ССЫЛКА НА ПРЕДВАРИТЕЛЬНУЮ ЗАЯВКУ

[0001] Эта заявка испрашивает приоритет и преимущество предварительной заявки на патент США с серийным номером 62/966715, поданной 28 января 2020 г., предмет которой включен в настоящий документ посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0002] Настоящее изобретение относится к стабильным фармацевтическим композициям, которые содержат по меньшей мере один пептид, его производное, аналог или фармацевтически приемлемую соль, а также сокристаллы этих пептидов, его производных или аналогов. В частности, настоящее описание относится к стабильным при хранении фармацевтическим композициям и способам получения таких композиций. Композиции особенно подходят для парентерального введения и для лечения боли.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Группа синтетических низкомолекулярных пептидов с ненаркотическим типом обезболивания общей формулы 1 [SEQ ID NO: 1- 144] и 2 [SEQ ID NO: 145-288], именуемые далее «разработанные синтетические пептиды», была получена путем модификации минимального фрагмента молекулы кальцитонина лосося SCT16-21, который сохраняет показанную ранее анальгетическую активность полноразмерной молекулы [1].

[0004] Было установлено, что разработанные синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия, эффективные при различных способах парентерального введения (субокципитальном, внутримышечном, интраназальном и внутривенном) на различных моделях тонической и острой боли, являются специфическими ингибиторами клатрина [2].

[0005] Ингибирование функции клатрина имеет важную роль в профилактике или лечении целого ряда заболеваний и состояний, перечень которых включает, но не ограничивается ими, клеточно- пролиферативные заболевания и состояния, мультифокальную лейкоэнцефалопатию, поликистозные заболевания почек, заболевания, связанные с b-амилоидом (такие, как болезнь Альцгеймера), нейродегенеративные расстройства, нейропсихиатрические расстройства, психотические расстройства, психозы, биполярные расстройства, шизофрению, аберрантное нерегулируемое возбуждение нейронов, судороги, нейропатическую боль, мигрень, а также все заболевания и состояния, опосредованные или иным образом связанные с передачей синаптического сигнала с вовлечением процессов клатрин- опосредованного эндоцитоза (СМЕ) (например, таких как эпилепсия) или с нарушением рециркуляции клеточных везикул. Список заболеваний и состояний, при которых ингибирование функции клатрина играет ключевую роль, указан ранее в патенте [2], содержание таблицы 1 которого полностью включено в настоящий документ посредством ссылки во всей полноте.

[0006] Также было показано, что разработанные синтетические пептиды более эффективно снижают проявления признаков боли, чем кеторолака трометамин, который сопоставим с морфином по анальгетической активности и значительно превосходит другие НПВП [3].

[0007] Однако фармацевтические композиции на основе пептидов по своей природе нестабильны из-за чувствительности к химической (например, окисление или гидролиз) и физической (например, агрегация, осаждение или адсорбции на поверхности) деградации [4].

[0008] Такая подверженность деградации при длительном хранении при комнатной температуре приводит к тому, что рекомендуемые условия хранения для коммерчески доступного продукта требуют хранения в холодовой цепи с поддержанием температурного диапазона в пределах от 2° С до 8° С. Эти специальные требования к хранению, таким образом, приводят к увеличению стоимости конечного продукта, когда он достигает конечного потребителя.

[0009] В частности, фиг. 1 показывает, что без специальных мер по обеспечению стабильности фармацевтическая композиция, содержащая один из вышеупомянутых «разработанных синтетических пептидов», разлагается в течение четырех месяцев хранения при температуре 25 ° С.

[0010] Существует потребность в разработке стабильных и пригодных для хранения фармацевтических композиций, предназначенных преимущественно для парентерального введения, которые содержат разработанные синтетические пептиды или их производные, или их аналоги, или фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы этих пептидов, их производных и аналогов, а также способ получения таких композиций.

[ООН] Поскольку свойства пептидных молекул сильно зависят от их структуры, а семейство «разработанных синтетических пептидов» было получено авторами настоящего изобретения впервые, информация о стабильности фармацевтических композиций именно с такими пептидами при хранении в помещении температура была неизвестна.

[0012] В патентной публикации [5] предлагается жидкая фармацевтическая композиция, содержащая пептид кальцитонин в качестве активного ингредиента и специфические концентрации лимонной кислоты или ее соли в качестве стабилизатора и усилителя абсорбции. Однако «разработанные синтетические пептиды» отличаются от пептидов, указанных в упомянутой патентной публикации. Кроме того, условия стабильности фармацевтической композиции в публикации [5] не предусматривают хранение в течение как минимум четырех месяцев при комнатной температуре. [0013] В патентной публикации [6] предлагается стабильная, неводная и готовая к применению инъекционная композиция пептидного лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла, содержащая пептидное лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль или сокристалл и неводную систему растворителей. Однако физиологическая приемлемость неводных растворителей обычно ниже, чем у водных, и поэтому предпочтительным растворителем является вода с добавлением или без добавления органических растворителей [7]. Кроме того, условия стабильности фармацевтической композиции в публикации [6] не предусматривают хранение в течение как минимум четырех месяцев при комнатной температуре.

[0014] В патентной публикации [8] предлагается водная парентеральная фармацевтическая композиция для улучшения стабильности полипептида, содержащая полипептид и глицерин. Однако условия стабильности фармацевтической композиции, указанные в публикации [8], не предусматривают хранение в течение как минимум четырех месяцев при комнатной температуре.

[0015] Имеются многочисленные примеры других способов, которые используются для увеличения стабильности и улучшения условий хранения пептидных фармацевтических композиций. Все они обладают теми или иными недостатками, которые сужают возможности их применения в медицине.

[0016] В данной области существует потребность в стабильных при хранении фармацевтических композициях, в основном предназначенных для парентерального введения, которые содержат разработанные синтетические пептиды или их производные, или их аналоги, или фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы этих пептидов, их производных и аналогов. Кроме того, в данной области техники существует потребность в способе получения таких стабильных при хранении фармацевтических композиций.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0017] Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что можно разработать стабильную при хранении в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере один активный фармацевтический ингредиент, выбранный из группы, которая содержат разработанные синтетические пептиды или их производные, или их аналоги, или фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы этих пептидов, их производных и аналогов, и фармацевтически приемлемый носитель, причем композиция может не включать специальные стабилизаторы.

[0018] В частности, авторы настоящего изобретения обнаружили, что такая стабильная фармацевтическая композиция, которая содержит описанные здесь пептиды, может быть получена путем

[0019] а) с использованием фармацевтически приемлемого носителя, полностью состоящего из растворителя, при этом композиция сохраняет по меньшей мере 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после стерилизации паром;

[0020] Ь) с использованием фармацевтически приемлемого носителя, содержащего конкретный растворитель и, помимо растворителя, по меньшей мере, еще один ингредиент, где по меньшей мере один или несколько ингредиентов представляют собой агент, регулирующий pH; агент, поддерживающий изотоничность; консервант; хелатирующий агент; антиоксидант; поверхностно-активное вещество; загущающий агент или усилитель абсорбции;

[0021] с) с использованием комбинации методов а) и б) в зависимости от структуры пептида - активного ингредиента. [0022] Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что полученная фармацевтическая композиция может оставаться стабильной, когда ее подвергают условиям стабильности, и может храниться при комнатной температуре в течение периода хранения по меньшей мере четыре месяца и может избежать необходимости хранения в холодовой цепи.

[0023] Изобретатели также предложили простой и экономичный способ получения стабильных при хранении фармацевтических композиций.

[0024] В одном аспекте настоящее изобретение относится к стабильной при хранении фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере один активный фармацевтический ингредиент, который выбирают из пептидов общей формулы 1 [SEQ ID N: 1-144] или пептидов общей формулы 2 [SEQ ID NO: 145-288], или их производных, или их аналогов, или фармацевтически приемлемых солей и сокристаллов названных пептидов, их производных и аналогов, а также фармацевтически приемлемый носитель, где композиция сохраняет по меньшей мере 80% активности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после хранения в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре.

[0025] В другом общем аспекте предлагается стабильная при хранении фармацевтическая композиция, которая содержит разработанные синтетические пептиды или их производные или их аналоги или фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы названных пептидов, их производных и аналогов, и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что при хранении в течение по меньшей мере четырех месяцев при 25° С в закрытых ампулах общее количество родственных веществ не превышает 15 % (масс) от содержания активного фармацевтического ингредиента. [0026] В одном варианте осуществления, например и без ограничения, фармацевтически приемлемый носитель содержит растворитель и агент, регулирующий pH, и имеет pH 5,0 ± 0,1. В другом варианте осуществления, например и без ограничения, фармацевтически приемлемый носитель содержит растворитель; агент, регулирующий pH; агент, поддерживающий изотоничность; консервант; хелатирующий агент; антиоксидант; поверхностно-активное вещество; загущающий агент; усилитель абсорбции и имеет pH 3,7 ± 0,1. В другом варианте осуществления, например и без ограничения, стерилизованный паром фармацевтически приемлемый носитель содержит только растворитель и имеет pH 7,0 ± 0,1. В другом варианте осуществления, например и без ограничения, фармацевтически приемлемый носитель содержит растворитель, регулирующий pH; агент, поддерживающий изотоничность и имеет pH 4,0 ± 0,1.

