L'invention concerne l'utilisation en cosmétique d'extraits d'une plante du genre Commiphora, en particulier de la plante Commiphora mukul, notamment comme agent à activité anti-rides. Elle concerne également à titre de produits industriels nouveaux, deux produits particulièrement actifs isolés à partir de ces extraits ainsi que des dérivés de ces produits nouveaux. On sait que la plante Commiphora mukul fait partie de la famille des

Burséracées. Le Commiphora mukul est une plante originaire de l'Inde très utilisée en médecine traditionnelle de l'Inde, en médecine Ayurvédique. En particulier dans ces applications, on utilise une résine produite par Commiphora mukul appelée également Guggul. Dans ce traitement ayurvédique, on connaissait le traitement de l'obésité et des désordres lipidiques ainsi que des maladies rhumatismales.

Il est à noter que le terme "guggul" désigne à la fois la plante et la résine qu'elle produit. Par ailleurs, cette plante est un petit arbre ou un arbuste de 1,2 à 1,8 m de hauteur qui pousse essentiellement en Inde et l'incision de la plante permet de récolter la gomme-résine de manière courante. Récemment, on a décrit dans les brevets US-A-4 847 071,

US-A-4 847 069, US-A-4 946 671 et US-A-4 954 332, des compositions topiques pour la protection contre les radiations UV, contenant des absorbeurs de radicaux libres et un agent anti-inflammatoire. Parmi les nombreux agents anti- inflammatoires cités se trouve le Guggal ou extrait de Guggul. D'autre part, il est également connu par le document EP-A-513 671 des compositions contenant un extrait lipophile total de la plante Commiphora mukul en particulier obtenu à partir de la résine d'écorce de Commiphora mukul comme ingrédient actif. Cet extrait a une forte proportion en Guggulstérones. Cette composition est décrite comme présentant une activité antiinflammatoire, immuno-modulatrice ou anti-androgène pour le traitement de l'acné et de l'hypertrophie bénigne de la prostate.

Il a été maintenant découvert de manière surprenante et inattendue que les extraits de plante du genre Commiphora, en particulier de la plante Commiphora mukul, présentent une activité anti-rides et peuvent ainsi être utilisés comme agents cosmétiques destinés à améliorer l'aspect de surface de la peau, en particulier pour diminuer la profondeur des rides et faire disparaître les ridules.

Les deux produits ont pu être isolés à partir de la plante Commiphora mukul et ont été complètement identifiés par différentes techniques analytiques comme cela ressort de la description qui suit.

Le produit répondant à la formule II _a , de formule brute C30H50O3, sera désigné par "Commiphérol". Sa nomenclature est la suivante : (5R, 10S, 8R, 9R)-3-oxopolypoda- 13E, 17E,21 E-triène-8,30-diol .

Le dérivé acide répondant à la formule 11^, de formule brute C30H48O4, sera désigné par "Commiphérine". Il s'agit de l'acide (5R, 10S, 8R, 9R)-8-hydroxy-3-oxopolypoda-13E, 17E, 21E-triène-30-oïque.

La nomenclature utilisée pour désigner les produits de formules II _a et II _D ci-dessus est basée sur le nom de l'hydrocarbure correspondant qui est un triterpène : l'α-polypodatétraène, bien connu dans la littérature, par exemple dans la publication de Yoko Arai et al., Tetrahedron Letters, (1992) 3_3_ (10) 1325-8, relative à la plante Polypodiodes formosane. La numération des atomes de carbone répond à celle indiquée ci-dessous :

Il est à noter que divers dérivés triterpéniques possédant le squelette carboné polypodane ont été identifiés dans d'autres plantes, en particulier dans des fougères du genre des Polypodiacées telles que Polypodium vulgare, P. fauriei et P. virginianum (Y. Arai et al., Phytochemistry, (1991) 3J) (10) 3369-3377 ; K. Shiojima et al., Tetrahedron Lett., (1983) 24 5733), des Aspidiacées (M. Nishizawa et al., J. Chem. Soc, Chem. Commun. (1984) N'7, 467-8) et des Cheiropleuriacées (R. Karnaya et al., Chem. Pharm. Bull. (1990) 3J (8) 2130-2.

