ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Техническое решение относится к области медицины, а именно к средствам для лечения туберкулеза.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Туберкулез (или сокращенно ТБ) - опасное инфекционное заболевание, которое может привести к летальному исходу, и которое широко распространено в мире на сегодняшний день. Лечение туберкулеза осуществляется с использованием антибиотиков для борьбы с бактериями возбудителями туберкулеза, которыми являются микобактерии рода Mycobacterium (чаще всего Mycobacterium tuberculosis).

Туберкулезом заболевают миллионы людей каждый год, в частности, в 2015 году туберкулез был одним из десяти самых распространенных факторов, вызывающих смерть по всему миру, опередив ВИЧ/СПИД в качестве причины смерти от инфекционных заболеваний. Согласно информации, раскрытой в ежегодном отчете ВОЗ о туберкулезе от 2016 Году (Global Tuberculosis Report 2016), в 2015 году было зафиксировано 1 ,4 миллиона случаев смерти от туберкулеза и еще 0,4 миллиона случаев смерти от туберкулеза среди людей, живущих с ВИЧ. Также в 2015 году по всему миру было зарегистрировано 10,4 миллионов новых случаев заболевания туберкулезом.

Как известно, первые успешные разработки противотуберкулезных препаратов приходятся на 40-е годы XX столетия.

Согласно Сопроводительного пособия ВОЗ по лечению резистентного туберкулеза (Companion handbook to the WHO guidelines for the programmatic management of drug-resistant tuberculosis. WHO 2014), выделяют следующие группы препаратов с противотуберкулезным действием:

I группа. Пероральные препараты первой линии с соединениями:

- Изониазид;

- Рифампицин;

- Этамбутол;

- Пиразинамид;

- Рифабутин;

- Рифапентин.

II группа. Инъекционные противотуберкулезные препараты (инъекционные агенты или парентеральные агенты) с соединениями:

- Стрептомицин;

- Канамицин;

- Амикацин;

- Капреомицин.

III группа. Препараты с соединениями из группы фторхинолонов:

- Левофлоксацин;

- Моксифлоксацин;

- Гатифлоксацин. IV группа. Пероральные бактериостатические противотуберкулезные препараты второй линии с соединениями:

- Этионамид;

- Протионамид;

- Циклосерин;

- Теризидон;

- Пара-аминосалициловая кислота;

- Натрий пара-аминосалицилат.

V группа. Противотуберкулезные препараты с ограниченными данными об эффективности и/или безопасности при лечении резистентного ТВ (в эту группу входят новые противотуберкулезные препараты) с соединениями:

- Бедаквилин;

- Деламанид;

- Линезолид;

- Клофазимин;

- Амоксициллин/клавуланат;

- Имипенем/циластатин;

- Меропенем;

- Изониазид в повышенных дозах

- Тиоацетазон;

- Кларитромицин;

Одним из наиболее эффективных противотуберкулезных препаратов, который на сегодняшний день широко используется в клинической практике, является такое химическое соединение как изониазид. Изониазид - это производное изоникотиновой кислоты, гидразид изоникотиновой кислоты (сокращенно ГИНК). ГИНК был впервые получен в начале XX века, а с 50-х годов XX века началось активное клиническое применение противотуберкулезных препаратов на основе ГИНК.

Фармацевтический препарат изониазид может иметь различные формы выпуска, в частности:

- Таблетки и порошки, содержащие ГИНК по 0,1 г (100 мг), по 0,2 г (200 мг), по 0,3 г (300 мг) соответственно, которые дополнительно содержат фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

- раствор для инъекций, содержащий 10% ГИНК соответственно, который дополнительно содержит фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

- Дополнительно, из уровня техники является известным ингаляционный путь введения изониазида.

Преимущества изониазида состоят в том, что соединение:

- имеет очень мощный бактерицидный эффект, может использоваться для лечения всех форм и локализаций активного туберкулеза;

- имеет наибольший эффект в случаях впервые выявленного туберкулеза с острым течением;

- в связи с высокой эффективностью терапевтическая доза изониазида небольшая; - относительно редко вызывает побочные реакции, пригодно для лечения туберкулеза у взрослых и детей;

- является сравнительно дешевым.

Вместе с этим, в связи с длительной историей использования изониазида для лечения ТБ на протяжении нескольких десятилетий, в частности, в виде монотерапии, все чаще стали наблюдаться случаи развития устойчивости возбудителей туберкулеза к изониазиду. В частности, из открытых данных ВОЗ известно, что в 2015 году примерно 480 тысячам человек был поставлен диагноз мультирезистентный туберкулез.

Лечение мультирезистентного туберкулеза требует длительного применения токсичных и дорогостоящих препаратов, и имеет, как правило, плохие последствия для пациента. Случаи мультирезистентного ТБ характеризуются, в частности высокой смертностью (только в 60% случаев лечение мультирезистентного ТВ является эффективным и успешным) и последующим распространением резистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis в пределах человеческого сообщества. Кроме того, на сегодняшний день, оптимальный состав фармацевтических композиций для лечения мультирезистентного ТБ и продолжительность режима его лечения остаются неопределенными. В связи с увеличением частоты случаев мультирезистентного ТБ, очевидной необходимостью является направленность современных противотуберкулезных программ на борьбу именно с туберкулезом, который является резистентным к известным лекарственным средствам и способам лечения.

Таким образом, на сегодняшний день актуальной проблемой является разработка новых лекарственных средств для лечения ТБ и способов лечения ТБ (новые лекарственные препараты, новые режимы и подходы лечения и т.д.), которые будут более эффективными по отношению к возбудителям туберкулеза, в том числе по отношению к возбудителям туберкулеза, резистентных к известным противотуберкулезным препаратам, которые на данный момент используются в терапевтической практике.

В связи с этим возникает необходимость в поиске новых активных соединений, которые способны проявлять противотуберкулезную активность и являются безопасными для использования в лечении ТБ, в частности, в лечении резистентного ТБ, и создании новых фармацевтических композиций и фармацевтических препаратов для использования в лечении туберкулеза, в том числе, в лечении резистентного ТБ.

Одним из наиболее перспективных направлений является исследование противотуберкулезной активности производных известных соединений, которые имеют клинически подтвержденное противотуберкулезное действие. Известно, что противотуберкулезную активность способны проявлять соединения различных химических классов: производные ГИНК или изоникотиновой кислоты, производные тиосемикарбазона, соединения таких классов как аминогликозиды, фторхинолоны, тиоамиды и тому подобных. В частности, особый интерес вызывают соединения, являющиеся производными тиосемикарбазона.

Задачей данного технического решения является создание фармацевтической композиции с противотуберкулезным действием на основе новых активных соединений, которые проявляют активность в отношении бактерий возбудителей туберкулеза, в частности, проявляют антимикобактериальную активность в отношении возбудителей туберкулеза, резистентных к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; расширение арсенала и ассортимента лекарственных средств для лечения туберкулеза, в частности, расширение арсенала и ассортимента лекарственных средств для лечения туберкулеза, который является резистентным к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; повышение эффективности лечения туберкулеза, в частности, туберкулеза, который является резистентным к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; улучшение качества жизни больных туберкулезом, в частности, больных формой туберкулеза, резистентного к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату, за счет уменьшения срока лечения болезни, пониженной токсичности фармацевтической композиции, уменьшение возможности рецидива заболевания, улучшение показателей излечиваемости и выживаемости больных.

СУТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задача решается фармацевтической композицией для лечения туберкулеза, которая содержит активный ингредиент и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, причем как активный ингредиент содержит соединение формулы I

или соединение формулы II

II

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для перорального введения.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может быть изготовлена в лекарственной форме, пригодной для перорального введения, которая может быть выбрана из группы лекарственных форм, которая включает таблетку, капсулу, порошок, диск, каплету, гранулу, гранулу в капсуле, минитаблетку, минитаблетку в капсуле, пеллету, пеллету в капсуле, саше, таблетку для рассасывания, жевательную таблетку, шипучие таблетки, пленку для растворения во рту, жидкую форму в твердых желатиновых капсулах, жидкую форму в мягких желатиновых капсулах, жидкую форму в капсулах из гидроксипропилметилцеллюлозы, полутвердую форму в твердых желатиновых капсулах, полутвердую форму в мягких желатиновых капсулах, полутвердую форму в капсулах из гидроксипропилметилцеллюлозы.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы веществ, включающих наполнитель, связывающий агент, смазочный агент, дезинтегратор, глидант, антиоксидант, подсластитель, краситель, ароматизатор, консервант, хелатирующий агент, агент для маскировки вкуса.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для ингаляционного введения.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать в качестве фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества фармацевтически приемлемый носитель, в котором суспендируют или растворяют активный ингредиент.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включая суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать как агент для регулирования значения уровня рН, по меньшей мере, одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемое основание.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 90% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 50% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 25% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 10% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 1 % по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для инъекционного введения.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать как фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества воду для инъекций и, по меньшей мере, один сорастворитель или солюбилизатор.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать как агент для регулирования значения уровня рН, по меньшей мере, одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемое основание.

Некоторые данные о объектах изобретения показаны с помощью чертежей, которые предоставлены на Фигурах 1 -2.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 - изображение спектра 1 Н-ЯМР Соединения I.

Фиг. 2 - изображение спектра 1 Н-ЯМР Соединения II. СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Фармацевтическая композиция согласно техническому решению содержит как активный ингредиент соединение формулы I

соединение формулы

Соединение I и Соединение II, принадлежат к классу таких соединений как производные тиосемикарбазонов, и могут быть получены следующими способами.

5 г (55 ммоль) тиосемикарбазида растворяют в 100 мл дистиллированной воды, в результате получают первый раствор. Отдельно в 100 мл изопропанола растворяют 9,0 г (5,5 ммоль) 3-изопропоксибензальдегида при температуре 60 °С, в результате получают второй раствор. Первый и второй раствор смешивают, смесь этих растворов кипятят при перемешивании 1 час, в результате получают третий раствор. После охлаждения третьего раствора до комнатной температуры (3-12 часов) кристаллический осадок продукта отфильтровывают, промывают в 10 мл изопропанола и сушат. Конечный выход продукта - 68%. Чистота продукта не ниже 96%.

Для повышения чистоты продукта могут быть использованы приемлемые общеизвестные методы очистки химических соединений, например, метод перекристаллизации, в частности, перекристаллизация соединения из 70%-го или чистого изопропанола. Структуру синтезированного Соединения I устанавливали с помощью спектров ¹ Н-ЯМР, записанных в ДМСО-йб на приборе "Varian MercuryVRX-400" с рабочей частотой 400 МГц и внутренним стандартом - ТМС Спектр Соединения и представлен на Фиг. 1 . Полученные результаты свидетельствуют о соответствии синтезированного низкомолекулярного органического соединения заявленной формуле Соединения I.

5 г (55 ммоль) тиосемикарбазида растворяют в 100 мл дистиллированной воды, в результате получают первый раствор. Отдельно в 100 мл изопропанола растворяют 10,6 г (5,5 ммоль) 4-пропокси-З-метоксибезальдегиду при температуре 60 °С, в результате получают второй раствор. Первый и второй раствор смешивают, смесь этих растворов кипятят при перемешивании 1 час, в результате получают третий раствор. После охлаждения третьего раствора до комнатной температуры (3-12 часов) кристаллический осадок продукта отфильтровывают, промывают в 10 мл изопропанола и сушат. Конечный выход продукта - 71 %. Чистота продукта не ниже 96%.

Для повышения чистоты продукта могут быть использованы приемлемые общеизвестные методы очистки химических соединений, например, метод перекристаллизации, в частности, перекристаллизация соединения из 70%-го или чистого изопропанола.

Структуру синтезированного Соединения II устанавливали с помощью спектров ¹ Н-ЯМР, записанных в ДМСО-йб на приборе "Varian MercuryVRX-400" с рабочей частотой 400 МГц и внутренним стандартом - ТМС. Спектр Соединения II представлен на Фиг. 2. Полученные результаты свидетельствуют о соответствии синтезированного низкомолекулярного органического соединения заявленной структуре Соединения II.

Фармацевтическая композиция согласно техническому решению, содержащая Соединение I или Соединение II и вспомогательное вещество, может быть воплощена в более чем одной лекарственной форме.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена перорально или приготовлена для перорального введения. Фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может быть изготовлена в форме таблеток, капсул, порошков, диска, каплет, гранул, пеллет, гранул в капсуле, минитаблеток, минитаблеток в капсуле, пеллет в капсуле, саше, таблеток для рассасывания, жевательных таблеток, шипучих таблеток, пленки для растворения во рту, жидкой или полужесткой формах в твердых желатиновых капсулах, мягких желатиновых капсул, капсулах ГПМЦ (гидроксипропилметилцеллюлоза) и других лекарственных формах, пригодных для перорального применения.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, где одно или более вспомогательное вещество может быть выбрано из группы, которая включает связующие агенты, наполнители, смазочные агенты, дезинтеграторы, глиданты, солюбилизаторы и тому подобное.

Приемлемые связующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает повидон, крахмал, стеариновую кислоту, камеди, целлюлозу и тому подобное.

Приемлемые наполнители могут быть выбраны из группы, которая включает микрокристаллическую целлюлозу, фосфат кальция, сульфат кальция, каолин, сухой крахмал, сахарную пудру и тому подобное.

Приемлемые смазочные агенты могут быть выбраны из группы, которая включает стеарат магния, стеарат цинка, стеарат кальция, стеариновую кислоту, стеарилфумарат натрия и тому подобное.

Приемлемые дезинтеграторы могут быть выбраны из группы, которая включает крахмал, кроскармеллозу натрия, кросповидон, крахмалгликолят натрия и тому подобное.

