本发明涉及一种 ε-聚赖氨酸水凝胶及其制备方法和应用， 属于医疗技术应用领域。 背景技术

水凝胶医用创伤辅料是近年来发展起来的一种 新型的创伤辅料。 与传统的辅料相 比， 水凝胶能促进伤口更好地愈合、 减轻患者的疼痛， 它能改善创面的微环境、 抑制细 菌的生长。 水凝胶特别适用于常见的体表创伤， 如擦伤、 划伤、 褥疮等各种皮肤损伤。 对于这些伤口， 传统上医生一般用无菌纱布及外用抗生素处理 。伹是纱布易于皮肤伤口 组织黏连， 换药时常常破坏新手的上皮和肉芽组织， 引起出血， 这不但不利于伤口的愈 合， 而且使病人疼痛难忍。 用水凝胶辅料敷贴在伤口上时， 它不但不粘连伤口、 不破坏 新生组织， 而且能杀死各种细菌、 避免伤口感染。 水凝胶辅料是一种良好的创面辅料， 它是含有一定水分的三维网状结构的高分子溶 胀体， 具有良好的吸水性和生物相容性， 能与不平整的创面密切贴合而不会发生粘连， 减少了细菌滋生的机会且易于更换， 并且 可以渗入各种药物成分和生长因子， 可以促进伤口的愈合。 水凝胶本身的热容量大， 对 伤口有温和的冷却作用， 能减轻伤口的疼痛。 因此， 国内外学者对水凝胶辅料进行了广 泛的硏究并取得了一些成果。 目前， 水凝胶辅料占全球辅料和绷带市场的大部分。

目前应用于创伤辅料并已商业化生产的材料主 要有纤维蛋白胶、氰基丙烯酸酯、 壳 聚糖等， 但由于都分别有其缺陷而限制了在临床外科医 学中的广泛应用， 如纤维蛋白胶 主要来源于动物血液组织， 所以存在血液病毒感染的风险， 氰基丙烯酸酯虽然止血效果 良好但由于细胞毒性较大也不是伤口组织愈合 的最佳选择材料，壳聚糖具有快速止血的 功能， 可以加工成各种医用辅料产品， 但由于其力学性能差、 脆性较大、 水溶性差等缺 点成为其应用于外科创伤辅料的主要阻碍因素 。

聚赖氨酸是一种形成水凝胶的天然高分子材料 ， 由微生物发酵法制得。 ε-聚赖氨 酸的分子量在三千到五千道尔顿之间， 与天然细胞外基质（ECM)中的蛋白成分和功能 类似， 聚赖氨酸区别于其他创伤辅料材料的显著优势 在于以下几个方面： 首先， 分子链 上拥有大量的氨基活性基团，其在水溶液或者 酸性环境下结合氢离子带上正电荷形成阳 离子聚合物，这种阳离子聚合物可以很好的结 合在细胞表面从而达到创伤组织粘合的目 的， 其次， 由于聚赖氨酸是天然高分子材料， 具有良好的生物相容性， 并且其降解产物 赖氨酸为人体必需氨基酸， 最后， 聚赖氨酸为氨基酸聚合物， 其水溶性良好， 克服了众 多组织愈合材料难溶于水的困难， 但由于聚赖氨酸携带大量的活性氨基基团， 其在水溶 液或者酸性环境下结合氢离子带上正电荷会一 定程度上破坏组织细胞结构，具有一定的 细胞毒性， 要使其安全的应用于伤口组织粘合， 必须对其进行改性以降低细胞毒性。

PEG是一种水溶性和生物相容性良好的高分子， 被广泛用于生物材料的表面改性、 多肽和蛋白药物的修饰保护。 PEG修饰对一些引发的细胞凋亡有明显的抑制作 用，显著 降低胞内 ROS (活性氧簇） 含量， 并保护线粒体膜电位的稳定。 PEG修饰主要通过减少 胞内 ROS (活性氧簇） 的产生来降低聚赖氨酸的细胞毒性，高修饰度 有明显的降低毒性的 作用。 PEG化聚赖氨酸可以显著降低聚赖氨酸的细胞毒 性， 降低毒性的能力随 PEG的 分子量和修饰度的增大而明显加强。

目前应用于创伤辅料的水凝胶医用材料主要分 为化学合成和生物高分子材料两种， 但水凝胶材料形成过程存在材料机械强度差、 生物相容性不好、细胞毒性大等诸多缺陷。 发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种医用创 伤辅料聚赖氨酸水凝胶。