Selon un second aspect, l'invention concerne également des procédés de préparation des deux produits II _a et 11^ à partir de la plante Commiphora mukul ainsi que des dérivés d'acylation du produit II _a , en particulier le produit d'acctylation et des sels et esters du produit II5.

dans laquelle R représente : a) un groupement CH2OH, le produit étant désigné par la formule II _a , b) un groupement COOH, le produit étant désigné par la formule II _D , c) un groupement

0

dans lequel Rj représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, en particulier le groupe méthyle, d) un groupement COOM, où M désigne un métal alcalin, de préférence le sodium ou le potassium, ou un groupement ammonium ou amine quaternaire, e) un groupement COOM'Q 5, où M' désigne un métal alcalino-terreux, de préfé¬ rence le calcium, f) un groupement COOR2, où R2 désigne un groupement alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone.

L'invention concerne tout particulièrement les deux produits industriels nouveaux désignés respectivement par II _a et II5 et répondant aux formules ci- dessous :

l'extrait G en trois fractions F représentant 92,5 % de l'extrait G, FIII représentant 4,5 % de cet extrait et HV représentant 3 %. La fraction FIII a pu être identifiée comme constituée essentiellement des stérols et la fraction FIV se compose essentiellement des produits de rinçage de la colonne chromatographique par le dichlorométhane.

La fraction F est ensuite soumise au protocole C de séparation par chromatographie liquide, qui conduit à deux fractions dénommées respectivement FI et Fil. On élimine la fraction F I qui est sensiblement inactive. Elle représente 21,5 % de F, et est constituée essentiellement des stérones (Z- et E- guggulstérone).

La fraction Fil, qui présente une activité lipogénétique, est à son tour soumise à un fractionnement par chromatographie liquide permettant de la séparer en trois fractions : FILA représentant 19,5 % de l'extrait G, FIIB représentant 20 % de l'extrait G et FIIC représentant 31,5 % de l'extrait G. De ces trois fractions, la fraction FIIB est la plus active. On repère sur le chromatogramme la position des pics correspondants.

Il est donc ensuite possible, dans une deuxième étape, d'obtenir par fractionnement selon le protocole E directement à partir de l'extrait G une fraction active, dénommée FIIB1, correspondant aux pics de la fraction FIIB. Ensuite, les deux produits de formules N _a et II5 peuvent être séparés à partir de l'extrait FIIB1 par chromatographie liquide haute performance prépa¬ rât! ve.

Les deux produits II _a et 11^, dont l'activité s'est avérée sensiblement équivalente, ont été parfaitement purifiés et ont pu être isolés par chromatographie liquide en utilisant les conditions suivantes :

- Colonne RP 18 Lichrospher 5 μm 125 x 4 mm

- Mélanges : Eau + 0,1 % CF3 COOH

Acétonitrile - Détection UV : λ = 210 nm.

Le produit de formule II _a peut ensuite être soumis à une étape classique d'acylation, en particulier d'acétylation, pour préparer les dérivés acylés correspondants, en particulier le dérivé acétylé.

Différents procédés peuvent être utilisés pour isoler les produits de formules II _a et IIj, à partir de la plante Commiphora mukul.

Dans ces procédés, on part avantageusement de la résine de Commiphora mukul que l'on soumet à différentes étapes d'extraction et de fractionnement successives.

On soumet ainsi de façon particulièrement avantageuse la résine de Commiphora Mukul à une première étape dite d'extraction par un solvant ou un mélange de solvants, puis on soumet ensuite l'extrait à différentes étapes de sépa¬ ration destinées à isoler une fraction particulièrement active contenant au moins un des produits de l'invention.

Pour réaliser la première étape d'extraction, on peut utiliser une large gamme de solvants de polarités très différentes.

A titre d'exemples de solvants utilisables pour réaliser cette étape, on citera, par ordre de polarité croissante :

- l'éther de pétrole qui permet d'extraire 16 % en poids de la résine brute,

- le dichlorométhane qui permet d'extraire 26 % en poids de la résine brute,

- l'acétate d'éthyle qui permet d'extraire 30,5 % en poids de la résine brute,

- l'éthanol qui permet d'extraire 26,5 % en poids de la résine brute.

La figure 1 représente schematiquement différents protocoles permettant de préparer les produits de formules Il _a et 11^ à partir d'un extrait de la résine de Commiphora mukul selon l'invention.