Приемлемые глиданты могут быть выбраны из группы, которая включает коллоидный диоксид кремния, тальк, кукурузный крахмал и тому подобное.

Приемлемые солюбилизаторы могут быть выбраны из группы полимеров, включая гидроксипропилметилцеллюлозу (ГПМЦ), гидроксиэтилцеллюлозу (ГЭЦ), метилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу (ГПЦ), эудрагит, поливинилпирролидон (ПВП) и др.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать один или несколько других вспомогательных агентов, известных в данной области, таких как антиоксиданты, подсластители, красители, ароматизаторы, консерванты, хелатирующие агенты, маскирующие вкус агенты и др.

Приемлемые подсластители могут быть выбраны из группы, которая включает моносахариды, дисахариды и полисахариды, такие как, например, ксилоза, рибоза, глюкоза, манноза, галактоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, инвертный сахар, частично гидролизованный крахмал, концентрированный кукурузный сироп, маннитол, ксилит, D-сорбит, эритрит, пентитол, гекситол, мальтитол, дигидрохальконы, монелин, стевиозиды или глицирризин; сахарин в форме свободной кислоты, растворимые соли сахарина, например соли натрия или кальция, цикламатные или соли ацесульфама К; подсластители на основе дипептида, такие как подсластители, полученные из L-аспарагиновой кислоты, например аспартам; водорастворимые подсластители, полученные из природных водорастворимых подсластителей, например сукралоза; и белковые подсластители, например Thaumatococcus danielli (Тауматин I и II) и др.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать приемлемые ароматизаторы, которые известны для специалиста в данной области, такие как натуральные, "идентичные натуральным" и искусственные ароматизаторы. Эти ароматизаторы могут быть выбраны, например, из синтетических ароматических масел, усилителей вкуса и аромата, экстракционных эфирных масел, полученных, например, из растений, листьев, фруктов и тому подобное.

Типичные ароматы могут быть выбраны из группы, которая включает масла мяты курчавой, корицы, мяты перечной, гвоздики, лавра, чабреца, кедровых листьев, мускатного ореха, шалфея, горького миндаля, ванили, масла бобов кофейного дерева, какао-бобов и цитрусовых, лимона, апельсина, вишни, винограда, лайма, грейпфрута; фруктовые эссенции, например яблоки, груши, персика, клубники, малины, вишни, сливы, ананаса или абрикоса; мяты, такие как перечная мята (включая ментол, в частности L-ментол) альдегиды и эфиры, например циннамилацетат, циннамальдегид, цитраль, диэтилацеталь, дигидрокарвилацетат, п-метиланизол; альфа-цитраль и бета-цитраль деканаль; этилванилин; пиперональ (гелиотропин); ванилин; альфа-амилциннамальдегид; бутиральдегид; валеральдегид; цитронеллаль; деканаль; альдегиды С-8; альдегиды С-9; альдегиды С-12; 2-этилбутирадегид; гексенали, например, транс-2- гексеналь; толилальдегид; вератральдегид; 2,6-диметил-5-гептеналь (мелональ) 2- 6-диметилоктаналь; 2-додеканаль и тому подобное.

Приемлемые хелатирующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает лимонную кислоту, малеиновую кислоту, янтарную кислоту, винную кислоту, ЕГТА (этиленгликоль-бис ((3-аминоэтиловий эфир) тетрауксусной кислоты) и ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота). Такие хелатирующие агенты являются коммерчески доступными в различных формах, например, в формах солей натрия или калия, или свободных кислот и тому подобное.

Приемлемые антиоксиданты могут быть выбраны из группы, которая включает токоферол, токоферолацетат, витамина Е полиэтиленгликоль сукцинат, пропилгалат, бутилгидрокситолуол и бутилгидроксианизол и тому подобное.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать один или несколько других вспомогательных агентов, известных в данной области, таких как антиоксиданты, подсластители, красители, ароматизаторы, консерванты, хелатирующие агенты, маскирующие вкус агенты и тому подобное.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена ингаляционно или приготовлена для ингаляционного введения. Фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению содержит активный ингредиент, суспендированный в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе.

Преимущественно, фармацевтически приемлемым носителем может быть вода, в частности, вода для инъекций. Вода для инъекций является коммерчески доступной, и, как известно специалисту в данной области, может быть получена, например, методом дистилляции или обратного осмоса.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать другие ингредиенты, такие как суспендирующие агенты, смазочные агенты, мукоадгезивние агенты, изотонирующие агенты, консерванты, буферные агенты и/или фармацевтически приемлемые кислоты или основания для регулирования значения уровня рН растворов.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть изотоничной по отношению к жидкостям легких. Уровень тоничности фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулирован путем добавления приемлемого для этих целей соединения, например, хлорида натрия, глюкозы или хлорида кальция.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может иметь значение уровня рН от 6 до 8, в частности от 6,5 до 7,5, более точно от 6,7 до 7,3.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать буферную систему или буфер для установления значения уровня рН композиции в необходимом интервале. Для этого может быть использована любая фармацевтически приемлемая буферная система, которая способна установить значение уровня рН композиции в необходимом интервале. Например, буферы, которые могут быть использованы, включают фосфатный, ацетатный, цитратный буфер или их смеси.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать фосфатный буфер. Этот буфер может быть приготовлен, например, путем растворения монокалий фосфата и гидроксида натрия в воде.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать от примерно 0,001 % до 90%, от примерно 0,001 % до 50%, от примерно 0,001 % до 25%, от примерно 0,001 % до 10%, от примерно 0,001 % до 1 % одного или более вспомогательных веществ, выбранных из группы эмульгирующих агентов, увлажняющих агентов или суспендирующих веществ.

Приемлемые вспомогательные вещества могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: полисорбаты, включая, но не ограничиваясь веществами полиэтиленсорбитан моноолеат (полисорбат 80), полисорбат 20, полисорбат 65, полиоксиэтилен (20) сорбитан моноолеат, полиоксиэтилен (20) сорбитан монопальмитат, полиоксиэтилен (20) сорбитан моностеарат; лецитины; альгиновая кислота; натрий альгинат; калий альгинат; аммоний альгинат; кальций альгинат; пропан-1 ,2-диол альгинат; агар-агар; каррагинан; камедь рожкового дерева; гуаровая камедь; трагакант; камедь акации; ксантановая камедь; камедь карайи; пектин; амидированный пектин; фосфатиды аммония; микрокристаллическая целлюлоза; метилцеллюлоза; гидроксипропилцеллюлоза; гидроксипропилметилцеллюлоза; этилметилцеллюлоза; карбоксиметилцеллюлоза; соли жирных кислот натрия, калия и кальция; моно- и диглицериды жирных кислот; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и уксусной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и молочной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и лимонной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и винной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и диацетилвинной кислоты; смешанные сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и уксусной и винной кислот; сложные эфиры сахарозы и жирных кислот; сахароглицериды; сложные эфиры полиглицерина и жирных кислот; сложные эфиры полиглицерина и поликонденсированных жирных кислот рицинового масла; сложные эфиры пропан- 1 ,2-диола и жирных кислот; стеароил-2-лактилат натрия; стеароил-2-лактилат кальция; стеарилтартрат; сорбитан моностеарат; сорбитан тристеарат; сорбитан монолаурат; сорбитан моноолеат; сорбитан монопальмитат; экстракт квиллайи; сложные эфиры полиглицерина и димерных жирных кислот соевого масла; оксидативно полимеризованное соевое масло; и экстракт пектина. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению содержит полисорбат 80, микрокристаллическую целлюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу и/или декстрозу.

Преимущественно, значение уровня рН фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулировано путем добавления приемлемой кислоты или основания, обычно для таких целей используют разбавленный водный раствор соляной кислоты, где содержание соляной кислоты составляет, например, 10% масс , или разбавленный водный раствор гидроксида натрия, где содержание гидроксида натрия составляет, например, 4% масс.

Приемлемые мукоадгезивные агенты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: метил-, гидроксипропил- и натрий карбоксиметилцеллюлоза, хитозан, поливинилпирролидон и гидрогели.

В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать консервант. Приемлемые консерванты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: бензалкония хлорид, бензиловый спирт, хлорбутанол, хлорокрезол, крезол, этанол, фенол, фенилэтанол, сульфиты, тиомерсал, парабены, пропиленгликоль, бензоат натрия, фенил меркурий борат или фенил меркурий нитрат.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена путем инъекции или приготовлена для инъекционного введения. Фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению содержит активный ингредиент, суспендированный в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать воду для инъекций и, по меньшей мере, один сорастворитель или солюбилизатор. Вода для инъекций является коммерчески доступной, и, как известно специалисту в данной области, может быть получена, например, методом дистилляции или обратного осмоса.

Приемлемые сорастворители могут быть выбраны из группы, которая включает, в общем, неводные агенты, смешанные с водой, которые являются пригодными для парентерального введения. Преимущественно, сорастворитель представляет собой спирт, многоатомный спирт или сложный эфир. Например, сорастворитель может быть выбран из группы, которая включает этанол, 1 ,3- бутандиол (бутиленгликоль), глицерин, пропиленгликоль, 2-этоксиэтанол, глицеринформаль и их смеси.

В предпочтительном варианте осуществления сорастворителем является этанол.

Приемлемым солюбилизатором фармацевтической композиции для инъекционного введения согласно техническому решению может быть циклодекстрин. Циклодекстрины являются циклическими олигосахаридами с гидроксильными группами на внешней поверхности молекулы и пустой полостью в центре. Внешняя поверхность, как правило, является гидрофильной, поэтому циклодекстрины растворимы в воде. С другой стороны, полость, как правило, является гидрофобной. Циклодекстрины обладают способностью образовывать комплексы с посторонними молекулами, такими как зипразидон.

Приемлемые циклодекстрины могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: α-, β-, γ-циклодекстрины, метилированные циклодекстрины, гидроксипропил- β-циклодекстрин, гидроксиэтил-р-циклодекстрин, разветвленные циклодекстрины, в которых одна или две глюкозы или мальтозы присоединены к циклодекстриновому кольцу, этил- или этилкарбоксиметилциклодекстрин ы, дигидропропилциклодекстрины и сульфоалкил-циклодекстриновые эфиры, такие как сульфобутиловый эфир-β- циклодекстрин. Циклодекстрины могут быть незамещенными или полностью, или частично замещенными, как известно в данной области техники, смеси циклодекстринов также являются полезными. Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать γ-циклодекстрин, гидроксипропил-β- циклодекстрин, сульфобутиловый эфир-р-циклодекстрин или их смеси, в наиболее предпочтительных вариантах реализации - сульфобутиловый эфир-β- циклодекстрин.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать другие вспомогательные вещества, например, изотонирующие агенты, консерванты, буферы и/или фармацевтически приемлемые кислоты или основания для регулирования значения уровня рН растворов. Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может иметь осмолярность от 200 до 380 мОсм/кг. В случае необходимости, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать изотонирующий агент для регулировки осмолярности раствора до значения в этом интервале.

Приемлемые изотонирующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает хлорид натрия, хлорид калия, глюкозу, декстрозу и их смеси.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать буферную систему или буфер для установления значения уровня рН композиции в необходимом интервале. Для этого может быть использована любая фармацевтически приемлемая буферная система, которая способна установить значение уровня рН композиции в необходимом интервале. Например, буферы, которые могут быть использованы, включают фосфатный, ацетатный, цитратный буфер или их смеси.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать фосфатный буфер. Этот буфер может быть приготовлен, например, путем растворения монокалий фосфата и гидроксида натрия в воде.

Преимущественно, значение уровня рН фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулировано путем добавления приемлемой кислоты или основания, обычно для таких целей используют разбавленный водный раствор соляной кислоты, где содержание соляной кислоты составляет, например, 10% масс, или разбавленный водный раствор гидроксида натрия, где содержание гидроксида натрия составляет, например, 4% масс.

В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать консервант. Приемлемые консерванты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: бензалкония хлорид, бензиловый спирт, хлорбутанол, хлорокрезол, крезол, этанол, фенол, фенилэтанол, сульфиты, тиомерсал, парабены, пропиленгликоль, бензоат натрия, фенил меркурий борат или фенил меркурий нитрат.

Способ изготовления фармацевтической композиции согласно техническому решению в заявленных лекарственных формах показано далее в примерах 1 -27.

Получение композиций для перорального введения

Пример 1

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I и 25 г повидона добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 2 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 2

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I, 20 г повидона и 5 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 5 г кроскармеллозы натрия, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера. Пример 3

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I, 10 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 8 г кроскармеллозы натрия и 2 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 4

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 2 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 5

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 4 г кроскармеллозы натрия и 1 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 6

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 20 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 7 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 7

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 54 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 8 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 8

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 10 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 5 г кроскармеллозы натрия, 2 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/см ³ '

Формование полученного порошка осуществляется следующим способом: Полученный порошок формуют в таблетки с помощью пресса. Получают таблетки овальной формы, массы (в среднем) 349 мг с хорошим показателем истираемости. Готовые таблетки в дальнейшем обрабатывают с использованием стандартных процедур и известных специалисту в данной области ингредиентов: ставят печать, покрывают таблетки пленкой и полируют.

Пример 9

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 18 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 3 г кроскармеллозы натрия, 6 г пептизированного крахмала, 2 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 1 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ, Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8. Пример 10

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 2 г кроскармеллозы натрия, 8,5 г пептизированного крахмала, 1 ,5 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 2 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26°, насыпная плотность 0,48 Γ/CM ³ · Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Пример1 1

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (50 г Соединения I, 20 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 4 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 Γ/CM ³ · Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Пример 12

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (50 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 1 ,5 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 0,5 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 Γ/CM ³ · Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Пример 13

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (44 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 5 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 Γ/CM ³ · Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Композиции для ингаляционного введения могут быть получены с помощью способов получения композиций для небулайзеров, которые известны для специалиста в данной области:

Пример 14

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 10 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I).

