DOMAINE DE L'INVENTION

La présente invention concerne le domaine de la prévention et/ou du traitement des parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes. Plus particulièrement, la présente invention vise à fournir de nouveaux composés utiles dans la prévention et/ou le traitement des coccidioses (infections par Eimeria spp.). Les composés de la présente invention s'avèrent également utiles dans la prévention et/ou le traitement de la cryptosporidiose (infections par Cryptosporidium spp.), de la toxoplasmose (infections par Toxoplasma gondii), de la néosporose (infections induites par Neospora caninum) et/ou de la malaria (infections par Plasmodium spp.).

ARRIERE PLAN DE L'INVENTION

Les coccidioses du genre Eimeria sont des maladies parasitaires touchant de nombreuses espèces telles que les ovins, porcins, bovins, lapins, oiseaux et volailles. Les parasites responsables de ces pathologies sont divers et touchent chacun une espèce propre. Par exemple, les coccidioses aviaires, maladies parasitaires les plus fréquentes chez les volailles, peuvent prendre de nombreuses formes et sont causées par des parasites du genre Eimeria, tels qu'E. acervulina, E. necatrix, E. maxima, E. brunetti, E. tenella, E. mitis, E. praecox.

D'une manière générale, les parasites responsables des coccidioses appartiennent au phylum des apicomplexes, auquel appartiennent également les parasites responsables de pathologies humaines telles que la malaria ou paludisme (ex : Plasmodium falciparum, P. vivax, P. malariae, P.ovale, P. knowlesi), la toxoplasmose (ex : Toxoplasma gondii) ou la cryptosporidiose (ex : Cryptosporidium hominis).

Sur le plan vétérinaire, la lutte contre les coccidioses aviaires passe généralement par un traitement prophylactique des élevages comprenant l'administration d'anticoccidiens et/ou la vaccination. Le coût élevé des vaccins obtenus à partir de souches atténuées freine le recours à ce mode de traitement dans les élevages de poulets de chair. Ainsi, les éleveurs choisissent très souvent d'avoir recours à des anticoccidiens.

Si les agents anticoccidiens disponibles à ce jour s'avèrent efficaces, les éleveurs doivent cependant faire face à un problème majeur : l'apparition croissante de phénomène de résistance des parasites aux agents anticoccidiens, essentiellement liée à leur utilisation massive.

Un besoin existe donc pour la mise à disposition de nouveaux agents permettant de prévenir et/ou traiter les parasitoses induites par les parasites appartenant au phylum des apicomplexes, en particulier les coccidioses induites par Eimeria.

BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION

La présente invention concerne des composés de formule (I)

dans laquelle :

- -A-B- représente

o avec X représentant un atome d'oxygène ou d'azote ;

o avec Ri représentant un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycloalkyle, ledit groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycloalkyle pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, halogène, alkyle, alcényle, alcynyle, alkyloxy, alkylthio, amino, nitro, cycloalkyle, aryle, hétéroaryle, ester et/ou cétone ;

- Y représente un atome d'azote substitué, ou non, par un groupement R ₂ avec R ₂ représentant un atome d'hydrogène, un groupement alkyle, aryle, arylalkyle, hétéroaryle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle ou hétéroarylcarbonyle ;

- Z représente un atome de carbone ou d'azote ;

- W représente un atome de carbone ou d'azote, à la condition que lorsque W est un atome d'azote, Z est un atome d'azote et V est un atome de carbone substitué par

R ₃ ;

n représente le nombre entier 0 ou 1 ; - V représente un atome de carbone ou de soufre, à la condition que lorsque V est un atome de soufre, n est égal à 0, Z est un atome d'azote et W est atome de carbone ;

R ₃ représente un hydrogène, un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, alkylthio, arylthio, alkyloxy, aryloxy, aryle, hétéroaryle, amino ou un halogène ;

pour utilisation dans la prévention et/ou le traitement des parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes.

La présente invention concerne également des compositions pharmaceutiques ou vétérinaires comprenant au moins un composé de la présente invention et au moins un excipient acceptable.

Enfin, la présente invention concerne des combinaisons comprenant au moins un composé de la présente invention et au moins un agent antiparasitaire.

BREVE DESCRIPTION DES DESSINS

La figure 1 représente des images de microscopie à fluorescence de cellules MDBKs infectées par E. tenella en présence du composé C1 comparées à un contrôle (A : Schizontes ; B : Sporozoites)

La figure 2 représente un graphique illustrant l'inhibition dose dépendante du développement des parasites Eimeria tenella par le composé C1 . Les 0 illustrent le pourcentage d'invasion par rapport au témoin DMSO en fonction de de la concentration en composé C1. Les□ illustrent le pourcentage de développement par rapport au témoin DMSO en fonction de la concentration en composé C1 .

La figure 3A représente un graphique illustrant les effets des composés C1 , C2, C3 et C4 sur l'invasion et le développement des parasites Eimeria tenella. Pour chaque essai, la barre de gauche représente le pourcentage de parasites ayant envahi comparé au contrôle et la barre de droite représente le pourcentage de développement comparé au contrôle.

La figure 3B présente l'absence d'effets cytotoxiques des composés C1 , C2, C3 et C4 et C5 sur les cellules par rapport au contrôle (DMSO).

La figure 4A représente un graphique illustrant la diminution dose dépendante de la surface des plages de lyses en fonction des concentrations croissantes en composé C1.

La figure 4B représente des images de microscopie photonique (objectif x4).

La figure 5 représente un graphique illustrant l'inhibition dose dépendante de la croissance de

P. falciparum en fonction des concentrations croissantes en composé C1. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION

Les inventeurs ont découvert que le développement des parasites appartenant au phylum des apicomplexes peut être bloqué par des composés appartenant à la classe des pyranones. Ces composés, ici désignés par le terme « composé(s) de la présente invention », présentent ainsi un intérêt dans la prévention et/ou le traitement des parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes. Des exemples de parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes incluent les coccidioses (infections induites par Eimeria spp.), la malaria (infections induites par Plasmodium spp.), la toxoplasmose (infections induites par Toxoplasma gondii), la néosporose (infections induites par Neospora caninum) ou la cryptosporidiose (infections induites par Cryptosporidium spp.).

En particulier, les inventeurs ont montré que le développement des parasites du genre Eimeria tenella, Plasmodium falciparum et Toxoplasma gondii peut être bloqué par les composés de la présente invention. Les composés de la présente invention présentent ainsi tout particulièrement un intérêt dans la prévention et/ou le traitement des coccidioses, de la malaria et/ou de la toxoplasmose.

Plus spécifiquement, les inventeurs ont mis en évidence que les composés de la présente invention inhibent ou diminuent l'activité d'au moins une protéase appartenant à la famille des aminopeptidases N, protéases essentielles au développement des parasites et présentes chez la majorité des parasites appartenant au phylum des apicomplexes. Ainsi, les inventeurs ont mis en évidence que les composés de la présente invention inhibent ou diminuent l'activité de la protéase EtApNI chez Eimeria tenella. De manière avantageuse, les composés de la présente invention bloquent le développement parasitaire sans inhiber l'invasion. Le maintien de l'invasion permet une activation du système immunitaire des animaux, permettant in fine de limiter le recours à des traitements complémentaires pour traiter les parasitoses, en particulier les coccidioses.

De manière avantageuse, les composés de la présente invention sont actifs à des doses inférieures aux inhibiteurs commerciaux connus d'aminopeptidases perméables aux cellules, tels que le 1 ,10-ortho-phenanthroline et l'hydrochlorure de bestatine. Les doses peuvent être inférieures d'un facteur 10 (diminution de NC50 pour Eimeria in vitro par rapport à l'hydrochlorure de bestatine). En particulier, le composé C1 (voir ci-dessous) s'est avéré inhiber l'activité de la protéase EtApNI dans un lysat parasitaire à une concentration 20 fois inférieure à celle du 1 ,10-ortho-phenanthroline et de l'hydrochlorure de bestatine. Par ailleurs, les composés de la présente invention ne présentent pas de toxicité in vitro.