[0027] В дополнительном аспекте предлагается стабильная при хранении фармацевтическая композиция, содержащая разработанные синтетические пептиды или их производные или их аналоги, или фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы вышеуказанных пептидов, их производных и аналогов, и фармацевтически приемлемый носитель. В одном варианте осуществления, например и без ограничения, композиция сохраняет по меньшей мере 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после стерилизации паром. В другом варианте осуществления, например, и без ограничения, общее количество родственных веществ в композиции не превышает 15 % (масс) от содержания активного фармацевтического ингредиента после стерилизации паром.

[0028] В еще одном аспекте предоставляется стабильная при хранении фармацевтическая композиция, содержащая разработанные синтетические пептиды или их производные или их аналоги или фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы вышеуказанных пептидов, их производных и аналогов, и фармацевтически приемлемый носитель, при этом производное представляет собой пептид из пяти- четырнадцати аминокислотных остатков, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 50% идентичность аминокислотной последовательности по длине относительно аминокислотной последовательности пептидов общей формулы 1 [SEQ ID NO: 1-144 ] или 2 [SEQ ID NO: 145-288], который сохраняет активность пептида и / или взаимодействует с одним и тем же специфическим рецептором, и может отличаться от этих последовательностей усечением, делецией, заменой, добавлением или модификацией одной или нескольких выбранных аминокислот из встречающейся в природе аминокислоты, природной небелковой аминокислоты, неприродной аминокислоты или модифицированного или необычного аминокислотного остатка .

[0029] В другом аспекте предлагается стабильная при хранении фармацевтическая композиция, которая содержит разработанные синтетические пептиды или их производные или их аналоги или фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы названных пептидов, их производных и аналогов, и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель включает растворитель, который выбран из группы, состоящей из воды, этиленгликоля, пропиленгликоля, дипропиленгликоля, трипропиленгликоля, полиэтиленгликоля, метоксипропиленгликоля, полиэтиленоксида, этанола, пропилового спирта, изопропилового спирта, бензилового спирта, бензилбензоата, гликофурола или их комбинации.

[0030] В некоторых вариантах осуществления изобретения, например и без ограничения, фармацевтически приемлемый носитель полностью состоит из растворителя, который выбран из группы, состоящей из воды, этиленгликоля, пропиленгликоля, дипропиленгликоля, трипропиленгликоля, полиэтиленгликоля, метоксипропиленгликоля, полиэтиленоксида, этанола, пропилового спирта, изопропилового спирта, бензилового спирта, бензилбензоата, гликофурола или их комбинации. В конкретных вариантах осуществления, когда фармацевтически приемлемый носитель полностью состоит из растворителя, стабильность при хранении, как раскрыто в настоящем документе, достигается стерилизацией паром.

[0031] В некоторых вариантах осуществления изобретения, например, и без ограничения, фармацевтически приемлемый носитель содержит по меньшей мере еще один ингредиент, где один или несколько ингредиентов представляют собой агент, регулирующий pH; агент, поддерживающий изотон ичность; консервант; хелатирующий агент; антиоксидант; поверхностно-активное вещество; загущающий агента или усилитель абсорбции.

[0032] В другом аспекте предлагается стабильная при хранении фармацевтическая композиция, в которой pH составляет от примерно 2,0 до примерно 11,0. В одном варианте осуществления изобретения, например, и без ограничения, стабильная при хранении фармацевтическая композиция имеет pH от примерно 2,0 до примерно 9,0. В другом варианте осуществления изобретения, например и без ограничения, стабильная при хранении фармацевтическая композиция имеет pH от примерно 2,5 до примерно 7,0. В другом варианте осуществления изобретения, например, и без ограничения, стабильная при хранении фармацевтическая композиция имеет pH от примерно 3,0 до примерно 7,0. В другом варианте осуществления изобретения, например, и без ограничения, стабильная при хранении фармацевтическая композиция имеет pH от примерно 3,0 до примерно 5,0. В другом варианте осуществления изобретения, например, и без ограничения, стабильная при хранении фармацевтическая композиция имеет pH около 4,0.

[0033] В другом аспекте предлагается стабильная при хранении фармацевтическая композиция, в которой концентрация активного фармацевтического ингредиента находится в диапазоне от 1 мкг/мл до 500 мг/мл.

[0034] В другом аспекте предлагается стабильная при хранении фармацевтическая композиция, в которой активный фармацевтический ингредиент присутствует в количестве, достаточном для уменьшения числа проявлений признаков боли, когда фармацевтическую композицию вводят субъекту, нуждающемуся в этом.

[0035] В другом общем аспекте предлагается способ лечения от умеренной до умеренно сильной боли, которая требует обезболивания на уровне опиоидов у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту стабильной при хранении фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере, один активный фармацевтический ингредиент, который выбирают из пептидов общей формулы 1 [SEQ ID NO: 1 -144] или 2 [SEQ ID NO: 145-288], или их производных или их аналогов или фармацевтически приемлемых солей и сокристаллов названных пептидов, их производных и аналогов, и фармацевтически приемлемый носитель, где композиция сохраняет по меньшей мере 80% активности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после хранения в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре.

[0036] Также предполагается использование активных фармацевтических ингредиентов, раскрытых в данном документе.

[0037] В некоторых вариантах реализации предлагается способ приготовления стабильной при хранении фармацевтической композиции, в котором способ включает, но не ограничивается, стадию стерилизации паром, которая обеспечивает улучшенную стабильность.

[0038] В некоторых вариантах реализации предлагается способ приготовления стабильной при хранении фармацевтической композиции, включающий, помимо прочего, следующие стадии: [0039] (а) приготовление фармацевтически приемлемого носителя,

[0040] (b) добавление в носитель по крайней мере одного активного фармацевтического ингредиента;

[0041] (с) необязательно добавление по меньшей мере еще одного ингредиента, выбранного из группы, состоящей из агента, регулирующий pH; агента, поддерживающий изотоничность; консерванта; хелатирующий агента; антиоксиданта; поверхностно-активного вещества; загущающего агента или усилителя абсорбции;

[0042] (d) наполнение фармацевтической композицией подходящего контейнера;

[0043] (е) стерилизацию паром.

[0044] Подробности одного или нескольких вариантов осуществления изобретения изложены в описании ниже. Другие особенности, цели и преимущества изобретения будут очевидны из описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

[0045] Приведенные здесь с иллюстративными целями фигуры показывают примерные варианты осуществления изобретения, в том числе:

[0046] Фигура 1 представляет собой хроматограмму композиции, аналогичной фармацевтической композиции N? 1, но без специальных мер для обеспечения стабильности, после приготовления (А) и после четырех месяцев хранения при комнатной температуре 25 ° С (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после четырех месяцев хранения составило 50,1% от исходного значения, количество сопутствующих примесей превышает 49%;

[0047] Фигура 2 представляет собой хроматограмму стерилизованной паром фармацевтической композиции N? 1 после приготовления (А) и после четырех месяцев хранения при комнатной температуре 25 ° С (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после четырех месяцев хранения составило 98,3% от исходного значения, количество сопутствующих примесей не превышало 1,5%;

[0048] Фигура 3 представляет собой хроматограмму фармацевтической композиции N? 2 после приготовления (А) и после четырех месяцев хранения при комнатной температуре 25 ° С (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после четырех месяцев хранения составило 97,7% от исходного значения, количество родственных примесей не превышало 2,0%;

[0049] Фигура 4 представляет собой хроматограмму фармацевтической композиции N? 3 после приготовления (А) и после стерилизации паром (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после стерилизации паром составило 97,1% от исходного значения, количество сопутствующих примесей не превышало 2,7%.

[0050] На Фигуре 5 показаны значения порога возбуждения болевых рецепторов пульпы зуба у животных, приводящие к соответствующему уровню поведенческой реакции, через 60 минут после субокципитального введения физиологического раствора (К), трамадола гидрохлорида в дозе 12 мг / кг (R), фармацевтической композиции 7 в дозе 180 мкг / кг (Т1), фармацевтической композиции 8 в дозе 180 мкг / кг (Т2), фармацевтической композиции 9 в дозе 180 мкг / кг (ТЗ) , для клыка (А) и моляра (Б) соответственно (I; II; III - уровни проявления болевой реакции).

[0051] Аналогичная нумерация ссылок может использоваться на других фигурах для обозначения подобных компонентов. ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

[0052] Следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, хотя и указывают варианты осуществления изобретения, даны только в качестве иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в пределах сущности и объема изобретения станут очевидными для специалистов в данной области техники. Специалист в данной области, основываясь на приведенных здесь определениях, может использовать настоящее изобретение в полной мере. Следующие конкретные варианты осуществления должны быть истолкованы как просто иллюстративные и никоим образом не ограничивающие остальную часть раскрытия.

