été préparés sous forme de suspension en milieu basal contenant le peptide de riz sous forme de l’hydrolysat selon l'invention de l'exemple 2c, comparativement à l’hydrolysat de protéines de riz de l'exemple 4, ou sans aucun produit (témoin non traité), et transférés sur des microplaques à 96 puits. Les suspensions cellulaires ont été centrifugées pendant 5 minutes à 200 g puis les agrégats formés ont été incubés pendant 5 jours à 37 ° C, CO2 à 5% et humidté relative de plus de 95%.

Quantification d'ADN

Les agrégats ont été rincés par une solution saline équilibrée (PBS) puis disloqués par incubation pendant environ 1 heure avec un mélange de protéases (Collagénase A, Trypsine) avec de l’EDTA. Ensuite, une partie des suspensions cellulaires a été centrifugée et les culots ont été récupérés pour mesurer le niveau d'ADN (acide nucléique désoxyribose). L'ADN a été mesuré sur cellule solubilisée dans un tampon spécifique selon les recommandations du fabricant du kit (Kit CyQUANT NF Cell Proliferation Assay, Invitrogen, France).

Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin non traité et exprimés en moyenne.

Résultats: Tableau 5

Le peptide selon l'invention sous la forme d’un hydrolysat selon l’invention a stimulé la teneur totale en ADN dans les fibroblastes de pseudo-papilles par rapport au témoin non traité et à l'hydrolysat de protéine de riz de référence (exemple 4). A la même dose de 0,01 % (poids sec), Le peptide selon l'invention sous la forme d’un hydrolysat selon l’invention était 5 fois plus efficace que l'hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4.

Exemple 13 :Exemples de formulation O/W polymer gel

Tableau 6

Les formulations appropriées sont également celles décrites dans la demande de brevet BASF US20190216709 exemples B3 à B9, en remplaçant le peptide de l’exemple 2 par l’hydrolysat selon l’invention décrit dans l’exemple 2a). Les peptides utilisés dans le cadre de l’invention sont rassemblés dans le tableau 7 ci -après :

Tableau 7