Les composés de la présente invention, utiles dans la prévention et/ou le traitement des parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes, présentent la formule générale (I):

dans laquelle :

- -A-B- représente

o avec X représentant un atome d'oxygène ou d'azote ;

o avec Ri représentant un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycolalkyle, ledit groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycolalkyle pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, halogène, alkyle, alcényle, alcynyle, alkyloxy, alkylthio, amino, nitro, cycloalkyle, aryle, hétéroaryle, ester et/ou cétone ;

- Y représente un atome d'azote substitué, ou non, par un groupement R ₂ avec R ₂ représentant un atome d'hydrogène, un groupement alkyle, aryle, arylalkyle, hétéroaryle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle ou hétéroarylcarbonyle ;

- Z représente un atome de carbone ou d'azote ;

- W représente un atome de carbone ou d'azote, à la condition que lorsque W est un atome d'azote, Z est un atome d'azote et V est un atome de carbone substitué par R ₃ , de préférence R ₃ est un halogène ;

n représente le nombre entier 0 ou 1 ;

- V représente un atome de carbone ou de soufre, à la condition que lorsque V est un atome de soufre, n est égal à 0, Z est un atome d'azote et W est un atome de carbone ;

R ₃ représente un hydrogène, un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, alkylthio, arylthio, alkyloxy, aryloxy, aryle, hétéroaryle, amino ou un halogène. Le terme « alkyle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants R-i, R ₂ et R ₃ , désigne une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, de préférence comprenant de 1 à 12 atomes de carbone. Des exemples de groupement « alkyle » incluent, de manière non limitative, les groupements méthyle, éthyle, propyle, butyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle, dodécyle, isobutyle, isopropyle, t-butyle et 1 ,1-diméthylpropyle. Dans des modes de réalisation particuliers de la présente invention, R-i, R ₂ et R ₃ représentent indépendamment l'un de l'autre un groupement alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone.

Le terme « alcényle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants Ri et R ₃ , désigne une chaîne hydrocarbonée d'au moins deux atomes de carbone, linéaire ou ramifiée, comprenant au moins une double liaison carbone-carbone, de préférence comprenant au plus 12 atomes de carbone. Des exemples de groupement « alcényle » incluent, de manière non limitative, les groupements éthényle, propényle et butényle.

Le terme « alcynyle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants Ri et R ₃ , désigne une chaîne hydrocarbonée d'au moins deux atomes de carbone, linéaire ou ramifiée, comprenant au moins une triple liaison carbone- carbone, de préférence comprenant au plus 12 atomes de carbone. Des exemples de groupement « alcynyle» incluent, de manière non limitative, les groupements éthynyle, propynyle, butynyle, pentynyle et hexynyle. Le terme « arylalkyle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R ₂ , désigne un groupement alkyle tel que défini ci-dessus lié à un groupement « aryle » tel que défini ci-dessous. Un exemple de groupement « arylalkyle » inclut le groupement benzyle. R ₂ désigne de manière avantageuse un groupement benzyle ou méthyle.

Le terme « aryle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants R-i, R ₂ et R ₃ , désigne un système cyclique aromatique. Des exemples de groupement « aryle » incluent, de manière non limitative, les carbocycles aromatiques comprenant 5, 6, 7 ou 8 chaînons, tels que le phényle. Le terme « aryle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention inclut également les systèmes polycycliques comprenant au moins un cycle aromatique fusionné à au moins un autre cycle qui peut être aromatique ou non aromatique. Le terme « hétéroaryle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants R-i, R ₂ et R ₃ , désigne un cycle aromatique comprenant de 5 à 8 chaînons et contenant un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi l'oxygène, le soufre ou l'azote, tels que 2 ou 3 hétéroatomes. Le terme « hétéroaryle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention inclut également les systèmes polycycliques comprenant au moins un cycle aromatique comprenant de 5 à 8 chaînons et contenant un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi l'oxygène, le soufre ou l'azote. Des exemples de groupement « hétéroaryle » incluent, de manière non limitative, les groupements dérivants du thiophène, pyrrole, benzofurane, indole, pyridine, imidazole et pyrazine. Le terme « alkyloxy » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants Ri et R ₃ , désigne un radical monovalent de formule R-O- dans laquelle R désigne une chaîne hydrocarbonée, linéaire ou ramifiée, de préférence comprenant de 1 à 12 atomes de carbone. Des exemples de groupement « alkyloxy» incluent, de manière non limitative, les groupements méthoxy, éthoxy, propoxy, prop-2-oxy, butoxy, but- 2-oxy, 1-méthyléthyle-oxy, pentoxy ou hexyloxy.

Le terme « aryloxy » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions du substituant R ₃ , désigne un radical monovalent de formule R'-O- dans laquelle R' désigne un groupement « aryle » tel que défini ci-dessus.

Le terme « cycloalkyle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R-i, désigne un cycle hydrocarboné non aromatique comprenant au moins 3 chaînons et de préférence au plus 7 chaînons. Des exemples de groupement « cycloalkyle» incluent, de manière non limitative, les groupements cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle ou cyclohexyle.

Le terme « amino» tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants Ri et R ₃ , désigne un groupement aminé substitué, ou non, par un ou deux groupements choisis parmi les groupements alkyle, alcényle, alcynyle et/ou aryle. Les groupements alkyle, alcényle, alcynyle et aryle sont tels que définis ci-dessus.

Le terme « halogène » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R ₃ , désigne les éléments fluor, chlore, brome et iode.

Le terme « alkylcarbonyle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R ₂ , désigne un groupement carbonyle (C=0) attaché à un groupement alkyle, le groupement alkyle étant tel que défini ci-dessus.

Le terme « arylcarbonyle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R ₂ , désigne un groupement carbonyle (C=0) attaché à un groupement aryle, le groupement aryle étant tel que défini ci-dessus. Le terme « hétéroarylcarbonyle » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R ₂ , désigne un groupement carbonyle (C=0) attaché à un groupement hétéroaryle, le groupement hétéroaryle étant tel que défini ci-dessus.

Le terme « alkylthio » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R ₃ , désigne un atome de soufre attaché à un groupement «alkyle », le groupement alkyle étant tel que défini ci-dessus.

Le terme « arylthio » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans la définition du substituant R ₃ , désigne un atome de soufre attaché à un groupement «aryle », le groupement aryle étant tel que défini ci-dessus.

Le terme « ester » tel qu'utilisé dans la description de la présente invention, en particulier dans les définitions des substituants R-i, désigne un groupement -CO-O-R dans laquelle R désigne une chaîne hydrocarbonée, linéaire ou ramifiée, de préférence comprenant de 1 à 12 atomes de carbone.

En particulier, lorsque -A-B- représente les composés de la présente invention présentent la formule générale (II) suivante dans laquelle V, W, Y, Z, R-i et R ₃ et n sont tels que définis ci-dessus :

Lorsque -A-B- représente les composés de la présente invention présentent la formule générale (I II) suivante dans laquelle V, W, X, Y, Z, R-i et R ₃ et n sont tels que définis ci-dessus :

Dans des modes de réalisations particuliers, les composés de la présente invention présentent la formule (I), (II) ou (II I) dans laquelle Y représente un atome d'azote substitué par un groupement R ₂ avec R ₂ représentant un groupement alkyle, aryle, arylalkyle, hétéroaryle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle ou hétéroarylcarbonyle et V, W, Z, R-i , R ₃ , X et n sont tels que définis ci-dessus.