Упаковка полученной суспензии осуществляется следующим способом: Конечную суспензию стерилизуют, в частности, подходящим является метод термической стерилизации с использованием пара. Аликвоты суспензии после стерилизации помещают в пригодные стерильные контейнеры, например, одноразовые контейнеры, такие как флаконы или ампулы, которые соответствующим образом формируют из термопластичных материалов. Пример 15

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 20 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.

Пример 16

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 30 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.

Пример 17

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 40 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14. Пример 18

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 5 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I).

Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется следующим способом:

Конечный раствор может быть стерилизован, например, путем фильтрации. После этого, полученный раствор может быть распределен в приемлемые контейнеры для применения в единичной дозе стандартной лекарственной формы, например, в стерильных флаконах или шприцах.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может иметь дозировку в количестве 5 мл раствора в каждой дозе, хотя можно использовать единичную дозу с большим объемом, например, до 30 мл.

В определенных вариантах осуществления, флаконы или шприцы, содержащие фармацевтическую композицию для инъекционного введения согласно техническому решению, стерилизуются в автоклаве, например, путем обработки при температуре примерно 121 ° С в течение примерно 15 минут.

Пример 19

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 25 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18. Пример 20

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 35 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 21

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 55 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 22

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 70 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18. Пример 23

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 5 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 24

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 25 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 25

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 35 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 26

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 55 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 27

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 70 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечному раствору дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Способ изготовления фармацевтической композиции согласно техническому решению в заявленных лекарственных формах, содержащий Соединение II, осуществляется аналогично способам, показанным выше в примерах 1 -27.

Объем данного технического решения не должен ограничиваться конкретными вариантами реализации, описанными в примерах, которые предназначены только для иллюстрации нескольких вариантов реализации заявленного технического решения. Различные модификации данного технического решения дополнительно к представленным и описанных в данной заявке очевидны для специалиста в данной области, и, предполагается, что они подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения. Для изучения фармацевтической эффекта от применения предложенной фармацевтической композиции согласно техническому решению, был проведен ряд исследований.

1 . Исследование антимикобактериальной активности соединений при аэробных условиях.

Антимикробную активность соединений в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv, который культивировали при аэробных условиях, оценивали путем определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) соединения, то есть концентрации, которая полностью прекращала рост бактерий. Метод основан на измерении роста бактерий в жидкой среде флуоресцентного репортерного штамма H37Rv, где показателями были или оптическая плотность, или флуоресценция. Использование двух параметров оценки минимизирует проблемы, вызванные преципитацией соединения или автофлуоресценцией. Рассчитывали значение ICso - концентрацию соединения, при которой рост микроорганизмов ингибируется на 50% и Юэо - концентрацию соединения, при которой рост микроорганизмов ингибируется на 90%.

МИК определяли путем измерения бактериального роста через 5 дней в присутствии исследуемых соединений. Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем двукратного уменьшения концентрации. Вещество разводили в среде 7H9-Tw-OADC (4,7 г/л питательной среды Middlcbrook 7Н9 Base (VWR), Tween 80 (Fisher) (0,05%), Middlebrook OADC Supplement (VWR) (10%)) в 96- луночных планшетах (финальная концентрация ДМСО составляла 2%). Каждый планшет содержал несколько контролей (только среда/ДМСО, без бактериальных клеток), отсутствие роста (100 мкМ рифампицина (Sigma-Aldrich)) и максимальный рост (только ДМСО). Планшеты инокулировали клетками М. tuberculosis и инкубировали в течение 5 дней: рост измеряли по оптической плотности (OD590) и флуоресценции (Ex 560/Ет 590), используя планшетный ридер BioTek™ Synergy 4. Для измерения численного значения МИК строили 10-точечную дозозависимую кривую как % роста и подгоняли к модели Гомпертца с использованием GraphPad Prism 5. МИК рассчитывали с точки перегиба кривой подогнанной к нижней асимптоте (отсутствующий рост бактерий). Кроме того, дозозависимые кривые генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрации, при которых наблюдалось ингибирование роста бактерий на 50% и на 90% (значение ICso и Юэо, соответственно).

Данные по антимикобактериальной активности соединений при аэробных условиях приведены в таблице 1 .

Таблица 1

Антимикобактериальная активность (МИК (мкМ), ICso (мкМ) и Юэо (мкМ)) Соединения I, Соединения II при аэробных условиях По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I и Соединение II проявляют достоверную антимикобактериальную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv при аэробных условиях.

2. Исследование антимикобактериальной активности соединений в условиях низкого содержания кислорода.

Антимикробную активность соединений в отношении штамма Mycobacterium tuberculosis H37Rv в условиях гипоксии определяли методом LORA (low oxygen recovery assay). Бактерии сначала адаптировали к условиям низкого содержания кислорода и затем экспонировали к соединениям при гипоксии. Это сопровождалось определенным периодом роста при аэробных условиях, а рост измеряли, используя люминесценцию.

Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем двукратного уменьшения концентрации. Вещества разводили в среде Dubos-Tw- Albumin (DTA) (6,5 г/л питательной среды Dubos Broth Base (Fisher), Dubos medium albumin (Fisher) (10%), Tween 80 (Fisher) (0,05%)) в 96-луночных планшетах (финальная концентрация ДМСО составляла 2%).

Клетки М. tuberculosis, которые конститутивно экспрессируют оперон luxABCDE инокулировали в среду DTA в газонепроницаемых стеклянных пробирках и инкубировали 18 дней для достижения условиях гипоксии (модель гипоксии Вейна). При отсутствии кислорода бактерии находятся в нереплицирующем состоянии. Их инокулировали в планшеты со средой, содержащей соединения и инкубировали в анаэробных условиях в течение 10 дней, а затем инкубировали в течение 28 часов в аэробных условиях. Кроме того, нереплицирующие бактерии инокулировали в планшеты со средой, содержащей соединения и инкубировали при аэробных условиях в течение 5 дней. Рост в обоих случаях измеряли по показателям люминесценции. Рифампицин (SigmaAldrich) и метронидазол (SigmaAldrich) использовали как положительные контроли гибели М. tuberculosis при аэробных и анаэробных условиях, соответственно.

Антимикобактериальная активность исследуемых соединений в условиях гипоксии приведена в таблице 2.

3. Исследование минимальной бактерицидной концентрации соединений. Бактерицидную активность соединений исследовали в отношении штамма

М. tuberculosis H37Rv, который выращивали в аэробных условиях в среде 7H9-Tw- OADC. Расчет живых клеток проводили через 3 недели экспозиции к соединениям для определения уровня гибели.

Клетки М. tuberculosis выращивали в аэробных условиях до логарифмической фазы и инокулировали в жидкую среду, содержащую четыре различные концентрации соединений с максимальной концентрацией ДМСО 2%. Для соединений со значением МИК> 20 μΜ, отобранные концентрации были 10Х МИК, 5Х МИК, 1Х МИК и 0,25Х МИК (200, 100, 20 и 5 μΜ). Культуры инкубировали с соединениями в течение 21 дня, а выживаемость клеток определяли путем подсчета колоний-образующих единиц на агаровых планшетах в 0-й, 7-й, 14-й и 21 - й день. Минимальную бактерицидную концентрацию определяли как минимальную концентрацию, необходимую для достижения 2-log гибели на 21 -й день.

ДМСО был использован в качестве положительного контроля роста. Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) соединений приведена в таблице 2.

Таблица 2

Активность соединений МИК (мкМ), ICso (мкМ), 1Сэо (мкМ) в анаэробных условиях и минимальная бактерицидная концентрация МБК (мкМ)

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I и Соединение II проявляют достоверную антимикобактериальную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv в условиях низкого содержания кислорода.

4. Исследование цитотоксичности и внутриклеточной активности,

а. Цитотоксичность.

Цитотоксичность соединений в отношении эукариотических клеток определяли на клеточной линии моноцитов человека ТНР-1 , Клетки дифференцировали в макрофагоподобные клетки с использованием 4-форбол-12 миристат-13-ацетата (ФМА) (Sigma-Aldrich) и инкубировали с соединениями в течение трех дней и определяли выживаемость клеток. Значение ICso определяли как концентрацию, которая приводит к снижению уровня выживания клеток на 50%.

Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем трехкратного уменьшения концентрации. Самая высокая концентрация тестируемого соединения составляла 50 мкМ, где соединения были растворимы в ДМСО в 10 мМ концентрации. Клетки ТНР-1 культивировали в среде RPMI (RPMI- 1640 (Fisher), эмбриональная бычья сыворотка, рН 7,2 (10%) (Fisher)), 2 мМ GlutaMAX (Fisher), 1 мМ пирувата натрия) и дифференцировали в макрофагоподобные, используя 80 нМ РМА в течение ночи при 37 °С, 5% СО2.

Клетки культивировали в плашках в течение 24 часов перед добавлением растворов соединений (финальная концентрация ДМСО составляла 0,5%). В качестве контроля использовали стауроспорин. Затем клетки инкубировали в течение 3 дней при 37 °С, 5% СО2; рост измеряли с помощью CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega), использующий АТФ как индикатор роста клеток. Относительные единицы люминесценции измеряли, используя планшетный ридер Biotek Synergy 4. Дозозависимую кривую генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрацию, при которой наблюдалось ингибирование роста бактерий на 50% (значение ICso) (таблица 3). Таблица 3

Цитотоксичность соединений (ICso, мкМ)

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I имеет низкий показатель цитотоксичности, поэтому является безопасным в использовании для лечения ТБ.

Ь. Измерение внутриклеточной активности.

Внутриклеточную активность соединений определяли при использовании клеток ТНР-1 , инфицированных М. tuberculosis. Клетки дифференцировали в макрофагоподобные клетки при использовании ФМА и инфицировали бактериями. Инфицированные клетки инкубировали с соединениями в течение 72 часов.

Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем трехкратного уменьшения концентрации. Самая высокая концентрация тестируемого соединения составляла 50 мкМ, где соединения были растворимы в ДМСО в 10 мМ концентрации. Клетки ТНР-1 культивировали в среде RPMI (RPMI- 1640 (Fisher), эмбриональная бычья сыворотка, рН 7,2 (10%) (Fisher)), 2 мМ GlutaMAX (Fisher), 1 мМ пирувата натрия) и дифференцировали в макрофагоподобные, используя 80 нМ РМА в течение ночи при 37 °С, 5% СО2.

Клетки ТНР-1 инфицировали люминесцентным штаммом H37R.V (который конститутивно экспрессирует luxABCDE) и инкубировали в течение ночи при 37 °С, 5% СО2. Инфицированные клетки восстанавливали с помощью раствора Accutase/EDTA (Fisher), дважды отмывали фосфатным буфером для удаления внеклеточных бактерий и высевали в планшеты. К клеткам добавляли растворы соединений (конечная концентрация ДМСО составляла 0,5%). Планшеты инкубировали в течение 72 ч. при 37 °С, 5% СО2. В качестве контроля использовали изониазид. Количество живых бактериальных клеток определяли по уровню люминесценции. Относительные единицы люминесценции определяли при использовании смесевого ридера Biotek Synergy 2. Дозозависимую кривую генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрации, при которых наблюдалось ингибирование роста бактерий на 50% и на 90% (значение ICso и Юэо, соответственно) (таблица 4).

Таблица 4

Внутриклеточная активность (ICso, Юэо (мкМ)) соединений

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I и Соединение II проявляют достоверные бактерицидные свойства в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv, где микобактерии локализуются внутриклеточно. Таким образом, использование Соединения I и Соединения II для лечения ТБ способствует более эффективному лечению и уменьшению рецидивов заболевания.

5. Исследование активности соединений по отношению к резистентным штаммам М. tuberculosis.

Активность соединений в отношении пяти резистентных штаммов М. tuberculosis определяли при аэробных условиях. Использовали два изониазидрезистентных штамма (INH-R1 и INH-R2), два рифампицинрезистентных штамма (RIF-R1 и RIF-R2) и фторхинолонрезистентный штамм (FQ-R1 ). Метод основан на измерении роста бактерий в жидкой среде по показателю оптической плотности. INH-R1 был получен из H37Rv (мутация гена katG (Y155 ^* )), INH-R2 - штамм АТСС35822, RIF-R1 был получен из H37Rv (мутация гена rpoB (S522L)), RIF- R2 - штамм АТСС35828. FQ-R1 был получен из H37Rv (мутация гена gyrB (D94N)).

МИК соединения определяли путем измерения бактериального роста через пять дней в присутствии исследуемого соединения. Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем двукратного уменьшения концентрации. Вещества разводили в среде 7H9-Tw-OADC в 96-луночных планшетах (финальная концентрация ДМСО составляла 2%). Каждый планшет содержал несколько контролей (только среда/ДМСО, без бактериальных клеток), отсутствие роста - (100 мкМ рифампицина (Sigma-Aldrich)) и максимальный рост (только ДМСО). Планшеты инокулировали клетками М. tuberculosis и инкубировали в течение 5 дней: рост измеряли по оптической плотности (OD590). Для измерения численного значения МИК строили 10-точечную дозозависимую кривую как % роста и подгоняли к модели Гомпертца с использованием GraphPad Prism 5. МИК рассчитывали с точки перегиба кривой подогнанной к нижней асимптоте (отсутствующий рост бактерий).

Кроме того, дозозависимые кривые генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрации, при которых наблюдали ингибирование роста бактерий на 50% и на 90% (значение IC50 и Юэо, соответственно).

МИК производных бензальдегида тиосемикарбазона (МИК, мкМ) в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis приведена в таблице 5, IC50 (мкМ) - в таблице 6, Юэо (мкМ) - в таблице 7.