本发明还要解决的技术问题是提供上述水凝胶 的制备方法。

本发明最后要解决的技术问题是提供上述水凝 胶的应用。

为解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案如下：

一种 聚

其中， η取值为 20 30中的任意自然数， m取值为 50 70中的任意自然数。

上述 聚赖氨酸水凝胶的制备方法， 它包括如下步骤：

(1)将聚乙二醇 （PEG)溶解在二氯甲烷中， 再加入 4-二甲氨基吡啶 (DMAP)和三乙 胺 （TEA)室温下反应 20~150min， 反应结束后在室温、惰性气体保护条件下将反 应液滴 加到对硝基苯基氯甲酸酯 （PNC)的二氯甲垸溶液中， 滴加完毕后在室温、惰性气体保护 说 明 书 条件下反应 12〜72h， 反应结束后，先将反应液旋蒸再滴加到冷乙醚 中， 过滤后取沉淀再 真空冷冻干燥得到对硝基苯基氯甲酸酯-聚乙� �醇-酪胺共聚物溶液共聚物 (PNC-PEG-PNC);

(2) 将歩骤 (1)得到的对硝基苯基氯甲酸酯-聚乙二醇-酪胺� ��聚物溶液共聚物 (PNC-PEG-PNC)溶解在磷酸缓冲液中， 然后加入溶有酪胺 (TA)的磷酸缓冲液， 室温下反 应 5~15h得到对硝基苯基氯甲酸酯-聚乙二醇 -酪胺共聚物 (PNC-PEG-酪胺)溶液：

(3)将 s-聚赖氨酸溶解在磷酸缓冲液中， 再加入歩骤 (2)得到的对硝基苯基氯甲酸酯 -聚乙二醇 -酪胺共聚物 (PNC-PEG-酪胺)溶液， 室温下反应 12~72h, 反应结束后过滤除去 对硝基苯基氯甲酸酯 （PNC)盐沉淀， 过滤后得到的滤液再在纯水中透析 4~8天， 冻干得 到接枝聚乙二醇 （PEG)和酪胺的 -聚赖氨酸；

(4)将步骤 (3)得到的接枝聚乙二醇（PEG)和酪胺的 _£ -聚赖氨酸溶解在水或者磷酸缓 冲液中， 加入辣根过氧化物酶与过氧化氢的混合水溶液 ， 室温下搅拌 5〜60s形成聚赖氨 酸水凝胶。

步骤 (1)中， 聚乙二醇的数均分子量范围为 4000~6000 , 优选 4000。

歩骤 (1)中， 聚乙二醇溶解在二氯甲烷中， 使得溶质聚乙二醇的浓度为 50〜2G0g/L， 优选 50~150g/L; 对硝基苯基氯甲酸酯的二氯甲垸溶液中， 溶质对硝基苯基氯甲酸酯的 浓度为 20~40g/L， 优选 25~35g/L。

步骤 (1)中， 再加入 4-二甲氨基吡啶和三乙胺室温下优选反应 30min。

歩骤 (1)中， 滴加完毕后在室温、 惰性气体保护条件下优选反应 24h。

歩骤 (1)中， 聚乙二醇、 4-二甲氨基吡啶、 三乙胺、 对硝基苯基氯甲酸酯的反应摩尔 比为 1 :2~5 :2~5 :2~5 ' 优选 1 :3 :3 :3。

歩骤 (1)中， 所述的冷乙醚温度为 -41；〜 -20°C， 优选 -4°C， 冷乙醚用量为旋蒸后反应 液体积的 20~40倍， 优选 30倍。

步骤 (1)中， 真空冷冻干燥温度为 -40'C~ -80°C， 优选 -60'C， 压力为 10 30 Pa， 优选

10Pa。

步骤 (1)中， 旋蒸温度为 50°C， 旋蒸到原液体积的 5〜10%， 优选 5%。

步骤 (1)中，所有操作都在室温无水无氧条件下进行 ，所述的无氧条件可采用通入惰 性气体的方式保护， 优选通入氮气保护。

步骤 (2)、 （3)和 (4)中， 所述的磷酸缓冲液为 pH7.4、 0.01~0.2mol/L的磷酸缓冲液， 说 明 书 优选 pH7.4、 0.01mol/L的磷酸缓冲液。

