本发明涉及一种胆酸衍生物的制备方法， 更具体而言， 涉及一种 3-β-花 生酰胺基 -7α, 12(χ,5β-胆垸 -24-羧酸的制备方法。 背景技术

3-β-花生酰胺基 -7α, 12α,5β-胆垸 -24-羧酸 (Aramchol)是一种新型的用于治 疗胆结石症的化合物， 可以延缓胆固醇的结晶速度， 并且可以促进溶解已经 形成的胆固醇结晶 2001, 48, 75-79; Lipids, 2001 , 36, 1135-1140; Hepatology, 35, 597-600； WO 1999052932； WO 2009060452)。 除了可以治疗 胆结石以外， 该化合物还可以用于治疗由于饮食习惯不良导 致的脂肪肝、 减 少动脉硬化的可能性以及增加中性硬脂醇的分 泌 (Hep to/ogy, 38, 436-442; Pathobiology 2002, 70, 215-218; Biochem. Soc. Trans., 2004, 32, 131-133)。 其结 构式如下：

目前， 3-β-花生酰胺基 -7α, 12 _α ,5β-胆烷 -24-羧酸的合成主要采用以下方 法：

使用天然产物胆酸 (cholic acid)为原料， 经过甲酯化、 对甲苯磺酰化、 叠 氮化及还原得到化合物 4(Tetrahedron, 26, 2006, 11178-11186； Tetrahedron, 26, 2006, 6808-6813) , 一般再经过酰化和水解反应共六歩反应得到最 终产品 Aramcholo 合成歩骤如下：

在上述的合成方法中， 合成路线为六歩， 比较长， 且需将羧基转化为甲 酯， 最后进行水解。 甲基保护基的运用导致增加了上保护基和脱保 护基两歩 反应， 会造成歩骤增加， 总收率偏低， 原料及试剂消耗较多， 环境污染较重， 影响生产效率， 势必会造成合成成本增加。 发明内容

本发明提供一种合成 3-β-花生酰胺基 -7α,12α,5β-胆垸 -24-羧酸 (Aramchol) 的新方法， 可以通过两歩的反应路线来制备。 这种新方法避免了保护基的运 用， 减少了反应歩骤， 降低了不必要的原料消耗， 提高了生产效率， 减少了 环境污染， 具有收率高， 成本低， 制备周期短的优点。

因此， 本发明的目的在于提供一种 3-β-花生酰胺基 -7α,12(χ,5β-胆烷 -24- 羧酸 (Aramchol)的制备方法。

根据本发明， 3-β-花生酰胺基 -7α,12α,5β-胆垸 -24-羧酸 (Aramchol)可以按 照如下所述的方法制备 (Scheme 1)。

IV V, Aramchol

Scheme 1

(1)化合物 in经过还原反应得到化合物 IV；

(2)在碱的存在下， 化合物 IV 与花生酰氯经酰化反应得到目标化合物 V(SP , 3-β-花生酰胺基 -7α,12α,5β-胆垸 -24-羧酸， Aramchol)。

在上述方法中：

在歩骤 (1)中， 化合物 III结构中的叠氮基团经过还原反应转化为氨基 。 此还原反应可以在甲醇、 乙醇、 异丙醇、 四氢呋喃、 乙二醇二甲醚、 1,4-二 氧六环、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺、 Ν,Ν-二甲基乙酰胺、 乙腈或水中进行， 也可以 在以上溶剂形成的混合溶剂中进行； 反应使用的催化剂可以为， 例如， 钯碳、 活性镍、 氯化钴、 氯化镍或氯化铁等； 反应使用的还原剂可以为， 例如， 氢 气、 硼氢化钠、 硼氢化钾、 硼氢化锂、 硫化氢或三苯基膦等； 反应温度不限， 可以在较大范围内变化， 一般为-20 °( 〜100 °( ， 优选 0 °C〜80 °C。

在歩骤 (2)中， 化合物 IV与花生酰氯进行酰化反应可以在惰性溶剂中� �� 行； 所使用的惰性溶剂可以为， 例如， 二氯甲垸、 氯仿、 1,2-二氯乙垸、 四 氢呋喃、 1,4-二氧六环、 甲苯、 乙腈、 乙酸乙酯、 吡啶、 DMF或乙二醇二甲 醚等； 所述的碱可以为有机碱或无机碱， 例如， 碳酸钾、 碳酸钠、 三乙胺、 吡啶、 Ν,Ν-二甲基 -4-氨基吡啶、 二异丙基乙胺或咪唑等； 反应温度不限， 可 以在较大范围内变化， 一般为 -40 °C〜100 °C， 优选 -20 °C〜40 °C; 化合物 IV与花生酰氯的摩尔比例为 1 :0.8- 1 :3 , 优选 1 :卜 1 :1.5。