Таблица 5

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК, мкМ) соединений в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis

Таблица 6

IC50 соединений в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis (мкМ)

Таблица 7 эо соединений в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis (мкМ)

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I и Соединение II проявляют антимикобактериальную активность в отношении пяти резистентных штаммов М. tuberculosis: (INH-R1 , INH-R2, RIF-R1 , RIF-R2, FQ-R1 ). Согласно результатам исследований, Соединение I и Соединение II в относительно небольших концентрациях могут быть использованы для лечения ТБ, который является резистентным по отношению к другим известным противотуберкулезным препаратам. Таким образом, использование Соединения I и Соединения II для лечения резистентного ТВ является целесообразным и более эффективным.

6. Фармакология безопасности.

Было проведено исследование фармакологии безопасности, по оценке воздействия Соединения I и Соединения II и их метаболитов на центральную нервную, сердечно-сосудистую, дыхательную и почечную системы. Никаких связанных с лечением эффектов на центральную нервную систему не было отмечено на уровнях концентрации вещества в плазме крови ~ в 10 раз выше, чем предложенные в клинике. Кроме того, не наблюдалось ни одного, связанного с лечением, эффекта, влияющего на частоту дыхания, при экспозициях, которые в 2,8 раза превышали максимальную предложенную в клинике дозу. При проведении ряда фармакологических исследований безопасности, проводимых для исследования влияния на сердечно-сосудистую систему, негативного фармакологического эффекта не наблюдалось. Также не было зафиксировано влияния на потенциал действия папиллярной мышцы при исследовании влияния Соединения I и Соединения II (> 13 мг/кг/сут) на мышечную сократительную активность морских свинок. Также было показано влияние на интервал QT in vivo после однократного введения внутрь кроликам, где уровень Соединения I и Соединения II в плазме был в <4, 1 , ^2,7 раза выше соответственно, чем у человека.

7. Фармакокинетика

Было проведено исследование абсорбции, распределения, метаболизма, экскреции и фармакокинетических исследований взаимодействия лекарственных средств для исследуемых Соединения I и Соединения II. У исследуемых животных биодоступность при пероральном введении ультрадисперсного порошка исследуемых соединений крысам и собакам составила соответственно 34,9% и 61 ,3% (Соединение I), 37% и 64% (Соединение II).

Для исследуемых двух соединений Стах и AUC увеличиваются в меньшей степени пропорционально дозе. У собаки, потребление пищи привело к заметному увеличению системной экспозиции после перорального введения исследуемых соединений.

Связывания Соединения I и Соединения II in vitro с белками и метаболитами сыворотки крови крыс, кроликов и человека было выше > 64%, > 84,4%, соответственно. Распределение исследуемых соединений и/или их метаболитов в легких наблюдалось как у крыс так и у кроликов. Радиоактивно меченые исследуемые соединения, после перорального ввода, характеризировались широким распределением. Наиболее высокое соотношение соединений по отношению к плазме/сыворотке наблюдалось в надпочечниках и печени, что кореллирует с путем вывода и исследуемыми мишенями токсического действия данных соединений.

После повторного введения исследуемых соединений в течение 21 дня наибольшее накопление меченого материала наблюдалось в тестикулах. Соотношение распределения исследуемых соединений в различных группах было < 1 через 48 и 72 часа. В целом, метаболизм исследуемых соединений, опосредуется прежде всего, плазматическим альбумином и в меньшей степени ферментами CYP3A4, CYP1A1 , CYP2D6 и CYP2E1 . После разового и повторного приема внутрь крысам и кроликам, уровень метаболитов в плазме был значительно ниже, чем исходного вещества для всех четырех соединений. Исследуемые соединения не выступали субстратом или ингибитором Р-гликопротеин обусловленного транспорта при исследовании in vitro. Исследование взаимодействия испытуемых с левофлоксацином показало, что концентрация Соединения I и Соединения II составляет 50-80%; следовательно, существует вероятность запрета совместного введения исследуемых соединений.

8. Острая токсичность и токсичность при повторных введениях

Исследование острой токсичности в условиях единоразового ведения, и подострой, субхронической и хронической токсичности в условиях повторных введений, было проведено на крысах и кроликах путем перорального и внутривенного введения общим сроком до 9 месяцев. Соединение I и Соединение II были относительно хорошо переносимы животными после однократного или многократного приема внутрь. У крыс одноразовые пероральные дозы LD50 составляли 1300 мг/кг Соединения I, 1500 мг/кг Соединения II. Смертность у крыс и кроликов после однократных и повторных токсичных уровней доз, в основном, была связана с повреждением скелетных мышц/дегенерацией миокарда и/или панкреатитом. 13-недельное исследование ежедневного перорального введения исследуемых соединений у крыс показало, что значение доз при котором отсутствует негативный еффект NOAEL составило 30 мг/кг (Соединение I), 25 мг/кг (Соединение II). Установлено, что в течение 26 недель системной экспозиции, которая в 5-10 раз была выше предложенной клинической концентрации в крови (С max) не проявлялся токсический эффект. Основными органами-мишенями у крыс были печень, скелетные мышцы, легкие, щитовидная железа и почки в долгосрочных исследованиях. Показано неполное восстановление ткани в течение 13-недельного периода без лечения.

9, Генотоксичность

Соединение I и Соединение II не проявляли влияние на генотоксический потенциал в стандартных тестах in vitro и in vivo, включая исследования на культуре Salmonella typhimurium, клетках лимфомы мышей и оценку мутагенного воздействия с помощью AMES test.

10, Канцерогенность.

Исследования канцерогенное™ на крысах Sprague-Dawley продолжаются. Учитывая отсутствие мутагенного эффекта, можно ожидать отсутствие канцерогенного действия.

1 1 , Репродуктивная токсичность

Потенциал репродуктивной токсичности исследовался у крыс и кроликов в исследованиях, охватывающих все стадии репродуктивного процесса. Соединение I и Соединение II не влияли на фертильность у самок крыс в условиях введения дозировок в 2-5 раз выше, чем ожидаемое применение в клинике. В исследованиях эмбриофетальной токсичности крыс и кроликов, исследуемые соединения не проявляли вредного влияния на развитие эмбрионов, а частота вариаций и аномалий в развитии плода в группах животных Соединения I и Соединения II не превышала нормы.

12, Исследования местно-раздражающего действия на при нанесении исследуемых соединений на сетчатку глаза не выявили значимого эффекта.

На втором этапе проводили клинические исследования с целью изучения безопасности, фармакокинетики и токсичности фармацевтической композиции согласно техническому решению.

На втором этапе проводили клинические исследования с целью изучения безопасности, фармакокинетики и токсичности фармацевтической композиции согласно технического решения.

Клинические исследования оральной, ингаляционной и ингаляционной формы фармацевтической композиции по техническим решениям проводились как на здоровых волонтерах, так и на пациентов с диагнозом туберкулез.

А. Изучение безопасности, фармакокинетики и токсичности Соединения I и Соединения II в оральной, ингаляционном и ингаляционном форме фармацевтической композиции по техническим решениям у здоровых добровольцев. 1 . Дизайн клинических исследований.

Изучение влияния оральной, инъекционной, ингаляционной формы фармацевтической композиции по техническим решениям с Соединением I Соединением II, было проведено путем трех или четырех последовательных клинических исследований Фазы I, II, III для каждого соединения. С учетом того, что Соединение I и Соединение II принадлежат к одному классу противотуберкулезных соединений, дизайн клинических исследований, методы оценки, общие требования к рассматриваемым субъектам были идентичными.

Во время исследований первой фазы, в которых изучалась безопасность, переносимость и фармакокинетика Соединения I и Соединения II в оральной, инъекционной форме, и в виде порошка для ингаляции у здоровых добровольцев, были проведены исследования для каждой формы препарата и каждого соединения.

1 ) В исследование для ингаляционной формы фармацевтической композиции были включены 2 группы по 20 здоровых добровольцев, по 5 субъектов в каждой из исследуемых подгрупп, которые получали соответственно дозы 10, 50, 100 и 150 мг Соединение I и Соединения II, путем использования простого 1нгалятора для доставки фармацевтической композиции.

Фармацевтическая композиция в ингаляционной форме содержит следующие компоненте в составе:

Соединение I или Соединение II

Микрокристаллическая целлюлоза

Натрия карбоксиметилцеллюлоза

Полисорбат 80

Двухосновный фосфат калия

Гидрохлорид натрия

Соляная кислота

Вода для иньекций

Ингаляции хорошо переносились всеми субъектами исследования. Наиболее распространенной неблагоприятной реакцией был легкий или умеренный кашель у пяти пациентов. У пациентов не было выявлено изменений в функции легких или в лабораторных параметрах. Соединение I и Соединение II быстро всасывается после аспирации. Была проведенная оценка системных концентраций ту каждой группе доз в течение 20 минут после аспирации. Пиковая и средняя концентрация Соединения I и Соединения II в плазме крови была пропорциональной к принятой дозе.

Концентрации в сыворотке крови превышали 1 ,8 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения I; 2, 1 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения II.

Период полураспада (t1/2) составил 4,5±1 , 1 часов для Соединения I; 4,8±1 ,3 часов для Соединения II. Фармацевтическая композиция в ингаляционной форме порошка с микрочастицами Соединения I, Соединения II, хорошо переносилась. Одноразовая доза в 150 мг для обоих соединений быстро достигла концентрацию препарата в сыворотке выше МИК для Mycobacterium tuberculosis, что свидетельствует о потенциале ингаляционной терапии как части режима лечения мультирезистентного туберкулеза легких.

С учетом того, что доклинические исследования инъекционных препаратов с Соединением I и Соединением II, выявили низкой уровень распределения этих препаратов в легких животных, получение ингаляционной формы позволяет укрепить и улучшить протоколы лечения мультирезистентного туберкулеза легких.

Все исследования включали пациентов обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет; которые в течение последних 6 месяцев не употребляли табака; не использовали лекарств; без патологических изменений в лабораторных анализах крови и мочи. Жизненный объем легких и другие параметры спирографии должны были соответствовать возрастной норме. В исследование не включались беременные женщины и женщины, кормящие грудью, пациенты с известной аллергией на любые антибиотики.

Во всех исследованиях была проведена оценка функции легких в начале исследования и после 24-х часов после получения исследуемой фармацевтической композиции. После включения в исследование пациентам была последовательно назначена одна из четырех доз соединений (10 мг, 50 мг, 100 мг и 150 мг) Соединения I и Соединения II.

Каждый субъект получал одну дозу ингаляционной формы фармацевтической композиции с Соединением I или Соединением II в соответствии с групповой дозой, которое самостоятельно вводил с помощью портативного ингалятора. Каждая группа проходила анализ крови для оценки фармакокинетики Соединения I и Соединения II в 13 часовых точках: перед применением; на 10, 20, 30 и 45 минуте после ингаляции дозы; а также на 1 , 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часа после дозы. Концентрации соединений были определены с помощью высокочувствительной жидкостной хроматографии (HPLC - MS/MS). Нижний предел количественного определения Соединения I в плазме человека представляла 73 мкг/мл, с точностью 85, 1 %; Соединения II представлял 75 мкг/мл с точностью 87,6 %. Линейный диапазон количественной оценки был определен от 63 до 3958 мкг/мл для Соединения I и Соединения II.

Кроме того, исследуемым субъектам были проведены анализ крови и мочи, аускультация и рентген грудной клетки через 24 часа по получении дозы для оценки безопасности препарата.

Клинические и демографические данные о субъектах исследования были оценены с использованием итоговых мероприятий. Оценка фармакокинетики состояла из параметров всех субъектов исследований, которые получили полную дозу исследуемых соединений и завершили исследования.

Анализ фармакокинетики проводился с помощью стандартных методов, которые используют в исследованиях на людях.

Далее приведены фармакокинетические данные Соединения I и Соединения

II.

Соединение I было выявлено в сыворотке крови в течение 21 минуты после ингаляции у 17/20 (85 %) пациентов; Соединение II было выявлено в сыворотке крови в течение 25 минут после ингаляции у 16/20 (80 %) пациентов. У двух субъектов начальное выявление Соединения I случилось в промежуток от 1 до 2,5 часов после ингаляции; у двух субъектов начальное выявление Соединения II случилось в промежуток от 1 ,2 до 2,4 часов после ингаляции. Все эти субъекты были в группах, которым бело назначена доза 10 мг (наименьшая).

Для Соединения I: в группе, которая получила дозу 10 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 901 мин- мкг/мл, тогда как в группе, которая получала дозу 150 мг, среднее AUC0-t составляло 16185 мин мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 130 мкг/мл, 841 мкг/мл, 1292 мкг/мл и 2576 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе представляла 1 ,48 часа (для группы 10 мг); 2, 1 часа (для группы 50 мг); 2,6 часа (для группы 100 мг) и 2,8 часа (для группы 150 мг); значение t1/2 составляло 4, 1 ±1 ,2 часа ( для группы 50 мг), 4,5±1 ,2 часа (для группы 100 мг) и 4,7±1 , 1 часа (для группы 150 мг).

Для Соединения II: в группе, которая получила дозу 10 мг, - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 845 мин- мкг/мл, тогда как в группе, которая получала дозу 150 мг, среднее AUC0-t составляло 16013 мин- мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 1 18 мкг/мл, 851 мкг/мл, 1258 мкг/мл и 2381 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе представляла 1 ,28 часа (для группы 10 мг); 2,3 часа (для группы 50 мг); 2,74 часа (для группы 100 мг) и 3,2 часа (для группы 150 мг); значение t1/2 составляло 4, 41 ±1 ,3 часа ( для группы 50 мг), 4,6±1 ,3 часа (для группы 100 мг) и 4,8±1 ,1 часа (для группы 150 мг). Для групп, которые принимали 10 мг Соединения I и Соединения II измерения, t не проводилось.