Dans des modes de réalisations particuliers, les composés de la présente invention présentent la formule (I), (II) ou (III) dans laquelle V, W et Z représentent un atome de carbone, Y représente un atome d'azote substitué par un groupement R ₂ tel que défini ci-dessus, n est égal à 1 et R^ R ₃ et X sont tels que définis ci-dessus. De préférence, dans ces modes de réalisations, X est un atome d'oxygène et/ou R ₂ représente un groupement alkyle, aryle, arylalkyle, hétéroaryle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle ou hétéroarylcarbonyle.

Ainsi, dans des modes de réalisations particuliers, lorsque que -A-B- représente

les composés de la présente invention présentent la formule (IV) suivante : (IV)

dans laquelle :

- Ri représente un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycolalkyle, ledit groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycolalkyle pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, halogène, alkyle, alcényle, alcynyle, alkyloxy, alkylthio, amino, nitro, cycloalkyle, aryle, hétéroaryle, ester et/ou cétone ;

- R ₂ représente un groupement alkyle, aryle, arylakyle, hétéroaryle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle ou hétéroarylcarbonyle ;

- R ₃ représente un hydrogène, un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, arylthio, alkylthio, aryloxy, alkyloxy, aryle, hétéroaryle, amino ou un halogène.

Dans d'autres modes de réalisations particuliers, les composés de la présente invention présentent la formule (V) suivante :

dans laquelle :

- Ri représente un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycolalkyle, ledit groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycolalkyle pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, halogène, alkyle, alcényle, alcynyle, alkyloxy, alkylthio, amino, nitro, cycloalkyle, aryle, hétéroaryle, ester et/ou cétone ;

- R ₂ représente un groupement alkyle, aryle, arylalkyle, hétéroaryle, alkylcarbonyle, arylcarbonyle ou hétéroarylcarbonyle ;

- R ₃ représente un hydrogène, un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, alkylthio, arylthio, alkyloxy, aryloxy, aryle, hétéroaryle, amino ou un halogène.

En particulier, les composés de la présente invention peuvent présenter la formule (I), (I I), (III), (IV) ou (V) dans laquelle :

- Ri représente :

- un groupement alkyle ou alcényle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, alkyloxy, ester, alcyne et/ou cycloalkyle ;

- un groupement phényle ;

- un groupement phényle substitué en ortho, méta ou para par un groupement alkyle comprenant de 1 à 3 atomes de carbone, halogène, alkyloxy, alkylthio, nitro ou amino ; ou

- un groupement thiophène ou pyridine ; et/ou

- R ₂ représente un groupement benzyle ou méthyle; et/ou

- R ₃ représente un hydrogène.

Le groupement Ri peut tout particulièrement être choisi parmi les groupements suivants

Dans un mode de réalisation particulier, les composés selon la présente invention sont caractérisés en ce que lesdit I):

dans laquelle :

- -A-B- représente

o avec Ri représentant un groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycloalkyle, ledit groupement alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, hétéroaryle ou cycolalkyle pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, alkyle, alcényle, alcynyle, alkyloxy, cycloalkyle, aryle, hétéroaryle et/ou ester; Y représente un atome d'azote substitué, ou non, par un groupement R ₂ avec R ₂ représentant un groupement alkyle ou arylalkyle ; et

Z représente un atome de carbone ou d'azote. En particulier, lorsque -A-B- représente les composés de la présente invention présentent la formule générale (Via) suivante dans laquelle Y, Z, et Ri sont tels que définis ci- dessus :

Lorsque -A-B- représente -C=CRi-0-CO-, les composés de la présente invention présentent la formule générale (III) suivante dans laquelle Y, Z, et Ri sont tels que définis ci-dessus :

Dans des modes de réalisations particuliers, les composés de la présente invention présentent la formule (VI), (Via) ou (VIb) dans laquelle Y représente un atome d'azote substitué par un groupement R ₂ avec R ₂ représentant un groupement alkyle, arylalkyle et Z, et Ri sont tels que définis ci-dessus.

Dans des modes de réalisations particuliers, les composés de la présente invention présentent la formule (VI), (Via) ou (VIb) dans laquelle Z représente un atome d'azote ou de carbone, Y représente un atome d'azote substitué ou non par un groupement R ₂ tel que défini ci-dessus et R-i , est tel que défini ci-dessus. De préférence, dans ces modes de réalisations, R ₂ représente un groupement alkyle ou arylalkyle,

De manière avantageuse, les composés selon la présente invention sont caractérisés que lesdits composés prés

Ri représente un groupement alkyle, alcényle, aryle ou hétéroaryle, ledit groupement alkyle, alcényle, ou aryle, pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) alkyle, alcényle, alcynyle, alkyloxy, cycloalkyle et/ou ester.

De manière également avantageuse, les composés selon la présente invention sont caractérisés en ce que lesdi I):

dans laquelle Ri représente un groupement alkyle, alcényle, aryle, ou hétéroaryle, ledit groupement alkyle, alcényle, ou aryle, pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, alkyle, alcényle, alcynyle, alkyloxy, cycloalkyle, aryle, hétéroaryle et/ou ester ; et

R ₂ représente un groupement alkyle ou arylalkyle.

De manière tout aussi avantageuse, les composés selon la présente invention sont caractérisés en ce que lesdits composés présentent la formule (IX):

dans laquelle :

Ri représente un groupement alkyle, alcényle ou cycloalkyle, ledit groupement alkyle ou alcényle pouvant être substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) alkyle, alcényle, alkyloxy, cycloalkyle et/ou ester;

En particulier, les composés de la présente invention peuvent présenter la formule (VI), (Via), (Vlb), (VII), (VIII) ou (IX) dans laquelle :

- Ri représente le cas échéant :

- un groupement alkyle ou alcényle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, substitué, ou non, par un ou plusieurs groupement(s) hydroxyle, alkyloxy, ester, alcyne et/ou cycloalkyle ;

- un groupement phényle ;

- un groupement phényle substitué en ortho, méta ou para par un groupement alkyle comprenant de 1 à 3 atomes de carbone, halogène, alkyloxy, alkylthio, nitro ou amino ; ou

- un groupement thiophène ou pyridine.

Dans des modes de réalisations particuliers, les composés de la présente invention présentent les structures suivantes :

C13 C14

C15 C16

Les composés de la présente invention peuvent être préparés selon des méthodes connues de l'homme du métier et qui peuvent être telles que décrites dans J.Org.Chem. , 201 1 , 76, 8347-8354 et dans Org. Bio. Mol.2011, 9, 1212-1218. En particulier, les composés de la présen

Les composés de la présente invention sont utilisés pour prévenir et/ou traiter les parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes. En particulier, ils peuvent être utilisés pour prévenir et/ou traiter les coccidioses, telles que les coccidioses aviaires, bovines, porcines ou ovines. Les composés de la présente invention peuvent également être utilisés pour prévenir et/ou traiter la malaria (infections par Plasmodium spp.), la toxoplasmose (infections par Toxoplasma gondii), la néosporose (infections par Néospora caninum) et/ou la cryptosporidiose, en particulier des ruminants et de l'homme (infections par Cryptosporidium parvum et hominis).

Les composés de la présente invention peuvent être administrés seuls ou en combinaison avec des excipients acceptables dans une composition pharmaceutique et/ou vétérinaire. Ainsi, la présente invention concerne également une composition pharmaceutique ou vétérinaire comprenant au moins un composé de la présente invention et au moins un excipient acceptable. La composition pharmaceutique ou vétérinaire peut être utilisée pour prévenir et/ou traiter les parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes, telles que les coccidioses, la malaria, la toxoplasmose, la néosporose et/ou la cryptosporidiose. De préférence, la composition pharmaceutique ou vétérinaire peut être utilisée pour prévenir et/ou traiter les coccidioses, la malaria et/ou la toxoplasmose.