其中， 上述反应中的化合物 III由化合物 II与叠氮试剂经叠氮化反应制 备：

b:R = Ts

c:R =CF ₃ S0 ₂ 在酸性试剂的存在下，化合物 Π与叠氮试剂进行叠氮化反应得到化合物

III； 所述叠氮试剂可以为叠氮化钠、 叠氮化钾或三甲基叠氮硅等；

化合物 II与叠氮试剂的叠氮化反应可以在 Ν,Ν-二甲基甲酰胺、 Ν,Ν-二 甲基乙酰胺、 乙腈、 四氢呋喃、 1，4-二氧六环、 甲苯、 乙酸乙酯或乙二醇二 甲醚等极性溶剂中进行； 所述的酸性试剂可以为有机酸或无机酸， 例如， 氯 化铵、 硫酸铵或硫酸氢铵等； 反应温度不限， 可以在较大范围内变化， 一般 为-20 °( 〜100 °( ， 优选 20 °C〜80 °C。

其中， 上述反应中的化合物 II由胆酸 （化合物 I) 经酰化反应制备：

cholic acid, I ll a:R = Ms

b:R = Ts

c:R =CF ₃ S0 ₂ 在碱的存在下， 胆酸 I (； cholic acid)与 RC1进行酰化反应得到化合物 II (II-a: = Ms _; II-b: R= Ts; II-c: = CF ₃ SO ₂ ); 其中 R基团的定义为易离去 基团， 例如甲磺酰基 (Ms)、 对甲苯磺酰基 (Ts)或三氟甲磺酰基 (CF ₃ S0 ₂ )等； 胆酸与对甲苯磺酰氯或甲磺酰氯或三氟甲磺酰 氯进行酰化反应可以在二 氯甲垸、 氯仿、 1 ,2-二氯乙烷、 四氢呋喃、 1 ,4-二氧六环、 甲苯、 乙腈、 乙酸 乙酯、 吡啶、 DMF或乙二醇二甲醚等非质子性溶剂中进行； 所述的碱为有机 碱或无机碱， 例如， 碳酸钾、 碳酸钠、 三乙胺、 吡啶、 Ν,Ν-二甲基 -4-氨基吡 啶、 二异丙基乙胺或咪唑等； 反应温度不限， 可以在较大范围内变化， 一般 为-40°( 〜100°( ，优选 -20°C〜40°C;胆酸与对甲苯磺酰氯或甲磺酰氯或 三 氟甲磺酰氯的摩尔比例为 1:0.8-1:3, 优选 1:卜 1:1.5。

经试验证明， 本发明所述的方法， 反应歩骤少、收率高、 反应条件温和、 易于操作、 得到的产物质量稳定、 纯度高。 现有技术中的路线需要将羧基转 化为甲酯， 再水解为羧基； 本发明中的路线比现有技术中的路线减少了羧 基 的甲酯化保护和水解脱保护两歩反应， 避免了保护基的运用， 减少了反应歩 骤、 因而有利于提高总收率、 减少环境污染、 提高生产效率、 减少不必要的 原料消耗， 可以有效的降低生产成本， 缩短制备周期。 该制备方法的可控性 高， 可以进行工业规模放大生产。 具体实施方式

所用试剂均为分析纯 (AR)试剂， 没有经过进一歩的纯化； 核磁共振波谱 仪为 Bruker AMX-400/600, 氘代溶剂为 CDC1 ₃ ， 内标为 TMS; 质谱仪为 FinniganMAT-95/711。

实施例一： 3α-甲磺酰氧基 -7α,12α-二羟基 -5β-胆垸 -24-羧酸 (化合物 Il-a) 的制备

将 30克 (73.5 mmol)胆酸溶于 100毫升吡啶中， 冷却至 0°C， 加入 6.8毫 升甲磺酰氯 (88.2 mmol),在 0〜10°C继续搅拌 2小时。将反应混合物倒入 100 毫升乙酸乙酯与 100毫升水的混合物中， 搅拌， 静置， 分出有机层， 水层用 100毫升乙酸乙酯洗涤一次，合并有机相，用 50毫升饱和食盐水洗涤，干燥， 减压浓缩得白色泡沫状固体 II-a， 可直接用于下一歩反应。 实施例二： 3α-甲磺酰氧基 -7α,12α-二羟基 -5β-胆垸 -24-羧酸 (化合物 Il-a) 的制备

将 30克 (73.5 mmol)胆酸溶于 100毫升吡啶和 100毫升二氯甲垸中，冷却 至 0°C，加入 6.8毫升甲磺酰氯 (88.2 mmol),在 0〜10°C继续搅拌 2小时。将 反应混合物倒入 100毫升乙酸乙酯与 100毫升水的混合物中， 搅拌， 静置， 分出有机层， 水层用 100毫升乙酸乙酯洗涤一次，合并有机相，用 50毫升饱 和食盐水洗涤， 干燥， 减压浓缩得白色泡沬状固体 II-a， 可直接用于下一歩 反应。 实施例三： 3α-对甲苯磺酰氧基 -7α,12α-二羟基 -5β-胆垸 -24-羧酸 (化合物