Selon le schéma de la figure 1, on prépare à partir de la résine de Commiphora mukul un premier extrait selon l'invention, dénommé extrait G.

Cet extrait G est obtenu par extraction par l'éthanol à 96 % à 45 ^* C de la résine après broyât des agrégats.

Selon une première étape, l'extrait G est ensuite soumis à une succession de fractionnements par chromatographie liquide haute performance. Chaque fraction est testée pour son activité lipogénétique sur des fibroblastes en culture, selon la méthode exposée plus loin. Ces différents fractionnements aboutissent à l'obtention d'une fraction active, FIIB, dont on repère les pics caractéristiques sur le chromatogramme.

Plus précisément, selon cette première étape, l'extrait G sera soumis dans un premier temps à un protocole B destiné à isoler les fractions les plus actives permettant de séparer par chromatographie liquide haute performance

Selon une autre variante, on utilise comme extrait de la plante Commiphora mukul un extrait obtenu après broyât des agrégats de la résine, puis extraction par un solvant. Comme on l'a vu précédemment, une large gamme de solvants pourra être utilisée à cet effet. Toutefois, en se référant à la classification des solvants par polarité telle que publiée en particulier par Veronika R. Meyer dans Practical High - performance Liquid Chromatography (1988), John Willey & Sons, p. 120-121, on choisira, de préférence, les solvants dont le paramètre de polarité p' est inférieur à 5,5 et de préférence compris entre 0,1 et 4,5. L'extrait ci-dessus est avantageusement obtenu par extraction par un solvant organique ou un mélange de solvants organiques choisis dans le groupe constitué par : le n-pentane, le n-hexane, l'éther de pétrole, le cyclohexane, le n- décane, le dichlorométhane, l'isopropanol, le n-propanol, le chloroforme, l'éthanol, l'acétate d'éthyle, l'acétone et le méthanol. Selon d'autres variantes de l'invention, l'extrait pourra être constitué de différents produits présentant le caractère commun d'être enrichis en au moins l'un des produits de formule I ou II, en particulier de formule II _a ou II5, obtenus à partir de l'extrait décrit ci-dessus.

Comme cela est clairement illustré dans les exemples donnés en référence au schéma de la figure 1, les produits enrichis en produit(s) de l'invention peuvent être obtenus par exemple à partir de l'extrait G, en soumettant cet extrait à différentes étapes sucessives de séparation, notamment par Chromatographie Liquide Haute Performance ou par extraction au gaz carbonique supercritique.

Selon une variante particulièrement avantageuse de l'invention, on utilisera au moins l'un des produits de formule I ou II, en particulier de formule II _a ou 11^, comme agent cosmétique pour modifier la surface de la peau comme indiqué précédemment.

Selon un quatrième aspect, l'invention concerne également une composition, en particulier destinée à un usage cosmétique, caractérisée en ce qu'elle contient l'un au moins des produits de formule I ou II, en particulier II _a ou llb ou des extraits de plante contenant au moins l'un de ces produits, en particulier des extraits de plante du genre Commiphora, encore en particulier de la plante Commiphora mukul, de préférence en combinaison avec un excipient ou support acceptable, en particulier cosmétiquement acceptable.

Le produit 11^ peut être aisément transformé en l'un de ses sels décrits ci-dessus par neutralisation de la fraction acide en bout de chaîne par une base correspondante.

On pourra de même aisément accéder aux produits d'estérification du produit 11^ en le faisant réagir classiquement avec un alcool léger.