De manière non limitative, des exemples d ^' excipients acceptables incluent les solvants, agents d'écoulement, agents de mise en suspension, agents de solubilisation, stabilisants, conservateurs. Dans certains modes de réalisations, les composés de la présente invention peuvent être administrés en combinaison avec d'autres agents utiles dans le traitement des parasitoses (agents antiparasitaires). Ainsi, la présente invention concerne également une combinaison comprenant au moins un composé de la présente invention tel que décrit ci-dessus et au moins un autre agent utile dans le traitement des parasitoses (agent antiparasitaire).

Par exemple, dans le cadre de la prévention et/ou du traitement des coccidioses, les agents antiparasitaires peuvent être des produits chimiques de synthèse qui altèrent le métabolisme des parasites (décoquinate, diclazuril, halofuginone, nicarbazine et robénidine) et/ou des ionophores dérivés de la fermentation microbienne, qui inhibent le transport des ions à travers la membrane du parasite (lasalocid, maduramicine, narasin, salinomycine, semduramicine et monensin).

La combinaison peut ainsi être utilisée pour prévenir et/ou traiter les parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes, telles que les coccidioses, la malaria, la toxoplasmose, la néosporose et/ou la cryptosporidiose, de préférence les coccidioses, la malaria et/ou la toxoplasmose. Les composés individuels d'une telle combinaison peuvent être administrés séparément à différents moments au cours du traitement ou de manière concomitante dans des formes combinées ou séparées. Ainsi, la combinaison de la présente invention peut être destinée à une utilisation sous forme combinée ou séparée.

La combinaison décrite ci-dessus peut également être présente au sein d'une composition pharmaceutique et/ou vétérinaire. Ainsi, la présente invention concerne également une composition pharmaceutique ou vétérinaire comprenant au moins un composé de la présente invention tel que décrit ci-dessus, au moins un agent antiparasitaire et au moins un excipient acceptable pouvant être utilisée dans la prévention et/ou le traitement des parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes, telles que les coccidioses, la malaria, la toxoplasmose, la néosporose et/oula cryptosporidiose, de préférence les coccidioses, la malaria et/ou la toxoplasmose.

Les composés ou compositions de la présente invention destiné(e)s au traitement des humains peuvent être administrés par voie orale ou par voie parentérale, incluant les administrations intraveineuses, intramusculaires, intrapéritonéales, subcutanées, rectales ou topiques. Les compositions se présentent alors sous toutes formes appropriées selon les modes d'administration souhaités. En particulier, les compositions pharmaceutiques peuvent se présenter sous forme de poudre, lyophilisât, cachet, gélule, pilule, granule, comprimé, gel, pommade, crème, sirop, solution injectable, spray, patch.

Les composés ou compositions de la présente invention destiné(e)s au traitement des animaux peuvent être administrées selon toutes voies d'administration bien connues dans le domaine et adaptées au traitement de chacun des animaux. De préférence, elles sont administrées par voies orale et parentérale. Les compositions se présentent alors sous toutes formes appropriées selon les modes d'administration souhaités. Elles peuvent donc être sous la forme d'une solution ou d'une suspension liquide orale ou injectable, ou sous la forme solide ou semi-solide, de poudres, de comprimés, de capsules, de granules, de dragées, de gélules, de sprays, de cachets, de pilules, de tablettes, ou de pâtes. Par ailleurs dans le cas de formulations orales, celles-ci peuvent être administrées directement aux animaux ou bien mélangées à la nourriture.

La présente invention concerne également les composés de la présente invention pour leur utilisation en thérapie. Ainsi, la présente invention concerne également une méthode de prévention et/ou traitement des parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes comprenant l'administration à un sujet d'une dose efficace d'au moins un composé de la présente invention tel que décrit ci-dessus ou d'une composition comprenant au moins un composé de la présente invention tel que décrit ci-dessus et au moins un excipient acceptable. Le sujet peut être un humain ou un animal. En particulier, l'animal peut être choisi parmi les volailles et les ruminants.

La présente invention concerne, enfin, l'utilisation d'au moins un composé de la présente invention tel que décrit ci-dessus pour la préparation d'un médicament pour prévenir et/ou traiter les parasitoses induites par des parasites appartenant au phylum des apicomplexes, telles que les coccidioses, la malaria, la toxoplasmose, la néosporose ou la cryptosporidiose.

EXEMPLES

Préparation des composés C1 à C12

Les composés C1 à C12 sont préparés selon la méthode décrite dans J.Org.Chem. 201 1 , 76, 8347-8354.

Procédure générale d'obtention du noyau indolopyran-1 -one :

Dans un tube de Schlenk équipé d'un barreau aimanté, sont introduits 552 mg de K ₂ C0 ₃ (4 mmol, 2 équivalents) et 750 mg d'acide iodoindolylcarboxylique (2 mmol, 1 équivalent), ainsi que 15 mL de DMF anhydre. La suspension est agitée pendant 15 minutes puis dégazée sous vide à -80°C et mise sous argon. Après avoir atteint la température ambiante, l'alcyne (4 mmol, 2 équivalents) est ajouté ainsi que 381 mg de Cul (2 mmol, 1 équivalent). Le tube de Schlenk est placé et agité dans un bain d'huile préchauffé à 1 10-120°C pendant 24-48h. Le mélange est ensuite refroidi à température ambiante et hydrolysé à 0°C avec une solution aqueuse saturée de NH ₄ CI (15 mL) ; 50 mL d'éther sont ajoutés dans le tube de Schlenk et le mélange est filtré sur Celite®. La Celite® est ensuite lavée avec 50 mL d'éther. La phase aqueuse est éliminée et la phase organique est lavée trois fois avec de l'eau (3 x 15 mL). La phase organique est séchée sur MgS0 ₄ et concentrée sous vide. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash sur gel de silice pour donner les indolopyranones désirées.

2-[(9-Benzyl-1 ,9-dihydro-1 -oxopyrano[3,4-b]indol-3-yl)methyl]-2-(prop-2ynyl)malonate de diéthyle (C1)

Rendement: 30%; solide blanc. Mp: 165-166 °C. IR (KBr): 3256, 1735, 1709, 1628.

RMN H (300MHz,CDCI ₃ ): 1.31 (t, 6H, J = 7.1 ), 2.15 (t, 1 H, J = 2.5), 2.87 (d, 2H,J = 2.5), 3.44 (s, 2H), 4.25-4.37 (m, 4H), 5.89 (s, 2H), 6.90 (s, 1 H),7.01-7.34 (m, 6H), 7.40-7.50 (m, 2H), 7.89 (d, 1 H, J = 8.0).

RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ): 14.1 , 22.9, 36.3, 48.1 , 56.3, 62.3, 72.2, 79.0, 102.0, 1 1 1.5, 121.2, 121.3, 121.8, 125.6, 126.4, 127.1 , 127.6, 128.1 , 128.8, 137.5, 140.9, 151.2, 156.7, 169.3. MS (70 eV, El) m/z (%) = 485 (Μ·+, 19), 441 (40), 368 (17), 367 (33), 294 (1 1 ), 288 (17), 91 (100).

HRMS (ESI): calcul anal, pour Czgh NOe (M+H) 486.191 1 , mesuré 486.1914. 5-Benzyl-3-pentylpyrano[4,3-ft]indol-1(5W)-one (C2)

Rendement: 76%; solide incolore. Mp: 123-125 °C. IR (KBr): 3155, 3034-2872, 1713, 1626, 1608.