步骤 (2)中， 对硝基苯基氯甲酸酯-聚乙二醇 -对硝基苯基氯甲酸酯共聚物溶解在磷酸 缓冲液中， 溶质对硝基苯基氯甲酸酯-聚乙二醇-对硝基苯� ��氯甲酸酯共聚物的浓度为 50〜100g/L， 优选 80g/L; 溶有酪胺的磷酸缓冲液中， 溶质酪胺的浓度为 3〜10g L, 优选 2〜6g/L。

步骤 (2)中， 对硝基苯基氯甲酸酯-聚乙二醇 -对硝基苯基氯甲酸酯共聚物与酪胺的摩 尔比为 2:0.5〜1.5， 优选 2: 1。

步骤 (2)中， 优选室温下反应 10h得到对硝基苯基氯甲酸酯 -聚乙二醇-酪胺共聚物溶 液。

歩骤 (2)中，所有操作都在室温无氧条件下进行，所 述的无氧条件可采用通入惰性气 体的方式保护， 优选通入氮气保护。

歩骤 (3)中， 聚赖氨酸溶解在磷酸缓冲液中， 溶质聚赖氨酸浓度为 0.434.09g/L， 优 选 0.4〜0.8g/L。

步骤 (3)中， 聚赖氨酸与对硝基苯基氯甲酸酯-聚乙二醇-对� ��基苯基氯甲酸酯共聚 物的摩尔比为 0.04〜0.07： 2， 优选 0.05:2。

歩骤 (3)中， 优选室温下反应 24h。

步骤 (3)中， 优选透析 5天。

步骤 (3)中， 冻干温度为 -60°C。

歩骤 (3)中，所有操作都在室温无氧条件下进行，所 述的无氧条件可采用通入惰性气 体的方式保护， 优选通入氮气保护。

步骤 (4)中， 将步骤 (3)得到的接枝聚乙二醇和酪胺的 &聚赖氨酸溶解在水或者磷酸 缓冲液中， 溶质接枝聚乙二醇和酪胺的 ε-聚赖氨酸浓为 5〜10wt%， 优选 10wt%。

步骤 (4)中，辣根过氧化物酶与过氧化氢的混合水溶 液中，溶质辣根过氧化物酶和过 氧化氢在水溶液中的浓度分别为 0.003~0.12mg/mL和 0.02~0.07wt%， 优选 0.12mg/mL 和 0.06wt%。

步骤 (4)中，所有反应操作都在室温无氧条件下进行 ，所述的无氧条件可采用通入惰 性气体的方式保护， 优选通入氮气保护。

上述方法制备得到的 聚赖氨酸水凝胶也在本发明的保护范围之内。

上述 s-聚赖氨酸水凝胶在制备创伤辅料中的应用， 可以应用于医疗或者美容领域。 说 明 书 有益效果： 本发明通过使用天然高分子材料聚赖氨酸作为 创伤辅料支架， 通过接枝 聚乙二醇和酪胺对聚赖氨酸分子骨架进行修饰 ，再在辣根过氧化物酶和过氧化氢的作用 下形成聚赖氨酸-聚乙二醇 -酪胺三维网状结构的水凝胶医用材料， 该创伤辅料材料具有 机械强度大、 凝胶时间快且凝胶强度可调控、 反应条件温和、 组织毒性低等诸多优势， 克服了现有创伤辅料存在的材料机械强度差、 生物相容性不好、细胞毒性大等诸多缺陷， 在医疗领域具有很大应用前景。

附图说明

图 1 是制备的聚赖氨酸 -聚乙二醇-酪胺的示意图及分子结构；

图 2是聚赖氨酸、 聚赖氨酸 -聚乙二醇-酪胺的核磁共振氢谱 H-NMR)谱图， 溶剂为 D ₂ 0;

图 3 是聚赖氨酸-聚乙二醇-酪胺水凝胶的电镜图片 （SEM);

图 4 是老鼠背部伤口愈合实验， a)对照组为人工缝线愈合， b)为纤维蛋白胶敷料处理组， c)为氰基丙烯酸酯敷料处理组， d)聚赖氨酸-聚乙二醇水凝胶辅料， e)为本发明聚赖氨 酸水凝胶敷料处理组。

具体实施方式

根据下述实施例， 可以更好地理解本发明。 然而， 本领域的技术人员容易理解， 实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应 当也不会限制权利要求书中所详细描述的 本发明。