[0053] Если не указано иное, все термины, используемые в данном документе, включая технические и научные термины, имеют значение, обычно понимаемое специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение.

[0054] Для целей раскрытия ниже перечислены определения различных терминов, используемых для описания настоящего изобретения. Если не указано иное, эти определения применяются к терминам, используемым в описании и прилагаемой формуле изобретения, по отдельности или в составе большей группы. Они не должны интерпретироваться в буквальном смысле. Они не являются общими определениями и актуальны только для данного изобретения.

[0055] Следует отметить, что, как используется в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа "а", "ап" и "the" включают множественные ссылки, если содержание явно не предписывает иное. [0056] Следует отметить, что термин «или» обычно используется в его значении, включающем «и / или», если содержание явно не предписывает иное.

[0057] Используемый здесь термин «примерно» означает приблизительно, а в контексте числовых значений термин «около» может быть истолкован для оценки значения, которое составляет + 10% от указанного значения или диапазона.

[0058] Используемый здесь термин «фармацевтическая композиция» или «композиция» относится к одной стандартной дозе или множественной дозе активного фармацевтического ингредиента и фармацевтически приемлемого носителя, которые могут быть получены способами, описанными в одном или нескольких вариантах осуществления настоящего изобретения.

[0059] Для целей настоящего изобретения фармацевтическую композицию предпочтительно помещают в подходящий контейнер. Этот контейнер также может быть частью устройства, в котором фармацевтическую композицию приготавливают непосредственно перед введением пациенту.

[0060] Состав фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть выбран из группы, которая включает, но не ограничивается ими: раствор, суспензию, сироп, жидкость, гель, гидрогель, эмульсию, липосому, аэрозоль, туман, пленку, полимер, имплантат или состав с замедленным высвобождением.

[0061] Способ введения субъекту фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть выбран из группы, которая включает, но не ограничивается ими: трансдермально, внутривенно, кожно, подкожно, назально, ингаляционно, внутримышечно, внутрибрюшинно, перорально, внутричерепно или субокципитально. [0062] В некоторых вариантах осуществления композицию вводят субъекту один раз в день, два раза в день, три раза в день или чаще. В других вариантах осуществления изобретения вводят через день или реже.

[0063] Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый» означает подходящий для нормального фармацевтического применения, то есть не вызывающий побочных эффектов у пациентов.

[0064] Используемый здесь термин "носитель" относится к фармацевтически приемлемому веществу, который можно вводить пациенту вместе с активным фармацевтическим ингредиентом по данному изобретению и который не снижает его фармакологическую активность.

[0065] Используемый здесь термин «стабильный при хранении» или «стабильный» означает, что, когда фармацевтическая композиция хранится при комнатной температуре (25 ° С) в закрытых флаконах в течение продолжительного периода времени, например четырех месяцев, нет существенного изменения в профиле растворения и/или терапевтически эффективном количестве активного фармацевтического ингредиента и/или указанная композиция обладает хроматографической чистотой, когда идентифицированные примеси находятся в допустимых пределах.

[0066] В частности, как известно специалисту в данной области, стабильными считаются пептидные композиции, когда через четыре месяца хранения при температуре 25° С или, что эквивалентно, через два месяца хранения при температуре 37° С, остается, по меньшей мере, приблизительно 65% химически и физически стабильного активного фармацевтического ингредиента [9, 10].

[0067] Термин «химическая стабильность» означает, что процент продуктов разложения, образованных химическими путями, такими как окисление или гидролиз, является приемлемым. В частности, препарат считается химически стабильным, если после четырех месяцев хранения при температуре 25 ° С или, что то же самое, после двух месяцев хранения при температуре 37 ° С, общее количество продуктов распада в композиции не превышает 20 % (масс) от содержания активного фармацевтического ингредиента.

[0068] Термин «физическая стабильность» означает, что процентное содержание фибрилл и агрегатов является приемлемым. В частности, лекарственное средство считается физически стабильным, если после четырех месяцев хранения при температуре 25 ° С или, что то же самое, после двух месяцев хранения при температуре 37 ° С, общее количество фибрилл и агрегатов в композиции не превышает 15% (масс) от содержания активного фармацевтического ингредиента.

[0069] Изменение содержания химически и физически стабильного активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции приводит к соответствующему изменению эффективности (специфической активности) этого активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции и соответствующему изменению терапевтически эффективного количество фармацевтической композиции.

[0070] Используемый здесь термин «терапевтически эффективное количество» или «терапевтически эффективная доза» означает количество фармацевтической композиции, которое при введении субъекту для лечения заболевания, расстройства или другого нежелательного патологического состояния является достаточным для того, чтобы обеспечить положительный эффект в отношении заболевания, расстройства или состояния.

[0071] Особенно предпочтительными являются пептидные композиции, которые сохраняют, по меньшей мере, около 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после четырех месяцев хранения при 25 ° С. Еще более предпочтительными являются пептидные композиции, которые сохраняют, по меньшей мере, около 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после стерилизации паром. Также более предпочтительными являются пептидные композиции, в которых общее количество родственных веществ не превышает 15 % (масс) содержания активного фармацевтического ингредиента после стерилизации паром.

[0072] Изобретение относится к стабильной при хранении фармацевтической композиции, которая включает по меньшей мере один активный фармацевтический ингредиент, как определено выше, и фармацевтически приемлемый носитель, где композиция сохраняет по меньшей мере 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после хранения в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре. В одном варианте осуществления, например и без ограничения, композиция сохраняет по меньшей мере 85% активности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после хранения в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре. В другом варианте осуществления, например и без ограничения, композиция сохраняет по меньшей мере 90% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после хранения в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре. В другом варианте осуществления, например и без ограничения, композиция сохраняет по меньшей мере 95% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после хранения в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре.

[0073] Изобретение также относится к стабильной при хранении фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере один активный фармацевтический ингредиент, как определено выше, и фармацевтически приемлемый носитель, где при хранении при 25° С в закрытых ампулах в течение по меньшей мере четырех месяцев общее количество родственных веществ в композиции не превышает 15 % (масс) содержания активного фармацевтического ингредиента. В одном варианте осуществления, например, и без ограничения, общее количество родственных веществ в композиции не превышает 10 % (масс) содержания активного фармацевтического ингредиента. В другом варианте осуществления, например и без ограничения, общее количество родственных веществ в композиции не превышает 5 % (масс) содержания активного фармацевтического ингредиента.

[0074] Термин «родственные вещества» означает вещества, структурно родственные активному фармацевтическому ингредиенту. Эти вещества могут быть продуктами разложения или примесями, возникающими в процессе производства или во время хранения фармацевтической композиции.

[0075] В конкретном варианте осуществления, например и без ограничения, Пример N? 2 иллюстрирует рецептуры стабильных при хранении фармацевтических композиций, хотя специалист в данной области может предоставить другие составы.

[0076] В частности, в одном варианте осуществления, например, и без ограничения, описание относится к стабильной при хранении фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере один активный фармацевтический ингредиент, как определено выше, и фармацевтически приемлемый носитель, где композиция сохраняет по меньшей мере 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после стерилизации паром. Также, в варианте осуществления, например, и без ограничения, описание относится к стабильной при хранении фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере один активный фармацевтический ингредиент, как определено выше, и фармацевтически приемлемый носитель, где общее количество родственных веществ в композиции не превышает 15 % (масс) содержания активного фармацевтического ингредиента после стерилизации паром.

[0077] Используемый здесь термин «стерилизация паром» относится к процессу приготовления стерильных фармацевтических композиций в паровых стерилизаторах (автоклавах), в которых стерилизующий агент представляет собой насыщенный водой пар под избыточным давлением и повышенной температурой. Режимы стерилизации хорошо известны специалистам в данной области и относятся к водным растворам и другим жидким лекарственным формам в герметично закрытых флаконах, например, 8-45 минут при температуре 120-132 ° С и давлении 120-220 кПа. В одном варианте осуществления, например, без ограничения, стерилизацию проводят в течение 30 минут при температуре 125 ° С и давлении 140 кПа. В другом варианте осуществления, например, и без ограничения, стерилизация выполняется в течение 40 минут при температуре 120 ° С и давлении 130 кПа. В другом варианте осуществления, например и без ограничения, стерилизацию проводят в течение 20 минут при температуре 132 ° С и давлении 200 кПа.

[0078] Используемый здесь термин «стерильная фармацевтическая композиция» означает композицию, в которой большинство микроорганизмов и их спор было уничтожено и которая соответствует критериям стерилизации, изложенным в Фармакопее США.