RMN H (300 MHz, CDCI ₃ ): 0.88 (t, 3H, J = 6.4), 1 .27-1.35 (m, 4H), 1.65-1.80 (m, 2H), 2.57 (t, 2H, J = 7.9), 5.38 (s, 2H), 6.29 (s, 1 H), 7.03-7.12 (m, 3H), 7.27-7.35 (m, 6H), 7.97-8.03 (m, 1 H). RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ): 14.1 , 22.5, 27.1 , 31.3, 34.6, 47.7, 92.7, 99.6, 109.9, 121.4, 122.8, 124.5, 126.3, 128.2, 129.2, 135.7, 138.4, 146.7, 160.2, 164.5.

LRMS (ESI) 346 (M+H).

HRMS (ESI): calcul anal, pour C23H23NO2 (M+H) 346.1729, mesuré 346.1736. 9-Benzyl-3-methoxymethylpyrano[3,4-b]indol-1(9H)-one (C3)

Rendement : 77%; solide incolore. Mp: 121-122 °C.

IR (KBr): 3069, 1714, 1626, 1615, 1212, 1084.

RMN H (300MHz, CDCI ₃ ): 3.50 (s, 3H), 4.36 (d, 2H, J = 0.7), 5.90 (s,2H), 7.00 (s,1 H), 7.20- 7.32 (m, 6H), 7.45 - 7.50 (m, 2H), 7.90 (d, 1 H, J = 8.0).

RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ): 48.0, 58.9, 71.0, 99.9, 1 1 1.5, 120.7, 121.3, 121.4, 121.7, 125.4, 127.1 , 127.6, 128.1 , 128.7, 137.4, 140.8, 152.3, 156.9.

MS (70 eV, El) m/z (%) = 319 (M ^*+ ,68), 288 (27), 260 (8), 168 (11 ), 91 (100).

HRMS (ESI): calcul anal, pour C ₂ oH ₁₇ N0 ₃ (M+H) 320.1281 , mesuré 320.1276. 5-Benzyl-3-hydroxypropylpyran[4,3-ft]indol-1(5W)-one (C4)

Rendement: 63%; solide orange. Mp: 149-151 °C.

IR (KBr): 3413, 2930-2860, 1713, 1559.

RMN H (300 MHz, CDCI ₃ ): 1.71 (bs, 1 H), 1.92-2.05 (m, 2H), 2.73 (t, 2H, J = 7.3), 3.71 (t, 2H, J = 6.1 ), 5.38 (s, 2H), 6.36 (s, 1 H), 7.03-7.10 (m, 2H), 7.23-7.39 (m, 6H), 8.18-8.26 (m, 1 H). RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ): 30.3, 31.0, 47.3, 61.7, 93.2, 99.7, 1 10.0, 121.4, 122.9, 124.5, 124.7, 126.4, 128.2, 129.2, 135.7, 138.5, 146.6, 160.2, 163.6.

LRMS (ESI) 333 (M+H), 356 (M+Na); 372 (M+K).

HRMS (ESI): calcul anal, pour C ₂ i H ₁₉ N0 ₃ (M+H) 333.1365, mesuré 333.1367. 2-((9-benzyl-1 -oxo-1 ,9-dihydropyrano[3,4-b]indol-3-yl)methyl)-2-methylmalonate de diéthyle (C5)

Rendement: 65%; solide beige. IR (neat) :3050, 2984, 2957, 1720, 1708, 1628, 1468, 1244, 1 149, 738.

RMN H (300 MHz, CDCI ₃ ) : 1.28 (t, 6H, J = 7.1 Hz), 1.51 (s, 3H), 3.25 (s, 2H), 4.21 ^1.32 (m, 4H), 5.90 (s, 2H), 6.80 (s, 1 H), 7.18-7.29 (m, 6H), 7.42-7.50 (m, 2H), 7.86 (d, 1 H, J = 8.0 Hz). RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ) : 14.0, 19.1 , 39.3, 47.9, 53.5, 61.7, 101.6, 1 1 1.4, 121.1 , 121.2,

125.5, 127.0, 127.5, 128.0, 128.6, 137.4, 140.8, 151.9, 156.8, 171.3.

HRMS (ESI) : calcul anal, pour C27H ₂₈ N0 ₆ (M+H) 462.19166, mesuré 462.19072.

2-((9-benzyl-1 -oxo-1 ,9-dihydropyrano[3,4-b]indol-3-yl)methyl)-2-methylmalonate de diisopropyle (C6)

Rendement: 35%. Solide beige. Mp: .IR (neat): 3264, 2982, 1725, 1707, 1628, 1 195, 1099, 739.

RMN H (300 MHz, CDCI ₃ ) : 1.26 (d, 6H, J = 6.2 Hz), 1.33 (d, 6H, J = 6.2 Hz), 2, 13 (t, 1 H, J = 2.6 Hz), 2.85 (d, 2H, J = 2.6 Hz), 3.40 (s, 2H), 2.06-5.28 (m, 1 H), 5.89 (s, 2H), 6.89 (s, 1 H), 7.16-7.29 (m, 6H), 7.42-7.50 (m, 2H), 7.88 (d, 1 H, J = 8.0 Hz).

RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ) : 21 .6 (2C), 27.7, 35.9, 48.0, 56.2, 69.8, 72.0, 79.0, 101.9, 1 1 1.4,

120.6, 121.1 , 121.2, 121.6, 125.4, 127.0, 127.5, 128.0, 128.7, 137,4, 140.8, 151.3, 156.7, 168.6.

HRMS (ESI): calcul anal, pour C ₃₁ H ₃₂ N0 ₆ (M+H) 514.22296, mesuré 514.22267.

2-((9-benzyl-1 -oxo-1 ,9-dihydropyrano[3,4-b]indol-3-yl)methyl)-2-methylmalonate de dibenzyle (C7)

Rendement: 28%. Solide jaune. IR (neat): 3290, 2958, 1806, 1715, 1628, 1628, 1612, 1455, 1 173, 739, 695.

RMN H (300 MHz, CDCI ₃ ) : 2.13 (t, 1 H, J = 2.6 Hz), 2.96 (d, 2H, J = 2.6 Hz), 3.49 (s, 2H), 5.25 (s, 4H), 5.91 (s, 2H), 6.87 (s, 1 H), 7.20-7.39 (m, 16H), 7.44-7.52 (m, 2H), 7.88 (d, 1 H, J = 8.0 Hz).

RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ): 22.9, 36.3, 48.0, 56.5, 67.9, 72.4, 76.6, 78.6, 85.8, 102.0, 1 10.1 , 1 1 1.4, 121.1 , 121.7, 127.0, 127.3, 127.6, 128.0, 128.3, 128.4, 128.5, 128.56, 128.6, 128.7, 129.0, 135.1 , 137.3, 140.8, 150.8, 168.9.

HRMS (ESI): calcul anal, pour C ₃₉ H ₃₂ N06 (M+H) 610.22296, mesuré 610.22255. 9-benzyl-3-(pyridin-2-yl)pyrano[3,4-b]indol-1 (9H)-one (C8)

Rendement : 75%. Solide blanc. Mp = 183-184 °C. IR (KBr): 3033; 1717; 1616; 1582; 1526; 1204; 1073; 1060; 789; 735.

RMN H (200 MHz, CDCI ₃ ) : 5.98 (s, 2H), 7.22-7.36 (m, 7H), 7.49 (m, 2H), 7.84 (t, 1 H, J = 7.7 Hz), 8.05 (t, 2H, J = 7.6 Hz), 8.19 (s, 1 H), 8.68 (d, 1 H, J = 4.6 Hz).