以下实施例所用试剂来源如下：

聚赖氨酸： 购于南京轩凯生物科技有限公司；

PNC(PNC (对硝基苯基氯甲酸酯 ))、 DMAP(4-二甲氨基吡啶)购自 Sigma-Aldrich 公 司； TA (酪胺） 购自 Energy chemical; TEA (三乙胺)、 PEG (聚乙二醇)购自国药集团。

以下实施例所用设备来源如下：

磁力搅拌器： 型号 85-2C， 上海扭航仪器设备有限公司。

冷冻干燥机： 型号 FD-1C-50, 北京博医康实验仪器有限公司。

真空干燥箱： 型号 YZG-600, 南京焱泰电热设备有限公司。

红外光谱仪： 型号 Nicolet 380, 美国 Thermo公司。

核磁共振仪： 型号 AVANCE AV-500, 美国 Bruker Daltonics 公司。 说 明 书

实施例 1 : PNC-PEG-PNC的制备。

在室温并在无水无氧条件下， 称取 PEG4000 20g(5mmol)置于 500ml三口烧瓶中， 加入 400ml无水二氯甲烷， 在磁力搅拌下待 PEG完全溶解后加 1.832g(15mmol)DMAP 和 1.518g(15mmol)TEA， 室温下搅拌反应 30 分钟， 反应结束后将其滴加到 3.022g(15mmol)PNC溶液 (以 100ml无水二氯甲烷为溶剂)中， 递交完毕后在室温并在氮 气保护下搅拌反应 24h， 反应结束后， 先将反应液用旋转蒸发仪浓縮至 25ml， 再滴加到 -4Ό冷乙醚中， 冷乙醚用量为 750ml， 形成沉淀后进行过滤取沉淀再 -60°C， 10Pa真空冷 冻干燥得到 PNC-PEG-PNC共聚物， 收率为 79%。 实施例 2: PNC-PEG-PNC的制备。

在室温并在无水无氧条件下， 称取 PEG4000 20g(5mmol)置于 500ml三口烧瓶中， 加入 200ml无水二氯甲烷， 在磁力搅拌下待 PEG完全溶解后加 1.832g(15mmoDDMAP 和 ] .518 _g (15m _m0 l)TEA , 室温下搅拌反应 30 分钟， 反应结束后将其滴加到 3.022g(15mmol)PNC溶液 (以 100ml无水二氯甲烷为溶剂)中， 递交完毕后在室温并在氮 气保护下搅拌反应 24h， 反应结束后， 先将反应液用旋转蒸发仪浓縮至 15ml, 再滴加到 -4Ό冷乙醚中， 冷乙醚用量为 450ml， 形成沉淀后进行过滤取沉淀再 -60°C， 10Pa真空冷 冻干燥得到 PNC-PEG-PNC共聚物， 收率为 87%。 实施例 3: PNC-PEG-PNC的制备。

在室温并在无水无氧条件下， 称取 PEG6000 20g(5mmol)置于 500ml三口烧瓶中， 加入 100ml无水二氯甲垸， 在磁力搅拌下待 PEG完全溶解后加 1.832g(15mmol)DMAP 和 ] .518g(15mmol)TEA， 室温下搅拌反应 30 分钟， 反应结束后将其滴加到 3.022g(15mmol)PNC溶液 (以 100ml无水二氯甲烷为溶剂)中， 递交完毕后在室温并在氮 气保护下搅拌反应 24h， 反应结束后， 先将反应液用旋转蒸发仪浓縮至 10ml, 再滴加到 -4°C冷乙醚中， 冷乙醚用量为 300ml， 形成沉淀后进行过滤取沉淀再 -60°C， 10Pa真空冷 冻干燥得到 PNC-PEG-PNC共聚物， 收率为 62%。 实施例 4: PNC-PEG-PNC的制备。 说 明 书 在室温并在无水无氧条件下， 称取 PEG4000 20g(5mmol)置于 500ml三口烧瓶中， 加入 200ml无水二氯甲烷， 在磁力搅拌下待 PEG完全溶解后加 1.832g(15mmol)DMAP 和 1.518g(15mmol)TEA， 室温下搅拌反应 30 分钟， 反应结束后将其滴加到 3.022g(15mmol)PNC溶液 (以 120ml无水二氯甲垸为溶剂)中， 递交完毕后在室温并在氮 气保护下搅拌反应 24h， 反应结束后， 先将反应液用旋转蒸发仪浓缩至 16ml， 再滴加到 -4°C冷乙醚中， 冷乙醚用量为 480ml, 形成沉淀后进行过滤取沉淀再 -60°C， 10Pa真空冷 冻干燥得到 PNC-PEG-PNC共聚物， 收率为 77%。 实施例 5: PNC-PEG-PNC的制备。