Ces réactions, destinées à acyler le produit II _a ou à estérifier ou salifier le produit II5, peuvent également être réalisées directement sur un mélange contenant les deux produits actifs II _a et II5, en particulier sur le mélange FIIB1 décrit ci-dessus. Par exemple, on pourra effectuer l'acétylation de II _a par l'anhydride acétique en traitant l'extrait FIIB1 de la façon suivante : on dissout FIIB1 dans du dichlorométhane (1 volume), on ajoute 1 volume de pyridine puis 1,2 équivalent d'anhydride acétique pour 1 équivalent de FIIB1 et on laisse la réaction se faire à température ambiante durant toute une nuit. La demanderesse a constaté de façon tout à fait surprenante que les extraits de la plante Commiphora mukul, en particulier les extraits particulièrement riches en produits répondant à la formule II _a ou II5, présentaient une activité stimulatrice de la lipogénèse interne aux fibroblastes. Ceci se traduit par une augmentation de volume cellulaire des fibroblastes conduisant à un meilleur contact avec le réseau proteique extra-cellulaire. Le derme se trouve ainsi tonifié, ce qui permet de diminuer la profondeur des rides et des ridules, et, en conséquence, de les rendre moins apparentes. Cette activité a donc permis à la demanderesse de proposer une solution particulièrement originale pour améliorer l'aspect de surface de la peau. Ainsi, selon un troisième aspect, l'invention concerne l'utilisation d'au moins un extrait de plante du genre Commiphora, en particulier de la plante Commiphora mukul, comme agent cosmétique destiné à modifier la surface de la peau, en lui conférant un aspect plus lisse par l'atténuation de la profondeur des rides et des ridules. On pourra utiliser dans cette application différents extraits de la plante

Commiphora mukul, en particulier des extraits riches en composés répondant aux formules I, II, II _a ou 11^,, ou en leur mélange ou en dérivés de ces produits, tels que définis précédemment.

On pourra, selon une première variante, utiliser comme extrait de la plante Commiphora mukul la résine-gomme dite Guggul.

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L'extrait est réalisé par l'éthanol à 96 % à 45 ^* C de la façon suivante : on introduit 10 g de résine et 200 ml d'éthanol dans un ballon de 500 ml muni d'un réfrigérant et d'un agitateur et dont le chauffage est assuré par une plaque chauffante.

L'agitation et l'extraction durent 2 h minimum, mais il est conseillé de laisser 4 à 5 h pour un meilleur rendement.

Une filtration est faite après extraction suivie d'une évaporation sous vide.

Le rendement d'extraction est d'environ 25 % en poids.

Exemple 2 : Préparation de la fraction F II Bl à partir de l'extrait G

Cet exemple est donné en référence au schéma de la figure 1. On donne, dans le tableau 1 ci-dessous, des précisions sur les protocoles B, C, D et E en ce qui concerne la nature et les caractéristiques des colonnes de chromatographie utilisées ainsi que le type de détecteur et la nature des éluants utilisés.

TABLEAU 1

Commiphora mukul

Avantageusement, cette composition contient de 0,001 à 1 % en poids de l'un au moins des produits de formule (I) ou (II), en particulier (11^ ou (11^), de préférence de 0,01 à 0,1 %.

Ou encore cette composition contient très avantageusement de 0,005 à 5 % en poids, de préférence de 0,05 à 1 % en poids d'un extrait de Commiphora mukul contenant au moins l'un des produits précités, en particulier un extrait de résine de cette plante.

Les compositions cosmétiques de l'invention peuvent être sous différentes formes, en particulier sous forme de solutions, de lait, de gel, de crème. Selon une variante de l'invention, la composition cosmétique contient, en outre, une quantité cosmétiquement efficace d'un produit agissant sur la synthèse de la fibronectine et/ou sur la synthèse du collagène.

A titre d'exemple de produit agissant sur la synthèse de la fibronectine, on citera les galactolipides, en particulier les galactosylglycérides dont l'utilisation est décrite dans la demande de brevet français non encore publiée déposée le 15 février 1995 sous le numéro 95.01714.

A titre d'exemple de produit agissant sur la synthèse du collagène, on citera la vitamine C.

L'invention concerne également un procédé de traitement cosmétique destiné à modifier la surface de la peau en lui conférant un aspect plus lisse par l'atténuation de la profondeur des rides et des ridules, caractérisé en ce que l'on applique sur les zones de la peau à traiter, en particulier sur le visage, une quantité efficace d'un produit ou d'un extrait de plante en contenant, pour obtenir ladite modification de surface, ledit produit ou ledit extrait étant de préférence incorporé dans un excipient cosmétiquement acceptable.

Selon une variante de réalisation de ce procédé de traitement cosmétique, l'extrait de plante précité est un extrait de la plante Commiphora mukul.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent donnés à titre purement illustratif de l'invention.

EXEMPLES

Exemple 1 : Préparation de l'extrait G selon l'invention On prépare cet extrait par extraction de la résine de Commiphora mukul après broyât des agrégats.