Данные о безопасности Соединения I, Соединения II.

Вдыхание Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV не было связано с изменениями клинических или лабораторных параметров. Легочная функция была неизменной после ингаляции. Функция почек не изменялась после введения препарата. Также не наблюдалось изменений в анализах функций печени, общих анализах крови и мочи. Аускультативная картина не изменялась после приема препарата во всех группах пациентов.

Данные относительно наличия побочных реакций.

В этом исследовании не было тяжелых или серьезных нежелательных реакций. Несколько субъектов испытали легкие/умеренные нежелательные реакции, наиболее распространенным был кашель, который встречался у 12 субъектов из 40 включенных в исследование в общем. При возникновении кашля он прекращался после введения препарата и заканчивался в течение 4-6 мин. Также пациенты отмечали такие побочные реакции: головную боль, ощущение сжатия в груди, жажду, умеренную слабость и утомляемость.

1 ) В клиническом исследовании Фазы I было проведено изучение влияния однократной дозы Соединения I и Соединения II в виде таблеток, покрытых оболочкой на здоровых волонтеров, были оценены безопасность и фармакокинетика у здоровых пациентов натощак.

Фармацевтическая композиция в пероральной форме в виде таблеток содержит следующие компоненте в составе: Соединение I или Соединение II

Микрокристаллическая целлюлоза

Гидроксипропилметилцеллюлоза

Кроскармеллоза натрия

Крахмал прежелатинизированный

Коллоидный диоксид кремния

Стеарат магния

Вода очищенная

В исследовании 01 для пероральной формы фармацевтической композиции для каждого из Соединения I, Соединения II, восемь субъектов получали однократно дозу 50 и 150 мг. Результаты этих исследований показали небольшую разницу в возникновении побочных реакций у добровольцев, которые получали 50 мг дозы относительно пациентов, которые получали дозу 150 мг Соединения I и Соединения II. Второе клиническое испытание фазы I (02) было проведено с назначением нескольких доз, клиническое испытание было разработано для дальнейшей оценки безопасности Соединения I и Соединения II у здоровых волонтеров. Безопасность исследуемых препаратов подтверждалась физикальним осмотром, мониторингом функций жизнедеятельности, оценкой изменений параметров лабораторных анализов крови, мочи, и документации побочных реакций. Системный уровень препарата измеряли в каждой группе доз.

Исследование 02 фазы I были рандомизированными, открытыми исследованиями с введением нескольких доз Соединения I и Соединения II, исследуемые препараты назначались в течение 7 дней в дозе 300 мг и 600 мг, а также изучалось состояние пациентов в течение 7 дней после приема препарата. Все пациенты получали дозы в течение 30 минут после стандартизированного завтрака. Пациенты были разделены на две группы для каждого исследования. В группы 1 было включено по восемь пациентов, которые были рандомизированы в группы, которые получали ежедневную дозу Соединения I и Соединения II в 600 мг, и по шесть пациентов были рандомизированы в группы 2, которые получали дозу 300 мг Соединения I и Соединения II. После назначения пациентам группы 1 дозы 600 мг в течение первых суток у большинства пациентов начали возникать побочные реакции для обоих соединений, что дало возможность сделать вывод, что назначение дозы в 450 мг для обоих соединений является безопаснее для пациентов. Следовательно, после пересмотра данных о безопасности была внесена поправка к протоколам исследования для продолжения исследования с меньшей дозой в 450 мг для группы 1 для всех соединений. Группа 2 состояла из шести субъектов, которые принимали ежедневную дозу 300 мг дозы Соединения I и Соединения II.

Исследования 02 Фазы I включали 7-дневный период наблюдения после последней дозы Соединения I и Соединения II, в течение которого пациенты не принимали никаких лекарств, предназначенное для оценки количества и тяжести побочных реакций, а также оценки временного промежутка, в течение которого исчезало подавляющее количество побочных реакций. Безопасность подтверждалась физикальним осмотром, мониторингом функций жизнедеятельности, оценкой изменений параметров лабораторных анализов крови, мочи, и документации побочных реакций.

2. Побочные реакции, которые наблюдались после введения Соединения I и Соединения II у здоровых добровольцев.

Наиболее распространенной побочной реакцией, выявленной при проведении обследований пациентов клинических исследований Фазы I, была тошнота. Другими распространенными побочными реакциями были головная боль, головокружение, сердцебиение, нарушение сна, тошнота, слабость, сухость кожи.

Жизненные функции и данные физикальной оценки находились в пределах возрастной нормы и не имели существенных отличий в обоих исследованиях. Все изменения, выявленные во время электрокардиограммы были расшифрованы как клинически незначительные и ограничивались возрастными нормами.

В клинических исследованиях Фазы I были выявлены побочные реакции, изменения лабораторных показателей и проводилось изучение фармакокинетики Соединения I и Соединения II у здоровых добровольцев, которые принимали исследуемый препарат в дозе 50, 100, 300, 450 мг.

Большее количество побочных реакций наблюдались у пациентов, которые получали дозу Соединения I и Соединения II в 450 мг.

Тяжесть побочных реакций, частота распространения побочных реакций, распределение побочных реакций по отношению к органам и системам организма для исследований 01 и 02 предоставлено в таблице 8.

На основании данных таблицы 8 можно сделать вывод, что количество побочных реакций, их тяжесть непосредственно зависит от дозы Соединения I и Соединения II, а также длительности приема Соединения I и Соединения II.

Показатели фармакокинетики Соединения I и Соединения II в клинических исследованиях 01 и 02 в цельной крови были схожими с концентрациями Соединения I и Соединения II в плазме. В сравнении с данными, полученными при исследованиях на животных, можно сделать вывод о том, что у людей Соединение I и Соединение II имели более высокую концентрацию в сыворотке крови (1 ,69: 1 ; 1 ,67: 1 ). Проведенные исследования фармакокинетики были направлены на изучение концентраций Соединения I и Соединения II в плазме крови.

Измерение концентрации в плазме непосредственно Соединения I и Соединения II и их трех основных метаболитов (IN-2401 , IN-2402 и IS-2406), а также 5 других метаболитов (IS-2501 , 2512, 261 1 -2613) которые являются одинаковыми для всех изученных соединений, проводили с использованием специфической и чувствительной методики HPLC-MS/MS. Исследование показало линейную зависимость концентрации в диапазоне 1 -510 нг/мл для Соединения I, 1 -515 нг/мл для Соединения II в плазме и 1 -97 нг/мл для Соединения I, 1 -1 12 нг/мл для Соединения II для концентраций метаболитов. Концентрации Соединения I и Соединения II в моче не определялись из-за низкой экскреции, продемонстрированную хроматографией. Таблица 8

Тяжесть побочных реакций в исследованиях 01 и 02

для Соединения И, Соединения II

Абсолютная оральная биодоступность Соединения I и Соединения II у человека не определена. Допуская, что Соединение I и Соединение II не выделяются без изменений у людей (основываясь на отсутствии экскреции системой желчеотделения в доклинических исследованиях), проведено наблюдение, что 55, 1 - 74,7 % дозы Соединения I; 52,2 - 75,4 % дозы Соединения II в неизменном виде выводится с фекалиями, что свидетельствует о том, что от 25 до 49 % дозы Соединения I и Соединения II всасывается в кишечно-желудочном тракте.

В исследовании с одноразовым назначением Соединения I и Соединения II было обнаружено меньшее дозозависимое увеличение экспозиции Соединения I и Соединения II и их первичных метаболитов. При применении единичных доз 50-450 мг натощак практически не было выявлено разниц! в Стах или AUC0-°° между группами, которые получали 50 мг, и группами, которые получали 150 мг. Хотя Стах и AUC0- ⁰⁰ на 150, 300 и 450 мг увеличились при увеличении дозы, увеличения были меньшими относительно к пропорциям дозы.

Введение одиночных доз Соединения I, Соединения II, для субъектов исследований 01 не показало линейности для коэффициентов накопления Стах или AUC, значения коэффициентов накопления Cmax, AUC 0-12, AUC 0-24, С12 и С24 у здоровых добровольцев при введении дозы в 300 мг и 450 мг для Соединения I, Соединения II, предоставлено в таблице 9.

Таблица 9

Коефициэнты накопления Cmax, AUC 0-12, AUC 0-24, С12 та С24 у здоровых добровольцев при введении дозы в 300 мг и 450 мг

для Соединения I, Соединения II

Исходя из предыдущих исследований фармакокинетики на животных и результатов исследований 01 и 02, был сделан вывод, что Соединение I и Соединение II удовлетворительно всасывается в желудочно-кишечном тракте, легко проникает через гематоэнцефалический барьер, равномерно распределяется в разных тканях и жидкостях организма. После перорального введения максимальная концентрация Соединения I и Соединения II в крови определяется в среднем на 2,4-3,4 часа, концентрация в крови после приема одной дозы сохраняется до 24 часов. Выведение препарата происходит в основном с почками в виде неактивных метаболитов, небольшая часть выделяется с фекалиями.

3) В исследование для инъекционной формы включены 2 группы по 20 здоровых волонтеров, по 5 субъектов в каждой из исследуемых подгрупп, которые получали соответственно дозы 50, 150, 300 и 450 мг Соединения ! и Соединения II в виде раствора для инъекций, который вводился внутривенно, используя 200 мл раствора натрия хлорида 0,9 % для инфузий.

Фармацевтическая композиция в инъекционной форме в виде т раствора для инъекций содержит следующие компоненте в составе:

Соединение I или Соединение II

Этанол

Двухосновный фосфат калия

Гидроксид натрия

Соляная кислота

Вода для иньек ий

Инъекции хорошо переносились всеми субъектами исследования. Наиболее распространенной неблагоприятной реакцией было легкая или умеренная тошнота, которая наблюдалась во всех группах пациентов. У пациентов не было выявлено изменений в функции внутренних органов или лабораторных параметров. Соединение I и Соединение II быстро распространяется по органам и системам после введения. Была проведена оценка системных концентраций в каждой группе доз в течение 10 минут после инъекции. Пиковая и средняя концентрация Соединения I и Соединения II в плазме крови была пропорциональной к введенной дозе. Концентрации в сыворотке крови превышали 2,48 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения I; 2,75 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения II; период полураспада (t1/2) представлял 3,4±1 ,2 часа для Соединения I; 3,5±1 , 1 часа для Соединения II. Инъекционное введение Соединения I и Соединения II хорошо переносилось. Одноразовая доза в 150 мг для обоих соединений быстро достигала концентрации препарата в сыворотке выше МИК для Mycobacterium tuberculosis, что свидетельствует о потенциале инъекционной формы Соединения I и Соединения II в терапии лечения мультирезистентного туберкулеза легких.

Во все исследования включали пациентов обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет; которые в течение последних 6 месяцы не употребляли табака, не использовали лекарств, без патологических изменений в лабораторных анализах крови и мочи. В исследование не включались беременные женщины и женщины, которые кормят грудью, пациенты с известной аллергией на любые антибиотики.

Во всех исследованих была проведена оценка функции внутренних органов в начале исследования и после 24-х часов от получения исследуемого препарата. После включения в исследование пациентам было последовательно назначено одна из четырех доз (50 мг, 150 мг, 300 мг и 450 мг) Соединения I и Соединения II.

Каждый субъект получал одну инъекцию Соединения I и Соединения II в соответствии с групповой дозой, которая вводилась под надзором квалифицированных специалистов. Каждая группа проходила анализ крови для оценки фармакокинетики Соединения I и Соединения II в 13 часовых точках: перед применением; на 10, 20, 30 и 45 минуте после введения дозы; а также на 1 , 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часов после дозы. Концентрации действующего вещества были определены с помощью высокочувствительной жидкостной хроматографии (HPLC- MS/MS). Нижний предел количественного определения Соединения I в плазме человека представлял 81 ,2 мкг/мл, с точностью 86,0 %; Соединения II представлял 84 мкг/мл с точностью 86,4 %. Линейный диапазон количественной оценки был определен от 75 до 3695 мкг/мл для Соединения I и Соединения II.

Кроме того, исследуемым субъектам были проведены анализ крови и мочи, оценка состояния внутренних органов через 24 часа после получении дозы для оценки безопасности препарата.

Клинические и демографические данные о субъектах исследования были оценены с использованием итоговых мероприятий. Оценка фармакокинетики состояла из параметров всех субъектов исследования, κοτορίβ получили полную дозу исследуемой фармацевтической композиции и завершили исследование.

Анализ фармакокинетики проводился с помощью стандартных методов, которые используют в исследованиях на людях.

Фармакокинетические данные.

Соединение I и Соединение II были выявлены в сыворотке крови у 100 % исследуемых в течение 5 минут. У одного субъекта начальное выявление Соединения I случилось в промежуток от 1 , 1 до 2,6 минут после инъекции; у двух субъектов начальное выявление Соединения II случилось в промежуток от 1 ,3 до 2,8 минут после инъекции. Все эти субъекты были в группах, которым была назначена доза 50 мг (самая низкая).

Для Соединения I: в группе, которая получила дозу 50 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) представляло 1674 мин- мкг/мл, тогда как в группе, которая получала дозу 150 мг, средний AUC0-t представляла 32452 мин- мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 262 мкг/мл, 1724 мкг/мл, 2461 мкг/мл и 4756 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе представляла

13.2 минуты (для группы 50 мг); 12 минуты (для группы 150 мг); 12,8 минуты (для группы 300 мг) и 12,9 минуты (для группы 450 мг); значение t1/2 представляли 2,2±1 , 1 часа ( для группы 50 мг), 2, 41 ±1 ,4 часа (для группы 150 мг) и 2,7±1 ,5 часа (для группы 300 мг), 2,9±1 ,5 часа (для группы 450 мг) .