[0079] В конкретном варианте осуществления фармацевтическая композиция, которая содержит гексапептид H-Leu-D-His-Lys-Leu-Gln-Thr- Nhh (SEQ ID NO: 8) и фармацевтически приемлемый носитель, сохраняет по меньшей мере 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции, и общее количество родственных веществ в композиции не превышает 15 % (масс) содержания активного фармацевтического ингредиента, после стерилизации паром (пример N?4) с режимами стерилизации 20 минут при температуре 132 ° С и давлении 220 кПа. Другие режимы стерилизации очевидны для специалистов в данной области и должны быть включены в объем настоящего изобретения.

[0080] Для целей настоящего изобретения стабильная при хранении фармацевтическая композиция может содержать активный фармацевтический ингредиент в концентрации в диапазоне от 1 мкг / мл до 500 мг / мл. Предпочтительно стабильная при хранении фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит активный фармацевтический ингредиент в количестве, достаточном для уменьшения количества симптомов боли, когда фармацевтическая композиция вводится субъекту, нуждающемуся в этом.

[0081] В конкретном варианте осуществления пример N? 2 иллюстрирует составы стабильных при хранении фармацевтических композиций, хотя специалист в данной области может предоставить другие составы.

[0082] Используемый здесь термин «субъект» относится к животному, предпочтительно млекопитающему и наиболее предпочтительно человеку. В контексте настоящего изобретения термин «субъект» используется взаимозаменяемо с термином «пациент». В контексте настоящего изобретения фраза «субъект, нуждающийся в этом» означает субъекта (пациента), нуждающегося в лечении одного или нескольких заболеваний, состояний или расстройств (как описано в настоящем документе), для которых пептидное лекарственное средство может быть подходящим образом использовано.

[0083] Используемый здесь термин «пептид» используется в самом широком смысле для обозначения последовательности субъединичных аминокислот. Пептиды по изобретению могут содержать L-аминокислоты, D-аминокислоты (которые устойчивы к L-аминокислот-специфическим протеазам in vivo) или комбинацию D- и L-аминокислот. Описанные здесь пептиды могут быть химически синтезированы или рекомбинантно экспрессированы. Пептиды могут быть связаны с другими соединениями для стимулирования увеличенного периода полужизни in vivo, такими как пегилирование, HES-илирование, PAS-илирование, гликозилирование, или могут быть получены в виде Fc-слияния или в деиммунизированных вариантах. Такая связь может быть ковалентной или нековалентной, как понятно специалистам в данной области.

[0084] Пептиды также могут быть связаны с другими молекулами. Пептид и молекула могут быть связаны непосредственно друг с другом (например, через пептидную связь); связаны через линкерную молекулу, которая может быть или не быть пептидом; или косвенно связаны друг с другом, например, связью с общей молекулой-носителем.

[0085] Используемый здесь термин «аминокислота» означает органическое соединение, содержащее как основную аминогруппу, так и кислотную карбоксильную группу. В этот термин включены природные аминокислоты (например, L-аминокислоты), модифицированные и необычные аминокислоты (например, D-аминокислоты), а также аминокислоты, которые, как известно, встречаются биологически в свободной или комбинированной форме, но обычно не встречаются в белках. В этот термин включены модифицированные и необычные аминокислоты, такие как те, которые описаны, например, в [11], описание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.

[0086] Природные белковые аминокислоты включают, но не ограничиваются ими, аланин, аргинин, аспарагин, аспарагиновую кислоту, цистеин, глутаминовую кислоту, глютамин, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, серин, треонин, тирозин, тирозин, триптофан, пролин и валин. Природные небелковые аминокислоты включают, но не ограничиваются ими, аргинино-янтарную кислоту, цитруллин, цистеинсульфиновую кислоту, 3,4-дигидроксифенилаланин, гомоцистеин, гомосерин, орнитин, 3-моноиодтирозин, 3,5-дийодтирозин, 3,5,5 ' - трийодтиронин и 3, 3 ', 5,5'-тетрайодтиронин. Модифицированные или необычные аминокислоты (все L-конфигурации, кроме указанных), которые можно использовать для практического применения изобретения, включают, но не ограничиваются ими, D-аминокислоты, N- метилглутаминовую кислоту (NMeGlu), D-серин (DSer), алло-треонин (AlloThr), гидроксипролин (Hyp), орнитин (Orn), D-аспарагин (DAsn), метиловый эфир глутаминовой кислоты (GluOMe), норлейцин (Nle), норвалин (Nva), 1-аминоциклогексил карбоновая кислота (Chex), изоглутамин (IsoGIn), b-аланин (PAIa), б-амино-гексановая кислота (Aha), фенилглицин, бета-фен ил п рол ин, трет-лейцин, 4- аминоциклогексилаланин, N-метилнорлейцин, 3,4-дегидропролин, N, N- диметиламиноглицин, N-метиламиноглицин, 4-аминопиперидин-4- карбоновая кислота, б транс-4- (аминометил) - циклогексанкарбоновая кислота, 2-, 3- и 4- (аминометил) бензойная кислота, 1- аминоциклопентанкарбоновая кислота, 1-аминоциклопропанкарбоновая кислота и 2-бензил-5-аминопентановая кислота.

[0087] Термин «неприродная аминокислота» может использоваться для обозначения аминокислоты, которая не существует сама по себе в природе, а скорее была синтезирована или создана человеком. Примеры неприродных аминокислот включают, но не ограничиваются ими, йодированный тирозин, метилированный тирозин, гликозилированный серин, гликозилированный треонин, азетидин-2-карбоновую кислоту, 3,4- дегидропролин, пертиапролин, канаванин, этионин, норлейцин, селенометионин, аминогексановая кислота, теллурометионин, гомоаллилглицин и гомопропаргилглицин.

[0088] Термин «производный» или «модифицированный пептид», используемый в настоящем описании, относится к пептиду длиной от пяти до четырнадцати аминокислотных остатков, содержащему аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 50% идентичность аминокислотной последовательности по своей длине относительно аминокислотной последовательности пептидов общей формулы 1 [SEQ ID NO: 1 -144] или 2 [SEQ ID NO: 145-288], который сохраняет анальгетическую активность и может отличаться от этих последовательностей усечением, делецией, заменой, добавлением или модификацией одной или нескольких аминокислот, выбранных из встречающейся в природе аминокислоты, природной небелковой аминокислоты, неприродной аминокислоты или модифицированного или необычного аминокислотного остатка, как известно специалисту в данной области.

[0089] Модифицированные пептиды могут включать консервативные замены. Используемый здесь термин «консервативная аминокислотная замена» означает аминокислотную или нуклеиновую кислоту, которая не изменяет или существенно не изменяет пептидную или полинуклеотидную функцию или другие характеристики. Данная аминокислота может быть заменена остатком, имеющим сходные физико-химические характеристики, например, заменяя один алифатический остаток другим (таким как Не, Val, Leu или Ala друг на друга) или заменой одного полярного остатка другим (таким как между Lys и Arg; Glu и Asp или Gin и Asn). Другие такие консервативные замены, например замены целых областей, имеющих сходные характеристики гидрофобности, хорошо известны. Пептиды, содержащие консервативную аминокислотную замену можно тестировать в любом из описанных здесь анализов, чтобы подтвердить, что желаемая активность сохраняется.

[0090] Модифицированный пептид также может быть получен путем добавления одного или нескольких компонентов на N- и/или С-конце пептида. Например, пептиды могут быть модифицированы для добавления метки, такой как FITC на С-конце и / или N-конце, с или без линкера, такого как аминогексановая кислота; Ahx. Пептиды могут также включать функциональный компонент на одном или обоих концах пептида. Например, функциональный компонент может включать нацеливающий пептид или домен, такой как антитело или фрагмент антитела, транслокационный пептид или домен, такой как трансактиватор транскрипционного (ТАТ) пептида или пептид или домен стабилизации, с линкером или без него. В частности, N- и / или С-конец модифицированных пептидов может быть необязательно защищен от протеолиза. Например, N-конец может быть в форме ацетильной группы, и / или С-конец может быть в форме амидной группы.

[0091] Термин «транслокационный пептид» или «транслокационный домен» относится к любой последовательности аминокислот, которая направляет пептид, в котором он присутствует, к желаемому клеточному назначению. Например, домен транслокации, такой как последовательность полиаргинина, может направлять или облегчать проникновение пептида через биологическую мембрану, например, фосфолипидную мембрану, митохондриальную мембрану или ядерную мембрану. Например, последовательность транслокации направляет пептид снаружи клетки, через плазматическую мембрану, в цитоплазму или в желаемое место внутри клетки, например, в ядро, рибосому, митохондрию, ER, лизосому или пероксисому.

[0092] Альтернативно или в дополнение, последовательность транслокации может направлять пептид через физиологический барьер, такой как гематоэнцефалический барьер, трансмукозальный барьер или гематоэнцефалический, гематоретинальный, желудочно-кишечный и легочный барьеры.