在室温并在无水无氧条件下， 称取 PEG4000 20g 5mmol)置于 500ml三口烧瓶中， 加入 200ml无水二氯甲烷， 在磁力搅抨下待 PEG完全溶解后加 1.832g(15mmol)DMAP 和 ] .518 _g 15mmol)TEA , 室温下搅拌反应 30 分钟， 反应结束后将其滴加到 3.022g(15mmol)PNC溶液 (；以 86ml无水二氯甲烷为溶剂)中，递交完毕后在室� ��并在氮气 保护下搅拌反应 24h， 反应结束后， 先将反应液用旋转蒸发仪浓缩至 14.3ml， 再滴加到 -4°C冷乙醚中， 冷乙醚用量为 429ml， 形成沉淀后进行过滤取沉淀再 -60°C , 10Pa真空冷 冻干燥得到 PNC-PEG-PNC共聚物， 收率为 53%。 实施例 6: PNC-PEG-PNC的制备。

同实施例 1的方法，所不同的是控制 PEG、DMAP、TEA、PNC投料摩尔比为 :1 :2:2:3 , 所得 PNC-PEG-PNC收率为 43%。 实施例 Ί·· PNC-PEG-PNC的制备。

同实施例 1的方法，所不同的是控制 PEG、DMAP、TEA、PNC投料摩尔比为 :1 :2:5:3， 所得 PNC-PEG-PNC收率为 51%。 实施例 8: PNC-PEG-PNC的制备。

同实施例 1的方法，所不同的是控制 PEG、DMAP、TEA、PNC投料摩尔比为 :1 :5:2:3 , 所得 PNC-PEG-PNC收率为 38%。 实施例 9: PNC-PEG-PNC的制备。 说 明 书 同实施例 1的方法，所不同的是控制 PEG、DMAP、TEA、PNC投料摩尔比为 :1 :5:5:3， 所得 PNC- PEG-PNC收率为 69%。 实施例 10: PNC-PEG-PNC的制备。

同实施例 2的方法， 所不同的是加入 DMAP和 TEA后， 室温下搅拌反应 20分钟， 所得 PNC-PEG-PNC收率为 64%。 实施例 11 : PNC-PEG-PNC的制备。

同实施例 2的方法，所不同的是加入 DMAP和 TEA后，室温下搅拌反应 150分钟， 所得 PNC-PEG-PNC收率为 81%。 实施例 12: 接枝 PEG和酪胺的 -聚赖氨酸的制备。

在室温无氧条件下， 称取 TA 0.069g(0.5mmol)溶解在 14ml、 pH7.4、 0.01M磷酸盐 缓冲液中， 同时将实施例 2制备得到的 PNC-PEG-PNC共聚物 4g(2mmol)溶解在 50ml、 pH7.4、 0.01M磷酸盐缓冲液中， 待 PNC-PEG-PNC完全溶解后， 将酪胺磷酸盐溶液在 无氧条件下加入其中， 室温下搅拌反应 10h, 反应结束得到 PNC-PEG-酪胺共聚物溶液； 在室温无氧条件下， 称取 ε-聚赖氨酸 0.14g(0.04mmol)溶解在 280ml、 pH7.4、 0.01M磷 酸盐缓冲液中， 待&聚赖氨酸完全溶解后加入到 PNC-PEG-酪胺共聚物溶液， 室温下搅 拌反应 24h， 反应结束后过滤除去 PNC盐， 将混合液置于截止分子量为 7000D&的透析 袋中， 再在大量超纯水中透析除去未反应物质及副产 物， 每天换 5-6次超纯水， 透析 5 天， 最后 -60°C冷冻干燥得到接枝 PEG和酪胺的 聚赖氨酸， 收率为 65%。 实施例 13 : 接枝 PEG和酪胺的 e-聚赖氨酸的制备。