Для Соединения II: в группе, которая получила дозу 50 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) представляло 1698 мин- мкг/мл, тогда как в группе, которая получала дозу 150 мг, средний AUC0-t представляла 29169 мин- мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 251 мкг/мл, 1597 мкг/мл, 2561 мкг/мл и 4851 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе представляла

12.3 минуты (для группы 50 мг); 13,1 минуты (для группы 150 мг); 12,8 минуты (для группы 300 мг) и 12,9 минуты (для группы 450 мг); значение t1/2 представляли 2,5±1 ,2 часа ( для группы 50 мг), 2,8±1 ,3 часа (для группы 150 мг) и 2, 91 ±1 ,1 часа (для группы 300 мг), 2,87±1 , 1 часа (для группы 450 мг). Данные о безопасности фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II.

Инъекции Соединения I и Соединения II не были связаны с изменениями клинических или лабораторных параметров. Функция почек не изменялась после введения препарата. Также не наблюдалось изменений в анализах функций печенки; общему анализу крови и мочи.

Даннеы относительно побочных реакций после введения фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II.

В этом исследовании не было тяжелых или серьезных нежелательных реакций. Несколько субъектов испытали легкие/умеренные нежелательные реакции, наиболее распространенными явлениями была тошнота и головная боль, которая встречалась у 26 субъектов из 40 включенных в исследование в общем. Также пациенты отмечали таки побочные реакции: жажду, умеренную слабость, утомляемость, сухость в рту.

А. Эффективность лечения Соединением I, Соединением II, у больных туберкулезом - клинические исследования 02 и 03.

После проведения клинических испытаний у здоровых добровольцев следующим шагом было провести исследование у пациентов с подтвержденным мультирезистентным туберкулезом, индуктируемым М. tuberculosis (исследование 02 и 03).

1 ) Оральная и инъекционная формы.

В связи с тем, что в терапии мультирезистентного туберкулеза рутинно используются схемы, которые комбинируют оральные и инъекционные схемы лечения туберкулеза, было принято решение о проведении одновременных исследований для Соединения I и Соединения II, которые будут исследовать последовательное лечение пациентов инъекционными и оральными формами.

Исследование 03 Фазы II были плацебо-контролируемыми, двойными слепыми, рандомизированными исследованиями для оценки антибактериальной активности, безопасности и переносимости Соединения I и Соединения II в виде раствора для инъекций по 100 мг в флаконе, и таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 и 300 мг у пациентов с мультирезистентной формой легочного туберкулеза с подтвержденным бактериовыделением путем исследования мокроты больных. Больные в исследовании были разделены в 2 группы. Группы 1 получали Соединение I и Соединение II в виде раствора для инъекций по 100 мг в флаконе, Группы 2 получали лечение оральной формой (таблетки, покрытые пленочной оболочкой по 150 и 300 мг.).

Исследования проводились в 2 последовательных этапа: 1 -й этап исследования (8 недель лечение Соединением I и Соединением II) и 2-й этап подтверждение эффективности (24 недели лечения Соединением I и Соединением II ). Субъекты, которые участвовали в первом этапе, не имели права вступать в этап 2, Анализ этапов проводился отдельно. После фазы лечения субъекты продолжали получать лечение согласно протоколов лечения больных мультирезистентным туберкулезом, утвержденных ВОЗ. Качественный состав исследуемой фармацевтической композиции в оральной и инъекционной форме не отличался от состава, использованного в исследованиях 01 и 02, в соответствии с назначенной дозой.

Исследования были направлены на изучение безопасности, переносимости, и микробиологической эффективности Соединения I и Соединения II на протяжении 24 недель по получении последней дозы Соединения I и Соединения II или плацебо. Исследования состояли из двух этапов, которые быстрее можно считать двумя отдельными исследованиями. Однако оба этапа имели одинаковые методы, конечные точки и режимы назначения сопутствующей терапии. После проведения скрининга (в течение первой недели исследования), пациенты, которые отвечали критериям исследования были госпитализированы в лечебное заведение. Режимы лечения, назначенные схемы лечения на этапах 1 и 2, приведены в таблице 10.

Включение пациентов.

В соответствии с протоколами исследований процедура блочной рандомизации проводилась отдельным расслепленным членом исследовательской команды. Распределение пациентов к группам лечения состоялось следующим образом.

Таблица 10

Схемы лечения

Период скрининга (неделя - 1)

Лечения не проводилось.

Период лечения (8 недели на этапе 1 , 24 недели на этапе 2):

Недели 1 и 2:

- оральная форма: 300 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV или плацебо (1 : 1) в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 или 300 мг

- инъекционная форма: 300 мг Соединения I, Соединения II, или плацебо (1 :1 ) в виде раствора для инъекций;

Неделя 3-8 (этап 1):

- оральная форма: 300 мг Соединения I, Соединения II, или плацебо (1 :1) в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 или 300 мг

-ш'екцшна форма,: 300 мг Соединения И, Соединения II, или плацебо (1 :1) в виде раствора для инъекций;

Недели 3-24 (этап 2):

- оральная форма: 450 мг Соединения И, Соединения II, или плацебо 1 раз в сутки (1 :1) в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 или 300 мг

- инъекционная форма: 450 мг Соединения I, Соединения II, или плацебо (1 :1) в виде раствора для инъекций.

Длительность наблюдения ( потом отмены лечения) 24 недели для этапов 1 и 2 Наблюдения происходили в течение 6 месяцев, по крайней мере, в течение 3-х месяцев по получении первого негативной исследование мокроты.

В группы исследуемой фармацевтической композиции и в группы плацебо включалось одинаковое количество пациентов, независимо от пола пациентов. В целом в исследовании приняло участие 158 пациентов для Соединения I; 160 для Соединения II. Распределение пациентов к группам оральной и инъекционной формы происходило поочередно. Таким образом, исследование для оральной и инъекционной группы пациентов происходило на одинаковом количестве пациентов для каждого из соединений. Пациенты, которые были рандомизованы, но по какой-либо причине были исключены из исследования, были включены в анализ безопасности исследуемого препарата.

Плацебо был сделан должным образом: вид исследуемой фармацевтической композиции и плацебо не имел отличий. Исследуемые препарат/плацебо пациенты получали в течение 10 минут после завтрака для оральной формы, или через 30 минуты после завтрака для инъекционной формы. Препараты сопутствующей терапии принимались перед завтраком. Наблюдение за лечением проводилось в течение всех этапов лечения и периода наблюдения. Все лекарства принимались под надзором квалифицированного медицинского персонала.

Поддерживающая терапия.

Поддерживающая терапия состояла из 5 агентов, которые давали в течение 3-6 месяцев (по крайней мере, 3 месяца после первого документального подтверждения негативного посева мокроты): канамицин, офлаксацин, етионамид, пиразинамид и циклосерин/теризидон. Дозирование препаратов с агентами сопутствующей терапии приведено в таблице 1 1 .

Пациенты, которые получали исследуемые препараты Соединения I и Соединения II в виде раствора для инъекций получали поддерживающую терапию в виде оральных форм препаратов.

Таблица 1 1

Агенты сопутствующей терапии, которые используют в поддерживающей терапии у пациентов с мул ьти резистентным туберкулезом в исследовании 03

Поддерживающая терапия для каждого участника исследования была назначена в соответствии с протоколами лечения туберкулеза ВОЗ. Некоторые загодя определенные изменения позволялись в случае отсутствия препарата или выявления у пациента непереносимости отдельных препаратов. Если изменения поддерживающей терапии были проведены по причинам токсичного эффекта препарата или в связи с угрозой относительно безопасности здоровью пациента, об этом было поставлено в известность как о побочной реакции. Изменения (у заранее определенных участников исследования) по причинам выявления резистентности к препарату (в посеве мокроты, полученных во время лечения или наблюдения).

Лечение проводилось с использованием утвержденной терапии на протяжении всего исследования, со временем (то есть, когда пациент был выписан из больницы) по протоколу лечения под надзором участкового фтизиатра.

Индивидуальные схемы поддерживающей терапии могли изменяться со временем (главным образом в течение периода наблюдения) с добавлением некоторых этих других препаратов (в частности ПАСК и капреомицина). Такие изменения были более распространены в группе плацебо, чем в группах Соединения I и Соединения II.

Этап 1 : Целью этапа 1 было оценить антибактериальную активность, безопасность и переносимость Соединения I и Соединения II в сравнении с плацебо при добавлении к стандартной терапии лечения мультирезистентного туберкулеза в течение 8 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких по получении позитивного посева мокроты.

Этап 2: Основная цель 2-го этапа заключалась в том, чтобы продемонстрировать преимущество антибактериальной активности Соединения I и Соединения II в сравнении с плацебо, который добавляется к стандартной терапии в течение 24 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких по получении позитивного посева мокроты.

Первичная конечная точка эффективности.

Первичной конечной точкой эффективности является время получения негативного посева мокроты во время лечения Соединением I и Соединением II, или плацебо. Этот параметр базировался на качественной оценке роста культуры на жидких и твердых средах с использованием образцов мокроты.

Подтверждением преимущественной эффективности было получение двух последовательных негативных посевов культуры мокроты, полученных в течение 8 недель на этапе 1 , На этапе 2 применялось такое же определение, однако негативные культуры должны были быть получены в интервале по меньшей мере 25 дней один от другого. Случаи получения 1 -го негативного результата посева, после которого был получен 1 или 2 позитивных результата были определены в отчете как рецидив заболевания (во время лечения или после прекращения лечения). Для тех, кто прекратил участие в исследовании до конца периода наблюдения расчет времени получения негативного посева мокроты не применялся.

Полный курс лечения: полностью пролеченным считался пациент с мультирезистентным туберкулезом, который прошел лечение в соответствии с протоколом и имел постоянно негативные результаты посева мокроты (по крайней мере три последовательных результата) в течение последних 6 месяцев лечения. Если в течение этого времени сообщается лишь об одном позитивном посеве мокроты, пациент все равно будет считаться вылеченным, при условии, что за этим следовали по крайней мере три последовательных негативных посева мокроты в течение по меньшей мере 56 дней.

Соотношение времени и получения негативного посева мокроты. Культуральная эрадикация была выявлена быстрее и более часто в группах Соединения I и Соединения II в сравнении с группой плацебо; среднее время получения негативного посева было от 19 до 126 дней для обоих соединений. (Получен значительный результат с использованием статистической модели).

Микробиологические тесты образцов мокроты, проведенные последовательно у пациентов, которые получали Соединение I и Соединение II, и у пациентов в группе плацебо, показали, что в группе Соединения I и Соединения II рост М. Tuberculosis существенно замедлился, Соединение I и Соединение II демонстрируют высокую эффективность против мультирезистентных штаммов М. Tuberculosis. Были получены результаты того, что Соединение I и Соединение II влияют на штаммы М. Avium complex, полученные в посеве мокроты в 5 % пациентов в группах Соединения I и Соединения II, назначения препаратов с Соединением I и Соединением II привело к значительному замедлению роста и полному прекращению роста в образцах, полученных после 24 недели лечения, при том, что у пациентов группы плацебо, в образцах которых также были выявленные штаммы М. Avium complex, не было получено значительного замедления роста этих штаммов.

При лечении у пациентов групп Соединения I и Соединения II в течение длительного периода были зарегистрированы следующие побочные реакции, такие как "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головную боль; со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, запор, сухость в рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижение аппетита, повышение уровня печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия; со стороны кожи - зуд, сыпь (макулезно-папулезная сыпь); со стороны сердечно-сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди, со стороны нервной системы - нарушения сна, нарушения памяти; со стороны кроветворной системы: гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия; со стороны опорно-двигательного аппарата - артралгия, миалгия.

Данные, полученные от больных туберкулезом, свидетельствуют, что лечение Соединением I и Соединением II выявило гораздо меньшие побочные эффекты, тяжесть и длительность были менее выраженными, чем у пациентов, которые получали стандартное лечение. Количество побочных реакций у пациентов в группе плацебо существенно не отличалось от группы пациентов, которые получали Соединение I и Соединение II, поэтому можно сделать вывод, что большинство побочных реакций, которые зарегистрированы в исследованиях, были вызваны препаратами поддерживающей терапии.

Проведен рероспективний анализ по сравнению данных, полученных от исследований препаратов, которые содержат Соединение I и Соединение II, и исследований, которые имели сходный дизайн и использовали аналогичные классы противотуберкулезных препаратов в лечении мультирезистентного туберкулеза легких. Полученные сравнительные данные говорят о том, что статистически тяжесть и длительность побочных реакций не имеют большого отличия для исследований Соединения I и Соединения II, что позволяет сделать вывод, что препараты Соединения I и Соединения II являются безопасными и эффективными при применении у пациентов согласно стандартам лечения ВОЗ.

2) Ингаляционная форма.

Исследование 02 Фазы II для Соединения I и Соединения II были плацебо- контролируемыми, двойными слепыми, рандомизированными исследованиями для оценки антибактериальной активности, безопасности и переносимости Соединения

I и Соединения II в виде порошка для ингаляций в дозировании 50, 100 и 150 мг у пациентов с мультирезистентной формой легочного туберкулеза с подтвержденным бактериовыделением путем исследования мокроты больных. Качественный состав исследуемой фармацевтической композиции в виде порошка не отличался от состава, использованного в исследованные 01 , в соответствии с назначенной дозой.