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TABLEAU 3

Déplacements chimiques des différents groupements carbonés du produit II5

Exemple 4 : Extraction par COo supercritique

L'extraction est réalisée sur environ 240 g de résine brute broyée, en deux étapes de la façon suivante :

- Etape 1 :

Cette étape est réalisée dans un appareillage classique, avec du CO2 pur à 150 bars et 40 ^* C.

La consommation de CO2 est de 2 000 kg de CO2 pour 24 kg de résine à extraire.

Le rendement d'extraction est d'environ 12,50 % par rapport à la charge de départ. L'extrait obtenu est éliminé.

Exemple 3 : Obtention des produits II ₃ et IIfr à partir de la fraction FIIB1

Les deux produits II _a et 11^, ont été séparés par chromatographie liquide preparative, et purification sur colonne C18 en élution isocratique par la technique de recyclage. Une détection à 210 nm permet de visualiser les produits II _a et II5.

Les deux produits de formules II _a et 11^ ont été totalement identifiés par spectrometrie de masse qui a permis de vérifier les formules brutes établies par

RMN.

Les résultats obtenus par RMN du carbone pour les deux produits II _a et

II5 sont donnés dans les tableaux 2 et 3 ci-dessous :

TABLEAU 2

Déplacements chimiques des différents groupements carbonés du produit II _a

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la synthèse des lipides intracellulaires (triglycérides). Ainsi, l'augmentation de l'activité de la G3PDH est directement reliée au renforcement de cette synthèse.

Par ailleurs, il est connu que la quantité d'AMPc, médiateur intracellulaire, augmente lors de la réaction de la lipolyse intracellulaire. L'AMPc formée dans la cellule est ensuite excrétée par celle-ci dans le milieu extra¬ cellulaire. Ainsi, la diminution du taux d'AMPc dans le milieu de culture traduit une diminution de la dégradation des triglycérides, donc une accumulation intra¬ cellulaire de ces lipides.

La résine de Commiphora Mukul (extrait G), la fraction FIIB1 ainsi que les produits II _a et II^ ont donc été étudiés avec ces deux marqueurs de différenciation.

Les fibroblastes sont ensemencées au fond des boîtes de Pétri de 35 mm de diamètre avec du milieu de culture "Dulbecco's Modified Eagle Médium" (DMEM) en présence de 5 % de sérum de veau (SV) et 5 % de sérum de veau foetal (SVF). Chaque essai est fait en triple.

Pendant la phase de traitement, le milieu est constitué de DMEM + 10 % de sérum de veau foetal.

Le produit ou l'extrait selon l'invention est mis en solution dans de l'éthanol et utilisé sur les cultures à la concentration finale de 5 μg/ml. Les opérations de culture se déroulent de la manière suivante :

- Au jour J = 0 : ensemencement dans du milieu DMEM + 5 % SV, 5 % SVF

- Au jour J + 2 : changement de milieu

- Au jour J + 5 : traitement par la résine de Commiphora mukul (Extrait G), FIIB1 ou II _a ou II _D à 5 μg/ml dans du milieu DMEM, 10 % SVF

- Au jour J + 6 : dosage AMPc dans du milieu de culture

- Aux jours J + 7 et J + 9 : traitement identique à celui effectué à J + 5

- Au jour J + 12 : broyage des cellules pour dosage G3PDH.

2. Dosage de l'adénosine 3-5-monophosphate evelique (AMPc)

Le dosage de l'AMPc réalisé par Radio Immuno Assay dit RIA (Kit Immunotech, société française, référence 1117) est basé sur le principe de la compétition antigène-anticorps. Les échantillons et les standards sont incubés en présence d'AMPc radiomarqué à l'iode 125 dans des tubes ou sont préalablement fixé des anticorps anti AMPc.

Etape 2 :

Cette étape est réalisée dans le même appareillage, avec un mélange contenant en poids 98 % de CO2 à 98 % et 2 % d'éthanol.

On utilise 1 000 kg de CO2 pour 24 kg de résine brute (soit 18 kg de CO2 pour 240 g de résine).

Le rendement d'extraction est d'environ 10 % par rapport à la charge de départ. On obtient un extrait dit extrait SFE (supercritical fluid extraction) enrichi en molécules II _a et 11^ avec un facteur de concentration de 6 à 8 par rapport à la résine brute.