在室温无氧条件下， 称取 TA0.137g(lmmol)溶解在 28ml、 pH7.4、 0.01M磷酸盐缓 冲液中， 同时将实施例 2制备得到的 PNC-PEG-PNC共聚物 4g(2mmol)溶解在 50ml、 pH7.4、 0.01M磷酸盐缓冲液中， 待 PNC-PEG-PNC完全溶解后， 将酪胺磷酸盐溶液在 无氧条件下加入其中， 室温下搅拌反应 10h, 反应结束得到 PNC-PEG-酪胺共聚物溶液； 在室温无氧条件下， 称取 聚赖氨酸 0.14g (0.04mmol)溶解在 280ml、 pH7.4、 0.01M磷 酸盐缓冲液中， 待 s-聚赖氨酸完全溶解后加入到 PNC-PEG-酪胺共聚物溶液， 室温下搅 说 明 书 拌反应 24h， 反应结束后过滤除去 PNC盐， 将混合液置于截止分子量为 7000Da的透析 袋中， 再在大量超纯水中透析除去未反应物质及副产 物， 每天换 5-6次超纯水， 透析 5 天， 最后 -60°C冷冻干燥得到接枝 PEG和酪胺的 &聚赖氨酸， 收率为 77%。 由图 2， 下 面的图是聚赖氨酸氢谱图谱， 上面的图谱为合成的 s-pL-PEG-TA核磁氢谱图可以看到， 在原有聚赖氨酸的基础峰上出现化学位移为 3.5和 7.0的峰分别是接枝上的 PEG和酪胺， 表明合成的 ε-pL-PEG-TA合成正确。 实施例 14: 接枝 PEG和酪胺的 £ -聚赖氨酸的制备。

同实施例 12的方法， 所不同的是控制 PNC-PEG-PNC、 TA、 聚赖氨酸 ?-pL)的投 料摩尔比控制为 2: 1.5:0.04， 所得 £-pL-PEG-TA收率为 69%。 实施例 15 : 接枝 PEG和酪胺的 e-聚赖氨酸的制备。

同实施例 12的方法， 所不同的是控制 PNC-PEG-PNC、 ΤΑ、 聚赖氨酸 ?-pL)的投 料摩尔比控制为 2: 1 :0.06, 所得 s-pL-PEG-TA收率为 58%。 实施例 16: 接枝 PEG和酪胺的 _£ -聚赖氨酸的制备。

同实施例 12的方法， 所不同的是控制 PNC-PEG-PNC、 ΤΑ、 聚赖氨酸 (ε-pL)的投 料摩尔比控制为 2: 1.5:0.07， 所得 £-pL-PEG-TA收率为 63%。 实施例 17: 接枝 PEG和酪胺的 _£ -聚赖氨酸的制备。

同实施例 12的方法， 所不同的是， 待 PNC-PEG-PNC完全溶解后， 将酪胺磷酸盐 溶液在无氧条件下加入其中， 室温下搅拌反应 5h， 所得 _£ -pL-PEG-TA收率为 45%。 实施例 18: 接枝 PEG和酪胺的 e-聚赖氨酸的制备。

同实施例 12的方法， 所不同的是， 待 PNC-PEG-PNC完全溶解后， 将酪胺磷酸盐 溶液在无氧条件下加入其中， 室温下搅拌反应 15h, 所得 e-pL-PEG-TA收率为 72%。 实施例 19: 接枝 PEG和酪胺的 _ε -聚赖氨酸的制备。

同实施例 12的方法，所不同的是，待 聚赖氨酸完全溶解后加入到 PNC-PEG-酪胺 共聚物溶液， 室温下搅拌反应 12h, 所得 _e -pL-PEG-TA收率为 29%。 说 明 书

实施例 20: 接枝 PEG和酪胺的 _£ -聚赖氨酸的制备。

同实施例 12的方法，所不同的是，待 聚赖氨酸完全溶解后加入到 PNC-PEG-酪胺 共聚物溶液， 室温下搅拌反应 72h， 所得 ε-pL-PEG-TA收率为 67%。 实施例 21 : 水凝胶的制备。

将实施例 13制备得到的接枝 PEG和酪胺的 聚赖氨酸共聚物溶解在 pH7.4、 0.01M 磷酸盐缓冲液中， 配制成浓度为 10wt%的溶液， 再加入辣根氧化物酶 （酶活 >250U, Sigma)和过氧化氢，辣根过氧化物酶和过氧化氢 的终浓度分别为 0.03mg/ml， 0.06wt%, 25 °C下磁力搅拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 30s。 实施例 22: 水凝胶的制备。