Исследование проводилось в 2 последовательныж этапа: 1 -й этап исследования (8 недели лечения Соединением I и Соединением II ) и 2-й этап подтверждения эффективности (24 недели лечения Соединением I и Соединением

II ). После фазы лечения субъекты продолжали получать лечение согласно протоколов лечения больных мультирезистентным туберкулезом, утвержденных ВОЗ . Исследование было направлено на изучение безопасности, переносимости, и микробиологической эффективности Соединения I и Соединения II на протяжении 24 недель по получении последней дозы Соединения I и Соединения II или плацебо. Исследование состояло из двух этапов, которые скорее можно считать двумя отдельными исследованиями. Однако оба этапа имеют одинаковые методы, конечные точки и режимы назначения сопутствующей терапии.

После проведения скрининга (в течение первой недели исследования), пациенты, которые отвечали критериям исследования, были госпитализированы в лечебное заведение. Режимы лечения, назначенные на этапах 1 и 2, приведены в таблице 12.

Включение пациентов.

В соответствии с протоколом исследования процедура блочной рандомизации проводилась отдельным членом исследовательской команды. Распределение пациентов к группам лечения состоялось следующим образом.

Таблица 12

Схемы лечения

Период скрининга (неделя - 1)

Лечения не проводилось.

Период лечения (8 недели на этапе 1 , 24 недели на этапе 2 ):

Недели 1 и 2: 300 мг Соединения И, Соединения II, или плацебо (1 : 1) назначают как в режиме ингаляций в дозировании 150 мг 2 разы на сутки

Неделя 3-8 (стадия 1);

Недели 3-24 (стадия 2): 150 мг Соединения И, Соединения II, или плацебо назначают как в режиме ингаляций 1 раз в сутки.

Длительность наблюдения ( потом отмены лечения) 24 недели для этапов 1 и 2 Наблюдения происходили в течение 6 месяцев, по крайней мере, в течение 3-х месяцев по получении первого негативной исследование мокроты. В группу Соединения I было рандомизировано 58 пациентов, в группу плацебо было включено 62 пациентов, в целом в исследовании приняло участие 120 пациента. В группу Соединения II было рандомизировано 65 пациентов, в группу плацебо было включено 64 пациент, в целом в исследовании приняло участие 129 пациентов. Пациенты, которые были рандомизованы, но по какой-либо причине были исключены из исследования, были включены в анализ безопасности исследуемого препарата.

Соединение I и Соединение II были представлены как порошок для ингаляций, дозированием по 100 и 150 мг. Плацебо был сделан должным образом, вид исследуемой фармацевтической композиции и плацебо не имел отличий. Ингаляцию исследуемого препарата/плацебо пациенты получали в течение 30 минут после завтрака. Препараты сопутствующей терапии принимались перед завтраком. Наблюдение за лечением проводилось в течение всех этапов лечения и периода наблюдения было введено непосредственно наблюдаемым лечением. Все лекарства принимались под надзором врача.

Поддерживающая терапия.

Поддерживающая терапия состоит из 5 агентов, которые давали в течение 3-6 месяцев (по крайней мере, 3 месяца после первого документального подтверждения негативного посева мокроты): канамицин, офлаксацин, етионамид, тразинамид и циклосерин/теризидон. Дозирование агентов сопутствующей терапии приведено ниже.

Таблица 13

Агенты сопутствующей терапии, которые используют в поддерживающей терапии у пациентов с мультирезистентным туберкулезом в исследовании 03

Поддерживающая терапия для каждого участника исследования была назначена в соответствии с протоколами лечения туберкулеза ВОЗ. Некоторые заранее определенные изменения позволялись в случае отсутствия препарата или выявления у пациента непереносимости отдельных препаратов. Если изменения поддерживающей терапии были проведены по причинам токсичного эффекта препарата или в связи с угрозой относительно безопасности здоровью пациента, об этом было поставлено в известность как о побочной реакции. Изменения (у ззарнее определенных участников исследования) по причинам выявления резистентности к препарату (в посеве мокроты, полученных во время лечения или спостреження ).

Лечение проводилось с использованием утвержденной терапии на протяжении всего исследования, по времени (то есть, когда пациент был выписан из больницы) по протоколу лечения под надзором участкового фтизиатра.

Индивидуальные схемы поддерживающей терапии могли изменяться со временем (главным образом в течение периода наблюдения) с добавлением некоторых таких других препаратов (в частности ПАСК и капреомицина). Такие изменения были более распространены в группе плацебо, чем в группе Соединения I и Соединения II.

Этап 1 : Целью этапа 1 было оценить антибактериальную активность, безопасность и переносимость Соединения I и Соединения II в сравнении с плацебо при добавлении к стандартной терапии лечения мультирезистентного теберкульозу в течение 8 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких по получении позитивного посева мокроты.

Этап 2: Основная цель 2-го этапа заключалась в том, чтобы продемонстрировать преимущество антибактериальной активности Соединения I и Соединения II в сравнении с плацебо, который добавляется к стандартной терапии в течение 24 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких по получении позитивного nociBa мокроты.

Первичная конечная точка эффективности.

Первичной конечной точкой эффективности является время получения негативного посева мокроты во время лечения Соединением I и Соединением II или плацебо. Этот параметр базировался на качественной оценке роста культуры на жидких и твердых средах с использованием образцов мокроты.

Подтверждением преимущественной эффективности было получение двух последовательных негативных посевов культуры мокроты, полученных в течение 8 недель на этапе 1 , На этапе 2 применялось такое же определение, однако негативные результаты должны были быть получены в интервале по меньшей мере 25 дня один от другого. Случаи получения 1 -го негативного результата посева, после которого был получен 1 или 2 позитивных результата, были определены в отчете как рецидив заболевания (во время лечения или после прекращения лечения).

Для тех, кто прекратил участие в исследованиях до конца периода наблюдения, расчет времени получения негативного посева мокроты не применялся.

Полный курс лечения: полностью пролеченным считался пациент с мультирезистентным туберкулезом, который прошел лечение в соответствии с протоколом и имел постоянно негативные результаты посева мокроты ( по крайней мере три последовательных результата) в течение последних 6 месяцев лечения. Если в течение этого времени сообщалось лишь об одном позитивном посеве мокроты, пациент все равно будет считаться вылеченным, при условии, что за этим следовали по крайней мере три последовательных негативных посева мокроты в течение по меньшей мере 56 дней.

Популяции пациентов в исследованиях.

Определены три подгруппы:

1 . Пациенты основной группы: все рандомизированные пациенты, которые получали по крайней мере 1 дозу исследуемого препарата/плацебо.

2. Модифицированная группа, которая принадлежит к основной группе лечения, подгруппа основной группы за исключением:

- пациенты, результаты посева которых не позволяют оценить первичную эффективность (то есть нет позитивного посева мокроты к первому приему или отсутствующие негативные данные посева мокроты в течение первых 8 недели после первого приема).

- субъекты, инфицированные штаммом М. tuberculosis DS или XDR или субъекты, для которых статус мультирезистентного туберкулеза не может быть подтвержден на основе результатов посева мокроты, полученных к рандомизации.

3. Относительно протокола исследования: подгруппа пациентов, у которой не было серьезных нарушений протокола.

Соотношение времени и получение негативного посева мокроты.

Культуральная эрадикация была выявлена быстрее и более часто в группе Соединения I и Соединения II в сравнении с группой плацебо; среднее время получения негативного посева было от 50 до 1 12 дней для групп Соединения I и Соединения II.

Микробиологические тесты образцов мокроты, проведенные последовательно у пациентов, которые получали Соединение I и II, и у пациентов в группе плацебо, показали, что в группе Соединения I и Соединения II рост М. Tuberculosis существенно замедлился, Соединение I и Соединение II демонстрируют высокую эффективность против мультирезистентных штаммов М. Tuberculosis. Были получены данные о том, что Соединение I и Соединение II влияют на штаммы М. Avium complex, полученные в посеве мокроты, у 7 % пациентов в группе Соединения I, у 5 % пациентов в группе Соединения II, назначение Соединения I и Соединения II привело к значительному замедлению роста и полному прекращению роста в образцах, полученных после 24 недели лечения, при том, что у пациентов группы плацебо, в образцах которых также были выявленные штаммы М. Avium complex, не было получено значительного замедления роста этих штаммов.

При лечении у пациентов группы Соединения I и Соединения II в течение длительного периода были зарегистрированы следующие побочные реакции, такие как: со стороны сердечно-сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди; со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, запор, сухость в рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижения аппетита, повышения уровню печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия; со стороны кожи - зуд, сыпь (макулезно-папулезная сыпь); со стороны нервной системы - нарушения сна, нарушения памяти; со стороны кроветворной системы: гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия; со стороны опорно-двигательного апарату- артралгия, миалгия, "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головную боль.

Следует заметить, что наиболее распространенной побочной реакцией среди всех групп пациентов, и которая возникла больее чем у 81 % пациентов, был кашель разной степени тяжести. У некоторых пациентов возникла необходимость в применении противокашлевых препаратов центрального типа действия. Однако, следует отметить, что после определенного временного промежутка кашель становился менее выраженный и не нуждался в дополнительном лечении, и не приводил к снижению уровню жизни у пациентов.

Данные, полученные от больных туберкулезом, свидетельствуют, что лечение Соединением I, Соединением II, выявило гораздо меньше побочных эффектов, тяжесть и длительность были менее выраженными, чем у пациентов, которые получали стандартное лечение. Количество побочных реакций у пациентов в группе плацебо существенно не отличалась от группы пациентов, которые получали Соединения I и Соединения II.

Исследование III Фазы.

1 ) пероральная и инъекционные формы:

В связи с тем, что в терапии мультирезистентного туберкулеза рутинно используются схемы, которые комбинируют оральные и инъекционные схемы лечения туберкулеза, было принято решение о проведении одновременных исследований для Соединения I и Соединения II, которые будут исследовать последовательное лечение пациентов инъекционными и оральными формами.

Были проведены открытые, рандомизированные, многоцентровые, контролируемые в параллельных группах, сравнительные исследования эффективности, безопасности и переносимости схемы лечения туберкулеза Соединением I и Соединением II в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 и 300 мг, изониазидом, рифампицином и этамбутолом для внутривенного введения, и Соединением I и Соединением II в виде раствора для инъекций 300 мг во флаконе, изониазидом, рифампицином и этамбутолом для введения в интенсивной фазе лечения у пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Качественный состав исследуемой фармацевтической композиции оральной и инъекционной формы не отличался от состава, использованного в исследовании 01 и 02 в соответствии с назначенной дозой.

В исследование были включены 320 пациентов для Соединения I, 314 для Соединения II в возрасте от 18 до 65 лет включительно, у которых впервые был диагностирован мультирезистентный туберкулез легких с бактериовыделением и деструкцией легочной ткани, что было подтверждено любым из методов исследование выделений из дыхательных путей и рентгенологическим исследованием, и у которых получено информированное согласие на участие в исследовании.

Продолжительность исследований: общая продолжительность исследований составляла 18 месяцев (19 месяцев для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах), включая 3-дневный период скрининга и 8-недельный интенсивный период лечения (12-недельная интенсивная терапия для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах).

Все пациенты, включенные в исследование методом блочной рандомизации, распределялись на основную и контрольную группы в соотношении 1 :1 . Пациенты были распределены путем блочной рандомизации в группы по 160 пациентов для Соединения I, 157 пациентов для Соединения II. Пациенты основной группы были отнесены к режиму лечения с Соединением I и Соединением II, также пациенты получали изониазид, рифампицин и этамбутол внутривенно и пиразинамид перорально в интенсивной фазе (первые 2 месяца), а затем в течение 4 месяцев они получали стандартное лечение с рифампицином, изониазидом и Соединением I и Соединением II. Пациенты контрольной группы получали химиотерапию с противотуберкулезными препаратами per os. Длительность наблюдения составила 6 месяцев после окончания лечения. Пациентов основной и контрольной группы во время интенсивной фазы госпитализировали в специализированное медицинское учреждение. Во время интенсивной фазы лечения мониторинг осуществлялся сотрудниками учреждения, в течение амбулаторного периода лечения препараты один раз в месяц передавались участковому специалисту, который осуществлял надзор за пациентами для наблюдения за приемом препарата и выявления побочных реакций. Госпитализация могла быть продолжена при наличии показаний и в соответствии со стандартами медицинской помощи. Во время интенсивной фазы лечения в течение первых двух месяцев исследования, пациенты после приема 15 доз каждого препарата интенсивной фазы, а затем в течение следующих 4 месяцев - после приема каждые 30 доз каждого препарата пациенты проходили комплексный осмотр на 3-м и 6-м месяцах от начала лечения. При каждом визите (и, при необходимости, по клиническим показаниям чаще) у каждого пациента было отобрано 2 образца мокроты для проведения бактериоскопического исследования и 1 образец для посева на твердую среду. Рентгенография проводилась при поступлении в лечебное учреждение, а также в конце интенсивной фазы лечения (после приема пациентами 60 доз каждого из лекарственных средств для пациентов) и в конце периода наблюдения. Компьютерная томография выполнялась, если это было необходимо в спорных случаях. Продолжительность интенсивной фазы для пациентов, не достигших абациляции после 60 дозы, была увеличена до 90 доз в оральной или инъекционной форме препаратов Соединения I и Соединения II, изониазида, этамбутола, рифампицина и пиразинамид (длительность интенсивной фазы для таких больных составляла 3 месяца (60 доз инъекционных препаратов и 30 доз таблетированных препаратов).

Поддерживающая терапия: Соединение I и Соединение II, изониазид и рифампицин для орального применения в течение 4 месяцев (120 доз).

Терапевтические дозы определяли индивидуально, в зависимости от веса тела пациента и степени тяжести процесса (колебания ежедневных доз для Соединения I и Соединения II были от 50 до 450 мг для оральной форме и от 50 до 450 мг для инъекционной формы).