RMN ³ C (50 MHz, CDCI ₃ ): 48.2, 100.0, 1 1 1.6, 1 19.9, 121.7, 121.8, 122.1 , 123.6, 126.3, 127.2, 127.7, 128.4, 128.8, 137.4, 141.2, 149.5, 150.0, 151.3, 156.4.

SM (70 eV, El) m/z (%) = 352 (M + , 100), 261 (51 ), 233 (26), 204 (10), 106 (10), 91 (54), 78 (19).

HRMS (ESI): calcul anal, pour C ₂ 3H ₁₆ N ₂ 0 ₂ (M+H) 353.1285, mesuré 353.1273 9-benzyl-3-p-tolylpyrano[3,4-b]indol-1(9H)-one (C9)

Rendement: 60%. Solide blanc. Mp = 184-185 °C. IR (KBr): 3087; 3061 ; 3032; 1712; 1615; 1515; 1206; 1073; 816; 742.

RMN H (200 MHz, CDCI ₃ ) : 2.45 (s, 3H), 6.0 (s, 2H), 7.28-7.33 (m, 8H), 7.4 (s, 1 H), 7.51-7.54 (m, 2H), 7.85 (d, 2H, J = 8.2 Hz), 8.01 (d, 1 H, J = 8.0 Hz).

RMN ³ C (50 MHz, CDCI ₃ ): 21.5, 48.1 , 96.5, 1 1 1.6, 120.8, 121.2, 121.8, 125.0, 126.7, 127.2, 127.6, 128.2, 128.8, 129.6, 129.9, 137.5, 139.5, 141.1 , 153.2, 156.9.

SM (70 eV, El) m/z (%) = 365 (M , 100), 274 (63), 246 (21 ), 218 (27), 119 (12), 91 (44), 65 (12). HRMS (ESI): calcul anal, pour C ₂ 5H ₁₉ N0 ₂ (M+H) 366.1489, mesuré 366.1485.

3-(methoxymethyl)-9-methylpyrano[3,4-b]indol-1 (9H)-one (C10)

Rendement : 80%. Solide blanc. Mp = 80-82°C. IR (neat): 3056, 2946, 2829, 1733, 1701 , 1631 , 1461 , 1 195, 1055, 736.

RMN H (300 MHz; CDCI ₃ ) : 3.50 (s, 3H), 4.21 (s, 3H ), 4.37 (d, 2H, J = 0.6 Hz,), 6.70 (t, 1 H, J = 0.6 Hz), 7.25-7.31 (m, 1 H), 7.45-7.47 (m, 2H), 7.88 (ddd, 1 H; J = 8.1 , 1.2, 0.8 Hz).

RMN ³ C (75 MHz; CDCI ₃ ) : 31.2, 58,7, 70.8, 99.8, 1 10.5, 120.9, 121.5, 124.7, 127.8, 141.2, 151.9, 157.1.

HRMS (ESI): calcul anal, pour C ₁₄ H ₁₄ N0 ₃ (M+H) 244.09737, mesuré 244.09656. 9-benzyl-3-phenylpyrano[3,4-b]indol-1(9H)-one (C11)

Rendement: 40%; solide jaune. Mp: 160-161 °C. IR (KBr): 3025, 2939, 1716, 1616, 1605, RMN H (300MHz, CDCI ₃ ): 5.97 (s, 2H), 7.20-7.53 (m, 12H), 7.92-8.00 (m, 3H).

RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ): 48.2, 97.3, 100.1, 111.6, 121.0, 121.4, 121.8, 125.1, 126.5, 127.2,

127.7, 128.3, 128.8, 129.0, 129.3, 132.7, 137.5, 141.2, 153.0, 156.8.

MS (70 eV, El) m/z (%) = 351 (M +, 100), 260 (59), 232 (23), 204 (18), 105 (12), 91, 45, 77 (14).

HRMS (ESI): calcul anal pour C ₂ 4H ₁₇ N0 ₂ (M+H) 352.1332, mesuré 352.1322.

(E)-9-benzyl-3-(2-(2,6,6-trimethylcyclohex-2-enyl)vinyl)p yrano[3,4-ft]indol-1(9H)-one (C12)

Rendement: 70%; solide orange. Mp: 86-88 °C. IR (KBr): 3060, 3031, 1710, 1640, 1593.

RMN H (300 MHz, CDCI ₃ ): 0.92 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 1.20-1.28 (m, 1H), 1.49-1.60 (m, 1H), 1.65 (d, 3H, J=1.3 Hz), 2.02-2.12 (m, 2H), 2.30 (d, 1H, J= 9.5 Hz), 5.50 (bs, 1H), 5.92 (s, 2H), 6.12 (d, 1H, J= 15.4 Hz), 6.46 (dd, 1H, J= 15.4, 9.5 Hz), 6.76 (s, 1H), 7.24-7.30 (m, 6H), 7.45- 7.53 (m, 2H), 7.87 (d, 1H, J= 8.0 Hz).

RMN ³ C (75 MHz, CDCI ₃ ): 23.2, 23.2, 27.1, 28.1, 31.4, 32.8, 48.1, 54.8, 99.3, 111.5, 120.8, 121.2, 121.6, 121.8, 121.9, 123.3, 126.6, 127.2, 127.6, 128.1, 128.8, 133.3, 135.8, 137.6, 141.0, 152.0, 156.9.

MS (70 eV, El) m/z (%) = 423 (M ⁺ , 41), 368 (12), 367 (40), 331 (24), 301 (20), 289 (10), 288 (39), 91 (100).

HRMS (ESI): calcul anal pour C29H29NO2 (M+H) 424.2271, mesuré 424.2279.

Préparation des composés C13 à C16

C13 C14

Procédure générale d'obtention du noyau imidazo[1 ,2-a]pyridinpyran-1 -one :

Dans un tube de Schlenk équipé d'un barreau aimanté, sont introduits 478 mg de K ₂ C0 ₃ (3.46 mmol, 2 équivalents) et 500 mg d'acide 3-iodoimidazo[1 ,2-a]pyridin-2-oïque (1 .73 mmol, 1 équivalent), ainsi que 10 mL de DMF anhydre. La suspension est agitée pendant 15 minutes puis dégazée sous vide à -80°C et mise sous argon. Après avoir atteint la température ambiante, l'alcyne (2.59 mmol, 1.5 équivalents) est ajouté ainsi que 330 mg de Cul (1.73 mmol, 1 équivalent). Le tube de Schlenk est placé et agité dans un bain d'huile préchauffé à 1 10- 120°C pendant 24-48h. Le mélange est ensuite refroidi à température ambiante et hydrolysé à 0°C avec une solution aqueuse saturée de NH ₄ CI (15 mL) ; 50 mL d'éther sont ajoutés dans le tube de Schlenk et le mélange est filtré sur Celite®. La Celite® est ensuite lavée avec 50 mL d'éther. La phase aqueuse est éliminée et la phase organique est lavée trois fois avec de l'eau (3 x 15 mL). La phase organique est séchée sur MgS0 ₄ et concentrée sous vide. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash sur gel de silice pour donner les indolopyranones désirées. 3-[Cyclopropyl]pyrano[3',4':4,5]imidazo[1,2-a]pyridin-1-one (C13)

Rendement: 62%. Solide jaune. Mp = 150-152 °C. IR (KBr) : 3091, 2918, 1739, 1621, 1516, 1037.

RMN H (200 MHz; CDCI ₃ ) : 0.99-1.03 (m, 2H), 1.14-1,18 (m, 2H), 1.91-1,97 (m, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.96 (t, 1H, J = 6.6 Hz), 7.35 (dd, 1H, J = 9.4, 6.6 Hz), 7.71 (d, 1H, J = 9.4 Hz) ,8.12 (1H, d, J = 6.6Hz).