[0093] Модифицированный пептид может быть получен из пептидов общей формулы 1 [SEQ ID NO: 1 -144] или 2 [SEQ ID NO: 145-288] с помощью любой химической модификации, которая улучшает его устойчивость к протеолизу. Например, по меньшей мере, — CONH— пептидная связь, может быть модифицирована и заменена (CH2NH) восстановленной связью, (NHCO) ретро-инверсной связью, (СНг-О) метиленокси-связью, (CH2-S) тиометиленовой связью, (СН2СН2) карбаматной связью, (СО-СН2) цетометиленовой связью, (СН(ОН)— СН2) гидроксиэтиленовая связью, (N--N) связью, Е-алценовой связью, (- СН=СН-) связью или (CH2SO) связью. Такие замены и модификации описаны, например, в [12], описание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.

[0094] Также модифицированный пептид может быть получен ацетилированием, ацилированием, амидированием, сшиванием, циклизацией, образованием дисульфидной связи, образованием ковалентных поперечных связей, образованием цистеина, образованием пиро глутамата, формилированием, гамма-карбоксилированием, гликозилированием, образованием якоря GPI, гидроксилированием йодирование, метилирование, миристилирование, окисление, фосфорилирование и тому подобное.

[0095] Модифицированный пептид может быть связан с другими молекулами. Пептид и молекула могут быть связаны непосредственно друг с другом (например, через пептидную связь); связаны через линкерную молекулу, которая может быть или не быть пептидом; или косвенно связаны друг с другом, например, связью с общей молекулой-носителем.

[0096] Модифицированный пептид может быть циклическим или нециклическим. Циклические пептиды в некоторых случаях обладают улучшенными свойствами стабильности. Специалистам в данной области известно, как получить циклические пептиды.

[0097] Описанные здесь модифицированные пептиды могут быть синтезированы с использованием стандартных методов синтеза, известных специалистам в данной области, например химического синтеза или генетической рекомбинации. В предпочтительном варианте осуществления изобретения пептиды получают путем поэтапной конденсации аминокислотных остатков, либо путем конденсации предварительно образованного фрагмента, уже содержащего аминокислотную последовательность в соответствующем порядке, либо путем конденсации нескольких предварительно полученных фрагментов, защищая при этом функциональные группы аминокислот, за исключением тех, которые участвуют в пептидной связи во время конденсации. В частности, пептиды могут быть синтезированы в соответствии со способом, первоначально описанным в [1].

[0098] В некоторых случаях модифицированные пептиды могут включать только природные аминокислоты, хотя могут быть использованы и неприродные аминокислоты (то есть соединения, которые не встречаются в природе, но могут быть включены в пептидную цепь), которые известны в данной области техники.

[0099] Существует много известных не встречающихся в природе аминокислот, любая из которых может быть включена в модифицированные пептиды по настоящему изобретению. Некоторыми примерами неприродных аминокислот являются 4-гидроксипролин, десмосин, гамма-аминомасляная кислота, бета-цианоаланин, норвалин, 4- (Е) -бутенил-4 (R) -метил-1\1-метил-1_-треонин, N-метил -L-лейцин, 1- аминоциклопропанкарбоновая кислота, 1-амино-2- фенилциклопропанкарбоновая кислота, 1-аминоциклобутанкарбоновая кислота, 4-аминоциклопентенкарбоновая кислота, 3- аминоциклогексанкарбоновая кислота, 4-пиперидилуксусная кислота, 4 - амино-1-метилпиррол-2-карбоновая кислота, 2,4-диаминомасляная кислота, 2,3-диаминопропионовая кислота, 2,4-диаминомасляная кислота, 2-аминогептандиовая кислота, 4- (аминометил) бензойная кислота, 4- аминобензойная кислота , орто-, мета- и / пара-замещенные фенилаланины (например, замещенные -С (= 0) С б Н 5; -CF3 ; - CN; - гало; - N02; СН 3 ), дизамещенные фенилаланины, замещенные тирозины (например, дополнительно замещенные -Q = 0) С б Н 5 ; -CF 3 ; -CN; - гало; -N02; СН 3 ) и статина. Кроме того, аминокислоты могут быть дериватизированы для включения аминокислотных остатков, которые являются гидроксилированными, фосфорилированными, сульфонированными, ацилированными и гликозилированными.

[00100] Кроме того, одна или несколько аминокислот в пептиде могут быть модифицированы, например, путем добавления химического элемента, такого как углеводная группа, гидроксильная группа, фосфатная группа, фарнезильная группа, изофарнезильная группа, группа жирных кислот, линкер для конъюгации, функционализации или другой модификации и т.д. Модифицированный пептид также может представлять собой одну молекулу или может представлять собой многомолекулярный комплекс, такой как белок. Модифицированный пептид может быть встречающимся в природе, рекомбинантным или синтетическим, или любой их комбинацией.

[00101] Примерами технологий химического синтеза являются твердофазный синтез и жидкофазный синтез. В случае твердофазного синтеза, например, аминокислота, соответствующая С-концу пептида, который должен быть синтезирован, связывается с носителем, который нерастворим в органических растворителях, и посредством альтернативного повторения реакций, в которых аминокислоты с их амино-группами и функциональными группами боковой цепи, защищенными соответствующими защитными группами, конденсируют одну за другой в порядке от С-конца до N-конца. Способы твердофазного синтеза в значительной степени классифицируются методом tBoc и методом Fmoc в зависимости от типа используемой защитной группы. Обычно используемые защитные группы включают tBoc (трет- бутоксикарбонил), CI-Z (2-хлорбензилоксикарбонил), Br-Z (2- бромбензилйокарбонил), Bzl (бензил), Fmoc (9- флуоренилмктоксикарбонил), Mbh (4,4'-диметилокси) ), Mtr (4-метокси- 2,3,6-триметилбензолсульфонил), Trt (тритил), Tos (тозил), Z (бензилоксикарбонил) и Clz-Bzl (2,6-дихлорбензил) для аминогрупп; N02 (нитро) и Рте (2,2,5,7,8-пентаметилхроман-б-сульфо� �ил) для гуанидиногрупп); и tBu (трет-бутил) для гидроксильных групп). После синтеза желаемого пептида его подвергают реакции снятия защиты и вырезают из твердой подложки. Такая реакция разрезания пептида может проводиться с фтористым водородом или трифторметансульфоновой кислотой для метода Вое и с TFA для метода Fmoc. С другой стороны, пептид может быть синтезирован с использованием рекомбинантных методов. Пептидные ингибиторы CDK5 могут быть экспрессированы в виде изолированных нуклеиновых кислот, кодирующих пептид. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать РНК или ДНК. В настоящем описании «выделенные нуклеиновые кислоты» представляют собой те, которые были удалены из их нормальных окружающих последовательностей нуклеиновых кислот в геноме или в последовательностях кДНК. Такие выделенные последовательности нуклеиновой кислоты могут содержать дополнительные последовательности, полезные для стимулирования экспрессии и / или очистки кодируемого пептида, включая, но не ограничиваясь этим, последовательности polyA, модифицированные последовательности Козака и последовательности, кодирующие метки эпитопа, сигналы экспорта и секреторные сигналы, сигналы ядерной локализации и сигналы локализации плазматической мембраны. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать РНК или ДНК. В настоящем описании «выделенные нуклеиновые кислоты» представляют собой те, которые были удалены из их нормальных окружающих последовательностей нуклеиновых кислот в геноме или в последовательностях кДНК.

[00102] Используемый здесь термин «аналог», относится к молекуле, которая не является пептидом, но подобна пептиду по меньшей мере в одном свойстве, таком как, например, длина цепи, заряд, гидрофильность, гидрофобность, полярность, способность связываться с водородом или жесткость, а также сохраняет пептидную активность (взаимодействуя с одним и тем же специфическим рецептором).

[00103] В конкретном варианте осуществления в Примере N? 1 проиллюстрированы производные (модифицированные) пептидные последовательности и аналоги разработанных синтетических пептидов, хотя специалист в данной области может предоставить другие модифицированные пептидные последовательности и аналоги.

[00104] Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемая соль» означает соль или соли по меньшей мере одного из разработанных синтетических пептидов или их производных и аналогов, которую можно получить обработкой названного соединения подходящей кислотой или основанием. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения основания включают, но не ограничиваются ими, соли натрия, калия, кальция, магния, аммония или соли неорганического основания. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения органических оснований включают, но не ограничиваются ими, соли, полученные из органических оснований, таких как лизин, аргинин, гуанидин, метиламин, этиламин, изопропиламин, пиперидин, пиперазин, пирролидин, этаноламин, морфолин, диазепин, этилендиамин, пиридин, хинолин, хинуклидин и тому подобное и тому подобное. Примеры фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей включают, но не ограничиваются ими, соли, полученные из неорганических кислот, таких как соляная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и тому подобное, и органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памовая, малеиновая, адипиновая, альгиновая, аспарагиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая и тому подобное.

[00105] Используемый здесь термин «сокристалл» относится к кристаллической структуре, состоящей из двух или более компонентов в определенном стехиометрическом соотношении, где каждый компонент определяется как атом, ион или молекула. Термин «сокристалл» охватывает в своем объеме многие типы соединений, включая гидраты, сольваты и клатраты.