将 30克 (73.5 mmol)胆酸溶于 100毫升吡啶中， 冷却至 0°C， 加入 16.8 克对甲苯磺酰氯 (88.2 mmol), 在 0〜10°C继续搅拌 2小时。 将反应混合物倒 入 100毫升乙酸乙酯与 100毫升水的混合物中， 搅拌， 静置， 分出有机层， 水层用 100毫升乙酸乙酯洗涤一次，合并有机相，用 50毫升饱和食盐水洗涤， 干燥， 减压浓缩得白色泡沫状固体 II-b， 直接用于下一歩反应。 实施例四： 3β-叠氮基 -7α,12(ΐ-二羟基 -5β-胆垸 -24-羧酸 (化合物 III)的制备 将 48.6克 (100 mmol)II-a溶于 150毫升 Ν,Ν-二甲基甲酰胺 (DMF)中， 加 入 26克 (400 mmol)叠氮化钠和 21.2克 (400 mmol)氯化铵，反应混合物在 90°C 继续搅拌 4小时， TLC确定反应完全。冷却至 40°C， 加入至 200克冰中， 过 滤得到类白色固体 III。

III: ^! H NMR (300 MHz, DMSO-i ₅ ): 54.15(s, 2H), 3.99(s, IH), 3.79(s, IH), 3.63(s, IH), 3.17(s, 2H), 2.63(m, IH), 2.23(m, IH), 2.14(m, 2H), 1.97(m, IH), 1.62〜1.86(m, 6H), 0·91〜1 ·49(ιη, 16H), 0.86(s, 3H), 0.59(s, 3H); ESI-MS m/z (M-l)— 432 实施例五： 3β-叠氮基 -7α, 12α-二羟基 -5β-胆烷 -24-羧酸 (化合物 III)的制备 将 48.6克（100 mmol)II-a溶于 150毫升乙腈中， 加入 32.4克 (400 mmol) 叠氮化钾和 52.8克 (400 mmol)硫酸铵， 反应混合物在 80°C继续搅拌 4小时， TLC确定反应完全。冷却至 40°C， 加入至 200克冰中， 过滤得到类白色固体 III

1H NMR (300 MHz, OMSO-d ₆ ): 64.15(s, 2H), 3.99(s, IH), 3.79(s, IH), 3.63(s, IH), 3.17(s, 2H), 2.63(m, IH), 2.23(m, IH), 2.14(m, 2H), 1.97(m, IH), 1.62〜1.86(m, 6H), 0.91〜1.49(m, 16H), 0.86(s, 3H), 0.59(s, 3H); ESI-MS m/z (M-l)" 432

实施例六： 3β-氨基 -7α, 12α-二羟基 -5β-胆垸 -24-羧酸 (化合物 IV)的制备 将 43.3克（100 mmol)III溶于 250毫升甲醇中， 加入 4克 10%钯碳， 通 入氢气， 反应混合物在 20°C继续搅拌 16小时， TLC确定反应完全。 过滤， 减压除去甲醇， 得粗品， 在乙酸乙酯中重结晶得到产品 IV 30克， 直接用于 下一歩反应。

1H NM (400 MHz, CD ₃ OD/D ₂ 0=l/l): δ 3.59 (s, IH), 3.26 (s, IH) 2.00〜 0.75 (m, 30H), 0.52 (s, 3H); ESI-MS m/z (M+l) 408。 实施例七： 3β-氨基 -7α, 12α-二羟基 -5β-胆垸 -24-羧酸 (化合物 IV)的制备 将 43.3克 (100 mmol)III溶于 180毫升四氢呋喃中，加入 34克（130 mmol) 三苯基膦和 10毫升水， 反应混合物加热至回流， 维持在回流 16小时， TLC 确定反应完全。 反应混合物冷却至室温， 过滤， 滤饼用乙酸乙酯洗， 干燥得 到白色固体 IV， 直接用于下一歩反应。

1H NMR (400 MHz, CD ₃ OD/D ₂ 0=l/l): δ 3.59 (s, 1H), 3.26 (s, 1H) 2.00— 0.75 (m, 30H), 0.52 (s, 3H); ESI-MS m/z (M+l) 408。 实施例八： 3β-花生酰胺基 -7α, 12α-二羟基 -5β-胆垸 -24-羧酸 (化合物 V， Aramchol)的制备

将 41克（100 mmol)IV溶于 1000毫升二氯甲垸中， 冷却至 -20°C， 加入 30.3克 (300 mmol)三乙胺和 33克 (100 mmol)花生酰氯， 在 -20°C继续搅拌 16 小时。 将反应混合物倒入 100毫升乙酸乙酯与 100毫升冰水的混合物中， 搅 拌， 静置， 分出有机层， 水层用 100毫升乙酸乙酯洗涤一次， 合并有机相， 用 50毫升饱和食盐水洗涤， 干燥， 减压浓缩得 V的粗品， 丙酮重结晶得到 化合物 V共 56克 (收率 80%)。

1H NMR (300 MHz, OMSO-d ₆ ): δ 11.92(s, 1H), 7.5 l (d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.12(s, 1H), 4.04(s, 1H), 3.83(s, 1H), 3.77(s, 1H), 3.61 (s, 1H), 0.82~2.22(m, 69H), 0.56(s, 3H); ESI-MS m/z (M+l) 703。