RMN ³ C (50 MHz; CDCI ₃ ) : 7.5, 14.2, 89.5, 113.2, 119.1, 124, 126.4, 127.4, 132.2, 146.4, 158.2, 160.0.

SM (El) 226 (100), 197 (30), 184 (26), 169 (93), 155 (16), 129 (26), 78 (93), 51 (34) and 39 (14).

HRMS: calcul anal, pour C ₁₃ H ₁₀ N ₂ O2 (M ⁺ ): 226.0742, mesuré 226.0747.

3-(Diethoxymethyl)pyrano[3',4':4,5] imidazo[1,2-a]pyridin-1-one (C14)

Rendement : 43%. Solide jaune. Mp: 168-170 °C; IR (KBr) : 3059, 2974, 1734, 1685, 1636, 1506.

RMN H (200 MHz; CDCI ₃ ) : 1.30 (t, 6H, J = 7.0 Hz), 3.66-3.79 (m, 4H), 5.36 (s, 1H), 7.01 (t, 1H, J = 6.6, Hz), 7.16 (s, 1H), 7.40-7.43 (m, 1H), 7.74-7.76 (m, 1H), 8.18-8.21 (m, 1H).

RMN ³ C (50 MHz; CDCI ₃ ) : 15.6 (2C), 63.0 (2C), 91.7, 98.0, 114.7, 120.3, 125.4, 128.8, 155.1, 158.7.

MS (El) 288 (M, 70), 260 (54), 243 (62), 231 (39), 215 (100), 185 (46), 78 (72), 75 (49), 47 (68). HRMS calcul anal, pour C15H16N2O4 (M ⁺ ): 288.1110, mesuré 288.1119.

(E)-3-[2-(2,6,6-Trimethylcyclhex-2^nyl)vinyl]pyrano[3 4':4,5]imidazo[1,2-a]pyridin-1-one (C15).

Rendement: 60%. Solide jaune. Mp: 125-127 °C IR (KBr) : 3065, 2926, 1732, 1637, 1508, 1262, 1035.

RMN H (200 MHz; DMSO) : 0.85 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 1.50-1.53 (m, 2H), 1.58 (s, 3H), 1.99- 2.02 (m, 2H), 2.36-2.40 (m, 1H), 5.48 (bs, 1H), 6.20-6.24 (m, 2H), 7.33 (t, 1H, J =6.4 Hz), 7.46 (s, 1 H), 7.53 (dd, 1 H, J = 9.0, 6.4 Hz), 7.72 (d, 1 H, J = 9.0 Hz), 8.74 (d, 1 H, J = 6.4, Hz); RMN ³ C (50 MHz; DMSO) : 22.7, 26.6, 27.7, 30.8, 32.8, 53.5, 94.0, 1 13.8, 1 18.4, 121.6, 123.4, 126.7, 127.3, 129.3, 132.7, 132.8, 135.5, 135.7, 146.8, 152.2, 157.6.

MS (El) 334 (M ⁺ , 99), 278 (100), 249 (54), 213 (96), 149 (49) and 39 (34);

HRMS calcul anal, pour C21 H22N2O2 (M ⁺ ):. 334.1681 , mesuré 334.1687. pyrano[3',4':4,5]imidazo[1,2-a]pyridin-1 -one (C16)

Rendement: 2%. Solide marron. Mp: 172-174 °C IR (ATR) : 3081 , 2925, 2853, 1727, 1096, 757, 740.

RMN H (300 MHz; CDCI ₃ ) : 1.29 (t, 6H, J = 7.1 Hz), 1.53 (s, 3H), 3.27 (s, 2H), 4.27 (q, 4H, J = 7.1 Hz) , 6.83 (s, 1 H), 7.01 (ddd, 1 H, J = 1.1 , 6.9 Hz), 7.43 (ddd, 1 H, J = 1.1 , 6.9, 9.2 Hz), 7.80 (ddd, 1 H, J = 1.1 , 9.2 Hz), 8.19 (ddd, 1 H, J = 1.1 , 6.9 Hz).

RMN ³ C (75 MHz; CDCI ₃ ) : 14.0, 201.1 , 29.7, 39.8, 53.6, 61.9, 95.3, 1 14.0, 1 19.8, 124.7, 128.0, 136.3, 155.0, 171.1.

HRMS calcul anal, pour C19H21 N2O6 (M+H):. 373.13996 mesuré 373.1391 1

Inhibition du développement d'Eimeria tenella

L'effet des 15 composés dérivés du C1 (et en particulier C2, C3 et C5) sur le développement du parasite Eimeira tenella est déterminé en observant leur incidence sur la différenciation des sporozoites en schizontes, qui constitue une étape clef du développement des parasites.

Préparation des cellules :

Des cellules MDBK (Madin-Darby bovine kidney) sont mises en culture en plaque 24 puits contenant des lamelles de verres, 24h avant l'expérience. La concentration utilisée est de 1x10 ⁵ cellules par puits, dans du milieu Ham's F12 avec 5% de SVF, 2mM glutamine, 10UI/mL pénicilline et ^g/mL streptomycine.

Les cellules sont ensuite placées dans une étuve à 41 °C en atmosphère contenant 5% de C0 _2.

Préparation des parasites :

Des parasites exprimant le gène de la Yellow Fluorescent Protein (YFP) sont purifiés à partir d'oocystes comme décrit par Rieux et al, Plos One 2012.

Les oocystes sporulés sont broyés mécaniquement à l'aide de billes de verre de 0,5 mm. Les parasites sont centrifugés à 800G, 5 min, 20°C et lavés 3 fois en PBS pour éliminer les débris de parois. Les sporocystes sont ensuite incubés dans un milieu d'excystation (Sels biliaires 0,5%, Trypsine 0,25% dilué en PBS pH 7,6) à 41 °C pendant 75 minutes. Les sporozoïtes sont purifiés par deux étapes de filtration, la première sur du coton puis sur un filtre de polycarbonate de 5μΜ (GE Water &ProcessTechnology). Préparation des composés :

Les composés C1 , C2, C3, C4 et C5 sont dissous dans du DMSO (Diméthylsulfoxyde) à une concentration de 10mM.

Infection des cellules :

Les parasites (2x10 ⁵ ) sont mis au contact des cellules (1x10 ⁵ ) en même temps que le composé à tester (C1 , C2, C3, C4 et C5) dans un volume final de 500μί par puits. Pour chaque composé testé, le test est réalisé en double dans 2 puits différents. Un témoin (réalisés en double dans 2 puits) sert de témoin de développement. Il est constitué des parasites et des cellules sans ajout de composé à tester. Un autre témoin (également en double) est utilisé pour tester la toxicité du DMSO dans lequel sont dissouts les composés à tester. Il est constitué des cellules, des parasites et du solvant (DMSO) à la concentration maximale utilisée pour l'expérimentation.

Les cellules sont ensuite placées dans une étuve à 41 °C en atmosphère contenant 5% de C0 _2. Le milieu de culture est changé deux fois par jour à partir de 16h PI (Post-infection), les inhibiteurs sont renouvelés en même temps que le milieu.

Observation des parasites en absence et en présence du composé C1 :

Les cellules sont lavées et fixées à l'Antigène fixe à 48h Pl. Les lamelles sont ensuite mises en contact avec du milieu de montage (Vectashield) contenant du DAPI avant d'être sellées.

Les résultats sont présentés à la figure 1 . Il peut être observé qu'en présence du composé C1 , le nombre de schizontes observés (B) est plus faible.

Calcul du pourcentage d'invasion:

Dans un premier temps, le pourcentage d'invasion est calculé. Trois comptages sont effectués pour déterminer le nombre de cellules et le nombre de parasite total (sporozoites + schizontes).