将实施例 13制备得到的接枝 PEG和酪胺的&聚赖氨酸共聚物溶解在 pH7.4、 0.01M 磷酸盐缓冲液中， 配制成浓度为 10wt%的溶液， 再加入辣根氧化物酶 （酶活 >250U, Sigma)和过氧化氢，辣根过氧化物酶和过氧化氢 的终浓度分别为 0.05mg/ml， 0.06wt%, 25 °C下磁力搅拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 25s。 实施例 23 : 水凝胶的制备。

将实施例 13制备得到的接枝 PEG和酪胺的&聚赖氨酸共聚物溶解在 pH7.4、 0.01M 磷酸盐缓冲液中， 配制成浓度为 10wt%的溶液， 再加入辣根氧化物酶 （酶活 >250U, Sigma)和过氧化氢，辣根过氧化物酶和过氧化氢 的终浓度分别为 0.08mg/ml， 0.06wt%, 25 °C下磁力搅拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 22s。 实施例 24: 水凝胶的制备。

将实施例 13制备得到的接枝 PEG和酪胺的 聚赖氨酸共聚物溶解在 pH7.4、 0.01M 磷酸盐缓冲液中， 配制成浓度为 10wt%的溶液， 再加入辣根氧化物酶 （酶活 >250U, Sigma) 和过氧化氢， 辣根过氧化物酶和过氧化氢的终浓度分别为 0.12mg/L， 0.06wt%, 25 °C下磁力搅拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 5s。 实施例 25 : 水凝胶的制备。 说 明 书 同实施例 21 的方法， 所不同的是控制过氧化氢的浓度为 0.04wt%， 25 °C下磁力搅 拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 17s。 实施例 26: 水凝胶的制备。

同实施例 21 的方法， 所不同的是控制过氧化氢的浓度为 0.02wt%， 25 °C下磁力搅 拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 39s。 实施例 27: 水凝胶的制备。

同实施例 21的方法 '所不同的是控制水凝胶材料 s-pL-PEG-TA的浓度为 7wt%， 25 °C 下磁力搅拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 25s。 实施例 28 : 水凝胶的制备。

同实施例 21的方法 '所不同的是控制水凝胶材料 s-pL-PEG-TA的浓度为 5wt%， 25 °C 下磁力搅拌形成聚赖氨酸水凝胶， 其凝胶时间为 54s。 实施例 29:

将实施例 24制得的聚赖氨酸 -PEG-酪胺水凝胶样品进行冻干后，少量固定于� ��片后 过夜风干， 在扫描电镜 100倍下观察其表面交联形态， 如图 3。 实施例 30: 伤口愈合实验。

在老鼠背部剪毛后， 再用硫化钠溶液脱毛 48h, 每只老鼠皮下注射 0.5%利多卡因注 射液 0.5 mL局麻， 供 3处， 在背部用手术刀划出直径约 2.0 cm的切口两处， 用 7(^ %酒 精消毒， 将实施例 1中的创伤敷料涂布在伤口处， 对照组一用常规的手术针线缝合， 对 照组二采用市售医用创伤辅料纤维蛋白胶涂敷 ，对照组三采用市售医用创伤辅料多抹棒 涂敷， 对照组四采用聚赖氨酸 -PEG水凝胶 [Polylysine-Modified PEG-Based Hydrogels to Enhance the Neuro-Electrode Interface, Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition Volume 22, Issue 4-6, 2011]涂敷。 实验过程中各组均未发生细菌感染现象， 分别于 0， 7, 14夭后观察伤口愈合愔况。参见图 5， a)对照组为人工缝线愈合， b)为纤维蛋白胶敷料处 理组， c)为氰基丙烯酸酡敷料处理组， d) 聚赖氨酸 -PEG (聚乙二醇)水凝胶辅料， e ) 为 本发明聚赖氨酸水凝胶敷料处理组。 随着治疗时间的延长， 四组老鼠伤口均有愈合的现 说 明 书 象， 水凝胶敷料处理组均优于仅用缝合处理组； 使用 ε-聚赖氨酸交联聚合物水凝胶敷料 处理组， 伤口面积明显变小， 且愈合速度快， 表面光滑平整， 显示出优良的生物相容性 及促进伤口愈合的能力。

综合评价： 本发明的 聚赖氨酸水凝胶创伤敷料， 生物相容性良好， 有利于细胞附 着生长， 对伤口愈合具有促进作用， 有效减少组织液渗出， 在医用创伤敷料领域应用前 景广阔。