[00106] В конкретном варианте осуществления в Примере N? 1 проиллюстрирована фармацевтически приемлемая соль разработанных синтетических пептидов, хотя специалист в данной области может предоставить другие фармацевтически приемлемые соли и сокристаллы.

[00107] Для целей настоящего изобретения фармацевтически приемлемый носитель в стабильной при хранении фармацевтической композиции может содержать растворитель, выбранный из группы, состоящей из воды, этиленгликоля, диэтиленгликоля, триэтиленгликоля, тетраэтиленгликоля, полиэтиленгликоля. пропиленгликоль, дипропиленгликоль, трипропиленгликоль, метоксипропиленгликоль, полиэтиленоксид, глицерин, этанол, пропиловый спирт, изопропиловый спирт, бензиловый спирт, бензилбензоат, гликофурол или их комбинации.

[00108] Для целей настоящего изобретения фармацевтически приемлемый носитель в стабильной при хранении фармацевтической композиции может полностью состоять из растворителя, который выбран из группы, состоящей из воды, этиленгликоля, диэтиленгликоля, триэтиленгликоля, тетраэтиленгликоля, полиэтилена. гликоль пропиленгликоль, дипропиленгликоль, трипропиленгликоль, метоксипропиленгликоль, полиэтиленоксид, глицерин, этанол, пропиловый спирт, изопропиловый спирт, бензиловый спирт, бензилбензоат, гликофурол или их комбинации.

[00109] Для целей настоящего изобретения фармацевтически приемлемый носитель в фармацевтической композиции, стабильной при хранении, в дополнение к растворителю может содержать по меньшей мере еще один ингредиент, выбранный из группы, состоящей из агента, регулирующего pH; агента, поддерживающего изотоничность; консерванта; хелатирующего агента; антиоксиданта; поверхностно- активного вещества; загущающего агента и усилителя абсорбции.

[00110] Используемый здесь термин «агент, регулирующий pH», обозначает вещество, которое регулирует pH фармацевтических композиций до предполагаемого pH. Регулирующие pH агенты могут включать фармацевтически приемлемые кислоты, основания или буферные агенты. Например, кислоты могут включать, но не ограничиваются ими, одну или несколько неорганических минеральных кислот, таких как лимонная, фумаровая, глюконовая, молочная, яблочная, метатартаровая, винная, аскорбиновая и бензолсульфоновая кислота и тому подобное. Основания могут быть одним или несколькими неорганическими основаниями или органическими основаниями, включая, но не ограничиваясь этим, щелочной карбонат, щелочной бикарбонат, карбонат щелочноземельного металла, гидроксид щелочного металла, гидроксид щелочноземельного металла или амин. Например, неорганическое или органическое основание может представлять собой щелочной гидроксид, такой как гидроксид лития, гидроксид калия, гидроксид цезия, гидроксид натрия или тому подобное; щелочной карбонат, такой как карбонат кальция, карбонат натрия или тому подобное; или щелочной бикарбонат, такой как бикарбонат натрия или тому подобное; органическое основание также может быть ацетатом натрия. Буферный агент может представлять собой, но не ограничиваясь этим, соль щелочного металла аминокислоты, гидроксида алюминия, гидроксида алюминия-магния, глицината алюминия, ацетата кальция, бикарбоната кальция, бората кальция, карбоната кальция, цитрата кальция, глюконата кальция, глицерофосфата кальция гидроксид кальция, лактат кальция, фталат кальция, фосфат кальция, сукцинат кальция, тартрат кальция, двухосновный фосфат натрия, двухосновный гидрофосфат, дикалийфосфат. Предпочтительное количество агента, регулирующего pH, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 2,0% (масс).

[00111] Используемый здесь термин «pH» представляет собой меру концентрации ионов водорода, которая обычно используется в данной области. Обычно pH обеспечивает меру по шкале от 0 до 14 кислотности или щелочности раствора. В контексте настоящего изобретения pH стабильной при хранении фармацевтической композиции разработанных синтетических пептидов или их производных и аналогов или фармацевтически приемлемой соли и сокристалла вышеназванных пептидов, их производных и аналогов составляет от около 2,0 до около 11,0, и все значения и диапазоны между этими величинами.

[00112] Используемый термин «агент, поддерживающий изотоничность» относится к веществу в фармацевтической композиции, которое служит для изменения осмотического давления фармацевтической композиции, так что осмотическое давление становится ближе к таковому в плазме человека. Примеры агентов, поддерживающих изотоничность включают, но не ограничиваются ими: хлорид натрия или хлорид калия или физиологически переносимый полиол, такой как, например, сахарный спирт, в частности сорбит или глицерин, в концентрации, необходимой для придания изотон ичности. Предпочтительное количество агента, поддерживающего изотоничность, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 1,0% (масс).

[00113] Используемый здесь термин «консервант» относится к веществу, которое добавляют в фармацевтическую композицию для предотвращения или замедления микробной активности (роста и метаболизма). Примеры консервантов, которые могут быть использованы в стабильной при хранении фармацевтической композиции, могут быть выбраны из, но не ограничиваются ими, фенилкарбинола, бензалкония хлорида, тимеросала, бензилового спирта, этилового спирта, фенилэтилового спирта, метилпарабенов, этилпарабенов, пропилпарабенов и бутилпарабенов или их комбинации. Предпочтительное количество консерванта, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 2,0% (масс).

[00114] Примеры подходящих хелатирующих агентов, которые могут быть использованы в стабильной фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны из, но не ограничиваясь ими, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA); тринатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты; тетранатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты и пентаацетат диэтиленамина. Предпочтительное количество хелатирующего агента, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 1,0% (масс).

[00115] Примеры подходящих антиоксидантов, которые могут быть использованы в стабильной фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны из, но не ограничиваясь ими, аскорбиновая кислота, альфа-токоферол (витамин е), бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, глутатион и тому подобное. Предпочтительное количество антиоксиданта, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 1,0% (масс).

[00116] Примеры подходящих поверхностно-активных веществ, которые могут быть использованы в стабильной фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны из, но не ограничиваются, полисорбатов, их эфирэтоксилатами, полученными взаимодействием сложных эфиров сорбитана с этиленоксидом, полиоксиэтилен-алкиларила, полиоксиэтилен-цетиловый эфира, полиоксиэтилен алкилариловый эфира, полиоксиэтилен монолаурата, полиоксиэтилен-растительного масла, полиоксиэтиленсорбитанмонолаур ата, полиоксиэтиленовые эфира или смешанных жирных и смоляных кислот , полиоксиэтилен- сорбитланолинового производного, полиоксиэтилен-тридециловый эфира, полиоксиэтиленсорбитанового эфира смешанных жирных и смоляных кислот, полиоксиэтиленсорбитанмоностеа рата, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеа та, полиоксиэтилен моностеарата, полиоксиэтилен лаурилового эфира, полиоксиэтилен олеилового эфира, полиоксиэтилен тридецилового эфира, полиоксиэтилен жирного спирта, полиоксиэтилен алкиламина, полиоксиэтиленгликольмонопальм итата, полиоксиэтилен сорбитан монопальмитата, полиоксиэтилен сорбитан монопальмитата , полиоксиэтилен цетиловый эфира, полиоксиэтилен оксипропиленстеарата, полиоксиэтилен лаурилового эфира, полиоксиэтилированное ланолинового производного, олеат натрия или калия, лаурилсульфата натрия или их смеси. Предпочтительное количество поверхностно-активных веществ, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 5,0% (масс).

[00117] Примеры подходящих загустителей, которые могут быть использованы в стабильной фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны из, но не ограничиваясь ими, нерастворимых в воде полимеров, акриловых полимеров, блок- сополимеров полиоксиэтилена и полиоксипропилена, ксантановой смолы, трагакантовой камеди, альгинатов, агар-агара, желатины, сорбита. Предпочтительное количество загустителя, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 2,0% (масс).

[00118] Примеры подходящих усилителей абсорбции, которые могут быть использованы в стабильной фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут быть выбраны из, но не ограничиваются ими, динатрия эдетата, бензилового спирта, этанола, тиамина или его соли, каприновой кислоты или ее соли, яблочной кислоты или ее соли, пирофосфорной кислоты или ее соли, лимонной кислоты или ее соли, салициловой кислоты или ее соли, пирофосфорная кислоты или ее соли, или их комбинации. Предпочтительное количество усилителя абсорбции, которое может присутствовать в стабильной при хранении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может находиться в интервале от примерно 0,001 до примерно 2,0% (масс).