Цель исследования: целью данного исследования является сравнение схем лечения, содержащих внутривенные противотуберкулезные препараты Соединения I и Соединения II в виде раствора для инъекций, изониазид в виде раствора для инъекций, рифампицин в виде лиофилизата для приготовления раствора для инфузий, этамбутол в виде раствора для инъекций; и Соединения I и Соединения II, изониазид, рифампицин, и пиразинамид в форме таблеток для внутреннего применения с точки зрения безопасности, клинической эффективности и фармакоэкономики в лечении пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Первичной конечной точкой эффективности исследований было: процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа мокроты на М. Tuberculosis (прекращение бактериального выделения по данным микроскопического исследования мокроты и посева) к концу 1 -го месяца от начала лечения (после приема пациентом 30 доз каждого препарата) в основной и контрольной группах.

При бактериологическом анализе полученных показателей результатов микроскопического анализа мокроты и результатов посева на твердую среду было обнаружено, что лечение Соединением I и Соединением II вместе с комплексной терапией привело к значительному подавлению роста М. Tuberculosis, по сравнению с контрольной группой. При анализе штаммов, выявленных у пациентов основной и контрольной группы было выявлено, что в основной группе количество резистентных штаммов пропорционально понижалось согласно времени лечения, при том, что в контрольной группе количество резистентных штаммов в течение исследования не несло существенных изменений.

По результатам статистического анализа исследование показало, что количество пациентов, которые были включены в исследование в основной группе, достигло первичной конечной точки в 85 %, по сравнению с 53 % в контрольной группе для Соединения I, 87 % с 59 % для Соединения II. Согласно анализу вторичных критериев эффективности, исследование показало, что в основных группах временной промежуток до достижения отрицательного результата анализа на М. Tuberculosis (микроскопическое исследование мокроты и посев) был значительно меньше и составлял в среднем 17,98±1 ,2 дня по сравнению с временным промежутком в контрольной группе, который составил 27, 1 ±0,9 дня для Соединения I и Соединения II. Также оценивалось комбинированное процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа на М. Tuberculosis и клиническим улучшением (по данным клинической оценки и по данным рентгенографии (компьютерной томографии) органов грудной клетки через 2 месяца после начала лечения (после приема пациентом по 60 доз каждого из препаратов интенсивной фазы). По данным анализа процентное соотношение у пациентов основной и контрольной группы составило 80, 1 % и 55,1 % для Соединения I; 80,3 % и 53, 1 % для Соединения II. Таким образом, согласно результатам исследования можно сделать вывод, что назначение Соединения I и Соединения II в комплексе к стандартному лечению мультирезистентного деструктивного легочного туберкулеза привело к значительному улучшению показателей лечения, уменьшению длительности лечения, улучшению результатов микробиологических исследований, и уменьшению общей продолжительности лечения. В течение исследований изучалась количество, тяжесть и продолжительность побочных эффектов у пациентов обеих групп. В ходе исследования было обнаружено 2 случая тяжелых непредсказуемых побочных реакций, которые привели к изменениям в режиме лечения и привели к увеличению госпитализации. 1 случай (появление большого цилиндрического эпителия) был зафиксирован в основной группе, 1 (повышение уровня печеночных ферментов) случай в контрольной группе для Соединения I. В исследовании Соединения II не было зафиксировано тяжелых побочных реакций. Все случаи тяжелых непредсказуемых побочных реакций завершились благополучно и не привели к инвалидизации пациентов.

В общем у пациентов наблюдались следующие побочные реакции: со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, запор, сухость во рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижение аппетита, повышение уровня печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия; со стороны сердечно- сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди, со стороны нервной системы - нарушение сна, нарушение памяти; со стороны кроветворной системы: гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия; со стороны опорно-двигательного аппарата- артралгия, миалгия "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головная боль со стороны кожи - зуд, сыпь (макульознопапульозний дерматит). Количество и тяжесть побочных реакций не несли значительные изменения в основной и контрольной группе.

2) Ингаляционная форма.

Были проведены открытые, рандомизированные, многоцентровые, контролируемые в параллельных группах, сравнительные исследования эффективности, безопасности и переносимости схемы лечения туберкулеза с Соединением I и Соединением II, в виде порошка для ингаляции в дозе по 100 и 150 мг в комбинации с изониазидом, рифампицином и этамбутолом для перорального введения в интенсивной фазе лечения у пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Всего в исследование было включено 214 пациентов для изучения Соединения I, 210 пациент для изучения Соединения II. Включались пациенты в возрасте от 18 до 65 лет включительно, в которых впервые был диагностирован мультирезистентный туберкулез легких с бактериовыделением и деструкцией легочной ткани, что было подтверждено любым из методов исследования выделений из дыхательных путей и рентгенологическим исследованием, и в которых получено информированное согласие на участие в исследовании.

Продолжительность исследования: общая продолжительность исследования составила 12 месяцев (18 месяцев для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах), включая 3-дневный период скрининга и 8-недельный интенсивный период лечения (12-недельная интенсивная терапия для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах). Все пациенты, включенные в исследование методом блочной рандомизации, распределялись на основную и контрольную группы в соотношении 1 : 1 . Пациенты были распределены путем блочной рандомизации в группы по 107 человек для исследования для Соединения I, по 105 человека для Соединения II. Пациенты основной группы были отнесены к режиму лечения с Соединением I и Соединением II в виде порошка для ингаляций с дозировкой по 100 и 150 мг, также пациенты получали изониазид, рифампицин и этамбутол и пиразинамид перорально в интенсивной фазе (первые 2 месяца), а затем в течение 4 месяцев они получали стандартное лечение с рифампицином, изониазидом и порошком для ингаляций, содержащий Соединение I и II. Пациенты контрольной группы получали химиотерапию с противотуберкулезными препаратами per os. Длительность наблюдения составила 6 месяцев после окончания лечения.

Пациентов основной и контрольной группы во время интенсивной фазы было госпитализировали в специализированное медицинское учреждение. Во время интенсивной фазы лечения мониторинг осуществлялся сотрудниками учреждения, в течение амбулаторного периода лечения препараты один раз в месяц передавались участковому специалисту, который осуществлял наблюдение за пациентом для наблюдения за приемом препарата и выявления побочных реакций. Госпитализация могла быть продолжена при наличии показаний и в соответствии со стандартами медицинской помощи. Во время интенсивной фазы лечения в течение первых двух месяцев исследования пациенты после приема 15 доз каждого препарата интенсивной фазы, а затем в течение следующих 4 месяцев - после приема каждые 30 доз каждого препарата пациенты проходили комплексный обзор на 3-м и 6-м месяцах от начала лечения. При каждом визите (и, при необходимости, по клиническим показаниям чаще) пациенту было отобрано 2 образца мокроты для проведения бактериоскопического исследования и 1 образец для посева на твердую среду.

Рентгенография проводилась при поступлении в лечебное учреждение, а также в конце интенсивной фазы лечения (после приемом пациентами 60 доз каждой из лекарственных средств для пациентов) и в конце периода наблюдения. Компьютерная томография выполнялась, если это было необходимо в спорных случаях.

Продолжительность интенсивной фазы для пациентов, не достигших абациляции после 60 дозы, была увеличена до 90 доз Соединения I в виде порошка для ингаляции и в оральной форме препаратов, изониазида, этамбутола, рифампицина и пиразинамид в (продолжительность интенсивной фазы для таких больных составляла 3 месяца)

Поддерживающая терапия: Соединение I в виде порошка для ингаляций, изониазид и рифампицин для орального применения в течение 4 месяцев (120 доз).

Терапевтические дозы определяли индивидуально, в зависимости от веса тела пациента и степени тяжести процесса (колебания ежедневных доз для Соединения I и Соединения II были от 50 до 150 мг).

Цель исследования: целью данного исследования является оценка схемы лечения, включающей такие препараты как препараты Соединения I и Соединения II и в форме порошка для ингаляций, изониазид, рифампицин, и пиразинамид в форме таблеток для внутреннего применения с точки зрения безопасности, клинической эффективности и фармакоэкономики в лечении пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Первичной конечной точкой эффективности исследования было: процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа мокроты на М. Tuberculosis (прекращение бактериального выделения по данным микроскопического исследования мокроты и посева) к концу 1 -го месяца от начала лечения (после приема пациентом 30 доз каждого препарата) в основной и контрольной группах.

При бактериологическом анализе полученных показателей результатов микроскопического анализа мокроты и результатов посева на твердую среду было обнаружено, что лечение Соединением I и Соединением II вместе с комплексной терапией привело к значительному подавлению роста М. Tuberculosis, по сравнению с контрольной группой. При анализе штаммов, выявленных у пациентов основной и контрольной группы было выявлено, что в основной группе количество резистентных штаммов пропорционально понижалось согласно времени лечения, при том, что в контрольной группе количество резистентных штаммов в течение исследования не несла существенные изменения.

По результатам статистического анализа исследование показало, что количество пациентов, что было включено в исследование в основной группе, достигло первичной конечной точки в 79 %, по сравнению с 52 % в контрольной группе для Соединения I, соотношение 75 % с 50% для Соединения II. Согласно анализу вторичных критериев эффективности, исследование показало, что в основной группе временной промежуток до достижения отрицательного результата анализа на М. Tuberculosis (микроскопическое исследование мокроты и посев) был значительно меньше и составлял в среднем 16,2±1 ,1 дня по сравнению с временным промежутком в контрольной группе, составил 25.1 ±1 ,2 дня для Соединения I, 15,9±1 ,6 дня по сравнению с. 24,9±1 ,3 дня для Соединения II. Также оценивалось комбинированное процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа на М. Tuberculosis и клиническим улучшением (по данным клинической оценки и по данным рентгенографии (компьютерной томографии) органов грудной клетки через 2 месяца после начала лечения (после приема пациентом по 60 доз каждого из препаратов интенсивной фазы). По данным анализа процентное соотношение у пациентов основной и контрольной группы составило 82,3 % и 45 % для Соединения I, 81 , 1 % и 46,7 % для Соединения II.

Таким образом, согласно результатам исследования можно сделать вывод, что назначение Соединения I и Соединения II в комплексе к стандартному лечению мультирезистентного деструктивного легочного туберкулеза, привело к значительному улучшению показателей лечения, уменьшению длительности лечения, улучшению результатов микробиологических исследований, и уменьшению общей продолжительности лечения.

В течение исследований изучались количество, тяжесть и продолжительность побочных эффектов у пациентов обеих групп для Соединения I и Соединения II. В ходе исследования было наблюдаем 1 случай тяжелой непредсказуемой побочной реакции, которая привела к изменениям в режиме лечения и привела к удлинению госпитализации. Длительные приступы кашля, у пациента возник астмоподобный синдром, он был зафиксирован в основной группе Соединения II.

В общем у пациентов наблюдались следующие побочные реакции.

Общей побочной реакцией во всех группах всех исследований у пациентов возникал кашель различной степени тяжести, 83 % пациентов высказывали жалобы на возникновение кашля. Следует заметить, что кашель исчезал в течение определенного времени (в среднем в течение 2 недель) после регулярного приема препарата. Возникновение кашля является побочной реакцией, которую можно связать с приемом Соединения I и Соединения II в виде порошка для ингаляций, в то время, когда все другие реакции могут быть связаны с назначением препаратов сопутствующей терапии.

Другие побочные реакции.

1 ) со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, сухость во рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижение аппетита, повышение уровня печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия;

2) со стороны сердечно-сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди,

3) со стороны нервной системы - нарушение сна, нарушение памяти;

4) со стороны кроветворной системы: гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия;

5) со стороны опорно-двигательного аппарата- артралгия, миалгия

6) общие: "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головную боль

7) со стороны кожи - зуд, сыпь (макульознопапульозний дерматит).

Количество и тяжесть побочных реакций не несли значительные изменения в основной и контрольной группе для Соединения I и Соединения II.

Таким образом, согласно приведенных выше результатов клинических исследований, можно сделать вывод о том, что заявленная фармацевтическая композиция является эффективной в использовании для лечения ТБ, в частности для лечения ТБ, который был вызван возбудителями, резистентными по отношению к известным противотуберкулезным препаратам. В частности, достоверным антимикобактериальным действием обладают варианты осуществления заявленной фармацевтической композиции, предназначенные для перорального, ингаляционного и инъекционного введения.

Суммируя данные доклинического и клинического исследований можно сделать вывод, о том, что использование фармацевтической композиции согласно техническому решению, которая содержит как активный ингредиент Соединение I или Соединение II, повышает эффективность лечения туберкулеза, в частности, туберкулеза, который был вызван возбудителями, резистентными по отношению к известным противотуберкулезным препаратам, улучшает качество жизни больных за счет уменьшения срока лечения болезни, пониженной токсичности фармацевтической композиции, уменьшения возможности рецидива заболевания, улучшения показателей излечимости и выживаемости больных ТБ, в частности, больных резистентным ТБ. Из приведенных результатов исследований видно, что:

1 ) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет антимикобактериальную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv при аэробных условиях.

2) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет достоверную внутриклеточную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv.

3) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет достоверно большое антимикобактериальное действие по пяти резистентных штаммах М. tuberculosis: INH-R1 , INH-R2, RIF-R1 , RIF-R2, FQ- R1.

4) Фармацевтическая композиция заявленным техническим решением не является цитотоксичной, имеет относительно небольшой показатель связываемое™ с белками крови, легко проникает в ткани и клетки и легко выводится из организма, что способствует большей эффективности и безопасности при использовании в лечении ТБ, в частности, лечении резистентного ТБ.

Приведенное выше свидетельствует о том, что фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению является высокоэффективной и перспективной для внедрения в медицинскую практику в качестве средства для лечения ТБ, в частности, резистентного ТБ.

Приведенные примеры осуществления технического решения только иллюстрируют его и никак не ограничивают.