Exemple 5 : Mise en évidence de l'activité des extraits et produits selon l'invention

1. Culture

Les cellules utilisées sont des 3T3 F442A qui constituent une lignée de pré-adipocytes murins sélectionnés pour leur capacité à se convertir en adipocytes si les conditions de culture le permettent, conformément à la méthode de Green, H & Kehinde, C, Cell 1 (1974) 113.

Cette lignée constitue en effet un modèle d'étude de la différenciation adipocytaire in vitro. Les 3T3 F442A en monocouche lors de la phase de multiplication présentent la morphologie et les caractéristiques enzymatiques de fibroblastes.

Les cellules confluentes dans un premier temps cessent de se diviser pour entrer dans leur phase de différenciation précoce. Cette différenciation conduit à la formation de colonies de cellules qui subissent la conversion adipocytaire.

Cette différenciation s'accompagne de changements dans la biosynthèse de plusieurs protéines et d'une augmentation d'activités enzymatiques différentes (Acetyl CoA carboxylase, ATP citrate lyase, Fatty acid synthétase, phosphoenolpyruvate kinase, glycéro-3-phosphate deshydrogénase dénommé G3PDH).

On s'est attaché à mesurer l'expression de deux marqueurs de différenciation, la glycéro-3-phosphate deshydrogénase (G3PDH) d'une part et l'AMP cyclique (AMPc) d'autre part.

Il est rappelé à ce propos que l'enzyme G3PDH permet la formation dans le fibroblaste du glycérol 3-phosphate, molécule impliquée par la suite dans

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dans laquelle :

Vp est la valeur moyenne entre les trois essais de la vitesse de transformation de la

NADH exprimée en nmoles/mn/mg de protéines cellulaires dans les cultures traitées par les produits selon l'invention

V _t est la valeur moyenne de cette vitesse dans les cultures témoins.

TABLEAU 4

II ressort donc très clairement du tableau 4 que les produits selon l'invention, qu'il s'agisse de l'extrait G, de la fraction FIIB1 ou des produits II _a ou llb, augmentent très fortement l'activité de l'enzyme G3PDH dans les cultures de fibroblastes, par rapport à l'activité de cette enzyme dans les cultures témoins. On observe en effet que l'activité de cette enzyme est multipliée par 3 par l'action de l'extrait G, et multipliée par 7 par l'action du composé II _D . Ainsi, il est démontré que les produits selon l'invention contribuent à augmenter de manière importante la synthèse de triglycérides intracellulaires.

4.2 Dosage d'AMPc

La quantité d'AMPc excrétée en 24 heures dans le milieu des différentes cultures réalisées figure au tableau 5. Elle est exprimée en nmoles/litre de milieu. L'activité A2 des produits selon l'invention sur l'excrétion de l'AMPc par les cellules, en rapport direct avec la réaction de lipolyse intracellulaire, est calculée selon la formule ci-dessous :

Après incubation, le contenu des tubes est aspiré et on compte la radioactivité résiduelle à l'aide d'un compteur gamma. Une courbe standard est préparée avec 6 concentrations connues d'AMPc et on définit la concentration des échantillons grâce à cette courbe étalon. L'AMPc étant produit et excrété par les cellules, on mesure donc l'AMPc contenu dans le milieu de culture. Plus précisément, on mesure la quantité d'AMPc excrétée dans le milieu de culture en 24 heures.

3. Détermination de l'activité glycéro-3-phosphate deshydrogénase (G3PDH) La monocouche cellulaire est récupérée par grattage et vigoureusement homogénéisée dans du tampon TRIS-HC1 (25 mM, pH 7,4) 1 mmole EDTA à 4 ^* C.

Le dosage de l'activité G3PDH est déterminé sur le surnageant du broyât cellulaire aussitôt après centrifugation.

La G3PDH catalyse la réaction suivante :

G3PDH

DHAP + NADH > glycérol-3-phosphate + NAD dihydroxyacétone phosphate

On mesure en spectrophotométrie à 340 nm la transformation en fonction du temps du coenzyme NADH (nicotinamide-adénine-dinucléotide hydrogéné) en NAD, ce qui traduit la vitesse de la réaction enzymatique, et donc l'activité de l'enzyme G3PDH.