[00119] Изобретение также относится к способу лечения боли от умеренной до умеренно сильной, который требует обезболивания на уровне опиоидов у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту стабильной при хранении фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере один активный фармацевтический ингредиент выбранные из пептидов общей формулы 1 [SEQ ID NO: 1-144] или 2 [SEQ ID NO: 145-288], или их производных или их аналогов, или фармацевтически приемлемых солей и сокристаллов вышеуказанных пептидов, их производных и аналогов, и фармацевтически приемлемый носитель, где композиция сохраняет по меньшей мере 80% эффективности активного фармацевтического ингредиента в фармацевтической композиции после хранения в течение по меньшей мере четырех месяцев при комнатной температуре.

[00120] Изобретение также относится к способу получения стабильной при хранении фармацевтической композиции, включающей, но не ограничиваясь этим, стадию стерилизации паром, которая обеспечивает улучшенную стабильность. [00121] Изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами, которые представлены в качестве примеров изобретения и не ограничивают объем изобретения. Хотя настоящее изобретение было описано в терминах его конкретных вариантов осуществления, определенные модификации и эквиваленты будут очевидны специалистам в данной области техники и предназначены для включения в объем настоящего изобретения.

[00122] Пример 1. Синтез разработанного синтетического пептида и его ПРОИЗВОДНЫХ, аналогов и солей

[00123] Синтез гексапептида H-Leu-D-His-Lys-Leu-Gln-Thr-NFh [SEQ ID NO: 8] осуществляли автоматическим твердофазным синтезом Fmoc на полимере Ринка (смола Rink Amide, 0,6 ммоль аминогрупп на 1 г полимера) аминокислотным методом активации DCC / HOBt (N, N'- дициклогексилкарбодиимид / 1-гидроксибензотриазол). Деблокирование проводили обработкой раствором пиперидин / ДМФ (пиперидин / N, N- диметилформамид) (1: 4) в течение 7 минут. Группы боковых цепей были защищены следующими группами: tBu (трет-бутиловый эфир) для тирозина, треонин, Trt (тритил или трифенилметил) для глутамина и гистидина, Вое (трет-бутилоксикарбонил) для лизина. Пептиды удаляли из полимера и деблокировали смесью TFA / Н20 / EDT (трифторуксусная кислота / вода / 1,2-этандиол) (90: 5: 5). Пептид очищали обращенно- фазовой ВЭЖХ (колонка С18), элюент - ацетонитрил-вода (0,1 М дигидрофосфат калия) в соотношении 6: 4.

[00124] Ацетат пептида получали анионообменом на той же обращенно-фазовой ВЭЖХ, на которой очищали пептид. Пептид загружают в колонку, промывают достаточным количеством буфера уксусной кислоты, а затем элюируют, используя градиент водной уксусной кислоты / ацетонитрила. После сублимационной сушки противоион TFA будет заменен. Метод основан на гидрофобности пептида, и для очень гидрофильного пептида потребуется соответствующая анионообменная смола.

[00125] Пептид описывали с помощью масс-спектрометра и ВЭЖХ, колонка Waters DeltaPak С18 3,9 * 150 мм 5u 100А; раствор А: 0,1% TFA в 100% воде / MeCN; с расходом 1 мл / мин; длина волны обнаружения 230 нм.

[00126] Количество фармацевтически активного ингредиента в фармацевтической композиции также определяли с помощью ВЭЖХ в соответствии с методом, описанным в [13].

[00127] По той же технологии были синтезированы:

[00128] 1. Производная (модифицированная) пептидная последовательность разработанного синтетического пептида: H-Leu-D- His-Lys-Leu-Gln-Thr-CON2H2(OMe)2 (модифицированный пептид получают путем замены одного компонента на С-конце пептида [SEQ ID NO: 7] диметил гидразидом);

[00129] 2. Производная (модифицированная) пептидная последовательность разработанного синтетического пептида: Palmitoyl- Leu-D-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Nhh (модифицированный пептид получают добавлением пальмитоила на N-конце пептида [SEQ ID NO: 8]);

[00130] 3. Производная (модифицированная) пептидная последовательность разработанного синтетического пептида: H-His-Lys- Leu-Gln-Thr-OMe (модифицированный пептид получают путем делеции одного компонента на N-конце пептида [SEQ ID NO: 1]);

[00131] 4. Аналог разработанного синтетического пептида: H-Leu-

His-Lys-(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-Arg-OH, где (ВОС) (СНз)зС-0-С(=0)- (аналог пептида получают из пептида [SEQ ID NO: 2] путем добавления (ВОС) и модификации С-конца пептида);

[00132] 5. Соль (ацетат) пептида [SEQ ID NO: 8] : H-Leu-D-His-Lys-Leu-

Gln-Th r-NH ₂ -(СН _З СООН) ; [00133] 6. The H-Leu-D-His-Lys-Leu-Gln-Thr- ОМе гексапептид [SEQ ID

NO: 7].

[00134] Пример 2. Приготовление стабильной ПРИ хранении Фармацевтической композиции [00135] Приготовление фармацевтической композиции для целей настоящего изобретения включало следующие стадии:

[00136] (а) приготовление фармацевтически приемлемого носителя,

[00137] (Ь) добавление к носителю активного фармацевтического ингредиента, синтезированного в соответствии с Примером 1, при непрерывном перемешивании;

[00138] (с) необязательно добавление по меньшей мере еще одного ингредиента, выбранного из группы, состоящей из агента, регулирующего pH; агента, поддерживающего изотон ичность; консерванта; хелатирующего агента; антиоксиданта; поверхностно-активного вещества; загущающего агента или усилителя абсорбции (для фармацевтических композиций N?N? 1, 2, 4, 5, б, 7, 8, 9);

[00139] (d) наполнение фармацевтическим составом стеклянных флаконов по 1 мл с последующим закрытием;

[00140] (е) необязательно паровая стерилизация (для фармацевтических композиций N?N? 1, 3, 4, 5, б, 7).

[00141] Были приготовлены следующие фармацевтические композиции:

Таблица 1. Стабильные при хранении фармацевтические композиции

[00142] Пример _ 3 _; _ Исследование _ стабильности

Фармацевтических композиций ПРИ хранении

[00143] Исследование стабильности фармацевтических композиций для целей настоящего изобретения при хранении проводили следующим образом:

[00144] 1. Фармацевтические композиции N? 1 и 2 из Таблицы 1 настоящего изобретения в закрытых флаконах хранили при комнатной температуре 25 ° С в течение четырех месяцев. В качестве контроля состав, аналогичный фармацевтическому составу N? 1, но без специальных мер по обеспечению стабильности, в закрытых флаконах хранили при комнатной температуре 25 ° С в течение четырех месяцев.

[00145] 2. Количество активного фармацевтического ингредиента и родственных веществ определяли с помощью ВЭЖХ. Результаты исследования представлены на фигурах 1, 2 и 3. [00146] Фигура 1 представляет собой хроматограмму композиции, аналогичной фармацевтической композиции N? 1, но без специальных мер по обеспечению стабильности, после получения (А) и после четырех месяцев хранения при комнатной температуре 25 ° С (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после четырех месяцев хранения составило 50,1% от исходного значения, количество сопутствующих примесей превышает 49%..

[00147] Фигура 2 представляет собой хроматограмму стерилизованной паром фармацевтической композиции N? 1 после приготовления (А) и после четырех месяцев хранения при комнатной температуре 25 ° С (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после четырех месяцев хранения составило 98,3% от исходного значения, количество сопутствующих примесей не превышало 1,5%.

[00148] Фигура 3 представляет собой хроматограмму стерилизованной фармацевтической композиции N? 2 после приготовления (А) и после четырех месяцев хранения при комнатной температуре 25 ° С (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после четырех месяцев хранения составило 97,7% от исходного значения, количество сопутствующих примесей не превышало 2,0%.

[00149] Результат показывает, что композиции по настоящему изобретению остаются стабильными и сохраняют потенциал активного фармацевтического ингредиента в течение периода хранения не менее 80%.

[00150] Результаты также показали, что композиции по настоящему изобретению обладают превосходной стабильностью при хранении и не требуют холодовой цепи с температурным диапазоном от 2 ° С до 8 ° С.

[00151] Пример 4. Исследование стабильности

Фармацевтических композиций после стерилизации паром [00152] Исследование стабильности после стерилизации паром фармацевтических композиций для целей настоящего изобретения проводили следующим образом:

[00153] 1. Фармацевтическую композицию N? 3 из Таблицы 1 настоящего изобретения в закрытых флаконах подвергали стерилизации паром с режимами стерилизации 20 минут при температуре 132 ° С и давлении 220 кПа.

[00154] 2. Количество активного фармацевтического ингредиента и родственных веществ определяли с помощью ВЭЖХ. Результаты исследования представлены на фигуре 4.

[00155] Фигура 4 представляет собой хроматограмму фармацевтической композиции N? 3 после приготовления (А) и после стерилизации паром (В). Количество активного фармацевтического ингредиента после стерилизации паром составило 97,1% от исходного значения, количество сопутствующих примесей не превышало 2,7%.

[00156] Результат показывает, что композиции по настоящему изобретению остаются стабильными и сохраняют потенциал активного фармацевтического ингредиента после стерилизации паром не менее 80%. Также общее количество родственных веществ в композиции не превышает 15 % (масс) содержания активного фармацевтического ингредиента после стерилизации паром.