Formule : (Nb parasites / Nb cellules) * 100

Calcul du pourcentage de développement : Pour déterminer le pourcentage de développement, il est nécessaire de comparer le nombre de parasite total et le nombre de schizontes présents.

Formule : (Nb schizontes / Nb parasites) * 100

Les effets des composés sur l'invasion et le développement des parasites sont présentés aux figures 2 et 3.

La figure 2 met en évidence une inhibition dose dépendante du développement des parasites par le composé C1. Il peut être observé que le composé C1 n'inhibe pas l'invasion mais inhibe fortement la différenciation des sporozoïtes en schizontes.

Test de cytotoxicité au MTT :

Après incubation des cellules en présence de 20 μΜ des composés pendant 1 heure, le milieu de culture est éliminé, 1 mL de milieu complet frais est ajouté aux cellules ainsi que 200 μί de MTT (Dimethyl thiazol-diphenyl-tetrazolium bromide, à 5 mg/mL). Les cellules sont placées à 41 °C pendant 2 heures en atmosphère contenant 5% de C0 ₂ . Le milieu de culture est éliminé, et 200 μί de tampon d'extraction (HCI 4 mM en isopropanol) sont ajoutés. Les cellules sont incubées 10 minutes à 37°C en atmosphère contenant 5% de C0 ₂ . Le tampon d'extraction est prélevé, centrifugé 5 minutes à 1400 rpm pour éliminer les débris cellulaires. Le surnageant est transféré en plaque P96, et la densité optique (DO) est lue à 570 nm. L'intensité est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes. Le pourcentage de réduction de la DO est calculé :

Formule : (DO _CO mposé / DODMSO ) * 100

La figure 3A présente les effets des composés C1 , C2, C3, C4 et C5 sur l'invasion et le développement par rapport au contrôle. Il peut être observé que chacun des composés testés inhibe fortement la différenciation des sporozoïtes en schizontes sans influencer l'invasion. La figure 3B présente l'absence d'effets cytotoxiques des composés C1 , C2, C3, C4 et C5 sur les cellules par rapport au contrôle (DMSO).

Inhibition du développement de Toxoplasma gondii L'effet de composés chimiques sur le développement du parasite Toxoplasma gondii est déterminé en observant leur incidence sur la formation de plages de lyses qui illustre la multiplication de parasite sur un tapis cellulaire. Préparation des cellules :

Des cellules HFF (Human Foreskin Fibroblast) sont mises en culture en plaque 6 puits pour être à confluence au moment de l'expérimentation. Les cellules sont dans du milieu DMEM avec 10% de SVF, 2mM glutamine, 10U/mL péniciline et ^g/mL de streptomycine.

Les cellules sont ensuite placées dans une étuve à 37°C en atmosphère contenant 5% de C0 ₂

Préparation des parasites :

Les tachizoites de Toxoplasma gondii sont maintenus en routine sur des cultures de HFF cultivées dans du milieu DMEM (voir ci-dessus). Avant la mise en contact sur les cellules HFF les parasites sont filtrés avec un filtre de polycarbonate de 5μΜ (GE Water & Process Technology)

Préparation des composés :

Les composés à tester sont dissous dans du DMSO (Diméthylsulfoxyde) à une concentration de 10mM.

Infection des cellules :

Les parasites (1x10 ⁴ /puit) sont déposés sur les cellules à confluence en même temps que le composé à tester dans un volume final de 3mL par puits. Pour chaque composé, le test est réalisé en double dans deux puits différents. Un contrôle sans composé (réalisé en double dans 2 puits différents) sert de témoin de développement. Il est uniquement composé des cellules et des parasites. Un autre témoin (également en double) est testé pour vérifier l'absence d'effet néfaste du DMSO sur le développement. Il est constitué des cellules, des parasites et du solvant (DMSO) à la concentration maximale utilisée pour l'expérimentation. Après ajout des parasites et des composés, les cellules sont placées dans une étuve à 41 °C en atmosphère contenant 5% de C0 ₂ .

Le milieu de culture ne doit pas être changé et la plaque ne doit pas être déplacée pendant toute la durée de l'infection

Marquage des HFFs et révélation des plages de lyses : Les cellules sont fixées au méthanol froid (conservé à -20°C) pendant 5 minutes. Les cellules sont ensuite lavées au PBS avant d'être colorées au Crystal Violet pendant 1 à 5 minutes. Les plaques sont lavées abondamment pour enlever l'excédent de colorant et sont séchées à l'air libre. Les plages de lyses reflétant le développement de Toxoplasma vont apparaître comme des plages claires sur le fond violet des HFFs. Une diminution du développement du parasite entraine une diminution du nombre de plages observées et de leurs superficies.

Calcul de la superficie des plages de lyses :

La superficie des plages de lyses est calculée par l'utilisation d'un logiciel de traitement d'image de microscopie (Zeiss Axiovision). La superficie moyenne est calculée pour chaque condition et est exprimée comme le pourcentage de la moyenne d'une condition par rapport au contrôle sans inhibiteur avec son écart type.

Les résultats sont présentés aux figures 4A et 4B qui mettent en évidence la diminution dose dépendante de la surface des plages de lyses illustrant le développement du parasite Toxoplasma gondii.

Inhibition du développement de Plasmodium falciparum

Les travaux sur P. falciparum ont été réalisés par Henri Vial et son équipe (UMR 5235, Dynamique des Interactions Membranaires Normales et Pathologiques, CNRS Université Montpellier II, Case 107, Place Eugène Bataillon, 34095 Montpellier, Cedex 05, France). L'effet des composés chimiques sur le développement du parasite Plasmodium falciparum est déterminé in vitro en évaluant leur activité contre ce parasite après 48h de culture de contact (soit le temps d'un cycle de P. falciparum). Cette activité pharmacologique est évaluée par incorporation par le parasite d'hypoxanthine tritiée et est confirmée par microscopie optique après coloration au Giemsa.

Préparation des parasites et des cellules :

L'effet du composé C1 sur la croissance in vitro de Plasmodium falciparum est mesuré sur des érythrocytes en suspension infectés par la souche P. falciparum 3D7 (1 ,5% d'hématocrite finale et 0,6% de parasitémie) en micro-plaques 96 puits comme décrits par Desjardins et al (Dejardins, 1979). Le volume de chaque puit est de 200μί final de milieu de culture complet CM (RPMI 1640 25 mM Hepes + 10% de sérum humain AB) sans (Contrôle) ou en présence du composé C1 . La culture est mise en étuve pendant 48h à 37°C. Préparation des composés :

Le composé C1 a été dissous dans du DMSO (Diméthylsulfoxyde). La concentration finale de DMSO ne dépasse jamais 0,25%.

Evaluation des effets anti-malaria :

Après les 48h de cultures, 30μί de milieu complet contenant Ο,θμθί [ ³ H]-hypoxanthine sont ajoutés dans chaque puits. Les plaques sont incubées pendant 18h à 37°C. Les cellules sont ensuite lysées et les macromolécules parasitaires, incluant les acides nucléiques radioactifs sont récupérés avec des filtres de fibre de verre. Un cocktail de scintillation est ajouté et la radioactivité des filtres est évaluée en phase liquide par un spectromètre de scintillation.

Le bruit de fond de radioactivité est obtenu par l'incubation de cellules non infectée dans les mêmes conditions que précédemment. L'effet antiparasitaire est exprimé comme riC ₅₀ , dose à laquelle la drogue entraine une inhibition de 50% du développement parasitaire. Les résultats sont présentés à la figure 5. L'IC ₅ o du composé C1 contre la croissance de Plasmodium falciparum après 48 h de contact (un temps de cycle) est de 14 micromolaires.

L'activité antiparasitaire est confirmée par examen de frottis colorié au Giemsa.