On peut calculer une différence d'absorption (ΔAbs)/min qui correspond à la vitesse initiale de la réaction enzymatique.

Les résultats sont exprimés en activité spécifique soit en nmoles de

NADH transformées /min/ mg de protéines cellulaires (le taux de protéines cellulaires total est évalué par la méthode du BCA - PIERCE : protein assay

Reagent.).

4.1. Activité G3PDH

Les résultats expérimentaux de l'évaluation de l'activité de l'enzyme

G3PDH figurent au tableau 4 ci-dessous.

L'activité Ai des produits selon l'invention sur la stimulation de l'activité de cette enzyme est calculée selon la formule ci-dessous :

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Exemple 6 : Crème anti -rides

On prépare une crème anti-rides par mélange des constituants ci- dessous donnés avec leurs pourcentages en poids par rapport à la composition finale en suivant le protocole de préparation suivant : On prépare un mélange A constitué de :

Tegin 90® 1,7 Alcool stéarylique 1,8

Stéarine 3,0

Huile de silicone (Fluid 200®) 0,20

Squalane 10,0

Miglyol 812® 10,0 Acétate de D,L-α-tocophérol 0,2

Phénonip 0,5

Extrait supercritique SFE de l'exemple 4 0,5

On ajoute le mélange B constitué de : A :

- Glycérine 5,00

- Eau 58,53

Carbopol 940 0,20

puis C, D et E respectivement constitués de :

C : Soude 10 % 0,07

D : Protéines de blé 5,00

E : Parfum 0,30

dans laquelle : qp représente la quantité moyenne entre les trois essais d'AMPc excrétée dans le milieu des cultures traitées par les produits selon l'invention, exprimée en nmoles/litre/24 heures qt représente cette quantité moyenne dans le cas des cultures témoins.

TABLEAU 5

Ces résultats figurant au tableau 5 montrent que la quantité d'AMPc excrétée dans le milieu de culture est plus faible dans le cas des cultures traitées par les produits de l'invention que dans le cas des cultures témoins.

Ainsi, dans les cellules de cultures traitées, il apparaît que la lipolyse est très nettement inférieure à celle qui se produit dans les cellules des cultures témoins.

En conclusion, ces essais mettent clairement en évidence que les produits selon l'invention agissent par deux voies complémentaires pour augmenter la quantité de lipides intracellulaires, d'une part en favorisant leur synthèse, ce qui est démontré par l'augmentation de l'activité de l'enzyme G3PDH, et d'autre part en limitant leur dégradation, ce qui est démontré par la diminution du taux d'AMPc dans les cultures traitées.

On observera en outre que les deux molécules II _a et II _D donnent les résultats les plus élevés apparaissant effectivement comme étant les supports de l'activité lipogénétique des extraits et fractions selon l'invention. Ainsi, les produits selon l'invention accélèrent la différenciation adipocitaire des fibroblastes. De plus, en raison de l'accumulation des lipides, ces cellules augmentent leur volume, permettant ainsi un meilleur contact avec le réseau proteique extra-cellulaire. Le derme se trouve alors consolidé. Cette tonicité du derme entraine alors une dimunition de la profondeur des rides et ridules et confère à la surface de la peau un aspect plus lisse.

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REVENDICATIONS

1. Produit répondant à la formule (I) :

dans laquelle R représente : a) un groupement CH ₂ OH, b) un groupement COOH, ainsi que leurs sels ou esters.

2. Produits répondant à la formule (II)

dans laquelle R représente : a) un groupement CH2OH, le produit étant désigné par la formule II _a , b) un groupement COOH, le produit étant désigné par la formule II5, c) un groupement

— R 1,

dans lequel R\ représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, en particulier le groupe méthyle,

Exemple 7 : Gel pour le contour des yeux à activité anti-rides

On prépare une composition par mélange des composants notés A, B, C, D et E ci-dessous dont les constituants sont donnés avec leurs pourcentages en poids par rapport à la composition finale.

A :

- Carbopol 1342® 0,40

- Eau 83,20

B : Solution de soude 10 % 0,40

C :

- Produit II _a selon l'invention 0,1

- Miglyol 829® 10,00

- Phénonip 0,50 - Acétate de D,L-α-tocophérol 0,20

D : Protéines de blé 5,00

E : Parfum 0,20