[00157] Пример 5. Исследование анальгетической активности Фармацевтических композиций

[00158] «Формалиновый тест» [14] и «Тест электростимуляции пульпы зуба» [15] были выбраны в качестве моделей боли с целью изучения анальгетической активности фармацевтических композиций по настоящему изобретению.

[00159] В экспериментах использовали специально выведенных и ранее не задействованных в исследовании животных. Животных содержали в помещениях с контролируемыми условиями при температуре воздуха 20-26 ° С и относительной влажности 30-70%, с регулярной сменой светового цикла (12 часов света / 12 часов темноты) с водой и едой вволю. Все животные прошли 30-дневный карантин перед отправкой и 7- дневную адаптацию после доставки в виварии. В период адаптации у животных визуально контролировали клинические признаки здоровья (общее самочувствие, бодрость, чистоту, упитанность, аппетит, отсутствие симптомов). Перед началом исследования животные, соответствующие критериям включения в эксперимент (вид, пол, масса тела, клиническое состояние), были распределены в соответствующие группы. Распределение производилось таким образом, чтобы средний вес групп животных одного вида отличался не более чем на 10%. Каждому животному был присвоен уникальный номер.

[00160] Эксперименты на животных проводились в соответствии с правовыми и этическими стандартами обращения с животными в соответствии с положениями, принятыми Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Европейская конвенция о защите Позвоночные животные, используемые для экспериментальных и других научных целей (ETS 123). Страсбург, 1986 г.).

[00161] Формалиновый тест. Формалиновый тест проводился в следующей модификации: за 20 минут до введения формалина в лапу беспородным крысам-самцам в возрасте около 3 месяцев массой 180-200 г субокципально под легким эфирным наркозом вводили 10 мкл приготовленных стабильных фармацевтических композиций или физиологический раствор для контрольной группы. Крысам вводили водный раствор формалина в разведении 1:50 в объеме 50 мкл субплантарно (под подошвенный апоневроз) правой задней лапы. После введения раствора формалина животное сразу помещали в прозрачный цилиндр для регистрации болевых реакций. Все эксперименты на животных проводились двойным слепым методом в соответствии с принципами GLP.

[00162] Оценивали начальное время первой фазы болевой реакции, продолжительность первой фазы болевой реакции, начальное время второй фазы болевой реакции и наличие второй фазы боли.

Таблица 2. Результат исследования анальгетической активности

Фармацевтических композиций (Формалиновый тест) [00163] Результат указывает на то, что стабильные при хранении фармацевтические композиции по настоящему изобретению обладают выраженной анальгетической активностью.

[00164] Тест на электростимуляцию ПУЛЬПЫ зуба. Тест на электростимуляцию пульпы зуба у кошек проводился в следующей модификации: ранее при нембутальной анестезии у животных образовывались полости в дентине клыка и моляре одной из сторон верхней челюсти без открытия пульповой камеры. . В полость вводился заполняющий материал - серебряная амальгама, в которую помещался оловянный конец многожильного медного провода в тефлоновой изоляции. Зуб закрыли быстротвердеющим пломбировочным материалом - оксидом акрила. Другой конец проволоки через тонкую стальную канюлю вводили подкожно и выводили через кожу в затылочной области животного. Индифферентный электрод вводили через кожный разрез в кости лобной пазухи. Эксперименты начинали через 5-7 дней после операции имплантации электродов и после полного восстановления животных после операции. Электростимуляция зубов проводилась с помощью прибора ЭОМ-3, который широко используется в клинике терапевтической стоматологии для определения порогов болевой чувствительности у пациентов.

[00165] Обезболивающую активность лекарств оценивали на основании изменения болезненной поведенческой реакции в ответ на электрическую стимуляцию пульпы зуба до и после введения лекарства. В болезненной поведенческой реакции выделяли три уровня с соответствующими порогами возбуждения болевых рецепторов, развивающимися последовательно с увеличением интенсивности электростимуляции :

[00166] · Первый уровень характеризовался проявлением реакции открывания рта;

[00167] · Второй уровень характеризовался появлением двигательной реакции животного, заключающейся в повороте и наклоне головы с широко открытой пастью;

[00168] · Третий уровень проявлялся выраженной защитной реакцией, попыткой к бегству и звуковой реакцией.

[00169] Пороговые значения возбуждения болезненных рецепторов пульпы в зубе, приводящие к соответствующему уровню поведенческой реакции, определялись с интервалом 60 минут после введения лекарств двумя независимыми наблюдателями. Все эксперименты на животных проводились в двойном слепом режиме тестирования в соответствии с принципами GLP.

[00170] Приготовленные стабильные фармацевтические композиции, препарат сравнения (трамадол гидрохлорид) и контроль (физиологический раствор) вводили субокципитально под анестезией легким эфиром. Через 15-20 минут у животных внешние признаки эфирного наркоза полностью исчезли. Результаты исследования представлены на Фигуре 5.

[00171] Фигура 5. Значения порога возбуждения болевых рецепторов пульпы зуба у животных, приводящие к соответствующему уровню поведенческой реакции, в процентах от контроля через 60 минут после субокципитального введения трамадола гидрохлорида в дозе 12 мг / кг (R), фармацевтическая композиция 7 в дозе 180 мкг / кг (Т1), фармацевтическая композиция 8 в дозе 180 мкг / кг (Т2), фармацевтическая композиция 9 в дозе 180 мкг / кг (ТЗ), для клыка (А) и моляра (В) соответственно (I; II; III - уровни проявления болевой реакции).

[00172] Результат показывает, что стабильные при хранении фармацевтические композиции по настоящему изобретению обладают выраженной анальгетической активностью на уровне опиоидов.

[00173] СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

[00174] 1. Vlasov, G.P., Kotin, A.M. (2012). Synthetic peptides with a non-narcotic type of analgesic effect. U.S. Patent No. 9,260,482 Washington, DC: U.S. Patent and Trademark Office.

[00175] 2. Kotin, A.M., Emelyanov, M.O., Kotin, O.A. (2017). Specific peptide clathrin inhibitors. PCT No. W02018186770. World Intellectual Property Organization, International Bureau. [00176] 3. Kotin, A.M., Emelyanov, M.O., Kotin, O.A. (2019). Low- molecular synthetic peptides with non-narcotic type of analgesia: comparative study and mechanism of analgesic activity. Molecular pain, 15: 1-13.

[00177] 4. Juul-Mortensen, C., Engelund, D.K. (2009). U.S. Patent No.

7,632,806. Washington, DC: U.S. Patent and Trademark Office.

[00178] 5. Stern, W. (2002). U.S. Patent No. 6,440,392. Washington, DC:

U.S. Patent and Trademark Office.

[00179] 6. Sonavaria, V., Updhyay, K.K., & Patel, P. (2016). PCT No.

W02016059592. World Intellectual Property Organization, International Bureau.

[00180] 7. Usach, I., Martinez, R., Festini, T, & Peris, J.E. (2019).

Subcutaneous Injection of Drugs: Literature Review of Factors Influencing Pain Sensation at the Injection Site. Advances in therapy, 1-11.

[00181] 8. Defelippis, M.R., Dobbins, M.A., Sharknas, A.D., Prokai, A.M.,

Rinella, J.V. (2006). U.S. Patent No. 7,022,674. Washington, DC: U.S. Patent and Trademark Office.

[00182] 9. Cynthia L.S., Sally A.T., Steven J.P., Jeremy C.W., Joe L.,

James B.E. (1996). Patent No. 2259403. Canadian Intellectual Property Office.

[00183] 10. Guideline. (2003). Stability testing of new drug substances and products. ICH Topic Q 1 A (R2), 4, 1-24.

[00184] 11. Roberts, D.C. and Vellaccio, F. (1983). The Peptides. Gross,

E.; Meienhofer, J., Eds.; Academic Press: New York, NY.

[00185] 12. Fauchere, J.L. (1986). Advances in Drug Research. В Tesla ed., vol. 15, Academic Press, London.

[00186] 13. Meyer, V.R. (1992). Use of chromatographic peak-heights ratios for quantitative analysis: application to the separation of enantiomers. Journal of Chromatography A, 623(2), 371-374. [00187] 14. Tj0lsen A, Berge 0-G, Hunskaar S, Rosland JH and Hole K.

(1992) The formalin test: an evaluation of the method. Pain, 51(1), 5-17.

[00188] 15. Le Bars D, Gozariu M, Cadden SW. (2001) Animal Models of

Nociception. Pharmacological Reviews, 53, 597-652. [00189] Могут быть сделаны определенные адаптации и модификации описанных вариантов осуществления. Следовательно, обсуждаемые выше варианты осуществления считаются иллюстративными, а не ограничивающими.

Список пептидов обшей ФОРМУЛЫ 1 TSEO ID NO: 1-1441 и 2 rSEO ID NO: 145-2881